專利名稱：一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及以黑順片、制川烏、制草烏等烏頭 屬中藥材為原料制備單酯型生物堿的方法。
背景技術(shù)：
制草烏、黑順片和制川烏等中藥材是中藥附子、川烏和草烏的炮制品，均為 中醫(yī)臨床常用的中草藥。中藥川烏和草烏中生物堿的類型主要為雙酯型，代表化 合物主要有烏頭堿(aconitine,AC)、中烏頭堿(mesaconitine,MA)、次烏頭堿
(hypaconitine,HA)具有廣泛的藥理活性，如抗炎、鎮(zhèn)痛、強心、抗心肌缺血 缺氧等，但也有毒性大、中毒劑量低的缺點，所以中醫(yī)臨床用藥時一般用其炮制 品，如制草烏、黑順片和制川烏等。制草烏、黑順片和制川烏等烏頭屬中藥材 中生物堿的類型主要為單酯型，代表化合物主要有苯甲酰次烏頭原堿
(benzoylhypaconine，BH)、苯甲酰中烏頭原堿(benzoylmesaconine,BM)、苯甲酰 烏頭原堿(benzoylaconine,BA)等，大部分是由炮制過程中雙酯型生物堿水解轉(zhuǎn) 化而來。在炮制過程中雙酯型生物堿雖沒有完全轉(zhuǎn)化為單酯型，但經(jīng)過炮制后其 毒性已大大降低。
單酯型生物堿具有強心、消炎、鎮(zhèn)痛等顯著的生物活性，與雙酯型生物堿比 較，其毒性較小，僅為雙酯型的1 / 1000 1 / 100，是臨床上發(fā)揮主要藥效的一 類化學(xué)成分，具有重要的研究價值和廣闊的應(yīng)用前景。
目前，單酯型生物堿的制備方法，采用酸水滲漉法(李正幫等，天然產(chǎn)物 研究與開發(fā)Vo1.9(1)， 1997,9-14 )， 也有甲醇提取法的報道 (Katagawa,Chem.Pharm.Bull.30(2)758-761(1982))。但根據(jù)實驗證明烏頭類生物 堿在甲醇中容易分解，不宜大量提取。也有文獻提出用乙醇提取法提取烏頭類生 物堿(丁立生等，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)Vol.6(3),1994,50-54)，但乙醇提取法也
有其不足之處，如容易提取出淀粉、多糖等雜質(zhì)，給后續(xù)分離工作帶來不便。 單酯型烏頭類生物堿的分離方法現(xiàn)在主要采用柱色譜法，但柱色譜法存在由不可
逆吸附導(dǎo)致產(chǎn)率低的缺點，況且分離過程十分耗時、耗力，不利于生物堿的大量 分離提取。綜上所述，雖然對單酯型烏頭類生物堿的研究十分迫切，但是由于'分離提取比較困難，研究進展緩慢。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種制備單酯型生物堿的制備方法的方法。 一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿的方法，其特征是步驟和條件 如下將烏頭屬中藥材的制草烏、黑順片或制川烏干燥粉末浸于體積濃度為95 %的乙醇中超聲提取2~3小時，在20 25t)室溫冷浸24小時，乙醇的用量(ml) 是所述的藥材粉末重量(g)的5倍，濾出乙醇提取液，把浸過的藥渣按上述方 法處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液，50 65r下減壓蒸出溶劑，得粗浸膏； 在粗浸膏中倒入是粗浸膏重量的10 12倍的無水乙醇進行醇沉，離心，得濾液， 50 65"C下減壓蒸出溶劑制成總生物堿浸膏；將總生物堿浸膏用環(huán)己烷-乙醇-水
體系進行萃取，所述的環(huán)己烷乙醇水的體積比為2: 1: 1，取萃取分層后所
得到的下層溶液于50 65C下減壓蒸出溶劑，制成單酯型生物堿粗浸膏，將該 單酯型生物堿粗浸膏調(diào)配成pH8.5 9.5的堿性水溶液，置于IO(TC水浴加熱2 3小時，冷卻后用氯仿萃取，取萃取分層后得到的氯仿溶液于50 65t:下減壓蒸 出溶劑，制成一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿。
圖1為包含所有生物堿的乙醇提取液電噴霧質(zhì)譜圖。由圖可以看出乙醇提取 的生物堿成分較多，單酯型生物堿主要有苯甲酰次烏頭原堿(BH，質(zhì)荷比m /z574)、苯甲酰中烏頭原堿(BM，質(zhì)荷比m/z590)、苯甲酰烏頭原堿(,B入質(zhì) 荷比m/z604);
雙酯型生物堿主要有烏頭堿(AC，質(zhì)荷比m/z646)、中烏頭堿(MA，質(zhì) 荷比m / z632)、次烏頭堿(H入質(zhì)荷比m / z616)，質(zhì)荷比m / z在800 900 區(qū)域主要是脂型生物堿，其中包含所有類型的生物堿，說明乙醇提取能力較強；
圖2為通過萃取分層后所得的下層溶液中單酯型和雙酯型生物堿的質(zhì)譜圖。 其中不含有脂型生物堿，脂型生物堿的質(zhì)荷比m / z在800 900區(qū)域內(nèi)。
圖3為堿性水解后的氯仿萃取液的質(zhì)譜圖。圖中不含有雙酯型生物堿。烏頭 堿(AC,質(zhì)荷比m/z646)、中烏頭堿(MA,質(zhì)荷比m/z632)、次烏頭堿(HA^ 質(zhì)荷比m / z616)雙酯型生物堿被水解轉(zhuǎn)化，說明堿性條件下雙酯型生物堿能完 全水解成單酯型生物堿。
有益效果通過電噴霧質(zhì)譜檢測，通過本發(fā)明提供的一種制備單酯型生物堿的方法得到單酯型生物堿，只含單酯型生物堿，不含雙酯型生物堿和脂型生物堿。 經(jīng)計算產(chǎn)率在0.21%以上。本方法能從制草烏、黑順片和制川烏等烏頭屬中藥材 中制備單酯型生物堿，方法簡便、快速，優(yōu)于以往方法。


圖1為包含所有生物堿的乙醇提取液電噴霧質(zhì)譜圖。
圖2為通過萃取分層后所得的下層溶液中單酯型和雙酯型生物堿的質(zhì)譜圖。 圖3為堿性水解后的氯仿萃取液的質(zhì)譜圖。圖中不含有雙酯型生物堿。
具體實施例方式
實施例1:
制草烏干燥粉末500克浸于體積濃度為95%的乙醇中超聲提取2.5小時，在 20 25'C室溫冷浸24小時，乙醇的用量(ml)是藥材粉末重量(g)的5倍，濾 出乙醇提取液，把浸過的藥渣按上述方法處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液， 5(TC下減壓蒸出溶劑，得粗浸膏。在粗浸膏中倒入IO倍粗浸膏重量的無水乙醇 進行醇沉，離心，得濾液，5(TC下減壓蒸出溶劑制成總生物堿浸膏；將總生物堿 浸膏用環(huán)己烷-乙醇-水體系進行萃取，所述的環(huán)己烷-乙醇-水的體積比為2: 1: 1， 取萃取分層后所得到的下層溶液于5(TC下減壓蒸出溶劑，制成單酯型生物堿粗 浸膏，將單酯型生物堿粗浸膏用5X的NaOH溶液調(diào)配成pH8.5的水溶液，將其 置于10(TC水浴加熱2小時，冷卻后用氯仿萃取，取萃取分層后得到的氯仿溶液 于5(TC下減壓蒸出溶劑，制成一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿1.65 克，產(chǎn)率0.33%。
實施例2:
制川烏干燥粉末500克浸于體積濃度為95%的乙醇中超聲提取3小時，在 20 25t:室溫冷浸24小時，乙醇的用量(ml)是藥材粉末重量(g)的5倍，濾 出乙醇提取液，把浸過的藥渣按上述方法處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液， 55。C下減壓蒸出溶劑，得粗浸膏。在粗浸膏中倒入11倍粗浸膏重量的無水乙醇 進行醇沉，離心，得濾液，55-C下減壓蒸出溶劑制成總生物堿浸膏；將總生物堿
浸膏用環(huán)己烷-乙醇-水體系進行萃取，所述的環(huán)己垸-乙醇-水的體積比為2: 1: 1，
取萃取分層后所得到的下層溶液于55t:下減壓蒸出溶劑，制成單酯型生物堿粗 浸膏，將該單酯型生物堿粗浸膏用5X的NaOH溶液調(diào)配成pH9.0的水溶液，將其置于10(TC水浴加熱3小時，冷卻后用氯仿萃取，取萃取分層后得到的氯仿溶 液于55t:下減壓蒸出溶劑，制成一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿 1.75克，產(chǎn)率0.35%。 實施例3:
將黑順片干燥粉末500克浸于體積濃度為95%的乙醇中超聲提取2小時， 在20 25。C室溫冷浸24小時，乙醇的用量(ml)是藥材粉末重量(g)的5倍， 濾出乙醇提取液，把浸過的藥渣按上述方法處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取 液，65'C下減壓蒸出溶劑，得粗浸膏。在粗浸膏中倒入12倍粗浸膏重量的無水 乙醇進行醇沉，離心，得濾液，65D下減壓蒸出溶劑制成總生物堿浸膏；將總生 物堿浸膏用環(huán)己烷-乙醇-水體系進行萃取，所述的環(huán)己烷-乙醇-水的體積比為2: 1: 1，取萃取分層后所得到的下層溶液于65'C下減壓蒸出溶劑，制成單酯型生 物堿粗浸膏，將該單酯型生物堿粗浸膏用5X的NaOH溶液調(diào)配成pH9.5的水溶 液，將其置于10(TC水浴加熱2.5小時，冷卻后用氯仿萃取，取萃取分層后得到 的氯仿溶液于65'C下減壓蒸出溶劑，制成一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯 型生物堿1.05克，產(chǎn)率0.21%。 實施例4:
制草烏干燥粉末500克浸于體積濃度為95%的乙醇中超聲提取3小時，在 20 25"C室溫冷浸24小時，乙醇的用量(ml)是藥材粉末重量(g)的5倍，濾 出乙醇提取液，把浸過的藥渣按上述方法處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液， 6CTC下減壓蒸出溶劑，得粗浸膏。在粗浸膏中倒入11倍粗浸膏重量的無水乙醇 進行醇沉，離心，得濾液，6CTC下減壓蒸出溶劑制成總生物堿浸膏；將總生物堿 浸膏用環(huán)己烷-乙醇-水體系進行萃取，所述的環(huán)己烷-乙醇-水的體積比為2: 1: 1， 取萃取分層后所得到的下層溶液于6(TC下減壓蒸出溶劑，制成單酯型生物堿粗 浸膏，將該單酯型生物堿粗浸膏用5X的K2C03溶液調(diào)配成pH7.5的水溶液，將 其置于10(TC水浴加熱2.5小時，冷卻后用氯仿萃取，取萃取分層后得到的氯仿 溶液于6CTC下減壓蒸出溶劑，制成一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物 堿1.60克，產(chǎn)率0.32%。 實施例5:
制川烏干燥粉末500克浸于體積濃度為95%的乙醇中超聲提取3小時，在20 25。C室溫冷浸24小時，乙醇的用量(ml)是藥材粉末重量(g)的5倍，濾 出乙醇提取液，把浸過的藥渣按上述方法處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液， 65。C下減壓蒸出溶劑，得粗浸膏。在粗浸膏中倒入IO倍粗浸膏重量的無水乙醇 進行醇沉，離心，得濾液，5CTC下減壓蒸出溶劑制成總生物堿浸膏；將總生物堿
浸膏用環(huán)己烷-乙醇-水體系進行萃取，所述的環(huán)己垸-乙醇-水的體積比為2: 1: 1，
取萃取分層后所得到的下層溶液于5CTC下減壓蒸出溶劑，制成單酯型生物堿粗 浸膏，將該單酯型生物堿粗浸膏用5X的Na2C03溶液調(diào)配成pH7.5的水溶液， 將其置于100'C水浴加熱3小時，冷卻后用氯仿萃取，取萃取分層后得到的氯仿 溶液于5(TC下減壓蒸出溶劑，制成一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物 堿1.90克，產(chǎn)率0.38%。
權(quán)利要求
1、一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿的方法，其特征是步驟和條件如下將烏頭屬中藥材的制草烏、黑順片或制川烏干燥粉末浸于體積濃度為95％的乙醇中超聲提取2～3小時，在20～25℃室溫冷浸24小時，乙醇的用量(ml)是所述的藥材粉末重量(g)的5倍，濾出乙醇提取液，把浸過的藥渣按上述方法處理兩次，合并三次濾出的乙醇提取液，50～65℃下減壓蒸出溶劑，得粗浸膏；在粗浸膏中倒入是粗浸膏重量的10～12倍的無水乙醇進行醇沉，離心，得濾液，50～65℃下減壓蒸出溶劑制成總生物堿浸膏；將總生物堿浸膏用環(huán)己烷-乙醇-水體系進行萃取，所述的環(huán)己烷∶乙醇∶水的體積比為2∶1∶1，取萃取分層后所得到的下層溶液于50～65℃下減壓蒸出溶劑，制成單酯型生物堿粗浸膏，將該單酯型生物堿粗浸膏調(diào)配成pH8.5～9.5的堿性水溶液，置于100℃水浴加熱2～3小時，冷卻后用氯仿萃取，取萃取分層后得到的氯仿溶液于50～65℃下減壓蒸出溶劑，制成一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿。
全文摘要
本發(fā)明提供一種以烏頭屬中藥材為原料制備單酯型生物堿的方法。把烏頭屬中藥材的制草烏、黑順片或制川烏經(jīng)過乙醇冷浸后，用無水乙醇醇沉，然后經(jīng)過萃取，取下層溶液制成浸膏，再將浸膏調(diào)配成pH7.5～9.5的堿性水溶液，將其置于100℃水浴加熱3小時，冷卻后用氯仿萃取，蒸發(fā)萃取所得到的氯仿溶液，制成浸膏即得單酯型生物堿。通過電噴霧質(zhì)譜檢測，提取分離效果較好。經(jīng)計算單酯型生物堿的總產(chǎn)率在0.21％以上。
文檔編號A61P9/00GK101301370SQ20081005088
公開日2008年11月12日 申請日期2008年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月26日
發(fā)明者劉志強, 劉淑瑩, 懿 包, 宋鳳瑞, 皮子鳳 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所