專利名稱：：含有矢車菊素3-o-葡萄糖苷的有效部位及制備方法及應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種中藥提取物，特別是涉及一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位及制備方法及在制備防治類風濕性關節(jié)炎藥物或食品的應用。技術背景類風濕性關節(jié)炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種以關節(jié)病變?yōu)橹鞯穆匀硇宰陨砻庖咝约膊?，屬中醫(yī)痹證范疇，與"歷節(jié)病"、"白虎歷節(jié)"、"頑痹"等相似。RA具有反復發(fā)作、致殘率高等特點，是常見而難治性疾病，目前國內(nèi)外尚無特效治療方法[l]。西藥治療副作用大，有些患者不能耐受，而且不適當?shù)奈魉幹委熕滤幵葱约膊〉陌l(fā)病率更高。中藥不僅來源廣泛、種類數(shù)量眾多、毒副反應小，而且具有多環(huán)節(jié)、多層次、多靶點綜合作用的特點，因此治療RA有著獨特的優(yōu)勢。近幾十年來，我國在RA的臨床和實驗研究中，取得了長足的進展，初步顯示了中藥對RA具有較好的臨床療效和抗炎、鎮(zhèn)痛、改善血液流變性、改善關節(jié)滑膜超微結(jié)構(gòu)及免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[2]。從傳統(tǒng)的中藥及天然產(chǎn)物中尋找有效部位或有效成分治療RA已成為研究熱點。佐劑性關節(jié)炎動物模型在臨床上類似類風濕性關節(jié)炎，常用于評價天然藥物對RA的治療作用及可能的作用機理研究[3-4]。1.張銀玲，陳文，彭雪芹，王甫英，江發(fā)壽，治療類風濕性關節(jié)炎的中藥研究概況，中國藥業(yè)，2007,16(15):1-3.2.楊景峰，中醫(yī)藥治療類風濕性關節(jié)炎的試驗研究進舉，現(xiàn)代中醫(yī)藥，2003，3:55-57.3.陸生，梁崇禮，林月秋，類風濕性關節(jié)炎動物模型研究應用進展，中國實驗動物學雜志，2001，11(2):112-114.4.李萬瑤，林錦泉，賴秀麗，賴先娥，尹利華，峰針對佐劑性關節(jié)炎動物模型的試驗研究，中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2001，7(8):620-622.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。本發(fā)明的第二個目的是提供一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的制備方法。本發(fā)明的第三個目的是提供一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位在制備防治類風濕性關節(jié)炎藥物或食品的應用。本發(fā)明的技術方案概述如下一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位'，用下述方法制成(1)提取提取的方法為下述步驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量3—12倍的水或酸水溶液為提取溶劑，在20—50。C提取l-6次，每次l-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量3—12倍的體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20一50。C提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:1~10的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;(2)將所述歩驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%95%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10%~95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度《(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為1040的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:3-5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%-75%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5%-75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度560。C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。所述步驟(1)的提取優(yōu)選的是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的酸水溶液為提取溶劑，在40—45'C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述歩驟(1)的提取優(yōu)選的還可以是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—30。C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度S60'C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或檸檬酸。所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的制備方法，包括如下歩驟(1)提取提取的方法為下述歩驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑提取溶劑，在20—50'C提取l-6次，每次l-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量3—12倍的體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20一50。C提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度560。C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:110的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10%~95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度^60。C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度'為10~40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:3-5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%-75%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5%-75°/。的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。所述步驟(1)的提取優(yōu)選的是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—30。C提取3-5次，每次4-6小時，過100自篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述步驟(1)的提取優(yōu)選的還可以是以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、或桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20_30。C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度560。C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40,得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或擰檬酸。所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位在制備防治類風濕性關節(jié)炎藥物或食品的應用。本發(fā)明的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，其主要成分有矢車菊素3-0-半乳糖苷，矢車菊素3-0-葡萄糖苷，飛燕草素3-0-葡萄糖苷，且矢車菊素3-0-葡萄糖苷的含量大于50%。在此分析基礎上，我們通過實驗獲知含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位具有較好的鎮(zhèn)痛、抗急性炎癥的作用，同時更重要的是具有抗佐劑性類風濕性關節(jié)炎的作用。本發(fā)明的含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位來自于天然食物中，高效無毒，安全性極高，在防治類風濕性關節(jié)炎疾病方面的優(yōu)勢明顯。因此在臨床防治類風濕性關節(jié)炎疾病中具有廣闊的應用前景，也可以應用于食品中用于預防類風濕性關節(jié)炎及其相關的急性炎癥。i1為本發(fā)明的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的HPLC檢測圖譜。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例1含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)提取500g黑豆皮中加入5000g的水常壓5(TC溫浸提取5次，提取時間分別為5、4、3、2、1小時，過濾，濾網(wǎng)的目數(shù)為120，得上清液；(2)大孔樹脂吸附分離將(1)中提取液經(jīng)HP20型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物，矢車菊素3-0-葡萄糖苷的含量為31.7%;(3)聚酰胺樹脂分離將濃縮物按質(zhì)量比為l:4的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、70%的乙醇水溶液，通過薄層層析等方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度560'C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度為10，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，矢車菊素3-0-葡萄糖苷的含量為54.3%。利用HPLC進行矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量測定，并利用HPLC-MS進行組分分析(結(jié)果見表6)。矢車菊素-3-0-葡萄糖苷、矢車菊素-3-0-半乳糖苷、牽?；ㄉ?3-0-葡萄糖苷和飛燕草素3-0-葡萄糖苷標準品購自挪威Polyphenol公司。矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量HPLC檢測方法色譜柱C-18250x4.6mm檢測波長520nm流速1.0ml/min流動相A:5%甲酸水溶液；B:甲醇<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例2含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以黑米為原料，加入原料質(zhì)量3倍的鹽酸水溶液為提取溶劑，鹽酸水溶液的體積百分比濃度為1%，在45。C提取6次，每次8小時，過80目篩，得提取液；.(2)將提取液經(jīng)AB-8型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為10的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:3的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例3含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以紫胡蘿卜為原料，加入原料質(zhì)量10倍的硫酸水溶液為提取溶劑，硫酸水溶液的體積百分濃度為2%，在40。C提取1次，4小時，過100目篩，得提取液；(2)將提取液經(jīng)HPD100型大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為l:4的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例4含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以紫玉米須為原料，加入原料質(zhì)量12倍的水溶液為提取溶劑，在2(TC提取5次，每次1小時，過120目篩，得提取液；(2)將提取液經(jīng)HPD100A型大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。200810052526.9說明書第6/13頁實施例5含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以紫玉米皮為原料，加入原料質(zhì)量8倍的水溶液為提取溶劑，在5(TC提取3次，每次6小時，過100目篩，得提取液；(2)將提取液經(jīng)HPD300型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度S6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為20的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:3的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例6含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以紫玉米粒為原料，加入原料質(zhì)量3倍的體積百分比濃度為95%的乙醇水溶液為提取溶劑，在20。C提取6次，每次1小時，過80目篩，在溫度^60。C,真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:1的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)X-5型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為l:4的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例7含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以紫玉米棒為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%的甲醇水溶液為提取溶劑，在3(TC提取3次，每次4小時，過120目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮至糖度40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)NKA-II型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度56(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為l:4的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例8含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以紫甘薯為原料，加入所述原料質(zhì)量12倍的體積百分比濃度為10%的乙醇酸水溶液提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為鹽酸，鹽酸水溶液的體積百分比濃度為1%，在50'C提取1次，每次8小時，過100目篩，在溫度560。C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度10，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:10的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)D101型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、15%、30%、50%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例9,含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以桑椹果為原料，加入所述原料質(zhì)量5倍的體積百分比濃度為60%的甲醇酸水溶液為提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為檸檬酸，檸檬酸水溶液的體積百分比濃度為5%;在4(TC提取5次，每次6小時，過100目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度IO，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為l:5的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)DA201型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:3的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度《(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例10含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以藍莓果為原料，加入所述原料質(zhì)量IO倍的體積百分比濃度為60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為乙酸，其體積百分比濃度為3%，在20'C提取5次，每次4小時，過100目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為l:4的比例分散至水中；(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)HP20型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度S60'C，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、15%、30%、50%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度^6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-Q-葡萄糖苷的有效部位。實施伊lll含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以歐洲越桔為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，所述酸水溶液中的酸為檸檬酸，其體積百分比濃度為1%，在3(TC提取3次，每次6小時，過100目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:5的比例分散至水中；(2)將所述步驟(l)獲得的產(chǎn)物經(jīng)AB-8型大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度56(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為l:5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、15%、30%、50%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40,干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例12含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，用下述方法制成(1)以歐洲越桔為原藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%的磷酸水溶液為提取溶劑，在3(TC提取3次，每次6小時，過100目篩，在溫度^60'C，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度40，得到提取物；(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物AB-8型經(jīng)大孔樹脂吸附，用水和體積百分比濃度為10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度S6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:3的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%、20%、50%、75%的乙醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。實施例13含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的最大耐受量試驗及抗炎活性測試1.試驗材料動物ICR小鼠，18~22g，雌雄兼用；SD大鼠，體重180~200g，雄性，北京試驗動物研究中心提供。2.試劑含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位(矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量大于50%);阿司匹林購自湖南永可輕工業(yè)品進出口有限公司；角叉菜膠購自中國聯(lián)星實業(yè)有限公司；電子分析天平，旋渦混勻器。3.試驗方法(1)最大耐受量試驗將40只ICR小鼠分為兩組，第1組，常水對照組；第2組，含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位組。每組20只，雌雄各半，禁食12h后，l天內(nèi)給小鼠灌胃給藥的含有矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位最大濃度0.4g/mL溶液，間隔4h給藥l次。1天共給藥3次，每次0.30ml/10g，連續(xù)觀察7天。給藥后正常顆粒料飼養(yǎng)，自由飲水，自然光照12h/12h，室溫2024。C，濕度60%。觀察動物反應。(2)二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗小鼠50只，雌雄各半，隨機分5組，灌服含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位溶液、阿司匹林水溶液或等容水后lh，于小鼠右耳用微量注射器滴二甲苯0.02ml并令二甲苯浸滿鼠耳兩齒，40min后小鼠拉頸處死，沿鼠耳根部基線用眼科剪剪下兩耳，稱取左、右耳片重量，以右耳與左耳重量差的mg數(shù)表示炎癥反應強度。(3)角叉菜膠致大鼠足腫脹試驗大鼠40只隨機分成5組，灌胃給藥后lh，于每只大鼠右后腳足跖皮下注射1%角叉菜膠5(VL致炎，玻璃容積法測量致炎前及致炎后1、3和5h足容積，計算腫脹度和各組的腫脹抑制率。4.試驗結(jié)果(1)灌胃給藥7天內(nèi)小鼠無一死亡，給藥第3、8天分別稱重，體重變化兩組沒有差異，動物均增重。8天稱重后逐只處死解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等各器官均無異常。含有矢車菊素-3-0-葡萄糖苷的有效部位灌胃給藥的最大給藥量為36g/kg，說明該提取物安全無毒。(2)測試結(jié)果顯示含有矢車菊素-3-0-葡萄糖苷的有效部位能夠顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，且呈現(xiàn)量效依賴關系，其高劑量組與阿司匹林組的抗炎作用相當。表1含有矢車菊素-3-0-葡萄糖苷的有效部位對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與對照組比較，**P<0.01;采用T檢驗(n=10)(3)結(jié)果各藥物組于致炎后lh與對照組比較均有顯著性差異，致炎后3h和5h，高劑量組與對照組比較仍具有顯著性差異，且與陽性藥阿司匹林組作用相當，提示含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位對角叉菜膠所致大鼠足腫脹有明顯抑制作用，結(jié)果見表3。表2組合物對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響組別角叉菜膠致炎后(mg/kg)lh3h5hEV(mL)EI%EV(mL)EI%EV(mL)EI%對照組阿司匹林實施例l1001000.47±0.030.68±0.070.77±0.040.21±0.07a55.320.34±0.06a50.000.43±0,07a44.160.24±0.06a48.940.28±0.06a58.820.41±0.05a46.75實施例l500.33±0.0429.790.48±0.0529.410.59±0.0423.38實施例l250.39±0.0717.020.55±0.0519.120.64±0.0616,88與對照組比較，"PO.Ol;T檢驗(n=8);EV:腫脹程度；EI:腫脹抑制率。實施例14一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的鎮(zhèn)痛活性測試1.試驗材料動物ICR小鼠，18~22g，雌雄兼用；北京試驗動物研究中心提供。2.試劑含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位(矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量大于50%);阿司匹林購自湖南永可輕工業(yè)品進出口有限公司；醋酸為分析純，電子分析天平，旋渦混勻器。3.試驗方法(1)醋酸扭體試驗小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，分別灌胃藥物或等量水，藥后lh，各鼠腹腔注射0.7XHAC生理鹽水溶液0.2ml，觀察注射HAC后20min內(nèi)小鼠扭體反應的次數(shù)，并計算鎮(zhèn)痛抑制百分率。對照組扭體反應數(shù)-給藥組扭體反應數(shù)鎮(zhèn)痛百分率(％)=-xlOO%對照組扭體反應數(shù)(2)小鼠熱板法試驗按趙一法進行試驗，雌性小鼠于60士0.5'C熱板測定小鼠舔后爪反應的潛伏期，選取于熱板儀內(nèi)不跳躍、于515s內(nèi)出現(xiàn)反應的小鼠60只隨機分5組，灌胃藥物或等容水，藥后lh,2h將小鼠置熱板測定痛閾一次，超過60s不反應者立刻取出，反應時間按60s計。4.試驗結(jié)果(l)醋酸扭體法試驗結(jié)果顯示含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的提取物能夠一定程度抑制醋酸所致小鼠扭體反應。結(jié)果見表3。表3含有矢車菊素3-0葡萄糖苷的有效部位對醋酸所致小鼠扭體的鎮(zhèn)痛作用<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與對照組比較，**P<0.01;*P<0.05;T檢驗(n=10)。(2)熱板法測試結(jié)果顯示該含有矢車菊素3-0葡萄糖苷的有效部位具有一定的鎮(zhèn)痛作用，且低劑量隨著作用時間延長，作用效果越發(fā)顯著。詳細結(jié)果見表4表4組合物對熱板試驗小鼠舔足反應時間的影響(x±s，n=12)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實施例15含有矢車菊素3-0葡萄糖苷的有效部位抗佐劑性類風濕性關節(jié)炎的作用1.試驗材料動物ICR小鼠，18~22g，雌雄兼用；SD大鼠，體重180~200g，雄性，北京試驗動物研究中心提供。2.試劑含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位(矢車菊素3-0-葡萄糖苷含量大于50%);弗氏完全佐劑，Sigma公司產(chǎn)品；地塞米松注射液，江蘇蘇星制藥有限公司。電子分析天平，旋渦混勻器。3.試驗方法取雄性大鼠48只，體重160180g，按體重隨機分為6組，分別為對照組(NS10mL/kg);模型組(NS10ml/kg);地塞米松組(0.85mg/kg);含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位低、中、高劑量(25、50、100mg/kg)組。各組每Rig給藥l次，連續(xù)24d。實驗開始后，先用容積法測量左、右后足跖容積，然后于第l天給藥后lh，除對照組外，各組大鼠右后足跖SC弗氏完全佐劑0.1mL致炎。此后每3天測量大鼠右后足跖容積，并觀察鼠耳紅斑、尾部結(jié)節(jié)等出現(xiàn)情況及體重變化。計算并比較各組動物在不同時間的足跖腫脹度(足跖腫脹度=致炎后足跖容積一致炎前足跖容積)。4.試驗結(jié)果給佐劑后模型組大鼠右后足足跖腫脹度明顯增加，且與對照組比較差異顯著(PO.01);而地塞米松組、含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位中、高劑量組大鼠右后足足跖腫脹度明顯減小(P0.05、0.01)。表明含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位對佐劑誘發(fā)的原發(fā)性足跖腫脹具有良好的對抗作用。結(jié)果見表5。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實施例16表6含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位中各花青素的液質(zhì)分析結(jié)果(保留時間、紫外吸<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>權(quán)利要求1.一種含有矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位，其特征是用下述方法制成(1)提取提取的方法為下述步驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量3-12倍的水或酸水溶液為提取溶劑，在20-50℃提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1％～5％；②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量3-12倍的體積百分比濃度為10％～95％的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20-50℃提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1∶1～10的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1％～5％；(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10％～95％的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10％～95％的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa減壓濃縮，得糖度為10～40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1∶3-5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5％-75％的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5％-75％的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特征是所述步驟(1)提取為以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的酸水溶液為提取溶劑，在40—45'C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特征是所述步驟(1)提取為以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—30'C提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度《(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3之一所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特征是所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或檸檬酸。5.根據(jù)權(quán)利要求1至3之一所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位，其特征是所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。6.—種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的制備方法，其特征是包括如下步驟(1)提取提取的方法為下述歩驟之一種①以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量3—12倍的水或酸水溶液為提取溶劑，在20—50。C提取l-6次，每次l-8小時，過80-120目篩，得提取液，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;②以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量3—12倍的體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液或乙醇酸水溶液或甲醇酸水溶液為提取溶劑，在20—50。C提取1-6次，每次1-8小時，過80-120目篩，在溫度^6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:110的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~5%;(2)將所述步驟(1)獲得的產(chǎn)物經(jīng)大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為10%~95%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為10%~95%的甲醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將其合并，在溫度S6(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，得糖度為10~40的濃縮物；(3)將所述濃縮物按質(zhì)量比為1:3-5的比例分散至水中進行聚酰胺樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為5%-75%的乙醇水溶液或水及體積百分比濃度為5%-75%的甲醇水溶液梯度洗脫，通過薄層層析結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含矢車菊素3-0-葡萄糖苷的組分，將洗脫液在溫度56(TC，真空度為0.060.08MPa減壓濃縮，至糖度為10-40，干燥，得矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的制備方法，其特征是所述步驟(1)提取為以黑豆皮、黑米、紫胡蘿卜、紫玉米須、紫玉米皮、紫玉米粒、紫玉米棒、紫甘薯、桑椹果、藍莓果、歐洲越桔或藍靛果為原料，加入所述原料質(zhì)量10倍的體積百分比濃度為40%~60%的乙醇酸水溶液為提取溶劑，在20—3(TC提取3-5次，每次4-6小時，過100目篩，在溫度S6(TC，真空度為0.06~0.08MPa減壓濃縮至糖度2-40，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4~5的比例分散至水中，所述酸水溶液中的酸的體積百分比濃度為1%~3%。8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的制備方法，其特征是所述酸水溶液中的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸或檸檬酸。9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位的制備方法，其特征是所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。10.權(quán)利要求1至3之一所述的一種含有矢車菊素3-0-葡萄糖苷的有效部位在制備防治類風濕性關節(jié)炎藥物或食品的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種含有矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位及制備方法及應用，其制備方法為(1)提取以黑豆皮為原料，加水常溫提取，過篩，得提取液；(2)將提取液經(jīng)大孔樹脂吸附，用水及乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液通過檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，減壓濃縮，得濃縮物；(3)將濃縮物進行聚酰胺樹脂吸附，用水及乙醇水溶液梯度洗脫，通過檢測，收集富含矢車菊素3-O-葡萄糖苷的組分，將洗脫液減壓濃縮，干燥，得到矢車菊素3-O-葡萄糖苷的含量大于50％的有效部位，實驗證明，矢車菊素3-O-葡萄糖苷的有效部位高效無毒并具有較好的鎮(zhèn)痛、抗急性炎癥及抗佐劑性類風濕性關節(jié)炎的作用。文檔編號A61K31/7048GK101250206SQ20081005252公開日2008年8月27日申請日期2008年3月26日優(yōu)先權(quán)日2008年3月26日發(fā)明者丹劉,劉岱琳,於洪建申請人:天津市尖峰天然產(chǎn)物研究開發(fā)有限公司