專利名稱：三七總皂苷對微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的預(yù)防和治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品三七總皂苷的新用途，特別涉及三七總皂苷對微循環(huán)障 礙引發(fā)的疾病的預(yù)防和治療作用。
背景技術(shù)：
三七為五加科多年生草本植物三七Ranax notoginseng(Burk)F. H. Chen的 根，主產(chǎn)于云南、廣西等地，別名參三七、田七.三七的主要活性成分是三七總皂 苷，其塊根中含皂苷約12%,目前己經(jīng)從三七各部位分離出20種達(dá)瑪垸型皂苷. 國內(nèi)外對三七總皂苷的藥理作用特別是心腦血管藥理作用的研究非常活躍。三七 總皂苷(PNS)已經(jīng)列入國家藥典，有相應(yīng)制劑產(chǎn)品上市，如注射用血塞通。 中國專利CN200410058111. 4描述了一種三七總皂苷的制備方法三七用水提取， 提取液濃縮，乙醇沉淀，上清液除盡乙醇，水溶解后，行大孔樹脂HPD400柱色 譜，水洗脫除去雜質(zhì)后，再用90%乙醇洗脫，至有效成分洗脫完全為止，回收醇 洗脫液，干燥即得。具體可以采用以下方法獲得取三七藥材粉碎成粗粉，加 10倍藥材重量的70%乙醇，回流提取2次，每次25小時，濾過，合并二次提取 液，70t左右減壓回收溶劑，至比重為1.10-1. 12的流浸膏。用水稀釋，進(jìn)行大 孔樹脂HPD400吸附柱吸附，用水洗脫，繼以90%乙醇洗脫，90%乙醇洗脫部分70°C 左右減壓回收溶劑。向上述三七總皂苷溶液中，加入Mg02:AU03脫色,過濾,濾液 于80°C減壓真空干燥，粉碎，即得淡黃色三七總皂苷成品。
微循環(huán)是包括細(xì)動脈、毛細(xì)血管、細(xì)靜脈在內(nèi)的血管床，占體內(nèi)血管的90%， 是維持新陳代謝的重要部分。高脂血癥、高血壓、感染、精神刺激、跌打損傷、 手術(shù)、介入治療等都可以引起微循環(huán)障礙。微循環(huán)障礙包括血管徑變化、過氧化 物產(chǎn)生、血管內(nèi)皮粘附因子ICAM-1、白細(xì)胞粘附因子CDllb/CD18表達(dá)、白細(xì)胞 與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附、血漿白蛋白外漏、血管外肥大細(xì)胞脫顆粒釋放TNF-a、組 織胺、5羥色胺、炎性因子等血管活性物質(zhì)、以及形成血拴、出血等多環(huán)節(jié)變化 的復(fù)雜過程。
缺血再灌注損傷是介入療法、外科手術(shù)、溶栓后出現(xiàn)損傷的主要病理基礎(chǔ)。 缺血再灌注后白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附、肥大細(xì)胞脫顆粒是血管損傷的主要病理環(huán)節(jié)。
肥大細(xì)胞脫顆粒是一型變態(tài)反應(yīng)的主要病理環(huán)節(jié)，是花粉病，皮膚病，哮喘， 腹瀉的主要病理基礎(chǔ)。
目前，尚不清楚PNS對對心腦血管疾病的主要病理變化--缺血再灌注引起的 微循環(huán)障礙是否有預(yù)防和治療作用。本發(fā)明證明了 PNS可以改善缺血再灌注引起 的腸系膜微循環(huán)障礙，從而達(dá)到治療和/或預(yù)防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的作用， 并提供一種中藥藥物制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品的新用途，特別涉及三七總皂苷對缺血再灌注引起的腸 系膜微循環(huán)障礙的預(yù)防和治療的改善作用。從而將其應(yīng)用于治療和/或預(yù)防微循 環(huán)障礙引發(fā)的疾病，如高脂血癥、高血壓、感染、精神剌激、跌打損傷、花粉 病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術(shù)或介入治療等引發(fā)的微循環(huán)障礙。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷的預(yù)給藥和后給藥都可以抑制白細(xì)胞的粘附和肥大 細(xì)胞脫顆粒。
本發(fā)明所述三七總皂苷，可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備，符合藥用標(biāo)準(zhǔn)即可。 本發(fā)明所述制備的藥物，是用上述三七總皂苷作為藥物活性成分制備成的藥 物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物，以三七總皂苷作為藥物活性成分，同時含有藥物可接 受的載體，其中三七總皂苷在組合物中所占重量百分比是O. 1-99.9%,其余為藥 物可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形 式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每 袋，注射劑的每支等。
本發(fā)明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含 劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑。
本發(fā)明的藥物組合物，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、 填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤劑，必要時 可對片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩 解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤 滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二垸基硫酸鈉。
可通過混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合 可使活性物質(zhì)分布在整個使用大量填充劑的那些組合物中。
口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或 酏劑，或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種 液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、 明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑， 例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用 油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐 劑，例如對羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常 規(guī)的香味劑或著色劑。
對于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無菌載體。根據(jù) 載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質(zhì) 溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。
輔料例如一種局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高 其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水除去。
本發(fā)明的藥物組合物，在制備成藥劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的 載體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、 硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、 EDTA二鈉、EDTA
鈣鈉， 一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、 磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右 旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、
藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、 表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、e—環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、 硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。
本發(fā)明的藥物組合物在使用時根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服三 次，每次卜20劑，如l-20袋或粒或片，每劑lmg-1000mg。本發(fā)明所述的治療用途是通過以下實驗證明的 材料和方法
三七總皂苷由天津天士力制藥股份有限公司提供。
1、 實驗動物
200 220g的Wister雄性大鼠由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動物中心提供，試驗前禁 食12小時，可以自由飲水，動物合格證號SCXK(京)2002- 0001。動物被置于 常規(guī)飼養(yǎng)環(huán)境，動物的處理按照北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部規(guī)定的動物處理和倫理方針進(jìn) 行。
2、 缺血-再灌注模型的建立及給藥
缺血-再灌注組(I/R):按30mg/kg體重的用量，取sodium pentobarbital, 施腹腔注射進(jìn)行麻醉。在大鼠的右側(cè)頸靜脈插入3號聚乙烯靜脈注射管，并留置。 沿腹正中線切開20-30mm,輕柔地將近回盲部的回腸取出腹外，展開至有載玻片 的觀察臺上。用37'C的Krebs-Ringer緩沖液連續(xù)地在展開的腸系膜上滴加。腸 系膜微循環(huán)動態(tài)用置于37。C恒溫箱的倒立生物顯微鏡(Diaphot TMD-2S， Nikon, 東京)，在12V， 100W的白光條件下觀察。在20倍物鏡頭下選擇觀察部位,用有時 間顯示的錄像系統(tǒng),將觀察內(nèi)容用S-VHS錄像帶紀(jì)錄保存。選擇的觀察部位為直 徑在25-35um之間的細(xì)靜脈非分枝部(長度在200 u ra以上)的微循環(huán)血管床。經(jīng) 過10分鐘的基礎(chǔ)觀察之后,用聚乙烯管結(jié)扎觀察部環(huán)流的前腸系膜動靜脈10分 鐘,再解除結(jié)扎，將時間調(diào)至0處，連續(xù)觀察同一視野的微循環(huán)動態(tài)30分鐘(3)。
假手術(shù)組(Sham):將大鼠麻醉開腹，不作缺血-再灌注處理。
三七總皂苷預(yù)給藥組(PNS+I/R):在缺血20分鐘前經(jīng)頸靜脈按5 mg/kg/h的 給藥量連續(xù)靜滴入PNS至觀察結(jié)束。
三七總皂苷后給藥組(I/R+PNS):在缺血再灌注10分鐘后經(jīng)頸靜脈按5 mg/kg/h的給藥量連續(xù)靜滴入PNS至觀察結(jié)束。
每組6只大鼠。
3、 微循環(huán)動態(tài)的觀察
微循環(huán)動態(tài)用連接于倒立生物顯微鏡的CCD攝像系統(tǒng)(CC-090, Flovel,東京) 和SIT螢光攝影機(jī)(C-2400-08、濱松7才卜二夕^、濱松)連續(xù)紀(jì)錄。
血管經(jīng)的測定用video measuring gauge(IV-560,""、東京)經(jīng)時地測血管經(jīng)。
粘附于細(xì)靜脈管壁的白細(xì)胞數(shù)計數(shù):在紀(jì)錄的圖像上，經(jīng)時地計數(shù)在細(xì)靜脈 管壁的同一部位停留30秒以上的白細(xì)胞(粘附白細(xì)胞)，計算100um長細(xì)靜脈上 粘附的白細(xì)胞數(shù)。
肥大細(xì)胞脫顆粒率在缺血-再灌注30分后，將0. 1 % toluidine blue滴加 在觀察部位，用CCD攝像機(jī)紀(jì)錄。用20倍的對物鏡計數(shù)5個視野的脫顆粒和未 脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)，計算脫顆粒的肥大細(xì)胞占計數(shù)的整個肥大細(xì)胞數(shù)的百分比， 為肥大細(xì)胞脫顆粒率。
4、統(tǒng)計處理-
各測定值用one-way analysis of variance (A麗A)處理，各組經(jīng)時變化 用T檢驗，各組間比較用F檢驗。各測定值用均值土標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P 〈 0. 05為有 顯著意義。
實驗結(jié)果
1. 三七總皂苷預(yù)給藥和后給藥對再灌注后大鼠腸系膜細(xì)動脈和細(xì)靜脈血管 經(jīng)的影響。
在本觀察時間內(nèi)，缺血再灌注組大鼠細(xì)動脈和細(xì)靜脈血管徑?jīng)]有發(fā)生顯著的 變化.PNS的預(yù)給藥和后給藥都沒有引起再灌注后大鼠腸系膜細(xì)動脈和細(xì)靜脈血 管徑的顯著變化。
2. 三七總皂苷預(yù)給藥和后給藥對再灌注后大鼠白細(xì)胞與腸系膜細(xì)靜脈粘附 的抑制作用。
圖1所示，Sham組在本觀察結(jié)束時僅有少量的白細(xì)胞粘附于細(xì)靜脈。I/R 組大鼠在再灌注早期就有大量的白細(xì)胞粘附于細(xì)靜脈管壁，隨著再灌注的進(jìn)行， 黏附白細(xì)胞逐漸增多。PNS預(yù)給藥在再灌注開始時就顯著地抑制了白細(xì)胞的粘 附。在再灌注10分，已經(jīng)有白細(xì)胞黏附于細(xì)靜脈壁時，再投入PNS，在給藥20 分(再灌注30分)后，黏附白細(xì)胞顯著地減少。該結(jié)果提示PNS不但可以抑制 再灌注引起的白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，還可以解離已經(jīng)黏附于血管壁上的 白細(xì)胞。
3. 三七總皂苷預(yù)給藥和后給藥對再灌注后大鼠腸系膜間質(zhì)肥大細(xì)胞脫顆粒 的抑制作用。圖2所示PNS預(yù)給藥和后給藥對再灌注后腸系膜間質(zhì)肥大細(xì)胞脫顆粒的影 響。在再灌注30分后、與假手術(shù)組比、I/R組的肥大細(xì)胞脫顆粒率顯著增加。 PNS預(yù)給藥和后給藥都可以顯著地抑制肥大細(xì)胞脫顆粒。該結(jié)果提示PNS具有抑 制肥大細(xì)胞脫顆粒的作用。
缺血再灌注后大鼠腸細(xì)膜細(xì)動靜脈血管徑?jīng)]有顯著變化，而粘附在細(xì)靜脈管 壁上的白細(xì)胞數(shù)和血管外間質(zhì)組織中的肥大細(xì)胞脫顆粒率顯著增加。三七總皂苷 的預(yù)給藥可以抑制白細(xì)胞的粘附和肥大細(xì)胞脫顆粒。三七總皂苷的后給藥也可以 改善白細(xì)胞的粘附和肥大細(xì)胞脫顆粒。
總之，本發(fā)明表明，三七總皂苷可以預(yù)防和治療缺血再灌注引起的微循環(huán)障 礙，從而將其應(yīng)用于治療和/或預(yù)防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病，如高脂血癥、高 血壓、感染等以及因精神刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術(shù) 或介入治療等引發(fā)的微循環(huán)障礙。


圖1表示Sham組在本觀察結(jié)束時僅有少量的白細(xì)胞粘附于細(xì)靜脈。
圖2表示三七總皂苷預(yù)給藥和后給藥對再灌注后腸系膜間質(zhì)肥大細(xì)胞脫顆粒的
影響。 '
具體實施例方式
以下通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
實施例1
片劑
處方三七總皂苷103g 微晶纖維素 55g
微粉硅膠3.3g 硬脂酸鎂 1.5g
制法取原、輔料分別過100目篩；取三七總皂苷、硫酸鈣、微晶纖維 素，混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C 干燥，取出，過30目篩整粒，加入微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片， 制成1000片，即得。 實施例處方三七總皂苷86g 硫酸鈣117g 微晶纖維素37g
微粉硅膠 2.4g 硬脂酸鎂1.2g制法取原、輔料分別過100目篩；取三七總皂苷、硫酸鈣、微晶纖維 素，混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C 干燥，取出，過30目篩整粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓 片，制成1000片，即得。 實施例處方三七總皂苷123g 硫酸鈣203g 微晶纖維素68. 3g
微粉硅膠 5g 硬脂酸鎂2. 5g
制法取原、輔料分別過100目篩；取三七總皂苷、硫酸鈣、微晶纖維 素，混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，6(TC 干燥，取出，過30目篩整粒，加入適量微粉硅膠及硬脂酸鎂，混勻，壓 片，制成1000片，即得。 實施例4 膠囊
取三七總皂苷61g，加入適量淀粉，硬脂酸鎂等輔料，制粒，整粒，裝入1號 膠囊，即得。 實施例5 口服液
取三七總皂苷7.2g，加入適量蔗糖，防腐劑，加水到1000ml，分裝成10ml — 支，即得口服液。 實施例6 顆粒劑
取三七總皂苷83.5g，加入適量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分裝，即得。
實施例7
注射劑
取三七總皂苷8.2g，加水溶解，另氯化鈉、對羥基苯甲酸乙酯加熱水溶解，混 勻，調(diào)pH值。注射用水稀釋至1000ml，用中空纖維膜濾過，灌裝，滅菌，即得。 實施例8 注射劑
三七總皂苷2g，加水溶解，另氯化鈉、對羥基苯甲酸乙酯加熱水溶解，混勻，調(diào)pH值。注射用水稀釋至1000ml,用中空纖維膜濾過，灌裝，滅菌，即得。
權(quán)利要求
1、三七總皂苷或其藥物組合物在制備一種治療和/或預(yù)防微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
2、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，三七總皂苷預(yù)給藥對再灌注后白細(xì)胞的粘 附有抑制作用。
3、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，三七總皂苷后給藥對再灌注后白細(xì)胞的粘 附有抑制作用。
4、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，三七總皂苷預(yù)給藥對再灌注后腸系膜間質(zhì) 肥大細(xì)胞脫顆粒有抑制作用。
5、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，三七總皂苷后給藥對再灌注后腸系膜間質(zhì) 肥大細(xì)胞脫顆粒有抑制作用。
6、 權(quán)利要求1的應(yīng)用，所述應(yīng)用是對高脂血癥、高血壓、感染、精神刺激、跌 打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術(shù)或介入治療引發(fā)的微循環(huán)障礙 的應(yīng)用。
7、 權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物，以三七總皂苷作為藥物 活性成分，同時含有藥物可接受的載體。
8、 權(quán)利要求7的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物，作為可藥用的劑型。
9、 權(quán)利要求8的應(yīng)用，其特征在于，所述劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣 片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒 齊U、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓 齊U、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品三七總皂苷的新用途，特別涉及三七總皂苷對微循環(huán)障礙引發(fā)的疾病的預(yù)防和治療作用。
文檔編號A61P17/00GK101574383SQ20081005299
公開日2009年11月11日 申請日期2008年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月5日
發(fā)明者楊繼英, 俊 郭, 韓晶巖 申請人:天津天士力制藥股份有限公司