專利名稱：一種生物衍生肌腱修復(fù)材料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物衍生肌腱修復(fù)材料及其制備方法，屬于醫(yī)用 材料領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肌腱缺損的修復(fù)，目前仍以自體肌腱移植為主，但自體肌腱供體 來源有限，人工肌腱移植雖已有臨床應(yīng)用的報(bào)道，但其材料和與受體 結(jié)合等問題，尚未完全解決。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對肌腱移植做了大 量的研究，對肌腱的制備、保存和移植后的實(shí)驗(yàn)效果和臨床應(yīng)用效果 進(jìn)行了分析和評價。
目前肌腱的制備與貯存主要有三種方法，即超低溫冷凍儲存?zhèn)?用、藥物浸泡和射線照射。
超低溫冷凍儲存肌腱，即是將經(jīng)生理鹽水漂洗后的肌腱浸泡在含
有小牛血清的MEN溶液或其他營養(yǎng)液中，浸泡10-15min,然后置于 無菌容器內(nèi)密閉封裝，標(biāo)記后置于-8(TC超低溫中冷凍保存，10天后 可解凍移植。
藥物浸泡制備是將肌腱浸泡于化學(xué)藥物中處理，如采用三氯甲烷 /甲醇(CM)混合液處理肌腱，首先切開肌腱，將其浸入CM(1:1) 混合溶液中，在常溫下浸泡36小時，然后裝入含有0.01mol/L的乙 二胺乙酸、0.01mol/L的碘乙酸、0.01mol/L疊氮化納及pH7.4的磷酸 鹽緩沖溶液中，4'C浸泡24小時，取出后-《C預(yù)凍，并冷凍干燥8小 時凍干，包裝后環(huán)氧乙烷消毒備用。此外也有相對簡易的乙醇浸泡方 法，首先在95%的乙醇中浸泡96小時后取出，浸于75%的乙醇中備 用。但所制備的這些肌腱在保存期間容易受到微生物污染，Barrios 檢測了一份-80。C保存的肌腱組織，其細(xì)胞污染率達(dá)6.6%,其中80%
4的污染源于革蘭氏陽性菌，這些菌種不容易被常規(guī)的方法滅活。另外， 曲彥隆發(fā)明一種衍生肌腱支架的制備方法，首先切取肌腱組織預(yù)處
理，再浸泡于甘油與MEM混合液中；取出在-80~-90 'c冷凍10±1 天并真空凍干，將肌腱材料物理扭轉(zhuǎn)分絲處理；將處理后的材料過氧 化氫浸泡振蕩并在室溫下蒸餾水浸洗；最后再次真空凍干密封，用y 射線消毒，最終得到衍生肌腱支架。但是一方面該方法設(shè)計(jì)到兩次凍 干過程，有研究指出，這會對衍生肌腱支架的力學(xué)性能會造成較大影 響，另外這種方法不涉及去除材料中的蛋白成分，對材料的組織相容 性存在一定的影響。目前用于浸泡肌腱的藥物主要有戊二醛、絲裂霉 素F、三氯甲烷/甲醇混合液、脫氧鳥苷培養(yǎng)液及95%的乙醇等。
射線照射主要是y射線輻照滅菌，y射線具有很強(qiáng)的穿透力，能 夠達(dá)到有效滅菌。
抗原性問題是肌腱移植存在的一個非常重要問題，1959年 Peacock等首次報(bào)道了利用未處理的新鮮異體肌腱移植，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有 嚴(yán)重的炎癥和排斥反應(yīng)。現(xiàn)在已有研究證明，肌腱的抗原性主要存在 于細(xì)胞成分的組織相容性抗原HLA,而這種抗原在經(jīng)過超低溫冷凍 和復(fù)溫過程可以大大降低，這可能是由于經(jīng)過冷凍和復(fù)溫時的水化過 程可以改變肌腱細(xì)胞結(jié)構(gòu)，抑制了肌腱組織的抗原作用，但仍然保留 了肌腱組織的基本結(jié)構(gòu)及部分酶活性，從而降低其抗原性。多數(shù)的專 家學(xué)者認(rèn)為，在肌腱移植中輕度的免疫反應(yīng)可以接受，不會產(chǎn)生明顯 的排斥反應(yīng)，因?yàn)檫@不同于器官移植之類的功能性移植，而是為機(jī)體 組織的生長提供一個生長支架，因此認(rèn)為經(jīng)過超低溫冷凍的肌腱組織 可以視為無免疫原性的植入物。
肌腱移植時的組織特性，是決定功能能否恢復(fù)的組織學(xué)基礎(chǔ)。高 新生等認(rèn)為，將超低溫冷凍保存過的肌腱組織移植后，雖失去了代謝 功能，但保持肌腱組織的連續(xù)性，為肌腱重新血管化和活細(xì)胞化，奠 定了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)；其實(shí)驗(yàn)觀察到肌腱移植后，大量新生成纖維細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞及毛細(xì)血管，沿兩端肌腱表面及腱東間浸入移植腱表面及 周圍組織，其修復(fù)隨時間的推移而趨向成熟，最終演變?yōu)榕帕姓R呈 波浪型的膠原纖維東，使移植腱段成為具有活細(xì)胞代謝功能的腱組 織，至于對肌腱移植后修復(fù)速度的機(jī)理，尚有待于進(jìn)一步的研究。
實(shí)驗(yàn)證實(shí)，化學(xué)處理凍干肌腱移植肌腱基質(zhì)間隙中有大量的宿主 細(xì)胞，成纖維細(xì)胞長入并增生活躍，并逐漸成熟，數(shù)量減少，最終完 全轉(zhuǎn)化為腱細(xì)胞；而新生的細(xì)膠原原纖維逐漸替代原粗大膠原原纖 維，逐漸形成完全由致密的細(xì)膠原原纖維組成，排列整齊，與肌腱縱 軸一致。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的生物衍生肌腱修復(fù)材料，該材料保 持肌腱組織的基本機(jī)構(gòu)、部分酶活性及肌腱組織的連續(xù)性，為肌腱重 新血管化和細(xì)胞組織提供良好的支架結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的另一目的是提供一種生物衍生肌腱修復(fù)材料的制備方法。
本發(fā)明生物衍生肌腱修復(fù)材料是對合法供體來源的經(jīng)血清學(xué)檢 測為合格的肌腱，或經(jīng)檢疫后證實(shí)健康的動物肌腱進(jìn)行物理加工和化 學(xué)處理，除掉軟組織、消毒、通過去除脂肪、脫細(xì)胞處理，經(jīng)超低溫 預(yù)凍和冷凍干燥后，對組織進(jìn)行去纖膜分絲，重組編織處理，最終得 到保留了肌腱基本結(jié)構(gòu)的一類新型肌腱缺損修復(fù)材料。
臨床應(yīng)用中根據(jù)病人的不同需要，制備成多種不同規(guī)格，用于肌 腱、韌帶等軟組織缺損的修復(fù)。本發(fā)明所涉及的肌腱支架材料制備方 法， 一方面通過除掉軟組織、消毒、脫去脂肪及脫細(xì)胞處理過程破壞 肌腱組織的外圍結(jié)構(gòu)，降低移植受體對肌腱的排斥性，另一方面通過 凍干過程進(jìn)一步保持肌腱組織的基本機(jī)構(gòu)、部分酶活性及肌腱組織的 連續(xù)性，為肌腱重新血管化和細(xì)胞組織提供良好的支架結(jié)構(gòu)。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種生物衍生肌腱修復(fù)材料，以
6同種或異種肌腱為原料，通過消毒，脫脂，脫蛋白、脫細(xì)胞，冷凍干 燥，解聚、分絲重組，二次消毒而成。
所述人體同種或異種肌腱(如豬、牛肌腱)可先進(jìn)行一下前處理, 用純水將血脂成分洗凈。
所述消毒為釆用消毒液進(jìn)行處理，原料與消毒液的體積比為
1:5 1:15,消毒液可以用酒精、H202、過氧乙酸、氫氧化鈉、碘伏、 硫酸新霉素等等，具體為75%酒精5~30分鐘；或0.5~2°/必202浸泡 4 10小時；或0.08~1.5%的過氧乙酸和5~20°/。的乙醇的混合水溶液浸 泡10 60分鐘；或0.01 2%氫氧化鈉溶液浸泡6 12小時；或5 20% 的硫酸新霉素溶液浸泡15-60分鐘；或砩伏浸泡10~30分鐘，然后漂 洗干凈備用。漂洗釆用純水反復(fù)漂洗0.5 1.5小時，每5 15分鐘更換 液體。
所述脫脂為釆用脫脂劑進(jìn)行處理，至上清液清澈，漂洗干凈備用， 所述的脫脂劑為戊二醛、甲醛、混合體積比(v/v)為3:1 1:3的甲醇 與氯仿、乙醚或二氯甲烷的混合物，原料與脫脂劑用量體積比為 1:1 1:10。
根據(jù)油脂量多少確定更換液體次數(shù)(為2~5次)，中途攪拌，至 溶液清亮，無油脂；用純水漂洗至無有機(jī)溶劑殘留，清洗3 5次。
所述脫蛋白、脫細(xì)胞為釆用高滲溶液，低滲溶液和酶溶液中的一 種或兩種混合溶液進(jìn)行浸泡處理，體積比為1:1 1:3，所述酶溶液處理 為0.18~0.5%的胰蛋白酶溶液浸泡3~10小時；所述高滲溶液或低滲溶 液浸泡10 18小時。然后用純水反復(fù)漂洗，漂洗24小時以上，中途更 換數(shù)次，至溶液完全清亮。
所述解聚、分絲重組采用物理方法將纖膜剝?nèi)?、肌纖維解聚、并 分絲和重新編織。分絲后的肌腱直徑和長度尺寸按照所生產(chǎn)產(chǎn)品的規(guī) 格制定，編織按照兩股螺旋編織或三股麻花編織等方法根據(jù)需要進(jìn) 行。所述冷凍干燥釆用1 2小時-80'C深度溫預(yù)凍，凍干溫度為 -45 -55 °C ， 24~48小時凍干。
所述二次消毒采用20 25kGy劑量的Y射線輻照消毒滅菌。
本發(fā)明所述的生物衍生肌腱修復(fù)材料的制備方法，包括如下步 驟先將同種或異種肌腱進(jìn)行消毒，脫脂，脫蛋白、脫細(xì)胞，冷凍干 燥，解聚、分絲重組，二次消毒而成。
具體包括如下步驟
1) 原料消毒處理先將人體或異種肌腱進(jìn)行清洗，然后用消毒 液進(jìn)行消毒處理，所述消毒液及處理時間為75%酒精5 30分鐘； 0.5~2%11202浸泡4~10小時；0.08~1.5%的過氧乙酸和5 20%的乙醇 的混合水溶液浸泡10~60分鐘；0.01~2%氫氧化鈉溶液浸泡6 12小 時；5 20%的硫酸新霉素溶液浸泡15 60分鐘；碘伏浸泡10~30分鐘， 使用體積比為1:5 1:15。
2) 脫脂處理將消毒后的肌腱釆用脫脂劑進(jìn)行脫脂至上清液清 澈，漂洗干凈備用，所述的脫脂劑為戊二醛、甲醛、混合體積比(v/v) 為3:1 1:3的甲醇與氯仿、乙醚或二氯甲烷的混合物，肌腱材料與脫 脂劑用量體積比為1:1 1:10。
3) 脫蛋白、脫細(xì)胞處理將脫脂后的肌腱釆用高滲溶液、低滲 溶液和酶溶液中的一種或兩種混合溶液進(jìn)行浸泡處理；所述酶溶液處 理為0.18 0.5%的胰蛋白酶溶液浸泡3~10小時；高滲溶液或低滲溶液 浸泡10 18小時。
4) 然后經(jīng)冷凍干燥，解聚、分絲重組，二次消毒處理而成。 本發(fā)明材料的處理過程中對處理環(huán)境的要求為原材料清洗、粗加
工車間材料成型加工、處理車間均為潔凈度10萬級要求；材料冷凍 干燥車間，產(chǎn)品小包裝車間為潔凈度l萬級。處理過程中與材料接觸 的水均為純水。
本發(fā)明在于在肌腱支架材料的制備方法中系統(tǒng)地使用了消毒，脫
8脂，脫細(xì)胞的步驟。利用11202或過氧乙酸-乙醇混合溶液進(jìn)行前期消 毒處理，以最大限度減少移植受體受到感染的幾率；用甲醇、三氯甲 烷、甲醛等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行脫脂處理，用高滲溶液、胰蛋白酶溶液進(jìn)行 脫蛋白脫細(xì)胞處理，使組織失去具有抗原性的蛋白質(zhì)、脂肪、細(xì)胞及 其代謝功能，從而最大限度降低其免疫原性和炎性反應(yīng)，使之適合多 種不同類細(xì)胞的生長，并保持較高的活性。
通過短時間的超低溫預(yù)凍和凍干處理， 一方面能夠保證支架材料 的力學(xué)性能不受破壞，比長時間冷凍明顯提高；同時能夠更好的保持 支架的空間三維結(jié)構(gòu)，經(jīng)過去纖膜、分絲重編織處理有利于細(xì)胞、神 經(jīng)、血管長入，促進(jìn)修復(fù)組織的術(shù)后愈合與再生。同時作為組織工程 支架材料的應(yīng)用中使得培養(yǎng)的細(xì)胞易于長入，促進(jìn)肌腱組織工程化體 系的構(gòu)建。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
本產(chǎn)品的原料來源為自愿者捐贈。無遺傳性、免疫性疾病，3月 內(nèi)無使用激素類藥物史，近期無使用呼吸機(jī)歷史。每個捐贈者的肌腱 為一批號。捐贈者均經(jīng)血清學(xué)檢驗(yàn)，包括艾滋病病毒(HIV)抗體； 乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg);丙型肝炎病毒(HCV)抗體；梅 毒螺旋體抗體的檢測，排除肝炎、性病、艾滋病等傳染性疾病，并保 留原始檢測結(jié)果，同時提取血清標(biāo)本冷凍保存以供3月后復(fù)測及今后 檢測用。來源于動物(如豬、牛)的肌腱經(jīng)檢疫，證實(shí)無人畜共患疾 病存在。 實(shí)施例1
將新鮮合格的人體肌腱剔除附屬組織，把標(biāo)本放在去熱原的玻璃
容器里用去熱原純水反復(fù)漂洗，去除血液成分；將材料用P/。H202浸
泡(1:10體積)，37。C水洛搖床振動搖蕩6小時(40rpm),每3小時 更換液體；去熱原純水反復(fù)漂洗1小時，每10分鐘更換液體；將材料用甲醇/氯仿(v/v， 1/1)脫脂(用量l:3體積比)，浸泡l小時，期 間換液2次，中途要攪拌，至溶液清亮，無油脂為止；去熱原純水漂 洗至無有機(jī)溶劑殘留，即無氯仿氣味；將材料用0.25%胰蛋白酶消化 6小時，用量1:2體積比；去熱原純水反復(fù)漂洗，漂洗24小時，中途 更換數(shù)次，至溶液完全清亮；將材料放置于去熱原不銹鋼盤，置于-80 'C冷凍1小時，轉(zhuǎn)入凍干機(jī)冷凍干燥，冷凍溫度為-55"C, 24小時凍 干，凍干后將材料用機(jī)械力去除纖膜、將肌纖維解聚、并分絲和按兩 股螺旋或三股麻花重新編織，重組后加工成不同規(guī)格包裝，25kGy輻 照滅菌。 實(shí)施例2
將新鮮合格的人體肌腱材料剔除附屬組織，把標(biāo)本放在去熱原的 玻璃容器里用去熱原純水反復(fù)漂洗，去除血液成分；將材料用75%酒 精消毒20分鐘，再用0.8%的過氧乙酸-10%乙醇混合溶液中進(jìn)行消毒 處理，材料與溶液的質(zhì)量體積比為1:5，浸泡50分鐘，每25分鐘換 液l次，中途攪拌。用去熱原純水反復(fù)漂洗l小時，每20分鐘更換 液體；將材料用甲醇/二氯甲垸(v/v， 3/1)脫脂(用量1:3體積比)， 浸泡1.5小時，換液2次，中途要攪拌，至溶液清亮，無油脂為止； 去熱原純水漂洗至無有機(jī)溶劑殘留，即無氯仿氣味；將材料用0.18% 胰蛋白酶消化8小時，用量1:3體積比；去熱原純水反復(fù)漂洗，漂洗 24小時，中途更換數(shù)次，至溶液完全清亮；將材料放置于去熱原不 銹鋼盤，置于-8(TC冷凍1小時，轉(zhuǎn)入凍干機(jī)冷凍干燥，冷凍溫度為-45 °C， 48小時凍干，凍干后將材料用機(jī)械力去除纖膜、將肌纖維解聚、 并分絲和按兩股螺旋或三股麻花重新編織，重組后加工成不同規(guī)格包 裝，25kGy輻照滅菌。 實(shí)施例3
將新鮮牛肌腱材料剔除附屬組織，把標(biāo)本放在去熱原的玻璃容器
里用去熱原純水反復(fù)漂洗，去除血液成分；將材料用2%11202浸泡(i'.8體積)，37。C水洛搖床振動搖蕩5小時(40rpm)，前2小時更換液 體；去熱原純水反復(fù)漂洗1小時，每10分鐘更換液體；將材料用甲 醇/氯仿(v/v， 1/1)脫脂(用量1:3體積比)，浸泡1小時，換液2 次，中途要攪拌，至溶液清亮，無油脂為止；去熱原純水漂洗至無有 機(jī)溶劑殘留，即無氯仿氣味；將材料用0.5%胰蛋白酶消化3小時， 用量1:2體積比；去熱原純水反復(fù)漂洗，漂洗24小時，中途更換數(shù) 次，至溶液完全清亮；將材料放置于去熱原不銹鋼盤，置于-80。C冷 凍1小時，轉(zhuǎn)入凍干機(jī)冷凍干燥，冷凍溫度為-5(TC， 36小時凍干， 凍干后將材料機(jī)械力去除纖膜、將肌纖維解聚、并分絲和按兩股螺旋 或三股麻花重新編織，重組后加工成不同規(guī)格包裝，20kGy輻照滅菌。 實(shí)施例4
將新鮮牛肌腱材料剔除附屬組織，把標(biāo)本放在去熱原的玻璃容器
里用去熱原純水反復(fù)漂洗，去除血液成分；將材料用1.5%氫氧化鈉
溶液浸泡6小時，取出新干后，用10%的硫酸新霉素溶液浸泡30分 鐘，材料與溶液體積比為1:5;碘伏浸泡30分鐘，使用材料與碘伏體 積比(材料/溶液)為體積比為1:15。純水反復(fù)漂洗l小時，每10分 鐘更換液體；將材料用甲醇/氯仿(v/v， 2/1)脫脂(用量1:10體積比)， 浸泡l小時，換液2次，中途要撹拌，至溶液清亮，無油脂為止；純 水漂洗至無有機(jī)溶劑殘留，即無氯仿氣味；將材料用0.25%胰蛋白酶 消化10小時，用量1:2體積比；去熱原純水反復(fù)漂洗，漂洗24小時， 中途更換數(shù)次，至溶液完全清亮；將材料放置于去熱原不銹鋼盤，置 于-80。C冷凍l小時，轉(zhuǎn)入凍干機(jī)冷凍干燥，冷凍溫度為-55"C, 36小 時凍干，凍干后將材料機(jī)械力去除纖膜、將肌纖維解聚、并分絲和按 兩股螺旋或三股麻花重新編織，重組后加工成不同規(guī)格包裝，25kGy 輻照滅菌。 實(shí)施例5
將新鮮豬肌腱材料剔除附屬組織，把標(biāo)本放在去熱原的玻璃容器洗，去除血液成分；將材料用用0.5%11202浸
泡10小時。純水反復(fù)漂洗l小時，每10分鐘更換液體；將材料用戊 二醛浸泡2小時，浸泡體積比為1:3，每l小時換液l次，中途要攪 拌，至溶液清亮。純水漂洗至無有機(jī)溶劑殘留；將材料用10mM的 TrizmaHCl, 5mM的EDTA的低滲溶液浸泡12小時后再用50mM的 TrizmaHCl， 10mM的EDTA的高滲鹽水浸泡12小時，洗凈后用0.25% 胰蛋白酶消化6小時，用量1:2體積比；去熱原純水反復(fù)漂洗，漂洗 24小時，中途更換數(shù)次，至溶液完全清亮；將材料放置于去熱原不 銹鋼盤，置于-80。C冷凍1小時，轉(zhuǎn)入凍干機(jī)冷凍干燥，冷凍溫度為-50 'C， 40小時凍干，凍干后將材料機(jī)械力去除纖膜、將肌纖維解聚、 并分絲和按兩股螺旋或三股麻花重新編織，重組后加工成不同規(guī)格包 裝，20kGy輻照滅菌。 實(shí)施例6
將新鮮合格的人體肌腱材料剔除附屬組織，把標(biāo)本放在去熱原的
玻璃容器里用去熱原純水反復(fù)漂洗，去除血液成分；將材料用用1.5% &02浸泡6小時。純水反復(fù)漂洗l小時，每10分鐘更換液體；將材 料用甲醛浸泡5小時，浸泡體積比為1:3，每l小時換液l次，中途 要攪拌，至溶液清亮。純水漂洗至無有機(jī)溶劑殘留；將材料用0.45% 胰蛋白酶消化5小時，用量1:3體積比；去熱原純水反復(fù)漂洗，漂洗 24小時，中途更換數(shù)次，至溶液完全清亮；將材料放置于去熱原不 銹鋼盤，置于-80"C冷凍1小時，轉(zhuǎn)入凍干機(jī)冷凍干燥，冷凍溫度為-45 °C， 48小時凍干，凍干后將材料機(jī)械力去除纖膜、將肌纖維解聚、 并分絲和按兩股螺旋或三股麻花重新編織，重組后加工成不同規(guī)格包 裝，25kGy輻照滅菌。 實(shí)施例7
利用實(shí)施例1制備的組織工程肌腱支架材料作為支架載體負(fù)載 肌腱來源的成纖維細(xì)胞，構(gòu)建組織工程肌腱。所用肌腱人體四肢肌腱，
12離培養(yǎng)獲得，復(fù)合到支架材料中。方法為
在50RPMI1640培養(yǎng)液中，加入7.5ml胎牛血清，調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為 6xl()S個/ml，置于37。C、 5%C02、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將支架 材料置于上述細(xì)胞懸液中，輕輕混勻，在二氧化碳培養(yǎng)箱中預(yù)孵 30min。培養(yǎng)12h后，培養(yǎng)液逐漸變清亮，表明大部分細(xì)胞已貼附在 支架材料上。培養(yǎng)48h時，支架材料上附著有大量肌腱細(xì)胞，培養(yǎng)第 7天支架材料上的細(xì)胞分布趨向均勻分布，并在某些地方出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)。 細(xì)胞分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，部分支架出現(xiàn)粘連，出現(xiàn)搭橋現(xiàn)象。培養(yǎng) 18天時支架材料上的細(xì)胞團(tuán)進(jìn)一步增大，導(dǎo)致一些細(xì)胞團(tuán)從支架上 脫落，懸浮在培養(yǎng)液中；培養(yǎng)28天后，此時支架材料已部分降解， 肌腱細(xì)胞團(tuán)布滿支架表面?？傮w來說，利用該材料構(gòu)建組織工程肌腱， 細(xì)胞可以良好地粘附，生長，增殖，并表達(dá)很好的細(xì)胞功能。 實(shí)施例8
實(shí)驗(yàn)動物1-3歲齡雌雄不限的健康四川獼猴，體重5.35土1.9kg。 實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分為兩組，A組，同種異體重組衍生肌腱材料移 植組；B組，自體肌腱移植組。這兩種肌腱材料分別依次植入同一只 手，觀察l、 2、 3、 6、 12周5個時間點(diǎn)，每個時間點(diǎn)觀察2只手。
實(shí)驗(yàn)方法釆用靜脈吸入復(fù)合麻醉，氣管插入，無菌條件下，切 開手掌指部皮膚，顯露肌腱，在纖維鞘管區(qū)選取第4及5指屈指深肌 腱，切取2.5cm肌腱，依次植入A組和B組的肌腱修復(fù)材料修復(fù)肌 腱缺損。
實(shí)驗(yàn)觀察術(shù)后1周時A組肌腱橋接部、植入物表便大部分有很 薄的被膜覆蓋，未見明顯的粘連，植入物活動度較大易抽出，手術(shù)部 位出現(xiàn)水腫，有炎性反應(yīng)；B組移植的肌腱表面有很薄的被膜覆蓋， 橋接部愈合不牢，輕度水腫，l級粘連，周圍有炎性反應(yīng)，但相對輕 與A組。術(shù)后2周時A組植入物表面由增厚的被膜完全覆蓋，可見 粘連(l級)，可銳性分離，肌腱橋接部愈合較牢固，剝離表面的被
13膜可見植入物變得較致密，水腫逐漸減輕，組織灰白，周圍炎性反應(yīng)
明顯減輕；B組肌腱表面有被膜覆蓋，肌腱的橋接部愈合較牢與周圍 組織粘連，炎性反應(yīng)減輕。術(shù)后3周時A組植入物表面仍由增厚的 被膜覆蓋，l級粘連，可銳性分離，肌腱橋接部愈合牢固，剝離的被 膜可見植入物致密，水中明顯減輕，組織呈白色，炎性反應(yīng)明顯減輕； B組肌腱的表面有被膜覆蓋，肌腱橋接部愈合較牢，與周圍組織有l(wèi) 級粘連，無明顯炎性反應(yīng)。術(shù)后6周時A組生成新生肌腱，表面仍 由被膜包繞，與周圍組織粘連。B組生成新生肌腱，被膜包圍，易剝 離，與周圍組織粘連，肌腱橋接部愈合。術(shù)后12周時A組新生肌腱 連續(xù)性不完整，植入物變細(xì)，表面仍有被膜包繞，與周圍組織輕度粘 連，肌腱橋接部位愈合；B組新生肌腱較為完整，被膜包繞易剝離， 與周圍組織粘連，肌腱橋接部位愈合。通過比較可以看出，通過本方 法制備的生物衍生肌腱修復(fù)材料能夠誘導(dǎo)肌腱組織再生，新生肌腱組 織與正常相似，修復(fù)效果與自體肌腱移植相似。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳 盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本 領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ) 上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1. 一種生物衍生肌腱修復(fù)材料，其特征在于，以同種或異種肌腱為原料，通過消毒，脫脂，脫蛋白、脫細(xì)胞，冷凍干燥，解聚、分絲重組，二次消毒而成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的生物衍生肌腱修復(fù)材料，其特征在于，所述消毒為釆用消毒液進(jìn)行處理，原料與消毒液的體積比為1:5 1:15，消毒液為酒精、H202、過氧乙酸、氫氧化鈉、碘伏或硫酸 新霉素。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物衍生肌腱修復(fù)材料，其特征在于， 所述消毒液進(jìn)行處理為75%酒精5 30分鐘；或0.5 2%1"1202浸泡4 10 小時；或0,08~1,5%的過氧乙酸和5~20%的乙醇的混合水溶液浸泡 10 60分鐘；或0.01~2%氫氧化鈉溶液浸泡6~12小時；或5 20%的硫酸 新霉素溶液浸泡15 60分鐘；或碘伏浸泡10 30分鐘。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l-3任意一項(xiàng)所述的生物衍生肌腱修復(fù)材料，其 特征在于，所述脫脂為釆用脫脂劑進(jìn)行處理，至上清液清澈，漂洗干 凈備用，所述的脫脂劑為戊二醛、甲醛、混合體積比(v/v)為3:1 1:3 的甲醇與氯仿、乙醚或二氯甲烷的混合物，原料與脫脂劑用量體積比 為1:1 1:10。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l-4任意一項(xiàng)所述生物衍生肌腱修復(fù)材料，其特 征在于，所述脫蛋白、脫細(xì)胞為釆用高滲溶液，低滲溶液和酶溶液中 的一種或兩種混合溶液進(jìn)行浸泡處理；所述酶溶液處理為0.18~0.5% 的胰蛋白酶溶液浸泡3 10小時；所述高滲溶液或低滲溶液浸泡10 18 小時。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l-5任意一項(xiàng)所述生物衍生肌腱修復(fù)材料，其特 征在于，所述二次消毒釆用20 25kGy劑量的y射線輻照消毒滅菌。
7. 制備權(quán)利要求l-6任意一項(xiàng)所述生物衍生肌腱修復(fù)材料的方法， 其特征在于，包括如下步驟先將同種或異種肌腱進(jìn)行消毒，脫脂，脫細(xì)胞及解聚、分絲重組，最后經(jīng)冷凍干燥，二次滅菌消毒而成。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的生物衍生肌腱修復(fù)材料的方法，其特征在于，包括如下步驟1) 原料消毒處理先將人體或異種肌腱進(jìn)行清洗，然后用消毒 液進(jìn)行消毒處理，所述消毒液及處理時間為75%酒精5 30分鐘； 0.5 2%11202浸泡4~10小時；0.08~1.5%的過氧乙酸和5~20%的乙醇 的混合水溶液浸泡10 60分鐘；0.01~2%氫氧化鈉溶液浸泡6 12小 時；5~20%的硫酸新霉素溶液浸泡15-60分鐘；碘伏浸泡10 30分鐘， 使用體積比為1:5 1:15;2) 脫脂處理將消毒后的肌腱采用脫脂劑進(jìn)行脫脂至上清液清 澈，漂洗干凈備用，所述的脫脂劑為戊二醛、甲醛、混合體積比(v/v) 為3:1 1:3的甲醇與氯仿、乙醚或二氯甲烷的混合物，肌腱材料與脫 脂劑用量體積比為1:1 1:10;3) 脫蛋白、脫細(xì)胞處理將脫脂后的肌腱釆用高滲溶液、低滲 溶液和酶溶液中的一種或兩種混合溶液進(jìn)行浸泡處理；所述酶溶液處 理為0.18~0.5%的胰蛋白酶溶液浸泡3~10小時；高滲溶液或低滲溶液 浸泡10 18小時；4) 然后經(jīng)冷凍干燥，解聚、分絲重組，二次消毒處理而成。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種生物衍生肌腱修復(fù)材料，以同種或異種肌腱為原料，通過消毒，脫脂，脫蛋白、脫細(xì)胞，冷凍干燥，解聚、分絲重組，二次消毒而成。本發(fā)明所涉及的肌腱支架材料制備方法，一方面通過除掉軟組織、消毒、脫去脂肪及脫細(xì)胞處理過程破壞肌腱組織的外圍結(jié)構(gòu)，降低移植受體對肌腱的排斥性，另一方面通過凍干過程進(jìn)一步保持肌腱組織的基本機(jī)構(gòu)、部分酶活性及肌腱組織的連續(xù)性，為肌腱重新血管化和細(xì)胞組織提供良好的支架結(jié)構(gòu)。
文檔編號A61L27/00GK101496912SQ20081005719
公開日2009年8月5日 申請日期2008年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月30日
發(fā)明者李次會 申請人:北京大清生物技術(shù)有限公司