專利名稱：：以3-乙酰氧基-1,1-環(huán)丁烷二羧酸根為離去基團的新型水溶性Pt(II)抗癌配合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及到一類以3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁垸二羧酸根為離去基團的水溶性鉑(n)抗癌配合物，屬于化學制藥領域。
背景技術：
：癌癥是一種嚴重威脅人類健康和生命的疾病，是繼心血管疾病后的全球第二大死亡原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織大會估計，2005年全世界5800萬死亡總數(shù)中，大約有760萬人死于癌癥，預計在今后10年將有8400萬人死于癌癥。近年來，由于環(huán)境惡化、不良生活習慣以及人口老齡化等因素的影響，我國的癌癥發(fā)生率也不斷增加，每年癌癥新發(fā)病例為220萬，因癌癥死亡人數(shù)為160萬。因此，癌癥己成為人類亟待攻克的醫(yī)學難題之一。目前治療癌癥主要有三大手段:手術治療、放射治療和化學治療。然而，手術治療和放射治療主要針對的是局部或區(qū)域性腫瘤，對發(fā)生全身多處轉移的惡性腫瘤只能依賴化學治療。此外，目前手術治療和放射治療的技術已經(jīng)相當完善，已不能期望繼續(xù)取得顯著進步。而化學療法的歷史雖然較短，但發(fā)展較決，已經(jīng)取得了很多成就，因而在治療腫瘤方面可以期望從化學療法獲得更好的發(fā)展?；煹幕A是化療藥物，因此，世界各國每年都投入大量人力物力和財力進行抗癌藥物的研究。鉑類抗癌藥物是上世紀70年代末發(fā)展起來的一類無機抗癌化合物，由于其抗癌活性強、作用譜較廣，作用機制獨特，與非鉑類抗癌藥物不產(chǎn)生交叉耐藥性，是治療許多腫瘤的首選藥物，得到廣泛使用。目前批準上市的鉑類拋中瘤藥物有六個，它們分別是順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、奈達銷(nedaplatin)、舒銷(sunpla，eptaplatin)禾口樂銷(lob印latin)。據(jù)最新統(tǒng)計，現(xiàn)臨床使用的i^化療方案中，有85%的方案是鉬類抗腫瘤藥物為主藥，或有鉑類抗腫瘤藥物參與配伍。下面為目前臨床上使用的鉑類抗癌藥物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>然而，鉑類抗癌藥物存在較大的毒副作用，接受治療的癌癥患者通常出現(xiàn)骨髓抑制如血小板低下、惡心嘔吐、腎和神經(jīng)損傷等嚴重毒副作用，因此研究毒性小的新型鉑類配合物仍是目前抗癌藥研究的主要方向之一。
發(fā)明內容最新研究表明鉑類藥物的作用靶點為細胞的DNA，但只有約1%的藥物與DNA形成加合物A2Pt/DNA，抑制DNA的復制。其余的99%分布在其4也細胞器中?；趯︺K類抗癌藥物的認識和前期工作基礎，謝門認為鉑類抗癌藥物的毒性可能與作用于非耙標的99%的藥物所含的金屬鉑有關。鉑屬于非人體必須的微量金屬元素，在人體內很容易產(chǎn)生積累性中毒，而藥物的積累往往與其水溶性有關聯(lián)。因此，劍門預測可以通過采用極性大的離去基團來提高鉑類抗癌藥物的水溶性，加速藥物在發(fā)揮藥理作用后從體內清除，減少鉑在體內的積累，降低泰性。增加鉑類抗癌藥的水溶解度可以通過在其載體基團和/或離去基團上修飾極性基團來實現(xiàn)，為此，我們以臨床應用的銷類抗癌藥為先導化合物，經(jīng)過大量的研究和試驗，合成和篩選出水溶性好、毒性低的新型鉑(II)抗癌配合物。本發(fā)明的水溶性鉑(II)配合物，其化學結構如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，離去基團為3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根(3"C0CK:BDCA)，載體為己上市的鉑類抗腫瘤藥物的氨/胺配體，包括氨(鵬)、1R，2R-二氨基環(huán)己烷(DACH)、1，2-雙慮甲基)-環(huán)丁烷、2-異丙基-(4R，5R)-4,5-雙(氨甲基)-1,3-二氧環(huán)戊烷。本發(fā)明化合物的制備方法是以K2PtCl4為起始原料，加入KI，轉化成KaPtl4，與載體基團A2(A「2肌、lR，2R-二氨基環(huán)己烷、1,2-雙(氨甲基)-環(huán)丁烷、2_異丙基-(4R,5R)-4,5-雙(氨甲基)-l，3-二氧環(huán)戊垸)反應，制備出相應的cis-[Pt(II)A2lJ中間體，再在水中與3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀等摩爾定量反應，反應完全后過濾分離Agl，母液濃縮和冷凍干燥得到粗品。粗品在水乙醇=1:1的體系中重結晶得到本發(fā)明的配合物純品。所涉及的化學反應為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>本發(fā)明的化合物其特征在于它的溶解度大、抗癌活性高、毒副作用小，可以用于臨床治療癌癥。本發(fā)明的化合物可以帝喊兩種常規(guī)的制劑一凍干粉和注射液在臨床中使用。具體實式(1)3-乙酰氧基l，l-環(huán)丁烷二羧酸銀的制備先按文獻報道的方法[InorganicaChimicaAcA2004，357,4452-4466]制備3-羥基-l，l-環(huán)丁垸二羧酸(mp151-152°C)。取20g3-羥基l,l-環(huán)丁烷二羧酸，溶于200ml丙酮，加入33g新蒸乙酰氯，于50。C攪拌4h，蒸發(fā)除溶劑，得粗品，在異丙醚重結晶，得到白色晶體，6(TC烘干，得3-乙酰氧基-l,l-環(huán)丁烷羧酸15.5g,mp:128-129°C,產(chǎn)率60%。取3-乙酰氧基-l,l-環(huán)丁烷二羧酸10g，溶于100ml的水中，用lmol/LNaOH調節(jié)PH二6-7，加入104mmo1、100mlAgNO3(過量5%)，得到3-乙酰氧基-l，l-環(huán)丁烷二羧酸銀沉淀，過濾收集，用水、乙醇洗滌后在60^7(TC下真空干燥4小時，得到19g3-乙酰氧基-l，1-環(huán)丁烷二羧酸銀，產(chǎn)率92%。(2)cis-[Pt(II)A2l2]中間體的制備稱取5gK2PtCl4(12mmol)溶于50ml水中，過濾除去不溶物，在6(TC下，緩慢加入含KI12g(72mmol)的水溶液50ml，避光反應2—3小時后，滴加載體基團A2(NH331mmol,過量30%;DACH，12mmo1)，得到黃色沉淀，過濾收集，用水、乙醇洗滌后在60~70匸下真空千燥4小時，分別得到cis-[Pt(II)A2I2](A2=2NH3)5.5g，產(chǎn)率95%，(A2=DACH)6.3g，產(chǎn)率92%。(3)cis-[3-乙酰氧基-l,1—環(huán)丁垸二羧酸根.二氨合鉑(n)](LLC-1401)的合成取5g的cis-ptCNH^y,懸浮100ml水中，加入等摩爾量的3-乙酰氧基-1,1-環(huán)丁垸二羧酸銀4.28g，在45"C下攪拌反應8小時，檢査反應完全后過濾除去Agl沉淀，母液減壓WI到5ml，過濾收集白色晶體，得2.9g，產(chǎn)率65%。水溶性大于30mg/ml(室溫)特征結構參數(shù)為<1>元素分析:C22.1%，N6.54%,H3.29%,Pt45.2%與理論值C22.4%，N6.52%，H3.26%,Pt45.5%—致。<2>FAB+-MS(m/e，RI):4300000%)。0〉IR(cm",KBr壓片)..3286(svNH3),2960(w,vCH2),1722(s,vC=0),1639(vsVas(CO(J))，1374(sVs(COO-》。<4>NMR(dmso,ppm):1.97(s,3H,C瑪CO),2.54(仁2H，C//2),3.21(t,2H，C刷，4.14(s,6H,2Mf》,4.64(m,1H,3-C//)。這些參數(shù)符合所發(fā)明的配合物的化學結構。(4)cis-[1民2R-二氨基環(huán)己烷0-乙酰氧基-l，1—環(huán)丁烷二羧酸根合鉑(II)]的合成取5g的cis-[Pt(DACH)I2](DACH=1民2R-二氨S5f己烷)，懸浮100mJ水中，加入等摩爾量的3-乙酰氧基-l,l-環(huán)丁烷二羧酸銀3.67g，在45。C下攪拌反應12小時，檢査反應完全后過濾除去Agl沉淀，母液Mffi濃縮到5ml，過濾收集白色晶體，得3.4g，產(chǎn)率75%。水溶性大于5mg/ml(室溫)特征結構參數(shù)為<1>元素分析:C29.6%,N5.54%,H4.29%,Pt38.1%與理論值C33.0%,N5.50%,H4.32%,Pt383%—致。<2>FAB+-MS(m/e，RI):510(1^,100%)。0〉IR(cm"，KBr壓片)3208，3108(s，vNH2)，2941，2836(w,vCH2),1738(s,vC=0)，1646(vsVas(COO-))，1363(svs(COC0)0<4>13C-NMR(dmso,ppm):21.1(C-4,DACH),24.4(C誦3，DACH),31.8(C-2,CBDCA)，49.6(C-l,CBDCA),62.3,62.5(C-l，C-2，DACH),64.2(C-3,CBDCA)，170.4(00),176.6,176.8(COO—)。這些參數(shù)符合所發(fā)明的配合物的化學結構。(5)發(fā)明的配合物的急性毒性昆明種小鼠，體重20-22克，眼雄各半，購自上海斯萊克試驗動物有限責任公司，許可證號SCXK(滬)2004—0005。LLC-1401用5%葡萄糖溶液配制。小鼠單次靜脈注射不同劑量的LLC-1401。給藥后觀察死亡率及毒性情況，共觀察14天，根據(jù)死亡率應用Bliss方法計算LDn)，LD50。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>試驗測得所發(fā)明的配合物LLC-1401注射給藥的LD5。=490mmol/kg,相同的實7驗測得目前常用的鉑類抗癌藥卡鉑注射給藥的LD5Q=350mmd/kg,.因此LLC-1401急性毒性明顯比卡鉬低。(6)發(fā)明的配合物LLC-1401的抗癌作用昆明種小鼠，？，22±lg，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司。合格證號:SCXK(滬)2007—0005。飼養(yǎng)環(huán)境SPF級。LLC-1401和陽性對照藥卡鉬用5%GS酉己制成所需濃度。小鼠皮下接禾中S180肉瘤細胞，接種次日開始給藥。給藥劑量及方案見表l。第8天處死小鼠，取瘤稱重，計算抑瘤率。抑瘤率K對照組瘤重-治療組瘤重y對照組瘤重xioo表1.LLC-1401，卡鈾對小鼠Sl柳肉瘤的療效<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由此可知，本發(fā)明的化合物LLO1401對小鼠S180肉瘤生長有明顯的抑制作用，且呈現(xiàn)良好的量效關系，抑制率與目前常用的鉑類抗癌藥卡鉑相當。權利要求1.一種鉑(II)配合物，其特征在于具有下列化學結構式A2＝2NH3，2.根據(jù)權禾腰求1所述的鉑(II)配合物，其特征在于制成凍干粉或注射液。3.根據(jù)權利要求1所述的鉑(II)配合物，其特征是在制備臨床治療癌癥藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及一種新型的水溶性鉑(II)抗癌配合物，它的離去基團為3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根(3-COO-CBDCA)，載體為已上市的鉑類抗腫瘤藥物的氨/胺配體，包括氨(NH₃)、1R，2R-二氨基環(huán)己烷(DACH)、1，2-雙(氨甲基)-環(huán)丁烷、2-異丙基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷。他們可以采用常規(guī)的鉑類抗癌藥物制備的方法合成。本發(fā)明配合物的抗癌活性與目前臨床上常使用的鉑類藥物卡鉑相當、毒副作用明顯比卡鉑小，可以制成凍干粉或注射液，用于臨床治療癌癥。文檔編號A61P35/00GK101386629SQ20081005898公開日2009年3月18日申請日期2008年9月27日優(yōu)先權日2008年9月27日發(fā)明者堯余,侯樹謙,劉偉平,葉青松,樓麗廣,諶喜珠申請人:昆明貴金屬研究所;中國科學院上海藥物研究所