專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥藥物領(lǐng)域，尤其涉及一種從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白 術(shù)內(nèi)酯II的方法。白術(shù)(Atractylodes macrocephala koidz)，另lj名于術(shù)、冬術(shù)、浙術(shù)等，為多年 生草本植物，是菊科蒼術(shù)屬藥用植物，其根莖可以入藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》， 列為上品。白術(shù)性溫，味甘、苦，歸脾、胃經(jīng)，有健脾益氣、燥濕利水、止汗、 安胎的功能。主產(chǎn)于浙江、安徽等地，以浙江鄞縣、新昌地區(qū)產(chǎn)量最大。主要 用于脾虛食少、消化不良、腹脹泄瀉、倦怠無(wú)力、痰飲眩悸、水腫、自汗、胎 動(dòng)不安?，F(xiàn)代藥理研究表明，白術(shù)有保肝、利膽、利尿、抑菌、抗炎、抗腫瘤、 增強(qiáng)免疫力、降壓、降血糖、抗凝血、強(qiáng)壯、鎮(zhèn)靜等作用。白術(shù)的化學(xué)成分主要為白術(shù)揮發(fā)油，而揮發(fā)油中含量最多的為蒼術(shù)酮、白術(shù) 內(nèi)酯類(lèi)物質(zhì)。其中，蒼術(shù)酮具有降血壓作用，白術(shù)內(nèi)酯I、 II為抗炎有效成分， 白術(shù)內(nèi)酯III)具有抗癌作用(Endo K, Toguchi T， Toguchi F, et al. Antiinflammatory principles of Atractylodes. Chem. Pharm. Bull., 1979,27: 2954-2958.)。該類(lèi)成分還 具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸引的功能。白術(shù)內(nèi)酯II (atractylenoide II)屬于倍半萜內(nèi)酯類(lèi)化學(xué)物，分子式為 C15H1802，分子結(jié)構(gòu)式為白術(shù)內(nèi)酯II為無(wú)色針晶，溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，不溶于石 油醚、正己烷等低極性溶劑。白術(shù)內(nèi)酯11在白術(shù)中含量?jī)H0.07%(李偉.白術(shù)的有效物質(zhì)及質(zhì)量研究.南京:背景技術(shù)南京中醫(yī)藥大學(xué),2001，38.)，且分離比較困難?，F(xiàn)有技術(shù)常采用的分離方法是高 速逆流色譜分離(Chunxia Zhao, Chaohong He. Preparative isolation and purification of atractylon and atractylenolide III from the Chinese medicinal plant會(huì)a,/otfes 應(yīng)cracep/w/a by high-speed counter-current chromatography. J. Sep. Sci" 2006,29: 1630-1636.)和柱層析色譜分離(李偉.白術(shù)的有效物質(zhì)及質(zhì)量研究.南京南京 中醫(yī)藥大學(xué)，2001, 29-79.)，但前者在現(xiàn)階段工業(yè)化生產(chǎn)有一定難度，后者一般需 要經(jīng)重結(jié)晶等后續(xù)手段進(jìn)行分離后才能得到較純的物質(zhì)，這又可能損失一部分 物質(zhì)，不但如此，用柱層析法進(jìn)行分離，物質(zhì)得率、純度均較低。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成 分白術(shù)內(nèi)酯II的方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的 一種從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯n的方法，將干燥的白術(shù)根莖粉碎，粉末用中、低等極性的溶劑浸取，濃縮，得黃褐色揮發(fā)油粗提物；將所得的揮發(fā)油粗提物放置一段時(shí)間，待 其徹底氧化后，用正己垸-乙酸乙酯-乙醇-水按4:0 l:l 4:l間的任意比例配制 的混合溶劑萃取，取上相，濃縮，得精制的揮發(fā)油；精制的揮發(fā)油用柱層析色 譜法進(jìn)行分離，再用石油醚-乙酸乙酯按40 150:1間的任意比例配制的混合溶 劑進(jìn)行梯度洗脫，收集相應(yīng)流分；濃縮，回收溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù) 內(nèi)酯II。進(jìn)一步地，所述粉末用石油醚-乙酸乙酯按0 40:l間的任意比例配制的混合 溶劑浸取，用常壓蒸餾或者減壓蒸餾法濃縮，得黃褐色揮發(fā)油粗提物；所述浸 取方法為超聲法、冷浸、熱提、滲漉或索氏提取。進(jìn)一步地，取了上相后，再用下相洗滌上相，用常壓蒸餾或者減壓蒸餾法濃 縮，得精制的揮發(fā)油。本發(fā)明的有益效果是此方法在柱層析之前先對(duì)白術(shù)揮發(fā)油粗品進(jìn)行萃取、 氧化等前處理步驟，操作簡(jiǎn)單、成本低，且除去了白術(shù)揮發(fā)油中極性較大的成 分、提高了其中白術(shù)內(nèi)酯II的含量，因而可提高其得率和純度。


圖1是本發(fā)明從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯n的方法的操作流程圖；圖2是本發(fā)明從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯II的方法的柱層析色譜圖。
具體實(shí)施方式
下面根據(jù)附圖和具體實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明的目的和效果將變得更加明顯。如圖1所示，本發(fā)明從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯II的方法，包 括以下步驟一、 將千燥的白術(shù)根莖粉碎，粉末用中、低等極性的溶劑浸取，濃縮，得黃褐色揮發(fā)油。將市售的白術(shù)根莖放在陰涼處自然晾干后粉碎，粉末用石油醚-乙酸乙酯按0~40:1的比例配成的混合溶劑浸取，浸取方法包括超聲法、冷浸、熱提、滲漉 或索氏提取，用常壓蒸餾或者減壓蒸餾法濃縮，得黃褐色揮發(fā)油。二、 將步驟一獲得的白術(shù)揮發(fā)油粗提物放置一段時(shí)間待其徹底氧化后，用正己 垸-乙酸乙酯-乙醇-水按一定比例配制的混合溶劑萃取揮發(fā)油，取上相，濃 縮，得精制的揮發(fā)油。將步驟一獲得的白術(shù)揮發(fā)油粗提物放置一段時(shí)間或加熱使其徹底氧化后， 用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水按4:1:4:1至4:0:1:1間的任意比例配制的混合溶劑萃 取揮發(fā)油，取上相，再用干凈的下相洗滌上相若干次，用常壓蒸餾或者減壓蒸 餾法濃縮，得精制的揮發(fā)油。三、 精制后的揮發(fā)油用柱層析色譜法進(jìn)行分離，用一定配比的石油醚-乙酸乙酯 混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集相應(yīng)流分。柱層析時(shí)選用柱高為柱徑的IO倍以上的層析柱，所用硅膠的粒徑為60-100 目或更小，硅膠加熱活化與否均可；層析時(shí)首先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑在 洗脫梯度為200:1或者極性更小的混合溶劑(洗脫梯度小于200:1)除雜，再用 石油醚-乙酸乙酯混合溶劑在150:1至40:1之間的任意比例配制的混合溶劑進(jìn)行 洗脫；除雜時(shí)洗脫劑速度可在10ml/min以下任選，洗脫時(shí)速度應(yīng)為5ml/min或 更小，并收集相應(yīng)流分。四、 濃縮，回收溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II。用常壓蒸餾、減壓蒸餾法濃縮，回收溶劑，或?qū)⑷軇┳匀粨]干，即可得無(wú) 色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II。 實(shí)施例1 :將白術(shù)根莖自然晾干，粉碎成白術(shù)粗粉，用5倍體積的乙酸乙酯浸取2次 (6(TC的恒溫水浴，攪拌轉(zhuǎn)速500r/min，每次lh)，濃縮得黃褐色揮發(fā)油。放置 --段時(shí)間使其完全氧化后，用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水按4:1:4:1的比例配制的 混合溶液萃取，取上相，濃縮，得精制揮發(fā)油。精制后的揮發(fā)油用60-100目的 硅膠在Ol.OMOcm的層析柱中進(jìn)行分離，首先采用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑在 洗脫梯度為300:1、流速為5ml/min時(shí)除去雜質(zhì)峰，再用石油醚-乙酸乙酯混合溶 劑在洗脫梯度為50:1、流速為1ml/min時(shí)進(jìn)行洗脫，收集相應(yīng)流分，濃縮，回收 溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II，得率約1.6%(以揮發(fā)油上樣量為基準(zhǔn))， 純度約95.1%。 實(shí)施例2:將白術(shù)根莖自然晾干，粉碎成白術(shù)粗粉，用5倍體積的石油醚-乙酸乙酯按 1:1的比例配成的混合溶劑浸取2次(6(TC的恒溫水浴，攪拌轉(zhuǎn)速500r/min，每 次lh)，放置一段時(shí)間使其完全氧化后，用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水按4:1:4:1 的比例配制的混合溶液萃取，取上相，濃縮，得精制揮發(fā)油。精制后的揮發(fā)油 用60-100目的硅膠在01.0x40cm的層析柱中進(jìn)行分離，首先采用石油醚-乙酸 乙酯混合溶劑在洗脫梯度為300:1、流速為5ml/min時(shí)除去雜質(zhì)峰，再用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑在洗脫梯度為50:1、流速為lml/min時(shí)進(jìn)行洗脫，收集相應(yīng)流 分，濃縮，回收溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II，得率約1.9%(以揮發(fā) 油上樣量為基準(zhǔn))，純度約95.2%。 實(shí)施例3:將白術(shù)根莖自然晾干，粉碎成白術(shù)粗粉，用5倍體積的石油醚-乙酸乙酯按 40:1的比例配成的混合溶劑浸取2次(6(TC的恒溫水浴，攪拌轉(zhuǎn)速500r/min， 每次lh)，放置一段時(shí)間使其完全氧化后，用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水按4:1:4:1 的比例配制的混合溶液萃取，取上相，濃縮，得精制揮發(fā)油。精制后的揮發(fā)油 用60-100目的硅膠在01.0x40cm的層析柱中進(jìn)行分離，首先采用石油醚-乙酸 乙酯混合溶劑在洗脫梯度為300:1、流速為5ml/min時(shí)除去雜質(zhì)峰，再用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑在洗脫梯度為50:1、流速為lml/min時(shí)進(jìn)行洗脫，收集相應(yīng)流 分，濃縮，回收溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II，得率約1.9%(以揮發(fā) 油上樣量為基準(zhǔn))，純度約95.4%。實(shí)施例4:將白術(shù)根莖自然晾干，粉碎成白術(shù)粗粉，用5倍體積的石油醚-乙酸乙酯按 40:1的比例配成的混合溶劑浸取2次(6(TC的恒溫水浴，攪拌轉(zhuǎn)速500r/min， 每次lh)，放置一段時(shí)間使其完全氧化后，用正己垸-乙醇-水按4:1:1的比例配 制的混合溶液萃取，取上相，濃縮，得精制揮發(fā)油。精制后的揮發(fā)油用60-100 目的硅膠在01.0x40cm的層析柱中進(jìn)行分離，首先采用石油醚-乙酸乙酯混合溶 劑在洗脫梯度為300:1、流速為5ml/min時(shí)除去雜質(zhì)峰，再用石油醚-乙酸乙酯混 合溶劑在洗脫梯度為50:1、流速為lml/min時(shí)進(jìn)行洗脫，收集相應(yīng)流分，濃縮， 回收溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II，得率約1.5% (以揮發(fā)油上樣量為 基準(zhǔn))，純度約93.9%。實(shí)施例5:將白術(shù)根莖自然晾干，粉碎成白術(shù)粗粉，用5倍體積的石油醚-乙酸乙酯按 40:1的比例配成的混合溶劑浸取2次(6(TC的恒溫水浴，攪拌轉(zhuǎn)速500r/min， 每次lh)，放置一段時(shí)間使其完全氧化后，用正己垸-乙酸乙酯-乙醇-水按8:1:1:1 的比例配制的混合溶液萃取3次，取上相，濃縮，得精制揮發(fā)油。精制后的揮 發(fā)油用60-100目的硅膠在0)1.0x40cm的層析柱中進(jìn)行分離，首先采用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑在洗脫梯度為300:1、流速為5ml/min時(shí)除去雜質(zhì)峰，再用石 油醚-乙酸乙酯混合溶劑在洗脫梯度為50:1、流速為lml/min時(shí)進(jìn)行洗脫，收集 相應(yīng)流分，濃縮，回收溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II，得率約1.8%(以 揮發(fā)油上樣量為基準(zhǔn))，純度約94.8%。所得白術(shù)內(nèi)酯II晶體用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法(GC-MS)進(jìn)行鑒別 取少量白術(shù)內(nèi)酯II晶體進(jìn)行GC-MS分析，儀器TRACE GC 2000/TRACE MS ( ThermoQuest熱電儀器公司)。GC條件色譜柱DB-WAX 30mx0.25mmx0.25jom ，柱溫50°C(2min)-15°C/min-260°C(15min)，進(jìn)樣溫度 270°C，分流比50:1，載氣He,流速lml/min。 EIMS條件電子能量70Ev，質(zhì) 量范圍35-450,離子源溫度20(TC，界面溫度25(TC。白術(shù)內(nèi)酯II的保留時(shí)間為 16.23min。
權(quán)利要求
1. 一種從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯II的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將干燥的白術(shù)根莖粉碎，粉末用中、低等極性的溶劑浸取，濃縮，得黃褐色揮發(fā)油粗提物。(2)將所得的揮發(fā)油粗提物放置一段時(shí)間，待其徹底氧化后，用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水按4∶0～1∶1～4∶1間的任意比例配制的混合溶劑萃取，取上相，濃縮，得精制的揮發(fā)油。(3)精制的揮發(fā)油用柱層析色譜法進(jìn)行分離，再用石油醚-乙酸乙酯按40～150∶1間的任意比例配制的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集相應(yīng)流分。(4)濃縮，回收溶劑，即可得無(wú)色針狀晶體白術(shù)內(nèi)酯II。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯II的方法，其 特征在于，所述步驟(1)中，所述粉末用石油醚-乙酸乙酯按0 40:l間的任 意比例配制的混合溶劑浸取，用常壓蒸餾或者減壓蒸餾法濃縮，得黃褐色揮 發(fā)油粗提物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯II的方法，其 特征在于，所述浸取方法為超聲法、冷浸、熱提、滲漉或索氏提取。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯II的方法，其 特征在于，所述步驟(2)中，取了上相后，再用下相洗滌上相，用常壓蒸餾 或者減壓蒸餾法濃縮，得精制的揮發(fā)油。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從白術(shù)揮發(fā)油中分離有效成分白術(shù)內(nèi)酯II的方法，該方法是將干燥的白術(shù)根莖粉碎，粉末用中、低等極性的溶劑浸取，濃縮，得黃褐色揮發(fā)油；放置一段時(shí)間后，再用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水按一定比例配制的混合溶液萃取揮發(fā)油，取上相，濃縮，得精制的揮發(fā)油；精制揮發(fā)油用柱層析色譜以一定配比的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集相應(yīng)流分，濃縮，回收溶劑，即可得白術(shù)內(nèi)酯II。本發(fā)明在柱層析色譜分離之前先對(duì)白術(shù)揮發(fā)油粗品進(jìn)行萃取、氧化等前處理步驟，操作簡(jiǎn)單、成本低，并提高了白術(shù)內(nèi)酯II的得率和純度，避免了傳統(tǒng)的后處理步驟如重結(jié)晶等造成的晶體損失等問(wèn)題。
文檔編號(hào)A61K36/284GK101265247SQ20081006079
公開(kāi)日2008年9月17日 申請(qǐng)日期2008年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月22日
發(fā)明者何潮洪, 劍 沈, 王霏娜, 趙春霞, 照 雷 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)