專利名稱：：白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及白芨多糖的新用途，具體是白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：白芨系蘭科植物白發(fā)(Bletillastriata(Thunb)Reichb.f)的干燥塊莖。白芨膠又稱白芨多糖或白芨甘露聚糖(BletUlaglucomannan)，為白芨塊莖經(jīng)水提醇沉后所得的一種雜多糖。有關(guān)中藥文獻(xiàn)中記載，白芨多糖具有止血功能，用于各種原因所致的肌體內(nèi)外出血癥狀的治療；此外，還對(duì)人型結(jié)核桿菌有顯著抑制作用，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌也有抑制作用，是歷代醫(yī)家治療肺癆的主藥之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供白芨多糖在制藥中的新的應(yīng)用。本發(fā)明涉及白芨多糖作為制備增強(qiáng)造血功能的藥物中應(yīng)用。本發(fā)明涉及白復(fù)多糖作為制備升高造血干細(xì)胞的藥物中應(yīng)用。本發(fā)明涉及白芨多糖作為制備升高白細(xì)胞的藥物中應(yīng)用。本發(fā)明涉及白復(fù)多糖作為制備升高紅細(xì)胞的藥物中應(yīng)用。本發(fā)明涉及白芨多糖作為制備升高血小板的藥物中應(yīng)用。本發(fā)明涉及白茇多糖作為制備治療造血功能低下的藥物中應(yīng)用。上述藥物既可以單獨(dú)作為有效成分，也可以與其它無(wú)排斥作用的組分配伍構(gòu)成增強(qiáng)或改善造血功能的藥物組合物，包括白芨多糖及藥用載體或賦形劑。所述藥物可以為藥學(xué)上可以接受的各種劑型包括口服液、片劑、膠囊劑和顆粒劑。發(fā)明人采用常規(guī)血液學(xué)研究技術(shù)，檢測(cè)白復(fù)多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性造血功能低下的小鼠外周血的影響，發(fā)現(xiàn)白芨多糖對(duì)環(huán)磷酰胺所致的外周白細(xì)胞下降有一定的提升作用，此作用與等劑量陽(yáng)性藥物阿膠相當(dāng)；進(jìn)而研究了白芨多糖這種提升作用是否與促進(jìn)小鼠骨髓造血干細(xì)胞增殖有關(guān)，結(jié)果顯示白復(fù)多糖有促進(jìn)造血祖細(xì)胞生成及增加小鼠脾集落增殖形成的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示白芨多糖能促進(jìn)造血功能低下個(gè)體骨髓造血干細(xì)胞增殖和分化的作用。具體實(shí)施例方式為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面通過(guò)藥理試驗(yàn)及結(jié)果來(lái)說(shuō)明白發(fā)多糖在制藥領(lǐng)域中的新用途。實(shí)施例1白JL對(duì)小鼠外周血WBC白細(xì)胞的影響1.實(shí)^r動(dòng)物分組與給藥24只小鼠隨即分為4組，每組6只甲組一正常對(duì)照組乙組一模型組，腹腔注射環(huán)磷酰胺O.111^^*3天丙組一白發(fā)組(低劑量)，腹腔注射環(huán)磷酰胺O.lmg/g+3天，于其后的6天內(nèi)按0.lml/10g灌胃給予1.5°/白芨溶液丁組一白芨組(高劑量)，腹腔注射環(huán)磷酰胺O.lmg/gf3天，于其后的6天內(nèi)按0.lml/10g灌胃給予5%白芨溶液戊組一阿膠組，腹腔注射環(huán)磷酰胺0.lmg/g*3天，于其后的6天內(nèi)按0.lml/10g灌胃給予5%阿膠溶液2.外周血WBC計(jì)凄t:分別于灌胃的第三天和第六天取小鼠尾靜脈血取靜脈血20ji1于EP管中，再加入0.38ml白細(xì)胞稀釋液(3%乙酸溶液)，混勻，從混合溶液中取一定量加入等體積的苔盼藍(lán)溶液，混勻，吸取少許注入細(xì)胞計(jì)數(shù)池。計(jì)教:4竟下四角四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)月包數(shù)(白細(xì)月包凄t/ml-4個(gè)大方才各內(nèi)白細(xì)胞數(shù)/4*10*20*103)3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果用藥第三.六天白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(n=6，X±S)<table>complextableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>與正常對(duì)照組比較，A代O.05,AA代O.01;與模型對(duì)照組比較*戶<0.05,**尸<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)化療小鼠連續(xù)口服灌于白芨多糖溶液，第三天和第六天測(cè)定其外周白細(xì)胞與未給藥小鼠相比均有顯著性提高，高劑量白芨多糖溶液相對(duì)于低劑量多糖溶液對(duì)白細(xì)胞提升作用更明顯，并于陽(yáng)性藥阿膠相比無(wú)顯著性差異。說(shuō)明白芨多糖對(duì)外周白細(xì)胞有一定的增殖作用，且療效呈一定的劑量依賴性。實(shí)施例2白芨對(duì)骨髓造血干細(xì)胞作用1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥24只小鼠隨即分為4組，每組6只曱組一正常對(duì)照組乙組一模型組，腹腔注射環(huán)磷酰胺O.111^/8*3天丙組一白芨組(低劑量)，腹腔注射環(huán)磷酰胺0.lmg/g*3天，于其后的4天內(nèi)按0.lml/10g灌胃給予1.5°/白芨溶液丁組一白芨組(高劑量)，腹腔注射環(huán)磷酰胺0.lmg/g*3天，于其后的6天內(nèi)按O.lml/10g灌胃給予5%白芨溶液戊組一阿膠組，腹腔注射環(huán)磷酰胺0.lmg/g*3天，于其后的6天內(nèi)按0.lml/10g灌胃給予5%阿膠溶液2.骨髓有核細(xì)胞懸液制備于灌胃的第四天，取上述各組小鼠，用頸部脫臼方法殺死，剝離出l只股骨，用HANK，S液lml通過(guò)4〃2針頭沖出全部骨髓細(xì)胞并用針頭使細(xì)胞充分分散，計(jì)數(shù)骨髓細(xì)胞懸液中的有核細(xì)胞數(shù)。3.脾結(jié)節(jié)的形成由尾靜脈給750拉德y射線照射的小白鼠注射上述各組骨髓有核細(xì)胞懸液O.2ml，稀釋方法為假定細(xì)胞懸液的濃度為N(細(xì)胞計(jì)數(shù)的均數(shù))*2.5*104/ml，則應(yīng)4安下式稀釋Nx2.5xI04xVx0.2=3x104即取T'細(xì)胞懸液用HANK，S液稀釋到10ml,對(duì)每只受體小白鼠注射0.2ml經(jīng)稀釋后的細(xì)胞懸液。IO天后，取出脾臟，盡可能的去除沾連的脂肪，然后置于Bounes液中固定，1天后，在解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)每個(gè)脾臟上(正反兩面)的脾結(jié)節(jié)數(shù)4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果用藥第六天骨髓有核細(xì)胞數(shù)和CFU-S數(shù)的比較(n-6,X±S)組別劑量骨髓有核細(xì)胞(107)CFU-S數(shù)正常組一1.80±0.094615±1695模型組_0.85±0.14"2096±714AA白芨(低劑量)1.5g/kg1.24±0.18*4053±1639'白芨(高劑量)5g/kg1.44±0.19"4455±1589"阿膠5g/kg1.68±0.ir5320±1553"與正常對(duì)照組比較，A代O.05,AA代O.01;與模型對(duì)照組比較，*尸<0.05，**代0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)化療小鼠連續(xù)口服灌于白芨多糖溶液，第六天測(cè)定其骨髓有核細(xì)胞相對(duì)于未給藥小鼠有顯著性提高，高劑量白復(fù)多糖溶液相對(duì)于低劑量多糖溶液對(duì)骨髓有核細(xì)胞增殖效果更明顯。說(shuō)明白芨多糖對(duì)造血祖細(xì)胞有一定的增殖作用，且療效呈一定的劑量依賴性。而對(duì)于照射的小白鼠注射上述各組骨髓有核細(xì)胞懸液后十天觀察計(jì)數(shù)集落數(shù)發(fā)現(xiàn)給予白芨多糖的骨髓細(xì)胞懸液生成的集落數(shù)于未給藥生成的集落數(shù)相比有顯著性提高，高劑量白芨多糖溶液相對(duì)于低劑量多糖溶液對(duì)集落的增殖效果更明顯，且于等劑量陽(yáng)性藥阿膠相比無(wú)顯著性差異。說(shuō)明白發(fā)多糖對(duì)造血干細(xì)胞有一定的增殖作用，且療效呈一定的劑量依賴性。實(shí)施例3白發(fā)多糖的提取分離白芨徐州醫(yī)藥公司中藥飲片廠批號(hào)070903一.白芨多糖的制備12'3]:取100g的白芨粗粉，加入10倍量蒸餾水于60。C水浴浸泡3次，每次3h提取，過(guò)濾合并濾液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中7(TC濃縮至一定濃度，冷卻。濃縮液用Sevage法除去蛋白(即向濃縮液中加入1/3體積的氯仿曱醇為1:3的混合溶液，混勻，3000r/min離心5min除去蛋白沉淀，如此3次)，再將濃縮液裝入透析袋中透析3天除去小分子。透析內(nèi)液經(jīng)濃縮后緩慢加入95%乙醇若干至沉淀完全，析出大量白色絮狀沉淀。抽濾壓干，濾液回收乙醇。沉淀物中加入95%乙醇適量浸泡三次，使其充分脫水，減壓抽濾壓干，將沉淀物;故置恒溫電烤箱80~90°C烘干，得白芨多糖提取物9.7g。二.白芨多糖的含量測(cè)定[456]采用苯酚J克酸法進(jìn)行多糖的含量測(cè)定，其原理是根據(jù)多糖在濃錄^酸的作用下水解成單糖分子，并迅速脫水生成糖醛衍生物，再將其于苯酚縮合成有色化合物，于490nm處有最大吸收，吸收值于糖濃度呈線形關(guān)系，從而可比色測(cè)定其含量。Glu標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取Glu對(duì)照品(105。C干燥至恒重)0.0102g，置于100ml容量瓶中，加蒸餾水適量使溶解，稀釋至刻度，得濃度為0.102mg.ml—'Glu標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液。5°/。苯酚試劑的配制:取苯酚200g,加鋁片0.2g和0.lgNAHC(^進(jìn)行蒸餾，收集182。C餾分，取15g，加水300ml溶解，置棕色瓶中放冰箱內(nèi)備用。l.l標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取刻度試管7支向其中依次加入0.102mg.m"Glu標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液0.Oml，0.2ml,0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml用蒸餾水定容為2ml，向各管中依次加入lml5%的苯酚?；靹蚝?，再小心加入6ml濃H2S04(15-20s加完),室溫放置顯色30min。在紫外分光光度計(jì)上490nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)Glu溶液的吸光度A對(duì)其糖濃度C做標(biāo)準(zhǔn)曲線。<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.2.2曰間津青密度在連續(xù)5天內(nèi)分別耳又上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的Glu標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2ml，0.5ml和0.9ml,按制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行測(cè)定，以吸光度考察其精密度。<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.3白芨多糖的含量測(cè)定精密稱取三份白芨樣品分別為0.0159g，0.0146g和0.0127g，分別配成100ml溶液，作為樣品儲(chǔ)備液，各取樣品儲(chǔ)備液0.5ml三份分別置于刻度試管中，處理方法同Glu標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水定容為2.0ml,加1ml5%的苯酚混勻后，加入6ml濃H2S04,顯色30min后，測(cè)其吸光度A，將樣品溶液的吸光度A代入標(biāo)準(zhǔn)曲線從而算出樣品的濃度C。<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)論按照實(shí)施例3所述方法提取的白芨多糖提取物的多糖平均重量％含量為92.80。參考文獻(xiàn)RuiHY，WuGR,ZhangWM,etal.ResearchonextractionofpolysaccharidefromBletillastriata(Thunb.)Reichb.f.[J].ChinWiIdPlantResour(中國(guó)野生植物資源)，2001，20(1):14—16.RuiHY,WuGR，ChenJY，elal.Isolation,purificationandstructuralcharacterizationofneutralheteroopoly—saccharidefromBletillastriata[J].JAnhuiAgri—Univ(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào))，2004(1):35—38.陳景耀，吳國(guó)榮正交試驗(yàn)優(yōu)選白芨多糖硫酸酯化工藝的研究，中藥材，2005，28(1):43-45]張惟杰.糖復(fù)合物生化研究技術(shù)[M].第二版.上海上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999楊林莎，李玉賢，李明麗，等.苯酚一硫酸比色法測(cè)定百合多糖的含量.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2004,11(8):704—705.郭輝，張紅旭，曲楓，等.紅毛五加多糖膠嚢中多糖含量測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15(11):735。權(quán)利要求1、白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用。2、如權(quán)利要求1所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是白芨多糖在制備升高白細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。3、如權(quán)利要求1所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是白芨多糖作為制備升高造血干細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。4、如權(quán)利要求1所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是白芨多糖作為制備升高紅細(xì)胞和血小板的藥物中的應(yīng)用。5、如權(quán)利要求1所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是白芨多糖作為制備治療貧血的藥物中的應(yīng)用。6、權(quán)利要求l-5之一所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述藥物為白芨多糖單獨(dú)為藥物有效成分。7、權(quán)利要求l-5之一所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述藥物為白芨多糖與其它無(wú)排斥作用的組分配伍而成的藥物組合物。8、權(quán)利要求l-5之一所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述藥物包括白芨多糖及藥用載體或賦形劑。9、權(quán)利要求1-5之一所述的白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述藥物為口服液、片劑、膠嚢劑和顆粒劑。全文摘要本發(fā)明涉及白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用。所述應(yīng)用包括白芨多糖在制備增強(qiáng)造血功能的藥物中的應(yīng)用、在制備升高白細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用、制備升高造血干細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用、制備升高紅細(xì)胞和血小板的藥物中的應(yīng)用和制備治療貧血的藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61P7/00GK101342188SQ20081007020公開日2009年1月14日申請(qǐng)日期2008年8月29日優(yōu)先權(quán)日2008年8月29日發(fā)明者周岐新申請(qǐng)人:周岐新