專利名稱：一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術醫(yī)藥領域，本發(fā)明更具體涉及了一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽及 其應用。
背景技術：
在癌癥發(fā)生與治療的過程中，化學治療一直屬于主體部分。現有的臨床使用的化療藥物，如環(huán)磷酰胺、 順鉑、阿糖胞苷、阿霉素和長春新堿等，它們主要是用來破壞細胞的周期的，RNA、 DNA和蛋白質都是此類
藥物的耙向目標。近年來，AS203在對于白血病的治療上取得了很大的進展，但是，該藥物和其他化療藥物,
其本身都有自己的毒性，不管是一種化療藥物單獨使用還是幾種化療藥物結合運用在臨床治療上，其在對 癌癥有明顯療效，殺傷殺死癌細胞的同時，也會損害病人的正常細胞?；熕幬锏母弊饔米钇毡榈木褪菍?病人的骨髓產生極度抑制，造成病人的極大痛苦，甚至引起死亡。到目前，除了早發(fā)現癌癥病情并實行手 術切除腫瘤包塊外，對于已經擴散的腫瘤和白血病仍沒有特效藥物去治療[Cancer Biology癌生物學， R. J.B金著，劉以訓主譯，科學出版社，2002],現有臨床上用于癌癥治療的藥物大都是化合物，而短肽 在癌癥方面的應用尚無文獻報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的是針對上述問題，提供一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽及其應用。 本發(fā)明的一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽，其特征在于組成短肽的氨基酸主序列〈1〉
和編碼短肽的核苷酸主序列〈2〉如下
<1> J-Ala-B-Asn-0-Val-Z其中，J代表氨基酸Pro, Asn或Ala; B代表氨基酸Ser或Leu; 0代
表氨基酸Leu或Thr; Z代表氨基酸Lys， Ala或Arg <2>AHQ GCT或GCA或GCG或GCC IMC AAT或AAC NTG GTG或GTA或GTC或GTT AAA或AAG或GCC
其中，H代表核苷酸G， A或C; Q代表核苷酸G, T或C; M代表核苷酸T或C; N代表核苷酸C
或T;'
核苷酸T k C; N代表核苷酸C或T;
所述短肽的氨基酸主序列為氨基酸位置固定的主序列，其間隔的位置選擇排列相對應的氨基酸。
本發(fā)明的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽片段，其氨基酸主序列具有與該短肽氨基酸主序列
》70%的相同性，》90%的相似性，片段為把所述的7個氨基酸的序列從任意位置截取成3個或4個或5 個或6個氨基酸組成的與所述短肽具有同樣生物活性的短肽。
本發(fā)明的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽類似物具有與所述短肽相同的生物活性，所述類似 物是指在用所述短肽和另一種化合物融合或者用所述短肽的氨基酸序列融合另外的多肽或者蛋白質而形 成具有生物活性的多肽序列或蛋白質。
本發(fā)明的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽衍生物，其氨基酸序列具有與短肽氨基酸主序列》 70%的相同性，》90%的相似性，該衍生物是指把所述氨基酸的序列中的氨基酸的一個或者幾個氨基酸的 某個基團用另外的基團取代后與所述短肽具有同樣生物活性的短肽。
本發(fā)明的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽變體，其氨基酸序列具有與短肽氨基酸主序列》 70%的相同性，》90%的相似性，該變體是指一種具有一個或幾個氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編 碼它的核苷酸序列，所述改變包括在氨基酸序列或核苷酸序列中，在序列中間的任一位置缺失、插入或替 換氮基酸或核苷酸，或在序列兩端添加氨基酸或核苷酸。
本發(fā)明的短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備具有治療非實體腫 瘤人髓系各類病變細胞增生引起的白血病、治療人實體腫瘤癌細胞增殖的各類癌癥如肝癌、肺癌、胃癌、 乳腺癌、腸癌、宮頸癌等由于癌細胞無限增殖引發(fā)的一切癌癥、診斷與檢測癌癥的發(fā)生以及癌癥發(fā)生的惡 性程度藥物的應用。
本發(fā)明的短肽或核苷酸用于制備具有作為蛋白酶抑制劑或者促進劑或者親和試劑的藥物或者檢測試 劑的應用。
本發(fā)明的顯著優(yōu)點是本發(fā)明的短肽來自于運用生物信息學的方法把國際蛋白質數據庫的蛋白進行序 列比對，篩選出來的一種新型的具有活性功能的生物活性肽，運用本發(fā)明的短肽抑制或殺傷癌細胞的同時 對正常細胞無顯著傷害作用，解決了現有癌癥藥物在抑制或殺死癌細胞的同時對人體正常細胞也有嚴重傷 害的缺陷。


圖l是本發(fā)明的短肽對人肝癌細胞的抑制作用的效果試驗。圖中所示，本發(fā)明涉及的短肽明顯抑制人肝癌細胞系H印g2生長，但對正常人肝細胞系L02的影響不大。
圖2是運用透射電鏡檢驗分析本發(fā)明涉及的短肽誘導急性粒系白血病細胞凋亡的超微結構的試驗結 果。(a)對照組，Control為未加該短肽的陰性對照照片；(b)試驗組，LH為本發(fā)明所涉及的短肽誘導白 血病細胞凋亡的照片，圖片顯示為凋亡小體的出現，線粒體、溶酶體等都出現了顯著的凋亡特征。其中， Scale bar為5微米。
具體實施例方式
短肽的制備方法采用化學合成的方法，即本領域熟知的已經非常成熟的固相肽合成方法，既可以采用 Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護的氨基酸逐個偶眹到惰性固相載體上去，然后利用 強酸將肽鏈從載體上裂解下來，同時去除側鏈保護。
短肽的氨基酸主序列為氨基酸位置固定的主序列，其間隔的位置選擇排列相對應的氨基酸，例如，在 J位置的氨基酸有3種Pro, Asn或Ala;，此3種氨基酸都可以單一地安放在〈1〉中J的位置上，不管選擇 其中任何一種，該短肽仍具有其原有的生物活性，即抑制惡性腫瘤細胞增長，同樣地B和O所代表的位置 的氨基酸也有如此特性。
核苷酸采用人工合成方法制備；編碼短肽的核苷酸包含下組中的一種-
(a) 編碼具有所述氨基酸序列的短肽或其片段、類似物、衍生物或其變體的核苷酸；
(b) 與(a)所述核苷酸互補的核苷酸；
(c) 與(a)或(b)中所述核苷酸有》75%相同性的核苷酸；
該核苷酸基本由編碼具有<1>氨基酸序列短肽的核苷酸組成，本發(fā)明的核苷酸序列包括〈2〉中的核苷酸 序列，其形式為DNA形式包括cDNA或人工合成的DNA。 DNA可以是單鏈的也可以是雙鏈的。編碼短肽的編 碼區(qū)序列可以和〈2〉中的核苷酸相同，也可以不同，稱為變異體，其中變異體是指具有編碼〈D中的氨基酸 序列的編碼，但可以和〈2〉中的核苷酸不同。變異體可以是一個或兒個核苷酸取代、插入、缺失的核苷酸 序列，但不會改變編碼〈1〉中氨基酸序列的短肽的活性功能。
該短肽或核苷酸的"變體"是指一種具有一個或幾個氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的核 苷酸序列。改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入、添加或替換。變體可具 有"保守性"改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相類似的結構或化學性質，也可以有"非保守性" 改變，其中替換的氨基酸不具有與原氨基酸相類似的結構或化學性質。"缺失"是指在氨基酸序列或核苷 酸序列中一個或幾個氨基酸或核苷酸的缺失；"插入"是指在氨基酸序列或核苷酸序列的中間任意位置插
入一個或幾個氨基酸；"添加"是指在氨基酸序列或核苷酸序列的N端或C端添加一個或幾個氨基酸"替 換"是指用不同的氨基酸或核苷酸替換一個或幾個氨基酸或核昔酸。
該短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備具有抑制與治療包括但不 限于下述疾病的藥物的用途
1. 非實體腫瘤髓系白血病急性非淋巴細胞白血病(M1:未分化的原粒細胞白血?。籑2:部分分 化的原粒細胞白血?。籑3:急性早幼粒細胞白血?。籑4:急性粒、單核細胞白血??；M5:急性 單核細胞白血??；M6:急性紅血病或紅白血病；M7:急性巨核細胞白血病)，急性淋巴細胞白血 病，慢性粒細胞白血病，慢性粒-單細胞白血病，慢性單核細胞白血病以及其他特殊類型的細胞惡 性增殖類型的白血病。
2. 實體腫瘤癌癥肝癌、肺癌、宮頸癌、乳腺癌、胃癌、腸癌癥、胰腺癌以及其他的惡性細胞增殖 類型的癌癥疾病。
在計算短肽片段、短肽衍生物和短肽變體的氨基酸主序列具有與短肽氨基酸主序列的相同性和相似性 時，"相同性百分率"是指兩種或多種氨基酸或核酸序列比較中序列相同的百分率。根據Cluster法 (HiggingD.G. & Sharp P. M. ， Gene 1988， 73:234-237 )通過檢査所有配對之間的距離將各組序列排列 成簇，然后將各簇以成對或成組分配。兩個氨基酸序列如序列A和序列B之間的相同性百分率通過下式計 算
_序列A與序列B之間匹配的殘基個數X 100%_
序列A的殘基個數-序列A中間隔的殘基個數-序列B中間隔的殘基個數 "相似性"是指在確定兩條氨基酸序列比對中相同氨基酸序列位置確定后，在相同氨基酸之間排列的 對應的氨基酸的保守性取代程度。根據生物信息技術領域周知的氨基酸得分PAM 250 scoring matrix (Dayhoff, M. Schwartz, R. M. and Orcutt, B. C. Atlas of Protein Structure 1978， 345-352; DeLisi， C. and Kanehis4 M. Mathematical Biosciences 1984.69: 77-85; Schwartz, R. M. and Dayhoff, M. O. Atlas of Protein Structure, 1979. 353-358)，當相對應的不同氨基酸比較得分》0時，該兩個氨基酸相似；當不同氨基酸得分<0時，兩個氨基酸不相似。兩個氨基酸序列如序列C和序列D之間的相似性百分率通過下式計算
(序列C與序列D之間匹配的殘基個數+序列C與序列D之間相似的殘基個數)X腿
序列C的殘基個數-序列C中間隔的殘基個數-序列D中間隔的殘基個數
其中，序列C中間隔的殘基個數和序列D中間隔的殘基個數都不包括相似氨基酸的個數。
下面結合實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施舉例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。 下列所有列舉實施例所涉及的所有合成短肽都具有本發(fā)明涉及的藥物功能而不限于所列舉功能。
實施例1
抑制肝癌細胞的試驗(合成本發(fā)明涉及的短肽Pro-Ala-Leu-Asrt-Thr-Val-Lys)
人肝癌細胞系H印g2細胞的培養(yǎng)是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基來培養(yǎng)，以5X10V孔 的細胞密度種植入96孔細胞板，24小時后，把本發(fā)明涉及的短肽按照不同的濃度加入到細胞培養(yǎng)板中， 以等體積的PBS為對照組，24、 48、 72小時后用MTT方法檢驗活細胞成活率，給藥組和對照組比較，獲得 肝癌細胞的抑制率。如圖1所示。 實施例2
抑制急性粒細胞白血病(M2)(合成本發(fā)明涉及的短肽衍生物，在絲氨酸加磷酸類基團修飾 Pro-A1 a-S er/r"Asn-Thr-Va Hys )
人急性粒細胞白血病細胞系HL60細胞的培養(yǎng)是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基來培養(yǎng)， 以107孔的細胞密度種植入24孔細胞板后，立刻把本發(fā)明涉及的短肽按照不同的濃度加入到細胞培養(yǎng)板 中，以等體積的PBS為對照組，實驗結果表明該種細胞在5天的抑制率達到80%。
實施例3
急性粒細胞白血病細胞凋亡檢驗(合成本發(fā)明涉及的短肽片段，在序列中截取4個或者5個氨基酸 Asri-Leu-Val-Lys或Ala-Ser-Asn-Leu-Val)
急性粒細胞白血病細胞的培養(yǎng)是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基來培養(yǎng)，以1(f/孔的細胞 密度種植入24孔細胞板后，立刻把本發(fā)明涉及的短肽按照不同的濃度加入到細胞培養(yǎng)板中，以等體積的 PBS為對照組，現有臨床藥物As203作為陽性對照，24小時后，把細胞離心后去上清，用3%戊二醛-1.5% 多聚甲醛前固定細胞顆粒l天(4'C)以后，1%鋨酸-1. 5%亞鐵氰化鉀后固定1. 5h， PBS漂洗；70%酒精 飽和醋酸鈾染液塊染，酒精-丙酮梯度脫水，環(huán)氧樹脂618包埋劑包埋。超薄切片80nm，醋酸鈾、檸檬酸 鉛各染色5 min;在日立Hu-12A型或飛利浦EM 208型透射電鏡下觀察，實驗結果如圖2所示，其中，LH 為凋亡小體；Control為對照組，為一個完整細胞。 實施例4
1抑制肺癌細胞的試驗(合成本發(fā)明涉及的短肽變體，即在序列的N端增加一個Gla氮基酸 Gl3-Arg-Ala-Ser-Asn-Thr—Val-Lys)
人肺癌細胞系A549細胞的培養(yǎng)是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基來培養(yǎng)，以5 X 10'V孔的 細胞密度種植入96孔細胞板，24小時后，把本發(fā)明涉及的短肽按照不同的濃度加入到細胞培養(yǎng)板中，以 等體積的PBS為對照組，24、 48小時后分別用細胞計數板計數，給藥組和對照組比較，獲得肺癌細胞的抑 制率達78%。
5核苷酸或氨基酸序列表
<110〉李昊
〈120〉一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽及其應用
<160> 97
〈210〉 1
〈211〉 7
<212> PRT
〈213>人工序列
<220>
〈223〉 J代表氨基酸Pro, Asn或Ala; B代表氨基酸Ser或Leu; 0代表氨基酸Leu或Thr; Z代表氨基
酸Lys， Ala或Arg <400〉 1
J-Ala-B-Asn-0-Val-Z
〈210〉 2 <211> 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 〈220〉
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 2
ahq get tmc aat ntg gtg sas
<210> 3 <211> 21 <212> DNA <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; ra代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 3
ahq get tmc aat ntg gtg aag
〈210> 4 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 4
ahq get tmc aat ntg gta aaa
〈210〉 5 〈211> 21 <212> DNA 〈213〉人工序列
6<220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 5
ahq get tmc aat ntg gta aag
<210> 6 〈211> 21 <212〉腿 <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 6
ahq get tmc sst ntg gtc 333
<210> 7 <211> 21 〈212〉腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 7
ahq get tmc 33t ntg gtc 33g
<210> 8 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G， T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 8
ahq get tmc aat ntg gtt aaa
<210〉 9 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 〈220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 9
ahq get tmc ast ntg gtt ssg
〈210〉 10 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G, A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 10
ahq get tmc asc ntg gtg 333
<210> 11 <211〉 21 <212> DNA 〈213〉人工序列 <220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 11
ahq get tmc aac ntg gtg aag
<210> 12 〈211〉 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 12
ahq get tmc 33c ntg gt3 333
<210> 13 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 13
ahq get tmc sac ntg gta sag
<210> 14 <211> 21 〈212〉 DNA 〈213〉人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 14
ahq get tmc aac ntg gtc aaa
<210> 15 〈211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 15
ahq get tmc aac ntg gtc aag
8〈210〉 16 <211> 21 <212> DNA 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 16
ahq get tmc 33C ntg gtt 333
<210> 17 <211> 21 〈212〉腿 <213>人工序列 〈220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 17
ahq get 加c aac ntg gtt aag
<210> 18 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 18
ahq gca tmc aat ntg gtg aaa
<210〉 19 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G， A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 19
ahq gcs tmc 33t ntg gtg ssg
<210> 20 <211> 21 <212>麗 <213〉人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 20
ahq gcs tmc sst ntg gt3 ass <210> 21<211〉 21 〈212〉 DNA 〈213〉人工序列 〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 21
ahq gca tmc aat ntg gta aag
〈210〉 22 <211> 21 <212>腿 <213〉人工序列 〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 22
ahq gcs tmc 33t ntg gtc ssa
<210> 23 〈211> 21 <212>廳 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 23
ahq gca tmc 3st ntg gtc sag
<210〉 24 <211> 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 24
ahq gca tmc aat ntg gtt aaa
〈210〉 25 <211> 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 25
ahq gca tmc aat ntg gtt aag
<210> 26 〈211〉 21 <212> DNA〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 26
ahq gca tmc 3sc ntg gtg 333
<210〉 27 〈211〉 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400〉 27
ahq gca tmc aac ntg gtg aag
<210> 28 〈211〉 21 <212>醒 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 28
ahq gca tmc ssc ntg gts 333
<210> 29 <211> 21 〈212〉醒 〈213>人工序列 〈220〉
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 29
ahq gca tmc 3sc ntg gts sag
<210> 30 〈211> 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 30
ahq gc3 tmc 3sc ntg gtc ass
<210> 31 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
1〈223〉 h代表核苷酸G,八或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400>31
ahq gca tmc 3sc ntg gtc 3sg
<210〉 32 <211〉 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 32
ahq gca tmc ssc ntg gtt 333
<210〉 33 <211〉 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 33
ahq gca tmc ssc ntg gtt ssg
<210〉 34 <211〉 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220〉
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 34
ahq gcg tmc aat ntg gtg aaa
<210〉 35 〈211〉 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 35
ahq gcg tmc sst ntg gtg ssg
<210> 36 <211> 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 36<formula>formula see original document page 13</formula><210> 42 <211> 21 <212>腿 <213>人工序列 〈220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 42
ahq gcg tmc asc ntg gtg sss
〈210〉 43 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 43
ahq gcg tmc aac ntg gtg aag
<210> 44 <211> 21 〈212〉麗 <213〉人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 44
ahq gcg tmc aac ntg gta saa
<210> 45 <211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 45
ahq gcg tmc ssc ntg gt3 asg
<210> 46 <211〉 21 <212〉腿 <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 46
shq g口g tmc aac ntg gtc aaa
<210> 47 <211〉 21
14<212>腿 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 47
ahq gcg tmc aac ntg gtc aag
<210> 48 <211> 21 <212〉腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 48
ahq gcg tmc asc ntg gtt aaa
<210> 49 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 49
ahq gcg tmc 3sc ntg gtt ssg
<210> 50 〈211> 21 <212>靈 〈213〉人工序列 〈220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 50
ahq gcc tmc sst ntg gtg 333
<210> 51 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400>51
ahq gcc tmc aat ntg gtg aag
<210> 52 <211〉 21 <212>腿 <213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 52
ahq gcc tmc sst ntg gts sss
<210〉 53 <211〉 21 <212〉麗 <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 53
ahq gcc tmc sst ntg gts ssg
<210> 54 〈211> 21 <212>腿 <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 54
ahq gcc tmc 3st ntg gtc 333
<210> 55 <211〉 21 <212>醒 <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 55
ahq gcc tmc sst ntg gtc 33g
<210> 56 ,
<211> 21
<212>廳
<213>人工序列
<220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 56
ahq gcc tmc aat ntg gtt aag
<210> 57 〈211> 21 〈212〉 DNA 〈213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。
16<400> 57
ahq gcc tmc aat ntg gtt aaa
〈210> 58 <211> 21 <212〉 DNA 〈213〉人工序列 〈220〉
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 58
ahq gcc tmc sst ntg gtg 333
<210〉 59 〈211〉 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 59
ahq gcc tmc ast ntg gtg sag
<210> 60 <211> 21 〈212>腿 <213>人工序列 <220>
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 60
ahq gcc tmc 33t ntg gts 333
〈210〉 61 〈211〉 21 〈212>腿 <213>人工序列 <220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 61
ahq gcc tmc sst ntg gts ssg
<210〉 62 〈211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 62
ahq gcc tmc 33t ntg gtc sss
17<210〉 63 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220〉
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 63
ahq gcc tmc 33t ntg gtc ssg
<210> 64 <211〉 21 <212〉腿 <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 64
ahq gcc tmc sst ntg gtt 333
<210> 65 〈211〉 21 〈212>腿 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 65
ahq gcc tmc aat ntg gtt aag
<210〉 66
<211> 21 <212〉謹 <213〉人工序列 〈220〉
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。
<400> 2
ahq get tmc aat ntg gtg gcc
<210> 67 〈211〉 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 3
ahq get tmc sst ntg gts gcc 〈210〉 68<211> 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 4
ahq get tmc aat ntg gtc gcc
<210> 69 〈211〉 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 5
ahq get tmc aac ntg gtg gcc
<210> 70 <21D 21 <212>腿 <213>人工序列 〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 6
ahq get 加c ssc ntg gts gcc
<210> 71 <211> 21 <212> DNA <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 7
ahq get tmc ssc ntg gtc gcc
〈210〉 72 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; Q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 8
ahq get tmc aac ntg gtt gcc
<210> 73 <211> 21 〈212>腿<213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 9
ahq gc3 tmc ast ntg gtg gcc
<210> 74 〈211> 21 <212>腿 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 10
ahq gc3 tmc sst ntg gts gcc
〈210> 75 <211> 21 〈212〉 DNA <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 11
ahq gca tmc aat ntg gtc gcc
〈210〉 76 <211> 21 <212> DNA 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 12
ahq gca tmc aat ntg gtt gcc
<210〉 77 〈211> 21 〈212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223> h代表核苷酸G, A或C; q代表核苷酸G， T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 13
ahq gca tmc aac ntg gtg gcc
<210> 78 <211> 21 <212> DNA <213〉人工序列 〈220〉<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 14
ahq gcs tmc ssc ntg gt3 gcc
<210〉 79 〈211> 21 〈212〉麗 <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 15
ahq gca tmc ssc ntg gtc gcc
〈210〉 80 <211> 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 16
ahq gca tmc 33C ntg gtt gcc
<210> 81 <211> 21 〈212> DNA <213>人工序列 <220>〈223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 17
ahq gcg tmc aat ntg gtg gcc
〈210〉 82 <211> 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 18
ahq gcg tmc aat ntg gta gcc
<210> 83 <211> 21 <212>薩 <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 19ahq gcg tmc aat ntg gtc gcc
<210〉 84<211〉 21<212>廳<213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 20
ahq gcg tmc 33t ntg gtt gcc
<210> 85〈211〉 21<212>腿〈213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400〉21
ahq gcg tmc aac ntg gtg t gcc
<210> 87<211> 21(212〉麗〈213〉人工序列<220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 22
ahq gcg tmc aac ntg gta gcc
<210〉 88<211> 21<212>腿<213>人工序列〈220〉
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 23
ahq gcg tmc aac ntg gtc gcc
<210> 89<211> 21<212> DNA〈213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G, A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 24
ahq gcg tmc sac ntg gtt gcc<210> 90<211> 21<212> DNA<213>人工序列〈220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400〉 25
ahq gcc tmc ssc ntg gtg gcc
<210> 91〈211> 21<212> DNA<213>人工序列〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 26
ahq gcc tmc ssc ntg gts gcc
<210> 92<211> 21<212> DNA〈213〉人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 27
ahq gcc tmc aac ntg gtc gcc
<210> 93<211> 21<212〉 DNA<213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G， A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 28
ahq gcc tmc 3sc ntg gtt gcc
〈210> 94<211> 21<212>腿<213>人工序列〈220〉
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 29
ahq gcc tmc sst ntg gtg gcc
<210> 95<211> 21
23<212> DNA<213>人工序列〈220〉
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 30
ahq gcc tmc sst ntg gts gcc
〈210> 96<211〉 21〈212〉腿〈213〉人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G， A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400>31
ahq gcc tmc aat ntg gtc gcc
〈210> 97〈211〉 21<212> DNA〈213>人工序列<220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 32
ahq gcc tmc aat ntg gtt gcc
2權利要求
1. 一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽，其特征在于組成短肽的氨基酸主序列<1>和編碼短肽的核苷酸主序列<2>如下<1>J-Ala-B-Asn-O-Val-z其中，J代表氨基酸Pro，Asn或Ala；B代表氨基酸Ser或Leu；O代表氨基酸Leu或Thr；Z代表氨基酸Lys，Ala或Arg；<2>AHQ GCT或GCA或GCG或GCC TMC AAT或AAC NTG GTG或GTA或GTC或GTT AAA或AAG或GCC其中，H代表核苷酸G，A或C；Q代表核苷酸G，T或C；M代表核苷酸T或C；N代表核苷酸C或T；所述短肽的氨基酸主序列為氨基酸位置固定的主序列，其間隔的位置選擇排列相對應的氨基酸。
2. —種如權利要求l所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽片段，其特征在于短肽片段的氨 基酸主序列具有與所述短肽氨基酸主序列》70%的相同性，》90%的相似性，所述片段為把所述的7個 氨基酸的序列從任意位置截取成3個或4個或5個或6個氨基酸組成的與所述短肽具有同樣生物活性 的短肽。
3. —種如權利要求l所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽類似物，其特征在于所述短肽類 似物具有與所述短肽相同的生物活性，所述類似物是指在用所述短肽和另一種化合物融合或者用所述 短肽的氨基酸序列融合另外的多肽或者蛋白質而形成具有生物活性的多肽序列或蛋白質。
4. 一種如權利要求l所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽衍生物，其特征在于所述短肽衍 生物的氨基酸主序列具有與所述短肽氨基酸主序列》70%的相同性，》90%的相似性，所述衍生物是 指把所述氨基酸的序列中的氨基酸的一個或者幾個氨基酸的某個基團用另外的基團取代后與所述短 肽具有同樣生物活性的短肽。
5. —種如權利要求l所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽變體，其特征在于所述短肽變體 的氨基酸主序列具有與所述短肽氨基酸主序列》70%的相同性，》90%的相似性，所述變體是指一種具 有一個或幾個氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的核苷酸序列，所述改變包括在氨基酸序列 或核苷酸序列中，在序列中間的任一位置缺失、插入或替換氨基酸或核苷酸，或在序列兩端添加氨基 酸或核苷酸。
6. 根據權利要求1、 2、 3、 4或5所述的一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽，其特征在于 所述編碼短肽的核苷酸包含下組中的一種(a) 編碼具有所述氨基酸序列的短肽或其片段、類似物、衍生物或其變體的核苷酸；(b) 與(a)所述核苷酸互補的核苷酸；(c )與(a)或(b)中所述核苷酸有》75%相同性的核苷酸； 所述核苷酸采用人工合成方法制備。
7. 根據權利要求6所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽，其特征在于所述的短肽采用化學 合成方法制備；所述核苷酸采用人工合成方法制備。
8. —種如權利要求1、 2、 3、 4或5所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽的應用，其特征在 于所述短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備具有治療非實體腫 瘤人髓系各類病變細胞增生引起的白血病、治療人實體腫瘤癌細胞增殖的各類癌癥如肝癌、肺癌、胃 癌、乳腺癌、腸癌、宮頸癌等由于癌細胞無限增殖引發(fā)的一切癌癥、診斷與檢測癌癥的發(fā)生以及癌癥 發(fā)生的惡性程度藥物的應用。
9. 一種如權利要求6所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽的應用，其特征在于所述核苷酸用于制備具有治療非實體腫瘤人髓系各類病變細胞增生引起的白血病、治療人實體腫瘤癌細胞增殖的 各類癌癥如肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、腸癌、宮頸癌等由于癌細胞無限增殖引發(fā)的一切癌癥、診斷 與檢測癌癥的發(fā)生以及癌癥發(fā)生的惡性程度藥物的應用。
10. —種如權利要求6所述的抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽的應用，其特征在于所述短肽或核苷酸用于制備具有作為蛋白酶抑制劑或者促進劑或者親和試劑的藥物或者檢測試劑的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種抑制實體腫瘤及白血病癌細胞生長的短肽。該短肽的短肽片段、類似物、衍生物、變體的氨基酸主序列具有與該短肽氨基酸主序列≥70％的相同性，≥90％的相似性；短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備具有治療非實體腫瘤人髓系各類病變細胞增生引起的白血病、治療人實體腫瘤癌細胞增殖的各類癌癥、診斷與檢測癌癥的發(fā)生以及癌癥發(fā)生的惡性程度藥物的應用，短肽或核苷酸用于制備具有作為蛋白酶抑制劑或者促進劑或者親和試劑的藥物或者檢測試劑的應用。該技術能夠解決現有癌癥藥物在抑制或殺死癌細胞的同時對人體正常細胞也有嚴重傷害的缺陷。
文檔編號A61P35/00GK101497653SQ20081007058
公開日2009年8月5日 申請日期2008年2月1日 優(yōu)先權日2008年2月1日
發(fā)明者昊 李 申請人:昊 李