專(zhuān)利名稱(chēng)：異甘草素作為預(yù)防或治療惡性腫瘤術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從甘草屬植物中提取的異黃酮類(lèi)化合物——異甘 草素的新用途，特別涉及其作為惡性腫瘤手術(shù)切除后預(yù)防或治療腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的藥物中的 應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥(Cancer)也稱(chēng)為惡性腫瘤(malignant tumours)或贅生物(neoplasms),是一類(lèi)可 發(fā)生于機(jī)體各部位的約100多種疾病的總稱(chēng)。WHO將癌癥定義為可迅速超過(guò)其正常邊界生長(zhǎng) 的不正常細(xì)胞，這些細(xì)胞能夠侵襲毗鄰IK常部位并播散到其它器官一一這一過(guò)程稱(chēng)作轉(zhuǎn)移 (metastasis )，轉(zhuǎn)移是癌癥死亡的主要原因[http :〃www. who. int/mediacentre/factsheets/fs297/en/ ， 2007]。
癌癥是世界人口死亡的首要因素之一。2005年全球死亡人數(shù)約5,800力，其中有760萬(wàn) 死于腫瘤。我國(guó)衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，2006年惡性腫瘤己成為我國(guó)城市和農(nóng)村居民第一位死 亡原因。隨著世界范圍內(nèi)人口老齡化的加劇，每年死于腫瘤的人數(shù)仍在繼續(xù)增加，預(yù)計(jì)全球 2015年將有900萬(wàn)人死于腫瘤，到2030年將達(dá)1140萬(wàn)人，惡性腫瘤將成為影響全球人口最 主要的慢性疾病。
盡管科學(xué)的發(fā)展日新月異，惡性腫瘤治療的新方式和方法也層出不窮，但仍未改變大多 數(shù)惡性腫瘤患者(約90%)最終死于腫瘤這一現(xiàn)實(shí)。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者預(yù)后不良乃至死亡 的最主要原因，腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)極其復(fù)雜的病理過(guò)程。轉(zhuǎn)移指惡性腫瘤細(xì)胞能夠侵襲毗鄰^ 常部位組織并向遠(yuǎn)處播散到其它器官，是多,-驟、多因素參與和調(diào)控的復(fù)雜過(guò)稃。現(xiàn)有研究 表明，與細(xì)胞間粘附性、細(xì)胞外基質(zhì)降解和血管新生相關(guān)的多種因子參與了腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程。 目莉常規(guī)的手術(shù)、放分和化學(xué)治療對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移均未有理想的治療效果，這也正是目前全球 腫瘤患者死亡數(shù)量居高不下的主要原因。
癌癥治療的目的在于徹底治愈腫瘤或延長(zhǎng)患者生存期或改善患者生活質(zhì)量。治療手段主 要為手術(shù)切除、放療或化療。對(duì)于較早期未擴(kuò)散或轉(zhuǎn)移的癌灶，采用手術(shù)切除或放療治療清 除原發(fā)灶，無(wú)疑為消除可發(fā)生轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞大本營(yíng)的最佳方式，但對(duì)于發(fā)現(xiàn)時(shí)己發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn) 移、處于晚期的腫瘤患者則不甚理想。遺憾的是，受現(xiàn)有診斷水平的影響，大部分患者在發(fā) 現(xiàn)患有惡性腫瘤時(shí)均己處于中晚期，已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生，對(duì)于此類(lèi)患者，目甜的治療效果仍 然有限。廖美琳教授統(tǒng)計(jì)了 33年來(lái)上海地區(qū)腫癌發(fā)病情況，其中發(fā)現(xiàn)時(shí)己是111期的占30.4%， IV期的占47.5。/。，處于此期的患者5年總生存率不足10% (GLOBOCAN 2002， IARC， 2007
3年csco會(huì)議資料)。更糟糕的是，確診為早期未轉(zhuǎn)移的患者，并不一定真的未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，
只不過(guò)受目前技術(shù)條件限制，不能發(fā)現(xiàn)而已。這也是大多數(shù)腫瘤患者死于轉(zhuǎn)移的最主要原因。
手術(shù)治療對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)的未發(fā)生轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤患者算是最為合適的手段。為抑制腫瘤 轉(zhuǎn)移，清除原發(fā)灶是必要的，只有這樣才可以清除可轉(zhuǎn)移細(xì)胞的大本營(yíng)，但令人遺憾的是， 手術(shù)切除原發(fā)瘤的過(guò)程本身可促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，這種副作用源于與轉(zhuǎn)移相關(guān)的幾條通路間的 協(xié)同作用，包括腫瘤細(xì)胞由原發(fā)灶的脫離、新血管生成作用增強(qiáng)、生長(zhǎng)因子的分泌和免疫抑
制。早在上世紀(jì)50年代，即己發(fā)現(xiàn)手術(shù)應(yīng)激可致荷瘤鼠的生存時(shí)間縮短[l) Buinauskas P， McDonald GO, Cole WH, et al. Role of operative stress on the resistance of. the experimental animal to inoculated cancer cells. Ann. Surg. 1958; 148: 642-645]，隨后的研究又表明，手術(shù)應(yīng)激 可增加大鼠異體結(jié)腸癌種植后的成瘤率[Weese JL, Ottery FD， Emoto SE. Do operations facilitate tumor growth An experimental model in rats. Surgery. 1986 Aug;100(2):273-7.]。研究表 明，手術(shù)過(guò)程中由切除原發(fā)灶脫落下來(lái)的腫瘤細(xì)胞可在原位種植或通過(guò)血管發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移， 導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生[Weitz J, Herfarth C. Surgical strategies and minimal residual disease detection. Semin Surg Oncol. 2001; 20:329 - 333; Eschwege P, Dumas F， Blanchet P， et al. Haematogenous dissemination of prostatic epithelial cells during radical prostatectomy. Lancet. 1995; 346:1528 — 1530; Yamaguchi K, Takagi Y, Aoki S, et al. Significant detection of circulating cancer cells in the blood by reverse transcriptase-polymerase chain reaction during colorectal cancer resection, Ann Surg. 2000; 232:58 - 65.];另一方面手術(shù)可致患者細(xì)胞介導(dǎo)免疫功能抑制，如 NK細(xì)胞活性下降，導(dǎo)致腫瘤可以逃避免疫監(jiān)視，致使腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生[Ben-Eliyahu S, Page GG, Yirmiya R， Shakhar G. Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity. Int J Cancer 1999;80:880 - 888.];近來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)，手 術(shù)創(chuàng)口的修復(fù)可致機(jī)體內(nèi)多種生長(zhǎng)因子水平升高，如結(jié)合肝素的類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子(HB-GEF) 和血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)，這些因子可縮短腫瘤的倍增時(shí)間，促進(jìn)已有微轉(zhuǎn)移灶的生 長(zhǎng)[Abramovitch R, Marikovsky M, Meir G and Neeman M. Stimulation of tumour growth by wound-derived growth factors. Br J Cancer. 1999; 79:1392 - 1398; Hofer SO, Molema Q Hermens RA, et al. The effect of surgical wounding on tumour development. Eur J Surg Oncol. 1999; 25:231 -243.];另外，手術(shù)過(guò)程或切除原發(fā)灶可促進(jìn)血管新生因子(bFGF、 EGF等)[Maniwa Y, Okada M, Ishii N， Kiyooka K. Vascular endothelial growth factor increased by pulmonary surgery accelerates the growth of micrometastases in metastatic lung cancer. Chest. 1998;114(6):1668-75; Yoon SS, Kim SH, Gonen M, et al. Profile of plasma angiogenic factors before and after hepatectomy for colorectal cancer liver metastases. Ann Surg Oncol. 2006;13(3):353-62]表達(dá)水平 的升高、抗血管新生因子(如血管抑素和內(nèi)皮抑素)表達(dá)水平降低，也導(dǎo)致新轉(zhuǎn)移灶的形成和處于休眠狀態(tài)轉(zhuǎn)移灶的快速生長(zhǎng)[O， Reilly MS， Holmgren L, Shing Y, et al. Angiostatin: anovel angiogenesis inhibitor that mediates the suppression of metastases by a Lewis lung carcinoma.Cell. 1994; 79:315 - 328.; Kaya M， Wada T, Nagoya S, Yamashita T. Prevention of postoperativeprogression of pulmonary metastases in osteosarcoma by antiangiogenic therapy using endostatin. JOrthop Sci. 2007;12(6》562-7 ; Shepherd KE. Postoperative metastasis risk: more thanimmunosuppression. Anesthesiology. 92(5):1498-1499]。 Xu等研究發(fā)現(xiàn)，將不同人源腫瘤細(xì)胞株移植到裸鼠皮下，生長(zhǎng)至一定時(shí)間后切除皮下原發(fā)灶，繼續(xù)飼養(yǎng)一定時(shí)間后，肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目明顯高于原發(fā)腫瘤灶未切除小鼠，表明切除原發(fā)灶可增強(qiáng)大多惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能[徐冰，姚明，顧為望，等.人癌術(shù)后轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的建立及其生物學(xué)特性研究.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2007;27(7):1009-n.;i。
以上研究表明，盡管手術(shù)切除作為早期惡性腫瘤最佳治療選擇，許多腫瘤根治切除后仍會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移， 一方面局限于目前的診斷手段，不能發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移灶，另一方面也在于手術(shù)切除原發(fā)灶促進(jìn)了腫瘤轉(zhuǎn)移及已有轉(zhuǎn)移灶的生長(zhǎng)，這也正是大多惡性腫瘤患者最終死于腫瘤的原因之一。目前惡性腫瘤切除后，除手術(shù)后采用幾個(gè)周期常規(guī)化療方式來(lái)防止腫瘤的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移外，尚未有更合適的治療藥物或方法，而采用常規(guī)化療可產(chǎn)生較為嚴(yán)重的不良反應(yīng)， 一方面常規(guī)化療藥多為靜脈給藥制劑，難于長(zhǎng)期用藥，另一方面細(xì)胞毒類(lèi)化療藥物可產(chǎn)生骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)等嚴(yán)重不良反應(yīng)，導(dǎo)致患者免疫功能低下，反而有可能造成腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，開(kāi)發(fā)一類(lèi)具有預(yù)防惡性腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移作用，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)的藥物，適于患者長(zhǎng)期應(yīng)用的惡性腫瘤術(shù)后的輔助治療藥物勢(shì)在必行。
早在20世紀(jì)50年代就有科學(xué)家通過(guò)腫瘤細(xì)胞自體移植實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中極少數(shù)細(xì)胞能誘發(fā)新的腫瘤組織，由此科學(xué)家們提出了腫瘤干細(xì)胞的假設(shè)。早期研究通過(guò)軟瓊脂克隆形成以及動(dòng)物體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)白血病和一些實(shí)體腫瘤組織中都存在少量特殊細(xì)胞，在體外它們可以單獨(dú)形成克隆，在體內(nèi)它們能夠形成腫瘤組織，而大部分腫瘤細(xì)胞不具備這種能力。更深入的研究表明這些細(xì)胞有著成體干細(xì)胞的表面標(biāo)志和千細(xì)胞的特性，擔(dān)當(dāng)著腫瘤組織起始細(xì)胞功能，它們被稱(chēng)為腫瘤干細(xì)胞。目前己經(jīng)在骨髓性白血癥、惡性腦腫瘤、乳腺癌等多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)有干細(xì)胞存在。這些發(fā)現(xiàn)促成了人們重新認(rèn)識(shí)癌變機(jī)理，從而提出了腫瘤干細(xì)胞癌變假說(shuō)，該假說(shuō)提出腫瘤的惡性表型是由腫瘤組織內(nèi)一小群腫瘤干細(xì)胞維持的，腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是腫瘤干細(xì)胞更新和增殖的結(jié)果，各種治療手段的失敗也是因這種治療手段對(duì)腫瘤干細(xì)胞自我更新和增殖無(wú)效的結(jié)果[耿春霞，陳玉，馮曉剛，李世杰.腫瘤干細(xì)胞研究進(jìn)展.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志.2008;3(4):244-246]。因此，尋找到對(duì)腫瘤干細(xì)胞自我更新和增殖有效的藥物，對(duì)臨床治療腫瘤術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有重要意義。異甘草素(2，4,4-trihydroxychalcone， isoliquiritigenin)是從甘草屬植物(Glycyrrhiza)分離、純化的異黃酮類(lèi)化合物，它可通過(guò)超臨界二氧化碳萃取技術(shù)萃取、氯仿萃取等方法提取，再經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂技術(shù)和柱層析技術(shù)分離純化異甘草素(東北林業(yè)大學(xué)，異甘草素和甘草酸提取純化工藝研究，2005)。中科院上海藥物研究所植化研究室對(duì)異甘草素的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)已有詳細(xì)的敘述。(黃酮體化合物鑒定手冊(cè)[M]，北京:科學(xué)出版社,1981)。異甘草素的分子式為Cl5H1204，結(jié)構(gòu)式如下
異甘草素是甘草中的一種異黃酮化合物，它有著很強(qiáng)的藥理活性，具有抑制腫瘤紳胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抗病毒、抗自由基、松弛血管、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化等生物活性，其中抗腫瘤作用是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。文獻(xiàn)報(bào)道了[Yamazaki S, Morita T, Endo H， et al.
Isoliquiritigenin suppresses pulmonary metastasis of mouse renal cell carcinoma. Cancer Lett. 2002
Sep8;183(l):23-30.]異甘草素可以抑制小鼠腎細(xì)胞癌的人工肺轉(zhuǎn)移，與異甘草素的細(xì)胞毒作用及活化細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞有關(guān)。所謂人工肺轉(zhuǎn)移，是指直接將小鼠腎細(xì)胞癌自尾靜脈注射至小鼠體內(nèi)，觀(guān)察癌細(xì)胞在小鼠肺內(nèi)腫瘤灶的形成，這一過(guò)程僅僅模擬了腫瘤細(xì)胞侵入血管后的腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程，不能反映腫瘤細(xì)胞自原發(fā)灶脫離，再侵入血管或淋巴管，隨血流或淋巴液到達(dá)遠(yuǎn)處器官，形成新轉(zhuǎn)移灶的過(guò)程，因此本研究結(jié)果不能說(shuō)明異甘草素對(duì)于切除原發(fā)灶腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移具有抑制作用。文獻(xiàn)[張晶，楊靜，湯宏斌.異甘草素對(duì)人宮頸癌細(xì)胞增殖的抑制作用.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志.2005;19(6):436-442;王艾麗，鄭航，鄭新民，等.異甘草素對(duì)人前列腺癌細(xì)胞體外增殖的抑制作用.臨床泌尿外科雜志.2007; 22(11):867-868]報(bào)道了異甘草素對(duì)于宮頸癌和前列腺癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用，也未涉及異甘草素具有預(yù)防腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的作用。專(zhuān)利[一種抗腫瘤的異甘草素片劑，申請(qǐng)?zhí)?00710053147.7]僅公開(kāi)了以異甘草素制備抗腫瘤藥物片劑的工藝方法，并未涉及異甘草素用于制備預(yù)防或治療手術(shù)切除原發(fā)灶后抑制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了一種異甘草素的新用途，即異甘草素用于制備防止惡性腫瘤手術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用，可用于多種惡性腫瘤手術(shù)后的輔助治療，可防止或延緩腫瘤的復(fù)發(fā)以
發(fā)明內(nèi)容及轉(zhuǎn)移，從而改善患者的預(yù)后，提高其生活質(zhì)量。
本發(fā)明所述的惡性腫瘤包括常見(jiàn)的肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、胃癌、食管癌、宮頸癌、乳腺癌、惡性黑色素瘤、顱腦腫瘤等各種適于手術(shù)切除的惡性腫瘤。
本發(fā)明提供的異甘草素可以在手術(shù)切除原發(fā)灶后長(zhǎng)期應(yīng)用，具有明顯的抑制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的功效，無(wú)明顯不良反應(yīng)，成本低廉，明顯優(yōu)于采用常規(guī)化療藥物治療。
本發(fā)明所述的異甘草素可以根據(jù)臨床需要，加入相應(yīng)輔料，以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖槳、注射劑、霜?jiǎng)?、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、口嚼劑或貼劑等制劑形式存在。
本發(fā)明所述的異甘草素可根據(jù)臨床需要，采用口服或非口服方式用藥，優(yōu)選口服和藥方式。
本發(fā)明所述的異甘草素制劑采用口服方式用藥時(shí)，人用劑量?jī)?yōu)選lmg/人/閂至1000mg/人/日，其中更優(yōu)選為10mg/人/日至500mg/人/日，最優(yōu)選為100 mg/人/日。
本發(fā)明所述的異甘草素是從中藥甘草中提取分離獲得或人工方式合成，可采用任何已公開(kāi)文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄌ崛≈苽洹Ｈ缈刹捎梦墨I(xiàn)[付玉杰，劉曉娜，王微，等.酸水解法提取甘草中異甘草素工藝研究.中國(guó)藥學(xué)雜志.2007; (ll)];付玉杰，侯春蓮，劉威，等.超臨界C02萃取異甘草素的提取工藝.應(yīng)用化學(xué).2007;;]等方法由甘草中分離提取，也可采用文獻(xiàn)[楊立，沈鳳嘉.甘草素與異甘草素的合成.藥學(xué)學(xué)報(bào).1994;29(ll):877-880]，或采用已公開(kāi)的專(zhuān)利[一種異甘草素的合成方法，申請(qǐng)?zhí)?00410065383.7]等方法制備。采用各種不同方法制備的異甘草素對(duì)本發(fā)明的用途沒(méi)有影響。
以下結(jié)合實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不受限于該實(shí)施例。實(shí)驗(yàn)例1異甘草素對(duì)手術(shù)切除黑色素瘤后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響
異甘草素購(gòu)自江西本草天工科技有限公司，HPLC法測(cè)定純度為99.8%。小鼠B16F10黑色瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，細(xì)胞以含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100 y g/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，于37。C， 5% (302條件下培養(yǎng)，每24小時(shí)換培養(yǎng)液一次，每3天傳代一次。 .
取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，胰蛋白酶消化，以上述完全培養(yǎng)液調(diào)成濃度為1X10々ml的單細(xì)胞懸液，于C57BL/6小鼠左腋部皮下注射瘤細(xì)胞懸液0.1 ml，共接種小鼠150只。2周后，選取瘤塊長(zhǎng)徑大于0.5 cm小鼠120只，隨機(jī)分為6組，每組20只。隨機(jī)取一組作為荷瘤對(duì)照組，其余5組水合氯醛麻醉后消毒局部皮膚，剝除瘤塊，注意血管的剝離和腫瘤包膜的剔除，避免因出血過(guò)多而造成動(dòng)物死亡，'同時(shí)保證盡量剝除千凈，要把腫瘤全部切除，縫合傷口后繼續(xù)飼養(yǎng)。荷瘤對(duì)照組給予麻醉并切開(kāi)皮膚，但不剝除瘤塊，縫合皮膚后繼續(xù)飼養(yǎng)，每日觀(guān)察小鼠狀態(tài)。剝除瘤塊的5組中隨機(jī)選一組作為切除腫瘤對(duì)照組，其余4組給予不同劑量異甘草素，分別為0.1mg/kg， 1.0mg/kg， 10.0 mg/kg和100 mg/kg，異甘草素以0.5%羧甲基纖維素鈉混懸，給藥體積20ml/kg，每R給藥一次。切除腫瘤對(duì)照組和每?jī)医o予0.5%羧甲基纖維素鈉20 ml/kg。連續(xù)給藥2周后，各組小鼠摘眼球取血，分離血清，作生化測(cè)定。處死各組小鼠，剝離雙肺，解剖顯微鏡下觀(guān)察計(jì)數(shù)雙肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目。以單因素方差分析作肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目組間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，以xZ分析作組間復(fù)發(fā)數(shù)量比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，荷瘤對(duì)照組3只小鼠死亡，其余各組均全部存活。結(jié)果表明(表l)，手術(shù)切除腫瘤原發(fā)灶后，小鼠生活狀態(tài)優(yōu)于荷瘤組，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)未現(xiàn)明顯衰竭狀態(tài)，而荷瘤對(duì)照組除3只死亡外，另有4只生活狀態(tài)差，因瘤塊影響，自發(fā)活動(dòng)減少，出現(xiàn)進(jìn)食進(jìn)水困難等現(xiàn)象。切除腫瘤對(duì)照組肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目較荷瘤對(duì)照組明顯增加(尸O.Ol)，另有8只小鼠原發(fā)部位發(fā)現(xiàn)腫瘤灶，表明有復(fù)發(fā)現(xiàn)象，這一結(jié)果說(shuō)明手術(shù)切除原發(fā)灶促進(jìn)了腫瘤新的肺轉(zhuǎn)移灶的形成。給予異甘草素，可劑量依賴(lài)性地抑制腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成和原發(fā)部位的復(fù)發(fā)，表明異甘草素對(duì)切除黑色素瘤原發(fā)灶而造成的腫瘤轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用，對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)也有明顯抑制作用。
表1異甘草素對(duì)切除原發(fā)灶后B16F10黑色素瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響
劑量 出現(xiàn)復(fù)發(fā)鼠數(shù) 肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)
組別 n a
(mg/kg) (只) (個(gè))
荷瘤對(duì)照組179.06±2.47
切除腫瘤對(duì)照組20829.1 ±6. 48"
給藥組0.12024. 5±5. 61*
給藥組1.02015.6士4.38"
給藥組10.020『11.9土3.39"
給藥組1002010.3±3.18**
與荷瘤對(duì)照組比較"代O. 01;與切除腫瘤對(duì)照組比較:*代0.05， **代0. 01
實(shí)驗(yàn)例2異甘草素對(duì)手術(shù)切除肺癌原發(fā)灶后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響
小鼠Lewis肺癌細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物研究所，細(xì)胞接種于C57BL/6小鼠
腋部皮下保種。傳代時(shí)取己接種腫瘤兩周、腫瘤生長(zhǎng)狀態(tài)良好無(wú)潰破的荷瘤小鼠，斷頸處死，
75%酒精浸泡消毒后無(wú)菌剝?nèi)×鰤K，剪成lmr^大小瘤塊，以20#穿刺針接種于C57BL/6小
鼠腋部皮下，共接種小鼠150只。2周后，選取瘤塊長(zhǎng)徑大于0.5 cm小鼠120只，隨機(jī)分為
6組，每組20只。隨機(jī)取一組作為荷瘤對(duì)照組，其余5組水合氯醛麻醉后消毒局部皮膚，剝
除瘤塊，注意血管的剝離和腫瘤包膜的剔除，避免因出血過(guò)多而造成動(dòng)物死亡，同時(shí)保證盡
量剝除干凈，要把腫瘤全部切除，縫合傷口后繼續(xù)飼養(yǎng)。荷瘤對(duì)照組給予麻醉并切開(kāi)皮膚，
但不剝除瘤塊，縫合皮膚后繼續(xù)飼養(yǎng)，每R觀(guān)察小鼠狀態(tài)。剝除瘤塊的5組中隨機(jī)選一組作
為切除腫瘤對(duì)照組，其余4組給予不同劑量異甘草素，分別為0.1 mg/kg， 1.0 mg/kg， 10.0 mg/kg和100mg/kg，異甘草素以0.5%羧甲基纖維素鈉混懸，給藥體積20 ml/kg，每閂給藥一次。切除腫瘤對(duì)照組和每閂給予0.5%羧甲基纖維素鈉20 ml/kg。連續(xù)給藥2周后，各組小鼠摘眼球取血，分離血清，作生化測(cè)定。處死各組小鼠，剝離雙肺，解剖顯微鏡下觀(guān)察計(jì)數(shù)雙肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目。以單因素方差分析作肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目組間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，以)^分析作組間復(fù)發(fā)數(shù)量比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組小鼠均未出現(xiàn)死亡，荷瘤對(duì)照組小鼠中5只因腫瘤塊太大出現(xiàn)行動(dòng)困難，自發(fā)活動(dòng)減少等衰竭現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后手術(shù)切除原發(fā)灶腫瘤后復(fù)發(fā)和肺轉(zhuǎn)移灶計(jì)數(shù)結(jié)果表明(表2)，手術(shù)切除腫瘤原發(fā)灶后，小鼠生活狀態(tài)優(yōu)于荷瘤組，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各切除原發(fā)灶組未現(xiàn)明顯衰竭狀態(tài)。切除腫瘤對(duì)照組有5只接種部位出現(xiàn)復(fù)發(fā)，腫瘤肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目較荷瘤對(duì)照組明顯增加(PO.Ol)，表明手術(shù)切除原發(fā)灶可促進(jìn)腫瘤新轉(zhuǎn)移灶的形成。給予異甘草素，可劑量依賴(lài)性地抑制腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成和原發(fā)部位的復(fù)發(fā)，表明異甘草素對(duì)切除肺癌原發(fā)灶而造成的腫瘤轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用，對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)也有明顯抑制作用。
表2異甘草素對(duì)切除肺癌原發(fā)灶后腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響組別劑量 mg/kg)n出現(xiàn)復(fù)發(fā)鼠數(shù) (只)肺轉(zhuǎn)移灶數(shù) (個(gè))
荷瘤對(duì)照組206.85 ±1.48
切除腫瘤對(duì)照組2018.95士4.77"
給藥組0.1200**17.9±3.81
給藥組1.0200 14.7±3.16**
給藥組10.0200 10.55 ±2.98"
給藥組100200 8.70±2.4廣
與荷瘤對(duì)照組比較與切除腫瘤對(duì)照組比較:*代0.05，"代O. 01
實(shí)驗(yàn)例3異甘草素對(duì)人肝癌手術(shù)切除原發(fā)灶后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響
實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)[徐冰，姚明，顧為望，等.人癌術(shù)后轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的建立及其生物學(xué)特性研究.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2007;27(7):1009-11.]。
人肝癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株LCI-D20購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，接種于SPF級(jí)BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下傳代保存。
取出皮下傳代的荷瘤裸小鼠皮下移植瘤，浸入含青霉素和鏈霉素各100 U/ml的生理鹽水中，選擇生長(zhǎng)良好、無(wú)壞死、呈魚(yú)肉狀的瘤組織，剪切成約lmn^的小塊，用20號(hào)套管針移植至BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下，建模后觀(guān)察小鼠一般活動(dòng)，營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及移植瘤的潛伏期、成瘤率和生長(zhǎng)情況。
接種腫瘤三周后，選取瘤塊直徑大于1 cm且腫瘤生長(zhǎng)狀態(tài)良好無(wú)潰破的荷瘤小鼠90只，
9隨機(jī)分為6組，每組15只。隨機(jī)取一組作為荷瘤對(duì)照組，其余5組水合氯醛麻醉后消毒局部 皮膚，剝除瘤塊，注意血管的剝離和腫瘤包膜的剔除，避免因出血過(guò)多而造成動(dòng)物死亡，同 時(shí)保證盡量剝除干凈，要把腫瘤全部切除，縫合傷口后繼續(xù)飼養(yǎng)。荷瘤對(duì)照組僅給予麻醉并 切開(kāi)皮膚，但不剝除瘤塊，縫合皮膚后繼續(xù)飼養(yǎng)，每R觀(guān)察小鼠狀態(tài)。剝除瘤塊的5組中隨 機(jī)選一組作為切除腫瘤對(duì)照組，其余4組給予不同劑量異甘草素，分別為0.1mg/kg，1.0 mg/kg， 10.0 mg/kg和100 mg/kg，異甘草素以0.5%羧甲基纖維素鈉混懸，給藥體積20 ml/kg，每日給 藥一次。切除腫瘤對(duì)照組和每日給予0.5。/。羧甲基纖維素鈉20ml/kg。連續(xù)給藥4周后。處死 各組小鼠，剝離雙肺，解剖顯微鏡下觀(guān)察計(jì)數(shù)雙肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目。以單因素方差分析作肺轉(zhuǎn)移 灶數(shù)目組間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，以xS分析作組間復(fù)發(fā)數(shù)量比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組小鼠均未出現(xiàn)死亡，荷瘤對(duì)照組小鼠中8只因腫瘤塊太大出現(xiàn)行動(dòng)困 難，自發(fā)活動(dòng)減少等現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(表3)，手術(shù)切除腫瘤原發(fā)灶后，小鼠生活狀態(tài)優(yōu) 于荷瘤組，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各切除原發(fā)灶組未現(xiàn)明顯衰竭狀態(tài)。切除腫瘤對(duì)照組有6只接種部 位出現(xiàn)復(fù)發(fā)，腫瘤肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目較荷瘤對(duì)照組明顯增加(尸O.Ol)，表明手術(shù)切除原發(fā)灶可促 進(jìn)腫瘤新轉(zhuǎn)移灶的形成。給予異甘草素，可劑量依賴(lài)性地抑制腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成和原發(fā)部位 的復(fù)發(fā)，表明異甘草素對(duì)切除肝癌原發(fā)灶而造成的腫瘤轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用，對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)也 有明顯抑制作用。
表3異甘草素對(duì)切除原發(fā)灶后肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響組別劑量 (mg/kg)n出現(xiàn)復(fù)發(fā)鼠數(shù) (只)肺轉(zhuǎn)移灶數(shù) (個(gè))
荷瘤對(duì)照組1511.8±2.13
切除腫瘤對(duì)照組15624.9土5.16"
給藥組0.115221.0士4.7T
給藥組1.0 15(T18.4 ±3.96"
給藥組10.015(T12.1 ±3.78"
給藥組100150**11. 7土3.17"
與荷瘤對(duì)照組比較"代0.01;與切除腫瘤對(duì)照組比較*代0. 05， **線(xiàn)01。
實(shí)驗(yàn)例4異甘草素對(duì)人結(jié)腸癌手術(shù)切除原發(fā)灶后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響
實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)[徐冰，姚明，顧為望，等.人癌術(shù)后轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的建立及其生物學(xué) 特性研究.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2007;27(7):1009-11.]。
人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，接種于SPF級(jí) BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下傳代保存。
取出皮下傳代的荷瘤裸小鼠皮下移植瘤，浸入含青霉素和鏈霉素各100 U/ml的生理鹽水
中，選擇生長(zhǎng)良好、無(wú)壞死、呈魚(yú)肉狀的瘤組織，剪切成約lmiV的小塊，用20號(hào)套管針移植至BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下，建模后觀(guān)察小鼠一般活動(dòng)，營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及移植瘤的潛伏期、成 瘤率和生長(zhǎng)情況。
接種腫瘤三周后，選取瘤塊直徑大于1 cm且腫瘤生長(zhǎng)狀態(tài)良好無(wú)潰破的荷瘤小鼠90只， 隨機(jī)分為6組，每組15只。隨機(jī)取一組作為荷瘤對(duì)照組，其余5組水合氯醛麻醉后消毒局部 皮膚，剝除瘤塊，注意血管的剝離和腫瘤包膜的剔除，避免因出血過(guò)多而造成動(dòng)物死亡，同 時(shí)保證盡量剝除干凈，要把腫瘤全部切除，縫合傷口后繼續(xù)飼養(yǎng)。荷瘤對(duì)照組僅給予麻醉并 切丌皮膚，但不剝除瘤塊，縫合皮膚后繼續(xù)飼養(yǎng)，每日觀(guān)察小鼠狀態(tài)。剝除瘤塊的5組中隨 機(jī)選一組作為切除腫瘤對(duì)照組，其余4組給予不同劑量異甘草素，分別為0.1mg/kg，1.0 mg/kg， 10.0 mg/kg和100 mg/kg，異甘草素以0.5%羧甲基纖維素鈉混懸，給藥體積20ml/kg，每日給 藥一次。切除腫瘤對(duì)照組和每日給予0.5y。羧甲基纖維素鈉20ml/kg。連續(xù)給藥4周后。處死 各組小鼠，剝離雙肺，解剖顯微鏡下觀(guān)察計(jì)數(shù)雙肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目。以單因素方差分析作肺轉(zhuǎn)移 灶數(shù)目組間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，以xZ分析作組間復(fù)發(fā)數(shù)量比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組小鼠均未出現(xiàn)死亡，荷瘤對(duì)照組小鼠中5只因腫瘤塊太大出現(xiàn)行動(dòng)困 難，自發(fā)活動(dòng)減少等現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(表4)，手術(shù)切除腫瘤原發(fā)灶后，小鼠生活狀態(tài)優(yōu) 于荷瘤組，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各切除原發(fā)灶組未現(xiàn)明顯衰竭狀態(tài)。切除腫瘤對(duì)照組有7只接種部 位出現(xiàn)復(fù)發(fā)，腫瘤肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目較荷瘤對(duì)照組明顯增加(尸O.Ol)，表明手術(shù)切除原發(fā)灶可促 進(jìn)腫瘤新轉(zhuǎn)移灶的形成。給予異甘草素，可劑量依賴(lài)性地抑制腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成和原發(fā)部位 的復(fù)發(fā)，表明異甘草素對(duì)切除結(jié)腸癌原發(fā)灶而造成的腫瘤轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用，對(duì)腫瘤復(fù)發(fā) 也有明顯抑制作用。
表4異甘草素對(duì)切除原發(fā)灶后結(jié)腸癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響組別劑量 (mg/kg)n出現(xiàn)復(fù)發(fā)鼠數(shù) (只)肺轉(zhuǎn)移灶數(shù) (個(gè))
荷瘤對(duì)照組1514.2±3.46
切除腫瘤對(duì)照組15721.2土5.37"
給藥組0.115r19.1 ±4.82
給藥組1.0150 16.6土3.73'
給藥組10.0150**15.9土3.1廣
給藥組10015(T14.9±3.06w
與荷瘤對(duì)照組比較:§§代0. 01;與切除腫瘤對(duì)照組比較*代0. 05，林代O. 01。
實(shí)驗(yàn)例5異甘草素對(duì)人乳腺癌手術(shù)切除原發(fā)灶后復(fù)發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響
實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)[楊毅，馮玉梅，魏熙胤，等.免疫雙缺陷鼠人乳腺癌轉(zhuǎn)移模型的生物
學(xué)特性研究.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志.2002; 19(06):591-593]。
人結(jié)腸癌細(xì)胞株MDA-MB-231購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，接種于雌性SPF級(jí)SCID聯(lián)合免疫缺腺鼠腹部脂肪墊上傳代保存。
取出皮下傳代的荷瘤裸小鼠皮下移植瘤，浸入含青霉素和鏈霉素各100 U/ml的生理鹽水 中，選擇生長(zhǎng)良好、無(wú)壞死、呈魚(yú)肉狀的瘤組織，剪切成約lmr^的小塊，用20號(hào)套管針移 植至SCID小鼠腹部脂肪墊上，建模后觀(guān)察小鼠一般活動(dòng)，營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及移植瘤的潛伏期、成 瘤率和生長(zhǎng)情況。
接種腫瘤4周后，選取瘤塊直徑大于1 cm且腫瘤生長(zhǎng)狀態(tài)良好無(wú)潰破的荷瘤小鼠90只， 隨機(jī)分為6組，每組15只。隨機(jī)取一組作為荷瘤對(duì)照組，其余5組水合氯酸麻醉后消毒局部 皮膚，剝除瘤塊，注意血管的剝離和腫瘤包膜的剔除，避免因出血過(guò)多而造成動(dòng)物死亡，同 時(shí)保證盡量剝除干凈，要把腫瘤全部切除，縫合傷口后繼續(xù)飼養(yǎng)。荷瘤對(duì)照組僅給予麻醉并 切開(kāi)皮膚，但不剝除瘤塊，縫合皮膚后繼續(xù)飼養(yǎng)，每日觀(guān)察小鼠狀態(tài)。剝除瘤塊的5組中隨 機(jī)選一組作為切除腫瘤對(duì)照組，其余4組給予不同劑量異甘草素，分別為0.1 mg/kg， 1.0 mg/kg， 10.0 mg/kg和100 mg/kg，異甘草素以0.5%羧甲基纖維素鈉混懸，給藥體積20ml/kg，每日給 藥一次。切除腫瘤對(duì)照組和每日給予0.5。/。羧甲基纖維素鈉20ml/kg。連續(xù)給藥4周后。處死 各組小鼠，解剖觀(guān)察原發(fā)灶有無(wú)復(fù)發(fā)，并取各部位淋巴結(jié)，組織病理學(xué)檢查有無(wú)轉(zhuǎn)移發(fā)生， 計(jì)算各組發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的百分率。以\2分析作組間復(fù)發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組小鼠均未出現(xiàn)死亡，荷瘤對(duì)照組小鼠屮9只因腫瘤塊太大出現(xiàn)行動(dòng)困 難，自發(fā)活動(dòng)減少等現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(表5)，手術(shù)切除腫瘤原發(fā)灶后，小鼠生活狀態(tài)優(yōu) 于荷瘤組，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各切除原發(fā)灶組未現(xiàn)明顯衰竭狀態(tài)。切除腫瘤對(duì)照組有9只接種部 位出現(xiàn)復(fù)發(fā)，12只小鼠發(fā)生遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，明顯高于荷瘤對(duì)照組(尸<0.01)，表明手術(shù)切 除原發(fā)灶可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。給予異甘草素，可劑量依賴(lài)性地抑制腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的形成和 原發(fā)部位的復(fù)發(fā)，表明異甘草素對(duì)切除結(jié)腸癌原發(fā)灶而造成的腫瘤轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用，對(duì) 腫瘤復(fù)發(fā)也有明顯抑制作用。
表5異甘草素對(duì)切除原發(fā)灶后結(jié)腸癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的影響
組別劑量 (mg/kg)n出現(xiàn)復(fù)發(fā)鼠數(shù) (只)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移鼠數(shù) (只)
荷瘤對(duì)照組155
切除腫瘤對(duì)照組15912"
給藥組0.1153*8
給藥組1.015(T6*
給藥組10.015(T6*
給藥組10015(T;科
與荷瘤對(duì)照組比較:§§代0. 01;與切除腫瘤對(duì)照組比較*代0. 05， **代0.01。
實(shí)驗(yàn)例6異甘草素對(duì)腫瘤干細(xì)胞的治療作用
12實(shí)驗(yàn)方f去參'照、文獻(xiàn)[Guzman ML, Rossi RM， Kamischky L， W a/. The sesquiterpene lactone parthenlide induces apoptosis of human acute myelogenous leukemia stem and progenitor cells. Blood 105:4163-4169,2005],集落形成率是評(píng)價(jià)腫瘤干細(xì)胞自我更新和增殖能力的較為經(jīng)典的 方法。
試驗(yàn)方法急性髓系白血病細(xì)胞(acute myeloid leukemia)和急變期慢性髓系白血病(blast chronic myeloid leukemia)病人的外周血或骨髓細(xì)胞。外周血細(xì)胞用白細(xì)胞分離液去除紅細(xì)胞， 骨髓細(xì)胞用150mMNH4Cl禾卩10 mM NaHC03處理5分鐘去除紅細(xì)胞。細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng) 基洗三遍，加入異甘草素(終濃度為O、 5、 10 Pg/ml)處理4小日寸，或加入阿糖胞苷(終濃 度為0、 5、 10 Pg/ml)。然后用無(wú)血清培養(yǎng)基洗三遍去除異甘草素，用甲基纖維素IMAM培 養(yǎng)液(1%甲基纖維素、30%牛血清白蛋白、0.2 mM巰基乙醇、2mM谷氨酰酰胺、50 ng/ml 重組人干細(xì)胞因子、10ng/ml重組人粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子，10ng/ml重組人白介 素-3、 3單位/ml促紅細(xì)胞生成素、50ng/ml粒細(xì)胞集落生成因子)配成50000細(xì)胞/ml，放 入二氧化碳培養(yǎng)箱，培養(yǎng)10-14天，觀(guān)察細(xì)胞集落。
結(jié)果以上的細(xì)胞集落方法是觀(guān)察腫瘤干細(xì)胞的一種公認(rèn)的方法，能生成集落的細(xì)胞被 認(rèn)為是腫瘤干細(xì)胞。阿糖胞苷是一個(gè)廣泛用于治療急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性 淋系白血病和淋巴瘤的一種抗癌藥。從結(jié)果看，阿糖胞苷不能有效去除腫瘤千細(xì)胞，而異甘 草素去除腫瘤干細(xì)胞的藥效顯著比阿糖胞苷強(qiáng)(表6)。
表6異甘草素和阿糖胞苷抑制急性髓系白血病:F細(xì)胞的集落下生成率
異甘草素 阿糖胞苷
病人 對(duì)照
5 (ag/ml10 (ig/ml5嗎/ml 10 |ig/ml
1100%46%27%65%39%
2100%48%25%71%42%
3100%43%23%63%38%
4100%45%24%68%40% '
5100%50%28%65%36%
表注對(duì)照為沒(méi)有藥物處理的細(xì)胞，表中的數(shù)據(jù)為對(duì)照的細(xì)胞集落數(shù)為100%，藥物處理
組的細(xì)胞集落百分比為=(處理細(xì)胞組集落數(shù)/對(duì)照細(xì)胞組集落數(shù))xioo%。
1權(quán)利要求
1.異甘草素作為制備預(yù)防或治療手術(shù)切除腫瘤原發(fā)灶后腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的藥物的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述藥物，其特征在于可用于臨床使用的制劑包括采用常規(guī)或特殊制劑工 藝制備而成的口服或非口服途徑方式給藥的制劑，優(yōu)選為口服給藥制劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述藥物，其特征在于用于臨床，人用劑量為I一IOOO mg/人/天， 優(yōu)選為10—500 mg/人/天，最優(yōu)選為50 — 100 mg/人/天。
4. 如權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，其特征在于用于制備預(yù)防或治療乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的 藥物中的應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，其特征在于用于制備預(yù)防或治療乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的 藥物中的應(yīng)用。
6. 如權(quán)利要求1至3所還的應(yīng)用，其特征在f用于制備預(yù)防或治療肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的藥 物中的應(yīng)用。
7. 如權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，其特征在于用于制備預(yù)防或治療肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的藥 物中的應(yīng)用。
8. 如權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，其特征在于用于制備預(yù)防或治療結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移 的藥物中的應(yīng)用。
9. 如權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，其特征在于用于制備預(yù)防或治療其它任何惡性腫瘤手術(shù)切 除原發(fā)灶后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用。
10. 如權(quán)利要求1至3所述的應(yīng)用，其特征在于用于制備預(yù)防或治療腫瘤干細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
異甘草素作為預(yù)防或治療惡性腫瘤術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的藥物的應(yīng)用。本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開(kāi)了異甘草素作為預(yù)防或治療惡性腫瘤術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的藥物的應(yīng)用。已有研究表明，手術(shù)切除原發(fā)灶可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，目前對(duì)于切除原發(fā)灶后惡性腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移尚未有理想的治療方法或藥物。發(fā)明人經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，證明異甘草素對(duì)手術(shù)切除多種惡性腫瘤原發(fā)灶后的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)均具有明顯的抑制作用，根據(jù)這一作用，異甘草素可被應(yīng)用于臨床預(yù)防或治療包括肺癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等各種惡性腫瘤手術(shù)切除原發(fā)灶后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，具有安全性高、價(jià)格低廉、患者依從性好等明顯優(yōu)勢(shì)。異甘草素的這一作用可能與其對(duì)腫瘤干細(xì)胞自我更新和增殖能力的抑制有關(guān)。
文檔編號(hào)A61K31/122GK101658513SQ20081007294
公開(kāi)日2010年3月3日 申請(qǐng)日期2008年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月26日
發(fā)明者劉軍花, 超 孫, 娟 張, 忌 李, 婷 王, 王振華, 王祥飛, 露 甘, 鄭秋生, 雷 郭 申請(qǐng)人:石河子大學(xué)