專利名稱：結(jié)核及耐藥結(jié)核的個(gè)性化卵黃多克隆抗體制劑及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
結(jié)核及耐藥結(jié)核的個(gè)性化卵黃多克隆抗體制劑及其制備方法與應(yīng)用 技術(shù)領(lǐng)域-本發(fā)明涉及治療、預(yù)防結(jié)核及耐藥結(jié)核病生物新藥以及檢測結(jié)核及耐藥結(jié)核病新試劑的 開發(fā)，特別是結(jié)核及耐藥結(jié)核的個(gè)性化卵黃多克隆抗體制劑及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
結(jié)核病是嚴(yán)重危及全球公共衛(wèi)生的傳染病之一。據(jù)WHO估計(jì)，目前全球約有20億人受 結(jié)核桿菌感染，其中約有5000萬人感染了耐藥結(jié)核桿菌。1994 1997年，WHO/IUATLD (國 際防癆和肺病聯(lián)合會)在35個(gè)國家和地區(qū)統(tǒng)計(jì)初始耐藥率為9.9%，獲得性耐藥率為5.3% ~100%，耐多藥率為0 54%,因此，全球的結(jié)核病耐藥趨勢嚴(yán)峻。我國是"結(jié)核大國"，有 5.5億人口感染過結(jié)核菌，有結(jié)核患者500萬，占全球結(jié)核病人總數(shù)的25%。全球每年新出現(xiàn) 耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)患者約30力-，世界衛(wèi)生組織估算，中國耐多藥結(jié)核病患者數(shù)占全 球的25% 33%，屬高耐藥國家。耐藥、流動人口和愛滋病毒HIV感染已經(jīng)成為當(dāng)今結(jié)核病 控制所面臨的三大難題，其中耐藥性是對我國結(jié)核病控制起主要限制性作用的因素。結(jié)核病易產(chǎn)生耐藥性，其中重要原因是結(jié)核桿菌是一種非常容易發(fā)生變異以致產(chǎn)生耐藥 性的細(xì)菌。1944年鏈霉素開始用于結(jié)核病治療，很快就產(chǎn)生了耐藥菌株。1948年氨硫脲投入 抗結(jié)核病治療，與對氨水楊酸合用，抗癆效果很好。但是，沒過多久，結(jié)核桿菌也對它們產(chǎn) 生了耐藥。1952年異煙肼投入臨床，3種藥物聯(lián)用，治療效果更好。但僅僅過了3年時(shí)間， 到了 1955年，人們發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌又產(chǎn)生了耐藥，而且是耐多藥。1972年研制出利福平，利 福平的出現(xiàn)，打破了結(jié)核病化療的難點(diǎn)，縮短了療程。但沒過多久，同樣也出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象。 可以說， 一種新的抗結(jié)核西藥上陣沒多久，就對結(jié)核桿菌失去了威力；哪兒搞抗結(jié)核治療， 哪兒就產(chǎn)生耐藥結(jié)核病。對于結(jié)核桿菌這種特殊的耐藥本領(lǐng)，人類真有些束手無策。而近40 年來，沒有抗結(jié)核的新藥問世。在治療結(jié)核時(shí)，如果病人感染的是敏感性結(jié)核桿菌，用異煙肼、利福平、鏈霉素、二已 胺丁醇、吡嗪酰胺這些一線藥物的標(biāo)準(zhǔn)療程進(jìn)行治療就能夠控制。如果結(jié)核桿菌同時(shí)對異煙 肼和利福平等二種以上一線藥物產(chǎn)生抗藥性，就被認(rèn)為是耐多藥結(jié)核。對抗耐多藥結(jié)核，通 常用二線藥物組合治療耐多藥結(jié)核，所需時(shí)間更長，更加昂貴，并且產(chǎn)生更多副作用。在這 些二線藥物也被濫用或管理不當(dāng)，并因此也變得無效時(shí)，可發(fā)展為廣泛耐藥結(jié)核(XDR-TB)， 該病菌就連很少用的藥物也能抵抗，達(dá)到無藥可治的地歩。如果一個(gè)人被廣泛耐藥結(jié)核患者 傳染，被傳染的人很可能直接就變成了一個(gè)新的廣泛耐藥結(jié)核病人，而不是普通的結(jié)核病人， 也就是說，從他第一天得病開始，多數(shù)藥物就對他毫無效果了。由此可見，目前西藥治療結(jié) 核存在四大缺陷①療程長，初治至少9個(gè)月，復(fù)治至少l年半。②治療費(fèi)用昂貴，且難 以治愈。③有較大毒副作用，治療此病要聯(lián)合用藥，毒副作用也增大。 進(jìn)一步加劇多重 耐藥菌產(chǎn)生。此外，由于結(jié)核病患者的機(jī)體保護(hù)性免疫處于劣勢，單純、有效的化療仍然不能殺滅持 留菌。因此，即使在藥物治療有效的同時(shí)也必須采用免疫療法，恢復(fù)患者機(jī)體的保護(hù)性免疫。由此看來，發(fā)展沒有抗藥性的生物醫(yī)藥，采取免疫治療，是防治結(jié)核，尤其是耐藥結(jié)核的有 效途徑。結(jié)核桿菌變異性大、多型性十分突出，目前尚無一種針對結(jié)核病患者個(gè)性化的抗體 被動免疫治療的策略。卵黃IgY抗體，是將一些抗原物質(zhì)注射到雌禽的體內(nèi)，然后再從免疫雌禽所生的卵蛋中 提取針對抗原的特異性抗體，用于診斷和治療疾病。卵黃抗體在獸醫(yī)臨床上己得到應(yīng)用，但 至今，仍沒有一種卵黃抗體制品在人的結(jié)核及耐藥結(jié)核的臨床治療和檢測中使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種安全、可靠、經(jīng)濟(jì)簡便、易于推廣、無交叉耐藥性、適用面 廣的針對結(jié)核及耐藥結(jié)核個(gè)性化的卵黃多克隆IgY抗體制劑及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種結(jié)核及耐藥結(jié)核個(gè)性化卵黃多克隆IgY抗體制劑，它由從結(jié)核患者的血清或痰中分離、培養(yǎng)出致病菌，0.4%甲醛滅活，制成針對該患者及針對該致病結(jié)核桿菌的個(gè)性化疫苗，注射到健康的雌禽的體內(nèi)，經(jīng)此個(gè)性化免疫后，從雌禽所產(chǎn)的卵黃中提取結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體，經(jīng)除菌、提取、純化、脂質(zhì)體微囊化等工藝制成得到針 對結(jié)核或耐藥結(jié)核桿菌的個(gè)性化的特異性多克隆IgY抗體制劑。該制劑用于治療結(jié)核或耐藥 性結(jié)核桿菌引起相關(guān)疾病的藥物或保健品中，并可應(yīng)用于高危人群預(yù)防結(jié)核或耐藥性結(jié)核桿 菌的感染，亦可用于結(jié)核或耐藥性結(jié)核桿菌引起的相關(guān)疾病的個(gè)性化的快速檢測。本發(fā)明提供了一種個(gè)性化結(jié)核或耐藥性結(jié)核病卵黃多克隆IgY抗體制劑的制備方法，該方法包括如下步驟1. 個(gè)性化的免疫A. 取某個(gè)結(jié)核病或耐藥結(jié)核病患者的血清或痰，培養(yǎng)致病的結(jié)核桿菌，0.4%甲醛滅活，制成針對該患者以及該致病結(jié)核桿菌的個(gè)性化疫苗；B. 健康的雌禽適應(yīng)性飼養(yǎng)，正常產(chǎn)卵一周后，將步驟A制成的個(gè)性化疫苗以10 1000Mg 的抗原量進(jìn)行免疫，加弗式佐劑，每次0.5mL，皮下或肌肉注射，每7天免疫一次，免疫2~4 次， 一般抗結(jié)核或耐藥結(jié)核的特異性lgY抗體在第一次免疫14天后出現(xiàn)。收集卵蛋，4° C 保存，隔30天可加強(qiáng)免疫一次；C. 采用步驟B個(gè)性化疫苗免疫后的卵蛋，得到針對該患者及該致病結(jié)核桿菌的個(gè)性化lgY 抗體；所述的禽類，包括雞、鴨、鵝、鵪鵓、鴿、鴕鳥等；2. 抗體純化與制劑的制備用75%的酒精消毒上述個(gè)性化疫苗免疫后的卵黃外殼，去殼，去卵黃膜，取出卵黃，卵 黃中結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體純化與制劑制備方法是① 取卵黃，巴氏消毒，直接凍干，制成含有結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆lgY抗體的蛋 黃粉；② 取卵黃，采用水稀釋法(WD)法，或聚乙二醇(PEG)法，或硫酸葡聚糖法，或有 機(jī)溶劑抽提法，或自然膠(藻酸鈉、角叉菜膠)法，或乙醇沉淀法等方法，進(jìn)行分離和提取 結(jié)核或耐藥結(jié)核的特異性多克隆IgY抗體。采用層析法，或透析法或超濾法等方法進(jìn)行純化。 利用DEAE-Sepharose RF離子交換層析柱或親和層析法進(jìn)一步純化IgY，制得純的結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體液。③采用卵磷脂、膽固醇法或聚山梨脂法，進(jìn)一歩將結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗 體制成脂質(zhì)體微囊，提高口服lgY抗體的活性。上述三種lgY抗體制劑，4° C保存，備用。個(gè)性化結(jié)核或耐藥性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制劑的應(yīng)用(1) 在個(gè)性化治療或預(yù)防結(jié)核桿菌或耐藥結(jié)核桿菌感染引起的相關(guān)疾病 將含有結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆lgY抗體的蛋黃粉添加于食品或制成保健食品，或直接服用結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆lgY抗體制成的脂質(zhì)體微囊，或注射純的結(jié)核或耐藥 結(jié)核特異性多克隆IgY抗體液，是針對該致病結(jié)核桿菌感染引起的相關(guān)疾病的個(gè)性化治療方 法。此外，結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆lgY抗體制劑也可作為輔助治療法，該結(jié)核患者在 常規(guī)化療藥物方案治療期間可同時(shí)服用，增強(qiáng)免疫力。對健康人群尤其對與該結(jié)核患者密切接觸的高危人群，服用含結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多 克隆IgY抗體制劑，可個(gè)性化地預(yù)防結(jié)核及耐藥結(jié)核桿菌的感染。將多種結(jié)核及耐藥結(jié)核的 特異性多克隆IgY抗體制劑按比例混合，制成復(fù)合型特異性多克隆IgY抗體制劑，應(yīng)用于高 危人群預(yù)防結(jié)核及耐藥結(jié)核桿菌的感染。(2) 在快速檢測結(jié)核桿菌或耐藥結(jié)核桿菌的感染的應(yīng)用由于卵黃抗體(lgY)和人免疫球蛋白(IgG)有許多相同之處，這使得lgY抗體在檢測 診斷上具有的特異性和靈敏度。采用本發(fā)明得到的結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆lgY抗體可以個(gè)性化地應(yīng)用于以結(jié)核抗原-抗體免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)的所有檢測方法，包括免疫金標(biāo)記試紙、沉淀反應(yīng)、免疫熒光、酶 聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、免疫擴(kuò)散、免疫電泳、免疫印跡、免疫電鏡等免疫檢測方法?？焖?檢測結(jié)核桿菌或耐藥性桿菌結(jié)核的感染。指示結(jié)核桿菌的耐藥性及藥敏性。克服目前臨床耐 藥性桿菌結(jié)核的檢測，需要培養(yǎng)細(xì)菌后進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，確定耐藥性后，才能制定適用的用藥 方案，耗時(shí)長，費(fèi)用高的缺點(diǎn)。因此，本發(fā)明較目前臨床常用的藥敏檢測方法，其優(yōu)點(diǎn)在于 操作簡單、快速，成本較低，檢測結(jié)果準(zhǔn)確性高，在結(jié)核病患者耐藥性臨床個(gè)性化的診斷及 臨床指導(dǎo)個(gè)性化的用藥中具有很大的應(yīng)用前景。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用實(shí)時(shí)個(gè)性化結(jié)核及耐藥結(jié)核特異性多克隆lgY抗體制劑治療或輔助治療結(jié)核及耐藥結(jié)核，能克服結(jié)核桿菌變異性，多態(tài)性，易產(chǎn)生抗藥性等突出的問題， 雌禽產(chǎn)生有效免疫所需抗原量小，易于飼養(yǎng).卵蛋收集方便，治療費(fèi)用低，治療效果好，無 明顯的不良反應(yīng)，是一種安全、高效、經(jīng)濟(jì)簡便、易于推廣，無交叉耐藥性、不會破壞微生 態(tài)平衡、適用面廣的個(gè)性化的生物制劑，是結(jié)核及耐藥性結(jié)核病治療藥物及治療方法的新突 破。
具體實(shí)施例方式通過下面給出的本發(fā)明的具體實(shí)施例，可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明的內(nèi)容，但它們不 是對本發(fā)明的限定。 實(shí)施例1:一種敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制劑的制備方法包括如下步驟(一) 個(gè)性化實(shí)時(shí)化免疫 取某個(gè)受敏感性結(jié)核桿菌感染患者的血清或痰，培養(yǎng)出敏感性結(jié)核桿菌，0.4%甲醛滅活，制成針對受敏感性結(jié)核菌感染患者的個(gè)性化疫苗；另選用SPF( specific pathogen free,無特定 病原體)母雞，適應(yīng)性飼養(yǎng)，正常產(chǎn)蛋一周后，開始免疫。注射個(gè)性化疫苗抗原(敏感性結(jié)核 菌)量在10-1000 pg，加弗式佐劑，每次0.5 mL，皮下或肌肉注射，每7天免疫一次，共4 次，抗體一般在第一次免疫14天后出現(xiàn)。隔30天加強(qiáng)免疫一次，收集雞蛋，4'C保存；(二) 抗體純化與制劑制備將上述雞蛋外殼用75%酒精消毒，去殼、去卵黃膜，取卵黃，采用下述方法進(jìn)行抗體制 劑的制備；方法一卵黃巴氏消毒，凍干，制成含敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體的卵黃粉，4"C保存；方法二用WD法純化卵黃抗體蛋白質(zhì)，用微孔濾膜過濾，除菌。采用卵磷脂、膽固醇法，進(jìn)一歩將敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制成IgY脂質(zhì)體微囊，4"C保存； 方法三用WD法純化卵黃抗體蛋白質(zhì)，調(diào)節(jié)pH4.6 6.0，凍融預(yù)處理后微濾(0.45 pm)， 5 10 倍超濾濃縮，對超濾截留液用25 45%飽和硫酸銨鹽析，經(jīng)高速冷凍離心，得到lgY沉淀， PBS溶解，透析脫鹽，經(jīng)DEAE-Sepharose F.F離子交換層析柱法進(jìn)一步純化lgY，制得高純 度的敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體液，4'C保存。 敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制劑的應(yīng)用注射純的敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體液，或口服敏感性結(jié)核特異性lgY抗體制成 脂質(zhì)體微囊是針對敏感性結(jié)核桿菌感染引起的相關(guān)疾病的個(gè)性化治療藥物，每天使用IgY抗 體劑量為1.0 2.0 g， 一個(gè)月為l療程。是針對敏感性結(jié)核菌感染引起的相關(guān)疾病的個(gè)性化治 療方法。根據(jù)需要，可進(jìn)行多個(gè)療程的治療，不產(chǎn)生耐藥性。含敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體的蛋黃粉添加于食品或制成保健食品，可作為輔助 治療法，患者在常規(guī)化療藥物方案治療同時(shí)可服用，以增強(qiáng)對敏感性結(jié)核桿菌的抵抗力。對健康人群尤其對與敏感性結(jié)核患者密切接觸的高危人群，服用含抗敏感性結(jié)核特異性 多克隆IgY抗體的蛋黃粉添加于食品或制成保健食品，可個(gè)性化地預(yù)防敏感性結(jié)核桿菌的感 染。敏感性結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制劑亦可用于個(gè)性化檢測敏感性結(jié)核桿菌的感染引起 的相關(guān)疾病。 實(shí)施例2:一種利福平耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制劑的制備包括如下歩驟(一) 個(gè)性化實(shí)時(shí)化免疫取某個(gè)受利福平耐藥結(jié)核桿菌感染患者的血清或痰，培養(yǎng)出利福平耐藥結(jié)核桿菌，0.4% 甲醛滅活，制成針對利福平耐藥結(jié)核桿菌的個(gè)性化疫苗。選用SPF母雞，適應(yīng)性詞養(yǎng)，正常產(chǎn)蛋一周后，開始免疫。注射個(gè)性化疫苗中抗原(利 福平耐藥結(jié)核桿菌)量在10 1000 pg，加弗式佐劑，每次0.5mL，皮下或肌肉注射，每7天 免疫一次，共2 4次，抗體一般在第一次免疫14天后出現(xiàn)。隔30天可加強(qiáng)免疫一次。收集 雞蛋，4'C保存。(二) 抗體純化與制備將上述雞蛋外殼用75%酒精消毒，去殼、分離，取卵黃。方法一卵黃巴氏消毒，凍干， 制成含有利福平耐藥結(jié)核桿菌特異性多克隆IgY抗體的卵黃粉，4'C保存。方法二用PEG法純化抗體蛋白質(zhì)，用微孔濾膜過濾，除菌。采用聚山梨脂法，進(jìn)一歩將利福平耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制成IgY脂質(zhì)體微囊，4。C保存。方法三用WD法純化卵黃抗體蛋白 質(zhì)，調(diào)節(jié)pH4.6~6.0，凍融預(yù)處理后微濾(0.45 pm)， 5 10倍超濾濃縮，對超濾截留液用25 45% 飽和硫酸銨鹽析，經(jīng)高速冷凍離心，得到lgY沉淀，PBS溶解，透析脫鹽，經(jīng)親和層析法進(jìn) 一步純化lgY，制得高純度的利福平耐藥結(jié)核桿菌特異性多克隆IgY抗體液，4'C保存。 利福平耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制劑的應(yīng)用通過上述方法得到三種IgY抗體制劑含有利福平耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體的卵 黃粉，利福平耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體脂質(zhì)體以及純的利福平耐藥結(jié)核特異性多克隆 IgY抗體液，針對利福平耐藥結(jié)核桿菌感染引起的相關(guān)疾病的個(gè)性化治療藥物。適用對象為利福平耐藥結(jié)核桿菌感染的患者和高危感染人群，具體應(yīng)用方法同實(shí)施例1。實(shí)施例3:一種對異煙肼和利福平耐多藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體制劑的制備及應(yīng)用除了個(gè)性化疫苗采用對異煙肼和利福平耐多藥結(jié)核桿菌外，其他過程同實(shí)施例1或?qū)嵤├?。適用對象為異煙肼和利福平耐多藥結(jié)核桿菌感染的患者和高危感染人群，具體應(yīng)用方法 同實(shí)施例1。實(shí)施例4:一種廣泛耐藥結(jié)核雞蛋IgY抗體制劑的制備及應(yīng)用除了個(gè)性化疫苗采用廣泛耐藥結(jié)核桿菌外，其他過程同實(shí)施例1或?qū)嵤├?。適用對象為廣泛耐藥結(jié)核桿菌感染的患者和高危感染人群，具體應(yīng)用方法同實(shí)施例1。實(shí)施例5:結(jié)核及耐藥結(jié)核的復(fù)合型特異性多克隆IgY抗體蛋黃粉制劑敏感結(jié)核桿菌，耐鏈霉素結(jié)核桿菌，耐利福平結(jié)核桿菌，耐異煙肼結(jié)核桿菌，異煙肼和 利福平耐多藥結(jié)核桿菌是某地區(qū)臨床結(jié)核患者中發(fā)現(xiàn)的致病菌。將上述致病結(jié)核桿菌分別作為個(gè)性化疫苗，按以上實(shí)施例1或?qū)嵤├?，分別獲得上述致病結(jié)核桿菌的特異性多克隆IgY 抗體蛋黃粉制劑，按等比例混合，得到結(jié)核及耐藥結(jié)核的復(fù)合型特異性多克隆IgY抗體蛋黃粉制品，適用于該地區(qū)高危人群預(yù)防多種結(jié)核及耐藥結(jié)核桿菌的感染。實(shí)施例6:酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)快速檢測結(jié)核及耐藥結(jié)核桿菌的感染參照上述實(shí)施例，獲得高純度個(gè)性化的針對結(jié)核或多種耐藥結(jié)核的特異性多克隆IgY抗 體，將之分別作為第二抗體，包被酶標(biāo)試劑盒。用酶標(biāo)儀可快速檢測患者血清的抗體，根據(jù) 特異性免疫顯色情況，可快速、個(gè)性化地檢測出患者感染的結(jié)核桿菌有無耐藥性，并能反應(yīng) 出耐藥性的特點(diǎn)。實(shí)施例7:除了個(gè)性化免疫對象采用鵪鶉外，其他過程同以上實(shí)施例。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)核及耐藥結(jié)核的個(gè)性化卵黃多克隆抗體制劑，其特征是它是由從結(jié)核患者的血清或痰中分離、培養(yǎng)出致病的結(jié)核或耐藥結(jié)核桿菌，經(jīng)0.4％甲醛滅活，制成針對該病人及該致病結(jié)核桿菌的個(gè)性化疫苗，注射到健康產(chǎn)卵的雌禽體內(nèi)，經(jīng)此個(gè)性化免疫后，取卵黃，經(jīng)除菌、分離提取、純化得到針對該患者及針對該致病結(jié)核桿菌的個(gè)性化、特異性多克隆IgY制劑或?qū)⒑喾N結(jié)核及耐藥結(jié)核的特異性多克隆IgY抗體制劑按等比例混合，制成復(fù)合型特異性多克隆IgY抗體制劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述制劑的制備方法，其特征是制備方法包括如下步驟(1) 個(gè)性化免疫A. 取結(jié)核患者或耐藥結(jié)核患者的血清或痰，培養(yǎng)致病結(jié)核桿菌，0.4%甲醛滅活，制成 針對該患者以及針對該致病結(jié)核桿菌的個(gè)性化疫苗；B. 雌禽適應(yīng)性飼養(yǎng)，正常產(chǎn)卵一周后，將步驟A制成的個(gè)性化疫苗以10 1000嗎的 抗原量進(jìn)行免疫，加弗式佐劑，每次0.5 mL，皮下或肌肉注射，每7天免疫一次，免疫2~4 次， 一般抗結(jié)核或耐藥結(jié)核的特異性lgY抗體在第一次免疫14天后出現(xiàn),收集卵蛋，4° C 保存，隔30天可加強(qiáng)免疫一次；C. 采用步驟B個(gè)性化疫苗免疫后的卵蛋，得到針對該患者及該致病結(jié)核桿菌的個(gè)性化 lgY抗體；(2) .抗體純化與制劑的制備用75%的酒精消毒上述個(gè)性化疫苗免疫后的卵黃外殼，去殼，去卵黃膜，取出卵黃，卵黃中結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體純化與制劑制備方法是① 取卵黃，巴氏消毒，直接凍干，制成含有結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆lgY抗體的 蛋黃粉；② 取卵黃，采用水稀釋法(WD)法，或聚乙二醇(PEG)法，或硫酸葡聚糖法，或有 機(jī)溶劑抽提法，或自然膠(藻酸鈉、角叉菜膠)法，或乙醇沉淀法等方法，進(jìn)行分離和提取 結(jié)核或耐藥結(jié)核的特異性多克隆IgY抗體,采用層析法，或透析法或超濾法等方法進(jìn)行純化， 利用DEAE-Sepharose F.F離子交換層析柱或親和層析法進(jìn)一歩純化lgY，制得純的結(jié)核或耐 藥結(jié)核特異性多克隆IgY抗體液；③ 采用卵磷脂、膽固醇法或聚山梨脂法，進(jìn)一步將結(jié)核或耐藥結(jié)核特異性多克隆IgY 抗體制成脂質(zhì)體微囊。
3. 權(quán)利要求l所述個(gè)性化特異性多克隆IgY抗體制劑，在結(jié)核或耐藥結(jié)核桿菌感染性 疾病的預(yù)防以及個(gè)性化被動免疫治療中的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求l所述復(fù)合型特異性多克隆IgY抗體制劑，在高危人群預(yù)防結(jié)核及耐藥結(jié) 核桿菌的感染中的應(yīng)用。
5. 權(quán)利要求l所述個(gè)性化特異性多克隆IgY抗體制劑，在以結(jié)核抗原抗體免疫反應(yīng)為 基礎(chǔ)的所有免疫檢測方法，包括免疫金標(biāo)記試紙、沉淀反應(yīng)、免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附法 ELISA、免疫擴(kuò)散、免疫電泳、免疫印跡或免疫電鏡中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種個(gè)性化結(jié)核及耐藥結(jié)核的卵黃多克隆抗體制劑及其制備方法和應(yīng)用，它是由從結(jié)核病患者的血清或痰中分離、培養(yǎng)出致病的結(jié)核桿菌或耐藥結(jié)核桿菌，經(jīng)甲醛滅活制成個(gè)性化疫苗，用此疫苗對健康的雌禽注射免疫，從免疫后所產(chǎn)的卵黃中獲得針對該患者及該致病結(jié)核桿菌的特異性多克隆IgY抗體，經(jīng)除菌、提取、純化、脂質(zhì)體微囊化等工藝制成特異性多克隆IgY抗體制劑，用于該結(jié)核或耐藥結(jié)核病患者的被動免疫治療，及高危人群預(yù)防結(jié)核。這是一種安全、高效、無耐藥性的個(gè)性化的生物制劑。本抗體制劑亦可應(yīng)用于以結(jié)核抗原-抗體免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)的所有檢測方法，快速、個(gè)性化地檢測結(jié)核或耐藥結(jié)核桿菌的感染。
文檔編號A61K39/40GK101249264SQ200810073528
公開日2008年8月27日 申請日期2008年4月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月4日
發(fā)明者唐振祥, 慶 徐, 戴志剛, 李利亞, 宏 梁, 梁榮感, 沈星燦, 寧 譚, 陳秋娟 申請人:沈星燦