專利名稱：：一種牡丹葉有效組分及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域。涉及一種從牡丹葉中分離得到有效組分，并提供其制備方法、制劑和醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：近年來，隨著我國人口老年化及人們工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等變化，冠心病心絞痛、心肌梗塞、腦血栓，猝死等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，并成為當(dāng)今人類死亡率最高的三大疾病之一。因此，開發(fā)療效好、毒副作用小的治療藥物具有較好的市場前景，同時也成為醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點。牡丹皮為毛茛科芍藥屬植物牡丹(PaenoinaSuffruticosaAndr.)的根皮，為我國傳統(tǒng)中藥，有清熱涼血，活血化淤等功效。其藥理作用廣泛，包括抗心肌缺血、抗血栓、抗動脈粥樣硬化、降血糖、抗鐘瘤、鎮(zhèn)痛、保肝等(文獻l:馬玉玲，劉建勛，孫衛(wèi)，尚曉泓，李連達.牡丹皮對犬心肌缺血及心臟血流動力學(xué)影響的研究[J].山西醫(yī)藥雜志.1984年04期；文獻2:龍世林，陳雅.牡丹皮藥理作用及臨床研究進展.2007年第16巻第3期)。但由于牡丹皮采收周期較長、不可再生。為了充分、有效利用牡丹資源，可選擇牡丹葉作為藥用部位。牡丹葉為毛萊科芍藥屬植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的葉，收載于2002年版的山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)，主要含量有酚酸類、鞣質(zhì)、黃酮等。因牡丹葉資源豐富，可再生，故具有較好的開發(fā)前景。目前對牡丹葉的研究報道較少。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是研發(fā)一種牡丹葉有效組分，用于防治心腦血管疾病。該有效組分中主要成分清楚，產(chǎn)品質(zhì)量易于控制，重現(xiàn)性好，療效穩(wěn)定-同作用。同時，本發(fā)明還提供了用于防治心腦血管疾病的牡丹葉有效組分的制備方法，及以牡丹葉有效組分作為活性成分的中藥制劑。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明研究制定了如下技術(shù)方案。一種牡丹葉有效組分，其特征在于主要包含沒食子酸和沒食子酸乙酯，其中沒食子酸的含量為35-70%,沒食子酸乙酯的含量為15-30%。較優(yōu)選牡丹葉有效組分，其特征在于沒食子酸的含量在40-70%，沒食子酸乙酯的含量為15-30%。更優(yōu)選牡丹葉有效組分，其特征在于沒食子酸的含量在50-70%，沒食子酸乙酯的含量為20-30%。最優(yōu)選牡丹葉有效組分，其特征在于沒食子酸的含量在60-70%,沒食子酸乙酯的含量為25-30%。一種牡丹葉有效組分的制備方法，包括如下步驟(1)取牡丹葉，用水和/或低級醇提取，得提取液；(2)將步驟(1)提取液直接上大孔吸附樹脂柱，或者，將步驟(l)提取液濃縮后上大孔吸附樹脂柱；(3)依次用0-50°/。低級醇進行梯度洗脫；(4)收集富含沒食子酸及沒食子酸乙酯的洗脫液，濃縮；(5)用水和/或低級醇對富含沒食子酸及沒食子酸乙酯的濃縮液進行溶解，干燥，得牡丹葉有效組分，其中沒食子酸含量為35-70%，沒食子酸乙酯的含量為15-30%。所述牡丹葉有效組分的制備方法中，提取或者梯度洗脫或者溶解時，所用低級醇是指碳數(shù)為C「Cs的直鏈或支鏈低級醇，所述低級醇優(yōu)選為曱醇、乙醇、丙醇和/或正丁醇；水和低級醇是V/V混合，例如在100毫升水中加入一定毫升數(shù)的低級醇；再如梯度洗脫時，在100毫升水中逐漸增加低級醇的毫升數(shù)。步驟(l)提取中，優(yōu)選水和低級醇混合比例為0-95%(例如，95%是按100毫升水中含^f氐級醇95毫升計)；用回流、浸漬、滲漉或水煎方法提取。步驟(2)中大孔樹脂為聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚曱基丙烯酸酯型中的任意一種或幾種為骨架材料的樹脂。步驟(3)所述梯度洗脫是先用濃度為低于5%低級醇洗脫除去雜質(zhì)，再用濃度為X的低級醇洗脫，收集富集沒食子酸和沒食子酸乙酯的洗脫液，濃縮，其中5%《X<50%。步驟(5)中所用低級醇的濃度為0-100%;選用減壓、真空、冷凍或噴霧方法中的任意一種方法對富含沒食子酸和沒食子酸乙酯的溶液進行干燥，得牡丹葉有效組分。上述制備方法中優(yōu)選制備方法提取或者梯度洗脫時，所用低級醇選自曱醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種或它們的混合物；所述大孔樹脂選自NKA-II、DA201或S-8;提取所用溶劑是30-90%乙醇；梯度洗脫是先用0-5°/。乙醇除去雜質(zhì)，再用10%-30°/乙醇洗脫；溶解所用溶劑是50-100%乙醇。較優(yōu)選的制備方法，其中提取所用溶劑是55-80%乙醇；梯度洗脫是先用0-5%乙醇除去雜質(zhì)，再用10%-20%乙醇洗脫；溶解所用溶劑是60-100%乙醇。通過優(yōu)選制備方法得到優(yōu)選牡丹葉有效組分，其中沒食子酸的含量在40-70%，沒食子酸乙酯的含量為15-30%;更優(yōu)選牡丹葉有效組分，其中沒食子酸的含量在50-70%,沒食子酸乙酯的含量為20-30%;最優(yōu)選牡丹葉有效組分，其中沒食子酸的含量在60-70%,沒食子酸乙酯的含量為25-30%。本發(fā)明所用材料為毛萊科(Ra麵cnlaceae)芍藥屬(Paeoniaceae)植物:杜丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的新鮮或干燥葉，優(yōu)選用干燥的牡丹葉。也可選用牡丹的其它部分，包括莖、根、皮、花等。一種防治心腦血管疾病的藥物組合物，是將前述任一種牡丹葉有效組分與藥學(xué)上可接受的載體混合制成的藥用制劑。所述藥學(xué)上可接受載體包括常規(guī)制劑輔料，如淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、異丙醇、土溫-80、甘油、丙二醇、微晶纖維素鈉、糊精、環(huán)糊精、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、硬脂酸鹽和明膠等常規(guī)輔料。也包括對本發(fā)明藥效沒有明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物或植物提取物。所述藥用制劑為口服制劑，包括膠嚢劑、軟膠嚢劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸等；或者為注射劑，包括凍干粉針劑和注射液等；或者為局部給藥制劑，包括霜劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑、皮下植入劑等。制劑的后期制備工藝均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對此不作限定。上述任一種牡丹葉有效組分及其藥物制劑在制備防治心腦血管疾病中的應(yīng)用，特別是在制備防治冠心病及腦缺血性疾病等藥物中的應(yīng)用。藥效實驗結(jié)果表明，牡丹葉有效組分中沒食子酸和沒食子酸乙酯具有協(xié)同作用，其防治心腦血管疾病的效果要好于沒食子酸單獨的作用效果。本發(fā)明人采用了垂體后葉素所致的大鼠急性心肌缺血模型、心臟冠狀動脈結(jié)扎所致的大鼠和Beagle犬急性心肌缺血模型等，以心電圖表現(xiàn)、心肌缺血程度和范圍、心肌缺血面積及心肌酶等作為觀測指標(biāo)，結(jié)果表明牡丹葉有效組分可明顯改善缺血時心電圖T波抬高，明顯減輕心肌缺血程度，降低心肌缺血面積和血清心肌酶含量，提示其具有較好的防治心肌缺血性疾病的作用，且隨牡丹葉有效組分給藥劑量增加，其治療效果也隨之增強。虞型以及沙土鼠四動脈結(jié)扎所致的全腦缺血模型，以神經(jīng)生物學(xué)評分，腦缺血程度及范圍為觀測指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)牡丹葉有效組分給藥后可明顯改善大鼠神經(jīng)生物行為，明顯降低腦缺血程度及范圍，提示其具有顯著的改善腦缺血的作用，且隨牡丹葉有效組分給藥劑量增加，其治療效果也隨之增強。本發(fā)明人經(jīng)過多年的研究，用牡丹葉為原料，經(jīng)過溶劑提取、大孔樹脂吸附、溶劑洗脫、洗脫液濃縮，乙醇溶解，濃縮干燥得牡丹葉有效組分，其特征在于主要包含有沒食子酸和沒食子酸乙酯，其重量百分比為50%~100%，其中沒食子酸含量為35-70%，沒食子酸乙酯含量在15-30%。牡丹葉有效組分是從牡丹葉中分離得到，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠理解，其中可能含有一些源于藥材中的少量其它成分，但這些少量其它成分并不影響本發(fā)明藥物組合物防治心腦血管病的效果；此處少量意味著按重量計不大于49%,較好的是不大于40%，更理想是不大于20%,最優(yōu)選是不大于10%。牡丹葉有效組分中主要成分沒食子酸、沒食子酸乙酯的結(jié)構(gòu)式如下沒食子酸(3,4,5-三羥基苯曱酸)沒食子酸乙酯(3,4，5-三羥基苯曱酸乙酯)本發(fā)明采用大孔樹脂技術(shù)富集牡丹葉有效組分，沒食子酸和沒食子酸乙酯含量較高，易于控制質(zhì)量，可用于制備各種制劑，以達到療效穩(wěn)定的治療效果。本發(fā)明牡丹葉有效組分灌胃給藥小鼠的LDs。為5g/Kg，藥效學(xué)有效劑量為20mg/kg，根據(jù)實驗推算，推薦人臨床日用量為300mg/天。由于采用了中藥現(xiàn)代化技術(shù)中的樹脂技術(shù)，制備工藝簡單，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。具體實施例方式本發(fā)明人通過以下實施例詳細(xì)說明本發(fā)明技術(shù)方案的實施，但不應(yīng)以此限定本發(fā)明的實施范圍。實施例1:牡丹葉有效組分的制備方法lkg粉碎的牡丹葉藥材，裝入回流提取罐，以水回流提取，每次3h，共提取三次，合并提取液，直接吸附于NKA-II樹脂，用0-50%乙醇連續(xù)梯度洗脫，用常規(guī)薄層層析跟蹤檢測洗脫液中沒食子酸和沒食子酸乙酯。先用0-5%乙醇洗脫除雜，收集后面10-50%乙醇洗脫液，濃縮，用60%乙醇加熱回流3h后，得牡丹葉有效組分15g，其中沒食子酸含量為51.6%，沒食子酸乙酯含量為20.9%。取上述牡丹葉有效組分，用高效液相色譜法測定其單體含量，其中色i普條件為高效液相色譜儀J"ASC0PU-1580;色譜柱RP-C18柱(250x4,6mm,5Wi);柱溫27.2°C;流速lml/min;進樣量靈每丈度1.OOOAUFS。1)沒食子酸流動相曱醇-水-磷酸(10:90:0.2);檢測波長273腿；2)沒食子酸乙酯流動相曱醇-水-磷酸(30:70:0.2);檢測波長273nmj實施例2:牡丹葉有效組分的制備方法lkg粉碎的牡丹葉藥材，以95%乙醇浸泡2h，裝入滲漉桶，以95%乙醇滲漉，收集滲漉液30L，濃縮后以水溶解，直接吸附于DA201大孔樹脂，以水除雜，20%乙醇解吸，收集解吸液，濃縮，真空干燥，50。/。乙醇煎煮lh,得牡丹葉有效組分20g，沒食子酸含量可達41.5%，沒食子酸乙酯含量可達28.9%。實施例3:牡丹葉有效組分的制備方法lkg賴、淬的牡丹葉藥材，以55%乙醇浸漬2化，收集浸漬液30L,濃縮后以5%乙醇溶解，直接吸附于S-8大孔樹脂，5%乙醇除雜，25%乙醇除雜收集解吸液，濃縮，真空干燥，40。/。乙醇煎煮lh,得牡丹葉有效組分18g，沒食子酸含量可達49.6%，沒食子酸乙酯含量可達25.3%。實施例4:牡丹葉有效組分的優(yōu)選制備方法lkg賴、晬的牡丹葉藥材，以30。/。乙醇回流3h,共4是取3次，收集提取液，濃縮后以7%乙醇溶解，直接吸附于S-8大孔樹脂，3%乙醇除雜，30%乙醇解吸收集解吸液，濃縮，真空干燥，90%乙醇浸漬12h，得牡丹葉有效組分16g,沒食子酸含量可達38.5%,沒食子酸乙酯含量可達15.6%。實施例5:牡丹葉有效組分的制備方法lkg粉碎的牡丹葉藥材，以80°/。乙醇浸泡2h,裝入滲漉桶，以80%乙醇滲漉，收集滲漉液30L，濃縮后以水溶解直接吸附于NKA-II大孔樹脂，5%乙醇除雜，10%乙醇除雜收集解吸液，濃縮，真空千燥，40。/。乙醇加熱回流4h,得牡丹葉有效組分18g，沒食子酸含量可達65.8%，沒食子酸乙酯含量可達26.5°/。。.實施例6:本發(fā)明牡丹葉有效組分的分離鑒定取實施例5的牡丹葉有效組分，通過珪膠柱層析粗分，氯仿曱醇(100:1-1:100)梯度洗脫得到過個流份，再分別對不同流份利用反相柱層析，凝膠柱層析，曱醇水系統(tǒng)梯度洗脫，得到?jīng)]食子酸和沒食子酸乙酯。并且通過核磁共振技術(shù)，解析化合物結(jié)構(gòu)，經(jīng)與文獻對照確定化合物分別為沒食子酸、沒食子酸乙酯。沒食子酸的結(jié)構(gòu)確定該化合物化合物薄層斑點FeC13顯陽性，說明化合物結(jié)構(gòu)中有酚羥基。氫譜中56.94(2H，s)為芳香質(zhì)子信號。而碳i普中S167.5為l個酯羰基或羧基碳信號，S145.4、137.9、120.5、108.7為1組苯環(huán)碳信號，其中有2個重疊峰。因此推測其結(jié)構(gòu)為沒食子酸。與文獻[2]數(shù)據(jù)對照，因此化合物確定為沒食子酸。沒食子酸乙酯的結(jié)構(gòu)確定該化合物FeC13顯陽性，說明化合物結(jié)構(gòu)中有酚羥基。ESI-MS中分子離子峰為197[M-l]-。氬譜中S7.13(2H,s)處的信號為芳香質(zhì)子信號。由信號S4.28(2H,p，J=6,9Hz，CH2)，1.34(3H,t，J=6.9Hz，CH3)可以推斷分子中含有OCH2CH3的結(jié)構(gòu)片斷。而碳譜中S165.9為1個酯羰基或羧基碳信號，5145.5、138.2、119.7、108.5為1組苯環(huán)碳信號，其中有2個重疊峰。S60.1、14.4為乙氧基的2個碳信號。推測其結(jié)構(gòu)為沒食子酸乙酯。與文獻[l]數(shù)據(jù)對照，數(shù)據(jù)一致。因此化合物確定為沒食子酸乙酯。參考文獻1.張凱龍，陳凱，裴月湖等.訶子化學(xué)成分研究.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2001，18(6):417-418.2.尹凱，高慧媛，李行諾等.皺皮木瓜的化學(xué)成分研究.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2006,23(12):760-763.實施例7:牡丹葉有效組分的膠嚢劑制備取實施例4方法制備的牡丹葉有效組分100g,6(TC干燥，研磨粉碎，過80目篩，加過80目篩的微晶纖維素100g,混合均勻，用70%乙醇適量制成軟材，過30目篩制顆粒，烘干，使水分小于5%，過40目篩整粒，分裝于3號膠嚢中。每粒膠嚢含牡丹葉有效組分0.lg，用鋁塑復(fù)合包裝，即得?？诜o藥，每曰3次，每次1粒。實施例8:牡丹葉有效組分的片劑制備實施例3方法制備的牡丹葉有效組分60g，加入^L晶纖維素60g,以2%的羥丙曱纖維素作為粘合劑進行制軟材，制粒干燥整粒，加入4%的崩解劑羧曱基淀粉鈉和潤滑劑0.5%硬脂酸鎂與細(xì)粉混合均勻，干粒加入硬脂酸鎂，整粒，混勻，壓片，即得。每片含牡丹葉有效組分O.lg?？诜o藥，每日3次，每次1片。實施例9:牡丹葉有效組分凍干粉針劑的制備取實施例5方法制備的牡丹葉有效組分100g,加入2%的甘露醇為支架劑，加適量注射用水，攪拌溶解后，超濾，得到無熱源的澄清液，加注射用水至2000ml，分裝為1000支，按凍干粉針制備工藝凍干，制成凍干粉針劑。每支凍干粉針劑含量有牡丹葉有效組分0.10g，每天注射給藥1次，每次1支。為了便于理解牡丹葉有效組分的治療效果，本發(fā)明人采用實施例5所述的方法制備得到的牡丹葉有效組分進行了實施例7和實施例8所述的藥效學(xué)實驗。實施例7:牡丹葉有效組分對垂體后葉素所致大鼠實驗性心肌缺血的影響采用舌下靜脈注射垂體后葉素建立Wistar大鼠心肌缺血模型。將大鼠隨機分為空白對照組(不給予受試藥物，僅給予生理鹽水)，模型組，鹽酸地爾硫卓(L-型鈣通道拮抗藥)陽性對照組(6mg/kg),牡丹葉有效組分小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)劑量組。各劑量組大鼠均按10ml/kg連續(xù)灌胃給藥7天，空白對照組和模型組給予相同體積的生理鹽水，于第7天灌胃給藥后lh，腹腔注射烏來糖(1000mg/kg)麻醉，并測心電圖lmin,作為造才莫前值，然后按2，01U/kg經(jīng)舌下靜脈注射垂體后葉素造成急性心肌缺血模型，分別記錄各劑量組造模后30s、lmin、5min、10min、15min的心電圖，作為造模后值。實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(；±s)表示，模型組與空白對照組比較，其它劑量組均與模型組比較，采用F檢驗和t才企驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果見表1和表2。表i牡丹葉有效組分灌胃給藥對實驗性心肌缺血大鼠n導(dǎo)聯(lián)心電圖t波變化絕對值的影響(x±s，單位mV,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注與空白對照組比較，aP<0.05"P<0.01;與才莫型組比較，'P<0.05"P<0.01由表1可見，舌下靜脈注射垂體后葉素后，模型組動物均由于冠狀動脈痙攣出現(xiàn)心肌急性缺血，表現(xiàn)為心電圖T波抬高，變化絕對值增加。與模型組比較，牡丹葉有效組分小、中、大三個劑量組均具有降低T波變化絕對值的作用，且隨著灌胃給藥劑量的增加，藥效隨之增強。表2牡丹葉有效組分對冠脈結(jié)扎致大鼠心月睹死面積占全心面積百分比的影響(x±s，n=16)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注與假手術(shù)組比較，。"P<0.001;與才莫型組比4交，"P<0.01由上表2可見，冠脈結(jié)扎后，模型組心肌梗死嚴(yán)重，心肌梗死面積顯著增大。與模型組比較，鹽酸地爾硫卓組及牡丹葉有效組分組均能顯著縮小心肌梗死面積，牡丹葉有效組分大劑量組作用優(yōu)于陽性藥。本試驗結(jié)果表明牡丹葉有效組分在20mg/kg即具有良好的抗心肌缺血活性，且其活性隨著給藥劑量的增加而增強。綜合以上結(jié)果，牡丹葉有效組分對冠脈結(jié)扎所致大鼠實驗性心肌缺血有顯著的治療作用，通過改善缺血，減少心肌細(xì)胞損傷和減少心肌梗死范圍等作用對冠脈結(jié)扎所致大鼠實驗性心肌缺血和梗死有治療作用。實施例8:牡丹葉有效組分對大腦中動脈結(jié)扎所致大鼠腦梗死的影響。將Wistar大鼠96只，隨機分為6組，每組16只分別為假手術(shù)組、模型組、陽性藥組(尼莫地平30mg/kg)、牡丹葉有效組分小劑量組(20mg/kg)、中劑量組(40mg/kg)、大劑量組(80mg/kg)。采用結(jié)扎大鼠大腦中動脈復(fù)制局部腦梗死的動物模型，觀察其對局部腦缺血及梗死的影響，考察其對腦梗死面積的影響。結(jié)果見表3:表3牡丹葉有效組分對大腦中動脈結(jié)扎所致腦梗死面積占全腦面積的百分比的影響(x±s，n=16)組別劑量總面積梗死面積梗死區(qū)占全腦面積比例(mg/kg)(鵬"(咖2)(%)假手術(shù)組--1066.35±49.530.000.00±0.00模型組--1069.66±56.00120.24±36.99尼莫地平組301024.54±85.0848.76±18.80"4.5±3.6"牡丹葉有效組201053.34±65.9880.08±15.54"6.5±3.2"分401045.87±119.7856.64±19.23"5.3±2.9"801105.86±108.0248.21±16.67"4.2±3.1"注注與假手術(shù)組比較，AAaP<0.001;與沖莫型《且比4交，**P<0.01由上表3可見，大腦中動脈結(jié)扎后，模型組損傷嚴(yán)重，腦梗死面積顯著增大。與模型組比較，尼莫地平組及藥物各組均能明顯減輕腦動脈缺血導(dǎo)致的局部腦梗死，顯著縮小腦梗死面積，大劑量效果最優(yōu)，作用優(yōu)于陽性藥。同時，本發(fā)明人分別采用實施例1-4中制備得到的牡丹葉有效組分進行"牡丹葉有效組分對垂體后葉素所致大鼠實驗性心肌缺血的影響"和"牡丹葉有效組分對大腦中動脈結(jié)扎所致大鼠腦梗死的影響"。結(jié)果表明，不同含量的牡丹葉有效組分同樣具有抗心肌缺血作用和改善腦梗死情況，且隨著給藥劑量增加，作用效果也明顯增加。權(quán)利要求1.一種牡丹葉有效組分，其特征在于主要包含沒食子酸和沒食子酸乙酯，其中沒食子酸的含量為35-70％，沒食子酸乙酯的含量為15-30％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牡丹葉有效組分，其特征在于沒食子酸的含量在40-70%,沒食子酸乙酯的含量為15-30%。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牡丹葉有效組分，其特征在于沒食子酸的含量在50-70%，沒食子酸乙酯的含量為20-30%。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的牡丹葉有效組分，其特征在于沒食子酸的含量在60-70%,沒食子酸乙酯的含量為25-30%。5.—種牡丹葉有效組分的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)取牡丹葉，用水和/或低級醇提取，得提取液；(2)將步驟(1)提取液直接上大孔吸附樹脂柱，或者，將步驟(l)提取液濃縮后上大孔吸附樹脂柱；(3)依次用0-50%低級醇進行梯度洗脫；(4)收集富含沒食子酸及沒食子酸乙酯的洗脫液，濃縮；(5)用水和/或低級醇對富含沒食子酸及沒食子酸乙酯的濃縮液進行溶解，干燥，得牡丹葉有效組分，其中沒食子酸的含量為35-70%,沒食子酸乙酯的含量為15-30%。6.權(quán)利要求5所述的制備方法，其中，提取或者梯度洗脫或者溶解時，所用低級醇是指碳數(shù)為d-Cs的直鏈或支鏈低級醇；水和低級醇是V/V混合；步驟(l)提取中，醇濃度為0-95%;用回流、浸漬、滲漉或水煎方法提??；步驟(2)中大孔樹脂為聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚曱基丙烯酸酯型中的任意一種或幾種為骨架材料的樹脂；濃度為X的低級醇洗脫，收集富集沒食子酸和沒食子酸乙酯的洗脫液，濃縮，其中5%《X《50%;步驟(5)中所用低級醇的濃度為0-100%;選用減壓、真空、冷凍或噴霧方法中的任意一種方法進行干燥。7.權(quán)利要求6所述的制備方法，其中，提取或者梯度洗脫或者溶解時，所用低級醇選自曱醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種或它們的混合物；所述大孔樹脂選自NKA-II、DA201、S-8型樹脂。8.權(quán)利要求7制備方法，其中，提取所用溶劑是30-90%乙醇；梯度洗脫是先用0-5%乙醇除去雜質(zhì)，再用10-30°/。乙醇洗脫；溶解所用溶劑是50-100%乙醇。9.權(quán)利要求8制備方法，其中，提取所用溶劑是55-80°/。乙醇；梯度洗脫是先用0-5%乙醇除去雜質(zhì)，再用10°/廣20°/。乙醇洗脫；溶解所用溶劑是60-100:%乙醇。10.—種防治心腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于是將權(quán)利要求1至9任一項所述牡丹葉有效組分與藥學(xué)上可接受載體混合制成的藥用制劑。11.權(quán)利要求IO的藥物組合物，所述藥學(xué)上可接受載體包括常規(guī)制劑輔料，也包括對本發(fā)明藥效沒有明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物或植物提取物。12.權(quán)利要求ll的藥物組合物，其特征在于所述藥用制劑為口服制劑，包括膠嚢劑、軟膠嚢劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸；或者為注射劑，包括凍干粉針劑和注射液；或者為局部給藥制劑，包括霜劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑、皮下植入劑。13.權(quán)利要求1至12任一項牡丹葉有效組分在制備防治心腦血管病藥物中的應(yīng)用。14.權(quán)利要求13的應(yīng)用，所述心腦血管疾病包括冠心病。全文摘要本發(fā)明涉及一種從牡丹葉中分離得到牡丹葉有效組分，主要包含有沒食子酸和沒食子酸乙酯，其中沒食子酸的含量為35-70％，沒食子酸乙酯的含量為15-30％。本發(fā)明還提供了采用大孔樹脂純化的方法制備得到牡丹葉有效組分，并提供了該有效組分的藥物制劑。動物實驗結(jié)果表明，該有效組分能有效防治心腦血管疾病，尤其具有防治冠心病及腦缺血性疾病的作用。文檔編號A61K36/185GK101574410SQ20081009412公開日2009年11月11日申請日期2008年5月5日優(yōu)先權(quán)日2008年5月5日發(fā)明者周亞偉申請人:周亞偉