專利名稱：：薯蕷皂苷的提取方法及其制劑與用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種從中藥盾葉薯蕷的提取薯蕷皂苷的工藝方法，藥物制劑及其制備方法，以及其在制備防治心血管病藥物中的應用，屬于中藥領域。
背景技術：
：盾葉薯蕷(RhizoraaDioscoreaeZingiberensis)為薯蕷科植物盾葉薯蕷(拉丁名DioscoreaZingiberensisC.H.Wright)的根莖，盾葉薯蕷具有活血舒筋、消食利水等作用，且含有豐富的甾體皂苷。薯蕷皂苷是從藥用盾葉薯蕷、植物穿山龍等中提取獲得，具有化學結構明確、口服吸收利用度高等特點。在現(xiàn)有技術中，從盾葉薯蕷中提取薯蕷皂苷的方法有很多，大部分都是采用傳統(tǒng)的水提醇沉的方法，或者如CN02146284.4，采用乙醇回流提取的方法，但是大部分這樣的方法存在雜質過多的問題由于天然植物提取液除了含有提取成分外，還含有淀粉、蛋白質、果膠、樹膠、樹脂、黏液質等，這些成分的存在往往使提取液呈混懸狀態(tài)，并影響提取液的濾過速度，為此要實施除雜，常用的方法有離心法、澄清劑法、醇沉法、大孔樹脂吸附法、離子交換法、微孑L濾膜濾過法及超濾法等等。這嚴重影響了提取成分的煎出和最終產物的純度，為解決這個問題往往需要實施復雜的除雜過程，增加了中間步驟，加重了生產者的負擔，并且影響含有薯蕷皂苷藥劑的質量控制。近年來，國內外一些研究者采用單一酶制劑對薯蕷原料進行酶處理后結合酸水解進行研究，結果能夠使藥材中更多的薯蕷皂苷提取出來，但是酶催化反應的專一性較強，同時藥材中薯蕷皂苷結合的糖的種類和結構比較復雜，并且還被一些果膠，蛋白質和植物纖維等雜質緊密包裹，因此采用單一的酶進行反應的效果不佳，從而限制了薯蕷皂苷收率的提高。另外，如專利CN02146284.2、CN02146284.4和CN200510016775.9公開了利用極性大孔樹脂生產薯蕷皂苷(Dioscin)的方法，但是沒有具體公開其中薯蕷皂苷的含量。這種樹脂存在對薯蕷皂苷的吸附量小、解吸率低及制得的薯蕷皂苷的含量低的缺點。其中大孔吸附樹脂是由苯乙烯、a-甲基丙烯酸甲酯、丙腈等為原料加入一定量致孔劑二乙烯苯聚合而成的球狀顆粒，直徑一般在0.3-1.25nm之間?，F(xiàn)已廣泛應用提取純化天然植物中的活性成分，如皂苷、黃銅等。根據大孔樹脂結構不帶或帶有不同極性的功能基以及樹脂的表面性質，通常將大孔樹脂分為非極性、弱極性和中極性等類型。目前大部分都是利用極性較強的大孔樹脂生產，所以的吸附量小。并且現(xiàn)有技術薯蕷皂苷的包衣片在實際應用中存在的不足是，(1)片芯藥物溶出速度慢，藥物顯效慢；(2)容易吸濕，影響藥物的穩(wěn)定性和貯存期；(3)包衣色澤不穩(wěn)定，容易被氧化而影響了藥物的性狀；(4)包衣分散都不均一，遮蓋度差導致藥物氣味散發(fā)流失，影響了藥物的治療效果。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)有技術存在的缺陷和不足，提供了一種可以從中藥盾葉薯蕷中提取雜質少，性能穩(wěn)定，純度高的薯蕷皂苷的方法。本發(fā)明的另一目的是提供一種薯蕷皂苷制劑的制備方法。本發(fā)明的進一步的目的是提供上述薯蕷皂苷和薯蕷皂苷制劑在在制備防治心血管疾病藥物中的應用。本發(fā)明通過下述技術方案予以實施從盾葉薯蕷中提取薯蕷皂苷的方法，包括以下步驟1)取干燥的盾葉薯蕷粉末，加一定量水，攪拌均勻后加入先用20-6(TC水將所需多功能精練酶DMA溶解，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，升溫至60-1(KTC保溫30min-1.5小時后得到盾葉薯蕷粗液；2)將盾葉薯蕷粗液加6-15倍量水或10%-30%乙醇，加熱回流提取2-4次，每次1-3h，過濾，合并提取液，濃縮至0.25-2.0g生藥/ml;過濾或離心后通過填充有弱極性大孔樹脂的層析柱，提取液按薯蕷皂苷含量與干樹脂的比例為1:5-10，上柱流速l-4BV/h，樹脂徑高比為1:3-1:9;用水洗滌樹脂3-8BV，洗脫流速為2-4BV，水洗脫液棄去；用含30-95%含水乙醇洗脫，流速為2-4BV，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.1-1.25，減壓或噴霧干燥，得薯蕷皂苷。其中離心的轉速為4000-16000轉/分鐘。弱極性大孔樹脂優(yōu)選為聚苯乙烯型弱極性大孔樹脂。本發(fā)明所述的薯蕷皂苷提取物可以是制備任何一種藥劑學上所說的制劑。所述的薯蕷皂苷提取物制成糖衣片劑、糖漿、口服液、滴劑或膠囊劑。根據本發(fā)明的一個方面，薯蕷皂苷糖衣片的制備方法為(1)取薯蕷皂苷100-200份，粉碎，加入硫酸鈣1-20份、羧甲淀粉鈉20-60份，混合均勻，用95%乙醇濕潤，繼續(xù)轉動15秒-30分鐘，制備成濕顆粒；(2)將濕顆粒經10-40目過篩；(3)過篩后的顆粒在20-80。C干燥；(4)干燥后的顆粒經壓片機壓制成型，包糖衣，即得。更優(yōu)選的所述的薯蕷皂苷糖衣片的制備方法為(1)取薯蕷皂苷160份，粉碎，加入硫酸鈣10份、羧甲淀粉鈉40份，混合均勻，用95%乙醇濕潤，繼續(xù)轉動10分鐘，制備成濕顆粒；(2)將濕顆粒經14目不銹鋼篩制粒，(3)過篩后的顆粒在50'C干燥，(4)干燥后的顆粒經壓片機壓制成型，包糖衣，即得。根據本發(fā)明的另一個方面，薯蕷皂苷制劑在制備心血管病藥物中的應用。心血管病包括冠心病、心肌梗塞、心絞、腦血栓等疾病。其中，弱極性大孔樹脂為含酯基的吸附樹脂，其表面兼有疏水和親水兩部分，既可由極性溶劑中吸附非極性物質，又可由非極性溶液中吸附極性物質，因而應用范圍更為廣泛。本發(fā)明的積極進步效果在于酶法除雜是分離精制的新方法，此方法是根據天然物提取液中雜質的種類、性質，有針對性地采用相應的酶，將這些雜質分解或除去，以改善液體產品的澄清度，提高產品的穩(wěn)定性。由于酶反應具有高度的專一性，決定了酶解方法除雜的高效性。多功能精練酶DMA是由多種對纖維素等雜質有專一分解作用的酶和一些化學助劑組成，具有高效的生物催化特性，包括淀粉酶、果膠酶、脂肪酶、蛋白酶、纖維素酶復合組成，這些都是屬于水解酶，在它們的共同作用下，能夠有效除去盾葉薯蕷粉末中的各種雜質，初步提高。本發(fā)明在用乙醇提取前即采用的多功能精練酶DMA進行酶解，將薯蕷等根莖類植物中的植物纖維、果膠、淀粉等非藥物成分除去，大大提高薯蕷粗液的純度，然后利用弱極性大孔樹脂對薯蕷皂苷的吸附量大的特點，被解吸完全，所得總皂苷的含量高，提取方法損失小、工藝簡單、不使用毒性有機溶劑，比傳統(tǒng)醇提法提出的薯蕷皂苷純度高，含量大，一次性投資成本低、易于工業(yè)化大生產。本發(fā)明的提取方法本發(fā)明的產品粒徑在80-500nm之間，使現(xiàn)有薯蕷皂苷對光和熱具有更佳的穩(wěn)定性。而且本發(fā)明的提取物薯蕷皂苷糖衣片優(yōu)點為(l)片芯采用多種方法的提取工藝，大大提高了片芯藥物的有效成分，臨床應用過程中大大提高了藥物的溶出度，使藥物顯效更快。(2)由于采用新的薄膜衣的成膜工藝，成膜效果好，可有效防止潮濕空氣中水分的滲透，增加了藥物的穩(wěn)定性。(3)采用新的薄膜材料配方，增強了抗氧化褪色能力，保持了片劑外觀色彩鮮艷，穩(wěn)定了藥物形狀。(4)由于成膜材料的優(yōu)化，成膜材料易于霧化，分散均一，成膜快，遮蓋好，可有效掩蓋中藥的不良氣味，利于服用。(5)由于片芯有效成分高，衣層薄柔韌牢固光滑，片重大大減少，更加有利于運輸和貯存。圖1為試驗組和對照組對冠心病兩組血脂分型療效比較柱狀圖；圖2為試驗組和對照組對冠心病兩組各項中醫(yī)主癥改善情況比較柱狀圖；圖3為試驗組和對照組對冠心病兩組血脂水平改善情況比較柱狀圖；圖4為試驗組和對照組對冠心病兩組各實驗室安全性指標檢測結果柱狀圖；圖5為試驗組和對照組對治療心絞痛兩組單項中醫(yī)癥狀療效比較柱狀圖；圖6為試驗組和對照組對治療心絞痛兩組血液流變學指標變化情況比較柱狀圖；圖7為試驗組和對照組對治療心絞痛兩組各實驗室安全性指標檢測結果柱狀圖。具體實施方式本發(fā)明針對現(xiàn)有工藝缺陷進行了改進，首先在盾葉薯蕷原藥材粉末中加入多功能精練酶DMA酶解去除大部分粗雜質，再通過弱極性大孔樹脂來制備薯蕷皂苷提取物。其中薯蕷皂苷含量60%_90°/。重量，通過與現(xiàn)有兩種樹脂的工藝參數(shù)進行比較，結果顯示弱極性大孔樹脂對薯蕷皂苷吸附量明顯優(yōu)于非極性大孔樹脂D101及HPD100，解吸率及獲得的薯蕷皂苷吸附量也明顯高于利用非極性大孔樹脂D101及HPD100制得的產品。本發(fā)明還同時提供了所制備的薯蕷皂苷提取物治療冠心病以及心血管病的藥效學數(shù)據。所制備的薯蕷皂苷提取物，薯蕷皂苷含量不低于60%重量，優(yōu)選60%-90%重量，更優(yōu)選60%-70%重量。弱極性大孔樹脂AB-8與非極性D101及HPD100型大孔樹脂對薯蕷皂苷吸附量、解吸率及所得皂苷含量的比較樹脂各5克，用水洗至無醇味，減壓抽干，精密稱定，置于250ml具磨塞口的三角瓶中，各加入前期制備的樣品液150ml，25t:恒溫振蕩24h,分別取吸附前后的藥液，測定皂苷含量，計算樹脂比吸附量(mg/g干樹脂)。比吸附量mg.g—1干樹脂)=(吸附前皂苷量-吸附后皂苷量)/樹脂干重。分別將上述飽和吸附的樹脂濾出，用30ml水洗，洗干表面水分后，加入7(m乙醇50ml解吸(25。C恒溫振蕩24h)，取解吸后溶液測定，計算乙醇對各樹脂的解吸率。解吸率=(解吸液中皂苷量/飽和吸附量)X100%。將解吸液濃縮、減壓干燥得皂苷。計算皂苷的含量。結果如表l。表l不同類型樹脂對薯蕷皂苷的吸附量、解吸率及皂苷含量的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結果顯示，利用弱極性大孔樹脂AB-8制備皂苷，不僅吸附量大，而且解吸率高，所得產品含量高。實施例1多功能精練酶DMA酶解和弱極性大孔樹脂提取法(簡稱復合提取法)與酶解法制備薯蕷皂苷的比較實驗實驗l:取干燥的盾葉薯蕷粉末25g，加定量水于三口燒瓶中，攪拌均勻后在溫度5(TC下加入0.1%的纖維素酶和果膠酶復合酶制劑處理12h，然后加入一定量的濃貼04配成2mol/L的水解液于IO(TC進行水解4h,濾過，濾渣用10%NaOH溶液洗滌至中性，干燥，研磨得到粉末提取物。提取物用索氏提取器回流提取8h后，用旋轉蒸發(fā)器濃縮提取液并將產物結晶，最后在80-10(TC真空干燥箱中干燥得到薯蕷皂苷，對所得產品進行收率和熔點的測定實驗2:取干燥的盾葉薯蕷粉末25g，加定量水于三口燒瓶中，攪拌均勻后在溫度5(TC下加入0.1%的多功能精練酶DMA處理12h，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，將獲得提取物加6倍量水，加熱回流提取2次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮至0.25g生藥/ml;過濾后通過AB-8型大孔樹脂，提取液按薯蕷皂苷含量計與干樹脂的比例為1:5，上柱流速lBV/h，樹脂徑高為l:3;用水洗滌樹脂3BV，洗脫流速為2BV/h，水洗脫液棄去；用含30%含水乙醇洗脫8BV，流速為2BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為l.l，減壓干燥，得薯蕷皂苷.表2兩種提取薯蕷皂苷的方法比較<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表2可以看出，兩種提取方法中，復合提取法所得產品的收率高，能夠將薯蕷中近99%的薯蕷皂苷提取出來，并且該方法所得產品的熔點較高，熔距較短，產品純度高，符合優(yōu)極品的標準。實施例2取干燥的盾葉薯蕷粉末2kg,，加一定量水，攪拌均勻后，加入用3(TC水溶解的多功能精練酶DMA30g/L，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的8g/L雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，升溫至7(TC保溫50min后得到提取物；將獲得提取物加6倍量水，加熱回流提取2次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮至0.25g生藥/ml;過濾后通過AB-8型大孔樹脂，提取液按薯蕷皂苷含量計與干樹脂的比例為1:5，上柱流速lBV/h，樹脂徑高為1:3;用水洗滌樹脂犯V，洗脫流速為2BV/h，水洗脫液棄去；用含30y。含水乙醇洗脫8BV，流速為2BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.1，減壓干燥，得薯蕷皂苷浸膏。測得薯蕷皂苷含量為65%(香草醛-冰醋酸，高氯酸顯色；UV法；)將浸膏在4(TC下干燥，將干燥后的干浸膏粉碎裝入明膠硬膠囊殼，可得藥物膠囊。實施例3取干燥的盾葉薯蕷粉末lkg,，加一定量水，攪拌均勻后，加入用6(TC水溶解的多功能精練酶DMA15g/L，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的10g/L雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，升溫至80"C保溫60min后得到提取物；將獲得提取物加15倍量30%乙醇，加熱回流提取4次，每次3h，過濾，合并提取液，濃縮至2.0g生藥/ml;過濾后通過AB-8型大孔樹脂，提取液按薯蕷皂苷含量計與干樹脂的比例為1:10，上柱流速4BV/h，樹脂徑高為l:9;用水洗滌樹脂8BV，洗脫流速為4BV/h，水洗脫液棄去；用含95%含水乙醇洗脫，流速為4BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.25，減壓干燥，得薯蕷皂苷浸膏。測得薯蕷皂苷含量為77%(香草醛-冰醋酸，高氯酸顯色;UV法;)將浸膏在5(TC下干燥，將干燥后的干浸膏粉碎成細粉；加入乙醇作為黏合劑，加入淀粉作為填充劑，壓制成顆粒劑。實施例4取干燥的盾葉薯蕷粉末5kg，，加一定量水，攪拌均勻后，加入用2(TC水溶解的多功能精練酶DMA10g/L，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的5g/L雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，升溫至6(TC保溫30min后得到提取物；將獲得提取物加8倍量水，加熱回流提取2次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮至l.Og生藥/ml;離心(4000轉/分鐘)后通過AB-8型大孔樹脂，藥液按薯蕷皂苷含量計與干樹脂的比例為1:5，上柱流速2BV/h，樹脂徑高為l:5;用水洗滌樹脂3BV，洗脫流速為4BV/h，水洗脫液棄去；用含70%含水乙醇洗脫3BV，流速為2BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.1(5(TC熱測)，減壓干燥，得薯蕷皂苷。測得薯蕷皂苷含量為72%(香草醛-冰醋酸，高氯酸顯色；UV法；)實施例5取干燥的盾葉薯蕷粉末5kg,，加一定量水，攪拌均勻后，加入用4(TC水溶解的多功能精練酶DMA18g/L，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的6g/L雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，升溫至10(TC保溫1.5h后得到提取物；將獲得提取物加10倍量10%乙醇，加熱回流提取2次，每次1.5h，過濾，合并提取液，濃縮至0.5g生藥/ml;過濾后通過D201型大孔樹脂，藥液按薯蕷皂苷含量計與干樹脂的比例為1:9，上柱流速3BV/h，樹脂徑高為1:7;用水洗滌樹脂5BV，洗脫流速為4BV/h，水洗脫液棄去；用含30%含水乙醇洗脫IOBV，流速為4BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.25(50匸熱測)，減壓干燥，得薯蕷皂苷浸膏。測得薯蕷皂苷含量為66%(香草醛-冰醋酸，高氯酸顯色；UV法；)將浸膏在5(TC下干燥，將干燥后的干浸膏粉碎成細粉；加入輔料制成顆粒，并干燥，噴入潤濕輔料，壓制成片劑。實施例6取干燥的盾葉薯蕷粉末5kg,，加一定量水，攪拌均勻后，加入用55'C水溶解的多功能精練酶DMA18g/L，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的6g/L雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，升溫至75'C保溫1.2h后得到提取物；將獲得提取物加15倍量水，加熱回流提取2次，每次lh,過濾，合并提取液，濃縮至0.25g生藥/ml;離心(8000轉/分鐘)后通過HPD450型大孔樹脂，藥液按薯蕷皂苷含量計與干樹脂的比例為1:6，上柱流速4BV/h，樹脂徑高為1:9;用水洗滌樹脂2BV，洗脫流速為3BV/h，水洗脫液棄去；用含50%含水乙醇洗脫5BV，流速為3BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.2(5(TC熱測)，減壓干燥，得薯蕷皂苷。測得薯蕷皂苷含量為70%(香草醛-冰醋酸，高氯酸顯色；UV法；)實施例7取干燥的盾葉薯蕷粉末5kg,，加一定量水，攪拌均勻后，加入用55'C水溶解的多功能精練酶DMA18g/L，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的6g/L雙氧水和洗漆劑，攪拌均勻，升溫至75'C保溫1.2h后得到提取物；將獲得提取物加5倍量水浸泡后煎煮2小時，濾過，濾渣再加入水3倍量煎煮2次，每次1小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮(7080°C，-0.08MPa)至相對密度1.16(5060°C)的清膏；清膏加3倍量80%乙醇回流提取2次，每次l小時，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮(607(TC，-0.08MPa)至相對密度l.16(506(TC)的清膏；清膏加10倍量95°/。乙醇，靜置24小時，濾過，上清液回收乙醇，沉淀物減壓干燥(7080°C，-0.08MPa)，粉碎、檢驗、即得。實施例8糖衣片劑的制備方法，包括以下步驟(1)取實施例6中薯蕷皂苷160g，粉碎，加入硫酸鈣10g、羧甲淀粉鈉20g，混合均勻，用95%乙醇濕潤，14目不銹鋼篩制粒，(2)將濕顆粒經14目過篩；(3)過篩后的顆粒在5(TC干燥；(4)干燥后的顆粒外加硬脂酸鎂3g、滑石粉7g，混和均勻，壓制成片，包糖衣，即得。實施例9糖衣片劑的制備方法，包括以下步驟-(1)取取實施例6中薯蕷皂苷100g，粉碎，加入硫酸鈣2g、羧甲淀粉鈉40g，混合均勻，用95%乙醇濕潤，14目不銹鋼篩制粒，(2)將濕顆粒經IO目過篩；(3)過篩后的顆粒在2(TC干燥；(4)干燥后的顆粒外加硬脂酸鎂3g、滑石粉7g，混和均勻，壓制成片，包糖衣，即得。實施例10糖衣片劑的制備方法，包括以下步驟(1)取取實施例6中薯蕷皂苷200g，粉碎，加入硫酸鈣20g、羧甲淀粉鈉60g，混合均勻，用95%乙醇濕潤，14目不銹鋼篩制粒，(2)將濕顆粒經20目過篩；(3)過篩后的顆粒在80'C干燥；(4)干燥后的顆粒外加硬脂酸鎂3g、滑石粉7g，混和均勻，壓制成片，包糖衣，即得。效果實施例l薯蕷皂苷糖衣片對冠心病薯蕷皂苷糖衣治療冠心病效果較好，由于用于治療，本發(fā)明深入研究薯蕷皂苷療效。1、受試者的選擇和退出(一)診斷標準1.西醫(yī)診斷標準按照1997年中華心血管病雜志編輯委員會血脂異常防治對策專題組《血脂異常防治建議》標準制定。1.1血脂檢查在正常飲食情況下，檢測禁食1214小時后的血脂水平，在判斷是否存在高脂血癥時必須具有12周內至少2次血標本檢測記錄。1.2意義判斷血清TC5.20mraol/L(200mg/dl)以下合適范圍5.235.69mmol/L(201219mg/dl)邊緣升高5.72mmol/L(220mg/dl)以上升高血清LDL—C3.12畫ol/L(120mg/dl)以下合適范圍3.15~3.61mmol/L(121139mg/dl)邊緣升高3.64mraol/L(140mg/dl)以上升高血清HDL—C1.04mmol/L(40mg/dl)以下合適范圍0.91mmol/L(35mg/dl)以下減低血清TGL70mmol/L(150mg/dl)以下合適范圍1.70mmol/L(150mg/dl)以上升高1.3高脂血癥的分類A.臨床分類①高膽固醇血癥血清TC水平增高。②混合型高脂血癥血清TC與TG水平均增高。③高甘油三酯血癥血清TG水平增高。④低高密度脂蛋白血癥血清HDL一C水平減低。B.病因分類①原發(fā)性高脂血癥。②繼發(fā)性高脂血癥常見的病因為糖尿病、甲狀腺功能低下、腎病綜合征、通風、急性或慢性肝膽疾病等。2、試驗方法(一)試驗設計本試驗方案采用隨機、雙盲、陽性對照、多中心臨床試驗設計方法。整個過程由山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院、山東省濟南市中醫(yī)醫(yī)院、山東省濟南市第三人民醫(yī)院3所醫(yī)院協(xié)同完成。(二)試驗藥品的名稱和來源盾葉冠心寧片，江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司提供，批號20040908。安慰片劑，江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司提供，批號20040901。脂必妥片，成都地奧九泓制藥廠提供，批號041002。所有試驗用藥均檢驗合格。(三)服藥方法試驗組盾葉冠心寧片，2片/次，3次/日，溫開水送服。對照組早晚，脂必妥片，2片/次+午，安慰劑片，2片/次。溫開水送服。(四)合并用藥規(guī)定1.試驗期間，不得使用及治療本病的中西藥物和治療方法。2.合并其他疾病必須繼續(xù)服用的其他藥物和治療方法，必須在合并用藥表中詳細記錄。(五)療程8周一個療程。3、實驗結果一、療效分析(一)血脂總療效兩組血脂總療效比較見表3:表3兩組血脂總療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>兩組血脂總療效比較，差異無顯著性意義，而且試驗組比對照組總有效率更高。(二)血脂分型療效兩組血脂分型療效比較見表4:表4兩組血脂分型療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>兩組血脂分型療效比較，差異均無顯著性意義，如圖1所示，TC增高類型中，試驗組59例數(shù)的臨床控制、顯效、有效和總有效率的數(shù)值比對照組15例數(shù)試驗組更高，療效更好，同理TG增高和混合型中，試驗組60，試驗組59相比對照組21和對照組24效果更好。(三)中醫(yī)證候療效兩組中醫(yī)證候療效比較見表5:表5兩組中醫(yī)證候療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>兩組中醫(yī)證候療效比較，差異無顯著性意義，而且試驗組比對照組總有效率更高。(四)各項中醫(yī)主癥改善情況兩組各項中醫(yī)主癥改善情況比較見表6:表6兩組各項中醫(yī)主癥改善情況比較療前療后組內比較組間比較<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>兩組各中醫(yī)主癥的改善情況比較:各主要癥狀治療前后組內比較差異均有非常顯著性意義(P<0.01);療后組間比較除走竄疼痛兩組差異具有顯著性意義外(P<0.05)，胸脅脹悶和心前區(qū)剌痛組間比較差異均無顯著性意義(P>0.05)。如圖2所示，胸脅脹悶類型中，療效后試驗組的變化差異大于對照組，同樣從圖中看出走竄疼痛和心前區(qū)刺痛的試驗組變化差異均大于對照組，這也表明試驗組對它們更加有效。(五)中醫(yī)癥狀平均積分改善情況兩組中醫(yī)癥狀平均積分改善情況比較見表7:表7兩組中醫(yī)癥狀平均積分改善情況比較(J±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>治療前后組內比較兩組治療前后自身比較差異均有非常顯著性意義。治療后組間比較兩組治療后組間比較差異無顯著性意義。(六)血脂水平改善情況兩組血脂水平改善情況比較見表8:表8兩組血脂水平改善情況比較(J±SD,mmol/L)組內比較<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>組間比較tP1.862>0.05TGHDLLDLVLDL對照組606.67±0.955.46±1.091.21±1.058.926<0.01試驗組1783.35±0.952.01±0.911.34±0.6210.406<0.01對照組603.51±1.182.30±0.971.21±1.088.679<0.01試驗組1781.33±0.321.38±0.340.05±0.102.021>0.05對照組601.29±0.301.45±0.370.16±0.245.164<0.01試驗組1783.30±1.352.66±0.990.64±0.244.362<0.01對照組603.19±1.312.77±0.970.42土1.063.069<0.05試驗組1781.22±0.650.82±0.720.40±0.203.335<0.05對照組601.31±0.750.95±0.600.36±0.703.984<0.053.014<0.052.035>0.051.567〉0.050.881〉0.05治療前后組內比較試驗組HDL自身比較差異無顯著性意義，其余指標自身比較差異均有顯著或非常顯著性意義。治療后組間比較TG療后組間比較差異具有顯著性意義，其余指標組間比較差異均無顯著性意義。如圖3所示，從治療療效前后差值進行比較，TC、TG、HDL、LDL和VLDL的對照組數(shù)值均大于對照組，而且變化差異也小，所以療效更好。(七)載脂蛋白水平改善情況兩組載脂蛋白水平改善情況比較見表9:表9兩組載脂蛋白水平改善情況比較(X土SD，mmol/L)項目組別例數(shù)療前療后差值組內比較tP組間比較tPApo-A試驗組1781.25±0.201.15±0.220.1±0.133.078>0.052.594<0.05對照組601.26±0.211.33±0.180.07±0.143.873<0.01Apo-B試驗組1781.10±0.260.86±0.210.24±0.276.918<0.010.891〉0.05對照組601.08±0.290.94±0.260.14土0.323.389<0.05治療前后組內比較試驗組載脂蛋白A(Apo-A)自身比較差異無顯著性意義，其余指標自身比較差異均有非常顯著性意義。治療后組間比較載脂蛋白A(Apo-A)療后組間比較差異具有顯著性意義；載脂蛋白B(Apo-B)療后組間比較差異無顯著性意義。二、安全性分析(一)實驗室安全性指標檢測結果分析兩組各實驗室安全性指標檢測結果分析見表10:表10兩組各實驗室安全性指標檢測結果治療前治療后治療前/治療后檢測例數(shù)異常例數(shù)檢測例數(shù)異常例數(shù)正常轉異常例數(shù)異常加重例數(shù)試驗組1791179000血常規(guī)對照組60360200試驗組1793179100尿常規(guī)對照組60160100試驗組1520156000便常規(guī)對照組51049000試驗組17931179200心電圖對照組6013601300試驗組1796179100ALT對照組60660400試驗組1790178000BUN對照組60060000試驗組1790179000Cr對照組60060000實驗室安全性指標檢測結果顯示:試驗組和對照纟日均未見療前正常而療后異常指標或療前異常而療后異常加重指標。療前試驗組有31例、對照組有13例心電圖異常者，大多為45歲以上的中、老年人，追問病史，大都有動脈硬化、冠心病史，未見有明顯的心功能不全。療后該患者群心電圖檢査仍未異常，但未見異常情況加重。療前試驗組有6例、對照組有2例ALT升高，研究者判斷為高脂血癥病程長，合并脂肪肝所致。治療后隨著血脂的下降，試驗組對照組各有l(wèi)例患者的ALT降至正常。如圖4所示，從血常規(guī)、尿常規(guī)、便常規(guī)、心電圖、ALT、BUN和Cr的治療前后異常例數(shù)變化來看，試驗組改善異常顯著好于對照組，所以試驗組療效更好。4、結論通過對240例高脂血癥(氣滯血瘀證)患者的臨床觀察表明盾葉冠心寧片治療高脂血癥(氣滯血瘀證)安全有效，并且相比較現(xiàn)有技術中比較佳治療冠心病的藥物制劑療效更好。效果實施例2薯蕷皂苷糖衣片對治療冠心病心絞痛薯蕷皂苷治療冠心病效果較好，由于用于治療，本發(fā)明深入研究薯蕷皂苷脂質體透過的過程，對了解脂質體的靶向治療的特點有重要意義。1、病例選擇標準(一)診斷標準1.西醫(yī)診斷標準(參照國際心臟病學會和協(xié)會及世界衛(wèi)生組織臨床命名標準化聯(lián)合專題組報告《缺血性心臟病的命名及診斷標準》制定)(1)診斷標準①勞累性心絞痛勞累性心絞痛的特征是由于運動或其他增加心肌需氧量的情況下所誘發(fā)的短暫胸痛發(fā)作，休息或含服硝酸甘油后，疼痛常可迅速消失。可分為三類初發(fā)型勞累性心絞痛病程在一個月以內。穩(wěn)定型勞累性心絞痛病程穩(wěn)定在一個月以上。惡化型勞累性心絞痛同等程度勞累所誘發(fā)的次數(shù)、嚴重程度及持續(xù)時間突然加重。②自發(fā)性心絞痛自發(fā)性心絞痛的特征是胸痛發(fā)作與心肌需氧量的增加無明顯關系。與勞累性心絞痛相比，這種疼痛一般持續(xù)時間較長，程度較重，且不為硝酸甘油緩解。本型未見酶變化，心電圖常出現(xiàn)某些暫時性的ST段壓低或T波改變。自發(fā)性心絞痛可單獨發(fā)生或與勞累性心絞痛合并存在。自發(fā)性心絞痛患者的疼痛發(fā)作頻率、持續(xù)時間及疼痛程度可有不同的臨床表現(xiàn)，有時患者可有持續(xù)較長的胸痛發(fā)作，類似心肌梗塞，但沒有心電圖及酶的特征性變化。某些自發(fā)性心絞痛患者在發(fā)作時出現(xiàn)短暫性的S—T段抬高，常稱為變異性心絞痛。但在心肌梗塞早期記錄到這一心電形時，不能應用這一名稱。初發(fā)型勞累性心絞痛、惡化型勞累性心絞痛及自發(fā)性心絞痛常統(tǒng)稱為"不穩(wěn)定性心絞痛"。(2)分度、分級診斷標準(參照1979年9月全國中西醫(yī)結合防治冠心病心絞痛、心律失常研究座談會修訂的標準制定)①勞力型心絞痛I級較日?；顒又氐捏w力活動引起心絞痛，日?；顒訜o癥狀，如平地小跑，快速或持重物上三樓、上陡坡等引起心絞痛。II級日常體力活動引起心絞痛，日?；顒由允芟拗啤Ｈ缭谡l件下常速步行3—4站(3—4華里)、上三樓、上坡引起心絞痛。III級較日?；顒虞p的體力活動引起心絞痛，日?；顒用黠@受限。如在正常條件下常速步行1一2站(l一2華里)、上二樓、小坡引起心絞痛。IV級輕微體力活動(如在室內緩行)引起心絞痛，嚴重者休息時亦發(fā)生心絞痛。②非勞力性心絞痛輕度:有較典型心絞痛發(fā)作，每次持續(xù)數(shù)分鐘，每周至少發(fā)作2-3次，或每日發(fā)作1-3次，但疼痛不重，有時需服硝酸甘油。中度每天有多次較典型心絞痛發(fā)作，每次持續(xù)時間數(shù)分鐘到10分鐘疼痛較重，一般需要含服硝酸甘油。重度每天有多次典型心絞痛發(fā)作，因而影響日常生活活動(例如大便、穿衣等)，每次發(fā)作持續(xù)時間較長，需多次口含硝酸甘油。2、試驗方法(一)試驗設計本試驗方案采用隨機、雙盲、陽性對照、多中心臨床試驗設計方法。整個過程由山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院、山東省濟南市中醫(yī)醫(yī)院、山東省濟南市第三人民醫(yī)院3所醫(yī)院協(xié)同完成。(二)試驗藥品的名稱和來源盾葉冠心寧片，江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司提供，批號20040908。復方丹參片，黑龍江省鐵力制藥廠提供，批號20041002。所有試驗用藥均檢驗合格。(三)服藥方法試驗組盾葉冠心寧片，3片/次(相當于原標準生藥服用量2片/次)，3次/日，溫開水送服。對照組復方丹參片，3片/次，3次/日，溫開水送服。(四)合并用藥規(guī)定1.試驗期間，不得使用及治療本病的中西藥物和治療方法。2.合并其他疾病必須繼續(xù)服用的其他藥物和治療方法，必須在合并用藥表中詳細記錄。(五)療程8周一個療程。2、實驗結果一、療效分析(一)心絞痛療效兩組患者心絞痛療效比較見表11:表11兩組患者心絞痛療效比較組別例數(shù)-顯效有效無效加重總有效組間比較N%N%N%N%率(％)ZP試驗組1786938.768145.512815.730084.270.955〉0.05對照組601931.673050.001118.330081.67兩組心絞痛療效比較，差異無顯著性意義。(二)心電圖療效兩組心電圖療效比較見表12:表12兩組心電圖療效比較組別例數(shù)-顯效有效無效加重總有效組間比較ZPN%N%N%N%率(％)試驗組1784525.286234.837139.890060.110.587〉0.05對照組601321.672135.002643.330056.67兩組心電圖療效比較，差異無顯著性意義。(三)中醫(yī)證候療效兩組中醫(yī)證候療效比較見表13:表13兩組中醫(yī)證候療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>兩組單項中醫(yī)癥狀療效比較見表14:表14兩組單項中醫(yī)癥狀療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>兩組各單項中醫(yī)癥狀療效比較，差異均無顯著性意義，如圖5所示，從治療胸痛胸悶、胸脅脹滿和心悸癥狀來看，試驗組顯效比例高于對照組，所以其對這些癥狀療效更好。2.中醫(yī)癥狀積分改善情況兩組中醫(yī)癥狀積分改善情況比較見表15:表15兩組中醫(yī)癥狀積分改善情況比較(又士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>兩組中醫(yī)癥狀積分改善情況，治療前后組內比較兩組均有非常顯著性意義(P<0.01),療后組間比較差異無顯著性意義(P>0.05)。(五)硝酸甘油停減率兩組硝酸甘油停減率比較見表16:表16兩組硝酸甘油停減率比較組別療前療后服藥例數(shù)停藥不變停減率(%)組間比較ZP45112試驗組17518(10.29)89.71(25.71)(64.00)1.247>0.05對照組5612(21.43)34(60.71)10(17.86)82.14兩組硝酸甘油停減率比較，差異無顯著性意義。(六)對心絞痛發(fā)作頻率、持續(xù)時間的影響.又^L、紋浦僅1卞觀平tf」彭啊兩組心絞痛發(fā)作頻率比較見表17:表17兩組心絞痛發(fā)作頻率比較(次/周)組別例數(shù)療前(X土SD)療后(X土SD)(又土SD)組內比較P差值組間比較tP試驗組17810'62±5.19±1.315.43±2.1733.385<0.017.112.016>0.05對照組6010.84±5.83±2.055,01±2.6114.869<0.01___^_______兩組心絞痛發(fā)作頻率比較，治療前后組內比較兩組均有非常顯著性意義(P<0.01)，療后組間比較差異無顯著性意義(P〉0.05)。2.對心絞痛持續(xù)時伺的影響兩組心絞痛持續(xù)時間的比較見表18:表18兩組心絞痛持續(xù)時間比較(min/次)療前療后差值組內比較差值組間比較組別例數(shù)(X士SD)(X土SD)(X土SD)tPtP試驗組17810.83±5.166.01±2.084.82±3.0321.223<0.011.943〉0.05對照組6010.92±6.036.80±2.164.12±2.9610.782<0.01兩組心絞痛持續(xù)時間情況比較，治療前后組內比狡兩組均有非常顯著性意義(P〈0.01)，療后組間比較差異無顯著性意義(P〉0.05)。(七)血液流變學指標的影響兩組血液流變學指標變化情況比較見表19:表19兩組血液流變學指標變化情況比較<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>兩組血液流變學變化情況比較治療前后組內比較除血漿纖維蛋白原外，其余指標兩組改善情況均有非常顯著性意義(P<0.01);療后組間比較各項指標組間差異均無顯著性意義(P〉0.05)。如圖6所示，從全血粘度高切值、全血粘度低切值、血漿比粘度、血漿纖維蛋白原和紅細胞壓積的數(shù)值來看，對照組在治療前后的差值顯著高于對照組，所以其療效更好。(八)血脂指標的影響兩組血脂指標變化情況比較見表20:表20兩組血脂指標變化情況比較(mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>兩組血脂指標變化情況比較治療前后組內比較，除對照組血清總甘油三酯差異無顯著性意義外，其余指標兩組組內比較均有顯著(P<0.05)或非常顯著性意義(P<0.01);療后組間比較兩項指標差異均無顯著性意義(P>0.05)。二、安全性分析(一)實驗室安全性指標檢測結果分析兩組各實驗室安全性指標檢測結果分析見表21:表21兩組各實驗室安全性指標檢測結果治療前治療后治療前/治療后項目組別檢測異常檢測異常異常轉正常轉異常加例數(shù)例數(shù)例數(shù)例數(shù)正常例數(shù)異常例數(shù)重例數(shù)試驗組1807180'2500血常規(guī)對照組604603100試驗組18081800800尿常規(guī)對照組602601100便常規(guī)試驗組1460153000對照組42044000試驗組1806180060.0■ALT對照組602602000試驗組1800180000B函對照組60060000試驗組18021800200Cr對照組602602000實驗室安全性指標檢測結果顯示試驗組和對照組均未見療前正常而療后異常指標或療前異常而療后異常加重指標。療前試驗組有6例、對照組有2例ALT升高，治療后試驗組有1例患者的ALT降至正常，其余仍偏高，但較治療前無加重。研究者經追問病史判斷為合并肝硬化、脂肪肝所致。如圖7所示，從血常規(guī)、尿常規(guī)、便常規(guī)、ALT、BUN和Cr的治療前后異常例數(shù)變化來看，試驗組改善異常顯著好丁-對照組，所以試驗組療效更好。3、結論通過對240例冠心病心絞痛(氣滯血瘀證)患者的臨床觀察表明盾葉冠心寧片治療冠心病心絞痛(氣滯血瘀證)安全有效，并且相比較現(xiàn)有技術中比較佳治療心絞痛的藥物制劑療效更好。權利要求1、一種從盾葉薯蕷中提取薯蕷皂苷的方法，其特征在于包括以下步驟1)取干燥的盾葉薯蕷粉末，加一定量水，攪拌均勻后，加入用20-60℃適量水溶解的多功能精練酶DMA10-30g/L，然后加冷水調節(jié)水量，加入所需要的5-10g/L雙氧水和洗滌劑，攪拌均勻，升溫至60-100℃保溫30min-1.5小時后得到盾葉薯蕷粗液；2)將盾葉薯蕷粗液加6-15倍量水或10％-30％乙醇，加熱回流提取2-4次，每次1-3h，過濾，合并提取液，濃縮至0.25-2.0g生藥/ml；過濾或離心后通過填充有弱極性大孔樹脂的層析柱，提取液按薯蕷皂苷含量與干樹脂的比例為1∶5-10，上柱流速1-4BV/h，樹脂徑高比為1∶3-1∶9；用水洗滌樹脂3-8BV，洗脫流速為2-4BV，水洗脫液棄去；用含30-95％含水乙醇洗脫，流速為2-4BV，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.1-1.25，減壓或噴霧干燥，得薯蕷皂苷。2、根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的離心的轉速為4000-16000轉/分鐘。3、根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的弱極性大孔樹脂為聚苯乙烯型弱極性大孔樹脂。4、一種根據權利要求1至3任一項方法所提取的薯蕷皂苷，其特征在于所述的薯蕷皂苷可以制成任何一種藥劑學上可實現(xiàn)的制劑。5、一種根據權利要求4所述的薯蕷皂苷，其特征在于所述的薯蕷皂苷可以制成糖衣片劑、糖漿、口服液、滴劑或膠囊劑。6、一種制備權利要求5所述的薯蕷皂苷糖衣片的方法，包括以下步驟1)取薯蕷皂苷100-200份，粉碎，加入硫酸鈣1-20份、羧甲淀粉鈉20-60份，混合均勻，用95%乙醇濕潤，繼續(xù)轉動15秒-30分鐘，制備成濕顆粒；2)將濕顆粒經10-40目過篩；3)過篩后的顆粒在20-8(TC干燥；4)干燥后的顆粒經壓片機壓制成型，包糖衣，即得。7、一種制備權利要求5所述的薯蕷皂苷糖衣片的方法，包括以下步驟1)取薯蕷皂苷160份，粉碎，加入硫酸鈣10份、羧甲淀粉鈉40份，混合均勻，用95%乙醇濕潤，繼續(xù)轉動10分鐘，制備成濕顆粒；2)將濕顆粒經14目不銹鋼篩制粒；3)過篩后的顆粒在5(TC干燥；4)干燥后的顆粒經壓片機壓制成型，包糖衣，即得。8、一種利用權利要求5所述的薯蕷皂苷制劑在制備心血管病藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及從中藥盾葉薯蕷中提取薯蕷皂苷的方法和制劑，及其在制備防治心血管病藥物中的應用。本發(fā)明的薯蕷皂苷的提取方法首先采用酶解除去粗雜質，再采用的弱極性大孔樹脂來提取薯蕷皂苷。本發(fā)明方法可以顯著提高盾葉薯蕷皂苷的純度和提取率，降低生產成本。本發(fā)明所得薯蕷皂苷還可以制備成糖衣片劑、糖漿、口服液、滴劑或膠囊劑，與現(xiàn)有工藝相比具有更好的療效，有利于運輸和貯存。臨床實驗證明本發(fā)明薯蕷皂苷對冠心病、高脂血癥等心血管疾病有顯著療效。文檔編號A61K36/88GK101333241SQ200810108359公開日2008年12月31日申請日期2008年6月6日優(yōu)先權日2008年6月6日發(fā)明者杰張,葛海濤申請人:江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司