專利名稱：：具有溶栓活性的寡肽及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及寡肽，尤其涉及具有溶栓活性的4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；揎椀娜芩ü央募捌渲苽浞椒?，本發(fā)明還進一步涉及它們治療腦血栓的活性以及在臨床作為腦血栓治療劑的用途，屬于生物醫(yī)藥領域。
背景技術：
：腦血栓以高發(fā)病、高致殘和高死亡為特征。藥物治療,是臨床治療腦血栓的主要手段。針對腦血栓開發(fā)安全有效的藥物,是新藥研究與開發(fā)的熱點之一。在腦血栓治療藥物中，溶血栓藥物占有最重要的地位。在腦血栓治療中，溶血栓藥物降解血栓中的纖維蛋白成分，使血栓溶解實現血管再通。普遍認為，發(fā)病3h內應用組織型纖溶酶原激活劑可獲得確切療效。不過，目前治療栓塞性疾病使用的鏈激酶、尿激酶和組織型纖溶酶原激活劑等藥物普遍存在出血傾向和免疫原性反應，一直存在安全性問題。尋找安全有效的腦血栓溶栓藥物是溶血栓新藥研究的熱點之一。Ala-Arg-Pro-Ala-Lys是纖維蛋白e鏈的一個降解產物具有良好的溶栓活性，不存在出血傾向和免疫原性反應。對P6A的結構進行修飾，得到Gly-Arg-Pro-Ala-Lys和Gln-Arg-Pro-Ala-Lys兩種類似物。它們也具有良好的溶栓活性，也不存在出血傾向和免疫原性反應。代謝研究顯示P6A的水解片段RPAK和PAK也具有與P6A相當的溶栓活性。P6A類似物作為腦血栓的溶栓藥，打通血栓的過程類似于腦缺血再灌注的過程，腦內大量釋放谷氨酸(Glu)，使NMDA受體激活。這時不僅導致eNOS和nNOS的表達上調，而且導致eNOS和nNOS的活性升高。于是，20分鐘內缺血腦區(qū)NO的濃度迅速上升，以致達到微摩爾水平。6-12小時之后，iNOS的表達也大幅度上調。腦內生成的過量NO最終導致神經元死亡。從臨床實踐看，大部分腦缺血病人最后并不是死于腦缺血，而是死于缺血再灌注NO性神經元死亡。發(fā)明人針對目前臨床治療腦血拴的局限性，利用4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧甲酰基修飾溶栓寡肽,發(fā)揮4，4，5，5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；宄齆O的作用，使恢復血流時細胞能夠不受NO自由基損傷，從而保護腦組織，為腦血栓的臨床治療提供新策略。
發(fā)明內容本發(fā)明目的之一是提供一類具有溶栓活性的4,4，5，5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；揎椀墓央?。本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述具有溶栓活性的寡肽的方法。本發(fā)明上述目的是通過以下技術方案來實現的具有溶栓活性的4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；揎椀墓央?，其結構式為式i、式n或式m所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，Ri選自Pro、Arg-Pro、Ala-Arg-Pro、Gly-Arg-Pro或Gln-Arg-Pro;R2為4，4，5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?lt;formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，R,為4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；?；R2選自Pro、Arg-Pro、Ala-Arg-Pro、Gly-Arg-Pro或Gin-Arg-Pro;其中，4,4,5，5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基的結構式為式111。CH2-CO式m將Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-AIa-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys分別與4,4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；悸?lián)，即可分別得到上述式I、式II化合物。具體的，一種制備上述式I化合物的方法，包括(1)制備C-端和側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys;(2)制備4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸；(3)將C-端和側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys的N端分別與4,4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙酸偶聯(lián)、脫去所有保護基，即得；一種制備上述式II化合物的方法，包括(1)制備N-端、C-端和除Lys外側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys;(2)制備4，4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙酸；(3)分別將N-端、C-端和除Lys外側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys的Lys的側鏈氨基與4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸偶聯(lián)、脫去所有保護基，即得。本發(fā)明的又一目的是提供一種治療腦血栓的藥用組合物，該藥用組合物由治療上有效劑量的本發(fā)明式I或式II化合物與藥學上可接受的載體組成,即將有效量的本發(fā)明式I或式II化合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑配合后，按本領域常規(guī)的制劑方法將其制備成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射給藥，也適合其他的給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑，或口服液等液體制劑形式。根據不同的給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可以含有0.1%-99%重量，優(yōu)選10-60%重量的本發(fā)明化合物。本發(fā)明采用大鼠頸動靜脈旁路插管血栓模型先確定本發(fā)明化合物溶靜脈血栓活性，本發(fā)明再進一步采用大鼠腦血栓模型確定本發(fā)明化合物溶腦血栓活性。在大鼠頸動靜脈旁路插管血栓模型上，本發(fā)明化合物顯示優(yōu)秀的溶栓活性。在大鼠腦血栓模型上，本發(fā)明化合物顯示優(yōu)秀的腦梗死治療作用。圖l本發(fā)明化合物的合成路線圖。具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明作進一步說明。應當指出，這些實施例僅僅是本發(fā)明的例證，不應理解為對本發(fā)明的限制。實施例14，4，5，5-四甲基1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸的制備1)2,3-二甲基-2,3-二硝基丁烷的制備69g(0.78mo1,70ml)2-硝基丙烷加到130mlNaOH(6mo1/1)水溶液中。在冰鹽浴攪拌條件下，滴加20ml(0.38mol)Br2,lhr內滴加完。然后加入240ml乙醇。反應混合物于9(TC回流攪拌3hr，出現片狀不溶物。將反應混合物乘熱倒入800ml冰水中。抽濾，得白色片狀結晶55g(81%)，mpllO-112。C。2)2,3-二甲基-2,3-二羥胺基丁垸的制備將7.0g(40mmol)2,3-二甲基-2，3-二硝基丁垸和4.0gNH4Cl混懸于80ml乙醇(50%)溶液中。冰浴下攪拌。在3hr內加入16.0g鋅粉。鋅粉加完后，撤去冰浴，繼續(xù)室溫攪拌反應3hr，然后將反應液抽濾。濾餅用50%的乙醇水溶液反復洗滌。合并的濾液及洗滌液用濃鹽酸調節(jié)pH=2，減壓濃縮至泥漿狀。往泥漿狀物中加入適量碳酸鉀，拌勻后，使用索氏提取器，氯仿為提取劑，抽提6hr。提取液減壓濃縮至少量，加入石油醚后析出白色結晶2.60g(44%)，mp157-159°C。3)1,3-二羥基-2-(4'-羥基苯基)-4,4,5,5-四甲基二氫咪唑啉的制備1,22g(10mmol)對羥基苯甲醛與1.48g(lOmmoI)2,3-二甲基-2,3-二徑胺基丁烷溶于10ml甲醇中，室溫攪拌16hr后，TLC顯示原料點消失。濾出白色固體2g(85%)直接用于下一步反應。樣品經TLC純化后，EI-MS:236.3[M]+;mp:168-169。4)4'-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基)苯酚的制備475mg(211111101)1,3-二羥基-2-(4，-羥基苯基)-4,4，5，5-四甲基二氫咪唑啉溶解于50ml甲醇中。往得到的溶液中加入2.5gPb02，室溫攪拌0.5hr后，TLC顯示原料點消失。抽濾，除去固體。濾液室溫下減壓濃縮至干。殘留物柱層析分離(氯仿為洗脫劑)，得370mg(80o/cO標題化合物，為藍黑色晶體。mp84-85。C;EI-MS233[M]+、201[M-32]+，145[M-88]+。5)4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙酸乙酯的制備250mg(lmmo1)4'-(4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基)苯酚、0.32ml溴代乙酸乙酯及100mg乙醇鈉溶于5ml無水THF中,6(TC攪拌5hrs后，TLC顯示原料點消失。室溫下減壓蒸干反應液,柱層析(氯仿為洗脫劑),得目標物300mg(90%),mp:107-109°C。6)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸的制備33mg(0.1mmo1)4,4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸乙酯溶于3ml甲醇中,加入7滴2NNaOH,室溫攪拌30min后,TLC顯示原料點消失。將反應液在室溫下減壓蒸至少量，加入2ml飽和食鹽水溶液，用2NHCl調pH-5-6，用氯仿(3mlX3)反復萃取溶液，合并氯仿層，無水硫酸鈉干燥,室溫下減壓蒸干得藍色針狀結晶30mg(100y。)；mp:155-157°C,EI-MS—):307[M]+,276[M-31]+。實施例2Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl的制備1)制備Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl將473mg(2.5mmol)Boc-Ala-OH溶于10ml無水四氫呋喃(THF)，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmoI)N-羥基苯并三唑(HOBt)和619mgG.Ommol)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將936mg(2.3mmol)HCl'Lys(Z)-OBzl禾P232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=20:1)顯示HCl丄ys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液3/C減壓濃縮，得1.204g(97%)標題化合物。為無色油狀物。mp88-9(TC;[a]D2Q=-29.2'(c-O.Ol，甲醇)；ESI-MS(m/e)565[M+Na]十。2)制備HCl'Ala-Lys(Z)-OBzl將1.354g(2.5mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。3)制備Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將538mg(2.5mmo1)Boc-Pro-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mgGmmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.099g(2.3mmo1)HCl'Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=20:1)顯示HCl'Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37°C減壓濃縮，得2.847g(98%)標題化合物。為無色固體。mp82-83.4°C;[a]D2Q=-46.36'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)661.7[M+Na]+。4)制備HCl'Pro陽Ala-Lys(Z)-OBzl將L596g(2.5mmo1)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽千，加入無水乙酸乙酯，用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，再次用水泵將反應液抽干，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。實施例3Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl的制備1)制備HCl.Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將1.596g(2.5mmo0Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入乙酸乙酯，用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，再次用水泵將反應液抽干，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)陽OBzl將L073g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.322g(2.3mmo1)HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37"C減壓濃縮，得1.856g(85%)標題化合物。為無色固體。mp83.1-84.5°C;[a]D2Q=-58.8'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)951.2[M+H]+3)制備HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將2.372g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。實施例4Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)墨OBzl的制備1)制備HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將2.372g(2.5mmo1)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將473mg(2.5mmo1)Boc-Ala-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmoDHOBt和619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將2.037g(2.3mmoDHC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmo1)N陽甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37"C減壓濃縮，得2.088g(89%)標題化合物。為無色固體。mp85.6-86.7°C;[a]D2()=-81.3(c=0,01，甲醇)；ESI陽MS(m/e)1022.3[M+H]+。3)制備HC1'Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將2.550g(2.5mmo1)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽千，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料伊磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。實施例5Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl的制備1)制備Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將438mg(2.5mmoDBoc-Gly-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mgGmmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將2.037g(2.3mmol)HC1.Arg(Tos)-Pro誦Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得2.129g(92%)標題化合物。為無色固體。mp84.6-85.4°C;[a]D2()=-51,3.(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1008.6[M+H]+。2)制備HCl.Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將2.515g(2.5mmo1)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。實施例6Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl的制備1)制備Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將615mg(2.5mmo1)Boc-Gln-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt禾卩619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將2.037g(2.3mmo1)HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3腿o1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液3/C減壓濃縮，得2.205g(89%)標題化合物。為無色固體。mp90.6-91.4°C;[a]D2()=-91.3(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1079.3[M+H]+。2)制備HCl'Gln曙Arg(Tos)-Pro隱Ala-Lys(Z)-OBzl將2.693g(2.5mmo1)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇-10:1)顯示Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。實施例7Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe的制備1)制備Boc-Ala-Lys(Z)-OMe將473mg(2.5mmol)Boc-Ala-OH溶于10ml無水四氫呋喃(THF)，冰浴下往里加10ml338mg(2,5mmo1)N-羥基苯并三挫(HOBt)和619mg(3.0mm。i)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將762mg(2.3mmol)HCl丄ys(Z)-OMe和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=20:1)顯示HCl丄ys(Z)-OMe消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得1.018g(95%)標題化合物。為無色油狀物。mp87.6-88.5°C;[a]D2Q=-35.3'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)467.3[M+H]+。2)制備HCl'Ala-Lys(Z)-OMe將1.165g(2.5mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-OMe與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Ala-Lys(Z)-OMe消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。3)制備Boc-Pro-Ala陽Lys(Z)-OMe將538mg(2.5mmo1)Boc-Pro-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mgGmmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將926mg(2.3mmo1)HCl'Ala-Lys(Z)-OMe和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=20:1)顯示HCl'Ala-Lys(Z)-OMe消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液3/C減壓濃縮，得1.243g(96%)標題化合物。為無色固體。mp81.6-82.5°C;[a]D20=-45.8(c二O.Ol，甲醇)；ESI陽MS(m/e)564.5[M+H]+。4)制備HCl.Pro-Ala-Lys(Z)-OMe將1.408g(2.5mmo1)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙酸乙酯，用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，再次用水泵將反應液抽千，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。實施例8Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe的制備1)制備HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OMe將1.408g(2.5mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe消失。用水泵將反應液抽干，加入乙酸乙酯，用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，再次用水泵將反應液抽干，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe將L073g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.149g(2.3mmo1)HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水DMF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OMe消失。反應混合物減壓濃縮至干，DMF吹干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37"C減壓濃縮，得1.749g(87%)標題化合物。為無色固體。mp84.6-85.8。C;[a]D2G=-67.8'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)875.2[M+H]+。2)制備HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala陽Lys(Z)-OMe將2.185g(2.5mmo1)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。實施例9Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe的制備1)制備HC1.Arg(Tos)-Pro隱Ala-L.ys(Z)-OMe將2.185g(2.5mmo1)Boc-Arg(Tos)陽Pro-Ala-Lys(Z)-OMe與15ml氯化氫陽乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-AIa-Lys(Z)-OMe將473mg(2.5mmo1)Boc-Ala-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mg(3mmo0DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.864g(2Jmmo1)HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37"C減壓濃縮，得1.891g(87%)標題化合物。為無色固體。mp87.6-88.9°C;[a]D2Q=-69.1(c=0.01,甲醇)；ESI-MS(m/e)946.8[M+H]+。實施例10Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe的制備1)制備Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe將438mg(2.5mmo1)Boc-Gly-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.864g(2.3mmo1)HC1'Arg(Tos)陽Pro-Ala-Lys(Z)-OMe和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉千燥、過濾、濾液3/C減壓濃縮，得1.927g(90%)標題化合物。為無色固體。mp85.6-87.5°C;[a]D2G=-40.8(c二O.Ol，甲醇)；ESI-MS(m/e)932.0[M+H]+。實施例11Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe的制備1)制備Boc陽Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe將615mg(2.5mmo1)Boc-Gln-OH溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmol)HOBt和619mgGmmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.864g(2.3mmol)HC1.Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe和232mg(2.3mmol)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37"C減壓濃縮，得2.028g(88%)標題化合物。為無色固體。mp89.6-91.2°C;[a]D2Q=-61.8(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1003.5[M+H]+。實施例12Pro-Ala-(N"-4,4，5，5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基)Lys(Ia)的制備1)制備Boc-Pro-Ala-Lys-OMe將141mg(0.25mmo1)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe溶于適量甲醇中，加入20mgPd/C,減壓排出反應瓶中的空氣。通入氫氣置換，反復置換5次后，通氫氣室溫攪拌48小時，TLC(氯仿甲醇=10:1)顯示原料點消失。停止反應，濾除Pd/C，濾液減壓除去溶劑，得105mg(98%)標題化合物。為無色固體。mp85.6-97.2。C;[a]D2()=-41.8'(c二O.Ol,甲醇)；ESI陽MS(m/e)429.3[M+H]+。2)制備Boc-Pro-Ala-(N(。-4,4,5,5陽四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys-OMe將70.6mg(0.23mmo1)4,4，5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml33.8mg(0.25mmo1)HOBt和61.9mg(0.33mmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將107mg(0.25mmol)Boc-Pro-Ala-Lys-OMe和6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示4,4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37°C減壓濃縮，柱層析分純，得115mg(70%)標題化合物。為藍色固體。mp95.6-96.8。C;[a]D2()=-39.0'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)718.4[M+H]+,740.4[M+Na]+;ESRg=2.00787。3)制備Boc-Pro-Ala-(N"-4，4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；?Lys將179mg(0.25mmol)Boc-Pro-Ala-(NW-4,4，5,5-四甲基-l,3陽二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys-OMe溶于2ml甲醇中，冰浴條件下往里面加2ml2NNaOH,2hr后TLC(氯仿甲醇=10:l)顯示原料點消失。停止反應，37。C減壓蒸去甲醇，飽和KHS04調PH二2，用乙酸乙酯萃取3次，再用飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得167mg(95%)標題化合物。為藍色固體。mp151.2-152.5°C;[a]D20=-37.2.(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)704.5[M+H]+;ESRg=2.00788。4)制備Pro-Ala-(N。-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙酰基)Lys176mg(0.25mmo1)Boc-Pro-Ala-(N吒4,4，5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基)Lys加入茄瓶中，冰浴下加入6mlTFA和1.5mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PH=7,減壓抽干，ds柱純化，凍干，得98.1mg(65%)標題化合物。為藍色固體。mp160.6-161.8'C;[a〗D20=-35.3'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)605.3[M+H]+;ESRg=2.00785。實施例13Arg-Pro-Ala-(T-4，4，5，5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys(Ib)的制備1)制備Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys-OMe將219mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe溶于適量甲醇中，加入30mgPd/C,減壓排出反應瓶中的空氣。通入氫氣置換，反復置換5次后，通氫氣室溫攪拌48小時，TLC(氯仿甲醇=10:1)顯示原料點消失。停止反應，濾除Pd/C，濾液減壓除去溶劑，得181mg(98%)標題化合物。為無色固體。mp91.5-92.8。C;[a]D2Q=-68.0'(c=0.01，甲醇)；ESI陽MS(m/e)740.5[M+H]+。2)制備Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys-OMe將70.6mg(0.23mmo1)4，4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml33.8mg(0.25mmo1)HOBt和61.9mg(O.33mmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。、訟1Q《mrrmA^"1>^、—T>m_八1?！猅、，?！猰V/To壬HAJ;士TTJT7、〉曰狡械Gt;上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37°C減壓濃縮，硅膠柱純化，得170mg(72%)標題化合物。為藍色固體。mp142.3-143.8°C;[a]D2G=-42.5(c=0.01,甲醇)；ESI-MS(m/e)1028.2[M+H]+,1050.7[M+Na]+;ESRg=2.00784。3)制備Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N氣4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；?Lys將257mg(0.25mmo1)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；?Lys-OMe溶于3ml甲醇中，冰浴條件下往里面加3ml2NNaOH,2hr后TLC(氯仿甲醇=10:1)顯示原料點消失。停止反應，37。C減壓蒸去甲醇，飽和KHS04調PI^2，用乙酸乙酯萃取3次，再用飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得241mg(95%)標題化合物。為藍色固體。mp150.2-151.8°C;[a]D20=62.8(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1015.2[M+H]+,1027.7[M+Na]+;ESRg=2.00788。4)制備Arg-Pro-Ala-(N。-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys254mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N、4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪哇啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?1^加入茄瓶中，冰浴下加入8mlTFA和2mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PH-7,減壓抽干，C18柱純化，凍干，得120mg(63%)標題化合物。為藍色固體。mp147.2-148.4°C;[a]D2<)=-37.5.(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)761.5[M+H]+,783.4[M+Na]+;ESRg=2.00782。實施例14Ala-Arg-Pro-Ala-(NW-4，4，5，5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基)Lys(Ic)的制備1)制備Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys-OMe將236mg(0.25mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe溶于適量甲醇中，加入30mgPd/C,減壓排出反應瓶中的空氣。通入氫氣置換，反復置換5次后，通氫氣室溫攪拌48小時，TLC(氯仿甲醇=10:1)顯示原料點消失。停止反應，濾除Pd/C，濾液減壓除去溶劑，得196mg(97%)標題化合物。為無色固體。mp85.6-86.8。C;[a]D2()=-88.4'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)809.5[M+H]+。2)制備Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基)Lys-OMe將70.6mg(0.23mmo1)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml33.8mg(0.25mmo1)HOBt和61.9mg(0.33mmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將202mg(0.25mmo1)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys-OMe禾Q6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示4,4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，硅膠柱純化，得179mg(71%)標題化合物。為藍色固體。mp125.4-126.7°C;[a]D2()=-51.6'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1100.0[M+H]+,1022.0[M+Na]+;ESRg=2.00783。3)制備Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N"-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys將275mg(0.25mmo1)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-AIa-(N。-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?1^-€^6溶于3ml甲醇中，冰浴條件下往里面加3ml2NNaOH,2hr后TLC(氯仿甲醇=10:l)顯示原料點消失。停止反應，37。C減壓蒸去甲醇，飽和KHS04調PI^2，用乙酸乙酯萃取3次，再用飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得260mg(96%)標題化合物。為藍色固體。mp148.3-149.5°C;[a]D20=-48.5'(c二0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1085.4[M+H]+;ESRg=2.00788。4)制備H-Ala-Arg-Pro-Ala-(N①-4,4，5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys271mg(0.25mmo1)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW-4,4,5,5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys加入茄瓶中，冰浴下加入8mlTFA和2mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PH=7,減壓抽干，Ci8柱純化，凍干，得133mg(64%)標題化合物。為藍色固體。mp160.8-161.9°C;[a]D2Q=-46.2(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)832.7[M+H]+;ESRg=2.00781。實施例15Gly-Arg-Pro-Ala-(N。-4，4，5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰甚、T,vs^Td、的湘l客1)制備Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys-OMe將233mg(0.25mmo1)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe溶于適量甲醇中，加入30mgPd/C,減壓排出反應瓶中的空氣。通入氫氣置換，反復置換5次后，通氫氣室溫攪拌48小時，TLC(氯仿甲醇=10:1)顯示原料點消失。停止反應，濾除Pd/C，濾液減壓除去溶劑，得194mg(98%)標題化合物。為無色固體。mp84.1-85.4'C;[a]D2G=-66.9'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)795.4[M+H]+。2)制備Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys-OMe將70.6mg(0.23mmo1)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml33.8mg(0.25mmoDHOBt禾口61.9mg(0.33mmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將199mg(0.25mmo1)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys-OMe和6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，硅膠柱純化，得180mg(72%)標題化合物。為藍色固體。mp155.6-156.8°C;[a]D2Q=46.3'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1085.8[M+H]+,1107.3[M+Na]+;ESRg=2.00784。3)制備Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N。-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys將271mg(0.25mmo1)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys-OMe溶于3ml甲醇中，冰浴條件下往里面加3ml2NNaOH,2hr后TLC(氯仿甲醇=10:l)顯示原料點消失。停止反應，37。C減壓蒸去甲醇，飽和KHS04調PI^2，用乙酸乙酯萃取3次，再用飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得257mg(96%)標題化合物。為藍色固體。mp145.5-146.7°C;[a]D20=-44.7(c=0.01,甲醇)；ESI陽MS(m/e)1072.3[M+H]+;ESRg=2.007892;ESRg=2.00783。4)制備Gly-Arg-Pro-Ala-Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW-4,4,5，5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys，AQtYirr("n，《rr^n1、—d、,—A"7>^、—Dm—A1/1/1《fTTl田M:」L一鎮(zhèn)某脅0/^故太—，—、v/.""iiiii丄v^1yxjuv—vji)—jLig、iuo乂—1iv/—'nct—、丄、__r,"r,j,j—r—||,-1-、—i,-*—_^牛、<~^叫、'.t-'w—基苯-4，-基氧乙?；?Lys加入茄瓶中，冰浴下加入8mlTFA和2mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PI^7,減壓抽干，SephadexG-10柱除鹽，C!8柱純化，凍干，得135mg(66%)標題化合物。為藍色固體。mp162.8-164.2°C;[a]D20=-41.2(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)818.7[M+H〗+;ESRg=2.00783。實施例16Gln-Arg-Pro-Ala-Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N"-4，4，5，5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰萄Lys(Id)的制備1)制備Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys-OMe將251mg(0.25mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OMe溶于適量甲醇中，加入30mgPd/C,減壓排出反應瓶中的空氣。通入氫氣置換，反復置換5次后，通氫氣室溫攪拌48小時，TLC(氯仿甲醇=10:1)顯示原料點消失。停止反應，濾除Pd/C，濾液減壓除去溶劑，得212mg(98%)標題化合物。為無色固體。mp90.6-91.8。C;[a]D20=-91.5.(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)868.5[M+H]+。2)制備Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(N氣4,4，5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?-OMe將71.6mg(0.23mmo1)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml33.8mg(0.25謹o1)HOBt和61.9mg(0.33mmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將217mg(0.25mmo1)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys-OMe與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示4，4,5，5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，硅膠柱純化，得186mg(70%)標題化合物。為藍色固體。mp91.0-92.2°C;[a]D2()=56.4'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1178.1[M+Na]+;ESRg=2.00785。3)制備Boc-Gln-Arg-Pro-Ala-Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N。-4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys將289mg(0.25麵o1)Boc-Gln-Arg-Pro-Ala-Boc-Gly陽Arg(Tos)-Pro-Ala-(NW陽4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；?Lys-OMe溶于3ml甲醇中，冰浴條件下往里面加3ml2NNaOH,2hr后TLC(氯仿甲醇=10:1)顯示原料點消失。停止反應，37°C減壓蒸去甲醇，飽和KHS04調PH-2，用乙酸乙酯萃取3次，再用飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37°C減壓濃縮，得268mg(94%)標題化合物。為藍色固體。mp146.8-148.1°C;[a]D20=-50.3'(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1143.5[M+H〗+;ESRg=2.00784。4)制備Gln-Arg-Pro-Ala-Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N"-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Lys285mg(0.25mmo1)Boc-Gln-Arg-Pro-AIa-Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-(N①-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?1^加入茄瓶中，冰浴下加入8mlTFA和2mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PI^7,減壓抽干，<318柱純化，凍干，得144mg(65%)標題化合物。為藍色固體。mp171.2-172.5°C;[a]D20=-20.5(c二0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)889.5[M+H]+;ESRg=2.00786。實例施174,4，5，5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基-Pro-Ala-Lys(If)的制備1)制備HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將1.596g(2.5mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙酸乙酯，用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，再次用水泵將反應液抽干，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備4，4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將768mg(2.5mmo1)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.322g(2.3mmo1)HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HCl'Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得1.856g(85%)標題化合物。為藍色固體。mp155.4陽156.7。C;[a]D20=-20.6(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)828.3[M+H]+，850.2[M+Na]+ESR;g=2.00789。3)制備4,4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Pro-Ala-Lys285mg(0.25mmol)4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl加入莉瓶中，冰浴下加入6mlTFA和1.5mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇-l:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PI^7,減壓抽干，C18柱純化，凍干，得144mg(65%)標題化合物。為藍色固體。mp152.6-163.8°C;[a]D20=-18.4(c二O.Ol，甲醇)；ESI-MS(m/e)605.2[M+H]+;ESRg=2.00789。實施例184，4，5，5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基-Arg-Pro-Ala-Lys(lg)的制備1)制備HCrArg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將2.372g(2.5mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備4,4,5，5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Arg-Pro-Ala-Lys-OBzl將L073g(2.5mmol)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt禾B619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.322g(2.3mmo1)HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)陽OBzl和232mg(2.3mmo1)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1'Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37。C減壓濃縮，得1.856g(85%)標題化合物。為藍色固體。mp93.1-94.3°C;[a]D2Q=40.5(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1162.4[M+Na]+;ESRg=2.00791。3)制備4,4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Arg-Pro-Ala-Lys285mg(0.25mrno1)4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；朅rg-Pro-Ala-Lys-OBzl加入茄瓶中，冰浴下加入6mlTFA和1.5mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PH-7，減壓抽干，C18柱純化，凍干，得144mg(65%)標題化合物。為藍色固體。mp147.1-148.3°C;[a]D2G=-26.9(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)760.3[M+H]+;ESRg=2.00785。實施例194，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基-人13-Arg-Pro-Ala-Lys(Ih)的制備1)制備HC1'Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala陽Lys(Z)-OBzl將2.550g(2.5mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)陽OBzl將1.073g(2.5mmol)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.322g(2.3mmo1)HC1'Ala-Arg(Tos)陽Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液37'C減壓濃縮，得1.856g(85%)標題化合物。為藍色固體。mp146.7-147.9°C;[a]D20=-44.9(c二O.Ol，甲醇)；ESI-MS(m/e)1211.0[M+H〗+;ESRg=2.00789。3)制備4，4,5，5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Ala-Arg-Pro-Ala-Lys285mg(0.25mmol)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl加入茄瓶中，冰浴下加入6mlTFA和1.5mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇-l:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PH=7,減壓抽干，<:18柱純化，凍干，得144mg(65%)標題化合物。為藍色固體。mp162.1-163.5°C;[a]D20=-32.r(c二O.Ol，甲醇)；ESI-MS(m/e)832.1[M+H]+;ESRg=2.00788。實施例204，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?0^-Arg-Pro-Ala-Lys(Ii)的制備1)制備HCl'Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將2.515g(2,5mmo1)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將1.073g(2.5mmo1)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mgGmmol)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.322g(2.3mmo1)HC1'Gly陽Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmo1)N陽甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉千燥、過濾、濾液37"C減壓濃縮，得1.856g(85%)標題化合物。為藍色固體。mp139.2隱140.4。C;[a]D20=-35.1(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1197.9[M+H]+;ESRg=2.00786。3)制備4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酰基-0^-Arg-Pro-Ala-Lys285mg(0.25mmol)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl加入茄瓶中，冰浴下加入6mlTFA和1.5mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PH-7,減壓抽干，ds柱純化，凍干，得144mg(65%)標題化合物。為藍色固體。mp152.3-153.6°C;[a]D20==31.9(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)818.0[M+H]+;ESRg=2.00786。實施例214，4，5，5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Gln-Arg-Pro-Ala-Lys(Ij)的制備1)制備HCl.Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將2.693g(2.5mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與15ml氯化氫-乙酸乙酯液(4N)的混合物室溫攪拌3小時，TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵將反應液抽干，加入無水乙醚，再次用水泵將反應液抽干，重復5次。殘留物用無水乙醚泡洗，塑料鏟磨洗，將無水乙醚傾出，反復5次。得到的標題化合物直接用于下步反應。2)制備4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl將1.073g(2.5mmo1)4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙酸溶于10ml無水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmo1)HOBt和619mg(3mmo1)DCC的無水THF溶液。反應混合物冰浴攪拌20分鐘，得對應的活潑酯溶液，待用。將1.322g(2.3mmo1)HC1'Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基嗎啉先與6ml無水THF混溶，然后與上面待用的活潑酯溶液混溶。得到的反應混合物室溫反應24小時。TLC(展開劑氯仿甲醇=10:1)顯示HC1-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，濾除不溶物。濾液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗。分出的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液3/C減壓濃縮，得1.856g(85%)標題化合物。為藍色固體。mp96.7-97.9°C;[a]D20=-52.7(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)1268.2[M+H]+;ESRg=2.00789。3)制備4,4,5，5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；?0111-Arg-Pro-Ala-Lys285mg(0.25mmo1)4,4，5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙?；?Gln-Arg(Tos)國Pro-Ala-Lys(Z)隱OBzl加入茄瓶中，冰浴下加入6mlTFA禾口1.5mlTFMSA，lhr后TLC(氯仿甲醇=1:1)顯示原料點消失。停止反應，用無水乙醚反復洗滌至PH=7，減壓抽干，ds柱純化，凍干，得144mg(65%)標題化合物。為藍色固體。mp163.5-164.8°C;[a]D20=-35.8(c=0.01，甲醇)；ESI-MS(m/e)888.9[M+H]+;ESRg=2.00785。實驗例l本發(fā)明化合物(Ia-j)的溶靜脈血拴活性測定大鼠溶血栓模型上的溶血栓活性1)受試化合物本發(fā)明實施例12-21所制備的化合物Ia-j;2)大鼠手術與器械SD大鼠(雄性，220230g)按1200mg/kg劑量腹腔注射烏拉坦溶液進行麻醉。麻醉大鼠仰臥位固定，分離右頸總動脈，于近心端夾動脈夾，近心端和遠心端分別穿入手術線，將遠心端的手術線于皮毛用止血鉗夾緊，在遠心端插管，松開動脈夾，放出約lml動脈血，裝在lml子彈頭中。往垂直固定的玻璃管(長15mm,內徑2.5mm,外徑5.0mm，管底用膠塞密封)中注入O.lml大鼠動脈血液，往管內迅速插入一支不銹鋼質料的血栓固定螺栓。該血栓固定螺旋用直徑為0.2mm的不銹鋼絲繞成,螺旋部分長12mm,含15個螺圈，螺圈的直徑為l.0mm,托柄與螺旋相連,長7.0mm，呈問號型。血液凝固15min后,打開玻璃管底部的膠塞,用鑷子固定血栓固定螺旋的托柄,從玻璃管中小心地取出被血栓包裹的血栓固定螺旋。精確稱重。3)大鼠頸動靜脈旁路插管旁路插管由3段構成，中段為聚乙烯膠管，長60.0mm，內徑3.5mm;兩端為相同的聚乙烯管，管長100.0mm，內徑1.0mm，外徑2.0mm該管的一端拉成尖管(用于插入大鼠頸動脈或靜脈)，外徑為1.0mm，另一端的外部套一段長7.0mm，外徑為3.5mm的聚乙烯管(加粗，用于插入中段的聚乙烯膠管內)3段管的內壁均硅烷化。將血栓包裹的血栓固定螺旋放入中段聚乙烯膠管內，膠管的兩端分別與兩根聚乙烯的加粗端相套。用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液(50IUkg—1)，備用。繼續(xù)分離麻醉大鼠的氣管，并做氣管插管。分離大鼠的左頸外靜脈，近心端和遠心端分別穿入手術線，在暴露的左頸外靜脈上小心地剪一斜口,將上面制備好的旁路管道的尖管由斜口插入左頸外靜脈開口的近心端,同時遠離旁路管中段(含精確稱重的血栓固定螺旋)內血栓固定螺旋的托柄。用注射器通過另一端的尖管推入準確量的肝素生理鹽水(50IU*kg力,此時注射器不要撤離聚乙烯管，用止血鉗夾住注射器與聚乙烯管之間的軟管。在右頸總動脈的近心端用動脈夾止血,在離動脈夾不遠處將右頸總動脈小心地剪一斜口。從聚乙烯管的尖部拔出注射器,將聚乙烯管的尖部插入動脈斜口的近心端。旁路管道的兩端都用4號手術縫線與動靜脈固定。4)給藥用頭皮針將生理鹽水(3mlkg—1)，尿激酶的生理鹽水溶液(20000IU/kg)或本發(fā)明化合物的生理鹽水溶液(10nmol/kg)通過旁路管的中段(含精確稱重的血栓固定螺旋)，剌入遠離血栓固定螺旋的近靜脈處，打開動脈夾,使血流通過旁路管道從動脈流向靜脈，此即大鼠動靜脈旁路溶栓模型，緩慢將注射器中的液體注入到血液中，使生理鹽水(空白對照)，尿激酶(陽性對照)或線性肽(治療劑)通過血液循環(huán),按靜脈-心臟-動脈的順序作用到血栓上。從開始注射時計時,lh后從旁路管道中取出血栓固定螺旋,精確稱重。求每只大鼠旁路管道中血栓固定螺旋給藥前后的質量差，統(tǒng)計各組的血栓質量差值(亍土SD)，并做f檢驗。5)實驗結果血栓質量差值列入表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>n=10，NS空白對照，Dose=3ml/kg;UK的劑量20000IU/kg,化合物Ia-j的劑量lOnmol/kg;a)與NS比較PO.001，與UK和Id比較PO.01，與la比較PO.05;b)與NS比較PO.001,與UK、Id和la比較PO.05;c)與NS和UK比較PO.001，與Id比較P<0.01，與la比較PO.05;d)與NS比較P<0.01，與UK比較PO.001;e)與NS比較PO.01,與UK和Id比較PO.005;f)與NS比較PO.01,與UK和la及Id比較PO.005;g)與NS比較P<0.05，與UK比較PO.001;h)與UK比較PO.001.實驗結果顯示NS組血栓減重10.56mg，UK組血栓減重穩(wěn)定在20.30mg，10種目標化合物血栓減重12.178至16.88mg，所有目標化合物在濃度為10nmol/kg時與NS比P<0.05。其中Ib,Ie和If活性最好，Id和Ii活性最差，其余的目標化合物活性居中。實驗例2本發(fā)明化合物(Ia-j)的溶腦血栓活性測定實驗1)受試化合物本發(fā)明實施例12-21所制備的化合物la-j;2)實驗方法SD雄性大鼠(220230g)用10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉，從頸部正中略偏右側豎直開約2cm長切口，沿胸鎖乳突肌內側緣分離出右側頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)和頸內動脈(ICA)。用無創(chuàng)動脈夾分別夾閉頸內動脈開口處和頸總動脈近心端，在頸外動脈剪一小口，結扎頸外動脈遠心端，松開頸總動脈處的動脈夾，取IO微升血。取血之后再用無創(chuàng)動脈夾夾閉頸總動脈近心端。將取得的IO微升血裝入1mlEP管中并置-20度冰箱放1小時使血凝固，取出EP管加0.5毫升NS用鋼鏟搗成均勻細小血栓。松開頸內動脈夾的同時用lml注射器將血栓混合液緩慢從大鼠頸外動脈向近心端注入頸內動脈，結扎頸外動脈近心端，松開頸內動脈和頸總動脈,恢復血流。將手術大鼠隨機分為假手術組、陽性對照組、生理鹽水組和本發(fā)明的化合物組。分離靜脈，假手術組直接結扎,傷口處滴加3滴青霉素注射液，縫合。陽性對照組注入UK或tPA,,生理鹽水組注入生理鹽水,本發(fā)明的化合物組注入本發(fā)明的化合物,結扎靜脈，傷口處滴加3滴青霉素注射液，縫合。大鼠蘇醒后3h，24h按ZeaLonga方法評定神經功能缺損程度。0分表示無任何神經功能缺失體征、l分表示未損傷側前肢不能伸展、2分表示向未損傷側行走、3分表示向未損傷側轉圈成追尾狀行走、4分表示意識障礙無自主行走、5分表示死亡。將以上各組評分結果進行統(tǒng)計學比較。大鼠蘇醒后24h每組取6只大鼠用烏拉坦麻醉后迅速斷頭取腦，將腦組織置于一20度冰箱20min后，從前額極開始行約2mm冠狀切片并置2XTTC溶液中37'C避光孵育30min，然后用眼科鑷取出冠狀切片照相，經SPSS統(tǒng)計軟件處理，計算冠狀切片中梗死組織(白色)和正常組織(紅色)的面積。統(tǒng)計各組的梗塞體積百分比值(i土SD)，并做f檢驗。3)實驗結果Ia-j的化合物的溶腦血栓活性用腦血栓梗塞體積百分比表示并列入表2。表2Ia-j的化合物的溶腦血栓活性組別梗塞體積(X土SD"7。)組別梗塞體積(亍土SD7。)NS19.6284±3.4843UK)12.0842±5.1215cIa14.5363±4.5160bIf7.1444±3.4504aIb7.4571±3.5798aIg10.8154±3.6916cIc12.3878±5.3854bIh11.0495±5.2931bId15.7867±4.9794Ii15.5881±5.0733Ie7.6118±5.2317aIj12.3820±4.1952bPAK14.8390±5.6844n=10,NS空白對照3ml/kg;UK劑量:20000IU/kg，化合物Ia-j的劑量lOnmol/kg;a)與NS比較PO.OOl，與UK比較PO.01;b)與NS比較PO.01;c)與NS比較P<0.05.實驗結果顯示NS組梗塞體積百分比為19.6，UK組梗塞體積百分比為12.08。其中Ib，Ie和If活性最好，Id和Ii活性最差，其余的目標化合物活性居中。權利要求1、具有溶栓活性的化合物，其結構式為式I或式II所示id="icf0001"file="A2008101138580002C1.tif"wi="43"he="35"top="33"left="60"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式I其中，R1選自Pro、Arg-Pro、Ala-Arg-Pro、Gly-Arg-Pro或Gln-Arg-Pro；R2為4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4’-基氧乙?；籭d="icf0002"file="A2008101138580002C2.tif"wi="49"he="37"top="98"left="56"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式II其中，R1為4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4’-基氧乙?；?；R2選自Pro、Arg-Pro、Ala-Arg-Pro、Gly-Arg-Pro或Gln-Arg-Pro。2、一種制備權利要求1所述化合物的方法，包括將Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Pro-Ala-Lys、Arg隱Pro-Ala-Lys、Gly-Arg陽Pro陽Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys分另U與4,4,5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4'-基氧乙?；悸?lián)，即得。3、一種制備權利要求1所述式I化合物的方法，包括(1)、制備C-端和側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys;(2)、制備4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸；(3)、將C-端和側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys的N端分別與4，4,5,5-四甲基-l，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸偶聯(lián)、脫去所有保護基，即得。4、一種制備權利要求1所述式II化合物的方法，包括(1)、制備N-端、C-端和除Lys外側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys;(2)、制備4,4,5,5-四甲基-l,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸；(3)、分別將N-端、C-端和除Lys外側鏈保護的Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys的Lys的側鏈氨基與4，4,5,5-四甲基-1,3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4，-基氧乙酸偶聯(lián)、脫去所有保護基，即得。5、一種治療腦血栓的藥物組合物，由治療上有效量的權利要求1所述的化合物和藥學上可接受的載體或輔料組成。6、權利要求1所述的化合物在制備治療腦血栓藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明公開了4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4’-基氧乙?；揎椀娜芩ü央募捌渲苽浞椒?，本發(fā)明還公開了它們在治療腦血栓中的應用。將Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、Pro-Ala-Lys、Arg-Pro-Ala-Lys、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys或Gln-Arg-Pro-Ala-Lys分別與4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基苯-4’-基氧乙?；悸?lián)，即得本發(fā)明化合物。在大鼠頸動靜脈旁路插管血栓模型上，本發(fā)明化合物顯示出優(yōu)秀的溶栓活性。在大鼠腦血栓模型上，本發(fā)明化合物顯示優(yōu)秀的腦梗死治療作用。文檔編號A61K38/07GK101591376SQ200810113858公開日2009年12月2日申請日期2008年5月30日優(yōu)先權日2008年5月30日發(fā)明者彭師奇,明趙,鐘曉青申請人:首都醫(yī)科大學