專利名稱：：一種吡硫醇及其鹽脂質體的制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，具體涉及一種吡硫醇及其鹽脂質體的制備方法和應用。
背景技術：
：吡硫醇化學名為雙[(3'-羥基-4-羥甲基-2-甲基-5-吡啶基)甲基]二硫化物，基本化學結構為兩分子維生素B6以雙硫鍵相連，系維生素B6的衍生物。吡硫醇及其鹽是一種新的促智能藥物，它可以改善記憶和學習能力，主要用于治療腦震蕩綜合征、腦動脈硬化癥及老年癡呆性精神病等方面的疾病。藥理研究表明，吡硫醇及其鹽能促進腦內葡萄糖及氨基酸代謝，對腦內多巴胺功能有激活作用，改善全身同化作用，增加頸動脈血流量，增強腦功能，對邊緣系統(tǒng)和網(wǎng)狀結構亦有刺激作用，增強免疫功能，緩和有害因素對機體的損害作用。臨床主要用于腦外傷后遺癥、腦炎及腦膜炎后遺癥等的頭暈脹痛、失眠、記憶力減退、注意力不集中、情緒變化的改善；亦用于腦動脈硬化、老年癡呆性精神癥狀的治療。但是吡硫醇及其鹽靜脈注射后，副作用較大，血管刺激性強，除引起皮疹、惡心等不良反應外，還可引起嚴重的靜脈炎，這些毒副作用使吡硫醇及其鹽的臨床應用受到了很大限制。
發(fā)明內容本發(fā)明研究人員經過大量試驗研究，將吡硫醇及其鹽與藥用輔料混合，最終研制出吡硫醇及其鹽脂質體制劑，本發(fā)明制劑明顯改善吡硫醇及其鹽的血管刺激性的缺陷；本發(fā)明制劑制備工藝簡單、包封率高、適合于大規(guī)模生產、環(huán)境污染小；藥理試驗表明本發(fā)明制劑具有預防動脈硬化和軟化血管的作用，對心腦血管疾病有積;防和治療作用。本發(fā)明的目的在于提供一種能夠明顯減輕血管刺激訓L淳及其鹽脂質體制劑。本發(fā)明的目的還在于提供一種制備工藝簡單、包封率高、適合于大規(guī)模生產、環(huán)境污染小的吡硫醇及其鹽脂質體制劑。本發(fā)明的目的還在于提供一種吡硫醇及其鹽脂質體的制備方法。本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)一、制備工藝l.處方重量份組成:主藥膜材膽固醇維生素E緩沖系統(tǒng)-50重量份;-ioo重量份-20重量份l-12重量份25-150重量份200-1500重量份2.制備方法(1)稱取膜材、膽固醇和維生素E，采用乙醇注入法用乙醇使其溶解，混合均勻，得到溶液A;(2)將主藥、海藻糖加到pH為4.5-5.5的緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至60-70°C，得到溶液B;(3)將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;(4)將上述溶液C通過高壓均質機3-10次，過0.22-lum微孔濾膜整粒，凍千，即得主藥脂質體；3.制劑的制備將主藥脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服乳劑、口服液、注射液、粉針劑。本發(fā)明處方中的主藥為吡硫醇及其鹽，其中吡硫醇的鹽包括鹽酸吡硫醇，醋酸吡硫醇，硫酸吡硫醇，磷酸吡硫醇。本發(fā)明處方中的緩沖系統(tǒng)選自磷酸鹽緩沖系統(tǒng)、檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)、碳酸鹽緩沖系統(tǒng)。本發(fā)明制備方法中主藥脂質體平均粒徑為200士50nm，包封率大于80%。本發(fā)明處方中膜材為天然磷脂、天然大豆磷脂、合成磷脂。本發(fā)明制備方法中乙醇注入法還可以是前體脂質體法、逆相蒸發(fā)法、薄膜分散法、機械法、擠出法、pH梯度法。本發(fā)明制備方法中高壓均質機還可以是乳勻機、勻漿機、高壓微射流、擠出儀、納米機。二、剌激性試驗為了證明本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑能夠明顯改善血管刺激性，本發(fā)明研究人員對該制劑進行了如下的藥效學試驗試藥與動物本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由北京華融中惠醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司中藥實驗室提供)；家兔，大耳白(一級)，雄性，2.2-2.7kg;SD大鼠，雄性，200-250g;ICR小鼠，雌雄各半，20-24g;l.血管刺激試驗取家兔24只，隨機分為四組，每組6只，每日給家兔耳靜脈注射本發(fā)明制劑lml/kg體重，右側耳緣靜脈分別注射5%葡萄糖注射液對照品lml/kg體重，連續(xù)三次后，末次注射后24小時，各組處死半數(shù)動物，取耳組織(注射部位以上2cm處，近心端)，10%甲醛固定，送病理作切片檢杳。末次注射后72小時，各組處死剩余半數(shù)動物，取耳組織(注射部位以上2cm，近心端)，10%甲醛固定，送病理作切片檢査。標本處理取兔耳組織，10%甲醛固定。常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色。觀察方法給藥后肉眼觀察有無明顯的腫脹、出血等刺激癥狀，末次給藥后有無明顯的刺激癥狀。鏡下分別觀察各點血管擴張、有無出血和炎細胞浸潤的情況；實驗結果見表l。表1:光鏡觀察家兔耳靜脈注射對血管的局部刺激作用組別給藥時間血管擴張出血炎細胞浸潤本發(fā)明制劑組24—一—對照組24——一本發(fā)明制劑組72一——對照組72——一注"--"表示"未出現(xiàn)"實驗結果表明本發(fā)明制劑組肉服及光鏡觀察均無明顯炎癥刺激性反應的表現(xiàn)。2.肌肉刺激試驗取大鼠48只，隨機分為四組，12只/組各組大鼠左側后腿股四頭肌注射本發(fā)明制劑組；右側后腿股四頭肌注射葡萄糖注射液；給藥體積均為0.2ml/10g體重，連續(xù)三次；末次注射后24小時，各組處死半數(shù)動物，取F股四頭肌組織，10%甲醛固定，送病理作切片檢查。末次注射后72小時，各組處死剩余半數(shù)動物，取下股四頭肌組織，10%甲醛固定，送病理作切片檢査。標本處理取大鼠股四頭肌組織，10%甲醛固定。常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色。觀察方法末次給藥24或72小時后，縱向切開注射部位肌肉，肉眼和鏡下觀察注射部位有無明顯的充血、水腫、變性或壞死等刺激現(xiàn)象；試驗結果見表2。表2:光鏡觀察藥物對大鼠肌肉局部的刺激作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實驗結果表明本發(fā)明制劑組的刺激性能夠得到明顯的控制。三、制備實施例實施例1稱取5g天然磷脂、5g膽固醇和10mg維生素E，采用乙醇注入法用乙醇使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將5g吡硫醇、200g海藻糖加到25gpH為4.5的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至6(TC，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加磷酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將h述溶液C通過高壓均質機3次，過0.22um微孔濾膜整粒，凍干，即得吡硫醇脂質休；將吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成片劑。實施例2:稱取100g天然大豆磷脂、20g膽固醇和120mg維生素E，采用前體脂質休法使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將50g鹽酸吡硫醇、1500g海藻糖加到150gpH為5的檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至7(TC，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過乳勻機10次，過lum微孔濾膜整粒，凍干，即得鹽酸吡硫醇脂質體；將鹽酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成顆粒劑。稱取70g合成磷脂、15g膽固醇和90mg維生素E，采用逆相蒸發(fā)法使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將30g醋酸吡硫醇、1200g海藻糖加到130gpH為5.5的碳酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至65。C，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加碳酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過勻漿機4次，過0.22um微孔濾膜整粒，凍干，即得醋酸吡硫醇脂質體；將醋酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成膠囊劑。實施例4:稱取100g天然磷脂、5g膽固醇和120mg維生素E，采用薄膜分散法使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將5g硫酸吡硫醇、1500g海藻糖加到25gpH為4.8的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至6(TC，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加磷酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過高壓微射流5次，過0.22um微孔濾膜整粒，凍干，即得硫酸吡硫醇脂質體；將硫酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成口服乳劑。實施例5:稱取5g天然大豆磷脂、20g膽固醇和10mg維生素E，采用機械法使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將50g磷酸吡硫醇、200g海藻糖加到150gpH為5.2的檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至7(TC，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過擠出儀6次，過lum微孔濾膜整粒，凍干，即得磷酸吡硫醇脂質體；將磷酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成口服液。實施例6:稱取750g合成磷脂、16g膽固醇和110mg維生素E，采用擠出法使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將40g磷酸吡硫醇、800g海藻糖加到125gpH為4.5的碳酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至65"C，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加碳酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過納米機7次，過0.22um微孔濾膜整粒，凍干，即得磷酸吡硫醇脂質體；將磷酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成注射液。實施例7:取750g天然磷脂、16g膽固醇和110mg維生素E，采用pH梯度法使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將40g吡硫醇、800g海藻糖加到125gpH為4.5的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至6(TC，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加磷酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過高壓均質機8次，過lum微孔濾膜整粒，凍干，即得吡硫醇脂質體；將吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成粉針劑。稱取750g大然大豆磷脂、16g膽同醇和110mg維生素E，采用乙醇注入法用乙醇使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將40g鹽酸吡硫醇、800g海藻糖加到125gpH為4.5的檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至65'C，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過乳勻機9次，過0.22um微孔濾膜整粒，凍干，即得鹽酸吡硫醇脂質體；將鹽酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成片劑。實施例9:稱取750g合成磷脂、16g膽固醇和110mg維生素E，釆用機械法使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將40g醋酸吡硫醇、800g海藻糖加到125gpH為4.5的碳酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至60'C，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加碳酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過擠出儀10次，過lum微孔濾膜整粒，凍干，即得醋酸吡硫醇脂質體；將醋酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成注射液。實施例10:稱取750g天然磷脂、16g膽固醇和110mg維生素E，采用乙醇注入法用乙醇使其溶解，混合均勻，得到溶液A;將40g磷酸吡硫醇、800g海藻糖加到125gpH為4.5的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至60-70。C，得到溶液B;將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加磷酸鹽緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;將上述溶液C通過高壓均質機6次，過0.22um微孔濾膜整粒，凍下，即得磷酸吡硫醇脂質體；將磷酸吡硫醇脂質體與藥劑學上適宜輔料結合，制成粉針劑。四、藥理試驗試藥與動物注射用鹽酸吡硫醇(市售品)；本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由北京華融屮惠醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司屮藥實驗室提供)；Wistar大鼠，體重180-220g;健康昆明種小鼠，體重20-24g;l.對小鼠缺氧耐力的影響實驗實驗方法取健康昆明種小鼠30只，體重20-24g。隨機分成生理鹽水對照組、注射用鹽酸吡硫醇組、本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組。每組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。以人常規(guī)治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量-已知動物給藥量x待測動物的體表面積比值/己知動物的休表面積比值。對照組給生理鹽水，1次/天，連續(xù)7天。于末次給藥后1小吋，將小鼠分別置于體積為150ml磨U瓶中，內放15g鈉石灰，密閉觀察其存活時間；結果見表4。表4對小鼠常壓缺氧的影響(3C士SD)組別鼠數(shù)(只)平均存活時間(mm)對照組1018.12土].67注射用鹽酸吡硫醇組1029.41±1.15*本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組1034.05±1.28*#注與對照組比較*P<0.01;與注射用鹽酸吡硫醇組比較#P<0.05。實驗結果表明本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑的作用強于注射用鹽酸吡硫醇。2.對小鼠心肌缺氧的保護作用實驗實驗方法取健康昆明種小鼠30只，體重20-24g，隨機分成對照組，注射用鹽酸吡硫醇組、本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組。每組雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。以人常規(guī)治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量=已知動物給藥量x待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給生理鹽水。給藥方法l次/天，連續(xù)6天。于末次給藥后1小吋用烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分離氣管，以動脈夾夾閉氣管，用心電儀觀察心電，并用秒表記下小鼠夾閉氣管后至心電消失的時間；結果見表5。表5對小鼠心肌缺氧的影響(X士SD)組別鼠數(shù)(只)平均存活時問(min)對照組1010.43+1.27注射用鹽酸吡硫醇組1015.68±1.47*本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組1021.43±1.52*#注與對照組比較*P<0.01;與注射用鹽酸吡硫醇組比較弁P0.05實驗結果表明本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑的作用強于注射用鹽酸吡硫醇。3.對大鼠體內血栓形成的影響取Wistar大鼠30只，體重180-220g，隨機分成3組，每組10只，分別為生理鹽水對照組、注射用鹽酸吡硫醇組、本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組u以人常規(guī)治療劑量折算為大鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量=已知動物給藥量x待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。將各組動物給藥(生理鹽水組給予等體積的生理鹽水)，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后l小時，將大鼠用10%水合氯醛，按0.3g/kg體重麻醉后固定，分離左頸總動脈，在血栓儀上以2mA電流刺激血管7分鐘后，記錄血栓形成時間；結果見表6。表6對大鼠體內血栓形成的影響(S士SD)組別鼠數(shù)(.只)血栓形成時問(min)對照組1017.23±1.84注射用鹽酸吡硫醇組1028.47±1.65*本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組1035.62±].98*#注與對照組比較叩O.01;與注射用鹽酸吡硫醇組比較#P<0.05實驗結果表明本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑的作用強于注射用鹽酸吡硫醇。4.抗血小板聚集作用取Wistar大鼠30只，體重180-220g，隨機分成3組，每組10只，分別為對照組、注射用鹽酸吡硫醇組、本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組。以人常規(guī)治療劑量折算為大鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量=己知動物給藥量x待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。各組動物給藥，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時，動物麻醉后自腹主動脈取血，抗凝劑采用3.28%枸櫞酸鈉，與血液以1:9比例混合。將抗凝全血在2(TC條件下1500rmirf1離心5min，獲得富血小板血漿(platelet-richplasma，PRP)。留取定量PRP后，將剩余PRP再次以3000r.min"離心10min，獲得自身對照貧血小板血漿(platelet-poorplasma，PPP)。以PPP調節(jié)PRP濃度，使各PRP濃度相同。將PRP在37。C的恒溫孔中預熱后，加入ADP(終濃度為Sjimol.L")引起血小板聚集，記錄最大聚集率；結果見表7。表7抗血小板聚集作用(i±SD)組別鼠數(shù)(只)最大聚集率(Tl/%)對照組1083.25上11.67注射用鹽酸吡硫醇組1061.44±13.18*本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質體制劑組1045.36±12.53*#注與對照組比較沐P〈0.01;與注射用鹽酸吡硫醇組比較#P<0.05實驗結果表明本發(fā)明吡硫醇及其鹽脂質休制劑的作用強于注射用鹽酸吡硫醇。權利要求1.一種吡硫醇及其鹽脂質體，其特征在于處方重量份組成為主藥5-50重量份，膜材5-100重量份，膽固醇5-20重量份；維生素E1-12重量份；緩沖系統(tǒng)25-150重量份；海藻糖200-1500重量份。2.如權利要求1所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體，其特征在于主藥為吡硫醇及其鹽，其中吡硫醇的鹽包括鹽酸吡硫醇，醋酸吡硫醇，硫酸吡硫醇，磷酸吡硫醇。3.如權利要求1所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體，其特征在于緩沖系統(tǒng)選自磷酸鹽緩沖系統(tǒng)、檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)、碳酸鹽緩沖系統(tǒng)。4.如權利要求1所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體，其特征在于膜材為天然磷脂、天然大豆磷脂、合成磷脂。5.—種吡硫醇及其鹽脂質體的制備方法，其特征在于包括如下歩驟(1)稱取膜材、膽固醇和維生素E，采用乙醇注入法用乙醇使其溶解，混合均勻，得到溶液A;(2)將主藥、海藻糖加到pH為4.5-5.5的緩沖系統(tǒng)中溶解，并加熱至60-70°C，得到溶液B;(3)將溶液A注入溶液B中，恒溫高速攪拌，減壓蒸發(fā)揮去乙醇，加緩沖系統(tǒng)調整得溶液C;(4)將上述溶液C通過高壓均質機3-10次，過0.22-lum微孔濾膜整粒，凍干，即得主藥脂質體。6.如權利要求5所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體的制備方法，其特征在于乙醇注入法還可以是前體脂質體法、逆相蒸發(fā)法、薄膜分散法、機械法、擠出法、pH梯度法。7.如權利要求5所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體的制備方法，其特征在于主藥脂質體平均粒徑為200土50nm，包封率大于80%。8.如權利要求1所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體的用途，用于制備具有減少血管刺激性作用的藥物。9.如權利要求1所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體的用途，用于制備具有預防動脈硬化和軟化血管作用的藥物。10.如權利要求1所述的一種吡硫醇及其鹽脂質體的用途，用于制備具有預防和治療心腦血管疾病作用的藥物。全文摘要本發(fā)明涉及一種吡硫醇及其鹽脂質體的制備方法和應用，本發(fā)明研究人員經過大量試驗研究，將吡硫醇及其鹽與藥用輔料混合，最終研制出吡硫醇及其鹽脂質體制劑，本發(fā)明制劑明顯改善吡硫醇及其鹽的血管刺激性的缺陷；本發(fā)明制劑制備工藝簡單、包封率高、適合于大規(guī)模生產、環(huán)境污染??；藥理試驗表明本發(fā)明制劑具有預防動脈硬化和軟化血管的作用，對心腦血管疾病有積極的預防和治療作用。文檔編號A61K9/127GK101612123SQ20081011538公開日2009年12月30日申請日期2008年6月23日優(yōu)先權日2008年6月23日發(fā)明者楊于,兵佟,曹曉冬,漆新國,王立強,闞迎昕,顏文革申請人:佟兵;北京百美特醫(yī)藥有限責任公司;北京博時安泰科技發(fā)展有限公司