專利名稱：一種紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
20世紀60年代后期美國科學家從太平洋紫杉的樹皮中分離提取出了一種化學 結(jié)構(gòu)新穎(單體雙萜類化合物)的藥物，將其命名為紫杉醇(Paclitaxel) 。 80 年代初，紫杉醇被發(fā)現(xiàn)具有獨特的抗腫瘤作用(即促進癌細胞分裂過程中微管蛋白 的聚集，穩(wěn)定微管，最終造成癌細胞凋亡)，從而受到國際醫(yī)藥界的普遍重視。1992 年紫杉醇被美國FDA正式批準用于晚期卵巢癌、肺癌、子宮癌等治療，商品名為 Taxol ,是目前世界上最好的抗癌藥物之一。我國于90年代初仿制成功，商品名 有泰素《、紫素@等，在我國的腫瘤臨床治療中，紫杉醇己經(jīng)成為首選的化療藥物。 同時，因其藥理作用機制獨特，紫杉醇對風濕性關(guān)節(jié)炎、中風、早老性癡呆癥也顯 示出良好的治療前景。
紫杉醇及其制劑的發(fā)展受到原料的限制。目前，商業(yè)用紫杉醇是從紅豆杉的樹 皮中提取的，這種方法的缺憾是樹皮資源匱乏(每生產(chǎn)lkg紫杉醇，需16. 67t樹皮， 采剝1500 2000棵大樹)，而且威脅植物生存，如不加以遏制終將導致瀕危物種的 滅絕。紅豆杉資源的匱乏及生態(tài)保護的限制，必然導致紫杉醇生產(chǎn)的阻滯，因而廣 辟生產(chǎn)途徑，解決紫杉醇資源貧乏問題變得十分迫切。目前世界各國都在尋找新的 紫杉醇生產(chǎn)途徑，主要集中在合成、半合成、結(jié)構(gòu)改造、組織培養(yǎng)、真菌研究以及 天然資源的利用和發(fā)展(栽培)等方面。
除了資源匱乏，水溶性低的問題也限制了紫杉醇的臨床應用。紫杉醇水溶性很 低(溶解度僅為0.006mg/ml) ， 口服幾乎不吸收，臨床應用的主要是紫杉醇注射液。 目前在國內(nèi)、外上市的注射劑主要是用表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油(Crem叩hor EL) 與無水乙醇(1:1)作為混合溶媒制成的制劑，注射給藥前用生理鹽水或5%葡萄糖 溶液稀釋到給藥濃度。該制劑存在的主要問題如下-
①毒性和致敏性主要是聚氧乙烯蓖麻油導致的過敏反應，包括支氣管痙攣、 呼吸急促、疲倦、低血壓等；在生產(chǎn)過程中容器、注射器、輸液袋與聚氧乙烯蓖麻 油接觸會浸出大量的增塑劑鄰苯二甲酸二乙基乙酯，也導致過敏反應。因此臨床應用時一般預先用糖皮質(zhì)激素和抗組胺藥來阻止過敏反應的發(fā)生，這給應用過程帶來 不便，也給患者帶來很大的痛苦。
② 稀釋后的不穩(wěn)定性當該制劑被稀釋至0.3-1.2g/L時，若超過24h，會出現(xiàn) 顆粒性沉淀，影響紫杉醇的吸收利用，而且分析表明該沉淀已不是紫杉醇。
③ 配伍變化臨床常用的60種藥物與紫杉醇配伍會引起輸液混濁，某些藥物 與紫杉醇競爭結(jié)合血漿蛋白，使毒性增加。
針對以上問題，為了降低紫杉醇的全身毒性和溶媒的毒副作用，提高紫杉醇的 用藥安全性和順應性，有必要對紫杉醇的劑型進行改造。近年來，國內(nèi)外藥學工作 者對紫杉醇的藥用劑型進行了大量的研究和探討，主要集中在兩大方面
① 提高紫杉醇的水溶性，減少制劑中的CremophorEL:例如可溶性半合成紫杉 醇衍生物的研究，即在紫杉醇上連接一些水溶性基團，制成水溶性前藥。水溶性前 藥在生理條件下水解釋放出紫杉醇，不需要Cremophor的增溶作用，還能夠降低藥 物的全身清除率。但是水溶性前藥一般不穩(wěn)定，在一定程度上還會影響紫杉醇的藥 效，因此還沒有正式商品化。
② 新的紫杉醇給藥系統(tǒng)的研究主要是采用新的耙向載體如脂質(zhì)體、微球、脂 質(zhì)微球/囊、納米粒、乳劑、毫微球等將其制成靶向制劑，從而提高紫杉醇在腫瘤 部位的濃度，降低血液及其它組織中的藥物濃度，不僅可提高療效，還可以降低全 身毒副作用。此外還采用環(huán)糊精包合、聚乙二醇衍生物等。
目前紫杉醇涂層支架己經(jīng)進入了臨床應用。美國波士頓科學公司開發(fā)的 TAXUSTM紫杉醇藥物釋放冠狀動脈支架已經(jīng)上市。這種藥物釋放支架覆蓋有一種可 向動脈血管壁提供藥物紫杉醇的聚合物載體，紫杉醇通過多種途徑抑制支架內(nèi)平滑 肌細胞過度增生而抑制再狹窄，聚合物載體黏附在支架上，置入后控制逐步釋放， 使TAXUSTM支架成為具有突破性意義的藥物釋放支架。白蛋白結(jié)合紫杉醇納米粒注 射混懸液(paclitaxel， ABRAXANE)也被美國FDA批準上市，用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌聯(lián) 合化療失敗后或輔助化療6個月內(nèi)復發(fā)的乳腺癌。本品僅由白蛋白結(jié)合紫杉醇納米 粒組成，不含有毒溶媒，因此用藥劑量比Cremophor大，故可增強抗腫瘤作用。此 外，白蛋白是正常向細胞輸注營養(yǎng)的蛋白質(zhì)，在快速生長的腫瘤中積蓄。因而，白 蛋白結(jié)合的紫杉醇可定向釋放至腫瘤細胞，提高藥物的療效。
但是，大多數(shù)紫杉醇靶向制劑目前尚處于實驗研究階段，其開發(fā)還有許多問題 有待解決，如脂質(zhì)體靶向系統(tǒng)存在穩(wěn)定性差、耙向分布不理想、工業(yè)化生產(chǎn)困難等缺點。因此，如何將治療藥物安全、高效、靶向性地導入人體內(nèi)特定器官、組織，
并提高藥物在靶組織內(nèi)的濃度是目前研究的重點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法。
本發(fā)明提供的紫杉醇脂質(zhì)制劑，包括如下組分紫杉醇、聚乙二醇-十二羥基 硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰膽堿含量大于80%。
所述制劑中還包括助溶劑；所述助溶劑為碳原子總數(shù)為三以下的一元醇、二元 醇或三元醇。
所述助溶劑具體可為無水乙醇、丙二醇、甘油中的至少一種。
所述制劑中還包括pH調(diào)節(jié)劑。
所述pH調(diào)節(jié)劑具體可為無水擰檬酸。
所述制劑可包括如下質(zhì)量份的各組分紫杉醇O. 1-2，聚乙二醇-十二羥基硬脂 酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水檸檬酸0. 1-0. 2。
所述制劑具體包括如下質(zhì)量份的各組分紫杉醇0.6，聚乙二醇-十二羥基硬脂 酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水檸檬酸O. 18。
當然，該所述制劑也可以僅由如下質(zhì)量份的各組分組成紫杉醇0.6，聚乙二 醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水擰檬酸0. 18。
上述紫杉醇脂質(zhì)制劑為淡黃色油狀液體，穩(wěn)定性良好，稀釋后能自發(fā)乳化形成 粒徑10-200nm的納米粒子。
本發(fā)明還提供了一種制備所述的紫杉醇脂質(zhì)制劑的方法，包括如下步驟
1) 將所述磷脂加入助溶劑，45-55"C加熱溶解，得到溶液A;將紫杉醇、無水 檸檬酸和聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯加入助溶劑，常溫溶解,得到溶液B;
2) 將溶液A和溶液B混合。
本發(fā)明還提供了一種紫杉醇納米制劑，是用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液或注 射用水將所述紫杉醇脂質(zhì)制劑稀釋5-100倍，優(yōu)選稀釋20倍，得到的納米制劑。 上述紫杉醇納米制劑可直接作為注射用劑。 以上紫杉醇納米制劑的制備方法也屬于本發(fā)明的保護范圍。 發(fā)明人針對紫杉醇臨床應用存在的問題，采用高純度磷脂和一種新的增溶劑 Solutol HS15 (聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯)，制成一種新的脂質(zhì)制劑，可以降 低毒性及過敏反應，同時該制劑在臨用時用生理鹽水溶液、葡萄糖溶液、或注射用水稀釋后可自發(fā)乳化成納米級的粒子，吸收效果大大增強，從而藥效得以進一步提 高。
Solutol⑧HS15，是一種新型的高性能、極低毒性的增溶劑，其優(yōu)越性體現(xiàn)在
① 高增溶能力與聚山梨醇酯80的對比研究表明，Solutol HS15對疏水藥物 的溶解能力隨著溶劑濃度的增加而呈線性增加，而使用聚山梨醇酯80時，在達到 較高濃度時藥物的溶解量并沒有進一步增加。而另一實驗表明，隨著20%的 Solutol HS15的使用，不同藥物如克霉唑、雌二醇、磺胺噻唑、心痛定、酰胺咪嗪、 吡羅昔康等的水溶性增加，根據(jù)分子結(jié)構(gòu)不同其水溶解度被提高10-100因數(shù)，不 管化學結(jié)構(gòu)或藥物溶解的最大劑量怎樣，膠粒的直徑不變，均在13nm左右。 Soluto^HS15的這種高增溶能力使低容量高劑量的注射成為可能。
② 低組胺釋放使用前無需使用抗組胺劑和類皮質(zhì)激素。與聚山梨醇酯80相 比，靜脈注射SolutoWHS15后，狗的血清組胺水平低很多倍，15min后聚山梨醇酯 80組的血清組胺水平大于50000nMo1，而Solutol HS15組僅為220nMol; 60min后 聚山梨醇酯80組的血清組胺水平為247 nMol，而Solutol HS15組僅為8nMo1。
③ 低溶血作用與聚山梨醇酯80的對比研究表明，雖然隨著增溶劑濃度的增 加溶血作用增強，但是聚山梨醇酯80組的紅血球溶解量高于Solutol HS15組10 倍以上，表明這種新的增溶劑具有較低的毒性和刺激性。
此外這種新的增溶劑還具有較高的生理耐受性、較低的粘度，并且可以采用蒸 汽滅菌法，無需昂貴的無菌制造工藝，目前該溶劑已收入德國藥典，在美國和加拿 大已通過用于人體注射的審定。
本發(fā)明提供的紫杉醇脂質(zhì)制劑由于選用了新型的增溶劑SolUtol HS15以及合 適的載體材料，大大提高了紫杉醇的溶解性，同時可避免使用Crera叩hor EL帶來 的毒副作用，提高了紫杉醇制劑的安全性和順應性；而且該制劑稀釋后可自發(fā)乳化 形成納米粒子，用于靜脈注射，可以增加紫杉醇的體內(nèi)吸收，并且通過控制其乳化 粒度的大小可達到腫瘤靶向的目的；本發(fā)明的制備工藝簡單易行，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。


圖1為紫杉醇納米制劑乳化后粒度檢測結(jié)果-光強粒度多峰分布 圖2為紫杉醇納米制劑乳化后粒度檢測結(jié)果-光強粒度正態(tài)分布具體實施方式
下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。 實施例1、紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
一、 紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
1、 稱取5g磷脂(德國Lipoid公司)和10g丙二醇，45"C水浴加熱溶解，得 到溶液A。
2、 稱取0.6g紫杉醇、15g HS15 (德國BASF公司)、5g甘油、0. 18g無水檸 檬酸、65g無水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到紫杉醇脂質(zhì)制 劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到紫杉醇納 米制劑。
三、 紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態(tài)光散射儀檢測紫杉醇納米制 劑的粒徑。紫杉醇納米制劑的平均粒徑為43. 5nm。 實施例2、紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
一、 紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
1、 稱取20g磷脂和10g無水乙醇，55。C水浴加熱溶解，得到溶液A。
2、 稱取0.6g紫杉醇、50g HS15、 0. 18g無水檸檬酸、20g無水乙醇，常溫溶 解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到紫杉醇脂質(zhì)制 劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的注射用水稀釋，得到紫杉醇納 米制劑。
三、 紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態(tài)光散射儀檢測紫杉醇納米制 劑的粒徑。紫杉醇納米制劑的平均粒徑為166.4nm。 實施例3、紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備 一、紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備1、 稱取10g磷脂和10g丙二醇，5(TC水浴加熱溶解，得到溶液A。
2、 稱取0.6g紫杉醇、36gHS15、 15g甘油、0. 18g無水檸檬酸、29g無水乙醇， 常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到紫杉醇脂質(zhì)制 劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到紫杉醇納 米制劑。
三、 紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態(tài)光散射儀檢測紫杉醇納米制 劑的粒徑。在25±0. rC的穩(wěn)定環(huán)境下，粒徑檢測結(jié)果見圖l和圖2。結(jié)果表明， 紫杉醇納米制劑的平均粒徑為26.6nm，粒度分布均勻。
實施例4、紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
一、 紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
1、 稱取12g磷脂和8g無水乙醇，45i:水浴加熱溶解，得到溶液A。
2、 稱取0.6g紫杉醇、36gHS15、 18g甘油、0. 18g無水檸檬酸、26g無水乙醇， 常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫攪拌、混合均勻，過濾，得到紫杉醇脂質(zhì)制 劑，通氮氣保護，密封保存。
二、 紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的葡萄糖溶液稀釋，得到紫杉醇 納米制劑。
三、 紫杉醇納米制劑的粒徑測定
用美國Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動態(tài)光散射儀檢測紫杉醇納米制 劑的粒徑。紫杉醇納米制劑的平均粒徑為127nm。 實施例5、急性毒性試驗
1、 實驗動物及分組
健康昆明種小鼠(18-22g) 50只，雌雄各半。將小鼠隨機分為5組，每組10只。
2、 紫杉醇注射液的制備
按質(zhì)量比l:l配制Crem叩hor EL/無水乙醇，作為混合溶媒。將3g紫杉醇溶于500ml的CremophorEL/無水乙醇混合溶媒，得到紫杉醇注射液，作為對照組受試物。 3、給藥
對照組(IO只小鼠)腹腔注射紫杉醇注射液，給藥劑量為45mg/Kg。 實驗組I (IO只小鼠)腹腔注射實施例l制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥劑量 為45mg/Kg。
實驗組II (IO只小鼠)腹腔注射實施例2制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥劑量 為45mg/Kg。
實驗組III (IO只小鼠)腹腔注射實施例3制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥劑量 為45mg/Kg。
實驗組IV (IO只小鼠)腹腔注射實施例4制備的紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥劑量 為45mg/Kg。
觀察給藥后實驗組與對照組小鼠的毒性反應癥狀。
結(jié)果表明對照組小鼠表現(xiàn)出明顯的毒性反應癥狀，四肢伏地、呼吸急促、瀕 臨死亡，給藥后4h即有小鼠死亡， 一周后小鼠死亡率為80%。注射紫杉醇脂質(zhì)制劑 的4組小鼠毒性反應癥狀明顯減輕，表現(xiàn)為反應遲緩、狀態(tài)萎靡、體重減輕。實驗 組I至實驗組IV分別在給藥后第2天、第2天、第3天、第3天才有小鼠死亡，給藥后 一周小鼠死亡率分別為50%、 60%、 50%、 40%，明顯低于對照組。
以上實驗結(jié)果表明，與紫杉醇注射液相比較，紫杉醇脂質(zhì)制劑的毒性有所降低， 安全性得以提高，從而為研究長效、低毒、安全性好的紫杉醇制劑奠定了基礎(chǔ)。
權(quán)利要求
1、一種紫杉醇脂質(zhì)制劑，包括如下組分紫杉醇、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰膽堿含量大于80％。
2、 如權(quán)利要求1所述的制劑，其特征在于所述制劑中還包括助溶劑；所述助 溶劑為碳原子總數(shù)為三以下的一元醇、二元醇或三元醇。
3、 如權(quán)利要求2所述的制劑，其特征在于所述助溶劑為無水乙醇、丙二醇、 甘油中的至少一種。
4、 如權(quán)利要求1至3中任一所述的制劑，其特征在于所述制劑中還包括pH調(diào) 節(jié)劑。
5、 如權(quán)利要求4所述的制劑，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)劑為無水擰檬酸。
6、 如權(quán)利要求5所述的制劑，其特征在于所述制劑包括如下質(zhì)量份的各組分:紫杉醇O. 1-2，聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水 檸檬酸0. 1-0.2。
7、 如權(quán)利要求6所述的制劑，其特征在于所述制劑包括如下質(zhì)量份的各組分: 紫杉醇0.6，聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無水檸 檬酸O. 18。
8、 一種制備權(quán)利要求7所述的紫杉醇脂質(zhì)制劑的方法，包括如下步驟1) 將所述磷脂加入助溶劑，45-55。C加熱溶解，得到溶液A;將紫杉醇、無水檸 檬酸和聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯加入助溶劑，常溫溶解,得到溶液B;2) 將溶液A和溶液B混合。
9、 一種制備紫杉醇納米制劑的方法，是用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液或注射 用水將權(quán)利要求1至7中任一所述的紫杉醇脂質(zhì)制劑稀釋5-100倍，優(yōu)選稀釋20倍， 得到的納米制劑。
10、 一種紫杉醇納米制劑，是用權(quán)利要求9所述方法制備得到的。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法。本發(fā)明的紫杉醇脂質(zhì)制劑，包括如下組分紫杉醇、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯和磷脂。本發(fā)明提供的紫杉醇脂質(zhì)制劑，提高了紫杉醇制劑的安全性和順應性，該制劑稀釋后可自發(fā)乳化形成納米粒子用于靜脈注射，增加紫杉醇的體內(nèi)吸收，并且可達到腫瘤靶向的目的。本發(fā)明的制備工藝簡單易行，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K9/127GK101632636SQ20081011697
公開日2010年1月27日 申請日期2008年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月22日
發(fā)明者張小寧, 晚 王, 鄔月明, 文 邰, 郝艷麗 申請人:清華大學