專利名稱：：中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是用于預(yù)防和治療尿結(jié)石的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：尿結(jié)石(尿石癥)為泌尿系統(tǒng)常見病，多發(fā)病。尿石癥的發(fā)病率受遺傳，營養(yǎng)，環(huán)境等多種因素影響。由于各民族生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)和遺傳基因的不同，我國尿石癥的發(fā)病率存在民族差異、年齡差異、性別差異。近幾十年來，隨著我國社會經(jīng)濟狀況的改變，尿石癥患者的構(gòu)成發(fā)生了明顯變化，尿石癥分布的地區(qū)差異、年齡差異、性別差異明顯縮小，發(fā)病率有逐年增加的趨勢，目前我國尿石癥的發(fā)病年齡高峰為2150歲。尿結(jié)石可造成腎臟局部炎性浸潤，并蔓延至周圍組織，長期的結(jié)石壓迫可引起梗阻，導(dǎo)致腎盂腎炎、腎積水、惡性病變、腎功能衰竭等一系列病理改變，嚴(yán)重影響國民健康和生活質(zhì)量。金錢草為報春花科植物過路黃ayw'鵬c/w'a02^s"77aeHance)的干燥全草，又名大金錢草、對座草、路邊黃、遍地黃等。主要分布于長江流域，北至陜西，南到貴州、四川、云南等省，其中以四川為主產(chǎn)地。金錢草味苦，酸，微寒，歸肝，膽，腎，膀胱經(jīng)。功能清熱解毒，利尿排石，活血散淤。用于肝、膽結(jié)石，膽囊炎，黃疸性肝炎，泌尿系結(jié)石，水腫，跌打損傷，毒蛇咬傷，毒蕈及藥物中毒；外用治化膿性炎癥，燒燙傷。藥理研究證明金錢草能顯著促進大鼠膽汁分泌，明顯降低致石豚鼠膽汁中游離膽紅素和鈣離子的含量，顯著提高總膽汁酸的含量，抑制膽紅素結(jié)石的形成[中藥藥理與臨床.2004:20(2):21-22]。金錢草是治療尿結(jié)石的傳統(tǒng)藥物，療效經(jīng)多年的臨床應(yīng)用得到良好的驗證。金錢草的治療尿結(jié)石作用主要有三個方面1、使堿性尿液酸性化，并起到溶石的作用；2、松弛、擴張膀胱、輸尿管平滑肌，利于結(jié)石排出；3、顯著利尿效應(yīng)，增加腎盂、輸尿管內(nèi)壓，起到推石下移的作用[中西醫(yī)結(jié)合臨床[J].2004:4(3):44]。目前金錢草作為中藥治療結(jié)石的金石之藥，在抗結(jié)石復(fù)方中廣泛應(yīng)用，但迄今為止，其抗結(jié)石作用的物質(zhì)基礎(chǔ)一有效成分尚不明確。有研究認為槲皮素和山柰素是金錢草的主要藥理活性成分[江蘇藥學(xué)與臨床研究.2005:13(1):31-33]，另外所含的黃酮類化合物具有酚羥基可能是抗氧化作用的主要活性基團[中成藥，2005，27(2):239-241]。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是將金錢草分級提取，得到醇提物(JA)及四個分級產(chǎn)物，即石油醚部分(JB)、乙酸乙酯部分(JC)、正丁醇部分(JD)、水層部分(JE)，通過藥理試驗來證明中藥金錢草提取物JA、JB、JC、JD、JE是抗結(jié)石的活性成分，明顯降低大鼠尿液草酸和尿鈣含量，明顯降低腎組織損傷和結(jié)石沉積程度，明顯抑制草酸鈣晶體形成過程，延長結(jié)晶成核、形成、聚集的時間，延長三水草酸鈣結(jié)晶向一水草酸鈣結(jié)晶轉(zhuǎn)化的時間，抑制結(jié)晶的數(shù)量，降低結(jié)晶的大小及密度，從而抑制草酸鈣晶體形成，保護腎組織。中藥金錢草提取物JA、JB、JC、JD、JE作為預(yù)防和治療尿結(jié)石的活性成分，使直接、復(fù)合制成各種方便使用的藥物制劑或作為食品添加劑用于尿結(jié)石的防治。本發(fā)明采用金錢草藥材為報春花科植物過路黃(Ar^歷ac力^c力r^"/aeHance)的千燥全草。金錢草藥材用3090%乙醇，80。C10(TC加熱回流提取23次，每次0.52小時，過濾，合并兩次濾液，回收乙醇，水浴濃縮得總提取物醇浸膏(JA)，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水、分步萃取34次，合并同類萃取液，回收溶劑，濃縮，分別得金錢草的分級提取物，即石油醚部分(JB)、乙酸乙酯部分(JC)、正丁醇部分(JD)、水層部分(JE)。金錢草分級提取流程圖，見說明書附l。本發(fā)明通過藥理試驗證明了金錢草抗結(jié)石分級提取物的抗結(jié)石作用，是預(yù)防和治療尿結(jié)石的活性成分。本發(fā)明金錢草分級提取物作為預(yù)防和治療尿結(jié)石的活性成分，經(jīng)直接、復(fù)合制成各種方便使用的藥物制劑或作為食品添加劑，用于尿結(jié)石的防治。本發(fā)明藥效實驗結(jié)果如下1、體內(nèi)大鼠草酸鈣結(jié)石模型試驗金錢草抗結(jié)石分級提取物JA、JC、JD、JE可增加腎結(jié)石大鼠尿量，其中JA對尿量的增加較顯著；降低尿鈣、尿草酸的含量，其中JC、JE對尿液鈣含量的降低有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，JA、JE對尿液草酸含量的降低有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義;降低腎組織病變程度，減少腎組織草酸鈣晶體量；降低腎組織骨橋蛋白表達量，從而抑制草酸鈣結(jié)晶的腎組織的沉積。2.體外草酸鈣結(jié)晶動力學(xué)試驗-金錢草提取物可延長結(jié)晶誘導(dǎo)時間，在濃度24yg/ml時尤其明顯，其中JB、JD、JE在24ug/ml濃度與對照條件比較有顯著差異，提示金錢草提取物均可抑制草酸鈣結(jié)晶的形成；金錢草提取物JA、JB、JC、JD在高濃度24ug/ml時可明顯降低吸收峰值，表明可抑制草酸鈣結(jié)晶的生成量；金錢草提取物JA、JB、JC、JD、JE可延長草酸鈣結(jié)晶的達峰時間，抑制草酸鈣結(jié)晶的形成，各組在濃度0.2424ug/ml對Tmax的延長均在2倍以上；金錢草提取物均可押制草酸鈣結(jié)晶的成核速率，且JA、JB、JC、JD對成核速率的抑制在濃度0.2424ug/ml呈劑量相關(guān)性，濃度越大，抑制越強，而JE無劑量相關(guān)性；金錢草提取物均可抑制草酸鈣結(jié)晶的聚集速率，但各組分對聚集速率的抑制無劑量相關(guān)性。3.體外草酸鈣結(jié)晶形態(tài)學(xué)研究金錢草各提取物能影響草酸鈣結(jié)晶的形態(tài)、大小，延長三水草酸鈣結(jié)晶向一水草酸鈣結(jié)晶轉(zhuǎn)化的時間，抑制結(jié)晶的數(shù)量，從而降低結(jié)晶的大小及密度，強度依次為JB》JC〉JA》JD〉JE〉。綜上所述，本發(fā)明的金錢草醇提物和分級提取物能明顯降低大鼠尿液草酸和尿鈣含量，明顯降低腎組織損傷和結(jié)石沉積程度，明顯抑制草酸鈣晶體形成過程，延長結(jié)晶成核、形成、聚集的時間，延長三水草酸鈣結(jié)晶向一水草酸鈣結(jié)晶轉(zhuǎn)化的時間，抑制結(jié)晶的數(shù)量，降低結(jié)晶的大小及密度，從而抑制草酸鈣晶體形成，保護腎組織。金錢草醇提物和分級提取物是預(yù)防和治療尿結(jié)石的活性成分，可直接、復(fù)合制成各種方便使用的藥物制劑或作為食品添加劑用于尿結(jié)石的防治，特別是能制成顆粒劑、口服液、散劑、片劑、膠囊、丸劑等；作為食品添加劑可制成果汁或果肉型飲料、糖果、糕點等。圖1為金錢草分級提取流程圖。具體實施例方式實施例1本發(fā)明中的金錢草抗結(jié)石分級提取物使用的金錢草藥材為報春花科植物過路黃aj^z'/zacMac力n's"/7aeHance)的干燥全草。具體制備方法如下一.金錢草醇提物的獲得金錢草藥材5kg，加3090%乙醇(溶劑比1:810)浸泡過夜，加熱80100。C回流2小時，過濾。濾渣再用乙醇，回流提取2小時，過濾。合并兩次濾液，回收乙醇，水浴濃縮得醇浸膏(JA)。二.不同極性溶劑萃取金錢草醇提物適量，用水溶解后得混懸物1000ml左右，置于2L分液漏斗中，依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水分步萃取34次，合并同類萃取液，回收溶劑，水浴濃縮，分別得金錢草的分級提取物石油醚部分(JB)、乙酸乙酯部分(JC)、正丁醇部分(JD)、水層部分(JE)。濃縮的浸膏，稱重，計算得率。三.金錢草分級提取流程圖，見說明書附圖l。四.藥理試驗下面的藥理試驗將進一步具體說明金錢草分級提取物的抗結(jié)石作用。1.金錢草分級提取物抑制大鼠尿結(jié)石的作用l.l實驗方法大鼠80只，雄性，隨機分為8組，每組10只。除對照組小鼠每日飲用正常水外，其它各組均飲用成石水(1%的乙二醇+1%氯化銨)，連續(xù)飲用1周，同時各組按下述劑量給藥①對照組，ig.等體積水(lml/100g);②模型組，ig.等體積水；③排石顆粒組，ig.6g/kg;④總浸膏組(JA)，ig.500mg/kg;⑤石油醚部分(JB)，ig.200mg/kg，⑥乙酸乙酯部分(JC)，ig.200mg/kg;⑦正丁醇部分(JD)，ig.200mg/kg;⑧水層部分(JE)，ig.200mg/kg。每天給藥1次，連續(xù)1周。給藥前后各稱體重1次，比較實驗前后大鼠體重的變化。每天觀察動物表觀變化。于實驗第7天給藥后，用代謝籠收集各組大鼠12h尿液，并測定12h尿量、尿液pH值，尿液于-2(TC保存，測定12h尿鈣、尿草酸、尿鎂含量。第8天處死大鼠后，立即解剖腎臟，觀察腎外觀，并稱重，腎臟以10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片，作HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織形態(tài)及草酸鈣結(jié)晶分布；骨橋蛋白免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織的骨橋蛋白表達量。1.2實驗結(jié)果1.2.l對大鼠體重和腎臟重量、尿量、尿pH的影響腎結(jié)石模型大鼠，體重增長明顯抑制，腎臟指數(shù)增加，尿量明顯減少，尿pH下降，而金錢草各提取物各組對腎結(jié)石大鼠的體重抑制、腎臟指數(shù)增加，尿pH的降低無明顯的影響，而金錢草提取物JA、JC、JD、JE可增加腎結(jié)石大鼠尿量，其中金錢草提取物JA對尿量的增加有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，提取物JB對尿量無明顯的影響，結(jié)果見表l。表l對大鼠尿量、尿pH的影響(n=10，5±s)組別劑量(mg/kg)體重(g)腎臟指數(shù)(mg/g)尿量(ml/12h)尿pH對照—281.5±43.78.8±1.429.2±8.66.6±0.4模型—254.0±16.3#11.0±1.6抑17.4±5.O抑5.7±0.2鵬排石顆粒6000279.7±21.8**9.0±1.4**24.2±3.3**5.8±0.5JA500254.6±23.711.2±2.322.9±2.8**5.7±0.3200254.9±20.110.3±1.516.5±4.55.7±0.3了c200258.6±15.811.0±2.221.7±4.75.7±0.3了D200262.5±18.610.6±2.219.6±3.15.7±0.3JE200256.3±20.010.8±1.119.9±4.15.7±0.3與對照組比較##P<0.01;與模型組比較林承P〈0.001，**P<0.01L2.2對大鼠尿液鈣、草酸和尿鎂含量的影響腎結(jié)石模型大鼠的尿液鈣、草酸明顯增加，而尿鎂無明顯變化；金錢草提取物可降低尿鈣、尿草酸的含量，其中金錢草提取物JC、JE對尿液鈣含量的降低有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，金錢草提取物JA、JE對尿液草酸含量的降低有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，但各組尿鎂均無明顯的影響，結(jié)果見表2。表2對大鼠尿液鈣、鎂和草酸含量(n=10，i±s)組別劑量(mg/kg)尿鈣(mM)尿草酸UM)尿鎂(mM)對照—3.5±1.20.8±0.16.1±1.7模型—5.6±1.2#tt1.2±0.4##6.0±2.2排石顆粒60005.2±0.80.6±0.2承承承5.4±1.8JA5004.8±0.70.6±0.2氺氺承5.6±1.0■JB2005.0±0.60.9±0.56.4土1.5了c2004.2±0.4氺氺l.O士O.26.5±1.9了D2005.1±1.70.9±0.46.0±1.8了E2003.9±1,1**0.7±0.4*6.9±2.4與對照組比較:抑P〈0.01;與模型組比較=M=*P<0.001，**P〈0.011.2.3大鼠腎組織形態(tài)和草酸鈣結(jié)石觀察HE染色病理切片觀察草酸鈣晶體在正常光鏡下呈灰褐色，在相差和偏光下晶體有明亮的光澤。對照組動物腎臟正常，無結(jié)晶沉積；模型組動物腎臟病變程度較嚴(yán)重，小管上皮細胞明顯腫脹、變性、壞死，管腔顯著擴張；腎組織草酸鈣結(jié)晶布滿全腎，主要分布在腎皮質(zhì)部、髓質(zhì)部、腎乳頭、腎盞、腎盂內(nèi)，嚴(yán)重者多量大結(jié)石積集成堆，成堆且互相連接成片;與模型組比較，金錢草提取物各組腎組織病變程度較輕，草酸鈣晶體明顯少于模型組，尤其在腎髓質(zhì)部分，其管腔擴張程度也明顯比模型組輕，腎組織草酸鈣結(jié)石評分結(jié)果見表3。表3大鼠腎臟HE染色病理切片草酸鈣結(jié)石評分(組別皮質(zhì)部髓質(zhì)部腎乳頭腎盂腎盞HE染色評分對照0.1±0.30.7土0.50.9±0.3S1.7±0.8模型3.8±0.8###4.3±0.9抑#3.9士l.lft糊3.8±0.6#抑15.8±2.4抑#排石顆粒2.8±0.6林3.0±0.7**2.8±0.8*2.5土0.5*林11.1±1.4*林JA3.6土1.03.2±1.1*2.8±0.4**3.0±0.7*12.6±2.2**JB3.8±0.82.8±0.4***3.3±1.13.4±0.813.3±2.2*JC3.6±0.73.4±0.8*3.1±1.33.2±0.4*13.3±2.3*JD3.6±0.73.1±0.6**3.1±0.63.3±0.513.1±1.4**J"E2.8±0.4氺承2.7±0.7承承承2.4±0.7氺氺2.6±0.5氺氺承10.5士1.3氺承氺與對照組比較tt抑P〈0.001;與模型組比較***P<0.001，**P<0.01,*P〈0.051.2.4大鼠腎組織骨橋蛋白的表達(半定量計分)與對照組比較，腎結(jié)石模型大鼠腎臟骨橋蛋白表達量顯著增多；各給藥組與模型組比較，骨橋蛋白表達量顯著下降。提示金錢草提取物通過抑制草酸鈣結(jié)晶，降低骨橋蛋白在腎結(jié)石的表達，抑制草酸鈣結(jié)晶的腎組織的沉積，結(jié)果見表4。表4對腎結(jié)石大鼠骨橋蛋白表達的影響(『10,5±》組別劑量(mg/kg)免疫組化評分對照-1.1±0.3模型—3.1±0.6鵬排石顆粒60002.3±0.8*JA5002.3±0.7*JB2002.5±0.5*了c2001.9±0.7氺承氺2002.2±0.4氺氺承了E2001.7±0.8承氺*與對照組比較WWP〈0.001;與模型組比較:***P〈0.001，**P<0.01，*P<0.052.體外草酸鈣結(jié)晶動力學(xué)試驗2.1實驗方法:過飽和溶液草酸鈣攪拌，析出晶體，通過分光光度計動態(tài)測定在620nm時的OD值，觀察在過飽和溶液中草酸鈣晶體的形成、成核和聚集過程。在比色皿中加入1.25mM的草酸鉀溶液lml，加0.5ml雙蒸水(或待測定藥物溶液)，同時馬上加入鈣混和液(新鮮配置含12.50mM的CaCl2，12.50mM的醋酸鈉，250.00mM的NaCl，調(diào)pH值到5.7)lml，記錄溶液在620nm處的OD值。實驗在37-C的恒溫條件下進行，加入鈣溶液后，分光光度計每5s自動記錄1次，記錄20min，每個實驗重復(fù)5遍。上述反應(yīng)體系中鈣離子終濃度為5.00mM，草酸根離子終濃度為0.50mM。測定參數(shù)包括最大吸收峰Amax—草酸鈣結(jié)晶曲線的最大吸收峰值，最大吸收峰時間Tmax—草酸鈣結(jié)晶曲線的最大吸收峰的達峰時間，誘導(dǎo)時間(TI)一即誘導(dǎo)形成可測定微粒形成所需的時間，成核速率(SN)—草酸鈣結(jié)晶A,曲線上升支的斜率(只受晶核的影響)和聚集速率(SA)一即草酸鈣結(jié)晶&2。曲線下降支的斜率(主要受晶體聚合物的影響)。以及加入金錢草提取物后參數(shù)的變化。抑制率(負值表示結(jié)晶過程的促進作用)計算公式如下-成核抑制率=(1-SN受継/SN柳、)X100%聚集抑制率=(1-SA受試藥/SA對照)X100%2.2實驗結(jié)果誘導(dǎo)時間(TI)為體系形成可被儀器測定微粒形成所需的時間，反映了草酸鈣結(jié)晶最初形成的時間。金錢草提取物均可延長TI，在濃度24pg/ml時尤其明顯，其中JB、JD、JE在24ug/ml濃度與對照條件比較有顯著差異，提示金錢草提取物均可抑制草酸鈣結(jié)晶的形成，結(jié)果見表5。草酸鈣結(jié)晶的生成量越多，曲線的Amax越高，Amax反映了草酸鈣結(jié)晶最大生成量。與對照條件比較，金錢草提取物各組對Amax均有不同程度的影響，其中JA、JB、JC、JD的影響較大，在高濃度24ug/ml時可明顯降低Amax(P〈0.001)，而JE對Amax的影響無明顯的劑量關(guān)系，提示金錢草提取物可抑制草酸鈣結(jié)晶的生成量，結(jié)果見表5。草酸鈣結(jié)晶曲線的Tmax越小，草酸鈣結(jié)晶曲線的達峰時間越短，Tmax反映了草酸鈣結(jié)晶曲線峰值時間。與對照條件比較，金錢草提取物各組對Tmax均有不同程度的增加，提示金錢草提取物可延長草酸鈣結(jié)晶的達峰時間，抑制草酸鈣結(jié)晶的形成，各組在濃度0.2424txg/ml對Tmax的延長均在2倍以上，結(jié)果見表5。表5在各種條件下草酸鈣結(jié)晶形成的參數(shù)值(l)(n=5，5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>反映了草酸鈣結(jié)晶的成核速率。金錢草提取物均可抑制草酸鈣結(jié)晶的成核速率，且JA、JB、JC、JD對SN的抑制在濃度0.2424pg/ml呈劑量相關(guān)性，濃度越大，抑制越強，而JE對SN的抑制無劑量相關(guān)性，結(jié)果見表6。聚集速率(SA)為草酸鈣結(jié)晶A,曲線下降支的斜率，主要受晶體聚合物的影響，反映了草酸鈣結(jié)晶的聚集速率。金錢草提取物均可抑制草酸轉(zhuǎn)結(jié)晶的聚集速率，但各組分對SA的抑制無劑量相關(guān)性，結(jié)果見表6。3.體外草酸鈣結(jié)晶形態(tài)學(xué)研究3.1實驗方法:采用草酸鈣亞穩(wěn)過飽和溶液體系，使用偏光相差顯微攝像分析系統(tǒng)觀察藥物對草酸鈣晶體形態(tài)的影響。在一只潔凈的燒杯中加入5mM的CaCl2溶液19ml，150mM的NaCl溶液120ml，然后一邊磁力攪拌，加入0.5ml的雙蒸水(或O.5ml溶媒對照)，緩慢滴加5mM的Na2C204溶液19ml，滴加速度大約是l.Oml/min，使得[O[C2042—]=0.6mM，得到草酸鈣亞穩(wěn)過飽和溶液。觀察藥物影響時用受試藥物0.5ml代替0.5ml的雙蒸水，同法操作。受試藥物濃度分別為2.00、0.40、0.08mg/ml，終濃度分別為6,31、1.26、0,25ug/ml。在燒杯底部放入3片經(jīng)過親水性處理的玻璃片，將各燒杯用封口膜密封，于31土rC培養(yǎng)箱中放置，分別于第ld、3d、6d各取出一片玻璃片，干燥，相差顯微鏡下(400X，ph2)觀察得到的晶體晶體類型、密度、周長及長短軸的變化。每張玻璃片隨機拍攝4個不同的視野，用圖像分析軟件進行分析計算得出分散單顆晶體的參數(shù):周長、長軸、短軸。3.2實驗結(jié)果從實驗觀察到草酸鈣晶體有三種形態(tài)，結(jié)晶初始為長棒狀(可能為三水草酸鈣結(jié)晶)，逐漸形成四角錐形(可能為二水草酸鈣結(jié)晶)和拉長的六邊形晶體(可能為一水草酸鈣結(jié)晶)。文獻報道三水和二水草酸鈣結(jié)晶極不穩(wěn)定，定向轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的一水草酸鈣結(jié)晶，然后聚集成較大結(jié)晶，本實驗過程中觀察到最多的晶形為長棒狀和六邊形晶體。按長棒狀晶體多少，依次為JB^JC〉JA》JD〉JE〉H20;按六邊形晶體多少，依次為H20〉JE〉JA^JD〉JOJB，實驗結(jié)果顯示金錢草各提取物能延長三水草酸鈣結(jié)晶向一水草酸鈣結(jié)晶轉(zhuǎn)化的時間，抑制結(jié)晶的數(shù)量，從而降低結(jié)晶的大小及密度，上述顯微鏡下觀察結(jié)果與晶體的參數(shù)分析結(jié)果相一致，結(jié)果見表7。表7相差顯微鏡下晶體類型、密度<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>用圖像分析軟件進行分析計算得出分散單顆晶體的參數(shù):周長、長軸、短軸。因第1天、第3天結(jié)晶顆粒多而密度較大，參數(shù)測定困難，這里只列出第6天六邊形晶體，長棒狀晶體計算結(jié)果。數(shù)據(jù)顯示金錢草提取物JA，JD可使六邊形晶體周長、長軸、短軸等參數(shù)降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義。對照組第6天棒狀晶體生成極少，無法計算數(shù)值，而JA、JD、JE也有棒狀晶體生成，但由于邊緣不夠清晰所以無法計算數(shù)值。結(jié)果顯示在該實驗體系中金錢草提取物對草酸鈣結(jié)晶的形態(tài)、大小有明顯影響，其中JB、JC生成的六邊形晶體最少，其次是JA、JD，而JE又次之，提示金錢草各提取物能延長三水草酸鈣結(jié)晶向一水草酸鈣結(jié)晶轉(zhuǎn)化。藥理試驗表明，本發(fā)明的金錢草醇提物和分級提取物能明顯降低大鼠尿液草酸和尿鈣含量，明顯降低腎組織損傷和結(jié)石沉積程度，明顯抑制草酸鈣晶體形成過程，延長結(jié)晶成核、形成、聚集的時間，延長三水草酸鈣結(jié)晶向一水草酸鈣結(jié)晶轉(zhuǎn)化的時間，抑制結(jié)晶的數(shù)量，降低結(jié)晶的大小及密度，從而抑制草酸鈣晶體形成，保護腎組織。金錢草醇提物和分級提取物是預(yù)防和治療尿結(jié)石的活性成分，可直接、復(fù)合制成各種方便使用的藥物制劑或作為食品添加劑用于尿結(jié)石的防治。五.金錢草分級提取物在抗泌尿系結(jié)石中的應(yīng)用本發(fā)明將通過下列實施例說明。以下配方實施例中的單位均為重量百分比(w/%)。實施例2金錢草排石顆粒金錢草分級提取物浸膏乳糖糊精15303030制成1000克實施例3金錢草排石口服液I金錢草分級提取物浸膏525聚山梨酯801090%乙醇60ml單糖漿200ml蒸餾水加至1000ml實施例4金錢草排石口服液II金錢草分級提取物浸膏525聚山梨酯801090%乙醇60ml蒸餾水加至1000ml實施例5金錢草排石散金錢草分級提取物浸膏1215金錢草藥材細粉50300蔗糖適量制成1000克實施例6金錢草排石片金錢草分級提取物浸、枸櫞酸鈉淀粉糊精25301220301520制成1000片金錢草排石膠囊金錢草分級提取物浸膏羧甲基纖維素鈉糊精實施例8金錢草排石丸金錢草分級提取物浸;枸櫞酸鈉羧甲基纖維素鈉52520301530制成1000粒5251220301530制成1000丸實施例9金錢草青梅(果汁)清排飲料金錢草分級提取物浸、青梅粉或果汁枸橡酸鈉聚山梨酯8090%乙醇12蒸餾水加至51023(2030ml)1210ml60ml勤Oml根據(jù)上述實施例，金錢草分級提取物浸膏可以指JB、JC、JD、JE的單一使用，也可指它們間兩兩加合或多組分組合使用。因此，本發(fā)明可有許多改良和變更，除上述涉及例之外，在所附權(quán)力要求范圍內(nèi)，本發(fā)明也可以用其它方法實施。權(quán)利要求1、一種預(yù)防和治療尿結(jié)石的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的制備方法，其特征在于用金錢草藥材30～90％乙醇，加熱回流提取，回收乙醇，濃縮，得總提取物，水浴濃縮得醇浸膏，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水分步萃取，分別得金錢草的分級提取物石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水層部分。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的制備方法，其特征在于所指的金錢草為報春花科植物過路黃a7si'/a3ch'acAr&t&aeHance)的干燥全草，金錢草藥材用3090%乙醇，80。C100。C回流23次，每次0.52小時，過濾，合并濾液，回收乙醇，濃縮得醇浸膏，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水，分步萃取34次，合并同類萃取液，回收溶劑，濃縮，分別得金錢草的分級提取物。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的應(yīng)用，其特征在于為預(yù)防和治療尿結(jié)石的活性成分。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的應(yīng)用，其特征在于能制成各種方便使用的藥物制劑。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的應(yīng)用，其特征在于能制成顆粒劑、口服液、散劑、片劑、膠囊、丸劑等。6、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的應(yīng)用，其特征在于能作為食品添加劑用于尿結(jié)石的防治。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的應(yīng)用，其特征在于食品添加劑能制成果汁或果肉型飲料、糖果、糕點等。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是用于預(yù)防和治療尿結(jié)石的中藥金錢草抗結(jié)石分級提取物的制備方法。金錢草用乙醇，加熱回流提取，回收乙醇，濃縮，得總提取物，水浴濃縮得醇浸膏，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水分步萃取，回收溶劑，濃縮，分別得金錢草的分級提取物石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水層部分。藥理試驗表明，本發(fā)明的金錢草醇提物和分級提取物能明顯降低大鼠尿液草酸和尿鈣含量，明顯降低腎組織損傷和抑制結(jié)石沉積，是預(yù)防和治療尿結(jié)石的活性成分，可直接、復(fù)合制成各種方便使用的藥物制劑或作為食品添加劑用于尿結(jié)石的防治。文檔編號A61K9/48GK101352481SQ20081012078公開日2009年1月28日申請日期2008年9月5日優(yōu)先權(quán)日2008年9月5日發(fā)明者羅硯曦,蔡華芳,鐘宇森申請人:浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院