專利名稱：新型羊毛甾烷類化合物、其制備方法及其抗癌用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型的抗癌化合物、其制備方法及其抗癌用途， 具體是涉及一種羊毛甾烷類化合物、其制備方法及其抗癌用途。
背景技術(shù)：
目前肺瘤仍然是威脅人類生命的疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，
1993年4Mfr界癌癥死亡人數(shù)達到IOO萬人，占全球死亡人數(shù)的12 % ， ;^中國家占大多數(shù)(約58% )。世界工業(yè)國家死于癌癥的人數(shù)估計 約25萬人，占死亡人數(shù)的25%左右。人們急需通過各種途徑尋找不 同類型的抗癌活性高的先導(dǎo)化合物或抗癌藥。
黑老虎為五味子科科植物冷飯團^3^ 〃ra cocc//7ea "e邁J A C.的根和藤莖，別名黑老虎、緋紅南五味子、過山龍?zhí)俚?。冷飯團 的根皮干燥，外表略粗糙，質(zhì)脆，呈棕褐色，內(nèi)表面紅棕色，氣芳香， 味微苦澀。主要分布在湖北、廣東、廣西、四川、云南、貴州等地。 主要功效黑老虎為民間草藥，主要用于治療風(fēng)濕骨痛、跌仆扭傷、 婦女痛經(jīng)、慢性胃炎等癥。#^取物有一定鎮(zhèn)靜和消炎作用。雖然目 前已有對黑老虎的研究，但均未見對其抗癌活性的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人通過潛心研究，從黑老虎中提取分離出一種新型的3， 4-開環(huán)并且含17-20位雙鍵的羊毛甾烷類化合物，并且通過抗癌活性 的研究發(fā)現(xiàn)，其具有非常高的抗癌活性，從而完成本發(fā)明。
本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗癌活性的化合物，其結(jié)構(gòu)如 下述通式(i)所示，式中R1和R2分別獨立選自氫和碳數(shù)1 6的烷基。
此外，本發(fā)明還提供一種上述化合物的制備方法，主要包括一 下步驟，將黑老虎粉碎后，以50~95%丙酮水溶液冷浸提取1~10 次，每次5~50小時，合并提取液，濃縮后得到的浸骨依次用進行環(huán) 己烷、氯仿、乙酸乙脂、正丁醇萃取，將氯仿層部分用硅膠柱反復(fù)柱 層析，溶劑系統(tǒng)氯仿-甲醇。
進一步，本發(fā)明目的還在于提供一種抗癌劑，其特征在于，以 下述通式(I)所示的化合物作為有效成分，
式中R1和R2分別獨立選自氫和碳數(shù)1 6的烷基。
最后，本發(fā)明目的還在于提供一種上述化合物在制備抗癌制劑 中的用途。
本發(fā)明上述通式(1)中的Rl和R2為氫或碳數(shù)1 ~ 6的烷基， 優(yōu)選碳數(shù)為1 ~ 6的飽和烷基，更優(yōu)選碳數(shù)為1 ~ 3的飽和烷基，最優(yōu) 選甲基或乙基，當(dāng)R1和R2均為M時可以相同也可以不同。
對于本發(fā)明所述的上述化合物的制備方法，發(fā)明人通it^提取 溶劑、提取時間以及萃取和精制的溶劑進行大量的正交試驗，最終終 于獲得了一種提取時間短、收率高、純度大的制備方法，具體如下。
本發(fā)明中所述的提取溶液為丙酮溶液，所述丙酮溶液是指濃度 (體積濃度)為50~95%的水溶液，優(yōu)選其濃度為70~90%，更優(yōu) 選為80%。本發(fā)明中的提取方法既可以是冷提也可以是熱提，但是優(yōu)選為
冷提。對于提取次數(shù)，優(yōu)選為1~10次，更優(yōu)選為2~7次，最優(yōu)選 為1 ~ 3次。每次提取時間優(yōu)選為24小時左右。對于提取后所得的浸 骨通過依次用環(huán)己烷、氯仿，乙酸乙脂，正丁醇萃取，然后對氯仿層 的浸骨進行硅膠柱層析精制。對于柱層析的洗脫溶劑優(yōu)選為氯仿—甲 醇的混合溶劑，其中優(yōu)選用氯仿甲醇的比例按照體積計為100: 0~ 0: 100的梯度洗脫。
具體實施例方式
1.通式(I)化合物的制備。 黑老虎根及根莖采自廣西。將上述黑老虎根1.75Kg粉碎后，以 80%丙酮冷浸提取3次，每次24小時，合并提取液，濃縮后得到的 浸骨依次用環(huán)己烷、氯仿、乙酸乙脂、正丁醇萃取。對于氯仿層部分 用硅膠柱反復(fù)柱層析，溶劑系統(tǒng)氯仿-甲醇(100: 0-0: 100)得到 化合物下述化合物1 ~ 3。
化合物1
R1=R2=H
化合物2
R1=CH3, R2=H
化合物3
R1=R2=CH3
上述化合物的核磁數(shù)據(jù)如下。Table 1H and 13C-NMR (150 MHz) Data of 1, 2 and 3 (CDC13)No.123No.123
129.128.928.91628.828.828.8
231.832.332.317143.1142.9143.1
3181.7175.1174.91821.121.221.2
4147.6147.6147.61926.826.726.7
549.449.349.320124.6124.8124.9
627.727.827.82119.819.619.6
726.626.726.72233.733.033.0
841.541.541.52329.729.329.3
9142.0142.1142.724146.4146.2146.2
1042.642.442.425126.3126.0126.6
11118.9118.4118.326174.1172.6168.5
1236.036.536.527ZO-420.20.7
1347.247.247.228llS.8113.7113.7
1446.246.146.12923.123.223.2
1533.033.033.03019.119.119.1
3-0CH351.551.5
26-OCH3 51.2
2.上述化合物1 3的抗癌活性 活性方法測定方法
測試用樣品溶解于DMSO溶液。將人肺癌細胞林A549調(diào)整細胞濃 度到1.2xl0VmL,每孔200jiiL接種于96孔培養(yǎng)板，5%C02， 371C， 培養(yǎng)24小時，加入測試用樣品2pL，終濃度分別為50， 25， 10， 2， 0.5 和0.1 |i g/ML。培養(yǎng)48小時后，用酶聯(lián)免疫檢測儀(BIO-RAD 3550) 在570nm (對照655咖)測定吸亮度。癌細胞抑制率用MTT法進行測 定。
活性結(jié)果
在體外活性實驗中，氯仿浸骨及化合物1-3均顯示出有強抗肺癌細胞林A549的活性。氯仿浸奮濃度50ug/mL時，A549癌細胞抑制率 為80%?；衔?-3對A549癌細胞抑制率IC50分別為1. 2， 1. 45和 4.7 //M。
結(jié)果表明本發(fā)明的化合物具有顯著的抗人肺癌細胞林A549活性。
權(quán)利要求
1.一種下述通式(I)所示的化合物，式中R1和R2分別獨立選自氫和碳數(shù)1～6的烷基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中碳數(shù)1 ~ 6的烷基為飽和直鏈烷基。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中碳數(shù)為1 ~ 6的烷基選自甲基、 乙基和丙基。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中碳數(shù)為1 ~ 6的烷基為甲基。
5. 上述權(quán)利要求1~4中任一項所述化合物的制備方法，其特征在于，包 括如下的步驟將黑老虎粉碎后，以50 ~ 95 %丙酮水溶液提取1 ~ 10次，每次5 ~ 50小時， 合并提取液，濃縮后得到的浸骨依次用進行環(huán)己烷、氯仿、乙酸乙脂、正丁醇 萃取，將氯仿層部分用皿柱反復(fù)柱層析，溶劑系統(tǒng)氯仿-甲醇。
6. —種抗癌劑，其特征在于，以下述通式(I)所示的化合物作為有效成分，式中R1和R2分別獨立選自氫和碳數(shù)1 6的烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗癌制劑，其中碳數(shù)為1 ~ 6的紇基為飽和直連絲，
8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的抗癌制劑，其中碳數(shù)為1 ~ 6的烷基為甲基、 乙基或丙基。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的抗癌制劑，其中碳數(shù)為1 ~ 6的烷基為甲基。
10. 權(quán)利要求1 ~ 4中任一項所述的化合物在制造抗癌制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新型羊毛甾烷類化合物、其制備方法及其抗癌用途，所述羊毛甾烷類化合物為右述通式(I)所示的化合物，通過抗癌活性試驗表明，具有顯著的抗癌活性，式中R1和R2分別獨立選自氫和碳數(shù)1～6的烷基。
文檔編號A61K31/194GK101607886SQ200810125600
公開日2009年12月23日 申請日期2008年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月17日
發(fā)明者李賀然 申請人:李賀然