專利名稱：：一種乙氧碳?；?取代噻唑二氫嘧啶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新的乙氧碳?；?取代噻唑二氫嘧嚏，其制備方法及其作為藥物的用途，尤其是在治療和預(yù)防乙型肝炎病毒感染上的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及這些二氫嘧啶同其他抗病毒劑、和適當(dāng)情況下，免疫調(diào)節(jié)劑的組合物，以及含有這些組合物的藥物，尤其是用于治療和預(yù)防HBV感染，如乙型肝炎。技術(shù)背景乙型肝炎病毒屬于肝病毒科。它可引起急性的和或持續(xù)/漸進(jìn)的慢性病。B型肝炎病毒還引起病理形態(tài)中的許多其他的臨床表征一一尤其是肝臟的慢性炎癥、肝硬化和肝細(xì)胞的癌變。另外，與丁型肝炎的共同感染在疾病的發(fā)展過程中會(huì)產(chǎn)生不利影響。被許可用于治療慢性肝炎治療的常規(guī)藥劑是干擾素和拉米夫定(lamivudine)。然而，干擾素只具有中等的活性，并具有有害的副反應(yīng)；雖然拉米夫定(lamivudine)具有良好的活性，但其在治療中抗性發(fā)展迅速，并在停止治療之后常常出現(xiàn)反彈效應(yīng)。US7074784公開了6-胺基烷基二氫嘧啶及其作為藥物的應(yīng)用，尤其是用于治療和預(yù)防乙型肝炎病毒感染。該專利EP01/02442DE德文版公開了兩個(gè)含有R^C1，R2=F，R3=Me和R6=3，5-二氟-吡嚏-2-基的實(shí)施例。
發(fā)明內(nèi)容該專利中沒有公開上述結(jié)構(gòu)以及尺6=噻唑-2-基。我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)具有2-瘞唑-2-基的衍生物相對(duì)于這兩個(gè)專利中公開的近似化合物驚人地表現(xiàn)出增強(qiáng)的代謝和化學(xué)穩(wěn)定性。1、其化學(xué)穩(wěn)定性測(cè)定如下在10ml乙醇中加入約5mg(10nM的化合物與45mg的嗎啉。通過HPLC測(cè)定6小時(shí)與12小時(shí)后的化合物濃度，從表1可知12小時(shí)后，可檢測(cè)的R6=3，5-二氟-2-吡啶基結(jié)構(gòu)少于50%。表2的結(jié)構(gòu)幾乎沒有被嗎啉破壞。因此，可以斷定具有R6=噻唑-2-基的衍生物與具有116=3，5-二氟-2-吡啶基的穩(wěn)定。表1來自WO01/68641Al的實(shí)例<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2新的專利實(shí)例<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>我們也測(cè)定了本發(fā)明的其他化合物的，結(jié)果與表2所示基本相同，幾乎沒有被破壞。2、肝微體的體外清除測(cè)定在37°C,利用改良的MultiprobeIIII機(jī)器人系統(tǒng)(CanberraPackard)對(duì)總量1.5ml的微粒體進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)混合物含有0.5mg/mL的微粒體蛋白，~1juM底物，0.05M磷酸氫二鉀緩沖液(pH-7.4)，ImMEDTA,5mM葡萄糖-6-磷酸鹽和來自腸膜樣明串珠菌(丄ewco"o加cMesewtera/cfes.)的1.5U/ml葡萄糖-6-碟酸鹽脫氫酶。盡管通過加入NADP+(終濃度ImM)啟動(dòng)反應(yīng)，但FMO-活性得以維持(數(shù)據(jù)未顯示)，CAN的最終濃度小于1%。溫育2，10，20，30，50，70和90后，由溫育混合物取125|al的樣品并懸浮于含有用于終止反應(yīng)的250^1ACN的96孔板中。通過MSMS(API2000)分析離心的上清液后，檢測(cè)其半衰期。US7074784B2的實(shí)例45的半衰期被設(shè)置為1。代謝的結(jié)果顯示于表3中。實(shí)例<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>半衰期(相對(duì)于實(shí)例45)45(專利US7074784B2的實(shí)例)CICICH3卜0—NO16CICICH3/"A—N,SO^/615CICICH3IS一N,S02/4因此，本發(fā)明涉及分子式(I)所示的化合物及其同分異構(gòu)體(la)與對(duì)應(yīng)異構(gòu)體及其鹽R3—OC(la)其中，R1和R2分別獨(dú)立是氫、氟、氯或溴，R3是d-C4烷基，R6是噻唑-2-基，X是亞甲基，以及Z是硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物。優(yōu)選的是，本發(fā)明的分子式(I)和(Ia)給出的化合物，其中W是鄰-氯或鄰-溴，R2是對(duì)-氫、對(duì)-氟或?qū)?氯，R3是CrC2-烷基，W是謹(jǐn)唑-2-基，X是亞甲基，和Z是硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物。本發(fā)明還涉及上述化合物的對(duì)映異構(gòu)體及其各自的混合物。外消旋體能通過已知的手段分離出來，本質(zhì)上說它是立體異構(gòu)體中的均一成分。本發(fā)明的化合物包含分子式(I)和(Ia)的異構(gòu)體及其混合物。本發(fā)明的化合物也可以以鹽的形式存在。根據(jù)本發(fā)明的框架，生理上可接受的鹽是優(yōu)選的。生理上可接受的鹽可以是無機(jī)酸鹽或者有機(jī)酸鹽。優(yōu)選的是無機(jī)酸，諸如酸鹽、氫溴酸、轔酸或硫酸等，或者有機(jī)羧酸或磺酸，例如醋酸、馬來酸、反丁烯二酸、蘋果酸、杼檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸或甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸或萘-二硫磺酸等形成的鹽。生理上可接受的鹽還可以是本發(fā)明的化合物的金屬鹽或者銨鹽。尤其優(yōu)選的例子是鈉、鉀、鎂、或鈣鹽，以及由氨或有機(jī)胺，諸如乙胺，二-或三乙胺，二-或三乙醇胺，二環(huán)己基胺，二甲基氨基乙醇，精氨酸，賴氨酸，乙二胺，或2-苯乙胺等生成的銨鹽。本發(fā)明的化合物(I)可由下述方法制備[A]首先將苯甲醛(11)，其中R1和R2的含義如前所述z—x,人o(m)(其中R3、X和Z的含義如前所述，加入或不加入堿或酸，以適于存在于惰性有機(jī)溶劑中)反應(yīng)，得到如分子式(IV)所示的苯亞甲基化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(II)與分子式(III)所示的(3-酮酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>然后，將后者與分子式(V)所示的脒<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>NH2(V)其中R6含義如前所述，或者其鹽(例如，鹽酸鹽或醋酸鹽)加入或不加入堿或酸，以適于存在于惰性有機(jī)溶劑中，進(jìn)行反應(yīng)或[B]將分子式(III)所示化合物同醛(II)和脒(V)或它們的鹽(諸如，鹽酸鹽或醋酸鹽)加入或不加入堿或酸，以適于存在于惰性有機(jī)溶劑中進(jìn)行一步反應(yīng)；或[C]分子式(I)中的X是亞甲基，分子式(VI)所示化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>(VI)其中R1、R2、R3和R6含義如前所述，Y是親核取代基團(tuán)，諸如氯化物，溴化物，碘化物，甲磺酰基或甲苯磺?；c硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物(VII),<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>(vn)加入或不加入堿，以適于存在與惰性溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。制備化合物(vi)可以通過，例如，用分子式(vin)所示化合物間其中R1、R2、R3和R6含義如前所述，和溴化劑諸如，N-溴琥珀酰亞胺，優(yōu)選在惰性溶液中進(jìn)行反應(yīng)，得到分子式(DO所示化合物，將具有親核取代基團(tuán)的后者直接或者如文獻(xiàn)中的常規(guī)方法進(jìn)一步轉(zhuǎn)變之后，與硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物(VII)反應(yīng)。[D]分子式(II)所示的醴與分子式(X)所示的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>(X)其中R3、X和Z含義如前所述，以及分子式(V)所示的脒，加入或不加入堿，為適合存在于惰性溶劑中，進(jìn)行反應(yīng)。[E]本發(fā)明的化合物(I),其中R1、R2、R3、R6和X含義如前所述，也可以使用具有結(jié)構(gòu)(I)其中R1、R2、R3、R6和X具有上述含義且Z是硫代嗎啉按照文獻(xiàn)公開的方法使用如H202，NaI04，KMn04或間-過苯甲酸在最后一步氧化硫制備，為制備本發(fā)明的分子式(I)所示化合物，其中X是亞甲基，Z是硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物，相應(yīng)的J3-酮羧酸酯(III)可由分子式(XI)所示的氯乙酸酯其中R3含義如前所迷，與硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物(vn)反應(yīng)制得。氯代苯甲醛(n)作為起始原料可通過商業(yè)途徑獲得。用作起始原料的(3-酮羧酸酯(m)是公知的，或者是能夠從文獻(xiàn)公布的已知方法中類推制得的[如，D.Borrmann,"UmsetzungvonDiketenmitAlkoholen,PhenolenundMercaptanen",in"MethodenderorganischenChemie"(Houben畫Weyl),vol,VII/4,230ff(1968);YOikawa，K.Sug肌oundO.Yonemitsu,J.Org.Chem.43，2087(1978)]。化合物(V)是已知的，并可根據(jù)WO-A-99/54326和WO-A-99/54329的描述來制備。硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物(VII)可根據(jù)J.Med.Chem.1994，Vol.37，Nr.7，p922公開的方法合成制得。(在室溫下氧化制得一氧化物)?；衔?VIII)和(X)可根據(jù)WO-A-99/54326中的描述按照步驟[A]或[B]制得。A、B、C和D所有步驟都適合的溶劑是所有的惰性有機(jī)溶劑。其中優(yōu)選的包括醇如，甲醇、乙醇、異丙醇，醚如二惡烷、二乙醚、四氫呋喃、乙二醇單甲醚，乙二醇二甲醚，羧酸諸如冰醋酸、或二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙腈、吡啶和六甲基磷酰三胺。反應(yīng)溫度可以在相當(dāng)寬的范圍內(nèi)變化。通常使用20到150°C之間的溫度，但優(yōu)選的是所選的溶劑的沸點(diǎn)溫度。反應(yīng)可以在大氣壓下進(jìn)行，也可以在高壓下進(jìn)行。通常在大氣壓下進(jìn)行。反應(yīng)可以在加入或者不加入酸或者堿的環(huán)境下進(jìn)行；但是，在弱酸諸如醋酸或者蟻酸等的存在下進(jìn)行反應(yīng)是較好的。本發(fā)明的一種實(shí)施方案涉及含有A)至少一種上述的二氫嘧啶，B)至少一種與A)不同的其他抗病毒劑的組合物。本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案涉及含有A)上述二氫嘧啶，B)HBV聚合酶抑制劑和，和合適的情況下，C)免疫調(diào)節(jié)劑的組合物。優(yōu)選的免疫調(diào)節(jié)劑C)包括，例如，所有的干擾素諸如cx-,(3-和Y-干擾素，尤其是a-2a-和a-2b-干擾素，白細(xì)胞介素諸如白細(xì)胞介素-2，多肽諸如胸腺素-a-l和胸腺托南(thymoctonan),咪唑喹啉衍生物諸如⑧左咪唑，免疫球蛋白和治療疫苗。.因此，本發(fā)明還涉及用于治療和預(yù)防HBV感染的這些組合物及其在治療HBV引發(fā)的疾病上的用途。.相對(duì)于單一化合物的單一治療，本發(fā)明的組合物的使用對(duì)治療HBV引發(fā)的疾病是有益的，主要是協(xié)同的抗病毒活性，以及相對(duì)于單個(gè)成分的Tox-50(有50%的細(xì)胞存活的毒性范圍)來說，本發(fā)明的組合物具有良好的耐受性。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，HBV聚合酶抑制劑B那些在內(nèi)生聚合酶化驗(yàn)中被Ph.A.Furman等在《抗微生物制劑與化療方法》(AntimicrobialAgentsandChemotherapy)Vol.36(No.12)，2688(1992)中揭示的那些物質(zhì)，以及那些在下文中描述的，抑制HBVDNA雙鏈的形成，從而導(dǎo)致最大50%活性的值為零。在試管中，將HBV毒粒與核苷5'-三磷酸鹽一起從培養(yǎng)懸浮物中移至HBVDNA正鏈中。通過使用瓊酯糖凝膠電泳，發(fā)現(xiàn)其中存在有[oc;P]-脫氧核苷5'-三磷酸鹽和病毒的3.2kbDNA的結(jié)合產(chǎn)物，不存在具有潛在HBV聚合酶抑制性質(zhì)的物質(zhì)。從HepG2.2.15細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)懸浮物中，用聚乙二醇沉淀、濃縮得到HBV毒粒。l體積份的澄清細(xì)胞培養(yǎng)懸浮物與1/4體積份的含有50%(重量)聚乙二醇8000和0.6M氯化鈉的水溶液混合。2500xg離心沉淀15分鐘，沉淀物用2ml含有0.05Mtris-HClM(pH7.5)的緩沖液再懸浮，用含有100mM氯化鉀的該緩沖液透析。樣品在-80。C時(shí)冷凍。每個(gè)反應(yīng)1混合物(IOO含有至少105HBV毒粒、50mMtris-HCl(p.sub.H7.5)、300mM氯化鉀、50mM氯化鎂、0.1%NonidentP-40(非離子型洗滌劑，BoehringerMannheim)、10//MdATP,10//MdGTP，10〃MdTTP;10〃Ci[32P〗dCTP(3000Ci/mmol;最終濃度為33nM)and1//M三磷酸形式的聚合酶潛在抑制劑。樣品在37。C下培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)，然后加入50mMEDTA中止反應(yīng)。加入10%重量/體積SDS溶液(每90ml水含有10gSDS)到最終濃度為1%(體積)(基于溶液總體積)，加入蛋白酶K至最終濃度為lmg/ml。然后在37。C培育1小時(shí)，用等體積的苯酚/氯仿/異戊醇(體積比為25:24:1)溶液提取，DNA從合有乙醇的水相中沉淀出來。DNA小球在10//1凝膠緩沖液(1升水中含有10.8gtris、5.5g硼酸和0.75gEDTA(=TBEbuffer))中在懸浮，并用瓊脂糖凝膠電泳分離。將其中的凝膠干燥或者釆用Southern轉(zhuǎn)化技術(shù)將其中的核酸轉(zhuǎn)變成膜。形成一定數(shù)量的標(biāo)記DNA雙鏈進(jìn)行對(duì)照檢測(cè)(=空白或有惰性對(duì)照物進(jìn)行ndo-pol反應(yīng))。如果存在對(duì)照組的最大50%濃度則存在HBV聚合酶抑制劑。優(yōu)選的HBV聚合酶抑制劑B)包括，例如，3TCHi米夫定(lamivudine)4-氨基-l-[pR-順式)-2-(羥甲基)-1.3-氧硫茂-5-基-]-嘧^^-2(lH)國(guó)酮cf.EP-B382526(=U.S.Pat.No.5,047,407)和WO91/11186(=U.S.Pat.No.5,204,466);阿德福韋酯(Adefovirdipivoxil)=9-[2-[雙(特戊酰羥甲氧基)膦酰甲氧基]乙基]腺瞟呤，cf.EP-B481214(=U.S.Pat.Nos.5,663，159和5,792，756),U.S.Pat.Nos,4,724，233和4,808，716;BMS200475=[1S-(1..alpha.,3,.alpha.，4..beta.)]-2-氨基-1.9-二氫-9-[4-羥基—3-(羥甲基)-2-亞甲基-環(huán)戊基]-6H-嘌呤-6-酮，cf.EP-B481754(=U.S.Pat.Nos.5,206,244和5,340,816),WO98/09964和99/41275;阿巴卡韋(Abacavir)K-)-(lS-cis)-4-[2-氨基-6-(環(huán)丙胺)-9H-嘌呤國(guó)9畫基]畫2-基-環(huán)戊烯國(guó)l畫甲醇，cf.EP-B349242(=U.S.Pat.No.5，049，671)和EP-B434450(=U.S.Pat.No.5，034，394);FTC氣2R-順式)-4-氨基-5-氟-l-[2-(羥甲基)-1.3-氧硫茂-5-基]-嘧啶誦2(1H)誦酮，cf.WO92/14743(=U.S.PatNos.5，204，466;5,210,085;5，539，116;5，700，937;5，728，575;5,814,639;5，827，727;5,852,027;5,892,025;5，914，331;5，914，400)和WO92/18517;.卩-L-FDDC二5-(6-氨基-2-氟-9H-嘌呤-9-基)-四氫-2-吹喃甲醇，cf.WO94/27616(=U.S.Pat.Nos.5,627，160;5,561，120;5,631,239和5，830，881);L-FMAU-l-(2-脫氧-2-氟-.beta,L-阿拉伯吹喃糖)-5-甲基-嘧嚏e-畫2.4(1H，3H)-二酮，cf.WO99/05157,WO99/05158和U.S.Pat.No.5,753，789。本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案涉及含有A)上述二氫嘧啶(I)和(Ia)及B)拉米夫定(lamivudine)的組合物。另一個(gè)優(yōu)選的HBV抗病毒劑B包括，例如，下述分子式所示的苯基丙烯酰胺及其鹽其中R1和R2,分別獨(dú)立為，d-Q-烷基或者，在他們所在的位置上帶有一個(gè)氮原子，形成具有5到6個(gè)原子含有碳和/或氧的環(huán);R3到R12,分別獨(dú)立為，氫、鹵素、CVQ-烷基、任意的取代CVQ-烷氧基、硝基、氰基或三氟甲基；R"是氫、CrCr烷基、CrCV?；蚍纪榛?，以及X是鹵素或任意取代的d-Cr烷基。這些苯基丙烯酰胺及其制備方法已在WO98/33501中公開，這里提及是為了公開的目的。AT-61是化合物優(yōu)選的免疫調(diào)節(jié)劑C)包括例如，所有的干擾素，a-，(3-和y-干擾素，尤其還可以是01-2&和a-2b-干擾，白細(xì)胞介素如白細(xì)胞介素-2,多肽如胸腺素-a-l和胸腺托南(thymoctonan)，咪唑喹啉衍生物如⑧左咪唑，免疫球蛋白和治療疫苗。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)逸的實(shí)施方案涉及含有A)上述二氫嘧啶(I)和(Ia);B)拉米夫定(lamivudine);以及合適的情況下含有C)干擾素的組合物。測(cè)試說明本發(fā)明的化合物對(duì)乙型肝炎病毒的抗病毒作用通過M.A.Sells等描述的方法基礎(chǔ)上進(jìn)行研究，Proc.Natl.Acad.Sci.84，10051009(1987)andB.E.Korbaetal.，AntiviralResearch19，5570(1992).抗病毒測(cè)試在96-孔微量滴定板上進(jìn)行。第一直列只接受培養(yǎng)基和HepG2.2.15細(xì)胞，作為病毒對(duì)照.測(cè)試化合物的儲(chǔ)備液(50mM)是先溶解在DMSO中，然后在H印G2.2.15培養(yǎng)基中稀釋制得。根據(jù)本發(fā)明的化合物通常每次用移液管移取100測(cè)試濃度(lst測(cè)試濃度)到微量滴定板的第二測(cè)試列，然后在加入2%重量胎牛血清(體積25的培養(yǎng)基中分兩步稀釋21()倍。(V/V)培養(yǎng)測(cè)試混合物4天。然后將表面懸浮物吸出丟棄，向孔中加入225//1新制備的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的化合物是每個(gè)都在25/a體積中重新加入了10-fold濃縮溶液。混合物繼續(xù)培養(yǎng)4天。在收集懸浮物測(cè)試抗病毒效果之前，先在光學(xué)顯微鏡下或者通過生物化學(xué)檢測(cè)方法(例如AlamarBluestainorTrypanBluestain)檢測(cè)HepG2.2.15細(xì)胞細(xì)胞毒素的改變。收集表面懸浮物和/或細(xì)胞并用抽真空的方法在96-孔斑點(diǎn)室上覆蓋一層尼龍膜(根據(jù)制造商的信息)。細(xì)胞毒素的測(cè)定檢測(cè)HepG2.2.15細(xì)胞中物質(zhì)引發(fā)的細(xì)胞毒素或抑制細(xì)胞的改變，例如，在光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)的改變。HepG2.2.15細(xì)胞的這些物質(zhì)引發(fā)的改變與未處理過的細(xì)胞相比起來是明顯的，例如，細(xì)胞溶解，液泡或者細(xì)胞形態(tài)的改變。50%毒性(丁(^.-50)是指與相應(yīng)的對(duì)照細(xì)胞相比50%的細(xì)胞表現(xiàn)出一種形態(tài)學(xué)。根據(jù)本發(fā)明一些化合物的耐受性在其他的宿主細(xì)胞如，HeLa細(xì)胞，primary人外周造血細(xì)胞或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系如H-9細(xì)胞上進(jìn)行測(cè)試。在本發(fā)明的化合物濃度MO/zM是沒有檢測(cè)到細(xì)胞毒素的改變?？共《咀饔玫臋z測(cè)在將表面懸浮物或溶解的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到點(diǎn)裝置(如上述)的尼龍膜上之后，將HepG2.2.15細(xì)胞的胞內(nèi)或胞外懸浮物變性(1.5MNaCl/0.5NNaOH),中和(3MNaCl/0.5MTrisHC1，pH7.5),然后水洗(2xSSC)。通過在120。C下培養(yǎng)過濾器2-4小時(shí)，使DNA回到膜上。DNA雜化從尼龍過濾器上處理過的HepG2.2.15細(xì)胞中得到的病毒DNA的檢測(cè)在非放射性，地高辛標(biāo)記的乙型肝炎DNA探針，每個(gè)均用地高辛標(biāo)記條件下進(jìn)行，純化并且根據(jù)制造商的信息進(jìn)行雜化。預(yù)雜化和雜化在5xSSC，lx封閉試劑，0.1%(重量)N-月桂酰肌氨酸，0.02%(重量)SDS和100//g青魚精子DNA中進(jìn)行。預(yù)雜化在60。C進(jìn)行30分鐘，然后與20至40ng/ml地高辛標(biāo)記過的，變性的HBV-DNA(14小時(shí)，60。C)進(jìn)行特定雜化。洗滌過濾器。用地高辛抗體險(xiǎn)測(cè)HBV-DNA按照造制造商的信息進(jìn)行地高辛-標(biāo)記DNA的免疫檢測(cè)洗滌過濾器在封閉試中雜化(依照制造商的信息)。雜化使用抗-DIG抗體和堿性磷酸酶，進(jìn)行30分鐘。在洗滌步驟之后，加入堿性磷酸酶的底物，CSPD，帶著過濾器培養(yǎng)5分鐘，然后包上塑料膜,37°C再培養(yǎng)15分鐘.將過濾器曝光在X射線層下，可看見乙型肝炎DNA的發(fā)光信號(hào)(培養(yǎng)取決于信號(hào)強(qiáng)度IO分鐘至2小時(shí))。胞內(nèi)或胞外乙型肝炎群被根據(jù)本發(fā)明的化合物降低相當(dāng)于未處理的樣本50%的濃度下測(cè)試最大半抑制濃度(IC5。，50%抑制濃度)。本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出的抗病毒作用值為IC5o低于lnM，這是沒有預(yù)料到的。因此，本發(fā)明的化合物適用于病毒引發(fā)的疾病的治，尤其是急性和慢性持續(xù)的HBV病毒感染。HBV引發(fā)的慢性病毒病可能導(dǎo)致病態(tài)變得嚴(yán)重，慢性乙型肝炎病毒感染在許多情況下可導(dǎo)致肝硬化和/或肝細(xì)胞癌變。對(duì)本發(fā)明的化合物來說，可能被提及的指示區(qū)域是，例如:可能導(dǎo)致傳染性肝炎的急性和慢性病毒感染的治療，例如乙肝病毒感染。本發(fā)明的化合物尤其適合治療慢性乙肝感染和急性和慢性乙肝病毒感染。本發(fā)明包括藥物的制備，除了無毒，惰性的制藥學(xué)上合適的載體之外，還含有一種或多種本發(fā)明的化合物(I)或(Ia)或組合物或由一種或多種活性成分(I)或(Ia)組成的組合物或由者本發(fā)明的組合物組成的組合物。上述藥物制備中所指的活性成分(I)和(Ia)，濃度約為0.1至99.5%(重量)，優(yōu)選約為0.5至95%(重量)，相對(duì)于整個(gè)混合物。上述藥物制備也可以包含化合物(I)和(Ia)以外的其他活性藥物成分。本發(fā)明的組合物中組分A、B和合適的C的含量比例可以在較寬的限制范圍內(nèi)變化，優(yōu)選5至500mgA/10至1000mgB,尤其是10至200mgA/20至400mgB.組分C,適當(dāng)?shù)臅r(shí)候也可使用，其總使用量，優(yōu)選，1至10百萬，更優(yōu)選2至7百萬，I.U.(國(guó)際單位)，在超過一年的時(shí)期內(nèi)每周3次。上述藥物制備所指的本發(fā)明的化合物或組合物濃度通常為約0.1%至99.5%，優(yōu)選約0.5%至95%,(重量百分比)，相對(duì)于整個(gè)混合物。上述藥物制備可以通過公知的常規(guī)方法實(shí)現(xiàn)，例如將活性成分和載體混合。無論是在人體還是在獸醫(yī)學(xué)上每24小時(shí)服用總劑量為約0.05至約500,優(yōu)選0.1至100mg/kg體重的活性成分已經(jīng)被普遍證明是有益的，合適的單劑的多次服用，可以達(dá)到理想的效果。單劑含有的活性成分優(yōu)選在總量約0.1至約80,優(yōu)選0.1至30mg/kg體重。無論如何，根據(jù)上述劑量尤其是根據(jù)個(gè)人和治療對(duì)象的體重，藥物制作的類型，藥物服用方式以及藥物服用的時(shí)間或間隔有所偏移是必要的。因此，本發(fā)明還涉及用于控制疾病的上述化合物和組合物。本發(fā)明還涉及至少含有一種上述化合物或組合物和適當(dāng)?shù)那闆r下，一種或幾種其他活性藥物成分的藥物。本發(fā)明還涉及，用于制備治療和預(yù)防上述疾病尤其是病毒性疾病特別是乙型肝炎的藥物的上述化合物和組合物的用途。下述實(shí)施例中的百分?jǐn)?shù)均是重量百分?jǐn)?shù)，特別指明的除外?；旌先芤褐腥軇┑谋壤阁w積比。實(shí)施例A.中間體實(shí)施例l乙基4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯將10.0g(63.1mmol)of2陽氯4-氟苯甲醛，8.2g(63.1mmol)乙基乙酰乙酸，10.3g(63.1mmol)2-脒基-瘞唑鹽酸鹽和6.2g(75.7mmol)醋酸鈉溶解或懸浮于500ml乙醇中，回流下沸騰16小時(shí)。冷卻至室溫，抽氣過濾，水洗殘?jiān)コ裏o機(jī)鹽。得產(chǎn)品12.8g(53.4%),熔點(diǎn):162-164。C。甲基4-(2-氯-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-l，4-二氫嘧^^-5-羧酸酯該化合物使用甲基乙酰乙酸按照類似實(shí)施例1的方法合成制得。產(chǎn)率55%(熔點(diǎn)152-154。C)乙基4-(2-溴-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯該化合物使用乙基乙酰乙酸按照類似實(shí)施例1的方法合成制得。產(chǎn)率51.6%(熔點(diǎn)163-165。C)甲基4-(2-溴-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4該化合物使用甲基乙酰乙酸按照類似實(shí)施例1的方法合成制得。產(chǎn)率53%(熔點(diǎn)155-157°C)實(shí)施例5乙基4-(2，4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-l,4-二氫嘧啶-5-羧酸酯該化合物使用乙基乙酰乙酸按照類似實(shí)施例1的方法合成制得。產(chǎn)率52.5%(熔點(diǎn)164-166。C)實(shí)施例6甲基4-(2，4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯該化合物使用甲基乙酰乙酸按照類似實(shí)施例1的方法合成制得。產(chǎn)率51.1%(熔點(diǎn):142-144°C)實(shí)施例7乙基6-溴甲基4-(2氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-l,4-二氫嘧啶-5-羧酸酯將實(shí)施例1制得的4.0g(8.72mmol)乙基4-(2氯-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-l,4-二氫嘧啶-5-羧酸酯加入到80ml四氯化碳中，氬氣氛圍下加熱至50°C，得到澄清溶液。在此溫度，加入1.73g(9.61mmol)N-溴琥珀酰亞胺，保持在該溫度混合10分鐘。立刻冷卻，室溫下抽氣過濾，減壓濃縮。根據(jù)HPLC產(chǎn)品純度高于90%,并作為下一步的原料。RfN).70(石油醚/乙酸乙酯=8:2)甲基6-溴甲基4-(2氯-4-氟苯基)-2-(蓬唑-2-基H，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯實(shí)施例823該化合物使用實(shí)施例2制得的化合物按照類似實(shí)施例7的方法合成制得。RfM)/70(石油醚/乙酸乙酯=8:2)實(shí)施例9乙基6-溴甲基4-(2氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯該化合物使用實(shí)施例3制得的化合物按照類似實(shí)施例7的方法合成制得。RfN).的(石油醚/乙酸乙酯=8:2)實(shí)施例10甲基6-溴甲基4-(2-溴-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯該化合物使用實(shí)施例4制得的化合物按照類似實(shí)施例7的方法合成制得。RfN).69(石油醚/乙酸乙酯=8:2)實(shí)施例11乙基6-溴甲基4-(2,4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯該化合物使用實(shí)施例5制得的化合物按照類似實(shí)施例7的方法合成制得。RfN).68(石油醚/乙酸乙酯=8:2)實(shí)施例12甲基6-溴甲基4-(2,4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-l，4-二氫嘧啶-5-羧酸酯該化合物使用實(shí)施例6制得的化合物按照類似實(shí)施例7的方法合成制得。RfN)說(石油醚/乙酸乙酯U)B.制備實(shí)施例實(shí)施例13實(shí)施例No.結(jié)構(gòu)Mp(0C)/Rf<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>乙基4-(2-氯-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-(8-二氫嘧嚏-5-羧酸酯-氧_嗎啉_4-基-甲基)-1，4-將6.0g實(shí)施例3新制備的乙基-6-溴甲基-4-(2-氯4-氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-l,4-二氫嘧啶-5-羧酸酯加入到100ml甲醇中形成溶液，同5倍量的溶解在甲醇和三乙胺的硫代嗎啉-S-—氧化物鹽酸鹽，60。C下攪拌40分鐘。溶液用水稀釋，乙酸乙酯萃取。產(chǎn)量5.6g熔點(diǎn)217-218°C.按照類似實(shí)施例13的方法制備的化合物如表1所示。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>Rf流動(dòng)相乙酯實(shí)施例22乙基4-(2-氯-4氟苯基)-2-(瘞唑-2-基)-6-(S-二氧-硫代嗎啉-4-基)-氬嗜P定-5-羧酸酯將5.0g實(shí)施例3新制備的乙基-6-溴甲基-4-(2-氯4-氯苯基)-2-(瘞唑-2-基)-l,4-二氫嘧啶-5-羧酸酯加入到70ml甲醇中形成溶液，同5倍量的溶解在甲醇和三乙胺的硫代嗎啉-S-二氧化物鹽酸鹽，60。C下?lián)璋?0分鐘。溶液用水稀釋，乙酸乙酯萃取。產(chǎn)量:4.6g熔點(diǎn)202-203°C.按照實(shí)施例11類似的方法制得的化合物如表2所示表2<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>權(quán)利要求1.通式(I)及其同分異構(gòu)體(Ia)所示的化合物以及其對(duì)映異構(gòu)體及它們的鹽其中R1和R2獨(dú)立地為氫、氟、氯、溴或碘，R3是C1-C4烷基，R6是噻唑-2-基，X是亞甲基，Z是硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物。2、如權(quán)利要求1所述的化合物以及其對(duì)映異構(gòu)體及它們的鹽，其中R、W分別獨(dú)立是氫、氟、氯或溴，R3是d-C3-烷基，W是噻唑-2-基，X是亞甲基，Z是硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物。3、如權(quán)利要求1所述的化合物以及其對(duì)映異構(gòu)體及它們的鹽，其中W是鄰-氯或鄰-溴，W是對(duì)-氫或?qū)?氟，RS是d-C2-垸基，R6是噻唑-2-基，X是亞甲基，Z是硫代嗎琳-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物。4、如權(quán)利要求l所述的化合物的制備方法[A]首先將通式(II)所示苯甲醛與通式(III)所示p-酮酯反應(yīng)生成通式(IV)所示的苯亞甲基化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(iv)其中R1、R2、R3、X和Z具有權(quán)利要求1中所述的含義，且然后將通式(IV)所示苯亞甲基化合物與通式(V)所示的脒或其鹽，或其它化合物反應(yīng)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(v)其中r6具有權(quán)利要求1中所述的含義；[B]將分子式(m)所示化合物在一步反應(yīng)中同醛(II)和脒(V)所示的脒或其鹽，或其它化合物反應(yīng)，[C]當(dāng)通式(I)中X是亞甲基時(shí)，將通式(VI)所示化合物和，和硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物(VI)其中R1、R2、R3和R6含義如前所述，Y是親核取代基團(tuán)，和硫代嗎啉-S-氧化物或硫代嗎啉-S-二氧化物(VII)或其鹽反應(yīng)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(vn)[D]將式(II)所示醛與分子式(X)所示化合物及分子式(V)所示的脒或其鹽反應(yīng)，NH2(X)其中R3、X和Z具有權(quán)利要求1中所述的含義，[E]將式(I)所示的化合物與氧化劑進(jìn)行反應(yīng)，其中R1、R2、R3、R6和X含義如前所述，Z是硫代嗎啉5、式(XII)所示化合物及其作為合成化合物(I)或(Ia)的中間體的用途，其中R1、R2、R3和R6含義如權(quán)利要求1至3所述。6、如權(quán)利要求1至3之任一所述的用于控制疾病的化合物。7、一種藥物含有至少一種如權(quán)利要求1至3之任一所述的化合物，適當(dāng)時(shí)，含有其他活性藥物成分。8、如權(quán)利要求1至3之任一所述的化合物用于制備治療和預(yù)防病毒性疾病的用途。9、如權(quán)利要求1至3之任一所述的化合物用于制備治療和預(yù)防乙型肝炎感染的用途。10、一種治療乙型肝炎的方法，包括給予哺乳動(dòng)物有效量的權(quán)利要求l所述的化合物。11、一種治療由乙型肝炎感染引起的疾病的方法，包括給予哺乳動(dòng)物有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。12、如權(quán)利要求ll所述的方法，其中所述的疾病是肝炎。13、如權(quán)利要求ll所述的方法，其中所述的疾病是肝硬化。14、如權(quán)利要求ll所述的方法，其中所述的疾病是肝細(xì)胞癌變。15、一種藥物的制備包含一種或多種權(quán)利要求1所述的化合物及一種制藥學(xué)上可接受的載體的。16、一種由下列組分組成的組合物A)至少一種如權(quán)利要求1至3之任一所述的二氫嘧啶，B)至少一種不同于A的HBV抗病毒劑和，適當(dāng)情況下，C)至少一種免疫調(diào)節(jié)劑。17、如權(quán)利要求16所述的組合物，其中組分B是HBV聚合酶抑制劑。18、如權(quán)利要求16所述的組合物，其中組分B是拉米夫定(lamivudine)。19、如權(quán)利要求16所述的組合物，其中組分B選自下述分子式所示的化合物其中，R1和R2，分別獨(dú)立是，d-C4-烷基或者，分別獨(dú)立地為，CrC4-烷基或者，與其所在位置上的氮原子一起，形成具有5-6個(gè)環(huán)原子包括碳和/或氧原子的環(huán)，R3至R12,分別獨(dú)立是，氫、卣素、d-(V烷基、任意的取代d畫Cr烷氧基、硝基、氰基或三氟甲基，R13是氫、CKV垸基，CKV?；蚍价?，X是卣素或任意取代的d-C4-烷基，及其鹽。20、如權(quán)利要求19所述的組合物，其中化合物具有如下結(jié)構(gòu)。21、如權(quán)利要求16至20之任一所述的組合物，其中免疫調(diào)節(jié)劑C包括干擾素。22、一種組合物，其由下述物質(zhì)組成A)權(quán)利要求1至3所述的二氫嘧啶，B)拉米夫定(lamivudine)和，適當(dāng)時(shí)，C)干擾素。23、一種如權(quán)利要求16至22之任一所述的組合物的制備方法，其特征在于，以適合方式組合或混合組分A,B和，適當(dāng)情況下的組分C。24、如權(quán)利要求16至22之任一所述的用于控制疾病的組合物。25、一種藥物，其包含至少一種如權(quán)利要求16至22之任一所述的組合物，且適當(dāng)情況下，其他活性藥物成分。26、如權(quán)利要求16至22之任一所述的組合物在制備治療和預(yù)防病毒性疾病的藥物中的用途。27、如權(quán)利要求16至22之任一所述的組合物在制備治療和預(yù)防乙型肝炎感染的藥物中的用途全文摘要本發(fā)明涉及一種適于對(duì)抗乙肝病毒(HBV)感染含有亞砜和砜的新型噻唑基二氫嘧啶，及其與其他抗病毒劑的組合物。文檔編號(hào)A61K31/541GK101328168SQ20081012572公開日2008年12月24日申請(qǐng)日期2008年6月18日優(yōu)先權(quán)日2007年6月18日發(fā)明者S·戈?duì)柕侣?劉遺松,靜李申請(qǐng)人:張中能