專利名稱：：一種治療缺血性腦血管疾病的藥物及其制備方法一種治療缺血性腦血管疾病的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療缺血性腦血管疾病的藥物及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。卒中是引起人類死亡的前3位原因和致殘的第一位原因。在我國，根據(jù)衛(wèi)生部調(diào)査，卒中每年發(fā)病率為150/10萬，病死率為120/10萬，現(xiàn)有腦卒中患者人數(shù)約500—600萬，其中約75%不同程度喪失勞動能力，重度致殘者占40%以上，隨著人口老齡化，卒中的問題將日益嚴(yán)重，社會和經(jīng)濟(jì)將不堪重負(fù)。其中缺血性中風(fēng)占急性腦血管病的43—65%，病死率為15—25%，具有發(fā)病率高、病死率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，是我國醫(yī)學(xué)界亟待攻克的難題。目前，國內(nèi)外越來越多的報(bào)道指出早期治療缺血性腦血管疾病的重要性，特別在發(fā)病36小時(shí)內(nèi)。美國NINDSt-PA溶栓(發(fā)病后3小時(shí)內(nèi))研究結(jié)果表明，神經(jīng)功能恢復(fù)正常者較對照組增加11%，治療組36小時(shí)內(nèi)顱內(nèi)出血明顯增加(6.4%比0.6%)。由于溶栓治療尚處于初期研究階段，早期出血率高，其危險(xiǎn)/療效比還需明確。抗凝治療(包括肝素和口服抗凝劑)長時(shí)期用于防止血栓的擴(kuò)延和進(jìn)展性腦血管病、短暫性腦缺血發(fā)作、椎一基底動脈血栓形成和預(yù)防腦栓塞再發(fā)療效不確定，如使用不當(dāng)，可增加顱內(nèi)和全身出血的危險(xiǎn)。降纖治療的大隨機(jī)、對照、雙盲的研究報(bào)道不多，仍處于研究階段，降纖至何種程度，如何減少出血并發(fā)癥的問題，尚待解決，其療效尚有待進(jìn)一步評價(jià)。腦保護(hù)劑是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)，在理論上有一定的依據(jù)，但迄今尚未找到經(jīng)臨床研究證明確定有效的制劑。在介入治療方面，據(jù)報(bào)道，頸動脈內(nèi)膜切除術(shù)對防治短暫性腦缺血性發(fā)作已取得肯定療效，對頸內(nèi)動脈閉塞70%以上者，療效相對較好。雖然這些介入性治療包括顱內(nèi)外血管經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)及血管內(nèi)支架置入或與溶栓治療結(jié)合己引起越來越多的重視，但資料不多尚處于研究階段，缺乏成熟經(jīng)驗(yàn)?？傊毙匀毖阅X血管病的西醫(yī)治療，迄今尚無重大突破，方法雖多，療效尚不十分肯定，有些正在研究中。目前，隨著對中風(fēng)病認(rèn)識的不斷研究，中醫(yī)對中風(fēng)的病因病機(jī)有了更深入地認(rèn)識。"內(nèi)虛邪中"之外風(fēng)學(xué)說被當(dāng)今大部分醫(yī)家所認(rèn)同。陳立峰(湖南中醫(yī)雜志，1997;13(6):56頁)等人認(rèn)為正氣虛弱，感受外邪，經(jīng)脈痹阻，營衛(wèi)失和，營氣不能達(dá)于外，則出現(xiàn)肢體麻木不仁，半身不遂；營氣不能達(dá)于內(nèi)則神昏、舌強(qiáng)語蹇；馮學(xué)功(中醫(yī)雜志，1998;39(8),156頁)亦認(rèn)為人體正氣虧虛是中風(fēng)發(fā)病之本，"虛而受邪"，使風(fēng)邪人侵，夾痰濁瘀血阻于患肢，氣血不得暢行而腫脹疼痛。同時(shí)認(rèn)識到痰濁與瘀血亦是缺血性中風(fēng)的基本病機(jī)。在治法上，祛風(fēng)活絡(luò)法被多數(shù)醫(yī)家用于治療缺血性中風(fēng)，并且取得了一定的療效，但不能很好的反映本病的病機(jī)特點(diǎn)。此外，運(yùn)用益氣活血法治療缺血性中風(fēng)病的報(bào)道也較多，程金倉(山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1999;23(3):198-499)等人以益氣活血為法，用芪蛭膠囊治療48例缺血性中風(fēng)，愈顯率為815%,總有效率為979%,并且具有降脂，降低血液粘稠度，改善腦部血液循環(huán)作用。馮福海[河南中醫(yī)，1998;18(2),32頁]等人用黃芪、當(dāng)歸、川芎、丹參、水蛭、紅花、郁金、赤芍等治療缺血性中風(fēng)65例，有效率為83.33%。以益氣、活血為組方原則的方藥研究顯示，能使腦缺血動物海馬組織一氧化氮(No)含量下降、LPO生成減少、GSH-Px活性升高，能減輕No介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用，提高自由基清除酶的活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。但以上研究多是在以活血化瘀為主的基礎(chǔ)上佐以益氣藥，無以反映本病的主要病機(jī)。近年來關(guān)于中風(fēng)病的多數(shù)研究，病例數(shù)較少，多未設(shè)對照組，主要著眼于實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和癥狀改善等方面，且沒有很好體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的特點(diǎn)，極少采用病損水平和殘疾/生活能力水平評定等指標(biāo)，如美國國立衛(wèi)生研究院腦卒中量表(NIHSS)和BartheI指數(shù)(BI)有很好的真實(shí)性和可靠性，且真實(shí)性不受評定人員變化的影響，二者均廣泛用于腦卒中的臨床試驗(yàn)。改良Rankin量表(MRS)可靠性好且非常簡單，廣泛用于大規(guī)模多中心臨床試驗(yàn)。此外，大多數(shù)的文獻(xiàn)報(bào)道多為中藥煎劑的有效性，服用不便，且缺乏藥物的動物藥效學(xué)、毒理學(xué)研究，不利于臨床廣泛推廣。[
發(fā)明內(nèi)容]因此，人們對療效更好的治療缺血性腦血管疾病的中藥制劑存在較大的需求，但遺憾的是，本發(fā)明出現(xiàn)之前，還沒有發(fā)現(xiàn)合適的藥物，本發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)研究，并通過動物藥理、毒性試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)的反復(fù)驗(yàn)證，終于找到了有更好療效和服用性的治療治療缺血性腦血管疾病的內(nèi)服藥物，從而完成本發(fā)明。本發(fā)明的目的就是提供一種更為有效治療缺血性腦血管疾病的中藥組合物；本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了該中藥組合物的制備方法。本發(fā)明藥物選擇黃芪、水蛭、地龍、大血藤和桂枝進(jìn)行組合的，將這些藥物組合使得各藥物功效產(chǎn)生協(xié)同作用，從而能有效治療缺血性腦血管疾病。其中選用黃芪是因?yàn)槠溲a(bǔ)氣固表，利尿托毒，排膿生肌。選用水蛭是因?yàn)槠淦蒲?，逐瘀，通?jīng)。選用地龍是因?yàn)槠淝鍩岫@，通絡(luò)，平喘利尿。選用大血藤是因?yàn)槠淝鍩峤舛?，活血，祛風(fēng)。選用桂枝是因?yàn)槠浒l(fā)汗解肌，溫通經(jīng)脈，助陽化氣，平?jīng)_降氣。為了獲得最佳療效，本發(fā)明組合物的用量也是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量為在下述重量份范圍都具有較好的療效黃萬30-40份、水蛭5-IO份、地龍20-30份、大血藤20-30份、桂枝10-20份。優(yōu)選為黃芪35份、水蛭7份、地龍22份、大血藤23份、桂枝13份。本發(fā)明藥物可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成常規(guī)內(nèi)服制劑，例如可以將這些原料藥研成粉末混合均勻制成散劑沖服，本發(fā)明優(yōu)選的藥物活性組分的制備方法如下a)稱取各原料藥黃芪、水蛭、地龍、大血藤和桂枝，備用；b)將所述重量配比的水蛭和地龍用相當(dāng)于它們總重量5倍量的乙醇浸泡5-9天，濾過得到藥渣，濾液回收乙醇后，再濃縮成流浸膏另置；c)將上述藥渣與所述重量配比的黃芪、大血藤和桂枝混合后加入相當(dāng)于它們總重量7倍量的水浸泡0.5小時(shí)后，煎煮二次，每次1小時(shí)，每次煎液過濾后得到濾液，合并兩次濾液，同時(shí)收集揮發(fā)油另置；d)將上述合并后的濾液減壓濃縮至相對密度為1.05-1.15(在8(TC條件下測)，冷卻至常溫后，向該濾液中加入乙醇，使溶液中乙醇的體積濃度達(dá)到50%，靜置12小時(shí)后過濾得到濾液，回收乙醇后，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20(在80'C條件下測)；e)向上述d)步驟得到的濾液中加入上述流浸膏，以重量份數(shù)2份的糊精作母核沸騰制粒，粉碎成細(xì)粉，均勻噴入上述揮發(fā)油，密閉24小時(shí)，即得本發(fā)明藥物的活性組分。其中，在步驟b)中使用的乙醇的體積濃度最好為60%;本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服劑型，如丸劑、散劑、片劑、膠囊劑、口服液等。較好的是，將步驟e)制得的活性組分裝入膠囊中制成膠囊劑或?qū)⒉襟Ee)制得的活性組分與片劑常用輔料混合，壓片制成片劑，方便病人服用。本發(fā)明藥物具有益氣活血、化瘀通絡(luò)等功效。主治缺血性腦血管疾病，對冠心病、靜脈血栓性疾病等也有較好療效。[具體實(shí)施方式]以下通過試驗(yàn)來進(jìn)一步闡明本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括了本發(fā)明藥(以下稱蛭龍活血通瘀膠囊)物的藥效學(xué)試驗(yàn)和臨床療效觀察試驗(yàn)。一、毒理學(xué)研究1、急性毒性(最大給藥量法)在預(yù)試實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，取小鼠20只，雌雄各半，以灌胃針能抽取的最大濃度及最大給藥量，灌胃給藥0.4ml/10g，24小時(shí)內(nèi)給藥3次，以攝食、皮毛、糞便、分泌物，四肢活動，動物死亡為指標(biāo)，觀察藥物的急性毒性。結(jié)果在給藥后觀察期間，動物的精神狀態(tài)良好，毛色光潔，活動自如，呼吸均勻，飲食量可，二便無異常，口鼻內(nèi)無異常分泌物，無一只動物死亡。觀察14天后，以頸椎脫位法處死動物，并對所有動物進(jìn)行尸檢后肉眼觀察，亦未發(fā)現(xiàn)異常；按最大灌胃濃度和容積計(jì)算小鼠對該藥的最大耐受量(MTD)為81.6g/kg體重(折合原藥材1326g/kg);按以下公式計(jì)算相當(dāng)于人耐受量的倍數(shù)(小鼠的最大耐受量/小鼠平均體重20g)X(成人平均體重60kg/成人日常用量)，故蛭龍活血通瘀膠囊對小鼠的耐受量相當(dāng)于人的1020倍。2、長期毒性取大鼠80只，稱重后隨機(jī)分為藥物3g/Kg/d、L5g/Kg/d、0.75g/Kg/d組及對照組，用藥組每天灌胃給不同濃度的藥物0.75ml/100g，對照組給予等容量生理鹽水,連續(xù)12周,每天觀察動物給藥后的攝食、皮毛、糞便、分沁物、呼吸活動、口腔大體觀察、眼耳鼻器官、行為活動,每2周稱重一次，分別在12周末和停藥后2周末每組各取一半動物，心臟采血3.5ml檢測外周血像(2.5ml，WBC、Hb、RBC、PLT、N、L、BT、CT)和血液生化(lml,BUN、CR、GPT、GOT、AKP、TP、ALB、Glu、CHol)，兩次采血后分兩批處死動物取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、胸腺、睪丸(雙)、子宮(雙)電子天平稱重，行肉眼觀察和病理切片檢查。結(jié)果一般癥狀給藥期和恢復(fù)期高、中、低劑量組和對照組動物均未出現(xiàn)任何中毒反應(yīng)，一般狀況良好。3、血液學(xué)檢查結(jié)果血紅蛋白((Hb)、紅細(xì)胞(RBC)計(jì)數(shù)、白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)及分類(W)、血小板(PLT)計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞(n/。)及凝血時(shí)間(CT)和出血時(shí)間(BT)測定。(表l、2)表l蛭龍活血通痂膠嚢給藥末期大鼠血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果(x士SD)(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果各組間比較無顯著性差異(P〉0.05)4、血液生化檢查結(jié)果血糖(Glu)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、肌酐(CR)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、堿性磷酸酶(AKP)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHOL)測定。(表3、4)表3蛭龍活血通瘀囊給藥末期大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果(x士SD)(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注*與高劑量組比較有顯著性差異(<0.05)5、系統(tǒng)解剖和病理組織學(xué)檢査結(jié)果解剖肉眼觀察結(jié)果僅見恢復(fù)期對照組有l(wèi)例動物一側(cè)腎臟腎盂擴(kuò)張，形成多個(gè)相通的囊腔。其余動物主要臟器組織表面光滑，色澤正常臟器重量及臟器系數(shù)稱量動物心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、前列腺、子宮及卵巢、睪丸重量并計(jì)算臟器系數(shù)，(表5，6，7，8)表5蛭龍活血通瘀膠囊給藥末期雌性大鼠臟器重量(g)及其系數(shù)(M)測定結(jié)果(x士S)(n=5)器官對照組低劑量組中劑量組高劑量組<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>0,00250.0029胸腺g0.35士0.0500.34士0.0650.35士0.0750.38士0.072%0.14士0.0230.14士0.0320.13士0.030.16士0.025子宮g0.64士0.130.578士0.160,53士0.200.59士0.13%0.25士0.0440.23士0.0680.20士0.0640.24士0.056注*與對照、低、中劑量組比較有顯著性差異(p〈0.01)表6蛭龍活血通瘀膠囊給藥末期雄性大鼠臟器重量(g)及其系數(shù)(M)測定結(jié)果(x士S)(n=5)器官對照組低劑量組中劑量組高劑量組腦g1.95士0.0871.95士0.0741.98士0.0721.90士0.14%0.51士O.0500.48士0.0320,52士0.0630.51士0,042心g1.45士0.151.41士O.191.45士0.161.41士O.18%0.38士0.0440.35士0.0390.38士0.0410.37士0.022肺g1.67士0.551.70士O.261.66士O.191.78士0.28%0.44士0.140.42士0.0610.44士0.0670.47士0.058肝g11.41士1.4011.22士1.5911.38士1.3011.84士1.41%2.98士0.282.76士0.402.98士0.303.16士0.28脾g0.76士0.130.89士0.160.83士0.160.79士0.11%0.20士0.0290.22士0.0410.22士0.0320.21士O.038腎g2.54士0.392.54士0.302.58士0.302.65士0.28%0.66士0.010.62士0.0690.68士0.070.71士0.038腎上腺g0.059士0.020.060士0.0120.062士0.0110.058士0.0100.015士0.015士0.01士O.00310.017士0.00360.00470.0028胸腺g0.39士0.0770.37土0.0770.39士0.090.34士0.085%0.10士0.0210.09士0.0170.10士0.0240.091士0.023睪丸g2.90士0.202.85士0.332.98士0.212.98士0.21%0.85士0.090.85士0.160.88士0.0750.92士0.22各組間比較無顯著性差異(P〉0.05)表7蛭龍活血通瘀膠囊給藥恢復(fù)期雌性大鼠臟器重量(g)及其系數(shù)(y。)測定結(jié)果(x士S)(n=5)器官對照組低劑量組中劑量組高劑量組腦g1.85士0.0951.84士0.0631.84士0.121.78士0.11%0.70士0.0230.70士0.0540.68士0.0190.67士0.022心g1.06士0.101.08士0.0661.14士0.111.01士0.082%0.40土0.0310.41士O.0430.43士0.0480.38士0.027肺g1.27士0.0691.33士O.0931.51士O,331.33士0.156%0.48士0.0220.51士O.0630.56士0.120.50士0.056肝g7.90士0.687.68士0.458.37士0.507.62士0.53%2.97士0.232.91士O.283.ll士O.122.87士0.17脾g0.67士0.0240.68士0.090.72士0.040.64士0.07%0.25士0.0150.26士0.0460.28士0.0150.24士0.028腎g1.74士0.141.79士0.141.84士0.151.73士0.0940.66士0.0480.68士0.0870.69士0.0410.65士0.014腎上腺g0.062士0.010.064士0.055士0.0130.0519±0.093%0.023士0.00850.021士O.0050.019士O.0031<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>各組間比較無顯著性差異(P〉0.05)表8蛭龍活血通瘀膠囊給藥恢復(fù)期雄性大鼠臟器重量(g)及其系數(shù)(M)測定結(jié)果(x士S)(n=5)器官對照組低劑量組中劑量組高劑量組<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>%0.013士0.00210.01士0.00220.012士0.0020.013士0.0016胸腺g0.36土0.090.37士0,060.34士0.0620.34士0.047%0.085士0,0180.086士0.0160.075士0.0130.082士0.0094睪丸g3.03士0.0763.23士0.412.95士0.263.02士0.26%0.70士0.0410.74士0.0880.66士0.0480.715士0.028各組間比較無顯著性差異(P〉0.05)病理組織學(xué)檢査結(jié)果對照組及高劑量組動物心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、前列腺、子宮及卵巢、睪丸病理組織學(xué)檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對照組和高劑量組均有部分動物肺部有間質(zhì)性肺炎，肝臟可見散在點(diǎn)狀小灶性肝細(xì)胞壞死，胃腸輕度炎癥。但對照組與高劑量組的病變發(fā)生率及病變程度無顯著性差異(P〉0.05,)觀察到的這些組織學(xué)異常改變屬大鼠常見自發(fā)性病變，故認(rèn)為非供試藥品所致，其余組織器官檢查未見明顯異常改變。6、急性毒性實(shí)驗(yàn)和長期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)論蛭龍活血化瘀膠囊藥粉1.6g/kg、4g/kg、8gAg(折合原藥材量26g/kg、65g/kg、130g/kg體重)，連續(xù)12周灌胃，停藥恢復(fù)2周，大鼠未出現(xiàn)明顯中毒反應(yīng)，體重增長，進(jìn)食，飲水正常，活動自如，毛澤光滑，一般狀態(tài)良好；血液學(xué)，血清生化學(xué)(肝臟功能、腎臟功能)和重要器官重量系數(shù)及病理組織學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)由供試品所致的異常改變和明顯毒性損傷。本試驗(yàn)低劑量1.6g/kg(原藥材量26g/kg/d)己達(dá)到臨床擬用藥量(原藥材量1.3g/kg/d)的20倍；以蛭龍活血通瘀膠囊最大濃度0.68g/ml給小鼠灌胃給藥，未引起任何急性毒性反應(yīng)；蛭龍活血通瘀膠囊有較寬的安全劑量范圍，臨床擬推薦用原藥材量1.3g/kg體重是較安全的。二、藥效學(xué)試驗(yàn)1、局灶性腦缺血大鼠模型復(fù)制(線栓法復(fù)制腦膜中動脈阻塞缺血模型)頸部正中切口暴露頸總動脈按Longa線栓法制成局灶腦缺血模型,將事先備好的線栓經(jīng)右頸內(nèi)動脈入顱插至大腦中動脈;缺血30min后，拔出線栓,縫合血管和皮膚；24h后如上步驟線栓再插至右側(cè)大腦中動脈，再缺血時(shí)間為24h.2、蛭龍活血通瘀膠囊對局灶性腦缺血大鼠防治作用大鼠分為蛭龍活血通瘀膠囊3g/Kg/d、1.5g/Kg/d、0.75g/Kg/d組、步長腦心通組1.5g/Kg/d、模型組及對照組，用藥10天檢測行為活動、認(rèn)知記憶功能、生存率;取腦組織測梗塞體積、梗塞區(qū)病理解剖。3、蛭龍活血通瘀膠囊對局灶性腦缺血大鼠活血化瘀作用大鼠分為蛭龍活血通瘀膠囊3g/Kg/d、1.5g/Kg/d、0.75g/Kg/d組、步長腦心通組1.5g/Kg/d、模型組及對照組，用藥10天全自動血流變快測儀檢測血流變學(xué)、顯微鏡下觀察軟腦膜微循環(huán)、頸外動、靜脈血栓稱重檢測.4、蛭龍活血通瘀膠囊對局灶性腦缺血大鼠抗炎抗氧化作用大鼠分為蛭龍活血通瘀膠囊3g/Kg/d、1.5g/Kg/d、0.75g/Kg/d組、步長腦心通組1.5g/Kg/d、模型組及對照組，用藥10天,化學(xué)法測腦組織MDA、SOD、放免法和ELISA法檢測IL-1、IL-6、IL-10、TNF-a、NOS、NO、ET)5、蛭龍活血通瘀膠囊對局灶性腦缺血大鼠梗塞區(qū)細(xì)胞凋亡的影響大鼠分為蛭龍活血通瘀膠囊3g/Kg/d、1.5g/Kg/d、0.75g/Kg/d組、步長腦心通組1.5g/Kg/d、模型組及對照組，用藥10天，免疫組化法檢測Bcl-2、Caspase3表達(dá)的影響.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示免疫組化染色后(未復(fù)染)，bcl-2蛋白陽性呈現(xiàn)棕黃色顆粒，位于核膜、胞膜及胞漿內(nèi)，其在假手術(shù)組的腦組織中呈弱陽性表達(dá)。在模型組，缺血周圍區(qū)bcl-2蛋白的表達(dá)上調(diào)，而活血通瘀組和步長腦心通組bcl-2蛋白的表達(dá)較模型組更多。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示免疫組化染色后，Caspase-3蛋白陽性呈現(xiàn)棕黃色顆粒，位于核膜、胞膜及胞漿內(nèi)。其在假手術(shù)組的腦組織中呈弱陽性表達(dá)。在模型組，缺血周圍區(qū)Caspase-3蛋白的表達(dá)上調(diào)，而活血通瘀組和步長腦心通組Caspase-3蛋白的表達(dá)較模型組表達(dá)有所減少。6、各組動物腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)比較(見表9)表9各組大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況(%)分組動物數(shù)(只)劑量(/kg)AI假手術(shù)組10—2.02±0.25模型組10—19.35±8.54**蛭龍活血通瘀膠囊組102.012.17±6.58**#步長腦心通組102.012.78±7.35**1*注與假手術(shù)組比較，林P〈0.01;與模型組比較SP<0.01結(jié)果表明模型組腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著高于假手術(shù)組，蛭龍活血通瘀組與腦心通藥物干預(yù)組與模型組相比細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著下降(P〈0.01),表明蛭龍活血通瘀膠囊與步長腦心通膠囊對腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡有明顯抑制作用。7、各組大鼠bcl-2及caspase3的基因蛋白表達(dá)指數(shù)比較(見表10)表10caspase3和bcl—2基因蛋白表達(dá)PEI改變(％)分組動物數(shù)劑量(g/kg)bcl-2Caspase-3假手術(shù)組10—4.70±1.353.53±0.07模型組10—53.31±3.35**68.36±6.53**蛭龍活血通瘀膠囊組102.063.25±4.23鄉(xiāng)43.36±5.43**#步長腦心通組102,060.75±6.37***145.33±3.46**tt注與假手術(shù)組比較，林P〈0.01;與模型組比較臥<0.01結(jié)果表明模型組腦神經(jīng)細(xì)胞bcl-2和Caspase-3基因蛋白表達(dá)均顯著高于假手術(shù)組(P〈0.01),與模型組相比，蛭龍活血通瘀組與腦心通組更能提高bcl-2的基因表達(dá)(P〈0.01)，明顯抑制Caspase-3基因蛋白表達(dá)(P〈0.01)。8、結(jié)論動物實(shí)驗(yàn)表明其能上調(diào)抗凋亡基因bcl-2，降低caspase3蛋白的表達(dá)，說明其可能通過抑制腦組織細(xì)胞凋亡，從而減少缺血性損傷，搶救半暗帶，保護(hù)損傷腦組織。三、本發(fā)明藥物治療缺血性腦血管疾病的臨床觀察1、一般資料共觀察病例60例，男性28例，女性32例。其中蛭龍活血通瘀膠囊觀察組30例，男15例，女15例；對照組30例，男13例，女17例。兩組患者性別分布比較，經(jīng)X2檢驗(yàn)，P〉0.05，無明顯差異，具有可比性。兩組病例年齡分布為觀察組48-70歲，平均(62.00±7.55)歲；對照組42-70歲，平均(61.17±7.64)歲。經(jīng)t檢驗(yàn)，t=0.42，p=0.63，無明顯差異，具有可比性。主要癥狀中醫(yī)辨證屬中風(fēng)風(fēng)痰瘀阻型。主癥半身不遂，口舌歪斜，言語謇澀或不語，感覺減退或消失。次癥頭暈?zāi)垦?，痰多而粘，舌質(zhì)暗淡，舌苔薄白或白膩，脈弦滑。2、診斷標(biāo)準(zhǔn)(1)西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1995年中華醫(yī)學(xué)會第四次全國腦血管病學(xué)術(shù)會議修訂的《各類腦血管病診斷要點(diǎn)》。動脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞①常于安靜狀態(tài)下發(fā)病。大多數(shù)發(fā)病時(shí)無明顯頭痛和嘔吐。②發(fā)病較緩慢，多逐漸進(jìn)展，或呈階段性進(jìn)行，多與腦動脈粥樣硬化有關(guān)，也可見于動脈炎、血液病等。(D—般發(fā)病后12天內(nèi)意識清楚或輕度障礙。④有頸內(nèi)動脈系統(tǒng)和/或椎一基底動脈系統(tǒng)癥狀和體征。(D應(yīng)做頭顱CT或MRI檢查。腔隙性梗塞①發(fā)病多由于高血壓動脈硬化引起，呈急性或亞急性其病。②多無意識障礙。③臨床表現(xiàn)多不嚴(yán)重，較常見的為純感覺性卒中、純運(yùn)動性卒中、共濟(jì)失調(diào)性輕偏癱、構(gòu)音不全-手笨拙綜合征或感覺運(yùn)動性卒中。④應(yīng)進(jìn)行頭顱CT或MRI檢查，以明確診斷。(2)中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照衛(wèi)生部藥政局制定的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》之"中藥新藥治療中風(fēng)病的臨床研究指導(dǎo)原則"執(zhí)行。中風(fēng)病主癥偏癱、神識昏蒙、言語蹇澀或不語，偏身感覺異常，口舌歪斜；次癥頭痛、眩暈、瞳神變化、飲水發(fā)嗆、目偏不瞬、共濟(jì)失調(diào)。急性起病，發(fā)病前多有誘因，常有先兆癥狀。發(fā)病年齡多在40歲以上。具備2個(gè)主癥以上，或1個(gè)主癥2個(gè)次癥，結(jié)合起病、誘因、先兆癥狀、年齡即可確診；不具備上述條件，結(jié)合影像學(xué)檢查結(jié)果亦可確診。臨床分期參照王維治主編《神經(jīng)病學(xué)》人民衛(wèi)生出版社，1984年11月第一版制定。急性期新發(fā)病，病程多在2周以內(nèi)；恢復(fù)期病程在2周至6個(gè)月以內(nèi)；慢性期病程在6個(gè)月以上。病情嚴(yán)重程度分級按照格拉斯哥昏迷量表(Glasgow)評分。中醫(yī)癥狀分級計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)按照國家中醫(yī)藥管理局腦病急癥科研協(xié)作組起草制定的《中風(fēng)病診斷療效評定標(biāo)準(zhǔn)》(試行)制定的"中風(fēng)病癥狀分級量化表"進(jìn)行。3、治療方法基礎(chǔ)治療按照中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會1998年制定的"急性缺血性腦卒中患者處理的建議"制定基礎(chǔ)治療規(guī)范。7天為一療程，連續(xù)2個(gè)療程。一般治療呼吸功能維持；并發(fā)癥的處理；調(diào)整血壓、血糖至略高于病例病前水平；降低體溫；腦保護(hù)劑治療(胞二磷膽堿1.5g+0.9WN.S250ml靜脈滴注，qd)，預(yù)防感染；必要時(shí)用20%甘露醇處理顱內(nèi)高壓，消除腦水腫；觀察治療期間不得加用與試驗(yàn)藥品效用相同或相近的藥物與非藥物療法，包括活血化瘀中藥、中成藥及西藥溶栓、降脂等藥物及針灸、推拿等治療。(注意以上治療若有禁忌癥者可適當(dāng)調(diào)整)試驗(yàn)組基礎(chǔ)治療+蛭龍活血通瘀膠囊3粒(0.4g/粒)。對照組基礎(chǔ)治療。療程7天為一療程，連續(xù)2個(gè)療程。4、療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(1)中醫(yī)證候療效判定臨床痊愈中醫(yī)臨床癥狀、體征消失或基本消失，證候積分減少》95%;顯效中醫(yī)臨床癥狀、體征明顯改善，證候積分減少》70%;有效中醫(yī)臨床癥狀、體征均有好轉(zhuǎn)，證候積分減少》30%，但不足70%;無效中醫(yī)臨床癥狀、體征均無明顯改善，甚或加重，證候積分減少不足30%。(2)西醫(yī)臨床療效評定分級標(biāo)準(zhǔn)基本痊愈功能缺損評分減少90—100%，病殘程度0級；顯著進(jìn)步功能缺損評分減少46—89%，病殘程度1一3級；進(jìn)步功能缺損評分減少18—45%;無變化功能缺損評分減少或增加在18%以內(nèi)；惡化功能缺損評分增加18%上。注計(jì)算公式(尼莫地平法)為[(治療前積分-治療后積分)+治療前積分]X100%。(3)血液流變學(xué)指標(biāo)比較治療前后全血粘度、血漿粘度、全血還原粘度，紅細(xì)胞壓積、血沉。5、治療結(jié)果(1)兩組中醫(yī)證候療效的變化用藥后觀察組總有效率93.33%，對照組總有效率73.33%，兩組間比較有著顯著差異(P〈0.05),說明活血通瘀觀察組證候療效優(yōu)于對照組。(見表ll)_表ll兩組用藥后中醫(yī)證候療效比較_組別例數(shù)臨床痊愈顯效有效無效總有效率(%)觀察組307138293.33對照組302911873.33X24.24注總有效率為臨床痊愈、顯效和有效三者之總和，X2=170，P=0.03。經(jīng)比較有顯著差異(P<0.05)，說明觀察組證候療效優(yōu)于對照組(2)兩組主要中醫(yī)臨床癥狀療效比較兩組主要臨床癥狀治療前后積分值比較(見表12)表12兩組主要臨床癥狀治療前后積分值比較(^i"組別肢體麻木語H不利頭暈?zāi)垦Ｌ刀喽成噘|(zhì)暗苔薄白或膩脈弦滑觀察治療前2.33±0.992.66±2.30±3.103.202.60±2.70±0.462,40±組1.021.110.670.610.490.72治療后1.70±0.741.96±1.83±2.331,032.00±L03士0.671,90O.了l0.910.710.710.260.83t2.85求承3,33**1.624.49木氺13.00林5.83林12.04林2.34*對照治療前2.23±0,562,802.303.36±3.06±2.66±2.67士0.712.43±組0.761,140.490.550.470.67治療后1.83±0.742.60±1.733.03±3.03±2,50±2.23±0.851.860.560.94a550.730.500.862.26*1.06#1.852.27*#0.20#1.履2,14Jt2.98氺氺注治療前后對比林P〈0.01，*P<0.05，與對照組比較ttP〈0.05.治療前兩組癥狀無顯著差異(P〉0.05)，治療后產(chǎn)生了顯著差異，經(jīng)t檢驗(yàn)，治療前后比較，提示觀察組治療前后肢體麻木、口舌歪斜、頭暈?zāi)垦！⑻刀喽?、舌象均有明顯改善，對照組僅肢體麻木、頭暈?zāi)垦！⒚}象三種癥狀有所改善，且觀察組在改善各癥狀上優(yōu)于對照組。(3)兩組神經(jīng)功能缺損評分、NIHSS評分、BI指數(shù)評分和MRS評分兩組病例祌經(jīng)功能缺損評分，NIHSS評分，BI指數(shù)評分，MRS評分的比較(見表13)表13兩組病例CSS、NIHSS、BI、MRS治療前后比較(x土"組別css畫SSBIMRS觀察組治療前24.63±4.4611.36±4.2066,33±10.162.60±1.35治療后8.46±3.075.33±3.3377.83±4.671.53±1.07t16.57**5.59**5.16料3.08*對照組治療前24.66±4.889.80±6.4261.67±9.762.33±1.42治療后14.26±3.987.13±3.8567.16±6.391.68±1.17t9.39**tt1.97*2.41***3.05林注治療前后對比林P〈0.01，*P<0.05，與對照組比較W5〈0.05由上表看出，治療后兩組CSS、NIHSS、BI和MRS評分均有顯著差異，提示觀察組與對照組用藥均可有效改善急性腦梗塞的神經(jīng)功能缺損，二者作用以觀察組為優(yōu)。觀察組治療前后CSS、NIHSS、BI和MRS評分均有顯著差異，對照組僅CSS，MRS評分有顯著差異，蛭龍活血通瘀膠囊尚可顯著改善CSS及BI評分。(4)兩組對血脂的影響觀察組能降低TC，TG，LDL_C，治療前后有顯著差異性，而對照組僅TC有所降低，表明蛭龍活血通瘀膠囊有一定的降脂效果(見表14)表14兩組對血脂的影響(x士"組別TC(,1/L)TG(隱ol/L)HDL_C(mmol/L)LCD—C(誦ol/L)觀察組治療前6.95±0.962.61±0.251.26±0.624.43±0.21治療后5.76±0.942.29±0.121.39±0.572.67±0.46t5.04承承6.23**0.7920.04**對照組治療前6.78±0.442.91±1.241.38±0.374.65±0.20治療后6.30±0.342.46±0.201.25±0.234.51±0.22t4.57*#2.01#2.12.12J*注治療前后對比林P〈0.01,*P<0.05，與對照組比較ftP〈0.05(5)兩組對血流變學(xué)的影響兩組病人治療前后血流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均有所改善(P<0.05或P<0.01)，蛭龍活血通瘀觀察組除血漿粘度外其他指標(biāo)均有所改善，對照組僅紅細(xì)胞聚集指數(shù)與血沉有所改善，且觀察組較對照組改善更明顯，表明蛭龍活血通瘀膠囊可明顯改善患者血流變學(xué)指標(biāo)(見表15)表15兩組治療前后血液流變學(xué)變化對比(;c土s)組別高切粘度(nPa")低切血漿粘度紅細(xì)胞聚集指數(shù)血沉(腿/h)血小板聚集率纖維蛋白原(g/U觀察組治療前5,45±0.812.8±3.332.0±0,413.98±0.5028.02±11.0141,30±5.024.35±0.92治療后4.8±0.68*tt9.71±1.862.82±0.41**22.80±9.97*38,65±3.98±0.72幼2,06林##0.303.10鄉(xiāng)t值3.CH33,9241.4649.3432.182.1892.184對照組治療前5.66±0.8713.09±2.631.923.62±0.3127.25±10.9043.62±2.314.59±1.020.21治療后5.25±0.6312.30±2.711.87士2.80±0,32**21.30±42.27±4.094.33±0.640,1510.12*t值1.9491.2170.8839.4622.2621.6841.125注與本組治療前比較*<0.05，**P<0.01:與對照組治療后比較，ttP<0.05，##P<0.01(6)兩組對血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能的影響由表16可以看出，治療前兩組血管內(nèi)皮分泌因子都有不同程度的升高，兩組經(jīng)治療后各指標(biāo)都有不同程度改善，觀察組使ET，TXB2，PAI顯著降低，并使ET/NO比值顯著降低，TPA/PAI比值顯著增高，而對照組在ET,PG,TPA,PAI有所改善，但觀察組改善較對照組更為明顯。表16兩組對血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能的影響G士s)組別觀察組對照組治療前治療后治療前治療后ET(pg/ml〉125.95土34.0770.35±23.57樹tttt7.61113.55±36.1893.57±28.34*2.38N0(腦ol/ral)58.24±28.9268.50±24.321.5157.46±27，8362.29±23.520.69ET/N02.73±1.971.22±0.75林ft3.962.53±2.031.71±0.751.97TXB2(pg/ml)958.29±463.68483,88±224.54**#5.29879.91±508.89668.32±350.642.01PG(pg/ml)455.81士285.39335.26±157.891.78545.84±440.31352.29±128.32*2.42TXB2/PG2.73士i'852.11±2.291.092.04±1,562.16±1,430.27TPA(ng/ml)42.69±22.2840.50±7.50.5048.02土19.5136.50±13.50*2,53PAI(ng/ml)121.36±39.5962,11±32.83*柳5.91127.89±39.987.09±28.29**5,05TPA/PAI0.38±0.210.93士0.47**糾4.100.4±0.20.47±0.241.26注與本組治療前比較^<0.05,*外<0.01:與對照組治療后比較，ftP<0.05，tW頁P(yáng)<0.01(7)不良反應(yīng)及安全性治療前后對患者進(jìn)行心電圖、肝腎功能、血常規(guī)檢査，結(jié)果顯示均無明顯異常，療程結(jié)束后加以復(fù)查，兩者無明顯差異(P〉0.05)(見表17)。觀察組30例患者，僅有1例病人在治療的1周內(nèi)出現(xiàn)輕度腹瀉，為稀溏便，無膿血，每日2-5次，每次200-500ml，持續(xù)2-4天，大便培養(yǎng)無致病菌生長，不經(jīng)處理癥狀可緩解，未影響服藥，屬安全性2級；對照組無不良反應(yīng)。表17兩組治療前后肝腎功能、血常規(guī)的變化(x土s)組別ALT(u/L)BUN(咖ol/L)Cr(mmol/UHg(g/L)RBC(X1012/L)WBC(X109/L)觀察組治療21.2±15.437.35±3.61104.03±23.13142.05±4.67±0.367.15±1.67前13.45治療19.42±13.627.16±3.5595.62±25.31135.55±4.38±0.376.95±1.86后13.04對照組治療22.71±10.0813.15±5.7885.98±24.32141.35±4.28±0.547.05±1.73前13.18治療20.08±7.849.61±4.3698.33±21.34138.25±4.53±0.286.67±1.62后15.56注:經(jīng)t檢驗(yàn)，兩組治療前后均P>0.05結(jié)論本研究分析了急性腦梗塞總病機(jī)以風(fēng)痰瘀阻為主，確立了"重用補(bǔ)氣，以補(bǔ)氣為君藥，輔以化痰通絡(luò)，佐以祛風(fēng)"的治療方法，在此法則指導(dǎo)下形成中藥制劑"蛭龍活血通瘀膠囊"，并采用規(guī)范化方案進(jìn)行了臨床研究；研究表明蛭龍活血通瘀膠囊對急性腦梗塞的治療效果較好，能提高臨床療效，改善血流變學(xué)，降低血脂，明顯抑制血小板、紅細(xì)胞聚集，改善腦循環(huán)，改善血管內(nèi)皮分泌功能，說明蛭龍活血通瘀膠囊治療急性腦梗塞是有效的；本研究亦未發(fā)現(xiàn)有明顯用藥不良事件；本研究注意到急性腦梗塞與血管內(nèi)皮素分泌功能失衡、細(xì)胞凋亡相關(guān)。而且本研究結(jié)果亦提示蛭龍活血通瘀膠囊對臨床癥狀的改善與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮分泌功能和抑制腦組織細(xì)胞凋亡有關(guān)。以下通過實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明藥物的制備方法。本發(fā)明藥物的膠囊劑制備a)稱取各原料藥黃芪35g、水蛭7g、地龍22g、大血藤23g和桂枝13g，備用；b)將所述重量的水蛭和地龍用145g濃度為60%的乙醇浸泡5天，濾過得到藥渣，濾液回收乙醇后，再濃縮成流浸膏另置C)將上述藥渣與所述重量配比的黃芪、大血藤和桂枝混合后加入相當(dāng)于它們總重量7倍量的水浸泡0.5小時(shí)后，煎煮二次，每次1小時(shí)，每次煎液過濾后得到濾液，合并兩次濾液，同時(shí)收集揮發(fā)油另置；d)將上述合并后的濾液減壓濃縮至相對密度為1.05-1.15(80'C)，冷卻至常溫后，向該濾液中加入乙醇，使溶液中乙醇的體積濃度達(dá)到50%，靜置12小時(shí)后過濾得到濾液，回收乙醇后，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20(80'C);e)向上述d)步驟得到的濾液中加入上述流浸膏，以重量份數(shù)2份的糊精作母核沸騰制粒，粉碎成細(xì)粉，均勻噴入上述揮發(fā)油，密閉24小時(shí)，即得本發(fā)明藥物的活性組分，將該活性組分裝入明膠硬膠囊。本發(fā)明藥物的顆粒劑制備a)稱取各原料藥黃民40g、水蛭5g、地龍20g、大血藤20g和桂枝15g，備用；b)將所述重量的水蛭和地龍用125g濃度為60%的乙醇浸泡9天，濾過得到藥渣，濾液回收乙醇后，再濃縮成流浸膏另置；c)將上述藥渣與所述重量配比的黃芪、大血藤和桂枝混合后加入相當(dāng)于它們總重量7倍量的水浸泡0.5小時(shí)后，煎煮二次，每次1小時(shí)，每次煎液過濾后得到濾液，合并兩次濾液，同時(shí)收集揮發(fā)油另置；d)將上述合并后的濾液減壓濃縮至相對密度為1.05-1.15(8(TC)，冷卻至常溫后，向該濾液中加入乙醇，使溶液中乙醇的體積濃度達(dá)到50%,靜置12小時(shí)后過濾得到濾液，回收乙醇后，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20(8(TC);e)向上述d)步驟得到的濾液中加入上述流浸膏，以重量份數(shù)2份的糊精作母核沸騰制粒，粉碎成細(xì)粉，均勻噴入上述揮發(fā)油，密閉24小時(shí)，即得本發(fā)明藥物的活性組分，將該活性組分加入乙醇做粘合劑，淀粉做填充劑制成顆粒劑。本發(fā)明藥物的膠囊劑制備a)稱取各原料藥黃芪30g、水蛭10g、地龍25g、大血藤25g和桂枝10g，備用；b)將所述重量的水蛭和地龍用175g濃度為60%的乙醇浸泡7天，濾過得到藥渣，濾液回收乙醇后，再濃縮成流浸膏另置；c)將上述藥渣與所述重量配比的黃芪、大血藤和桂枝混合后加入相當(dāng)于它們總重量7倍量的水浸泡0.5小時(shí)后，煎煮二次，每次1小時(shí)，每次煎液過濾后得到濾液，合并兩次濾液，同時(shí)收集揮發(fā)油另置；d)將上述合并后的濾液減壓濃縮至相對密度為1.05-L15(8(TC)，冷卻至常溫后，向該濾液中加入乙醇，使溶液中乙醇的體積濃度達(dá)到50%,靜置12小時(shí)后過濾得到濾液，回收乙醇后，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20(80'C);e)向上述d)步驟得到的濾液中加入上述流浸膏，以重量份數(shù)2份的糊精作母核沸騰制粒，粉碎成細(xì)粉，均勻噴入上述揮發(fā)油，密閉24小時(shí)，即得本發(fā)明藥物的活性組分，將該活性組分加入輔料后壓制成片劑。權(quán)利要求1、一種治療缺血性腦血管疾病的藥物，其特征在于由下列重量份的原料藥制成黃芪30-40份、水蛭5-10份、地龍20-30份、大血藤20-30份、桂枝10-20份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于各個(gè)原料藥的用量為黃芪35份、水蛭7份、地龍22份、大血藤23份、桂枝13份。3、權(quán)利要求1或2所述藥物的制備方法，它包括下列步驟-a)稱取各原料藥黃芪、水蛭、地龍、大血藤和桂枝，備用；b)將所述重量配比的水蛭和地龍用相當(dāng)于它們總重量5倍量的乙醇浸泡5-9天，濾過得到藥渣，濾液回收乙醇后，再濃縮成流浸膏另置；c)將上述藥渣與所述重量配比的黃芪、大血藤和桂枝混合后加入相當(dāng)于它們總重量7倍量的水浸泡0.5小時(shí)后，煎煮二次，每次1小時(shí)，每次煎液過濾后得到濾液，合并兩次濾液，同時(shí)收集揮發(fā)油另置；d)將上述合并后的濾液減壓濃縮至相對密度為1.05-1.15(80。C)，冷卻至常溫后，向該濾液中加入乙醇，使溶液中乙醇的體積濃度達(dá)到50%，靜置12小時(shí)后過濾得到濾液，回收乙醇后，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20(8(TC);e)向上述d)步驟得到的濾液中加入上述流浸膏，以重量份數(shù)2份的糊精作母核沸騰制粒，粉碎成細(xì)粉，均勻噴入上述揮發(fā)油，密閉24小時(shí)，即得本發(fā)明藥物的活性組分。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述藥物的制備方法，其特征在于將步驟e制得的活性組分裝入膠囊中。5、根據(jù)權(quán)利要求3所述藥物的制備方法，其特征在于將步驟e制得的活性組分與片劑常用輔料混合，壓片。6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于在b)步驟中使用的乙醇的體積濃度為60%。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療缺血性腦血管疾病的藥物及其制備方法，由下列重量份的原料藥制成黃芪30-40份、水蛭5-10份、地龍20-30份、大血藤20-30份、桂枝10-20份，通過備料、醇提、煎煮過濾、再次醇提和制粉工藝制得，本發(fā)明藥物具有益氣活血、化瘀通絡(luò)等功效，主治缺血性腦血管疾病，對冠心病、靜脈血栓性疾病等也有較好療效。文檔編號A61P9/00GK101433586SQ20081014777公開日2009年5月20日申請日期2008年12月5日優(yōu)先權(quán)日2008年12月5日發(fā)明者琴孫,尹思源,廖惠玲,張開蓮,楊思進(jìn),雪白,蒲清榮,陳美娟申請人:瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院