專(zhuān)利名稱(chēng)：一種替米考星納米乳抗菌藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥領(lǐng)域，涉及一種獸用抗菌藥物的新劑型，特別涉及一種 替米考星納米乳抗菌藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
替米考星為畜禽專(zhuān)用的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭 氏陰性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用，尤其對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、溶 血性巴氏桿菌及畜禽霉形體作用最強(qiáng)。因?yàn)樘婷卓夹堑闹饕移鞴贋榉魏腿?房，藥物濃度高，因此主要用于畜禽呼吸道感染和奶牛乳房炎。但是由于替 米考星在水中不溶，現(xiàn)在用的傳統(tǒng)制劑是替米考星磷酸鹽，其內(nèi)服后因易被 胃酸破壞，吸收不完全、生物利用度低、體內(nèi)半衰期短，另外其對(duì)心臟有一 定的毒性。因此，如何尋找一種合適的劑型從而提高替米考星的生物利用度、 靶向性、緩釋性、延長(zhǎng)其在體內(nèi)半衰期、增強(qiáng)療效己經(jīng)成為當(dāng)前急需解決的 問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種生物利用 度高、靶向性和緩釋性好的替米考星納米乳抗菌藥物。
實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術(shù)方案是一種替米考星納米乳抗菌藥物，該納米
乳抗菌藥物的粒徑在1 100nm之間，其組成成份及其質(zhì)量百分比為
替米考星0. 01% 6. 0°/。、表面活性劑/助表面活性劑20. 0% 40. 0%、油2.2% 10.0%、余量為蒸餾水，上述成份的質(zhì)量百分比之和為100%。
根據(jù)納米乳的形成機(jī)理，當(dāng)表面活性劑的親水親油平衡(HLB)值與油所 需的HLB值相等或相近時(shí)，容易形成性質(zhì)非常穩(wěn)定的納米乳。本發(fā)明根據(jù)此 方法選用毒性相對(duì)較小，不易受電解質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)及酸堿的影響且與其他表 面活性劑的相容性好的聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油(RH-40)、吐溫-80作為表 面活性劑。
助表面活性劑是用來(lái)調(diào)節(jié)表面活性劑的HLB值，使表面活性劑與油更容 易形成納米乳。本發(fā)明選用1，2-丙二醇、無(wú)水乙醇作為助表面活性劑來(lái)調(diào)節(jié) HLB值，而且它們也是替米考星很好的溶劑。
根據(jù)納米乳形成機(jī)理，油是配合表面活性劑參與形成穩(wěn)定納米乳的，肉 豆蔻酸異丙酯(IPM)、乙酸乙酯的HLB值和吐溫-80的HLB值接近，易形成穩(wěn) 定的納米乳，所以本發(fā)明選用的油是肉豆蔻酸異丙酯(IPM)、乙酸乙酯。
本發(fā)明所述的替米考星納米乳抗菌藥物中表面活性劑和助表面活性劑最 佳質(zhì)量比為2:1 4:1。
本發(fā)明所述的替米考星納米乳抗菌藥物中，表面活性劑和助表面活性劑 之和與油的最佳質(zhì)量比例為9:1 7:3。
本發(fā)明是采用偽三元相圖法篩選出最佳配方制備替米考星納米乳。當(dāng)表 面活性劑和助表面活性劑質(zhì)量比為2:1 4:1，表面活性劑和助表面活性劑之 和與油的質(zhì)量比例為9:1 7:3時(shí)形成的納米乳區(qū)最大，最穩(wěn)定，同時(shí)載藥量 最高。組方中所用的聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油(RH-40)、吐溫-80毒性相對(duì) 較小，不易受電解質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)及酸堿的影響；用1，2-丙二醇、無(wú)水乙醇作 助表面活性劑形成的納米乳乳化能力強(qiáng)，另外它還用來(lái)調(diào)節(jié)HLB值，而且它們也是替米考星很好的溶劑；肉豆蔻酸異丙酯(IPM)、乙酸乙酯的HLB值和吐
溫-80的HLB值接近，易形成穩(wěn)定的納米乳，另外它們的分子量小，小分子油
相的作用與助表面活性劑類(lèi)似，易嵌入到表面活性劑中，與之共同形成界面
膜，增溶能力大于大分子油相；在納米乳體系中水所占的百分比越高，形成納米 乳的可能性越大。
方法為選取無(wú)水乙醇或1,2-丙二醇作為替米考星原料藥的溶劑(也把它 當(dāng)作助表面活性劑)，朋-40或吐溫-80為表面活性劑，肉豆蔻酸異丙酯(IPM) 或乙酸乙酯為油相，使表面活性劑/助表面活性劑(km=2:l 4:l)與油相分
別按照9: 1、 8: 2、 7: 3、 6: 4、 5: 5、 4: 6、 3: 7、 2: 8、 1: 9的比例變
化，找出能形成納米乳的比例，結(jié)果顯示替米考星納米乳的配方是替米考星
0. 01% 6. 0%、表面活性劑/助表面活性劑(km二2:l 4:l) 20. 0% 40. 0%、 IPM 2.2% 10.0%、余量為蒸餾水。按該配方分別精密稱(chēng)取各組分將其混合后置恒 溫磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆蚴蛊湫纬傻S色、澄清透明的0/W型微乳。
將本發(fā)明的替米考星納米乳抗菌藥進(jìn)行高速離心和在-4"C、室溫、60 °C 條件下進(jìn)行留樣觀察看其穩(wěn)定性，是否有分層和結(jié)晶析出。
1. 高速離心試驗(yàn)對(duì)納米乳穩(wěn)定性的影響
取制備的替米考星納米乳抗菌藥物液適量于離心管中，密封管口，置高 速離心機(jī)中，以12000r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，經(jīng)20 min離心納米乳液仍保 持澄清透明，未見(jiàn)替米考星析出及油水分層現(xiàn)象。
2. 留樣觀察實(shí)驗(yàn)
取部分替米考星納米乳，分裝于幾個(gè)玻璃瓶中，密封之后分別置于冰箱 -4。C、室溫25。C、 60。C條件下留樣考察60d，每隔5d取樣觀察。結(jié)果表明，該納米乳在三種溫度條件下均保持澄清透明的外觀，未破乳、分層和結(jié)晶析 出。透射電子顯微鏡下觀察，替米考星納米乳的液滴呈球形，其粒徑大小為l
100nm，且分布均勻，分散性良好。
本發(fā)明的替米考星納米乳抗菌藥物呈淡黃色澄清透明的液體，在低溫-4 nC下長(zhǎng)期放置沒(méi)有結(jié)晶析出，在6(TC高溫條件下也無(wú)混濁現(xiàn)象，可見(jiàn)是一種 穩(wěn)定的藥物劑型；而且制備方法簡(jiǎn)單、能耗低、毒性小、安全性高、不需特 殊設(shè)備可用于大批量生產(chǎn)，從而用于臨床治療畜禽疾病。
用途該藥物主要用于牛、豬、雞、羊等動(dòng)物由敏感菌引起的感染性疾 病，特別是畜禽呼吸道感染，如豬的喘氣病、傳染性胸膜肺炎、雞的支原體 病和動(dòng)物巴氏桿菌病，同時(shí)對(duì)奶牛乳房炎主要菌系具有良好作用。
本發(fā)明的替米考星納米乳的具體使用方法及用量混飲，用本品100 ml (5%)兌水65Kg，供畜禽自由飲用，連用3天。注意事項(xiàng)本品僅用于飲水， 不可注射，須兌水混勻后才能使用，不能直接使用，蛋雞產(chǎn)蛋期禁用。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的具有以下優(yōu)點(diǎn)
1) 具有粘度低、穩(wěn)定性好、分散性強(qiáng)、吸收迅速、靶向釋藥等特點(diǎn)，并 可提高藥物的生物利用度、延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的半衰期、降低毒副作用。
2) 它還具有表面張力低、浸潤(rùn)性好的特點(diǎn)，所以能使藥物很好的附著于 細(xì)菌上，滲透進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部干擾其代謝而發(fā)揮抑菌或殺菌作用。


圖1是本發(fā)明替米考星納米乳抗菌藥物的透射電子顯微鏡照片圖。
圖2是本發(fā)明替米考星納米乳抗菌藥物的粒徑分析圖。
圖3是本發(fā)明替米考星納米乳抗菌藥物的粒徑分析檢測(cè)報(bào)告圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)發(fā)明人給出的制備方法、產(chǎn)品配方及產(chǎn)品的使用效果試驗(yàn)例來(lái) 進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。
實(shí)施例1配制藥物濃度為0.01%的替米考星納米乳
1) 稱(chēng)取聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油(RH-40) 13.38g、肉豆蔻酸異丙酯 (IPM)2.43g、替米考星0.01g、蒸餾水84. 18g，備用；
2) 將聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油和替米考星攪拌混勻，適當(dāng)超聲乳化處 理有助于藥物溶解，直至替米考星完全溶解；再加入肉豆蔻酸異丙酯攪拌混 勻；最后緩慢滴加蒸餾水，滴加的同時(shí)不斷攪拌，直至形成均勻透明的體系， 即得本發(fā)明的藥物濃度為0. 01%的替米考星納米乳抗菌藥物。
實(shí)施例2配制藥物濃度為0. 1%的替米考星納米乳
RH-40 9. Og
IPM 1. Og
替米考星 0.03g
蒸餾水 20. Og
制備方法同實(shí)施例l
實(shí)施例3配制藥物濃度為0. 75%的替米考星納米乳
1) 稱(chēng)取聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油(RH-40) 9.0g、肉豆蔻酸異丙酯(IPM) l.Og、替米考星0.3g、 1，2-丙二醇4.0g、蒸餾水25.7g，備用；
2) 先將替米考星完全溶于1，2-丙二醇中(可在40。C水浴上適當(dāng)加熱有 助于溶解藥物)，然后加入RH-40攪拌均勻后，再加入IPM攪拌混勻；最后緩 慢滴加蒸餾水，滴加的同時(shí)不斷攪拌，直至形成均勻透明的體系，即得本發(fā)明的0. 75%的替米考星納米乳抗菌藥物。
實(shí)施例4配制藥物濃度為1. 37%的替米考星納米乳
替米考星 0.5g
1， 2-丙二醇 3. 27g
RH-40 9.81g
IPM 1.36g
蒸餾水 21.47g
制備方法同實(shí)施例3
實(shí)施例5-12的本發(fā)明替米考星納米乳抗菌藥物的制備方法
1) 按以下實(shí)施例配方稱(chēng)取替米考星、無(wú)水乙醇、IPM、乙酸乙酯、蒸餾 水備用；
2) 先將替米考星完全溶于無(wú)水乙醇(也可加適量的磷酸做助溶劑)，然后 加入吐溫-80攪拌均勻后，再加入IPM或乙酸乙酯攪拌混勻；最后緩慢滴加蒸 餾水，滴加的同時(shí)不斷攪拌，直至形成均勻透明的體系，即得本發(fā)明的替米 考星納米乳抗菌藥物。
實(shí)施例5配制藥物濃度為1. 5%的替米考星納米乳
替米考星 0.9g
無(wú)水乙醇 5.0g
吐溫-80 15. Og
IPM 2.2g
蒸餾水 36.9g
實(shí)施例6配制藥物濃度為1.5%的替米考星納米乳替米考星 0. 9g
無(wú)水乙醇 5.0g
吐溫-80 15. Og
IPM 5.0g
蒸餾水 34. lg 實(shí)施例7配制藥物濃度為2.7%的替米考星納米乳
替米考星 0.9g
無(wú)水乙醇 5.0g
吐溫-80 7. 5g
IPM 1.4g
蒸餾水 18.5g 實(shí)施例8配制藥物濃度為3. 3 %的替米考星納米乳
替米考星 1. Og
無(wú)水乙醇 5.0g
吐溫-80 7. 5g
IPM 1.4g
蒸餾水 15. Og 實(shí)施例9配制藥物濃度為3. 7 %的替米考星納米乳
替米考星 1. Og
無(wú)水乙醇 4. Og
吐溫-80 6. Og
IPM 1. lg
9蒸餾水 15. Og
實(shí)施例10配制藥物濃度為4%的替米考星納米乳
替米考星 1.2g
無(wú)水乙醇 5. Og
吐溫-80 7.5g
IPM 1.4g
蒸餾水 15. Og
實(shí)施例11配制藥物濃度為4.4%的替米考星納米乳
替米考星 1.2g
無(wú)水乙醇 4.0g
吐溫-80 6. Og
IPM 2.5g
蒸餾水 13.6g
實(shí)施例12配制藥物濃度為6.0%的替米考星納米乳
替米考星 1.3g
無(wú)水乙醇 4.0g
吐溫-80 6. Og
乙酸乙酯 1. lg
蒸餾水 9.4g
試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物用透射電子顯微鏡進(jìn)行微觀形態(tài)觀察(JEM1230型 透射電子顯微鏡，日本日立電子公司生產(chǎn))，結(jié)果顯示見(jiàn)圖l，從圖l可以看 出該納米乳液滴為球形，大小均一且分布均勻、分散性良好。圖2 、圖3為本發(fā)明納米乳用粒度分析儀測(cè)定結(jié)果圖(Zetasizer Nano ZS 型激光粒度分析儀，英國(guó)Malvern Instrument公司)，從圖2可以看出納米 乳粒徑〉10nm粒子占95。/。， 〉20nm占15%，粒度分布在10 20nm占80%，粒徑 分布范圍窄，粒徑比較均勻，平均粒徑為14.6nm，圖3為替米考星納米乳抗 菌藥物的粒徑分析檢測(cè)報(bào)告。
試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物的體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果
以替米考星溶液、酒石酸泰樂(lè)菌素為對(duì)照，本發(fā)明藥物對(duì)致病性巴氏桿 菌、無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、致病性大腸桿菌、沙門(mén)氏菌的抗菌效果 如下所述
MIC和MBC的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，替米考星納米乳對(duì)巴氏桿菌 的MIC是替米考星溶液的2倍，酒石酸泰樂(lè)菌素的5倍；對(duì)無(wú)乳鏈球菌、金 黃色葡萄球菌、致病性大腸桿菌的MIC分別是替米考星溶液的2倍，酒石酸 泰樂(lè)菌素的6倍；替米考星納米乳對(duì)沙門(mén)氏菌的MIC是替米考星溶液的2倍， 酒石酸泰樂(lè)菌素的8倍。結(jié)果表明替米考星納米乳的體外抑菌效果強(qiáng)于替米 考星溶液，與酒石酸泰樂(lè)菌素相比抑菌效果顯著。結(jié)果如下
表1 最低抑菌濃度(MIC )和最小殺菌濃度(MBC )(單位ng/ml)
細(xì)衞替米考星納米乳替米考星溶液酒石酸泰樂(lè)菌素現(xiàn)困 ■■MICMBCMICMBCMICMBC
巴氏桿菌1.953.93.97. 819. 7519. 5
無(wú)乳鏈球菌3.97. 817.8115. 6323. 4346. 87
金黃色葡萄球菌7.8115. 6315. 6331.2546. 8762. 5
致病性大腸桿菌3.97. 817. 8115. 6323. 4346. 87
沙門(mén)氏菌1. 953.93. 97.8115. 631. 2
納米乳作為一種新型的藥物載體，可提高難溶性藥物的溶解度，具有緩
11釋和靶向作用及提高口服生物利用度等優(yōu)點(diǎn)。藥物在納米大小范圍內(nèi)出現(xiàn)的 小尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)也有利于藥效增強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，替米考星納米 乳對(duì)巴氏桿菌、無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、致病性大腸桿菌、沙門(mén)氏菌 均具有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用。替米考星納米乳的抑菌能力比傳統(tǒng)制劑強(qiáng)， 其原因有三個(gè) 一是納米乳的粒徑在1 100nm，藥物及其載體極易透過(guò)細(xì)菌 的細(xì)胞壁，從而對(duì)細(xì)菌具有較強(qiáng)的抑制作用；二是空白納米乳具有自我抗菌 的能力，對(duì)綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌等均具有較強(qiáng)的殺滅作用；三是納米 乳中親水性分散相粒徑為納米級(jí)，遠(yuǎn)小于細(xì)菌的體積，且連續(xù)相是非極性的， 微生物也難以生長(zhǎng)。由于替米考星納米乳較強(qiáng)的抗菌活性，臨床上可用于牛、 豬、雞、羊等動(dòng)物的呼吸道感染的治療，如豬的喘氣病、傳染性胸膜肺炎、 雞的支原體病和畜禽巴氏桿菌病，同時(shí)也可用于奶牛乳房炎的治療。
權(quán)利要求
1. 一種替米考星納米乳抗菌藥物，其特征在于，該納米乳抗菌藥物的粒徑在1～100nm之間，其組成成份及其質(zhì)量百分比為替米考星0. 01％～6.0％、表面活性劑/助表面活性劑20.0％～40.0％、油2.2％～10.0％、余量為蒸餾水，上述成份的質(zhì)量百分比之和為100％；所述的表面活性劑是吐溫-80或聚氧乙烯醚(40)氫化蓖麻油(RH-40)；所述的助表面活性劑是無(wú)水乙醇或1，2-丙二醇；所述的油是肉豆蔻酸異丙酯(IPM)或乙酸乙酯。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述'的納米乳抗菌藥物，其特征在于，所述的表面活 性劑和助表面活性劑的質(zhì)量比為2:1 4:1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的納米乳抗菌藥物，其特征在于，所述的表面活 性劑和助表面活性劑之和與油的質(zhì)量比例為9: 1 7:3。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種替米考星納米乳抗菌藥物，粒徑在1～100nm之間，其組成成份及質(zhì)量百分比為替米考星0.01％～6.0％、表面活性劑/助表面活性劑20.0％～40.0％、油2.2％～10.0％、余量為蒸餾水，上述成份的質(zhì)量百分比之和為100％。該藥物外觀呈淡黃色澄清透明的液體，具有粘度低、穩(wěn)定性好、分散性強(qiáng)、吸收迅速等特點(diǎn)，并可提高藥物的生物利用度、使藥物在體內(nèi)的半衰期延長(zhǎng)、療效增強(qiáng)、毒性降低，并具有緩釋和靶向作用，同時(shí)，制備工藝簡(jiǎn)單、能耗低、毒性小、安全性高、不需特殊設(shè)備即可大量生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/04GK101422432SQ20081015029
公開(kāi)日2009年5月6日 申請(qǐng)日期2008年7月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月9日
發(fā)明者李向輝, 歐陽(yáng)五慶 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)