專利名稱：：苯比呋喃化合物的用途及含其的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體地涉及苯比呋喃化合物的用途及含其的藥物組自吞噬是一類溶酶體依賴的細(xì)胞內(nèi)蛋白或損傷器官降解過(guò)程。(Klionsky，D.J.&Emr，S.D.Science,2000，290，1717-21.)在這一過(guò)程當(dāng)中，雙膜的自吞噬體包被需要降解的細(xì)胞內(nèi)容物之后，與溶酶體融合行使降解功能，實(shí)現(xiàn)氨基酸的再循環(huán)。這一降解/再循環(huán)系統(tǒng)在進(jìn)化上高度保守，在發(fā)育、生長(zhǎng)、衰老、疾病、死亡等過(guò)程中至關(guān)重要。自吞噬-溶酶體途徑與泛素-蛋白酶體途徑一起成為真核細(xì)胞中的兩種主要降解系統(tǒng)，但與蛋白酶體途徑分工不同，自吞噬主要降解長(zhǎng)壽命蛋白，蛋白聚集體以及細(xì)胞器等。因此，除了參與一些重要的生理過(guò)程，自吞噬在一些由于特定組織中錯(cuò)誤折疊蛋白聚集等因素所導(dǎo)致的疾病例如阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)、帕金森癥(Parkinson'sdisease)、肌萎縮側(cè)索硬化癥(amyotrophiclateralsclerosis)、亨廷頓舞蹈病(Huntington'sdisease,HD)以及脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)的一些類型(spinocerebellarataxiatypes1,2,3，6，7，17)以及傳染性蛋白質(zhì)病(Priondiseases)、致死性家族失眠癥(fatalfamilialinsomnia)、cx-I型抗胰蛋白酶缺乏癥(alpha-lantitrypsindeficiency)、齒狀核紅核蒼白球路易斯核萎縮癥(dentatorubral-pallidoluysianatrophy)、額顳葉失智癥(frontaltemporaldementia)、進(jìn)行性上眼神經(jīng)核麻痹癥(progressivesupranuclearpalsy)、X連鎖脊延髓肌萎縮癥(spinobulbarmuscularatrophy)、神經(jīng)元核內(nèi)包涵體病(Neuronalintranuclearhyalineinclusiondisease)等的治療中顯得很有意義,通過(guò)化合物(如雷帕霉素，rapamycin)誘導(dǎo)自吞噬降解HD相關(guān)蛋白聚集體被證實(shí)是一種行之有效的方法(BergerZ，Ravik畫rB，MenziesFMetalHumMolGenet.2006,15:433-42)?；谧酝蘣藍(lán)在生理和病理過(guò)程中的重要作用，目前這一領(lǐng)域已日益成為生物學(xué)研究熱點(diǎn)。(Lum，J.J.,DeBerardinis，R.J.&Thompson,C.B.NatRevMo1CellBiol2005，6,439-48.)。在正常條件下，自吞噬在細(xì)胞中僅維持低微的本底水平，而在饑餓或其它壓力條件之下，自吞噬水平迅速上調(diào)。酵母基因分析業(yè)已確定了17個(gè)自吞噬相關(guān)基因(簡(jiǎn)稱ATG基因)(Klionsky，D.L，Cregg，J.M.，Dunn,W.A.etal.DevCell2003，5,539-45.)。這17個(gè)基因編碼的蛋白可以分為4類，包括參與調(diào)節(jié)自吞噬上游信號(hào)(如mT0R)的幾種絲/蘇氨酸激酶(Atgl，Atgl3，Atgl7)，參與調(diào)節(jié)自吞噬起始過(guò)程中脂/激酶信號(hào)復(fù)合物的蛋白(Atg6，Atgl4，Vps34，andVpsl5)，參與自噬體形成的2類新型泛素樣結(jié)合系統(tǒng)(Atg8以及Atgl2系統(tǒng))，以及幫助自吞噬體形成過(guò)程中結(jié)合于自吞唾體之上的ATG分子從成熟的自吞噬體上進(jìn)行解離的蛋白(Atg2，Atg9,Atgl8)。絕大多數(shù)酵母ATG基因在高等真核生物細(xì)胞中具有同源體(Mizushima，N.&Klionsky,D.J.AnnuRevNutr2007,27，19-40.)。例如，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，雷帕霉素靶蛋白mT0R激酶介導(dǎo)非饑餓等條件下自吞嗡抑制通路(Lum,J.J.，DeBerardinis,R.J.&Thompson,C.B.NatRevMolCel1,2005,6，439-48)。相反，酵母vps34蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的同源體C3PI3激酶則為自吞^f啟動(dòng)所必需，雷帕霉素因而也成為自吞噬研究和相關(guān)應(yīng)用過(guò)程中最常用的誘導(dǎo)劑。雷帕霉素(Rapamycin,RAPA，RPM),又名Sirolimus,是新型大環(huán)內(nèi)酯的抗排斥藥物，是目前世界上最新的強(qiáng)效免疫抑制劑，臨床上用于器官移植的抗排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的治療。在大量的臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其副作用有劑量依賴性，并且為可逆的，治療劑量的RAPA尚未發(fā)現(xiàn)有明顯的腎毒性，無(wú)齒齦增生。主要毒副作用包括頭痛，惡心，頭暈，鼻出血，關(guān)節(jié)疼痛。實(shí)驗(yàn)室檢查異常包括血小板減少，白細(xì)胞減少，血色素降低，高甘油三酯血癥，高膽固醇血癥，高血糖，肝酶升高(SG0T,SGPT),乳酸脫氬酶升高，低鉀，低鎂血癥等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供一類苯比吹喃衍生物在制備治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病的藥物中用途。本發(fā)明的目的之二是提供一種臨床適用的、能用于治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病的藥物制劑。本發(fā)明的目的之三是提供一種具有自吞噬誘導(dǎo)功能、能治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所致疾病的藥物的篩選方法。本發(fā)明的目的之四是提供一種治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病的治療方法?；谧酝淌勺饔脵C(jī)制，同時(shí)尋找更多的真正誘導(dǎo)自吞噬發(fā)生的小分子化合物，發(fā)明人以LC3-GFP在自吞噬發(fā)生時(shí)定位于自吞噬體膜這一特性為基礎(chǔ)，建立了一種基于圖像的高通量篩選自吞噬誘導(dǎo)劑的新方法(Kabeya，Y.，Mizushima,N.，Ueno，T.，etalEMB0J，2000,19，5720-8.)。靈長(zhǎng)類細(xì)胞中LC3蛋白乃是酵母ATG8的同源體，被認(rèn)為是自吞噬體的特征性蛋白標(biāo)記。通過(guò)與綠色熒光蛋白(GFP)融合表達(dá)，可以通過(guò)熒光顯微鏡方便地觀察到自吞噬體的情況。在正常培養(yǎng)的細(xì)胞中，LC3-GFP的熒光亮點(diǎn)數(shù)量以及熒光強(qiáng)度處于很低的本底水平，而在一些自吞噬誘導(dǎo)條件,例如饑餓或加入自吞噬誘導(dǎo)劑等，以上參數(shù)則迅速而顯著地升高(Mizushima,N.，Yamamoto，A.,Matsui，M.，etalMolBiolCel1,2004，15，1101-11.)。這為大規(guī)模地篩選可能地自吞噬提供了基礎(chǔ)。然而，LC3-GFP增加并能不完全等同于自吞噬降解活性的增加，它還有可能源于細(xì)胞損傷甚至溶酶體功能遭到破壞導(dǎo)致的自吞噬體過(guò)程停滯(抑制)等因素。同時(shí)，雖然本發(fā)明人篩選的480種化合物(ICCBknownbioactivelibrary,BIOMOL)已經(jīng)證實(shí)有清楚的生物活性，但絕大多數(shù)化合物都不會(huì)只有單一作用靶點(diǎn)，其本身已知的活性只可能為篩選提供參考，但并不能對(duì)以上所述的多種誘導(dǎo)LC3-GFP增加的情況加以區(qū)分。多種細(xì)胞內(nèi)、外的誘導(dǎo)因素包括饑餓、營(yíng)養(yǎng)因子去除、細(xì)菌感染、細(xì)胞器損傷以及蛋白錯(cuò)配等均可能誘導(dǎo)自吞噬發(fā)生。目前只對(duì)饑餓誘導(dǎo)的自吞噬機(jī)制研究相對(duì)清楚。但同時(shí)許多細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子例如AMPK,mTOR,C3PI3K，MAPK也被證實(shí)參與自吞噬調(diào)節(jié)(12)此外，Ca2+、Ca2+調(diào)節(jié)的蛋白酶(calpainsetal,Autophagy，2007，3，235-7)以及calmodulin(Hoyer-Hansen，M.，Bastholm,L.,Szyniarowski，P.，etalMolCell,2007,25，193-205.)亦可能參與自吞噔調(diào)節(jié)。由于化合物可能影響多個(gè)蛋白靶點(diǎn)，篩選到的增加LC3-GFP的化合物即便不是由于溶酶體功能破壞導(dǎo)致的自吞噬抑制，也需排除細(xì)胞死亡帶來(lái)的影響，從而尋找到通過(guò)影響已知甚至來(lái)知的自吞噬調(diào)控蛋白誘導(dǎo)自吞噬的化合物。III型磷月旨酰肌醇-3-磷酸激酶(classIIIphosphoinositide3-kinases(PI-3-kinases),PI3K)催化磷脂酰肌醇(phosphatidylinositolPI)磷酸化生成磷脂酰肌醇-3-磷酸(Phosphatidylinositol-3-phosphate，Ptdlns(3)P,PI(3)P),后者在細(xì)胞內(nèi)吞以及自吞噬體膜運(yùn)輸過(guò)程中至關(guān)重要(Simonsen，A.，Wurmser，A.E.,Emr,S.D.etalCurrOpinCellBiol,2001,13,485-92.)。同時(shí)Vps34/beclinl(分別為哺乳動(dòng)物細(xì)胞中酵母III型PI3K同源體Vps34與ATG6同源體beclinl)形成的復(fù)合物參與自吞鬼起始信號(hào)調(diào)節(jié)(Nobukuni，T.，Kokma，S.C.&Thomas，G.，CurrOpinCellBiol，2007,19，135-41)。因此，在自吞噬發(fā)生過(guò)程中，PI(3)P水平至少不應(yīng)當(dāng)降低太多。FYVEdomain由約70個(gè)氨基酸殘基組成，形成一個(gè)鋅指蛋白結(jié)構(gòu)，與Ptdlns(3)P特異結(jié)合，通常Ptdlns(3)P募集含有FYVEdomain蛋白結(jié)合于細(xì)胞器膜，參與蛋白運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程。因此，熒光標(biāo)記的FYVEdomain常被用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)PI(3)P水平及定位(St函ark,H.,Aasland,R.&Driscoll，P.C.FEBSLett,2002,513,77-84)。我們亦利用穩(wěn)定表達(dá)FYVE-RFP融合蛋白的細(xì)胞株觀察化合物對(duì)FYVEdomain的影響，從中間接反映化合物對(duì)自吞噬的影響，去除掉FYVE顯著減少的化合物。自吞噬過(guò)程的實(shí)質(zhì)是蛋白質(zhì)降解過(guò)程，它主要介導(dǎo)細(xì)胞器以及細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)壽命蛋白的降解(Mizushima，N.&Klionsky,D.J.AnnuRevNutr，2007,27,19-40.)。因此，檢測(cè)化合物是否促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)壽命蛋白降解是說(shuō)明化合物誘導(dǎo)自吞噬的一個(gè)重要佐證。另外，錯(cuò)誤折疊的蛋白大量聚集是多種神經(jīng)退行性疾病的一個(gè)顯著特點(diǎn)，例如，亨廷頓舞蹈病的發(fā)病機(jī)理即由于含有大量多聚谷氨酸(polyglutamine，polyQ)的蛋白聚集于神經(jīng)細(xì)胞當(dāng)中無(wú)法清理所致。自吞噬在此被認(rèn)為是polyQ清除機(jī)制(Wullschleger，S.，Loewith，R.&Hall，M.N.Cell，2006，124,471-84)。例如，自吞嗜誘導(dǎo)劑雷帕霉素就常用作清除PolyQ聚集體的化合物。所以，polyQ清除與降解實(shí)驗(yàn)同樣是自吞噬發(fā)生的重要佐證?；诖耍覀兘⒘藦臋z測(cè)LC3-GFP熒光變化、檢測(cè)FYVE-RFP熒光變化到檢測(cè)長(zhǎng)壽命蛋白總量或polyQ降解的一系列方法篩選誘導(dǎo)自吞噬的小分子化合物。本發(fā)明釆用了簡(jiǎn)便的化合物高通量篩選途徑，包括定量分析細(xì)胞中熒光標(biāo)記的LC3變化-定量分析細(xì)胞中熒光標(biāo)記的FYVE變化，獲得自吞嗡誘導(dǎo)劑候選化合物，再進(jìn)行長(zhǎng)壽命蛋白降解、polyQ降解等，最終確定新的自吞噬誘導(dǎo)劑和具有自吞噬機(jī)制的分子工具或錯(cuò)誤折疊蛋白聚集因素所導(dǎo)致的疾病等自吞噬相關(guān)疾病的治療的藥物。具體篩選步驟分3步進(jìn)行1、對(duì)480種已知生物活性的化合物(ICCBknownbioactivelibrary，BI0M0L)處理穩(wěn)定表達(dá)LC3-GFP的細(xì)胞株，以二甲基亞砜(DMSO)溶劑為空白對(duì)照，已知的自吞噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，高通量分析化合物作用導(dǎo)致的細(xì)胞數(shù)目以LC3-GFP熒光變化情況，去除明顯減少細(xì)胞數(shù)目或并不明顯增加LC3-GFP的化合物。2、將剩余的明顯增加LC3-GFP的化合物處理穩(wěn)定表達(dá)FYVE-RFP的細(xì)胞株，以DMS0溶劑為陰性對(duì)照，已知的自吞噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，高通量分析化合物作用導(dǎo)致的FYVE-RFP熒光變化情況，去除FYVE顯著減少的化合物。3、將剩余的明顯增加LC3-GFP且基本不減少FYVE-RFP的化合物作為候選的自吞噬誘導(dǎo)劑，通過(guò)LC3II/LC3I比例分析、長(zhǎng)壽命蛋白降解以及polyQ降解實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確證，上述3項(xiàng)指標(biāo)都較DMS0顯著增強(qiáng)的化合物即為篩選出的新的錯(cuò)誤折疊蛋白聚集因素所導(dǎo)致的疾病等自吞P藍(lán)相關(guān)疾病的治療的藥物，雷帕霉素在此依然作為陽(yáng)性對(duì)照。本發(fā)明公開了一類下列結(jié)構(gòu)通式(I)的苯比呋喃類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥在制備治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病的藥物中用途，其中，K選自烷基、鏈烯基、雜烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基或氨基烷基中之一；R2選自烷基、鏈烯基、雜烷基、烷氧烷基、烯氧基、烷氧基氨基烷基、烷基氨基羰基、磺酰基、烷基磺?；⑼榛鶃喕酋；被酋；?、酰基或酰胺基中之一；R3和R4獨(dú)立選自H、硝基、氨基、烷基或鹵素中之一；R5選自烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、磺?；⑼榛酋；?、烷基亞磺?；被酋；?、?；?NHS02R6中之一；R6選自H、氨基、烷基、鏈烯基、鹵代烷基、鹵代烯基、雜烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、磺?；?、烷基磺酰基、烷基亞磺?；?、氨基磺?；Ⅴ；⒎蓟榛?，環(huán)烷基芳基、雜芳基或雜環(huán)基中之一；在以上基團(tuán)中，各自可不被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，這些取代基包括鹵素、=0、=S、-CN、-N02、-CF3、-0CF3、烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、卣代烯基、卣代炔基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、磺?；⑼榛酋；被酋；?、烷氧基烷基、-COOH、-SH和?；?在某些具體實(shí)施方案中，K選自d-d。烷基，優(yōu)選為C4烷基；在某些具體實(shí)施方案中，R2為烷氧基氨基烷基，優(yōu)選為二乙氨基乙氧基；在某些具體實(shí)施方案中，R3和R4獨(dú)立選自H或I原子；在某些具體實(shí)施方案中，Rs選自H或-NHS02R6;116選自H、氨基或烷基；在一些具體實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)通式(I)的苯比^^喃化合物為胺碘酮(Amiodarone)、去乙基胺碘酮或決奈達(dá)隆(Dronedarone)。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(2)將(1)剩余的明顯增加LC3—GFP的化合物處理穩(wěn)定表達(dá)FYVE—RFP的細(xì)胞株，以二甲基亞砜溶劑為陰性對(duì)照，已知的自吞噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，高通量分析化合物作用導(dǎo)致的FYVE—RFP熒光變化情況，去除FYVE顯著減少的化合物；(3)雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，將(2)剩余的明顯增加LC3—GFP且基本不減少FYVE—RFP的化合物作為候選的自吞逸誘導(dǎo)劑，通過(guò)LC3II/LC3I比例分析、長(zhǎng)壽命蛋白降解以及polyQ降解實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確證，上述3項(xiàng)指標(biāo)都較二甲基亞砜顯著增強(qiáng)的化合物即為具有自吞噬誘的治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所致疾病的藥物。另一方面，本發(fā)明提供使用有效量的通式(I)所表示的化合物或含有通式(I)所表示的化合物的藥物組合物單獨(dú)或者與其它藥物聯(lián)合使用進(jìn)行治療由治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致、關(guān)聯(lián)或伴隨的病癥的方法。本方面所公開的化合物可以明顯地促進(jìn)自吞噬、減少細(xì)胞中錯(cuò)配蛋白聚集，并顯示出更低的細(xì)胞毒性，甚至優(yōu)于雷帕霉素和另一種已知的自吞噬誘導(dǎo)劑他莫西酚。本方面所公開的化合物可以在一些錯(cuò)配蛋白所導(dǎo)致的疾病如多聚谷氨酸聚集所導(dǎo)致的神經(jīng)退行性疾病治療中發(fā)揮作用，能開發(fā)成為治療相關(guān)疾病的治療藥物。圖l八種化合物增加內(nèi)源性LC3II比率圖2八種化合物增加polyQ降解。具休實(shí)施方式本發(fā)明所使用的術(shù)語(yǔ)"不被取代"是指無(wú)取代基或僅被氫取代。本發(fā)明所使用的部分術(shù)語(yǔ)定義如下"鹵素"是指氟、氯、溴和碘。"烷基"當(dāng)作一基團(tuán)或一基團(tuán)的部分時(shí)是指直鏈或者帶有支鏈的脂肪烴基團(tuán)。優(yōu)先選擇烷基為C,-C"的烷基；更優(yōu)先選擇為d-d。烷基；最優(yōu)先選擇為d-C6，除非另有指明。直鏈或和帶有支鏈的CrC6烷基的實(shí)例包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、特丁基、己基等。"烷基氨基"包括單烷基氨基和二烷基氨基兩種，除非另有指明。"單烷基氨基"是指(烷基-NH)-的基團(tuán);"二烷基氨基"是指:((烷基)2N)-的基團(tuán)。其中，烷基見(jiàn)本文有關(guān)定義。該烷基基團(tuán)優(yōu)先選擇CrC6的烷基基團(tuán)。實(shí)例包括，但不限于N-甲胺基、N-乙胺基、N-異丙胺基、N,N-(二乙基)胺基等。"氨基烷基"是指(氨基-烷基)-的基團(tuán)。其中，烷基見(jiàn)本文有關(guān)定義。實(shí)例包括，但不限于氨基乙基、l-氨基丙基、1-氨基丙基等。"芳基氨基"包括單-芳基氨基和二-芳基氨基兩種，除非另有說(shuō)明。單-芳基氨基是指(芳基-)NH-的基團(tuán)；二-芳基氨基是指式(芳基)2N-的基團(tuán)；芳基的定義見(jiàn)本文相關(guān)部分。"?；?包括(烷基-C0)-的基團(tuán)和(芳基-C0)-的基團(tuán)，除非另有說(shuō)明。其中烷基或芳基均見(jiàn)本文中的有關(guān)定義。?；膶?shí)例包括，但不限于乙?；⒈；?、異丁?；?、苯甲酰基等。"酰胺基"包括(烷基-CONH)-的基團(tuán)和(芳基-CONH)-的基團(tuán)，除非另有說(shuō)明。其中，烷基或芳基均見(jiàn)本文中的有關(guān)定義。酰胺基的實(shí)例包括，但不限于乙酰胺基、丙酰胺基、丁酰胺基、異丁酰胺基、苯甲酰胺基等。"烯基"作為一基團(tuán)或一基團(tuán)的一部分時(shí)是指至少含有一個(gè)碳-碳雙鍵的脂肪烴基團(tuán)，可為直鏈也可以帶有支鏈。優(yōu)先選擇具有C廠CH的烯基。C廠C,2則更好；最為優(yōu)先選擇的是C2-C6的烯基。該基團(tuán)可在其主鏈中含有多個(gè)雙鍵且其構(gòu)象可各自為E或Z。烯基基團(tuán)的例子包括，但不限于乙烯基、丙烯基等。"烷氧基"是指(烷基-0)-的基團(tuán)。其中，烷基見(jiàn)本文有關(guān)定義。C「C6的烷氧基為優(yōu)先選擇。其實(shí)例包括，但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基等。"烯氧基"是指(烯基-0)-的基團(tuán)。其中，的烯基見(jiàn)本文有關(guān)定義。d-C6的烯氧基為優(yōu)先選擇。"炔氧基"是指(炔基-O)-的基團(tuán)。其中，的炔基見(jiàn)本文有關(guān)定義。d-C6的炔氧基為優(yōu)先選擇。"烷氧羰基"是指(烷基-o-c(o))-的基團(tuán)。其中，烷基見(jiàn)本文有關(guān)定義。優(yōu)先選擇的烷基基團(tuán)為d-C6烷基。其實(shí)例包括，但不限于甲氧羰基、乙氧羰基等。"烷基亞磺?；?是指(烷基-S(9))-的基團(tuán)。其中，的烷基見(jiàn)本文有關(guān)定義。優(yōu)先選擇的烷基為C,-C6烷基基團(tuán)。烷基亞磺?；鶊F(tuán)包括，但不限于甲基亞磺?；⒁一鶃喕酋；取?烷基磺?；?是指(烷基-S(0)「0)-的基團(tuán)。其中，的烷基見(jiàn)本文有關(guān)定義。該優(yōu)先選擇的烷基為C,-C6烷基基團(tuán)。其實(shí)例包括，但不限于甲磺酰基、乙磺?；?。"烷基氨基芳基"是指烷基氨基-芳基基團(tuán)。其中，烷基氨基見(jiàn)本文有關(guān)定義。"環(huán)烷基"是指飽和或部分飽和的單環(huán)、稠環(huán)或螺環(huán)之碳環(huán)。以3-9個(gè)碳原子組成的環(huán)為優(yōu)先選擇。實(shí)例包括，但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。"環(huán)烷基烷基"是指環(huán)烷基-烷基基團(tuán)。其中，環(huán)烷基和烷基部分見(jiàn)本文有關(guān)定義。單環(huán)烷基烷基基團(tuán)包括，但不限于環(huán)丙基甲基，環(huán)戊基甲基，環(huán)己基甲基、環(huán)庚基甲基等。"雜環(huán)烷基"是指至少含有一個(gè)選自N,S，0的雜原子的環(huán)烷基。優(yōu)選含有l(wèi)-3個(gè)雜原子。優(yōu)選的環(huán)為3-14員環(huán)，更優(yōu)先選擇的環(huán)為4-7員環(huán)。雜環(huán)烷基包括，但不限于吡咯烷基、二氫吡咯基、四氫吡咯基、二氫吡唑基、哌啶基、嗎啉四氫呋喃基、四氫硫代呋喃基、四氫吡喃基等。"雜環(huán)烯基"是指至少含有一個(gè)雙鍵的雜環(huán)烷基。雜環(huán)烷基見(jiàn)本文有關(guān)定義。"雜環(huán)烷基垸基"是指(雜環(huán)烷基-烷基)-的基團(tuán)。其中，雜環(huán)烷基和烷基部分見(jiàn)本文有關(guān)定義。雜環(huán)烷基烷基基團(tuán)包括，但不限于(2-四氫呋喃基)甲基、(2-四氫硫代呋喃基)甲基等。"雜烷基"是指直鏈或含有支鏈烷基的基團(tuán)，并且在主鏈中，至少含有一個(gè)或多個(gè)選自S,O和N的雜原子。優(yōu)先選擇含有2-14個(gè)原子鏈。雜烷基包括，但不限于醚類、硫醚類、烷基酯類，第二或第三烷基胺類、烷基亞磺酸類等。"芳基"作為一基團(tuán)或一基團(tuán)的部分是指(1)芳香性的單環(huán)或稠環(huán)；優(yōu)先選擇具有5-12個(gè)碳原子的芳香性碳環(huán)(環(huán)原子均為碳的環(huán)狀構(gòu)造)。芳基的實(shí)例包括，但不限于苯基，萘基；(2)可以連接部分飽和的碳環(huán)，例如苯基和Cw環(huán)烷基或Cw環(huán)烯基基團(tuán)系互相稠合而形成一環(huán)狀結(jié)構(gòu)。實(shí)例包括,但不限于四氫萘基，茚基或氫茚基等。芳基基團(tuán)可被一個(gè)或多個(gè)取代基取代。"芳基烯基"是指(芳基-烯基)-的基團(tuán)。其中，的芳基和烯基見(jiàn)本文有關(guān)定義。示例性的芳基烯基基團(tuán)包括，但不限于苯基丙烯基等。"芳烷基"是指(芳基-烷基)-的基團(tuán)。其中，芳基和烷基部分見(jiàn)本文有關(guān)定義。示例性的芳烷基基團(tuán)包括，但不限于苯甲基，苯乙基、l-萘甲基等。"環(huán)烯基"是指非芳香性單環(huán)或多環(huán)環(huán)系。其至少含有一個(gè)碳-碳雙鍵且每環(huán)優(yōu)選具有5-10個(gè)碳原子。示例性的單環(huán)狀環(huán)烯基環(huán)包括，但不限于環(huán)戊烯，環(huán)己烯或環(huán)庚烯。環(huán)烯基集團(tuán)可被一個(gè)或多個(gè)取代基取代。"雜芳基"是指單環(huán)性或稠合的多環(huán)芳香雜環(huán)。優(yōu)先選擇含有一個(gè)或多個(gè)選自N,0或/和S的雜原子的5-7員芳香環(huán)。典型的雜芳基取代基包括實(shí)例，但不限于^^喃基，噻吩基，吡咯，吡唑，三唑，p塞唑，吡啶，嘧啶，吡嗪，p引噪,苯并咪唑等。"雜芳烷基"是指(雜芳基-烷基)-的基團(tuán)。其中，雜芳基和烷基部分見(jiàn)本文有關(guān)定義。示例性的雜芳烷基基團(tuán)包括，但不限于2-吹喃甲基、3-呋喃甲基、2-吡啶甲基等。本發(fā)明包括通式(I)所表示的化合物及其可能的各種異構(gòu)型式。包括非鏡像異構(gòu)體、鏡像異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和"E"或"Z"構(gòu)型異構(gòu)體的幾何異構(gòu)體等。任何具有一定基礎(chǔ)的化學(xué)工作者均可以分離出上述光學(xué)純或者立體異構(gòu)純的化合物。本發(fā)明包括通式(I)所表示的化合物及其可能的消旋體或/和鏡像異構(gòu)物/或/和非鏡像異構(gòu)物的混合物。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的鹽"是指上述化合物能保持原有生物活性并且適合于醫(yī)藥用途的某些鹽類。通式(I)所表示的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽有兩種形成形式一是與酸形成的鹽；另一是與堿或者堿金屬形成的鹽。與通式(I)所表示的化合物形成藥學(xué)上可接受的鹽的酸包括無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸。合適的無(wú)機(jī)酸包括鹽酸，硫酸和磷酸。合適的有機(jī)酸可選自脂肪族、環(huán)脂肪族、芳香性、雜環(huán)羧酸和磺酸類有機(jī)酸；其實(shí)例包括但不限于甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、甘醇酸、葡萄糖酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、甘氨酸、精氨酸、檸檬酸、反丁烯二酸、烷基磺酸、芳級(jí)磺酸等。與通式(I)所表示的化合物形成藥學(xué)上可接受的鹽的堿金屬包括鋰、鈉、鉀、鎂、鈣、鋁、鋅等；與通式(I)所表示的化合物形成藥學(xué)上可接受的鹽的堿包括膽堿、二乙醇胺、嗎啉等。"前藥"是一種通式(I)所表示的衍生物，借助于在體內(nèi)代謝的方式將其于活體內(nèi)轉(zhuǎn)化(例如藉由水解，還原或氧化)成通式(I)所表示的化合物。例如，可以將通式(I)所表示的、含有羥基基團(tuán)的化合物與酸反應(yīng)制備成相應(yīng)的酯。相應(yīng)的酯即為前藥，可以再活體內(nèi)水解母體藥物。適合來(lái)制備"前藥"的酸包括但不限于乙酸、獰檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、草酸、水楊酸、琥珀酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、亞甲基-雙-p-羥基萘酸、龍膽酸、羥乙基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸等。通式(I)所表示的化合物的制備可參見(jiàn)胺碘酮(Amiodarone)、去乙基胺碘酮或奈達(dá)隆(Dronedarone)的制備方法和步驟(如奈達(dá)隆的合成流線參見(jiàn)EP0471609、FR2665444、JP1992316554、US5223510;胺碘酮的合成流線參見(jiàn)CHARLIERR，DELT0URG,T0NDEURR，BIN0NF，ArchIntPharmacodynTher.1962Sep1;"9:255-64),可以廣泛應(yīng)用于類似物的合成，只需要變換起始原材料即可。通式(I)所表示的化合物亦可用以治療涉及、關(guān)于或由錯(cuò)誤折疊蛋白聚集因素所導(dǎo)致的疾病。已有許多病癥己知涉及或至少一部分藉由自吞"t所調(diào)節(jié)，其中己知自吞噬誘導(dǎo)劑對(duì)于減輕或減緩疾病發(fā)作扮演某種角色，或者該等征狀已知或己顯示可藉由自吞噬誘導(dǎo)劑抑制劑予以減羥。預(yù)期可藉由本發(fā)明的化合物加以治療的此型病癥包括但不限于下列阿爾茨海默病、帕金森癥、肌萎縮側(cè)索硬化癥、亨廷頓舞蹈病、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)以及眼、咽型肌營(yíng)養(yǎng)不良、傳染性蛋白質(zhì)病、致死性家族失眠癥、cx-型抗胰蛋白酶缺乏癥、齒狀核紅核蒼白球路易斯核萎縮癥、額顳葉失智癥、進(jìn)行性上眼神經(jīng)核麻痹癥、x連鎖脊延髓肌萎縮癥、神經(jīng)元核內(nèi)包涵體病。通常，當(dāng)本發(fā)明通式(I)所表示的化合物用于上述用途時(shí)，它們可與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑混合制成不同給藥途徑的藥物劑型，如注射劑、注射用無(wú)菌粉末、片劑、膠囊、醑劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑、栓劑等。上述劑型中可經(jīng)口服給藥的劑型為片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、醑劑。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖、白陶土、微粉硅膠、滑石粉、低取代羥丙基纖維素、羧甲基淀粉鈉、聚乙烯吡咯烷酮。而液態(tài)載體包括無(wú)菌水、乙醇、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制備藥物組合物的過(guò)程中通常使用的佐劑包括調(diào)味劑、著色劑、防腐劑(如羥苯烷基丁酯、苯甲酸鈉、山梨酸)和抗氧化劑(如維生素E、維生素C、焦亞硫酸鈉和二丁基羥基甲苯)。上述劑型中可用于注射途徑給藥的劑型包括注射劑、注射用無(wú)菌粉末，它們是將藥物與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合制成以供注射給藥的形式。溶劑包括無(wú)菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，還需加入抑菌劑(如苯甲醇、羥苯丁酯、硫柳汞)、等滲調(diào)節(jié)劑(如氯化鈉、葡萄糖)、助懸劑(如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素)、增溶劑(吐溫-SO、卵磷酯)、抗氧化劑(如維生素E、維生素C、焦亞硫酸鈉)和填充劑(如乳糖、上述劑型中可經(jīng)胃腸道外途徑給藥的有氣霧劑、粉霧劑、栓劑。粉霧劑中適合的載體實(shí)例包括乳糖、葡聚糖、阿拉伯膠、甘露、葡萄糖和十二烷基硫酸鈉。氣霧劑中適合的溶劑為無(wú)菌水、乙醇、植物油、油酸。適合的拋射劑為三氯一氟甲烷、二氯二氟甲烷、丙烷、異丁烷、二氧化碳、氮?dú)?。栓劑的制備可將藥物與一種適合的無(wú)刺激性賦形劑混合而成，賦形劑包括可可脂、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羥苯乙酯、甘油。所用的活性成分的有效劑量可隨給藥模式和待治療疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明通式(I)所表示的化合物每天以約0.05-200mg/kg動(dòng)物體重的劑量給予時(shí)，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開的劑量給予，或以緩釋形式給藥。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體混合的約0.5-200mg的通式(I)所表示的化合物。可調(diào)節(jié)此治療方案以達(dá)到最佳治療效果。例如，可根據(jù)治療狀況的需要，每天若干次分開給藥，或?qū)┝堪幢壤郎p少。通常，成人口服臨床劑量的范圍為0.5-200mg/日，優(yōu)選為l-100mg/日。下面結(jié)合具體實(shí)施例，來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例1化合物增加LC3-GFP的表達(dá)和聚集試驗(yàn)方法微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)是酵母自吞噬蛋白ATG8(Aut7/Apg8)的哺乳動(dòng)物蛋白同源體，定位于前自噬泡和自噬泡膜表面，為廣泛采用的自吞噬體膜標(biāo)i已(MizushimaN.IntJBiochemCellBiol2004;36:2491-2502)。本發(fā)明通過(guò)高內(nèi)涵顯微鏡分析統(tǒng)計(jì)綠色熒光(GFP)標(biāo)記的自噬體標(biāo)記LC3在化合物作用前后的熒光強(qiáng)度以及分布等變化情況具體方法在H4細(xì)胞中轉(zhuǎn)入融合蛋白LC3-GFP，構(gòu)建并篩選獲得H4-LC3細(xì)胞株作為篩選平臺(tái)對(duì)480種已知生物活性的化合物(ICCBknownbioactivelibrary,BI0M0L)進(jìn)行高內(nèi)涵篩選，具體方法將化合物用DMS0稀釋溶解配制不同濃度，每濃度重復(fù)3次；將H4-LC3細(xì)胞按照合適密度種植于96孔板，用化合物處理24小時(shí)。設(shè)置以下實(shí)驗(yàn)組空白對(duì)照(DMS0處理)、陽(yáng)性對(duì)照(誘導(dǎo)劑雷帕霉素處理)、實(shí)驗(yàn)組(化合物處理)等。如果化合物影響LC3的表達(dá)及分布，則可通過(guò)圖像以及熒光點(diǎn)大小、強(qiáng)弱等數(shù)值準(zhǔn)確體現(xiàn)。該實(shí)驗(yàn)被重復(fù)3次，選取在3次實(shí)驗(yàn)中LC3-GFP熒光強(qiáng)度大于空白對(duì)照組50%以上的72種化合物加以分析，根據(jù)統(tǒng)計(jì)的細(xì)胞數(shù)結(jié)果去除細(xì)胞死亡超過(guò)30%(與對(duì)照組比較)的化合物，剩余的化合物作為候選分子進(jìn)一步研究。試驗(yàn)結(jié)果對(duì)480種化合物進(jìn)行篩選后確認(rèn)47種化合物(用*標(biāo)注)顯著增加LC3-GFP且并不導(dǎo)致明顯的細(xì)胞死亡，可以用來(lái)繼續(xù)篩選可能的自吞噬抑制劑。結(jié)果見(jiàn)表1:表l:增加LC3-GFP強(qiáng)度且基本沒(méi)有細(xì)胞毒性的化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>實(shí)施例2化合物增加或不影響細(xì)胞內(nèi)PI(3)P水平試驗(yàn)方法III型PI3Kvps34是一種多功能蛋白，一方面，它催化PI磷酸化生成PI(3)P,細(xì)胞內(nèi)吞以及自吞噬體膜運(yùn)輸過(guò)程中至關(guān)重要(14)。同時(shí)Vps34/beclinl形成的復(fù)合物參與自吞噬起始信號(hào)調(diào)節(jié)(15)。因此，在自吞噬發(fā)生過(guò)程中，Ptdlns(3)P水平至少不應(yīng)當(dāng)降低太多。而FYVEdomain是一種由—70個(gè)氨基酸殘基的、含鋅指蛋白結(jié)構(gòu)的蛋白結(jié)構(gòu)域，可以特異結(jié)合PI(3)P(16)，通常PI(3)P募集含有FYVEdomain蛋白結(jié)合于細(xì)胞器膜，參與蛋白運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程。因此，熒光標(biāo)記的FYVEdomains可以用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ptl(3)P水平及定位。我們?cè)贖4細(xì)胞中轉(zhuǎn)入融合蛋白FYVE-RFP，構(gòu)建并篩選獲得H4-FYVE細(xì)胞株作為篩選平臺(tái)對(duì)化合物進(jìn)行高內(nèi)涵篩選，從中間接反映化合物對(duì)自吞噬的影響，去除掉FYVE顯著減少的化合物。本發(fā)明通過(guò)高內(nèi)涵顯微鏡分析統(tǒng)計(jì)紅色熒光(RFP)標(biāo)記的PI(3)P募集蛋白markerFYVEdomain在化合物作用前后的熒光強(qiáng)度以及分布等變化情況。具體方法將化合物用DMS0稀釋溶解配制不同濃度，每濃度重復(fù)3次；將H4-FYVE細(xì)胞按照合適密度種植于96孔板，用化合物分別處理2、4、8小時(shí)。設(shè)置以下實(shí)驗(yàn)組空白對(duì)照(DMS0處理)、陽(yáng)性對(duì)照(誘導(dǎo)劑雷帕霉素處理)、陰性對(duì)照(PI3K抑制劑LY-294002處理)、實(shí)驗(yàn)組(化合物處理)等。如果化合物影響FYVE的表達(dá)及分布，則可通過(guò)圖像以及熒光點(diǎn)大小、強(qiáng)弱等數(shù)值準(zhǔn)確體現(xiàn)。該實(shí)驗(yàn)被重復(fù)3次，去除顯著減少FYVE的化合物，選取在3次實(shí)驗(yàn)中RFP-FYVE熒光強(qiáng)度均較對(duì)空白照組沒(méi)有顯著減少的各種化合物進(jìn)行進(jìn)一步分析。試驗(yàn)結(jié)果對(duì)47種化合物進(jìn)行篩選后確認(rèn)26種化合物并不明顯減少FYVE-RFP(包括以上8種化合物)，可以用來(lái)繼續(xù)篩選可能的自吞噬抑制劑，見(jiàn)表2:表2:化合物不減少FYVE-RFP表達(dá)和聚集<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>實(shí)施例3八種化合物增加長(zhǎng)壽命蛋白降解試驗(yàn)方法自吞噬過(guò)程的實(shí)質(zhì)是蛋白質(zhì)降解過(guò)程，它主要介導(dǎo)細(xì)胞器以及細(xì)胞內(nèi)內(nèi)長(zhǎng)壽命蛋白的降解(5)。因此，檢測(cè)化合物是否促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)壽命蛋白降解是說(shuō)明化合物誘導(dǎo)自吞噬的一個(gè)重要佐證。具體方法將化合物用DMSO稀釋溶解配制不同濃度，每濃度重復(fù)3次；將H4細(xì)胞按照合適密度種植于96孔板，用化合物分別處理其、2、4、24小時(shí)。設(shè)置以下實(shí)驗(yàn)組空白對(duì)照(DMS0處理)、陽(yáng)性對(duì)照(誘導(dǎo)劑雷帕霉素處理)、實(shí)驗(yàn)組(化合物處理)。于實(shí)驗(yàn)前1天將細(xì)胞按照合適密度種植于12孔板中在正常條件下(DMEM+10。/。胎牛血清)進(jìn)行培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前換不含L-亮氨酸的完全培養(yǎng)液培養(yǎng)lh以去除細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性L-亮氨酸。接著用含[3H]L-亮氨酸的完全培養(yǎng)液孵育細(xì)胞24h,使細(xì)胞攝入同位素標(biāo)記的亮氨酸進(jìn)行蛋白合成，24h之后換用完全培養(yǎng)液孵育細(xì)胞24h降解短壽命蛋白。待短壽命蛋白降解之后換用加入化合物的完全培養(yǎng)液孵育細(xì)胞，分別于0、1、2、4、24h檢測(cè)培養(yǎng)液中放射性強(qiáng)度，24h收集細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞中同位素強(qiáng)度，計(jì)算化合物作用后不同時(shí)間相對(duì)于空白對(duì)照組長(zhǎng)壽命蛋白降解率，通過(guò)t檢驗(yàn)挑選出增加長(zhǎng)壽命蛋白降解的化合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果找到八種可以增加長(zhǎng)壽命蛋白降解(促進(jìn)自吞噬)的化合物，見(jiàn)表3:表3化合物促進(jìn)長(zhǎng)壽命蛋白降解<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實(shí)施例4八種化合物增加細(xì)胞內(nèi)源性自吞噬體標(biāo)記LC3II比率試驗(yàn)方法在化合物篩選平臺(tái)、中使用的自吞噬體標(biāo)記LC3在胞漿中經(jīng)過(guò)以上加工過(guò)程，通常細(xì)胞中新合成的LC3經(jīng)過(guò)加工，成為胞漿可溶性LC3I，分子量為18Kd。自吞噬發(fā)生時(shí)，后者經(jīng)泛素樣加工修飾過(guò)程，與自噬泡膜表面的磷脂酰乙醇胺(PE)結(jié)合，稱為L(zhǎng)C3II,定位于自吞噬體膜，表觀分子量為16KD(KabeyaY,MizushimaN,UenoT,etalEMBOJ.2000;19,5720-8)。LC3-I1含量的多少在某種程度上反映了細(xì)胞的自噬活性，因此通過(guò)免疫印記的方法檢測(cè)細(xì)胞中LC3-II的含量能夠進(jìn)一步反映化合物對(duì)自吞噔的影響。具體方法將H4-LC細(xì)胞按照合適密度種植于6孔板，用化合物處理4h后收集細(xì)胞，裂解后收獲胞漿中蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳分離后轉(zhuǎn)膜，用抗體進(jìn)行免疫印記染色，細(xì)胞骨架蛋白actin作為內(nèi)參照。設(shè)置以下實(shí)驗(yàn)組空白對(duì)照(DMSO處理)、陽(yáng)性對(duì)照(誘導(dǎo)劑雷帕霉素處理)、實(shí)驗(yàn)組(化合物作用)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果8種化合物能夠誘導(dǎo)LC3II/LC31比率增加。如附圖1所示。圖1中D:DMSO;R:雷帕霉素；3:胺碘酮；4:尼古地平；5:三氟拉嗪；6:洛哌丁胺；7:青霉震顫素；8:匹莫齊特；9:氟司必林；10:尼卡地平。實(shí)施例5八種化合物促進(jìn)多聚谷氨酸降解試驗(yàn)方法錯(cuò)誤折疊的蛋白大量聚集是多種神經(jīng)退行性疾病的一個(gè)顯著特點(diǎn)，例如，亨廷頓舞蹈病的發(fā)病機(jī)理即由于含有大量多聚谷氨酸(polyglutamine，polyQ)的蛋白聚集于神經(jīng)細(xì)胞當(dāng)中無(wú)法清理所致。自吞噬在此被認(rèn)為是polyQ清除機(jī)制(20)。例如，自吞噬誘導(dǎo)劑mTOR常用作清除polyQ聚集體的化合物。所以，polyQ清除與降解實(shí)驗(yàn)同樣是自吞噬發(fā)生的重要佐證。具體方法將篩選到的8種化合物用DMSO溶解，并逐級(jí)稀釋于完全培養(yǎng)液中。將H4細(xì)胞按照合適密度種植于12孔板，用脂質(zhì)體包裹重組質(zhì)粒GFP-polyQ-HA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，4小時(shí)后換用上述添加不同濃度化合物的完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，24小時(shí)后拍照并收集細(xì)胞，裂解后收獲胞漿中蛋白質(zhì)，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣至PVDF膜，用抗HA抗體進(jìn)行免疫印記染色，細(xì)胞骨架蛋白actin作為內(nèi)參照。設(shè)置以下實(shí)驗(yàn)組空白對(duì)照(DMSO處理)、陽(yáng)性對(duì)照(誘導(dǎo)劑雷帕霉素處理)、實(shí)驗(yàn)組(化合物處理)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果八種化合物可以有效誘導(dǎo)polyQ降解并呈較好的劑量依賴關(guān)系，能制備并成為更好的由錯(cuò)誤折疊蛋白聚集因素所導(dǎo)致的疾病等自吞噬相關(guān)疾病的治療藥物。見(jiàn)附圖2。圖2中從左至右第一列上DMSO;下雷帕霉素處理樣品。2-9列分別為氟司必林、匹莫齊特、三氟拉嗪、胺碘酮、哌洛丁胺、尼卡地平、尼古地平、以及青霉震顫素處理的樣品，從上至下為不同稀釋比例的樣品，依次為用篩選濃度，數(shù)值見(jiàn)附圖1，以及按照1:2.5、1:5以及1:10稀釋度稀釋的化合物處理的樣品。實(shí)施例6胺砩酮顆粒劑處方胺碘酮10gPVPK3010g交聯(lián)pvp15g乳糖1000g度、糖1000g檸檬黃lg硬脂酸20g工藝將胺碘酮過(guò)80目篩，與乳糖、蔗糖混勻，加含檸檬黃的PVPK30漿制成軟材，用14目篩制粒后，置7(TC8(TC干燥后于12目篩整粒，加入交聯(lián)PVP和硬脂酸混勻后，裝1000袋即可。奈達(dá)隆片處方奈達(dá)隆1000g乳糖1500g淀粉500g10%淀粉漿200g干淀粉20g硬脂酸鎂15g制成1000片工藝將奈達(dá)隆過(guò)80目篩，與淀粉乳糖混勻，加淀粉漿制成軟材，用14目篩制粒后，置7(TC8(TC干燥后于12目篩整粒，加入干淀粉及硬脂酸鎂混勻后，壓片，即得。胺碘酮緩釋片處方胺碘酮1000g枸櫞酸10g國(guó)C(K4M)160g乳糖180g硬脂酸鎂2mg制成1000片工藝將胺碘酮與HPMC乳糖混勻，枸櫞酸溶于乙醇中作潤(rùn)濕劑制成軟材，制粒，干燥，整粒，加硬脂酸鎂混勻，壓片即得。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。權(quán)利要求1.一類下列結(jié)構(gòu)通式(I)的苯比呋喃化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥在制備治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病的藥物中的用途，其中，R1選自烷基、鏈烯基、雜烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基或氨基烷基中之一；R2選自烷基、鏈烯基、雜烷基、烷氧烷基、烯氧基、烷氧基氨基烷基、烷基氨基羰基、磺?；?、烷基磺?；?、烷基亞磺?；?、氨基磺?；?、?；蝓０坊兄?；R3和R4獨(dú)立選自H、硝基、氨基、烷基或鹵素中之一；R5選自烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、磺?；?、烷基磺酰基、烷基亞磺?；?、氨基磺?；?、酰基或-NHSO2R6中之一；R6選自H、氨基、烷基、鏈烯基、鹵代烷基、鹵代烯基、雜烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、磺?；⑼榛酋；?、烷基亞磺?；?、氨基磺酰基、酰基、芳基烷基，環(huán)烷基芳基、雜芳基或雜環(huán)基中之一；在以上基團(tuán)中，各自可不被取代或被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，這些取代基包括鹵素、＝O、＝S、-CN、-NO2、-CF3、-OCF3、烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、磺?；⑼榛酋；被酋；⑼檠趸榛?、-COOH、-SH和酰基。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于^選自d-d。烷基。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的用途，其特征在于K為C,烷基。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的用途，其特征在于R2為烷氧基氨基烷基。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于所述烷氧基氨基烷基為二乙氨基乙氧基。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的用途，其特征在于R3和R4獨(dú)立選自H或I原子。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于Rs選自H或-NHS02R6，116選自H、氨基、烷基中之一。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述結(jié)構(gòu)通式(I)的苯比吹喃化合物為胺碘酮、去乙基胺碘酮或決奈達(dá)隆。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病為肌病或神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病為阿爾茨海默病、帕金森癥、肌萎縮側(cè)索硬化癥、亨廷頓舞蹈病、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)以及眼、咽型肌營(yíng)養(yǎng)不良、傳染性蛋白質(zhì)病、致死性家族失眠癥、a-型抗胰蛋白酶缺乏癥、齒狀核紅核蒼白球路易斯核萎縮癥、額顳葉失智癥、進(jìn)行性上眼神經(jīng)核麻痹癥、x連鎖脊延髓肌萎縮癥、神經(jīng)元核內(nèi)包涵體病中之一。11.一種藥物組合物，其特征在于它含有(a)作為主要活性成分的0.01-99.9wty。的如式(I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)選自下組的一種或多種輔助活性成分雷帕霉素、長(zhǎng)春新堿、他莫西芬、白藜蘆醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸鈉、N-羥基-N'-苯基辛二酰胺(SAHA)、喜樹堿、替尼泊苷、秋水仙堿、高三尖杉酯堿、依托泊苷、丙卡巴肼、門冬酰胺酶、順鉑、卡鉑、米托蒽醌、環(huán)磷酰胺、鹽酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、優(yōu)氟啶、卡莫氟、巰嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、環(huán)胞苷、巰鳥嘌呤、六甲蜜胺、羥基脲、絲裂霉素、阿霉素、表柔比星、博萊霉素、培萊霉素、阿伐司汀、赫賽汀、格列衛(wèi)、吉西他濱、托泊替康、多西他賽、亮丙瑞林；和(c)藥學(xué)上可接受的載體。12.如權(quán)利要求11所述的組合物，其特征在于所述的(b)輔助活性成分的含量是0.0001-20wt%。13.如權(quán)利要求11所述的組合物，其特征在于所述的藥物組合物的劑型選自下組注射劑、注射用無(wú)菌粉末、片劑、膠囊、醑劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑、栓劑。14.一種具有自吞噔誘導(dǎo)功能、能治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所致疾病的藥物的篩選方法，包括下列步驟(1)將生物活性的化合物進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)LC3—GFP的細(xì)胞株，以二甲基亞砜溶劑為空白對(duì)照，已知的自吞噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，高通量分析化合物作用導(dǎo)致的細(xì)胞數(shù)目以LC3—GFP熒光變化情況，去除明顯減少細(xì)胞數(shù)目或并不明顯增加LC3—GFP的化合物；(2)將(1)剩余的明顯增加LC3—GFP的化合物處理穩(wěn)定表達(dá)FYVE—RFP的細(xì)胞株，以二甲基亞砜溶劑為陰性對(duì)照，已知的自吞噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，高通量分析化合物作用導(dǎo)致的FYVE—RFP熒光變化情況，去除FYVE顯著減少的化合物；(3)雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，將(2)剩余的明顯增加LC3—GFP且基本不減少FYVE—RFP的化合物作為候選的自吞^誘導(dǎo)劑，通過(guò)LC3II/LC3I比例分析、長(zhǎng)壽命蛋白降解以及polyQ降解實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確證，上述3項(xiàng)指標(biāo)都較二甲基亞砜顯著增強(qiáng)的化合物即為具有自吞噬誘的治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所致疾病的藥物。全文摘要本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體地涉及苯比呋喃衍生物的應(yīng)用及含其的藥物組合物。本發(fā)明公開了一類結(jié)構(gòu)通式(I)的苯比呋喃化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥在制備治療錯(cuò)誤折疊蛋白聚集所導(dǎo)致的疾病的藥物中的用途。本方面所公開的化合物可以明顯地促進(jìn)自吞噬、減少細(xì)胞中錯(cuò)配蛋白聚集，并顯示出更低的細(xì)胞毒性，甚至優(yōu)于雷帕霉素和另一種已知的自吞噬誘導(dǎo)劑他莫西酚。本方面所公開的化合物可以在一些錯(cuò)配蛋白所導(dǎo)致的疾病如多聚谷氨酸聚集所導(dǎo)致的神經(jīng)退行性疾病治療中發(fā)揮作用，能開發(fā)成為治療相關(guān)疾病的治療藥物。文檔編號(hào)A61P25/28GK101406468SQ200810166669公開日2009年4月15日申請(qǐng)日期2008年10月13日優(yōu)先權(quán)日2007年10月12日發(fā)明者佳于,張立紅,潘鶴齡,袁鈞瑛,馬大為申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所