專利名稱：：硼酸鹽及其在治療血栓形成中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及得自有機(jī)硼酸的藥物學(xué)有用的產(chǎn)物。本發(fā)明還涉及前述一類產(chǎn)物中的各成員的應(yīng)用，涉及其配制、其制備、其合成中間體及涉及其它主題。本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有所述產(chǎn)物的口服藥物制劑。
背景技術(shù)：
：硼酸化合物這些年來已經(jīng)知道硼酸(boronicacid)化合物及其衍生物例如酯具有生物學(xué)活性，特別是作為蛋白酶抑制劑或底物。例如，Koehler等，Biochemistry10:2477，1971報道了2-苯乙烷硼酸在毫摩爾水平抑制絲氨酸蛋白酶胰凝乳蛋白酶。Phillip等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA68:478-480,1971報道了芳基硼酸(苯基硼酸、間硝基-苯基硼酸、間氨基苯基硼酸、間溴苯基硼酸)對胰凝乳蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶的抑制。Seufer-Wasserthal等，Biorg.Med.Chem.2(1):35-48,1994描述了多種硼酸，尤其由C1、Br、CH3、H2N、MeO等取代的苯基硼酸對枯草桿菌蛋白酶Carisberg抑制的研究。在描述蛋白酶的抑制劑或底物中，Pl、P2、P3等是指易斷裂的肽鍵的氨基末端的底物或抑制劑殘基，Sl、S2、S3等是指根據(jù)Schechter，I.andBerger，A.OntheSizeoftheActiveSiteinProteases,Biochem.Biophys.Res.Comm.，27:157-162,1967所述關(guān)連蛋白酶的相應(yīng)亞位點(diǎn)。在凝血酶中，Sl結(jié)合位點(diǎn)或"特異性口袋"是指所述酶中的裂縫，同時S2和S3結(jié)合亞位點(diǎn)(也分別稱為近端和遠(yuǎn)端疏水性口袋)是疏水性的，而且例如分別與Pro和(R)-Phe強(qiáng)有力地反應(yīng)。對絲氨酸蛋白酶抑制劑的藥物學(xué)研究已經(jīng)從簡單的芳基硼酸轉(zhuǎn)移至硼酸肽(boropeptide)，即含有a-氨基羧酸的硼酸類似物的肽。所述硼酸可以是衍生的，通常形成一種酯。Shenvi(EP-A-145441和US4499082)揭示了含有具有中性側(cè)鏈的一種a-氨基硼酸的肽是彈性蛋白酶的有效抑制劑，隨后有許多關(guān)于絲氨酸蛋白酶的硼酸肽抑制劑的專利出版物。特別地，已經(jīng)報道了如下酶的緊密結(jié)合的硼酸抑制劑彈性蛋白酶(Ki，0.25nM)、胰凝乳蛋白酶(Ki，0.25nM)、組織蛋白酶G(Ki，21nM)、a-裂解蛋白酶(Ki，0.25nM)、IV型二肽基(dipeptidyl)氨基肽酶(Ki，16pM)及更最近的凝血酶(Ac-D-Phe-Pro-boroArg-OH(DuP714，初始Ki1.2nM)。Claeson等(US5574014等)及Kakkar等(WO92/07869及同族專利，包括US5648338)揭示了具有中性C末端側(cè)鏈例如烷基或烷氧基烷基側(cè)鏈的凝血酶抑制劑。WO96/25427揭示了對Kakkar等所述化合物的修飾，針對肽基絲氨酸蛋白酶抑制劑進(jìn)行，其中P2-P1天然肽鍵由另一個鍵置換。非天然肽鍵例如可以是-C02-、-CH20-、-NHCO-、-CHYCH2-、-CH=CH-、-CO(CH2)pCO-，其中p是l、2或3、-COCHY-、-C02-CH2NH-、-CHY-NX-、-N(X)CH2-N(X)CO-、-CH=C(CN)CO-、-CH(OH)-NH-、-CH(CN)-NH-、-01(011)-0^-或-順-01011-，其中X是H或氨基保護(hù)基，Y是H或卣素，尤其是F。特殊的非天然肽鍵是-C02-或-CH20-。Metternich(EP471651及US5288707，后一專利被轉(zhuǎn)讓給TrigenLimited)揭示了Phe-Pro-BoroArg硼酸肽的變體，其中P3Phe由一個非天然的疏水性氨基酸如三甲基甲硅烷丙氨酸、對-叔丁基-聯(lián)苯基-甲硅氧基甲基-苯丙氨酸或者對-羥甲基苯丙氨酸置換，Pl側(cè)鏈可以是中性的(垸氧基烷基、垸基硫代垸基或三甲基甲硅烷基烷基)。FevigJMetalBioorg.Med.Ch亂8:301-306及RupinAetalThromb.Haemost.78(4):1221-1227，1997描述了N-取代的甘氨酸對硼酸三肽凝血酶抑制劑的P2Pro殘基的置換，也見于US5，585，360所述(deNanteuiletal)。Amparo(WO96/20698及同族專利，包括US5698538)揭示了結(jié)構(gòu)為芳基-接頭-Boro(Aa)的肽模擬物，其中Boro(Aa)可以是具有非堿性側(cè)鏈的一個氨基硼酸殘基，例如BoroMpg。所述接頭是化學(xué)式為-((:&)01(:€^11-(其中m是0—8，R是H或某些有機(jī)基團(tuán))的化合物或其類似物，其中肽鍵匿CONR-由-CSNR-、-S02NR-、-C02-、-。(8)0-或-3020-置換。芳基是由1、2或3個選自一個特定基團(tuán)的基團(tuán)取代的苯基、萘基或聯(lián)苯基。最典型地，這些化合物是結(jié)構(gòu)為芳基-(CH2)n-CONH-CHR、BY、z的化合物，其中R"例如是上述中性側(cè)鏈，n是0或l。非肽硼酸酯已經(jīng)被提議在去污劑組合物中作為蛋白酶抑制劑。WO92/19707和WO95/12655報道了芳基硼酸酯可以在去污劑組合物中用作蛋白酶抑制劑。WO92/19707揭示了由氫鍵結(jié)合基團(tuán)尤其乙酰氨基(-NHCOCH3)、磺酰氨基(sufonamido)(-NHS02CH3)和烷基氨基取代硼酸根基團(tuán)的化合物。W095/12655教導(dǎo)正位取代的化合物是優(yōu)異的。硼酸酯酶抑制劑具有廣泛應(yīng)用，從去污劑至細(xì)菌孢子形成抑制劑再至醫(yī)藥品中。在制藥學(xué)領(lǐng)域，有描述絲氨酸蛋白酶例如凝血酶、因子Xa、激肽釋放酶、彈性蛋白酶、纖溶酶以及其它絲氨酸蛋白酶如脯氨酰肽鏈內(nèi)切酶和IgAI蛋白酶的硼酸酯抑制劑的專利文獻(xiàn)。凝血酶是凝血途徑中最后的蛋白酶，作用是從纖維蛋白原的每個分子中水解四種小肽，因此使其聚合位點(diǎn)去保護(hù)。線性纖維蛋白聚合物一旦形成就可以通過由凝血酶激活的因子XIIIa而交聯(lián)。另外，凝血酶是血小板的強(qiáng)力激活劑，凝血酶作用于血小板上的特定受體。凝血酶還通過激活因子v和vm而加強(qiáng)其自身產(chǎn)生。絲氨酸蛋白酶的其它氮基硼酸酯或硼酸肽抑制劑或底物如以下文獻(xiàn)所述US4935493EP341661WO94/25049WO95/09859WO96/12499WO96/20689LeeS-Letal,Biochemistry36:13180-13186,1997DominguezCetal，Bioorg.Med.Chem.Lett.7:79-84，1997EP471651WO94/20526WO95/20603WO97/05161US4450105US5106948US5169841.丙型肝炎病毒蛋白酶的肽硼酸抑制劑在WO01/02424中描述。MattesonDSChem.Rev.89:1535-1551,1989回顧了a-卣素硼酸酯(haloboronicesters)作為中間體與其它物質(zhì)在合成氨基硼酸及其衍生物中的應(yīng)用。Matteson描述了頻哪醇硼酸酯在非手性合成中的應(yīng)用，及蒎二醇(pinanediol)硼酸酯在手性控制中的應(yīng)用，包括在氨基和酰氨基硼酸酯的合成中。ContrerasetalJ.Organomet.Chem.246:213-217,1983描述了通過對環(huán)狀硼酸酯進(jìn)行光譜學(xué)研究論證了分子內(nèi)N—B配位作用，所述環(huán)狀硼酸酯是通過Me2CHCMe2-BH2與二乙醇胺的反應(yīng)而制備的。已經(jīng)顯示了硼酸及酯化合物可以作為蛋白酶體的抑制劑，蛋白酶體是負(fù)責(zé)多數(shù)胞內(nèi)蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)的多重催化性蛋白酶。Ciechanover，Cell,79:13-21，1994教導(dǎo)蛋白酶體是遍在蛋白-蛋白酶體途徑的一個蛋白酶解成分，其中蛋白質(zhì)通過綴合于遍在蛋白的多個分子而定向降解。Ciechanover還教導(dǎo)遍在蛋白-蛋白酶體途徑在多種重要的生理學(xué)過程中起重要作用。Adams等，美國專利No5780454(1998)、美國專利No6066730(2000)、美國專利No6083卯3(2000)及等同的WO96/13266，及美國專利No6297217(2001)描述了用作蛋白酶體抑制劑的肽硼酸酯和酸化合物。這些文獻(xiàn)還描述了硼酸酯和酸化合物在降低肌蛋白質(zhì)降解速度、降低細(xì)胞中NF-icB活性、降低細(xì)胞中p53蛋白的降解速度、抑制細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白降解、抑制癌細(xì)胞生長、抑制細(xì)胞中抗原呈遞、抑制NF-KB依賴性細(xì)胞附著及抑制HIV復(fù)制中的應(yīng)用。Brand等的WO98/35691教導(dǎo)蛋白酶體抑制劑包括硼酸化合物用于治療梗塞如在中風(fēng)或心肌梗塞期間發(fā)生的梗塞。Elliott等的WO99/15183教導(dǎo)蛋白酶體抑制劑用于治療炎癥和自身免疫疾病。不幸地，有機(jī)硼酸相對地難以獲得分析醇形式。因此，烷基硼酸及其環(huán)硼氧烷通常是空氣敏感的。Korceketal，J.Chem.Soc.PerkinTrans.2:242，1972，教導(dǎo)丁基硼酸易于在空氣中氧化而產(chǎn)生l-丁醇和硼酸。已知硼酸的衍生物作為環(huán)酯提供氧化抗性。例如MartichonokVetalJ.Am.Chem.Soc.118:950-958,1996，闡述了二乙醇胺衍生化提供了針對可能的硼酸氧化的保護(hù)作用。美國專利No5,681,978(MattesonDSetal)教導(dǎo)l，2-二醇及l(fā),3-二醇，例如頻哪醇，形成不易于氧化的穩(wěn)定的環(huán)狀硼酸酯。Wuetal,J.Pharai.Sci.，89:758-765,2000，論述了一種抗癌劑即化合物N-(2-吡嗪)羰基-苯丙氨酸-亮氨酸硼酸(LDP-341，也稱作bortezomib)的穩(wěn)定性。描述了"在配制非腸道給藥的[LDP-341]期間，所述化合物示出"無規(guī)律的穩(wěn)定性行為"。研究了降解途徑并推斷所述降解是氧化性的，初始的氧化歸因于過氧化物或氧分子及其自由WO02/059131揭示了穩(wěn)定的硼酸產(chǎn)物。特別地，這些產(chǎn)物是某些硼酸肽和/或硼酸肽模擬物，其中硼酸基團(tuán)已經(jīng)用糖衍生化。所揭示的糖衍生物具有疏水性氨基酸側(cè)鏈，其化學(xué)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中P是氫或一個氨基基團(tuán)保護(hù)基團(tuán)；R氫或烷基；A是O、l或2;R1、R，nW是獨(dú)立的氫、垸基、環(huán)烷基、芳基或-CH2-R、RS在每種情況中均是芳基，芳烷基、烷芳基、環(huán)垸基、雜環(huán)基、雜芳基或-W-RS之一，其中W是一個硫族元素及W是烷基；R1、R2、RS或RS中所述任何芳基、芳烷基、垸芳基、環(huán)垸基、雜環(huán)基或雜芳基的環(huán)狀基團(tuán)可以被任意取代；及z、nzs—起形成一個衍生自糖的基團(tuán)，其中在每種情況中均附著于硼的原子是氧原子。一些揭示的化合物是LDP-341的糖衍生物(見上述)。許多藥物包含為羧酸的一種活性基團(tuán)。在羧酸與硼酸之間有許多不同，其對(例如)藥物輸送、穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)運(yùn)的作用還未加以研究。三價硼化合物的一個特點(diǎn)是硼原子是^2雜化，其在硼原子上留下了一個空2pz軌道。BX3類型的分子因此可作為電子對接受體(acceptor)或者路易斯酸。可以使用空2k軌道從路易斯酸中獲得一對非鍵合的電子以形成共價鍵。BF3因此與路易斯堿基如NH3反應(yīng)，形成酸-堿復(fù)合物，其中所有原子均具有價電子充填殼層。因此，硼酸可作為路易斯酸，接受OH一B(OH)3+H20—B(OH)4—+H+另外，RB(OH)2類型的硼酸是二堿價的，并具有兩個pKa。區(qū)別硼化合物的另一點(diǎn)是硼的鍵長非常短，可能是因為三個因素1.p兀-p兀鍵的形成；2.離子共價共振；3.在非鍵合電子之間的相斥降低。KOH水溶液中硼酸和羧酸的預(yù)定平衡如下所示(排除RB022.的形成)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>血栓形成止血是血液的正常生理學(xué)情形，其中其成分存在動態(tài)平衡。當(dāng)所述平衡被破壞時，例如在血管損傷后，在這個實例中某些生物化學(xué)途徑被觸發(fā)，導(dǎo)致由于血凝塊的形成(凝固)而止血。凝固是一種動態(tài)的和復(fù)雜的過程，其中蛋白酶如凝血酶起關(guān)鍵作用。血液凝固可以通過兩個級聯(lián)酶原激活的任一個而發(fā)生，即外源性和內(nèi)源性凝血級聯(lián)途徑。外源性途徑中的因子VIIa和內(nèi)源性途徑中的因子IXa是因子X被激活為Xa的重要決定因素，Xa自身催化凝血酶原激活為凝血酶，同時凝血酶依次催化纖維蛋白原單體聚合為纖維蛋白聚合物。在每個途徑中最后的蛋白酶因此是凝血酶，其作用是水解來自每個纖維蛋白原分子的4種小肽(兩種FpA及兩種FpB)，由此使其聚合位點(diǎn)去保護(hù)。一旦線性纖維蛋白聚合物形成，則其可以通過自身被凝血酶激活的因子XIIIa而交聯(lián)。另外，凝血酶是一種有效的血小板激活劑，在此之上其對特定受體起作用。血小板的凝血酶激活導(dǎo)致細(xì)胞聚集及額外的因子分泌，進(jìn)一步促進(jìn)止血栓子的產(chǎn)生。凝血酶通過激活因子V和VIII還加強(qiáng)其自身產(chǎn)生(見Hemker禾口Beguin:Jolles，et.al""BiologyandPathologyofPlateletVesselWallInteractions,"pp.219-26(1986),C畫ford禾nScmtton:Bloom禾卩Thomas,"HaemostasisandThrombosis,"pp.47-77,(1987)，Bevers，et.al.,Eur.J.Biochem.122:429-36,1982,Mann，TrendsBiochem.Sci.12:229-33，1987)。蛋白酶是在特異的肽鍵裂解蛋白質(zhì)的酶。Cuypersetal.,J.Biol.Chem.257:7086,1982及其引用的參考文獻(xiàn)，將蛋白酶根據(jù)機(jī)械論原理分為5類絲氨酸、半胱氨酰基或硫醇、酸或天冬氨酰基、蘇氨酸和金屬蛋白酶。每個類別的成員均通過相似機(jī)制催化肽鍵的水解，具有相似活性位點(diǎn)氨基酸殘基，及對類別特異性抑制劑敏感。例如，已經(jīng)鑒定的所有絲氨酸蛋白酶均具有一個活性位點(diǎn)絲氨酸殘基。凝固蛋白酶凝血酶、因子Xa、因子VIIa和因子IXa是對序列特異性Arg-Xxx肽鍵的裂解具有胰蛋白酶樣特異性的絲氨酸蛋白酶。正如其它絲氨酸蛋白酶一樣，裂解事件首先是攻擊底物的易斷裂的鍵上活性位點(diǎn)絲氨酸，導(dǎo)致四面體中間體形成。隨后該四面體中間體折攏形成酰基酶并釋放裂解的序列的氨基末端。然后?；傅乃忉尫鹏然〢山順。如上所述，血小板在正常止血中起兩種重要作用。首先，通過血小板的聚集組成了最初的止血栓子，其立即減少從破壞的血管中流出的血液。其次，血小板表面可以成為活性的并加強(qiáng)血液凝固，這是稱作血小板促凝血活性的一種性質(zhì)。這可以作為在存在因子Va和C^+的情況下，因子Xa激活凝血酶原的速度提高而觀測到，稱為凝血酶原酶反應(yīng)。通常地，未刺激的血小板表面上幾乎沒有(即便有也是很少)凝固因子，但是當(dāng)血小板被激活時，通常在膜的胞質(zhì)側(cè)的負(fù)電荷的磷脂(磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇)變?yōu)榭衫玫?，并提供在其上發(fā)生兩步凝固的一個表面。激活的血小板表面上的磷脂極度促進(jìn)導(dǎo)致凝血酶形成的反應(yīng)，以便凝血酶能與其被抗凝血酶III的中和相比更快速產(chǎn)生。在有或無肝素情況中，在血小板表面上發(fā)生的反應(yīng)不易于被血液中天然的抗凝血物質(zhì)如抗凝血酶m抑制(SeeKelton和Hirsch:BloomandThomas,"HaemostasisandThrombosis,"pp.737-760,(1981);Mustardetal:BloomandThomas,"HaemostasisandThrombosis,"pp.503526，(1981》Goodwinetal;Biochem.J.308:15-21，1995)。可以認(rèn)為血栓是正常機(jī)制的一種異常產(chǎn)物，并可以解釋為在心血管系統(tǒng)例如心或血管的表面上從血液組分中形成的一種塊狀物或沉積物。血栓形成被認(rèn)為是病理狀況，其中不正確的止血機(jī)制活性導(dǎo)致血管內(nèi)血栓形成?，F(xiàn)在識別了三種基本類型的血栓白色血栓，其通常見于動脈，主要由血小板組成；紅血栓，其見于靜脈，主要由纖維蛋白和紅細(xì)胞組成；混合血栓，其由白色血栓和紅血栓的成分組成。血栓的成分受在其形成部位的血流速度的影響。通常白色血小板富集的血栓在血流速度快的系統(tǒng)形成，而紅色凝固血栓在淤滯的區(qū)域形成。動脈的高切變率防止血液凝固的中間體聚集在循環(huán)的動脈側(cè)壁上只有血小板具有通過Willebrand因子形成與損傷部位結(jié)合的血栓的能力。僅由血小板組成的這種血栓是不穩(wěn)定及分散的。如果刺激強(qiáng)則血栓將再次形成，然后持續(xù)分散直至剌激降低。為使血栓穩(wěn)定，必須形成纖維蛋白。在這個方面，少量的凝血酶可以聚集在血小板血栓內(nèi)并使因子Va激活及刺激血小板促凝血活性。這兩個事件導(dǎo)致因子Xa對凝血酶原的激活速度整體提高300,000倍。纖維蛋白沉積物使血小板血栓穩(wěn)定。間接的凝血酶抑制劑如肝素在抑制剌激血小板促凝血活性方面無臨床效力。因此，抑制血小板促凝血活性的治療劑將有用于治療或預(yù)防動脈血栓病變。在循環(huán)的靜脈側(cè)，血栓包括纖維蛋白由于靜脈側(cè)血流緩慢因此凝血酶可聚集，血小板僅起次要作用。因此不認(rèn)為血栓形成是一個單一指征，而是包含適合不同治療劑和/或方案的不同亞類的一類指征。因此，管理機(jī)構(gòu)將治療疾病例如深部靜脈血栓形成、腦血管動脈血栓形成及肺栓塞作為批準(zhǔn)藥物的指標(biāo)。兩種主要的血栓形成亞類是動脈血栓形成和靜脈血栓形成。動脈血栓形成包括特異的病變?nèi)缂毙怨跔顒用}綜合征((例如急性心肌梗塞(由冠狀動脈血栓形成引起的心臟病發(fā)作))、腦血管動脈血栓形成(由腦血管動脈系統(tǒng)中血栓形成引起的中風(fēng))及周圍動脈血栓形成。由靜脈血栓形成引起的病變例如是深部靜脈血栓形成和肺栓塞。血栓形成的處理一般包括使用抗血小板藥物(血小板聚集的抑制劑)以控制進(jìn)一步的血栓形成，及使用血栓溶解劑溶解新形成的血塊，這兩種制劑的一種或兩種可以與抗凝血劑聯(lián)合或組合應(yīng)用。在治療認(rèn)為易患血栓形成的患者中也可以預(yù)防性使用抗凝血劑。目前，臨床用作抗凝血劑的最有效的兩類藥物是肝素和維生素K拮抗劑。肝素是與抗凝血酶III結(jié)合并因此加強(qiáng)其作用的硫酸多糖的不明混合物?？鼓窱II是激活的凝血因子IXa、Xa、XIa、凝血酶及可能的XIIa的一種天然發(fā)生的抑制劑(見Jaques,Pharmacol.Rev.31:99-166，1980)。維生素K拮抗劑，例如熟知的殺鼠靈，通過抑制維生素K依賴性凝血因子II、VII、IX和X的核糖體后羧化作用而間接起作用(見Hirsch，Semin.Thromb.Hemostasis12:1-11，1986)。盡管肝素和維生素K拮抗劑是治療血栓形成的有效方法，但其具有出血、肝素誘導(dǎo)的血小板減少(在肝素的情況中)等不利的副作用，及明顯的患者間可變性，導(dǎo)致治療安全性小及不可預(yù)知。應(yīng)用直接起作用的凝血系統(tǒng)的凝血酶及其它絲氨酸蛋白酶的抑制劑期望可以減輕這些問題。為此，已經(jīng)測試了大量的絲氨酸蛋白酶抑制劑，包括硼酸肽，即含有a-氨基酸的硼酸類似物的肽。在這個說明書的前文已經(jīng)論述了直接起作用的硼酸凝血酶抑制劑，在一下章節(jié)進(jìn)一步描述。中性的P1殘基硼酸肽凝血酶抑制劑Claeson等(US5574014等)及Kakkar等(WO92/07869及同族專利，包括US5648338)揭示了具有一個中性(無電荷的)C末端(Pl)側(cè)鏈例如一個垸氧基垸基側(cè)鏈的親脂性凝血酶抑制劑。CIaeson等及Kakkar等同族專利揭示了含有氨基酸序列D-Phe-Pro-BoroMpg[(R)-Phe-Pro-BoroMpg]的硼酸酯，其是凝血酶的高度特異性抑制劑。這些化合物中可以提及的特別是Cbz-(R)-Phe-Pro-BoroMpg-O頻哪醇(也稱作TRI50b)。相應(yīng)的游離硼酸稱作TRI50c。關(guān)于TRI50b及相關(guān)化合物的進(jìn)一步的信息，讀者可查閱如下文獻(xiàn)ElgendySetal"inTheDesignofSyntheticinhibitorsofThrombin,ClaesonGetalEds,AdvancesinExperimentalMedicine,340:173-178，1993.ClaesonGetal，BiochemJ.290:309-312，1993TapparelliCetal，JBiolChem,268:4734-4741，1993ClaesonG,inTheDesignofSyntheticinhibitorsofThrombin,ClaesonGetalEds,AdvancesinExperimentalMedicine,340:83-91，1993Phillipetal，inTheDesignofSyntheticinhibitorsofThrombin,ClaesonGetalEds，AdvancesinExperimentalMedicine,340:67-77，1993TapparelliCetal，TrendsPharmacol.Sci.14:366-376,1993ClaesonG,BloodCoagulationandFibrinolysis5:411-436，1994Elgendyetal，Tetrahedron50:3803-3812,1994DeadmanJetal,J.EnzymeInhibition9:29-41，1995*DeadmanJetal,J.MedicinalChemistry38:1511-1522,1995.TRI50b的三肽序列有3個手性中心。認(rèn)為至少在具有商業(yè)有益的抑制劑活性的化合物中，Phe殘基是(R)-構(gòu)型及Pro殘基是天然(S)-構(gòu)型；在具有商業(yè)有益的抑制劑活性的異構(gòu)體中確信Mpg殘基是(R)-構(gòu)型。因此，認(rèn)為活性或最大活性的TRI50b立體異構(gòu)體是R,S，R構(gòu)型，可以如下化學(xué)式所示OMe(RSR)-TRI50b:Cbz畫(R)-Phe-(S)-Pro畫(R)-boroMpgPinacol雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)間接起作用的凝血酶抑制劑用于治療易患或患有靜脈血栓形成的患者，但動脈血栓卻不是這樣的，因為需要將用于治療靜脈血栓的劑量增加許多倍以治療(預(yù)防)動脈血栓。這種增加的劑量典型地引起出血，這使得間接起作用的凝血酶抑制劑不適于或者不優(yōu)選用于治療動脈血栓。肝素及其低分子量的衍生物是間接的凝血酶抑制劑，因此不適于治療動脈血栓?？诜苯拥哪敢种苿┦侵委焺用}血栓的一個進(jìn)展，但治療指數(shù)低于所希望的治療指數(shù)(therapeuticindices)，即在治療劑量下具有高于希望水平的出血情況?？梢詫⒃S多有機(jī)硼酸化合物分為親脂類或疏水類。典型地，這種化合物包括如下化合物全部或大部分氨基酸是疏水性的硼酸肽，至少一半氨基酸是疏水性的而且具有一個疏水性N末端取代基(氨基保護(hù)基)的硼酸肽，基于疏水性基團(tuán)的非肽。口服吸收可以通過主動或被動途徑在胃腸道中吸收。通過轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的主動吸收在個體之間趨于可變及與腸道內(nèi)容物相關(guān)(Gustafssonetal,ThrombosisResearch,2001,101，171-181)。已經(jīng)確定上部的腸道是口服藥物吸收的主要部位。特別地，十二指腸由于其表面積大而是吸收口服藥物的慣例靶定部位。腸粘膜作為一個屏障控制跨細(xì)胞的被動吸收離子的吸收被阻斷而有利于親脂類分子的跨細(xì)胞吸收(PalmKetal.:丄PharmacolandExp.Therapeutics,1999，291，435-443)?？诜幬镄枰掷m(xù)及充分吸收。討厭的是個體之間及同一個體的不同時機(jī)之間的不同而吸收不同。相似地，一般不可接受生物利用度水平低的藥物(僅少部分給予的活性劑被吸收)。被動吸收有利于非離子化合物的吸收，這是與不變性相關(guān)的一種途徑，因此被優(yōu)選為進(jìn)行持續(xù)吸收。被動吸收機(jī)制特別有利于親脂類物質(zhì)，因此表明最利于非離子的親脂類藥物的持續(xù)和高度口服吸收。藥物與其生理學(xué)靶位的相互作用所需要的典型功能性是功能型基團(tuán)如羧酸和磺酸。這些基團(tuán)在胃中(在pH2-3)以質(zhì)子化形式存在，但在較高pH的腸液中有一定程度的離子化。用于避免羧酸鹽或磺酸鹽離子化的一個策略是將其以酯形式存在，一旦吸收入血管腔中則被裂解。例如，未達(dá)到最佳胃腸道吸收的直接作用的凝血酶抑制劑mdagatmn，具有末端羧基和脒基基團(tuán)，而且當(dāng)所述羧酸和脒基基團(tuán)均是帶電荷的時在pH8-10是純兩性離子。因此開發(fā)了一種前體藥物H376/95,其具有羧酸和脒的保護(hù)基，而且是比mdagatmn更親脂的分子。所述前體藥物經(jīng)過培養(yǎng)的Caco-2上皮細(xì)胞的透性系數(shù)高于melagatran的80倍，口服生物利用度高于melagatran的2.7—5.5倍，以及在藥物血漿濃度vs時間曲線下的范圍內(nèi)可變性較小(Gustafssonetai，ThrombosisResearch,2001，101,171-181)。硼酸肽、硼酸肽模擬物及其它有機(jī)硼酸酯的口服吸收TRI50b的硼酸酯基團(tuán)在血漿的條件下迅速裂解，形成相應(yīng)的硼酸基團(tuán)，該基團(tuán)被認(rèn)為是抑制凝血酶的催化位點(diǎn)的活性基團(tuán)。硼酸是二價的功能基團(tuán)，具有更典型的單鍵特點(diǎn)的硼-氧鍵長度(1.6A)，與羧酸和磺酸中的C-O和S-O的鍵不同。因此，硼酸基團(tuán)具有兩種離子化潛力。硼酸基團(tuán)在十二指腸液的pH下部分離子化，與希望的被動十二指腸吸收不相稱。因此，一種帶電荷的硼酸酯抑制劑H-D-PheProBoroArg是通過主要的主動轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制被吸收的(Saitoh,H.andAungst,B丄，Pharm.Res"1999，16，1786-1789)。通過TRI50b的這種裂解形成的肽硼酸(該酸被稱為TRI50c)在水中相對不能溶解，特別是在酸性或中性pH下，并趨于在胃和十二指腸中難以吸收。該酸的結(jié)構(gòu)為Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH。而肽硼酸Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH在十二指腸條件下部分離子化，達(dá)到那樣的程度不利于被動轉(zhuǎn)運(yùn)，該酸的酯被設(shè)計為高速被動轉(zhuǎn)運(yùn)(因此一致)。三肽序列Phe-Pro-Mpg有一個非堿性Pl側(cè)鏈(特別是甲氧基丙基)，由此所述三肽由三個非極性氨基酸組成。所述肽硼酸的酯是不可離子化的，而且酯形成種類進(jìn)一步授予親脂性性質(zhì)，由此促進(jìn)高速被動轉(zhuǎn)運(yùn)。計算技術(shù)已經(jīng)證實可推測TRI50b及Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH的其它二醇酯具有良好的生物可利用度。因此，極性表面區(qū)域(PSAd)是推測生物利用度的一個參數(shù)，高于60A的PSAd值與被動跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)及已知藥物的生物利用度密切相關(guān)聯(lián)(Kelder,J.Pharm.Res"1999,16，1514-1519)。對上述肽硼酸的二醇酯包括頻哪醇酯TRI50b的測定，示出該二醇酯具有高于60A的PSAd值，推測被動轉(zhuǎn)運(yùn)和良好的生物利用度，如表l所示表l:選擇的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH二醇酯的PSAd值二醇PSAd值頻哪醇98.74蒎二醇90.64相應(yīng)的單羥基醇(例如烷醇)酯被認(rèn)為太不穩(wěn)定，在體外自然裂解釋放酸。二醇如蒎二醇和頻哪醇的酯具有與單羥基醇的酯相比增強(qiáng)的動力學(xué)穩(wěn)定性，在部分水解為單酯衍生物之后，它們趨于通過便利的分子內(nèi)反應(yīng)而重新組合。
發(fā)明內(nèi)容為平衡TRI50b的這些高度需要的特征，已經(jīng)揭示了TRI50b趨于水解。因此在HPLC分析的酸性條件下，TRI50b被轉(zhuǎn)變?yōu)榘胨テ谳^短的酸形式，這意味著在十二指腸及在胃腸道中其它部位潛在的十二指腸內(nèi)水解為離子形式，離子形式將抵抗被動轉(zhuǎn)運(yùn)，并且如果有什么的話，則由主動轉(zhuǎn)運(yùn)吸收，最多表現(xiàn)出不定的生物利用度。TRI50b對水解的不穩(wěn)定性在化合物的制備及其配制，以及含有其的藥物制劑的貯存中還具有潛在的不利之處。由TRI50b引起的另一種具有挑戰(zhàn)性的困難是數(shù)據(jù)示出對象之間的生物利用度中的顯著變化。這種可變性可產(chǎn)生一種無法接受的藥物候選物，因此需要降低這種觀測到的可變性。解決TRI50b不穩(wěn)定性的一種理想方法是開發(fā)對水解更穩(wěn)定的二醇酯，因為這種二醇酯與TRI50b相似，可以預(yù)測與TRI50c相比其具有氧化抗性。在此方面，已知環(huán)的大小可影響硼酸酯的穩(wěn)定性，而且已經(jīng)示出glycolatoboron與頻哪醇相比具有增強(qiáng)的水性穩(wěn)定性(D.S.Matteson,StereodirectedSynthesiswithOrganoboranes,Springer-Verlag,1995，Ch.l)。相似地，蒎二醇酯與頻哪醇相比更穩(wěn)定；確信這是由于蒎二醇基團(tuán)是高度位阻的并且不利于對硼的親核攻擊。事實上，已經(jīng)報道了從頻哪醇到蒎二醇的酯交換(Brosz，CS,Tet.Assym,8:1435-1440,1997)，而反向過程不順利。然而認(rèn)為蒎二醇酯在血漿中太不活躍以至于不能裂解，因此需要提供一種改良的二醇酯。解決TRI50b的不穩(wěn)定性的另一種方法是在其原位給予TRI50c。然而，TRI50c數(shù)據(jù)提示TRI50c的生物利用度中可變性太高。TRI50c也具有不穩(wěn)定性，因為存在硼酸肽部分通過去硼化(碳一硼鍵裂解)而自身降解的趨向，通過先前文獻(xiàn)教導(dǎo)的氧化途徑進(jìn)行(例如Wuetal，如上述)。降解水平可非常高。TRI50b和TRI50c的上述性質(zhì)非限于這種化合物，而是由其它硼酸肽酯和酸共有，即使這種其它硼酸肽的性質(zhì)在數(shù)量上不同。本發(fā)明是以某些有機(jī)硼酸產(chǎn)物表現(xiàn)出增強(qiáng)的穩(wěn)定性等發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)。本發(fā)明的益處包括解決了二醇硼酸酯尤其TRI50b不穩(wěn)定性的問題，也就是說本發(fā)明揭示的產(chǎn)物尤其提供了藥物活性化合物，其與TRI50b及其它可對比的酯在對水解的穩(wěn)定性方面相比更穩(wěn)定。本發(fā)明進(jìn)一步包括了解決有機(jī)硼酸不穩(wěn)定性的問題，也就是說本發(fā)明揭示的產(chǎn)物尤其提供了藥物活性化合物，其與TRI50c相比對去硼化更穩(wěn)定。在本發(fā)明的構(gòu)架中提供的穩(wěn)定性不是絕對的，但與對比的化合物相比是改良的。本發(fā)明的提供的益處進(jìn)一步包括提供在口服制劑中具有效力的未曾預(yù)料的產(chǎn)物。本發(fā)明揭示了一種氨基硼酸衍生物，其避免了頻哪醇酯的缺點(diǎn)。本發(fā)明進(jìn)一步包括一種肽硼酸衍生物，其表現(xiàn)出增強(qiáng)的穩(wěn)定性。特別地，本發(fā)明包括一種藥物制劑，其包含一種氨基硼酸衍生物并且可以在十二指腸內(nèi)提供一種離子性硼酸肽物質(zhì)同時避免了頻哪醇酯的缺點(diǎn)，并可以提供生物利用度。本發(fā)明進(jìn)一步包括硼酸衍生物，其對水解和去硼化相對穩(wěn)定并且在抑制凝血酶的口服制劑中有益。本發(fā)明涉及一種藥物可接受的某些有機(jī)硼酸藥物的堿加成鹽，特別是疏水性硼酸肽(例如二肽或三肽)，及更特別是具有非堿性P1基團(tuán)的凝血酶抑制劑。作為一個種類，這種鹽不僅與現(xiàn)有
技術(shù)領(lǐng)域：
的指導(dǎo)相反，而且額外具有改良的穩(wěn)定性水平，這基于己知化學(xué)原理不能解釋或預(yù)知。一方面，本發(fā)明涉及藥物可接受的硼酸的堿加成鹽，所述硼酸具有并具有一中性氨基硼酸殘基以及經(jīng)一肽鍵與該中性氨基硼酸殘基相連接的疏水性基團(tuán)，所述中性氨基硼酸殘基能結(jié)合凝血酶S1亞位點(diǎn)，所述疏水性基團(tuán)能結(jié)合凝血酶S2和S3亞位點(diǎn)。在第一個實施方案中，揭示了一種藥物可接受的例如式(I)所示硼酸的堿加成鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>其中Y包含一個疏水性基團(tuán)，其與氨基硼酸殘基-NHCH(R,-B(OH^—起對凝血酶的底物結(jié)合位點(diǎn)具有親和性；及R"是由一或多個醚鍵(例如1或2個)中斷的一個直鏈烷基基團(tuán)，其中氧和碳原子的總數(shù)是3，4，5或6(例如5)，或者W是《CH2)m-W，其中m是2，3,4或5(例如4)，W是-OH或鹵素(F，Cl,Br或I)。119在化合物的一個亞型中是烷氧基垸基基團(tuán)，例如含有4個碳原子的烷氧基垸基。本發(fā)明包含藥物可接受的凝血酶的疏水性硼酸抑制劑的堿加成鹽，及因此包括肽硼酸的這種鹽，其在生理pH及在25"C條件下在l-n-辛醇和水之間的分配系數(shù)以logP表示高于l.O。本發(fā)明中的一些肽硼酸的分配系數(shù)為至少1.5。本發(fā)明中一類疏水性肽硼酸的分配系數(shù)為不超過5。作為某些實例揭示的是藥物可接受的凝血酶的疏水性硼酸抑制劑的堿加成鹽。這種抑制劑可含有疏水性氨基酸，這類氨基酸包括側(cè)鏈?zhǔn)菬N基、含有一個鏈內(nèi)氧和/或通過鏈內(nèi)氧或雜芳基與分子的其余部分連接的烴基、或者被羥基、鹵素或三氟甲基取代的任何前述基團(tuán)的氨基酸。代表性疏水側(cè)鏈包括垸基、烷氧基垸基、由至少一種芳基或雜芳基取代的前述基團(tuán)、芳基、雜芳基，由至少一種垸基取代的芳基以及由至少一種垸基取代的雜芳基。脯氨酸以及環(huán)沒有被取代的或者由前一句所列的一種基團(tuán)進(jìn)行環(huán)取代的亞氨基酸也是疏水性的。一些疏水性側(cè)鏈含有1一20個碳原子，例如具有l(wèi)、2、3或4個碳原子的非環(huán)狀基團(tuán)。包含一個環(huán)狀基團(tuán)的側(cè)鏈典型地但非必須含有5—13個環(huán)成員，在許多情況中是苯基或由一或兩個苯基取代的烷基。疏水性非肽典型地基于上述可以形成疏水性氨基酸側(cè)鏈的基團(tuán)。疏水性化合物可含有例如一個氨基基團(tuán)和/或一個酸基團(tuán)(例如-COOH、-B(OH)2)。通常地，它們不含有任一類型的多極性基團(tuán)。一類疏水性有機(jī)硼酸在生理pH及在25r條件下，在l-n-辛醇和水之間的分配系數(shù)以logP表示高于l。例如，TRI50c的分配系數(shù)為大約2。疏水性有機(jī)硼酸的一些亞類是在下文標(biāo)題為"一些實施例詳述"中由式(i)和(m)所示的那些化合物。作為另一個實施方案揭示的是藥物可接受的式(n)所示肽硼酸的堿加成鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>其中X是與N末端氨基基團(tuán)結(jié)合的基團(tuán)，可以是H以形成NH2。X的性質(zhì)不是關(guān)鍵的，可以是上述一特殊的X基團(tuán)。在一個實施例中，是提及的芐氧基羰基。，aai是具有一個烴基側(cè)鏈的氨基酸，其含有不超過20個碳原子(例如最多15個及任選最多13個碳原子)并且包含具有最多13個碳原子的至少一個環(huán)狀基團(tuán)。在某些實施例中，a^的環(huán)狀基團(tuán)有5或6個環(huán)成員。例如，aa'的環(huán)狀基團(tuán)可以是芳基基團(tuán)，特別是苯基。典型地，在aa'側(cè)鏈中有一或兩個環(huán)狀基團(tuán)。某些側(cè)鏈包含或由被一或兩個5或6個成員的環(huán)取代的甲基組成。更特別地，aa'是Phe、Dpa或其完全或部分氫化的類似物。所述完全氫化的類似物是Cha，因此本發(fā)明包括包含有機(jī)硼酸的鹽例如金屬鹽的藥物，所述有機(jī)硼酸是凝血酶抑制劑，特別是具有一個中性P1(Sl結(jié)合)基團(tuán)的選擇性凝血酶抑制劑。關(guān)于結(jié)合凝血酶的S3，S2和S1位點(diǎn)的基團(tuán)的信息見例如TapparelliCetal，TrendsPharmacol.Sci.14:366-376,1993;SandersonPetal，CurrentMedicinalChemistry,5:289-304，1998;RewinkelJetal，CurrentPharmaceuticalDesign,5:1043-1075,1999;及Cob畫CExp.Opin.Ther.Patents11(5):721-738,2001。本發(fā)明的凝血酶抑制性鹽非限于在前一句列出的出版物中描述的具有S3，S2和S1親和性基團(tuán)的那些。a^是有4一6個環(huán)成員的一個亞氨基酸?；蛘撸琣^由C3-C,y烴基基團(tuán)例如包含CVC6烴基環(huán)的C3-CV烴基基團(tuán)在N末端取代的Gly;所述烴基基團(tuán)可以是飽和的，例如N末端取代基是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。含有一或多個不飽和鍵的烴基基團(tuán)可以是所述的苯基和由苯基取代的甲基或乙基，例如2-苯乙基，以及(3，P-二垸基苯乙基。文獻(xiàn)中有一爭論之處是水溶液中硼酸根是否形成"三角形"B(OH)2或者"四面體形"B(OH)3-硼類，但NMR跡象似乎表明在pH低于硼酸的第一個pKa之處，主要的硼類是中性B(OH)2。在十二指腸中，pH很可能在6和7之間，因此三角形的種類在那里很可能占優(yōu)勢。在任何情況中，符號-B(OH)2包括四面體以及三角形硼類，并且在本說明書中表示三角形硼類的符號也包含四面體形的類別。該符號進(jìn)一步可包含酐形式的硼酸基團(tuán)(boronicgroup)。所述鹽可以是溶劑合物形式，特別是水合物形式。所述鹽可包含或者基本由酸式鹽組成，其中硼酸是單獨(dú)去質(zhì)子化的。因此本發(fā)明包括具有與主要(50moP/。以上)攜帶單一負(fù)電荷的產(chǎn)物中硼酸根基團(tuán)一致的金屬/硼酸根化學(xué)計量的產(chǎn)物。本發(fā)明還提供了所述鹽的口服制劑。特別地，本發(fā)明提供了包含固相所述鹽的口服制劑，例如將微粒的鹽配制成壓縮的片劑或配制成膠囊。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種治療其中需要抗血栓形成活性的病癥的方法，所述方法包括給予患有或處于這種病癥危險之中的患者口服治療有效量的式(I)所示硼酸的鹽。如后文進(jìn)一步的描述，本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的鹽的血液透析溶液。本發(fā)明所述的鹽包括通過硼酸與強(qiáng)堿反應(yīng)可獲得的產(chǎn)物(具有通過該反應(yīng)獲得的產(chǎn)物的特性)，由此理解本發(fā)明的術(shù)語"鹽"。因此針對所揭示的產(chǎn)物的術(shù)語"鹽"非必須意味著產(chǎn)物含有分立的陽離子和陰離子，而應(yīng)理解為包含使用硼酸與堿的反應(yīng)可獲得的產(chǎn)物。本發(fā)明在更大或更小程度上包含配位化合物形式的產(chǎn)物。本發(fā)明因此還提供了通過硼酸(I)與強(qiáng)堿反應(yīng)可獲得的產(chǎn)物(具有通過這種反應(yīng)可獲得的產(chǎn)物的特性)，以及這種產(chǎn)物的治療，包括預(yù)防應(yīng)用。本發(fā)明不受鹽的制備方法的限制，只要它們含有衍生自硼酸(I)的硼酸根類和一個平衡離子即可。這種硼酸根類可以是其任何平衡形式的硼酸根陰離子。術(shù)語"平衡形式"是指相同化合物的不同形式，其可以在平衡等式中表示(例如與硼酸酐平衡及與不同硼酸根離子的平衡中的硼酸)。固相的硼酸鹽可以形成酐，并且當(dāng)所揭示的硼酸鹽是固相時可包含硼酸酐，作為硼酸平衡種類。非必需通過含有平衡離子的堿與硼酸(I)反應(yīng)制備所述鹽。另外，本發(fā)明包括這樣的鹽產(chǎn)物，其被認(rèn)為是通過這種酸/堿反應(yīng)而間接制備的，以及通過這種間接制備可獲得的鹽(具有通過這種反應(yīng)獲得的產(chǎn)物的特性)。可能的間接制備方法例如可以是這樣的方法，其中在初始鹽的回收之后，將其純化和/或處理以修飾其物理化學(xué)性質(zhì)，例如修飾其固體形式或水合物形式或這兩者。在一些實施方案中，所述鹽的陽離子是一價的。在一些實施方案中，所述鹽包含酐類，在其它實施方案中，它們基本是無酐類。所述鹽可以是分離的形式。如通過實施例28的方法確定，所述鹽可具有例如至少大約90%的純度，例如高于或等于大約95%。在藥物制劑的情況中，這種鹽的形式可以與藥物可接受的稀釋劑、賦形劑或載體組合。本發(fā)明包括一種從相應(yīng)的硼酸作為中間體制備鹽的方法，以及式(I)所示中間體硼酸和制備其的方法。本發(fā)明的其它方面和實施方案在以下描述和權(quán)利要求中闡述。在本說明書的描述和權(quán)利要求中，術(shù)語"包含"和"含有"及其變化術(shù)語，例如"包括"，是指"包括但非限于"，并且不排除其它基團(tuán)、添加劑、成分、整數(shù)或步驟。本發(fā)明申請含有的數(shù)據(jù)表明有機(jī)硼酸的穩(wěn)定性(去硼化抗性)可以通過將其以鹽例如金屬鹽的形式提供而增加。在個別的實驗中，TRI50c的銨鹽表現(xiàn)為基于干燥而分解產(chǎn)生氨，同時膽堿鹽表現(xiàn)為迅速分解為去硼化混雜物。盡管已經(jīng)進(jìn)行實驗以重現(xiàn)這些不可重復(fù)的觀測結(jié)果，但還是提供了一個亞類，其中排除了銨鹽和膽堿鹽。所述鹽可以是酸式鹽。在任何情況中，這種穩(wěn)定化技術(shù)形成了本發(fā)明的一部分，并且例如可適用于"背景"標(biāo)題下描述的有機(jī)硼酸及在該標(biāo)題下提及的出版物中描述的有機(jī)硼酸。附圖簡述圖1是實施例32的一個示意圖，示出在經(jīng)p.o.給予TRI50b或TRI50c后的口期清除率和動力學(xué)。圖2是實施例32的另一個示意圖，示出在經(jīng)十二指腸內(nèi)給予TRI50b或TRI50c后的口期清除率和動力學(xué)。一些實施例的詳述術(shù)語表在本說明書中使用以下術(shù)語和縮寫針對硼酸的鹽所用術(shù)語"酸式鹽"是指其三角形的酸基團(tuán)-B(OH)2的一個-OH基團(tuán)被去質(zhì)子化的一種鹽。因此其中硼酸根基團(tuán)攜帶一個負(fù)電荷并可以表示為-B(OH)(0—)或[-B(OH)3廠的鹽是酸式鹽。該術(shù)語涵蓋了具有化合價n的陽離子鹽，其中硼酸與陽離子的摩爾比率為大約n:l。在實際中，觀察的化學(xué)計量不可能真正是n:l，但與理論的n:l化學(xué)計量一致。例如，觀察的陽離子質(zhì)量可以在針對n:l化學(xué)計量計算的質(zhì)量之上變化不超過大約10%，例如不超過大約7.5%;在一些情況中，觀察的陽離子質(zhì)量與計算的質(zhì)量之間的變化不超過大約1%。計算的質(zhì)量是基于三角形形式的硼酸根。(在原子水平，與酸式鹽的化學(xué)計量一致的鹽可以含有質(zhì)子化狀態(tài)的硼酸鹽混合物，其平均值與單一去質(zhì)子化相近，這種"混和的"鹽包含在術(shù)語"酸式鹽"內(nèi))。酸式鹽例如是單鈉鹽和半鋅鹽。a-氨基硼酸或Boro(aa)是指其中C02基團(tuán)已經(jīng)由B02置換的氨基酸。術(shù)語"氨基基團(tuán)保護(hù)基團(tuán)"是指用于衍生一個氨基基團(tuán)尤其是肽或氨基酸的N末端氨基基團(tuán)的任何基團(tuán)。這種基團(tuán)包括但非限于烷基、?；③趸驶?、氨基羰基和磺?；鶊F(tuán)。然而，術(shù)語"氨基基團(tuán)保護(hù)基團(tuán)"非限于在有機(jī)合成中常用的那些特殊的保護(hù)基，也非限于易于裂解的那些基團(tuán)。本發(fā)明所用短語"藥物可接受的"是指那些化合物、物質(zhì)、成分和/或劑型，它們在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適合用于與人體或動物的組織接觸而無過多的毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)、或其它問題或并發(fā)癥，與合理的益處/危險率相應(yīng)。術(shù)語"凝血酶抑制劑"是指一種產(chǎn)物，其在可靠的藥物學(xué)判斷范圍內(nèi)，在藥物學(xué)方面潛在或真正用作凝血酶的抑制劑，包括包含藥物學(xué)活性物的物質(zhì)并且被描述為推薦或?qū)彾ㄗ鳛槟敢种苿?。這種凝血酶抑制劑可以是選擇性的，即其在可靠的藥物學(xué)判斷范圍內(nèi)與其它蛋白酶相比被認(rèn)為對凝血酶是選擇性的；術(shù)語"選擇性凝血酶抑制劑"包括包含藥物學(xué)活性物的物質(zhì)并且被描述為推薦或?qū)彾ㄗ鳛檫x擇性凝血酶抑制劑。術(shù)語"雜芳基"是指一個環(huán)系統(tǒng)，其具有至少l個(例如l、2或3個)環(huán)內(nèi)雜原子，并且具有一個綴合的環(huán)內(nèi)雙鍵系統(tǒng)。術(shù)語"雜原子"包括氧、硫和氮，其中有時不太優(yōu)選硫。"天然氨基酸"是指選自如下中性(疏水性或極性)的帶正電荷及負(fù)電荷的氨基酸的一種L-氨基酸(或其殘基)疏水性氨基酸A-Ala:丙氨酸V-Va卜纈氨酸I-Ile:異亮氨酸L二Leu二亮氨酸M-Met:甲硫氨酸F二Phe^苯丙氨酸P-Pro^^月甫氣酸W-Trp:色氨酸極性(中性或無電荷的)氨基酸N-Asn-天冬酰胺C=Cys=半胱氨酸Q=Gin=谷胺酰胺G=Gly=甘氨酸S-Ser-絲氨酸T二Thr^蘇氨酸Y-Tyr-酪氨酸帶正電荷的(堿性慮基酸R^A『精氨酸H-His-組氨酸K=Lys=賴氨酸帶負(fù)電荷的氨基酸D-Asp:天冬氨酸E=Glu=谷氨酸ACN=乙腈氨基酸=a-氨基酸堿加成鹽=向游離酸(在這個情況中是硼酸)中加入一種無機(jī)堿或有機(jī)堿而制備的鹽Cbz=芐氧基羰基Cha-環(huán)己基丙氨酸(一種疏水性非天然氨基酸)帶電荷的(如用于藥物或藥物分子的片段，例如氨基酸殘基)=在生理pH攜帶電荷，如在氨基、脒基或羧基基團(tuán)的情況中Dcha=二環(huán)己基丙氨酸(一種疏水性非天然氨基酸)Dpa-二苯丙氨酸(一種疏水性非天然氨基酸)藥物=一種藥物學(xué)有益物質(zhì)，無論是在體內(nèi)有活性的還是一種前體藥物i.v.=靜脈內(nèi)Mpg=3-甲氧基丙基甘氨酸(一種疏水性非天然氮基酸)多價=至少兩價的化合價，例如二或三價中性的(如用于藥物或藥物分子的片段，例如氨基酸殘基)=無電荷的在生理pH不帶電荷Pinac=頻哪醇=2,3-二甲基-2，3-丁二醇蒎二醇=2，3-蒎二醇=2，6，6-三甲基二環(huán)[3丄1]庚烷-2，3-二醇Pip-2-哌啶酸p.o.=peros=通過口腔給予(因此口服制劑是通過p.o.給予的)s.c.=皮下強(qiáng)堿有足夠高的pKb以與硼酸反應(yīng)的堿。合適的這種堿的pKb為7或更高，例如7.5或更高，例如大約8或更高。THF-四氫呋喃Thr-凝血酶化合物本發(fā)明的產(chǎn)物包含硼酸的鹽，其具有一能結(jié)合凝血酶S1亞位點(diǎn)的中性氨基硼酸殘基以及經(jīng)一肽鍵與該中性氨基硼酸殘基相連接的能結(jié)合凝血酶S2和S3亞位點(diǎn)的疏水性基團(tuán)。本發(fā)明包含式(I)所示酸的鹽0HY-CO-NH-(j)H-B①0H其中Y包含一個疏水性基團(tuán)，其與氨基硼酸殘基—NHCH(R"-B(OH)2—起對凝血酶的底物結(jié)合位點(diǎn)有親和性；及W是由一或多個醚鍵中斷的直鏈烷基基團(tuán)，其中氧和碳原子的總數(shù)是3，4，5或6(例如5)，或者119是—(CH2)mW，其中m是2，3，4或5(例如4)，W是-OH或鹵素(F,Cl，Br或I)。由一或多個醚鍵(-O-)中斷的直鏈垸基例如可以是提及的烷氧基烷基(一處中斷)和烷氧基垸氧基烷基(兩處中斷)。119是一種化合物亞型中的一個烷氧基垸基基團(tuán)，例如含有4個碳原子的垸氧基烷基。典型地，YCO-包含與凝血酶的S2亞位點(diǎn)結(jié)合的一個氨基酸殘基(無論天然還是非天然的)，氨基酸殘基與結(jié)合凝血酶的S3亞位點(diǎn)的一個基團(tuán)在N末端連接。在一類式(I)所示的酸中，YCO-是任選N末端保護(hù)的二肽殘基，其與凝血酶的S3和S2結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，所述酸中的肽鍵任選并獨(dú)立地由C,-d3烴基基團(tuán)在N末端取代，所述烴基基團(tuán)任選含有鏈內(nèi)和/或環(huán)內(nèi)氮、氧或硫及任選由選自鹵素、羥基和三氟甲基的取代基取代。當(dāng)存在N末端保護(hù)基時，其可以是上述基團(tuán)X(除了氫之外)。通常所述酸不含有N末端取代的肽鍵；在存在N取代的肽鍵之處，取代基通常是1C一6C的烴基，例如飽和的烴基；在一些實施方案中N取代基包含一個環(huán)，例如環(huán)烷基，并可以是例如環(huán)戊基。一類酸具有一個N末端保護(hù)基(例如X基團(tuán))和未取代的肽鍵。在YCO-是一個二肽殘基之處(無論N末端保護(hù)與否)，S3結(jié)合氨基酸殘基可以是R構(gòu)型和/或S2結(jié)合殘基可以是S構(gòu)型。片段-NHCH(R"-B(OH)可以是R構(gòu)型。然而本發(fā)明非限于這些構(gòu)象的手性中心。在一類化合物中，P3(S3-結(jié)合)氨基酸禾B/或P2(S2-結(jié)合)氨基酸的側(cè)鏈?zhǔn)沁x自式A或B所示基團(tuán)除了氫之外的一個基團(tuán)-(CO)a-(CH2)b-Dc-(CH2)d-E(A)-(CO)a-(CH2)b-Dc-Ce(Ei)(E2)(E3)(B)其中a是0或l;e是l;b和d獨(dú)立地是O或者一個整數(shù)，由此(b+d)為0—4，或者(b+e)是l一4;C是0或1;D是O或S;E是H，C,-C6垸基，或者一個飽和或不飽和的環(huán)基團(tuán)，其通常含有最多14個成員特別是5—6個成員的環(huán)(例如苯基)或者8—14個成員的稠環(huán)系統(tǒng)(例如萘基)，垸基或環(huán)基團(tuán)任選由獨(dú)立地選自如下的最多三個基團(tuán)(例如一個基團(tuán))取代，所述基團(tuán)為C,-C6三烷基甲硅烷基，-CN，-R13，-R12OR13，-R12COR13，-Rl2C02R，-R1202CR13，其中R"是-(CH2)廣，R"是-(CH2)gH，或者垸基或環(huán)基團(tuán)任選由一種基團(tuán)取代，該基團(tuán)的非氫原子由碳原子和環(huán)內(nèi)雜原子組成，數(shù)目為5—14個，其含有一個環(huán)系統(tǒng)(例如芳基)及任選一個烷基和/或亞烷基基團(tuán)，其中f和g均獨(dú)立地是0—10，g特別是至少l(盡管-OH也可以是一個取代基)，條件是(f+g)不超過10，更特別地不超過6，最特別是l，2，3或4，及條件是如果取代基是含有一個環(huán)系統(tǒng)的所述基團(tuán)則只有一個取代，或者E是d-C6三烷基甲硅垸基；E1,E嘲E3均獨(dú)立地選自-R15和-J-R15，其中J是一個5—6個成員的環(huán)，R"選自C廣C6三垸基甲硅烷基，-CN，-R13，-R12OR13，-R12COR13，-R'2C02R13，-1112020113及一或兩種鹵素(例如在后一情況中為形成-J-R15基團(tuán)其是二氯苯基)，其中R^和Rn分別是如上述R?；鶊F(tuán)和R^基團(tuán)(在E1，E^卩^含有R"基團(tuán)的一些酸中，g是0或l);在式(A)或(B)所示的基團(tuán)中，任何環(huán)均是碳環(huán)或芳族環(huán)，或者是這兩者；與碳原子鍵合的任一或多個氫原子均任選由鹵素尤其是F取代。在某些實施例中，a是0。如果a是l，c可以是0。在特殊的實施例中，(a+b+c+d)禾口(a+b+c+e)不超過4，尤其是l、2或3。(a+b+c+d)可以是0。E，E1，￡2和63的基團(tuán)例如包括芳環(huán)如苯基、萘基、吡啶基、喹啉基(quinolinyl)和呋喃基；非芳族不飽和環(huán)，例如環(huán)己烯基；飽和的環(huán)如環(huán)己基。E可以是含有芳環(huán)和非芳環(huán)二者的一個稠環(huán)系統(tǒng)，例如芴基。一類E、E1、ES和ES基團(tuán)是芳環(huán)(包括雜芳環(huán))，尤其是6個成員的芳環(huán)。在一些化合物中，E'是H，同時E^卩ES不是H;在那些化合物中，ES和^基團(tuán)例如是苯基(取代或未取代的)，CrCV烷基，例如甲基。在一類實施方案中，E含有一個取代是Q-C6烷基，(C,-Cs垸基)羰基，羧基CrC5烷基，芳基(包括雜芳基)，尤其是5個成員或優(yōu)選6個成員的芳基(例如苯基或吡啶基)，或芳烷基(例如芳基甲基或芳基乙基，其中芳基可以是雜環(huán)的，優(yōu)選是6個成員的)。在另一類實施方案中，E含有一個取代是OR13，其中R's可以是6個成員的環(huán)，其可以是芳環(huán)(例如苯基)，或者含有的一個取代是由這種6個成員的環(huán)取代的烷基(例如甲基或乙基)。一類式A或B所示的基團(tuán)是那些其中E是6個成員的芳環(huán)，任選特別是在第2或第4位由-R"或-OR"取代。本發(fā)明包括這樣的鹽，其中P3和/或P2側(cè)鏈包含其中1或2個氫原子已經(jīng)由鹵素例如F或C1置換的一個環(huán)狀基團(tuán)。本發(fā)明包括這樣的一類鹽，其中式(A)或(B)的側(cè)鏈如下式(C)、(D)或(E)所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>CqH2qCHT2(C)其中q是0—5，例如是O，l或2，每個T均獨(dú)立地是氫、卣素(例如F或C1)、-SiMe3、-R13、-OR13、-COR13、-0321113或-020113。在結(jié)構(gòu)(D)和(E)的一些實施方案中，T是在苯基的第4位，并且是-R13、-OR13、-COR13、-0)211|3或-020113，及R'3是C廣do垸基，更特別的是C,-C6垸基。在一個亞類中，T是-R"或-OR13，例如其中f和g均獨(dú)立地是O，1，2或3;在這個亞類的一些側(cè)鏈基團(tuán)中，T是-R。OI^及R。是H。在一類基團(tuán)中，所述側(cè)鏈如式(C)所示，每個T均獨(dú)立地是R"或OR'3，及R。是C,-C4烷基。在一些這種化合物中，1113是分支的烷基，在其它化合物中其是直鏈的。在一些基團(tuán)中，碳原子數(shù)是1一4。在許多二肽片段YCO-(該二肽可以是N-末端保護(hù)或不是)中，P3氨基酸有一個如上述式(A)或(B)所示的側(cè)鏈，P2殘基是一個亞氨基酸。本發(fā)明因此包括這樣的藥物，其包含是凝血酶抑制劑，特別是選擇性凝血酶抑制劑的具有中性P1(Sl結(jié)合)基團(tuán)的有機(jī)硼酸的鹽例如金屬鹽。關(guān)于結(jié)合凝血酶S3，S2和S1位點(diǎn)的基團(tuán)的更多信息，見例如TapparelliCetal,TrendsPharmacol.Sci.14:366-376，1993;SandersonPetal，CurrentMedicinalChemistry,5:289-304，1998;RewinkelJetal,CurrentPharmaceuticalDesign,5:1043-1075，1999;及CoburnCExp.Opin.Ther.Patents11(5):721-738,2001所述。本發(fā)明的凝血酶抑制性鹽非限于在前一句中列出的出版物中描述的具有S3，S2和S1親和性基團(tuán)的那些。所述硼酸對凝血酶的Ki為大約100nM或更低，例如為大約20nM或更低。式(I)所示酸的一個亞型包含式(III)所示的酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>X是與N末端氨基基團(tuán)鍵合的一個基團(tuán)，可以是H以形成NH2。X的性質(zhì)不是關(guān)鍵的，但可以是上述特定的X基團(tuán)。在一個實施例中，可以是提及的芐氧基羰基。在某些實例中，X是R6-(CH2)p-C(0)-，R6-(CH2)p-S(0)2-，r6-(CH2)p-NH-C(0)-或r6-(CH2)p-0-C(0)-，其中p是0，1，2,3,4,5或6(優(yōu)選0和1)，RS是H或者是5—13個成員的環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)任選由選自鹵素，氨基，硝基，羥基，C5-Q環(huán)狀基團(tuán)，d-C4垸基及含有鏈內(nèi)氧和/或與5—13個成員的環(huán)基團(tuán)通過鏈內(nèi)氧連接的d-C4垸基的l、2或3個取代基取代，前述烷基基團(tuán)任選由選自鹵素，氮基，硝基，羥基和C5-C6環(huán)狀基團(tuán)的一個取代基取代。更特別地，X是r6-(CH2)p-C(0)-或r6-(CH2)p-0-C(0)-，p是0或l。所述5—13個成員的環(huán)狀基團(tuán)通常是芳環(huán)或雜芳環(huán)，例如是6個成員的芳環(huán)或雜芳環(huán)基團(tuán)。在許多情況中，該基團(tuán)不被取代。X基團(tuán)例如是(2-吡嗪)羰基，(2-吡嗪)磺?；?，特別是芐氧基羰基。aa'是具有一個烴基側(cè)鏈的氨基酸殘基，該側(cè)鏈含有不超過20個碳原子(例如最多15個及任選最多13個碳原子)并包含具有最多13個碳原子的至少一個環(huán)狀基團(tuán)。在某些實施例中，aa'的環(huán)狀基團(tuán)有5或6個環(huán)成員。例如aa'的環(huán)狀基團(tuán)可以是芳基，特別是苯基。典型地，在aa'側(cè)鏈中有一或兩個環(huán)狀基團(tuán)。某些側(cè)鏈包含或由被一或兩個5或6個成員的環(huán)取代的甲基組成。更特別地，a^是Phe,Dpa或其完全或部分氫化的類似物。完全氫化的類似物是Cha和Dcha。a^是一個有4一6個環(huán)成員的亞氨基酸殘基。一類產(chǎn)物例如是包含其中a^是式(IV)所示亞氨基酸的殘基的那些產(chǎn)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>其中R"是-CH2-，CH2-CH2-，-5-(:112-或~012-012-012-，當(dāng)環(huán)是5或6個成員時，該基團(tuán)任選在一或多個-CH2-基團(tuán)由l一3個CrCV烷基取代，例如以形成R"基團(tuán)-S-C(CH3)2-。例如這些亞氨基酸是鈴蘭氨酸，特別是(s)鈴蘭氨酸，更特別是脯氨酸。從上所可知，一類非常優(yōu)選的產(chǎn)物由其中aa、a^是Phe-Pro的那些組成。在另一優(yōu)選的類別中，aa'-a^是Dpa-Pro。在其它產(chǎn)物中，aa1-aaZ是Cha-Pro或Dcha-Pro。當(dāng)然，也包括其中Pro由(s)-鈴蘭氨酸置換的相應(yīng)的產(chǎn)物類別。119如前述，并且可以是式-(CH2)s-Z所示的一基團(tuán)R1。整數(shù)s是2，3或4，W是-OH,-OMe,-OEt或鹵素(F,Cl,I或者優(yōu)選Br)。特別說明的是Z基團(tuán)是-OMe和-OEt，尤其是-OMe。在一些實施例中，對所有Z基團(tuán)而言s是3，事實上對本發(fā)明所有化合物而言均如此。特別地，W基團(tuán)是2-溴乙基，2-氯乙基，2-甲氧基乙基，4-溴丁基，4-氯丁基，4-甲氧基丁基，特別是3-溴丙基，3-氯丙基和3-甲氧基丙基。更優(yōu)選地，R1是3-甲氧基丙基。2-乙氧基乙基是另一個優(yōu)選的R'基團(tuán)。因此，一類非常優(yōu)選的鹽由式X-Phe-Pro-Mpg-B(OH)2尤其是式Cbz-Phe-Pro-Mpg-B(OH)2所示酸的那些鹽組成；也優(yōu)選的是其中Mpg由一個具有另一個特別優(yōu)選的R'基團(tuán)的殘基置換和/或Phe由Dpa或另一個a^殘基置換的這些化合物的類似物。所述鹽的aa'基團(tuán)優(yōu)選是R構(gòu)型。a^基團(tuán)優(yōu)選是(S)-構(gòu)型。特別優(yōu)選的鹽具有(R)-構(gòu)型的aa'及(S)-構(gòu)型的aa2。手性中心-NH-CH(R"-B-優(yōu)選是(R)-構(gòu)型。商業(yè)制劑具有(R,S，R)排列中的手性中心，例如在Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH的鹽的情況中OMeCbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-boroMpg-OH本發(fā)明包括Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-boroMpg-OH(及式X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-boroMpg-OH所示其它化合物)的鹽，其是至少90%純的，例如至少95%純。在主要的術(shù)語中，本發(fā)明的鹽可被認(rèn)為是相應(yīng)于上述有機(jī)硼酸與一種強(qiáng)堿的反應(yīng)產(chǎn)物，例如堿金屬化合物；然而所述鹽非限于得自這種反應(yīng)的產(chǎn)物，而且可以是通過另外途徑獲得的產(chǎn)物。所述鹽因此可通過將式(I)所示酸與一種強(qiáng)堿接觸而獲得。本發(fā)明因此涵蓋了具有式(I)所示酸與強(qiáng)堿的反應(yīng)產(chǎn)物的性質(zhì)的產(chǎn)物(物質(zhì)組合物)。所述堿是藥物可接受的?？梢蕴峒暗暮线m的鹽是1.金屬鹽，特別是一價的金屬，可提及的是堿金屬；2.強(qiáng)堿性有機(jī)含氮化合物的鹽，包括2A.胍的鹽及其類似物；2B.強(qiáng)堿性胺的鹽，例如包括(i)氨基糖和(ii)其它胺。在上述鹽中，特別說明的是堿金屬，尤其Na和Li。也說明了氨基糖。特異性鹽是酸性硼酸(acidboronate)的鹽，盡管實際上所述酸式鹽可含有非常少部分的雙去質(zhì)子化硼酸鹽。術(shù)語"酸性硼酸"是指三角形的-B(OH)2基團(tuán)，其中B-OH基團(tuán)之一是去質(zhì)子化的，以及是指平衡中相應(yīng)的四面體形基團(tuán)。酸性硼酸具有與單一去質(zhì)子化一致的化學(xué)計:本發(fā)明因此包括包含可由式(V)表示的鹽的產(chǎn)物(物質(zhì)組合物):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>其中yn+是一種藥物可接受的可得自強(qiáng)堿的陽離子，aal，aa2,x和Ri如上述。本發(fā)明還包括其中R'由另一個W基團(tuán)置換的產(chǎn)物。一類鹽的溶解性當(dāng)如實施例所述在25mg/ml的分散系中確定時，其溶解性為大約10mM或更多，例如至少大約20mM。更特別的是當(dāng)其溶解性如實施例所述在50mg/ml的分散系中確定時為至少50mM。本發(fā)明包含式(I)所示硼酸的鹽，其觀察化學(xué)計量與式"(硼酸根')。陽離子n+"所示的鹽的化學(xué)計量一致。一類這種鹽由下式表示[Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)(0—)]M+其中財+代表一個一價的陽離子，尤其是堿金屬陽離子。應(yīng)理解上述表示式是產(chǎn)物的理論上的表示式，其觀察化學(xué)計量未必完全及確切地是l:l。在上式中，三角形表示的硼酸根總是代表三角形、四面體形或混合的三角形/四面體形的硼酸根。特別例示這樣的產(chǎn)物，其包含(i)選自(a)式(VIII):X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)2所示的酸，其中X是H或者氨基保護(hù)基，尤其是Cbz，及(b)其硼酸根陰離子的種類；及(ii)與所述種類組合的具有化合價n的離子，所述種類和所述離子具有與n:l的理論種類:離子化學(xué)計量一致的觀測化學(xué)計量。在一類鹽中，V是l。然后考慮平衡離子:1.一價金屬，尤其堿金屬鹽合適的堿金屬包括鋰、鈉和鉀。所有這些均是明顯可溶的。因為其高度溶解性例證鋰和鈉。鋰鹽特別是鈉鹽相對于鉀鹽是顯著高溶解性的。許多情況中使用鈉。本發(fā)明涵蓋了含有堿金屬混合物的鹽。本發(fā)明包括包含式(VI)的鹽的產(chǎn)物X-aaLaa2"NH-GH-B\M+(VI)R1-其中JVT是一種堿金屬離子，aa'，aaX和R1如上述，本發(fā)明還包括這樣的鹽，其中硼酸根基團(tuán)的兩個羥基基團(tuán)均是鹽形式(優(yōu)選具有另一個相同的M+基團(tuán))，及這種鹽的混合物。本發(fā)明還包括這樣的產(chǎn)物，其中R1由另一個W基團(tuán)置換。2.強(qiáng)堿性有機(jī)含氮化合物本發(fā)明包括可通過如上述的肽硼酸與一種強(qiáng)有機(jī)堿反應(yīng)獲得的產(chǎn)物(具有通過這種反應(yīng)獲得的產(chǎn)物的特性)。兩類優(yōu)選的有機(jī)堿在下文2A和2B中描述。特別優(yōu)選的是酸式鹽(其中兩個硼酸-OH基團(tuán)之一是去質(zhì)子化的)。最常見地，所述鹽含有單一類型的有機(jī)平衡離子(不考慮痕量污染物)，然而本發(fā)明也涉及含有有機(jī)平衡離子混合物的鹽；在一個亞類中，所述不同的平衡離子均屬于下述段落2A家族，或者也有可能屬于下述段落2B家族；在另一亞類，所述鹽包含并非全部來自于同一家族(2A或2B)的有機(jī)平衡離子的混合物。合適的有機(jī)堿包括pKb為7或更高、例如7.5或更高的那些有機(jī)堿，如在8或更高的范圍。優(yōu)選親脂性較低的堿[例如有至少一個極性官能團(tuán)(例如1，2或3個這種基團(tuán))，如羥基];因此氨基糖是一類優(yōu)選的堿。2A.胍及其類似物胍基化合物(胍)原則上可以是任何可溶的及藥物可接受化合物，其具有一個胍基或取代的胍基基團(tuán)，或者一個取代或未取代的胍類似物。合適的取代基包括芳基(例如苯基)，垸基或由一個醚鍵或硫醚鍵中斷的垸基，在任何情況中，典型地含有1一6個、尤其l、2、3或4個碳原子，如在甲基或乙基的情況中。所述胍基基團(tuán)可有l(wèi),2,3或4個取代基團(tuán)，但通常有1或2個取代基團(tuán)，例如在末端氮上。一類胍是單烴基化的；另一類是二烴基化的。作為胍類似物可以提及的是硫胍和2-氨基吡啶。具有未取代的胍基基團(tuán)、例如胍和精氨酸的化合物形成一個特殊類別。本發(fā)明涉及含有胍混合物的鹽。一種特殊的胍基化合物是L-精氨酸或L-精氨酸類似物，例如D-精氨酸，或者高精氨酸或精胍基丁胺[(4-氨基丁基)胍]的0-或優(yōu)選L-異構(gòu)體。不太優(yōu)選的精氨酸類似物例如是NG-硝基-L-精氨酸甲酯，及限制的胍類似物，特別是2-氨基嘧啶，例如2，6-喹唑啉二胺如5，6，7，8-四氫-2，6-喹唑啉二胺。胍基混合物也可以是一種肽，例如含有精氨酸的二肽；一個這樣的二肽是L-酪氨酰-L-精氨酸。一些特殊的胍基化合物是式(VII)所示的化合物其中n式l一6，例如至少是2，例如3或更多，在許多情況中不超過5。最特別地，n是3，4或5。W是H或羧酸鹽或衍生的羧酸鹽，例如以形成一種酯(例如C,-Q垸基酯)或酰胺。W是H，C,-C4烷基或者一個天然或非天然氨基酸(例如酪氨酸)的殘基。式(IV)所示化合物通常是L-構(gòu)型。式(IV)所示化合物是精氨酸(n=3;R^羧基；R、H)及精氨酸衍生物或類似物。本發(fā)明包括包含式(IX)的鹽的產(chǎn)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>(IX)其中aa',aa2,X和R1如前述，G+是質(zhì)子化形式的一種藥物可接受的有機(jī)化合物，其包含一個胍基基團(tuán)或其類似物，本發(fā)明還包括其中硼酸根基團(tuán)的兩個羥基基團(tuán)均是鹽形式的(優(yōu)選具有另一個相同的G+基團(tuán))的鹽及這種鹽的混合物。本發(fā)明還包括其中R'由另一個W基團(tuán)置換的產(chǎn)物。2B.強(qiáng)堿性胺本發(fā)明包括可通過上述肽硼酸與一種強(qiáng)堿反應(yīng)獲得的產(chǎn)物(具有通過這種反應(yīng)獲得的產(chǎn)物的特性)，所述強(qiáng)堿是一種胺。所述胺原則上可以是任何可溶的及藥物可接受的胺。一合適類別的胺包括除了單一胺基團(tuán)外還具有極性官能團(tuán)的那些，這種化合物更親水性更強(qiáng)并因此與其它化合物相比更可溶。在某些鹽中，所述或每個額外的官能團(tuán)均是羥基。一些胺有l(wèi),2，3,4，5或6個額外的官能團(tuán)，尤其是羥基基團(tuán)。例如在一類胺中，(氨基加上羥基基團(tuán)):碳原子的比率為1:2至1:1，特別優(yōu)選后一比率。具有一或多個額外的極性官能團(tuán)的這些胺可以是烴，尤其是由氨基基團(tuán)和額外的極性基團(tuán)取代的烷。所述氨基基團(tuán)可以是取代或未取代的，并且排除氨基取代，極性堿可包含例如至多10個碳原子；通常不少于3個這種碳原子，例如4,5或6個。氨基糖包含在這種極性堿的范疇內(nèi)。本發(fā)明包括包含式(X)的鹽的產(chǎn)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>其中aa1,aa2,X和R1如前述，A+是質(zhì)子化形式的一種藥物可接受的胺，本發(fā)明還包括其中硼酸根基團(tuán)的兩個羥基均是鹽形式(優(yōu)選地具有另一個相同的A+基團(tuán))的鹽及這種鹽的混合物。在一類這種產(chǎn)物中，A+是如段落2B(i)所述的質(zhì)子化形式的一種胺；在另一類別中，A+是如2B(ii)所述的質(zhì)子化形式的一種胺。本發(fā)明還包括其中R'被另一個W基團(tuán)置換的產(chǎn)物。段落2B(i)和2B(ii)舉例說明了兩類胺堿。特別優(yōu)選的是酸式鹽(其中兩個硼酸-OH基團(tuán)之一是去質(zhì)子化的)。最常見地，所述鹽含有單一類型的胺平衡離子(不考慮痕量污染物)，然而本發(fā)明也涉及含有胺平衡離子混合物的鹽；在一個亞類中，所述不同的平衡離子均屬于下述段落2B(i)家族，或者也有可能屬于下述段落2B(ii)家族；在另一亞類，所述鹽包含并非全部屬于同一家族(2B(i)或2B(ii))的有機(jī)平衡離子的混合物。2B(i)氨基糖氨基糖的特性對本發(fā)明不是關(guān)鍵的。優(yōu)選的氨基糖包括開放環(huán)的糖，尤其是葡糖胺。也優(yōu)選環(huán)形的氨基糖。一類氨基糖是N末端未取代的，另一類優(yōu)選是N末端由一或兩個(例如一個)N末端取代基取代的。合適的取代基例如是烴基基團(tuán)，非限于含有1一12個碳原子；所述取代基可包含烷基或芳基基團(tuán)或這二者。取代基例如是C,，C2,C3，C4，C5，C6，C7和Q烷基基團(tuán)，特別是甲基和乙基，例證了甲基。數(shù)據(jù)表明氨基糖、尤其N-甲基-D-葡糖胺具有非常高的溶解性。一種最優(yōu)選的氨基糖是N-甲基-D-葡糖胺2B(ii)其它胺其它合適的胺包括氨基酸(無論天然發(fā)生與否)，其側(cè)鏈由一個氨基基團(tuán)、尤其賴氨酸取代。一些胺是式(XI)所示的化合物NHR3(X|)其中n，f和R3與式(IV)中所示相同。式(VI)的化合物通常是L-構(gòu)型。式(VI)的化合物是賴氨酸(r^4;R^羧基；R^H)及賴氨酸衍生物或類似物。最優(yōu)選的胺是L-賴氨酸。其它合適的胺是含氮雜環(huán)。至少通常這種雜環(huán)化合物是脂環(huán)族的；一類雜環(huán)化合物是N取代的，另一類優(yōu)選是N未取代的。所述雜環(huán)可含有6個環(huán)形成原子，如在哌啶、哌嗪和嗎啉的情況中。一類胺包括由極性取代基、尤其羥基取代的含N雜環(huán)，例如取代l、2或3次。本發(fā)明因此包括除了氨基糖之外的胺，其除了一個胺基團(tuán)之外還具有一或多個(例如l，2，3,4,5或6)極性取代基，尤其是羥基。這種化合物的(氨基加羥基基團(tuán)):碳原子的比率為1:2—1:1，特別優(yōu)選后一比率。本發(fā)明包括混和的鹽，即含有硼酸肽基團(tuán)和/或平衡離子的混合物的鹽，但優(yōu)選單一的鹽。固體形式的鹽可含有一種溶劑，例如水。本發(fā)明包括其中所述鹽基本上是無水的一類產(chǎn)物。本發(fā)明還包括其中所述鹽是水合物的一類產(chǎn)物。本發(fā)明產(chǎn)物的應(yīng)用本發(fā)明的鹽是凝血酶抑制劑。其因此用于抑制凝血酶。因此本發(fā)明提供了具有控制淤血及尤其抑制凝集的潛力的化合物，例如在治療或預(yù)防心肌梗塞形成后的繼發(fā)事件。所述化合物的醫(yī)學(xué)應(yīng)用可以是預(yù)防性的(包括治療血栓形成以及預(yù)防血栓形成的發(fā)生)以及治療性的(包括預(yù)防血栓形成再次發(fā)生或繼發(fā)血栓形成事件)。當(dāng)需要抗凝血酶原制劑時可以應(yīng)用所述鹽。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)所述鹽包括式(III)所示的硼酸的那些鹽，可通過治療或預(yù)防用于治療動脈血栓形成。所揭示的鹽因此示出可治療或預(yù)防動物包括人的血液和組織中血栓形成及血凝過快。術(shù)語"血栓形成"包括例如衰弱性血栓形成、動脈血栓形成、心內(nèi)血栓形成、冠狀動脈血栓形成、蔔行性血栓形成、傳染性血栓形成、腸系膜血栓形成、胎盤血栓形成、蔓延性血栓形成、外傷性血栓形成及靜脈血栓形成。已知血凝過快可導(dǎo)致血栓栓塞性疾病?？梢杂帽景l(fā)明的化合物治療或預(yù)防的靜脈血栓栓塞例如包括靜脈阻塞、肺動脈阻塞(肺栓塞)、深部靜脈血栓形成、與癌癥和癌癥化療相關(guān)的血栓形成、繼發(fā)于具有血栓形成傾向的疾病如蛋白C缺乏、蛋白S缺乏、抗凝血酶III缺乏及因子VLeiden的血栓形成、及得自獲得性血栓形成傾向的疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(炎癥性結(jié)締組織疾病)的血栓形成。對于靜脈血栓栓塞而言，本發(fā)明的化合物用于保持留置導(dǎo)管的開放性。可以用本發(fā)明的化合物治療或預(yù)防的心源性血栓栓塞例如包括血栓栓塞性中風(fēng)(導(dǎo)致與腦供血不足相關(guān)的神經(jīng)學(xué)病變的分離血栓)、與心房纖顫(快速的、不規(guī)律的上部心房肌纖維顫搐)相關(guān)的心源性血栓栓塞、與修復(fù)的心臟瓣膜如人工心臟瓣膜相關(guān)的心源性血栓栓塞、及與心臟疾病相關(guān)的心源性血栓栓塞。包含動脈血栓形成的病癥例如包括不穩(wěn)定性絞痛(胸部源于冠狀動脈的嚴(yán)重的壓搾性疼痛)、心肌梗塞(由于血供不足引起的心肌細(xì)胞死亡)，缺血性心臟病(由于血供阻塞(如動脈狹窄)所致局部缺血)、在經(jīng)皮穿刺冠狀動脈成形術(shù)期間或之后的再閉塞、在經(jīng)皮穿刺冠狀動脈成形術(shù)后再狹窄、冠狀動脈旁路搭橋術(shù)的閉塞、及阻塞性腦血管疾病。就動靜脈(混和的)血栓形成而言，本發(fā)明的抗血栓形成化合物也用于保持動靜脈支路的開放性?？梢蕴峒暗呐c血凝過快及血栓栓塞性疾病血管的其它病癥繼發(fā)于或獲得自肝素輔助因子II的缺乏、循環(huán)抗磷脂抗體(狼疫抗凝血劑)的缺乏、高半胱氨酸血癥、肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥及纖維蛋白溶解缺陷。可以提及的特殊用途包括治療性和/或預(yù)防性處理靜脈血栓形成及肺栓塞。本發(fā)明的產(chǎn)物(特別是TRI50c的鹽)的優(yōu)選用途包括預(yù)防靜脈血栓栓塞(例如深部靜脈血栓形成和/或肺栓塞)。例如包括經(jīng)歷整形外科手術(shù)如全部髖關(guān)節(jié)置換、全部膝關(guān)節(jié)置換、主要髖或膝關(guān)節(jié)手術(shù)的患者；處于血栓形成高危險狀態(tài)中經(jīng)歷普通外科手術(shù)的患者，如癌癥的腹部或骨盆手術(shù)；及臥床3天以上及具有急性心力衰竭、急性呼吸衰竭、感染的患者。預(yù)防患者血液透析通路、晚期腎病患者中血栓形成。預(yù)防晚期腎病患者中心血管病變(死亡、心肌梗塞等)，無論是否需要血液透析。預(yù)防通過留置導(dǎo)管接受化療的患者中靜脈血栓栓塞事件。預(yù)防經(jīng)歷下肢動脈重建手術(shù)(旁路、終動脈切除術(shù)、穿刺血管成形術(shù)等)的患者中血栓栓塞事件。治療靜脈血栓栓塞事件。與另一種心血管治療劑組合預(yù)防急性冠狀動脈綜合征中的心血管事件(例如不穩(wěn)定心絞痛、無Q波心肌缺血/梗塞)，所述另一種心血管治療劑例如是阿司匹林(乙酰水楊酸；阿司匹林是在德國已經(jīng)注冊的商標(biāo))、溶血栓劑(見下文實例)、抗血小板制劑(見下文實例)。與乙酰水楊酸、溶血栓劑(見下文實例)組合治療患有急性心肌梗塞的患者。本發(fā)明的凝血酶抑制劑因此可用于治療和/或預(yù)防性處理前述所有病癥。在一個方法中，本發(fā)明的產(chǎn)物用于治療血液透析的患者，通過在透析溶液中提供本發(fā)明的產(chǎn)物，如在WO00/41715中關(guān)于其它凝血酶抑制劑所述。本發(fā)明因此包含透析溶液及包含本發(fā)明的一種產(chǎn)物的透析濃縮物，本發(fā)明還包含治療需要這種治療的透析患者的方法，所述方法包括使用一種包含低分子量凝血酶抑制劑的透析溶液。本發(fā)明還包括本發(fā)明的抗血栓形成的產(chǎn)物在生產(chǎn)治療透析患者的藥物中的應(yīng)用，其中本發(fā)明的抗血栓形成產(chǎn)物在透析溶液中提供。在另一個方法中，本發(fā)明的產(chǎn)物用于抗擊不利的細(xì)胞增殖，如在WO01/41796中關(guān)于其它凝血酶抑制劑所述。所述不利的細(xì)胞增殖是典型不利的增生性細(xì)胞增殖，例如平滑肌細(xì)胞、尤其血管平滑肌細(xì)胞的增殖。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的產(chǎn)物在治療內(nèi)膜超常增生中特別有用，血管內(nèi)膜增生的一部分是平滑肌細(xì)胞增生。再狹窄可被認(rèn)為是由于新生內(nèi)膜超常增生所致；因此本發(fā)明說明書中內(nèi)膜超常增生包括再狹窄。本發(fā)明的產(chǎn)物也預(yù)期可治療缺血性疾病。更特別地，它們可用于治療(無論治療性或是預(yù)防性)患有或處于非瓣膜心房纖顫(NVAF)危險中的患者的缺血性疾病，如WO02/36157中關(guān)于其它凝血酶抑制劑所述。缺血性疾病是其結(jié)果包括機(jī)體一部分血流限制的病癥。該術(shù)語應(yīng)理解為包括血液、組織和/或器官中的血栓形成和血凝過快。可以提及的特殊用途包括預(yù)防和/或治療缺血性心臟病、心肌梗塞、系統(tǒng)性栓塞例如在腎或脾中，及更特別是腦缺血，包括腦血栓形成、腦栓塞和/或與非腦血栓形成或栓塞相關(guān)的腦缺血(換句話說，即治療(無論治療性還是預(yù)防性)血栓形成性或缺血性中風(fēng)及治療短暫腦缺血發(fā)作)，特別是治療患有或處于NVAF危險中的患者。本發(fā)明的產(chǎn)物還預(yù)期可治療風(fēng)濕性/關(guān)節(jié)炎疾病，如在WO03/007984中關(guān)于其它凝血酶抑制劑所述。因此，本發(fā)明的產(chǎn)物可用于治療慢性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或強(qiáng)直性脊椎炎。另外，期望本發(fā)明的產(chǎn)物用于預(yù)防溶栓、經(jīng)皮穿剌血管成形術(shù)(PTA)及冠狀動脈旁路術(shù)后再閉塞(即血栓形成)；預(yù)防一般性顯微外科和血管手術(shù)后再次血栓形成。本發(fā)明的產(chǎn)物的用途進(jìn)一步包括治療和/或預(yù)防性治療由細(xì)菌、多處外傷、中毒或任何其它機(jī)制導(dǎo)致的彌散性血管內(nèi)凝血；當(dāng)血液與機(jī)體內(nèi)外源表面如血管移植物、血管支架、血管導(dǎo)管、機(jī)械性和生物性修復(fù)的瓣膜或任何其它醫(yī)學(xué)裝置接觸時進(jìn)行抗凝血處理；及當(dāng)血液與機(jī)體外醫(yī)學(xué)裝置接觸如在使用心-肺機(jī)進(jìn)行心血管手術(shù)期間或在血液透析時進(jìn)行抗凝血處理。本發(fā)明的產(chǎn)物的用途進(jìn)一步包括治療其中存在不利的過量凝血酶而無血凝過快跡象的病癥，例如神經(jīng)變性疾病如阿爾茨海默病。除了凝血酶對凝集過程的作用之外，已知其可激活大量細(xì)胞(如嗜中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞)。因此，本發(fā)明的化合物也可用于治療和/或預(yù)防性治療特發(fā)性及成人呼吸窘迫綜合征、在放療或化療處理后的肺纖維化、敗血癥休克、敗血病、炎癥反應(yīng)，包括但非限于水腫，急性或慢性動脈硬化如冠狀動脈疾病、腦動脈疾病、周圍動脈疾病、再灌注損傷及在經(jīng)皮穿刺成形術(shù)(PTA)后再狹窄。所述鹽還可以用于治療胰腺炎。本發(fā)明的鹽進(jìn)一步可用于抑制血小板促凝血活性。本發(fā)明提供了一種抑制血小板促凝血活性的方法，通過給予患有或處于動脈血栓形成危險中的哺乳動物、特別是人一種本發(fā)明所述的硼酸的鹽。本發(fā)明還提供了這種鹽在生產(chǎn)抑制血小板促凝血活性的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的產(chǎn)物作為血小板促凝血活性抑制劑的應(yīng)用基于這樣觀察，即本發(fā)明的硼酸表現(xiàn)出有效抑制動脈血栓形成以及靜脈血栓形成。包含動脈血栓形成的病癥包括急性冠狀動脈綜合征(尤其是心肌梗塞和不穩(wěn)定心絞痛)，腦血管血栓形成和周圍動脈閉塞及由于心房纖顫、瓣膜性心臟病，動靜脈旁路，留置導(dǎo)管或冠狀動脈支架發(fā)生的動脈血栓形成。因此，本發(fā)明另一方面提供了一種治療選自這些疾病或病癥的方法，包括給予哺乳動物尤其是人類患者一種本發(fā)明的鹽。本發(fā)明包括用于動脈環(huán)境例如冠狀動脈支架或其它動脈植入體中的產(chǎn)物，其具有包含本發(fā)明的鹽的一個包被。本發(fā)明的鹽可預(yù)防性用于治療確信處于患有動脈血栓形成或者包含動脈血栓形成的疾病或病癥的危險中的個體，或者治療性應(yīng)用(包括預(yù)防血栓形成的再次發(fā)生或繼發(fā)的血栓形成)。因此本發(fā)明包括所述選擇性凝血酶抑制劑(有機(jī)硼酸鹽)在預(yù)防性或治療性處理上述疾病中的應(yīng)用，以及其在藥物制劑及藥物制劑的生產(chǎn)中的應(yīng)用。給藥及藥物制劑所述鹽可以給予宿主，例如在所述藥物有抗凝血酶原活性的情況中，以獲得抗凝血酶原作用。在較大動物如人的情況中，所述化合物可單獨(dú)給予或與藥物可接受的稀釋劑、賦形劑或載體組合給予。術(shù)語"藥物可接受的"包括人和獸醫(yī)目的均可接受性，其中優(yōu)選人用藥物應(yīng)用可接受性。在口服給藥的情況中，所述化合物優(yōu)選以防止本發(fā)明的鹽與酸性胃液接觸的形式給予，如是腸衣制劑形式，這樣防止本發(fā)明的鹽釋放直至達(dá)到十二指腸。腸衣例如是由碳水化合物聚合物或聚乙烯聚合物適當(dāng)?shù)刂瞥?。腸衣原料例如包括但非限于乙酸纖維素鄰苯二甲酸酯，乙酸纖維素琥珀酸酯，纖維素氫鄰苯二甲酸酯，乙酸纖維素偏苯三酸酯，乙基纖維素，羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯，羥丙基甲基乙酸纖維素琥珀酸酯:羧甲基乙基纖維素，淀粉乙酸鄰苯二甲酸酯，直鏈淀粉乙酸鄰苯二甲酸酯，聚乙酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯，聚丁酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯，苯乙烯順丁烯二酸共聚物，甲基丙烯酸-甲基丙烯酸共聚物(MPM-05),甲基丙烯酸-甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(MPM-06),及甲基甲基丙烯酸-甲基丙烯酸共聚物(Eudragit⑧L&S).。任選所述腸衣含有一種增塑劑。增塑劑例如包括但非限于檸檬酸三乙酯，三醋精和二乙基鄰苯二甲酸酯。本發(fā)明的鹽可以組合和/或與任何心血管治療劑共同給予。在商業(yè)應(yīng)用、臨床評價和臨床前研發(fā)中有大量可利用的心血管治療劑，可以加以選擇與本發(fā)明的產(chǎn)物一起通過組合藥物治療以預(yù)防心血管疾病。這種制劑可以是選自但非限于幾個主要類別的一或多種制劑，即降脂藥物，包括IBAT(回腸1^+/膽酸協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)抑制劑，貝特類藥(fibrate),煙酸，抑制素，CETP(膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白)抑制劑，及膽酸螯合劑，抗氧化劑，包括維生素E和普羅布可(probucol)，1Ib/IIIa拮抗劑(例如abciximab，eptifibatide，tirofiban)，醛甾酮抑制劑(例如螺內(nèi)酯(spirolactone)禾卩epoxymexrenone)，腺苷A2受體拮抗齊U(例如losartan),腺苷A3受體激動劑，p-阻滯劑，乙酰水楊酸，袢利尿劑及ACE(血管緊張素轉(zhuǎn)換酶)抑制劑。本發(fā)明的鹽可以組合和/或與具有不同作用機(jī)制的任何抗血栓形成劑共同給予，如抗血小板制劑乙酰水楊酸，ticlopidine，clopidogrel,血栓烷受體和/或合成酶抑制劑，前列環(huán)素模擬物和磷酸二酯酶抑制劑及ADP-受體(P2T)拮抗劑。本發(fā)明的產(chǎn)物在治療血栓形成疾病、特別在心肌梗塞中可進(jìn)一步組合和/或與溶栓劑共同給予，所述溶栓劑如組織纖溶酶原激活物(天然的、重組的或修飾的)，鏈激酶，尿激酶，尿激酶原，茴香酰纖溶酶原-鏈激酶激活物復(fù)合物(APSAC),動物唾液腺纖溶酶原激活物等等。本發(fā)明的鹽可以組合和/或與一種保心劑例如腺苷Al或A3受體激動劑共同給予。本發(fā)明還提供了治療患者炎癥疾病的一種方法，包括用本發(fā)明的產(chǎn)物與NSAID例如COX-2抑制劑一起治療該患者。這種疾病包括但非限于腎炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腎小球腎炎，脈管炎和肉樣瘤病。因此，本發(fā)明的抗血栓形成鹽可以組合和/或與NSAID共同給予。因此，典型地，本發(fā)明的鹽可以給予宿主以獲得一種凝血酶抑制作用，或者本發(fā)明中提及的任何其它凝血酶抑制性或抗血栓形成作用。本發(fā)明藥物組合物中活性成分的實際劑量水平可以變化，以獲得針對特定患者、組合物及給藥模式有效達(dá)到所需治療應(yīng)答的活性化合物的量(本發(fā)明稱之為"治療有效量")。所選擇的劑量水平依賴于特定化合物的活性，所治療的病癥的嚴(yán)重性及所治療的患者的狀態(tài)和現(xiàn)病史。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知所述化合物的起始劑量低于達(dá)到希望的治療作用所需要的水平，然后逐步增加劑量直至達(dá)到希望的作用。例如，目前預(yù)期在口服給予TRI50c的鹽的情況中，所述鹽例如可以每日兩次給予0.5—2.5mg/Kg的量，計作TRI50c的量。其它鹽可以等摩爾量給予。本發(fā)明非限于以這種數(shù)量或方案給予，包括在前句所述之外的劑量和方案。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種口服藥物制劑，其包含本發(fā)明的產(chǎn)物并混和一種藥物可接受的佐劑、稀釋劑或載體?？诜o藥的固體劑型包括膠囊、片劑(也稱為藥丸)、粉末和顆粒。在這種固體劑型中，所述活性化合物典型地混合至少一種惰性的藥物可接受的賦形劑或載體如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或一或多種以下原料:a)充填劑或增量劑如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合劑如羧甲基纖維素，藻酸鹽，明膠，聚乙烯吡咯垸酮，蔗糖和阿拉伯樹膠(acacia);c)濕潤劑如甘油；d)崩解劑如瓊脂-瓊脂，碳酸鈣，馬鈴薯或木薯淀粉，藻酸，某些硅酸鹽和碳酸鈉；e)溶液阻滯劑如石蠟；f)吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；g)濕潤劑如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯；h)吸收劑如高嶺土和皂土及i)潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉及其混合物。在膠囊和片劑的情況中，所述劑型還可以包含緩沖劑。在軟和硬填充的明膠膠囊中也可以使用相似類型的固體組合物用作充填劑，例如使用乳糖以及高分子量的聚乙二醇作為賦形劑。適當(dāng)?shù)兀诜苿┛珊幸环N溶解輔助物。所述溶解輔助物非限于是其性質(zhì)，只要其是藥物可接受的即可。例如包括非離子表面活性劑，如蔗糖脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯，失水山梨糖醇脂肪酸酯(例如失水山梨醇三油酸酯)，聚乙二醇，聚氧乙烯氫化蓖麻油，聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，聚氧乙烯烷基醚，甲氧基聚乙氧烯烷基醚，聚氧乙烯垸基苯基醚，聚乙二醇脂肪酸酯，聚氧乙烯垸基胺，聚氧乙烯烷基硫醚，聚氧化烯聚氧丙烯共聚物，聚氧乙烯甘油脂肪酸酯，季戊四醇脂肪酸酯，丙二醇單脂肪酸酯，聚氧乙烯丙二醇單脂肪酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯，脂肪酸垸基醇酰胺，及垸基胺氧化物；膽汁酸及其鹽(例如鵝脫氧膽酸，膽酸，脫氧膽酸，脫氫膽酸及其鹽，及甘氨酸或其?；撬峋Y合物)；離子表面活性劑，如十二垸基硫酸鈉，脂肪酸皂，烷基磺酸鹽，垸基磷酸鹽,磷酸乙醚，堿性氨基酸的脂肪酸鹽；三乙醇胺皂，及烷基季銨鹽；及兼性表面活性劑如甜菜堿和氨基羧酸鹽。所述活性化合物也可以是微囊化形式，如果適當(dāng)則具有一或多種上述賦形劑。口服制劑的液體劑型包括藥物可接受的乳狀液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除了活性化合物之外，該液體劑型可含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑如乙醇，異丙醇，碳酸乙甲酸節(jié)酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油(特別是棉油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油),甘油，四氫糠醇，聚乙二醇及脫水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀釋劑之外，口服組合物還可以包括佐劑如濕潤劑，乳化劑和懸浮劑，甜味劑，調(diào)味劑和香料。懸浮液除了所述活性化合物之外，還可含有懸浮劑如乙氧基化異硬脂醇，聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨糖醇酯，微晶纖維素，間氫氧化鋁，皂土，瓊脂-瓊脂，及黃蓍膠及其混合物。本發(fā)明的產(chǎn)物可以是細(xì)碎粒狀的固體形式，例如可以是微粉化的。粉末或細(xì)碎?？梢匝b入膠囊。所述活性混合物可以單一劑量、多重劑量或作為緩釋制劑給予。從前述內(nèi)容應(yīng)理解本發(fā)明提供了適于給藥的干細(xì)顆粒形式的藥物產(chǎn)物，其包含式(I)所示硼酸的金屬鹽，例如堿金屬鹽。所述金屬鹽可以是適于口服的形式。所述金屬鹽優(yōu)選是一種酸式鹽。合成l.肽服模擬物的合成硼酸肽包括例如Cbz-D-Phe-Pro-BoroMpg-O頻哪醇的合成是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并在現(xiàn)有
技術(shù)領(lǐng)域：
已經(jīng)加以描述，包括Claesonetal(US5574014及其它)和Kakkaretal(WO92/07869及同族專利，包括US5648338)。ElgendyetalAdv.Exp.Med.Biol.(USA)340:173-178，1993;Claeson，G.etalBiochem丄290:309-312,1993;DeadmanetalJ.EnzymeInhibition9:29-41，1995及DeadmanetalJ.Med.Chem.38:1511-1522,1995對此也加以了描述。在手性B末端碳S或R構(gòu)型的立體選擇性合成可以使用確定的方法學(xué)進(jìn)行(ElgendyetalTetrahedron.Lett.33:4209-4212,1992;WO92/07869及同族專利，包括US5648338)，使用(+)或(—)-蒎二醇作為手性定向物(chiraldirector)(MattesonetalJ.Am.Chem.Soc.108:810-819，1986;MattesonetalOrganometallics.3:1284-1288，1984)。另一種方法是溶解必備的氨基硼酸酯中間體(例如Mpg-BO頻哪醇)以選擇性獲得希望的(R)-異構(gòu)體并將其與二肽基團(tuán)(例如Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro，與Cbz-D-Phe-L-Pro相同)偶聯(lián)，這將形成所述分子的剩余物。所述硼酸肽最初可以硼酸酯形式合成，特別是具有二醇的酯。如下文所述，這種二醇酯可以轉(zhuǎn)變?yōu)殡呐鹚帷?.酯至酸的轉(zhuǎn)化可以將一種肽硼酸酯如Cbz-(R)-Phe-Pro-BoroMpg-O頻哪醇水解以形成相應(yīng)的酸。將式(I)所示肽硼酸的二醇酯轉(zhuǎn)變?yōu)樗岬囊环N新技術(shù)包括將該二醇酯溶解于醚尤其二垸基醚中，由此溶解的二醇與一種二醇胺例如二烷醇胺反應(yīng)形成沉淀產(chǎn)物，回收該沉淀，將其溶解于極性有機(jī)溶劑中并將由此溶解的產(chǎn)物與一種水性介質(zhì)例如水性酸反應(yīng)，形成肽硼酸。所述硼酸可以從得自反應(yīng)的混合物的有機(jī)層中回收，例如通過除去溶劑進(jìn)行，如通過在真空下蒸發(fā)或蒸餾除去溶劑。二醇酯與二醇胺之間的反應(yīng)可以在例如回流下進(jìn)行。二醇的性質(zhì)不是關(guān)鍵的。可以提及的合適的二醇是脂肪族和芳族化合物，其具有在相鄰碳原子或在被另一個碳取代的碳原子上被取代的羥基基團(tuán)。也就是說合適的二醇包括具有鏈內(nèi)或環(huán)內(nèi)由至少兩個相連碳原子分開的至少兩個羥基基團(tuán)的化合物。一類二醇包含由兩個羥基基團(tuán)精確取代的烴。這種二醇是一種是頻哪醇，另一種是琉二醇；還可以提及的是新戊二醇，1，2-乙二醇，1，2-丙二醇，1,3-丙二醇，2,3-丁二醇，1,2-二異丙基乙二醇，5,6-癸二醇和1,2-二環(huán)己基乙二醇。二烷基醚的烷基基團(tuán)優(yōu)選地具有l(wèi),2，3或4個碳原子，并且所述這些烷基基團(tuán)可以相同或不同。一種舉例性的醚是二乙醚。二烷醇胺的垸基基團(tuán)優(yōu)選地具有l(wèi),2，3或4個碳原子，并且所述這些烷基基團(tuán)可以相同或不同。一種舉例性的二烷醇胺是二乙醇胺。二乙醇胺/硼酸反應(yīng)產(chǎn)物在室溫于水中水解，水解速率可通過加入酸或堿而加速。極性有機(jī)溶劑優(yōu)選地是CHCl3。其它例子通常為多鹵化烷和乙酸乙酯。原則上除了醇以外的任何極性有機(jī)溶劑均是可接受的。酸水溶液合適地為pH為l的強(qiáng)無機(jī)酸，如鹽酸。與酸反應(yīng)后，反應(yīng)混合物合適地用例如NH4Cl或另一種弱堿洗滌。具體程序的例如以下所述1.將所選擇的肽硼酸的頻哪醇或蒎二醇酯溶解在二乙醚中。2.加入二乙醇胺并將混合物在4CTC回流。3.除去(過濾)沉淀產(chǎn)物，用二乙醚或除了醇以外的另一種極性有機(jī)溶劑洗滌(通常幾次)，并干燥(例如通過真空蒸發(fā))。4.將干燥產(chǎn)物溶于除了醇之外的一種有機(jī)溶劑例如CHCl3中，加入酸或堿水溶液，例如鹽酸(pH1),在室溫攪拌混合物例如l小時。5.取出有機(jī)層并用NH4C1溶液洗滌。6.蒸發(fā)掉有機(jī)溶劑并干燥殘余的固體產(chǎn)物。上述方法導(dǎo)致形成可被方便地稱作式(I)的肽硼酸的"二醇胺加成物"，特別是具有二乙醇胺的這種加成物，本發(fā)明包括這種加成物。這種加成物的分子結(jié)構(gòu)還未知，它們可能包含一種化合物，該化合物中二醇胺的兩個氧和氮均與硼配位；它們可包含離子。然而所述加成物被認(rèn)為是酯。本發(fā)明包含的一種特定的新產(chǎn)物是可通過式VIII所示化合物、特別是(R,S,R)-TRI50c的頻哪醇或蒎二醇酯與二乙醇胺的反應(yīng)獲得的產(chǎn)物，即新產(chǎn)物是(R,S,R)-TRI50c/二乙醇胺"加成物"，其中所述酸是(R，S,R)-TRI50c。本發(fā)明的二醇胺可以是包含如下物質(zhì)的一種組合物(i)式(XII)所示物質(zhì)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage56</formula>其中X是H或一個氨基保護(hù)基，硼原子任選額外與氮原子配位，末端氧的化合價狀況是開放的(它們可以附于另一個共價鍵上，離子化為-CT,或者有一些其它的例如中間體狀態(tài))；及處于鍵合中。(ii)式(xin)所示物質(zhì)OCH2CH2\N(XIII)其中氮原子和兩個氧原子的化合價狀態(tài)是開放的。應(yīng)意識到式(IX)所示種類的末端氧原子和式(x)所示種類的氧原子可以是相同的氧原子，在這種情況中式(X)的種類與式(IX)的種類形成一種二醇酯。應(yīng)理解的是前述技術(shù)包括一種回收有機(jī)硼酸產(chǎn)物的方法，所述方法包括提供一種溶解于溶劑中的混合物，該混合物包含可溶形式的有機(jī)硼酸和具有兩個羥基基團(tuán)和一個氨基基團(tuán)的化合物(即二醇胺)，使得所述有機(jī)硼酸與二醇胺反應(yīng)形成沉淀，回收所述沉淀?？扇苄问降挠袡C(jī)硼酸可以是如上所述的一種二醇酯。所述溶劑可以是如上所述的一種醚。所述有機(jī)硼酸可以是本說明書中提及的有機(jī)硼酸之一，例如其可以是式(i)，(n)或(in)所示的有機(jī)硼酸。本段中所述的方法是新的并且形成了本發(fā)明的一個方面。回收方法是過濾。二醇胺與可溶形式的有機(jī)硼酸之間的反應(yīng)是在升高的溫度下適當(dāng)進(jìn)行的，例如在回流下進(jìn)行。本發(fā)明的另一方面是回收有機(jī)硼化合物的方法，所述方法包括提供于醚中可溶形式的一種有機(jī)硼酸，例如一種藥物如式(m)所示的化合物；形成于醚中的可溶形式的一種溶液；將所述溶液與一種二烷醇胺組合，使得二烷醇胺與可溶形式的有機(jī)硼酸反應(yīng)形成一種不溶的沉淀；及回收所述沉淀。前一段落中的術(shù)語"可溶"是指在反應(yīng)介質(zhì)比沉淀產(chǎn)物中基本上更可溶的化合物。在該方法的變化方法中，所述醚由甲苯或另一種芳族溶劑代替。上述二乙醇胺沉淀技術(shù)例如是另一種新方法，這是從醚溶液中回收肽硼酸的頻哪醇或蒎二醇酯的一種方法，包括將二乙醇胺溶解于溶液中，使得沉淀形成并回收該沉淀。本發(fā)明涵蓋了這種方法的變化方法，其中使用除了頻哪醇或蒎二醇之外的另一種二醇。所述沉淀物，即"加成物"，可以被轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x有機(jī)硼酸，例如通過將其與酸接觸而進(jìn)行。所述酸可以是一種水性酸，例如上述一種水性無機(jī)酸。所述沉淀可例如溶解于有機(jī)溶劑中，之后再與所述酸接觸。本發(fā)明因此提供了一種生產(chǎn)有機(jī)硼酸的方法，包括將其二醇胺反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)樗帷５米郧皟啥嗡龇椒ǖ乃峥梢员晦D(zhuǎn)變?yōu)樵撍崤c一種多價金屬的鹽，該鹽隨后被配制成一種口服劑型的藥物組合物。3.鹽合成通常地，所述鹽可以通過將相應(yīng)的肽硼酸與一種合適的強(qiáng)堿接觸以形成希望的鹽。在金屬鹽的情況中，金屬的氫氧化物是合適的堿(或者例如可以使用金屬的碳酸鹽)，有時更便利地是將所述酸與一種相應(yīng)的金屬醇鹽(例如甲醇鹽)接觸，為此相應(yīng)的垸醇是一種合適的溶劑。有機(jī)堿的鹽可以通過將肽硼酸與有機(jī)堿自身接觸而制備。所述鹽例如是酸式鹽(一個-BOH質(zhì)子被置換)，用一種一價陽離子產(chǎn)生酸式鹽，所述酸和堿以基本等摩爾量適當(dāng)?shù)胤磻?yīng)。因此慣例的酸:堿摩爾比率基本為n:l，其中n是堿的陽離子的化合價。在一個程序中，將肽硼酸于可與水混溶的有機(jī)溶劑例如乙腈或醇(例如乙醇、甲醇、丙醇例如異丙醇，或另一種垸醇)中的溶液，與堿的水溶液組合。使酸和堿反應(yīng)并回收鹽。該反應(yīng)典型地在環(huán)境溫度(例如15—30°C,例如15—25'C)進(jìn)行，但可以使用升高的溫度，例如直至反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)，但更常見的是較低的溫度，例如至多4(TC或5(TC。靜置反應(yīng)混合物或者攪動(通常是攪拌)。酸和堿的反應(yīng)時間不是關(guān)鍵的，但己發(fā)現(xiàn)希望的是保持反應(yīng)混合物至少一小時。一至兩個小時的反應(yīng)時間通常是合適的，當(dāng)然也可以采用更長的反應(yīng)時間。鹽可以從反應(yīng)混合物中經(jīng)任何合適的方法如蒸發(fā)或沉淀而回收。沉淀可以通過加入過量的可混溶劑而進(jìn)行，所述鹽在該可混溶劑中溶解度有限。在一個優(yōu)選的技術(shù)中，鹽是通過將反應(yīng)混合物抽真空干燥而回收。之后優(yōu)選將鹽純化，例如通過將鹽重新溶解之后過濾所得溶液并將其干燥，例如抽真空至干燥而純化。重新溶解可以使用水例如蒸餾水進(jìn)行。然后將鹽進(jìn)一步純化，例如以除去剩余的水，這可以通過在合適的溶劑，優(yōu)選乙酸乙酯或THF中進(jìn)一步重新溶解，隨后蒸發(fā)至干燥而進(jìn)行。純化程序可以在環(huán)境溫度進(jìn)行(即15—30。C，例如15一25"C)，或者在適當(dāng)升高的溫度例如不超過40'C或5CTC進(jìn)行；例如鹽可以通過攪動溶解于水和/或溶劑中，加溫或不加溫至例如37"C。本發(fā)明還包括一種干燥本發(fā)明的鹽及其它肽硼酸鹽的方法，所述方法包括將它們?nèi)芙庥谟袡C(jī)溶劑例如乙酸乙酯或THF中，然后例如通過抽真空而蒸發(fā)至干燥。通常用于純化鹽的優(yōu)選的溶劑是乙酸乙酯或THF，或者也許是另一種有機(jī)溶劑。合成Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH的鹽的一般程序如下將Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g,38.1mM)在室溫經(jīng)攪拌溶解于乙腈(200ml)中。向此溶液中加入必要的于蒸餾水(190ml)中的堿溶液；加入的堿作為一價陽離子的0.2M溶液。使所得澄清的溶液例如通過靜置或攪拌反應(yīng)一段時間，在任一情況中均為1一2小時。典型地在室溫進(jìn)行反應(yīng)(例如15—30。C，例如15—25。C)，但或者可以升高溫度(例如至多為3(TC，4(TC或5(TC)。然后將反應(yīng)混合物在真空下抽真空至干燥，溫度不超過37t:，典型地產(chǎn)生一種白色易碎的固體或一種油狀/粘液。將該油狀/粘液重新溶解于最少量的蒸餾水(200ml—4L)中，典型地加溫(例如至30—40。C)，通常至多2小時。通過濾紙過濾溶液并抽真空至干燥，溶液溫度也不超過37。C，或者凍干。所得產(chǎn)物在真空下干燥過夜以正常產(chǎn)生一種白色的易碎固體。如果產(chǎn)物是以油狀或粘液狀態(tài)存在的，則然后將其溶解于乙酸乙酯中并抽真空至干燥，產(chǎn)生白色固體。該白色固體典型是一種粗糙的非晶質(zhì)粉末。在前述一般程序的變體中，乙腈由另一種與水可混溶的有機(jī)溶劑代替，所述溶劑特別是如上述醇，特別是乙醇、甲醇、異丙醇或另一種丙醇。在一種有機(jī)硼酸鹽在選擇的鹽形成反應(yīng)介質(zhì)中可溶性較低的情況中，不便于直接從相應(yīng)的酸和堿中制備，因此可溶性較低的鹽可以從在該反應(yīng)介質(zhì)中更可溶的一種鹽中制備。本發(fā)明還提供了硼酸在生產(chǎn)本發(fā)明的鹽中的應(yīng)用。本發(fā)明還包括一種制備本發(fā)明的產(chǎn)物的方法，包括將例如式(i),(n)或(in)所示的硼酸與能產(chǎn)生這種鹽的堿接觸。用于制備藥物制品的式(I)所示肽硼酸典型具有GLP或GMP性質(zhì)，或者符合GLP(《藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》)或GMP(《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》，本發(fā)明包括這種酸。相似地，所述酸通常是無菌和/或適于藥物學(xué)應(yīng)用的，本發(fā)明的一方面涉及一種組合物，其是無菌或適于藥物學(xué)應(yīng)用的或者包括這二者，并且包含式(I)所示的肽硼酸。這種組合物可以是微粒形式或者是液體溶液或分散液形式。中間體酸可以是分離形式的，本發(fā)明包括這種分離的酸，特別是如式(VIII)所示肽硼酸的分離的酸X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)畫Mpg-B(OH)2(VIII)其中X是H(以形成NH2)或一個氨基保護(hù)基。提供中間體酸的一種典型方式是作為微粒組合物，該組合物主要由這種肽硼酸組成，本發(fā)明包括這些組合物。肽硼酸通常占該組合物重量的至少75%，典型為占該組合物重量的至少85%，例如占組合物重量的至少95%。提供中間體酸的另一種典型方式是作為一種液體組合物，該組合物由式(II)所示肽硼酸和肽硼酸溶解或懸浮于其中的一種液體載體組成或基本由式(II)所示肽硼酸和肽硼酸溶解或懸浮于其中的一種液體載體組成。所述液體載體可以是水性介質(zhì)，例如水，或醇如甲醇、乙醇、異丙醇或另一種丙醇，另一種烷醇或前述介質(zhì)的混合物。中間體酸的組合物通常是無菌的。該組合物可含有細(xì)碎粒形式的肽硼酸以便于進(jìn)一步加工。立體異構(gòu)體的分離肽硼酸酯或合成的中間體氨基硼酸酯的立體異構(gòu)體可以通過例如任何已知方式拆分。特別地，硼酸酯的立體異構(gòu)體可以通過HPLC拆分。實施例實施例l至3以及實施例33-緒言儀器在如下實施例1一3及實施例33的程序中，使用標(biāo)準(zhǔn)實驗室玻璃器具類，及操作和轉(zhuǎn)移空氣敏感性試劑的專業(yè)器具。所有玻璃器具在使用前均在140-16(TC加熱至少4小時，然后在干燥器中或通過集中熱量并用干氮?dú)饬鞔碉L(fēng)冷卻。溶劑-實施例1一3及實施例33中使用的有機(jī)溶劑均是無水的。適當(dāng)?shù)?，將它們在使用之前?jīng)過鈉線干燥。干燥在實施例1一3和實施例33的干燥程序中，通過觀測在干燥過程中重量的減少而測試產(chǎn)物的干燥程度(包括有機(jī)溶劑的干燥)。根據(jù)如下程序測定干燥過程中重量的減少將樣品置于真空干燥器中并在4(TC在100mbar干燥2小時。當(dāng)在干燥時重量的減少低于起始物總重的0.5%時，認(rèn)為產(chǎn)物是干燥的。實施例1一3描述了如下反應(yīng)方案的執(zhí)行及所得TRI50c轉(zhuǎn)變其鈉鹽的過程<formula>formulaseeoriginaldocumentpage62</formula>LDA-二異丙基酰胺鋰LiHMDS=六甲基二硅氮烷鋰，也稱為雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰實施例1-TRI50D的合成步驟1:Z-DIPINB程序A加入17.8g(732.5mmole)鎂鏇屑，0.1g(0.4mmole)碘和127ml無水四氫呋喃并加熱至回流。隨后加入15ml的66g(608mmole)l-氯-3-甲氧基丙烷于185ml無水四氫呋喃中的溶液并在回流下攪拌直至發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)。最初放熱停止后，緩慢加入l-氯-3-甲氧基丙烷溶液以保持溫和回流直至全部鎂被消耗。在反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，并緩慢加入64.4g(620mmole)三甲基硼酸鹽于95ml無水四氫呋喃中的溶液；將后一溶液冷卻至(TC以下，如果在反應(yīng)過程期間其升溫，則反應(yīng)混合物必須非常緩慢地加入以保持這個溶液的溫度低于65°C。在加入完成后，使反應(yīng)混合物升溫至大約(TC并再攪拌60分鐘。然后緩慢加入22.4ml硫酸于400ml水中的溶液，以保持溫度低于20°C。使該層沉下并分離各相。將水性層用200ml叔丁基甲醚再洗滌3次。使組合的有機(jī)層沉下并除去從這個溶液中分離出的額外的水。將有機(jī)層經(jīng)過硫酸鎂千燥并蒸發(fā)至干。蒸發(fā)殘渣從沉淀的固體中過濾并將濾物溶解于175ml甲苯中。將34.8g(292mmole)頻哪醇加入該溶液中，隨后在環(huán)境溫度攪拌不少于10小時。將該溶液蒸發(fā)至干，溶解于475ml正庚烷中并用290ml飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌3次。將正庚烷溶液蒸發(fā)至干并將蒸發(fā)殘渣蒸餾及在Bp40—5(TC在0.1—0.5mbar回收級分。沸點(diǎn)40—50。C/0.1—0.5mbar收率40.9g(70。/。)Z-DIPINB(油)程序B加入17.8g(732.5mmole)鎂鏇屑，0.1g(0.4mmole)碘和127ml無水四氫呋喃并加熱至回流。隨后加入15ml的66g(608mmole)l-氯-3-甲氧基丙垸于185ml無水四氫呋喃中的溶液并在回流下攪拌直至發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)。最初放熱停止后，緩慢加入l-氯-3-甲氧基丙烷溶液以保持溫和回流。在反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，并緩慢加入64.4g(620mmole)三甲基硼酸鹽于95ml無水四氫呋喃中的溶液，將這個溶液的溫度低于一65。C。在加入完成后，使反應(yīng)混合物升溫至大約0'C并再攪拌60分鐘。然后緩慢加入22.4ml硫酸于400ml水中的溶液，以保持溫度低于2(TC。有機(jī)溶劑通過在真空下蒸餾而除去。將300ml正庚烷加入蒸發(fā)殘渣的水溶液中，隨后加入34.8g(292mmole)頻哪醇。將兩相混合物在環(huán)境溫度攪拌不少于2小時。在使該層沉下后，分離水性相。將300ml正庚垸加入水性相并在環(huán)境溫度攪拌兩相混合物不少于2小時。在使該層沉下后，分離水性相。組合有機(jī)層并用200ml水洗滌一次，隨后用200ml飽和的碳酸氫鈉溶液洗滌一次，再用200ml水洗滌兩次。將正庚烷溶液蒸發(fā)至干并將蒸發(fā)殘渣蒸餾及在Bp40—5(TC在0.1—0.5mbar回收級分。沸點(diǎn)40—50。C/0.1—0.5mbar收率40.9g(70-85%)Z-DIPINB(油)步驟2:Z-DIPINC加入16.6g(164mmole)二異丙胺和220ml四氫呋喃并冷卻至-30至4(TC。向此溶液中加入41.8g(163mmole)正丁基鋰于正庚烷中25%的溶液，隨后在0至-5"C攪拌1小時。將這個新鮮制備的二異丙酰胺鋰溶液冷卻至一3(TC，然后在-60和-75""C之間加入27.9g(139mmole)Z-DIPINB于120ml四氫呋喃中的溶液及35.5g(418mmole)二氯甲烷。在該溫度攪拌溶液半小時，隨后加入于四氫呋喃中的480ml(240mmole)0.5N無水氯化鋅(II)或者32.5g(240mmole)無水固體氯化鋅(II)。在-65"C攪拌1小時后，使反應(yīng)混合物升溫至環(huán)境溫度，再攪拌16—18小時。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干(即直至除去溶劑)，隨后加入385ml正庚烷。反應(yīng)混合物用150ml5M硫酸、190ml飽和碳酸氫鈉溶液和180ml飽和氯化鈉溶液洗滌。有機(jī)層經(jīng)過硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)至干(即直至除去溶劑)。油性殘余物無需進(jìn)一步純化而進(jìn)行下一個步驟。收率19g(55%)Z-DIPINC步驟3:Z-DIPIND向23.8g(148mmole)六甲基二硅氮垸于400ml四氫呋喃的溶液中在-15°(:加入34.7g(136mmole)正丁基鋰于正庚垸中的25%溶液，并攪拌1小時。將該溶液冷卻至-55i:，隨后加入溶解于290ml四氫呋喃中的30.6g(123mmole)Z-DIPINC，并向這個新鮮制備的LiHMDS溶液中加入35ml四氫呋喃。使溶液升溫至環(huán)境溫度并攪拌12小時。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，蒸發(fā)殘渣溶解于174ml正庚烷中，用170ml水和75ml飽和的氯化鈉溶液洗漆。有機(jī)相經(jīng)過硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)至完全干(即直至除去溶劑)。將油性殘余物溶解于100g正庚烷中。這一溶液無需進(jìn)一步純化而進(jìn)行下一步驟.收率32.2g(70%)Z-DIPIND步驟4:Z-DIPIN(TRI50b,粗制)26.6g(71mmole)Z-DIPIND于82.6g正庚垸中的溶液用60ml正庚烷稀釋并冷卻至-6(TC，隨后導(dǎo)入10.5g(285mmole)氯化氫。反應(yīng)混合物隨后抽真空并用氮排出，同時以約2(TC的升幅將溫度升至環(huán)境溫度。從油狀沉淀中除去溶劑并用60ml新鮮正庚垸更換若干次。油狀殘余物溶于60ml四氫呋喃(溶液A)中。向另一燒瓶中加入130ml四氫呋喃，24.5g(61.5mmole)Z-D-Phe-Pro-OH和6.22g(61.5mmole)N-甲基嗎啉并冷卻至-2(TC。向此溶液中加入8.4g(61.5mmole)氯甲酸異丁酯于20ml四氫呋喃中的溶液并攪拌30分鐘，隨后在-25。C加入溶液A。在加入完畢時，加入至多16m1(115mmole)三乙胺以調(diào)節(jié)pH至9-10，pH值用pH試紙測定。仍在氮?dú)庀率狗磻?yīng)混合物升溫至環(huán)境溫度并攪拌3小時。蒸干溶劑并將蒸發(fā)殘余物溶解于340ml叔丁基甲醚(t-BME)中。Z-DIPIN于t-BME中的溶液用175ml1.5%鹽酸洗兩次。將合并的酸性洗滌液用175mlt-BME再洗l次。合并的有機(jī)層用175ml水、175ml飽和碳酸氫鈉溶液、175ml25%氯化鈉溶液洗滌，在硫酸鎂上干燥并過濾。這一溶液無需進(jìn)一步純化而進(jìn)行下一步驟。收率29.9g(80%)Z-DIPIN實施例2-TRI50D(TRI50C的二乙醇胺加成物)的合成這個實施例中使用的起始物是在實施例1中獲得的TRI501溶液(2-DIPIN)。該溶液無需進(jìn)一步純化而直接進(jìn)行TRI50d的合成。將于t-BME中的Z-DIPIN溶液(含有7.0g(11.5mmole)(R，S,R)TRI50b，基于Z-DIPIN的HPLC結(jié)果計算)蒸發(fā)至干，并將蒸發(fā)殘渣溶解于80ml二乙醚中。加入1.51g(14.4mmole)二乙醇胺并將混合物在回流加熱至少10小時，在此期間產(chǎn)物沉淀。將懸浮液冷卻至5—10'C，過濾用二乙醚洗滌的濾渣。為改良手性和化學(xué)純度，將濕的濾渣(7g)溶解于7ml二氯甲烷中，冷卻至0—5。C，通過加入42ml二乙醚沉淀產(chǎn)物并過濾。將分離的濕產(chǎn)物在35"C在真空干燥，或者至少4小時直至1天。收率5.5g(80。/。)Tri50d熔點(diǎn)140—145。C實施例3-TRI50C的鈉鹽的制備將在實施例2中獲得的1.5kg(2.5mole)TRI50d溶解于10.5L二氯甲垸中。加入11L2%鹽酸并將混合物在室溫攪拌至多30分鐘(任選大約20分鐘)。在有機(jī)相中形成沉淀。在攪拌后，使該層沉下并分離。將水性層用2.2L二氯甲烷再洗滌兩次。組合的有機(jī)層用625g氯化銨于2.25L水中的溶液洗滌。(氯化銨緩沖水性提取物的pH在大約pHl—2至大約pH4—5范圍內(nèi)，因為強(qiáng)酸性條件可以裂解肽鍵)。有機(jī)相經(jīng)過硫酸鎂干燥，過濾并將濾物蒸發(fā)至干。進(jìn)行游離硼酸分析(通過實施例28的RPHPLC方法在室溫至多進(jìn)行30分鐘(任選大約20分鐘))，計算將酸轉(zhuǎn)變?yōu)辂}所需的溶劑和堿的量。如果獲得2.5mol的游離酸，則將蒸發(fā)殘渣溶解于5L乙腈中，隨后加入IOOg(2.5mole)氫氧化鈉于2.2L水中的5%溶液。將溶液在環(huán)境溫度(例如15—3(TC，任選室溫)攪拌2小時，然后在不超過35"C的溫度在真空(ca.10mmHg)中蒸發(fā)。將蒸發(fā)殘渣再溶解于3.5L新鮮乙腈中并蒸發(fā)至干以除去微量的水。如果蒸發(fā)殘渣是干的，則將其溶解于3L乙腈(或者6LTHF)中，緩慢加入32L正庚垸和32L二乙醚的混合物中。足夠緩慢地進(jìn)行加入以避免產(chǎn)物結(jié)成塊狀或粘滯，加入時間不少于30分鐘。過濾出沉淀產(chǎn)物，用正庚烷洗滌并在真空干燥，溫度初始為大約1(TC，然后升高至大約35'C限度直至變干。收率1.0kg(70%)Tri50c鈉鹽。實施例1一3的程序可以按比例放大，如果謹(jǐn)慎操作可產(chǎn)生高純的鹽。在二乙醇胺沉淀步驟中，重要的是每當(dāng)量(R,S，R)TRI50b使用1.25當(dāng)量的二乙醇胺。在二乙醇胺酯的水解中，重要的是避免過長時間與水性酸接觸。同樣，TRI50b應(yīng)通過Z-DIPINA的Grignard反應(yīng)合成。實施例4-TRI50B至TRI50C的另一種轉(zhuǎn)變在這個及隨后的合成實施例中描述的合成程序通常是在商購的氮及使用干溶劑下進(jìn)行的。1.將通過外消旋的TRI50b的HPLC純化獲得的大約300g的TRI50b溶解于大約2.5L二乙醚中。估計不同批次的TRI50b的異構(gòu)體純度在85°/。R,S，R至超過95%R,S,R范圍內(nèi)。2.加入大約54ml二乙醇胺(與總TRI50b含量l:l化學(xué)計量)，并將混合物在40'C回流。3.除去沉淀產(chǎn)物，用二乙醚洗滌若干次并干燥。4.將干產(chǎn)物溶解于CHCl3中。加入鹽酸(pHl)并將混合物在室溫攪拌大約1小時。5.除去有機(jī)層并用NH4Cl溶液洗滌。6.蒸餾去有機(jī)溶劑并干燥殘余的固體產(chǎn)物。典型收率大約230g實施例5-TRI50C的鋰鹽的制備將通過實施例4的方法獲得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g,38.1mM)在室溫攪拌下溶解于乙腈(200ml)中。向這個溶液中加入LiOH于蒸餾水中(190ml)的0.2M溶液。將所得澄清溶液在室溫攪拌2小時，然后在真空下抽真空干燥，溫度不超過37'C。將所得油/粘液重新溶解于500ml蒸餾水中，必需用稍稍加溫大約20分鐘。將溶液經(jīng)濾紙過濾并蒸發(fā)至干，再一次溶液溫度不超過37。C。所得產(chǎn)物在真空干燥過夜至正常獲得一種白色易碎固體。然后將鹽在真空經(jīng)過硅石干燥至恒定重量(72小時)。收率17.89g.微量分析<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>實施例6-TRI50C的鋰鹽的UV/可見光譜記錄得自實施例5的程序的鹽在蒸餾水中在2(TC在190nm—400nm的UV/可見光譜。鹽給定人n^在210和258nm。然后測定干的鹽的重量以計算消光系數(shù)。使用258nm的^^。使用下式計算消光系數(shù)A=SC1其中A是吸光度C是濃度1是UV池的通徑長度S是消光系數(shù)。消光系數(shù)451實施例7-TRI50C的鋰鹽的水溶解度這個實施例中使用的鹽是使用實施例5所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之處在于100mg的TRI50c用作起始物，重新溶解于水中的產(chǎn)物通過凍干而干燥，及通過0.2jim濾膜進(jìn)行過濾。確信鹽含有大約85%的R,S，R異構(gòu)體。為確定最大的水溶解度，將25mg的干鹽在37'C在水中搖動，過濾樣品并測定UV光譜。該鹽剩余一種未溶解的白色殘余物。鋰鹽是比較可溶的，因此以先前所述同樣的方式重新溶解成50mg/ml。當(dāng)在25mg/ml溶解時溶解度為43mM(23mg/ml)，當(dāng)在50mg/ml溶解時溶解度為81mM(43mg/ml)。實施例8-TRI50C(TGN255)的鈉鹽的制備將通過實施例4的方法獲得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室溫攪拌下溶解于乙腈(200ml)中。向這個溶液中加入NaOH于蒸餾水(190ml)中的0.2M溶液。將所得澄清溶液在室溫攪拌2小時，然后抽真空下干燥，溫度不超過37'C。將所得油/粘液重新溶解于500ml蒸餾水中，并稍稍加溫大約15—20分鐘。用濾紙過濾溶液并蒸發(fā)至干，再一次溶液溫度不超過37"C。所得產(chǎn)物在真空下干燥過夜至正常收獲一種白色易碎固體。該產(chǎn)物由于剩余水的存在而呈油狀或粘液狀，在這種情況中將其溶解于乙酸乙酯中并蒸發(fā)至干以產(chǎn)生白色固體狀產(chǎn)物。然后將鹽在真空下經(jīng)過硅石干燥至恒定重量(72小時)。<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>實施例9-TRI50C的鈉鹽的UV/可見光譜記錄得自實施例8的程序的鈉鹽在蒸餾水中在2(TC在190nm—400nm的UV/可見光譜。鹽給定w^在210和258nm。然后測定干的鹽的重量以計算消光系數(shù)。使用258nm的、^使用下式計算消光系數(shù)A=scl其中A是吸光度C是濃度1是UV池的通徑長度s是消光系數(shù)。消光系數(shù)415實施例10-TRI50C的鈉鹽的水溶解度這個實施例中使用的鹽是使用實施例8所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之處在于100mg的TRI50c用作起始物，重新溶解于水中的產(chǎn)物通過凍干而干燥，及通過0.2nm濾膜進(jìn)行過濾。確信鹽含有大約85%的R,S,R異構(gòu)體。為確定最大的水溶解度，將25mg的干鹽在37'C在水中搖動，過濾樣品并測定UV光譜。該鹽剩余一種未溶解的白色殘余物。鈉鹽是比較可溶的，因此以先前所述同樣的方式重新溶解成50mg/ml。當(dāng)在25mg/ml溶解時溶解度為44mM(25mg/ml)，當(dāng)在50mg/ml溶解時溶解度為90mM(50mg/ml)實施例11-丁11150(:的鉀鹽的制備將通過實施例4的方法獲得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室溫攪拌下溶解于乙腈(200ml)中。向這個溶液中加入KOH于蒸餾水中的0.2M溶液(190ml)。將所得澄清溶液在室溫攪拌2小時，然后在真空下抽真空干燥，溫度不超過37。C。將所得油/粘液重新溶解于1L蒸餾水中，加溫至37X:大約2小時。用濾紙過濾溶液并蒸發(fā)至干，再一次溶液溫度不超過37'C。所得產(chǎn)物在真空下干燥過夜以正常收獲一種白色易碎固體。收率14.45mg.<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>實施例12-TRI50C的鉀鹽的UV/可見光譜記錄得自實施例ll的程序的鉀鹽在蒸餾水中在2(TC在190nm—400nm的UV/可見光譜。TRI50C和鹽給定X腿在210和258nm。然后測定干的鹽的重量以計算消光系數(shù)。使用258nm的Xmax。使用下式計算消光系數(shù)A=scl其中A是吸光度C是濃度1是UV池的通徑長度S是消光系數(shù)消光系數(shù)438.實施例13-TRI50C的鉀鹽的水溶解度這個實施例中使用的鹽是使用實施例11所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之處在于100mg的TRI50c用作起始物，重新溶解于水中的產(chǎn)物通過凍干而干燥，及通過0.2pm濾膜進(jìn)行過濾。確信鹽含有大約85%的R，S,R異構(gòu)體。為確定最大的水溶解度，將25mg的干鹽在37'C在水中搖動，過濾樣品并測定UV光譜。該鹽剩余一種未溶解的白色殘余物。當(dāng)在25mg/ml溶解時溶解度為29mM(16mg/ml)實施例14-TRI50C的鋅鹽的制備氫氧化鋅的相對溶解度是這樣的，如果該氫氧化物使用實施例5的程序用于制備相應(yīng)的TRI50c鹽，它們不能導(dǎo)致同質(zhì)的鹽形成。因此需要揭示一種新的方法以制備鋅鹽，如在這個及后文的實施例中所述。TRI50c鈉鹽(2.24g，4.10mM)在室溫溶解于蒸餾水(100ml)中，小心加入于THF中的氯化鋅(4.27ml，0.5M)并攪拌。濾出立即形成的白色沉淀并用蒸餾水洗滌。將這個固體溶解于乙酸乙酯中并用蒸餾水洗滌(2X50ml)。將有機(jī)溶液抽真空干燥并將產(chǎn)生的白色固體在干燥器中經(jīng)過硅石干燥3天，之后進(jìn)行微量分析。收率1.20g。'HNMR400MHz,SH(CD3OD)7.23-7.33(20H,m，ArH),5.14(4H,m，PhCH20)，4.52(4H,m，aCH)，3.65(2H,m)，3.31(12H,m),3.23(6H,s,OCH3),2.96(4H,d，J7.8Hz)，2.78(2H,m)，2.58(2H，m)，1.86(6H,m)，1.40(IOH，m)。13CNMR75固z5c(CD3OD)178.50，159.00,138.05，137.66，130.54，129.62,129.50,129.07,128.79,128.22，73.90,67.90,58.64，58.18,56.02,38.81，30.06，28.57,28.36，25.29。FTIR(KBrdisc)v薩(cm-1)3291.1,3062.7，3031.1,2932.9,2875.7，2346.0,1956.2，1711.8,1647.6，1536.0,1498.2,1452.1,1392,4,1343.1，1253.8,1116.8，1084.3,1027.7,916.0,887.6,748.6,699.4,595.5,506.5。實施例15-TRI50C的精氨酸鹽的制備將通過實施例4的方法獲得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室溫攪拌下溶解于乙腈(200ml)中。向這個溶液中加入精氨酸于蒸餾水(190ml)中的0.2M溶液。將所得澄清溶液在室溫攪拌2小時，然后在真空下抽真空干燥，溫度不超過37'C。將所得油/粘液重新溶解于2L蒸餾水中，加溫至37'C大約2小時。用濾紙過濾溶液并抽真空干燥，再一次溶液溫度不超過37'C。所得產(chǎn)物在真空下干燥過夜以正常收獲一種白色易碎固體。然后將所得鹽在真空下經(jīng)過硅石干燥至恒定重量(72小時)。收率10.54g.微量分析<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>實施例16-TRI50C的精氨酸鹽的UV/可見光譜記錄得自實施例15的程序的鹽在蒸餾水中在20。C在190nm—400nm的UV/可見光譜。TRI50C和鹽給定人max在210和258nm。然后測定干的鹽的重量以計算消光系數(shù)。使用258nm的^^。使用下式計算消光系數(shù)A=scl其中A是吸光度c是濃度1是UV池的通徑長度s是消光系數(shù)消光系數(shù):406.實施例17-TRI50C的精氨酸鹽的水溶解度這個實施例中使用的鹽是使用實施例15所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之處在于100mg的TRI50c用作起始物，重新溶解于水中的產(chǎn)物通過凍干而千燥，及通過0.2fmi濾膜進(jìn)行過濾。確信鹽含有大約85%的R，S,R異構(gòu)體。為確定最大的水溶解度，將25mg的干鹽在37'C在水中搖動，過濾樣品并測定UV光譜。該鹽剩余一種未溶解的白色殘余物。當(dāng)在25mg/ml溶解時溶解度為14mM(10mg/ml)。實施例18-TRI50C的賴氨酸鹽的制備將通過實施例4的方法獲得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室溫攪拌下溶解于乙腈(200ml)中。向'這個溶液中加入賴氨酸于蒸餾水(190ml)中的0.2M溶液。將所得澄清溶液在室溫攪拌2小時，然后在真空下抽真空干燥，溫度不超過37'C。將所得油/粘液重新溶解于3L蒸餾水中，加溫至37"C大約2小時。用濾紙過濾溶液并抽真空干燥，再一次溶液溫度不超過37"C。所得產(chǎn)物在真空下干燥過夜以正常收獲一種白色易碎固體。該產(chǎn)物可以是油狀或粘液狀(由于殘余的水所致)，在這種情況中將產(chǎn)物溶解于乙酸乙酯中并抽真空干燥以產(chǎn)生白色固體產(chǎn)物。然后將所得鹽在真空下經(jīng)過硅石干燥至恒定重量(72小時)收率17.89.微量分析:c%觀察值(計算值)H%觀察值(計算值)N%觀察值(計算值)B%觀察值(計算值)57.03(59.11)7.43(7.36)10.50(10.44)1.72(1.61)實施例19-TRI50C的賴氨酸鹽的UV/可見光譜記錄得自實施例18的程序的鹽在蒸餾水中在2(TC在190nm—400nm的UV/可見光譜。TRI50C和鹽給定人max在210和258nm。然后測定干的鹽的重量以計算消光系數(shù)。使用258nm的Xmax。使用下式計算消光系數(shù)A=ecl其中A是吸光度C是濃度1是UV池的通徑長度s是消光系數(shù)消光系數(shù):437.實施例20-TRI50C的賴氨酸鹽的水溶解度這個實施例中使用的鹽是使用實施例18所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之處在于100mg的TRI50c用作起始物，重新溶解于水中的產(chǎn)物通過凍干而干燥，及通過0.2)am濾膜進(jìn)行過濾。確信鹽含有大約85%的R,S,R異構(gòu)體。為確定最大的水溶解度，將25mg的干鹽在37'C在水中搖動，過濾樣品并測定UV光譜。該鹽剩余一種未溶解的白色殘余物。當(dāng)在25mg/ml溶解時溶解度為13mM(8.6mg/ml)。實施例21-TRI50C的N-甲基-D-葡糖胺鹽的制備將通過實施例4的方法獲得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室溫攪拌下溶解于乙腈(200ml)中。向此溶液中加入N-甲基-D-葡糖胺于蒸餾水(190ml)中的0.2M溶液。將所得澄清溶液在室溫攪拌2小時，然后在真空下抽真空干燥，溫度不超過37t:。將所得油/粘液重新溶解于500ml蒸餾水中，并稍稍加溫大約20分鐘。用濾紙過濾溶液并蒸發(fā)至干，再一次溶液溫度不超過37'C，或凍干。所得產(chǎn)物在真空下干燥過夜以正常收獲一種白色易碎固體。然后將所得鹽在真空下經(jīng)過硅石干燥至恒定重量(72小時).收率21.31g.微量分析<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>實施例22-OFTRI50C的N-甲基-D-葡糖胺鹽的UV/可見光譜記錄得自實施例21的程序的鹽在蒸餾水中在20。C在l卯nm—400nm的UV/可見光譜。TRI50C和鹽給定w^在210和258nm。然后測定干的鹽的重量以計算消光系數(shù)。使用258nm的^^。使用下式計算消光系數(shù)A=scl其中A是吸光度C是濃度1是UV池的通徑長度s是消光系數(shù)消光系數(shù):433.實施例23-TRI50C的N-甲基-D-葡糖胺鹽的水溶解度這個實施例中使用的鹽是使用實施例21所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之處在于100mg的TRI50c用作起始物，重新溶解于水中的產(chǎn)物通過凍干而干燥，及通過0.2pm濾膜進(jìn)行過濾。確信鹽含有大約85%的R，S，R異構(gòu)體。為確定最大的水溶解度，將25mg的干鹽在37"C在水中搖動，過濾樣品并測定UV光譜。觀測到該鹽是充分溶解的。該鹽比較可溶并因此以前述同樣的方式重新溶解成50mg/ml。當(dāng)在25mg/ml溶解時溶解度為35mM(25mg/ml)當(dāng)在50mg/ml溶解時溶解度為70mM(50mg/ml)實施例24-TRI50C的精氨酸鹽的另一種制備精氨酸鹽是通過將略過量摩爾的L-精氨酸加入0.2—0.3mmol的TRI50c于10ml乙酸乙酯的溶液中而簡便制備的。l小時后將溶劑蒸發(fā)，殘余物用己烷研磨兩次以除去過量的精氨酸。實施例25-TRI50C的溶解度如上關(guān)于鹽所述獲得得自實施例5的程序的TRI50c的UV/可見光譜及其溶解度。當(dāng)在50mg/ml溶解時TRI50c的溶解度為8mM(4mg/ml)。13C畫R75MHz5C(CD3C(0)CD3)206.56,138.30,130.76,129.64，129.31，129.19,129.09,128.20,128.04，74.23,73.55,67.78,58.76,56.37,56.03,48.38,47.87,39.00，25.42,25.29。FTIR(KBrdisc)vmax(cm-1)3331.3，3031.4,2935.3,2876.9，2341.9,1956.1,1711.6,1639.9，1534.3,1498.1,1453.0，1255.3,1115.3，1084.6,1027.6,917.3,748.9，699.6,594.9,504.5,467.8。實施例26-(R,S,R)TRI50C的鈉鹽和鋅鹽的分析以下的鹽使用n:l的硼酸根:金屬化學(xué)計量制備，其中n是金屬的化合價，使用比實施例10中用于制備鹽更高的手性純度的(R，S,R)TRI50c。A.鈉鹽分析數(shù)據(jù)物理性質(zhì)HPLC或LC/MS:HPLCbetabasicC18形狀非晶質(zhì)固體Column,CH3CN,水顏色白色估計純度>95%，通過UV(、isnm)測定熔點(diǎn)N/A微量分析計算的.發(fā)現(xiàn)的.溶解度在水性介質(zhì)中可溶C:59.2459.93ca50mg/mlH:6.446.47N:7,677.31Mw:547.40其它:B:1.981.91Na:4.203.81B.鋅鹽分析數(shù)據(jù)物理性質(zhì)HPLC或LC/MS:HPLCbetabasicC18形狀非晶質(zhì)固體Column,CH3CN,zK顏色白色估計純度〉95%，通過UV(^,5,)測定熔點(diǎn)N/A微量分析計算的.發(fā)現(xiàn)的.溶解度:在水性介質(zhì)中可溶C:58.2156.20ca2mg/mlH:6.336.33N:7.547.18Mw:1114.18其它:B:1.941.84Zn:5.877.26ES:在微量分析中使用三角形化學(xué)式的酸硼酸鹽。確信在實施例ii中報道的鈉鹽溶解度較低，因為在實施例ii中測試的鹽具有較低的手性純度。結(jié)論鈉鹽和鋅鹽均已經(jīng)分別用一個金屬離子對一個TRI50c分子及一個金屬離子對兩個TRI50c分子制備。針對鈉鹽發(fā)現(xiàn)的值接近于并因此與計算的l:l化學(xué)計量一致。就鋅鹽而言，發(fā)現(xiàn)過量的鋅；但是鋅鹽包含有效比例的酸硼酸鹽。實施例27-穩(wěn)定性在干燥之前和之后分析TRI50c及其鈉鹽和賴氨酸鹽。方法稱重TRI50c及其Na、Ca和Lys鹽并置于HPLC瓶中，在干燥器中貯存經(jīng)過五氧化二磷干燥l周。為進(jìn)行樣品分析，稱重5mg的干和非干的物質(zhì)置于5mL量瓶中，并溶解于1mL乙腈中及用水填至5mL。通過HPLC研究化合物。針對雜質(zhì)分布圖，計算HPLC峰面積百分比。結(jié)果示于表l。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>酸的純度通過干燥過程而降低，但對鹽的純度影響不大；鈉鹽的純度沒有顯著降低。然而應(yīng)答因子中的明顯不同將降低真實的雜質(zhì)水平。這個實施例表明本發(fā)明的鹽、尤其金屬鹽例如堿金屬鹽，比酸式鹽特別是TRI50c更穩(wěn)定。實施例28-穩(wěn)定性這個實施例對比了當(dāng)充填入腸衣硬明膠膠囊中時TRI50c與TRI50c賴氨酸鹽的穩(wěn)定性。表格化結(jié)果化合物包裝1.5月的氣候條件W純度(HPLC%面積)TO純度(HPLC%面TlTRI50c起泡膠囊25°C/60%r.h.49973.9TRI50c起泡膠囊40。C/75%r.h9973.9TRI50c膠囊140°C〃5%r.h9975.3<table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>注意0)在給定條件下貯存1.5月，然后將樣品在室溫貯存直至進(jìn)行分析試驗。1)在各自的氣候條件下不用起泡貯存膠囊。2)在貯存之前批次的純度3)貯存批次的純度(將膠囊內(nèi)容物倒出，然后進(jìn)行分析)。4)r.h.=相對濕度結(jié)論在T0和T1賴氨酸鹽的純度無顯著差異。2.分析程序2.1樣品制備2丄1TRI50c及鹽的分析將TRI50o標(biāo)準(zhǔn)物(游離酸)貯存于干燥器中經(jīng)過五氧化二磷干燥2天。然后稱重參考標(biāo)準(zhǔn)物，置于量瓶中并溶解于乙腈和水的混合物中(25/75v/v%)。將所得溶液等份(ST1A)如表4所示稀釋方案用水相繼稀釋。<table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>2丄2貯存的膠囊的雜質(zhì)分布圖取出在相應(yīng)的氣候條件下貯存的每個批次的膠囊，并稱重10mg內(nèi)容物置于IOml量瓶中，溶解于IOml的乙腈/水混合物(25/75v/v。/。)中。注入這些溶液分別進(jìn)行雜質(zhì)分布圖分析并量化。3.數(shù)據(jù)評價使用HPLC-PDA方法進(jìn)行定量評價和雜質(zhì)分布圖分析。處理波長設(shè)定為258nm。4.分析參數(shù)4.1設(shè)備和軟件自動取樣器WatersAlliance2795泵WatersAlliance2795柱式加熱爐WatersAlliance2795檢領(lǐng)ijWaters996diodearray,extractedwavelength258nm軟件版本W(wǎng)atersMillenniumRelease4.04.2固定相分析柱IDS71材料X-TerraMSC18,5供應(yīng)商Waters,Eschborn,Germany尺度150mmx2.1mm(長度，內(nèi)徑)4.3流動相水相A:于水中0.1%HCOOH有機(jī)相C:ACN梯度條件<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>實施例29-TRI50B對血小板促凝血活性的抑制當(dāng)加入用凝血酶預(yù)處理的血小板時，由單獨(dú)的凝血酶、單獨(dú)的膠原或凝血酶與膠原的混合物所引起的，在存在因子Va的情況中，可觀測到血小板促凝血活性隨因子Xa對凝血酶原的激活速度而增加。這種性質(zhì)是由于血小板表面上陰離子磷脂的增加及伴隨的微泡從表面釋放所致。這是一個基本的生理學(xué)反應(yīng)，其血小板產(chǎn)生促凝血活性能力下降的人(Scott綜合征)示出出血傾向加重。方法洗滌的血小板用1.15nM凝血酶，23嗎/ml膠原或者兩種物質(zhì)的混合物在相同濃度在37'C處理。在加入激活物前l(fā)分鐘或在與激活物溫育后立即加入TRI50b。如前述確定血小板促凝血活性(GoodwinCAetal，BiochemJ.19958,308:15-21)。TRI50b被證實是血小板促凝血活性的強(qiáng)力抑制劑，其IC5o如下所概括。表2:TRI50b對由多種激動劑誘導(dǎo)的血小板促凝血活性的影響表2激動劑無TRI50b的提IC50加上預(yù)溫IC50不用溫育高倍數(shù)育(nM)(nM)凝血酶3083000膠原45200300凝血酶/膠原110380表2示出例如當(dāng)血小板用凝血酶處理時，其與對照血小板相比導(dǎo)致激活凝血酶原的速度提高30倍。用TRJ50在給定的多種濃度水平進(jìn)行處理使這種加速度降低一半。通過IC5(,值在納摩爾范圍內(nèi)的事實表明了TRI50的顯著效力。TRI50b對ADP、膠原或腎上腺素誘導(dǎo)的洗滌的血小板聚集無作用。實施例30-兔體外分流模型(extracorporealshuntmodel)緒言這個技術(shù)描述了一種動物模型，其中產(chǎn)生了血小板富集的血栓。對比了TRI50b與肝素的活性。使用麻醉的兔的頸動脈和頸靜脈產(chǎn)生含有懸浮的外源表面(絲線)的體外循環(huán)。通過高剪切應(yīng)力湍流的動脈血流的產(chǎn)生、血小板激活、隨后在存在血栓形成傾向(thrombogenic)表面的情況下凝聚而引發(fā)血栓沉積。組織病理學(xué)研究示出該血栓是血小板富集的。材料和方法動物使用NZW兔(雄性2.5—3.5kg)。允許動物攝取食物和水直至進(jìn)行麻醉。麻醉通過肌內(nèi)注射術(shù)前給予動物術(shù)前用藥共0.15ml的fontanel/氟阿尼酮(fluanisone)(Hypnorm)。用甲己酮(10mg/ml)誘導(dǎo)全身麻醉，隨后進(jìn)行氣管插管。用氧/一氧化二氮中攜帶的異氟垸(isoflumne)(1—2.0%)保持麻醉。將動物屈膝背臥放置，并對頸腹部備皮準(zhǔn)備手術(shù)。暴露左頸動脈和右頸靜脈。將大Portex⑧導(dǎo)管(黃色規(guī)格)插入動脈，切至合適長度。將Silastic⑧導(dǎo)管插入靜脈。吻合處包含5cm長的"自動分析儀"線(紫色/白色規(guī)格)。用中等大小的Silastic管形材料在動脈側(cè)連接吻合處。該吻合處在暴露于循環(huán)之前用鹽水充填。在右側(cè)股動脈插管以測定血壓。絲線制備及插入吻合中央處含有一條長度為3cm的絲線。這條絲線由000規(guī)格Gutterman縫合線組成，在末端打一個外科結(jié)(打結(jié)處在吻合處之外)。血流血流速度使用Doppler探針(CrystalBiotech)確定。將硅膠探針在靠近插入動脈導(dǎo)管處置于頸動脈上。使用熱敏紙將血流記錄在圖表記錄器上。結(jié)果表3<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>討論表3示出在動脈高剪切應(yīng)力條件下，靜脈內(nèi)給予3mg/kg—10mg/kg劑量的TRI50b顯著抑制血栓形成而不出血，而肝素在治療靜脈血栓形成的正常臨床劑量范圍內(nèi)(靜脈內(nèi)給予100u/kg肝素汰效。較高劑量的肝素盡管可以有作用，但導(dǎo)致嚴(yán)重出血。這些示出TRI50b有效抑制動脈血栓形成而不出血的結(jié)果與TRI50b抑制血小板促凝血活性一致。相反，凝血酶抑制劑肝素當(dāng)在大約等效劑量(即抑制動脈血栓形成)給予時，產(chǎn)生嚴(yán)重的出血，而這種出血在使用凝血酶抑制劑治療動脈血栓形成時是正常的。實施例31-出血時間對比這項研究的目的是在合適的模型中對比肝素與TRI50b處理的出血時間。一般公認(rèn)肝素是一種不太好的血小板促凝血活性的抑制劑(J.Biol.Chem.1978Oct10;253(19):6908-16;MiletichJP,JacksonCM，MajerusPWl:J.Clin.Invest.1983May;71(5):1383-91)。出血時間是在經(jīng)靜脈內(nèi)給予肝素和TRI50b之后在大鼠尾部出血模型中確定的。基于其在大鼠Wessler和動力學(xué)模型中的效力而選擇應(yīng)用劑量，選擇的劑量如下TRI50b:5禾口10mg/kg肝素100單位/kg材料和方法麻醉將大鼠用60mg/kg的戊巴比妥鈉(ip.注射30mg/ml溶液，2.0ml/kg)麻醉。如果需要ip.給予追加麻醉。手術(shù)準(zhǔn)備頸靜脈插管給予測試化合物。另外用合適的插管進(jìn)行氣管插管使動物自然呼吸"室內(nèi)空氣"?；衔锝o予這些化合物以l.Oml/kg劑量在合適的載體中經(jīng)靜脈內(nèi)給予。肝素在鹽水內(nèi)給予，而TRI50b溶解于乙醇中，然后將所得溶液加入水進(jìn)行注射(1份乙醇對5份水)。技術(shù)在給予化合物后2分鐘，用新的解剖刀切下2mm動物尾部末梢并將該尾部浸入標(biāo)準(zhǔn)"通用"容器中的溫鹽水(37'C)中，以便清晰觀測血流。在橫切后立即開始記錄出血時間直至尾部末端血流停止。在尾部血流停止后再觀察30秒，以確保不再發(fā)生出血，如果出血再次開始，記錄時間持續(xù)記載直至最多45分鐘。結(jié)果表4給出了出血結(jié)果概要并示出了在基線值之上的增加。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage87</column></row><table>*在所有動物中均嚴(yán)重出血，在40分鐘后不停止。tSEM-平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差討論結(jié)果示出TRI50b在所有劑量均優(yōu)于肝素(產(chǎn)生較少的出血)。應(yīng)注意當(dāng)100u/kg肝素與5mg/kgTRI50b相比時，肝素處理的動物與接受TRI50b的動物相比更廣泛出血；先前確定了(實施例25)肝素在100u/kg的劑量與3.0mg/kg劑量的TRl50b相比，抑制動脈血栓形成的效力較差。肝素最初是一種凝血酶抑制劑，而對血小板促凝血活性的抑制較差；這個結(jié)果因此與TRI50b除了凝血酶抑制活性之外通過抑制血小板凝血活性而發(fā)揮抗凝活性的結(jié)果一致。實施例32-TRI50C的前體藥物TRI50B:藥物代謝動力學(xué)和吸收材料和方法動物使用體重為大約250-300g的大鼠。動物只在用于iv.階段的當(dāng)天禁食。動物在進(jìn)行口服和十二指腸內(nèi)給藥的研究的前一夜禁食，水允許給至直至麻醉時。組口期<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>制劑(TRI50b/TRI50c)如下制備制劑將48mg/ml的TRI50b溶解于乙醇:PEG300(2:3vol:vol)中。就在給藥之前，將5體積的這個溶液與3體積的5%科利當(dāng)(kollidon)178F混和。l)將兩種化合物均以20mg/kg劑量通過口腔管飼或者直接注入十二指腸?；衔镌赑EG/乙醇/科利當(dāng)制劑中給予，該制劑在立即使用之前制備，如在標(biāo)題為"給藥"的段落中所述原液15.0mg/ml。這種給藥劑量是1.33ml/kg(等于30mg/kg)。方法給予大鼠20mg/kg。在給予大約30分鐘后，大鼠被麻醉。十二指腸內(nèi)給予在完成麻醉和手術(shù)程序后，將化合物直接滴注入十二指腸中。取血樣口期在麻醉和手術(shù)后從頸動脈插管取血樣(0.81ml)到(0.09ml)的3.80/0w/v檸檬酸三鈉中。第一次取樣是在給藥l小時后。然后在給藥后1.5、2、4小時取血樣。十二指腸內(nèi)期取血樣在給藥前、給藥后0.25、0.5、0.75、1.0、2、3及4小時。血漿通過離心(3000RPM，10分鐘)獲得并在-2(TC貯存直至進(jìn)行分析。體藥物代謝動力學(xué)分析圖l:在給予TRI50b或其游離酸(TRI50c)后的口期清除率和動力學(xué)。圖2:在經(jīng)十二指腸內(nèi)給予TRI50b或其游離酸(TRI50c)后的口期清除率和動力學(xué)。結(jié)論當(dāng)通過十二指腸內(nèi)途徑給予時，TRI50b達(dá)到比游離酸高的生物利用度(血漿峰濃度)。這個數(shù)據(jù)與在血漿中迅速水解為TRI50c的TRI50b及與是有效成分的TRI50c—致。實施例29—32的結(jié)果表明以鹽的形式給予TRI50c提供了一種治療動脈血栓形成和/或靜脈血栓形成的方式。實施例34-人體臨床研究在使用至多2.5mg/kgiv.劑量(顯著延長凝血酶凝固時間的劑量)的人休臨床志愿者研究中，TRI50b對Simplate出血時間(即使用Simplate出血時間設(shè)備測定的出血時間)無作用。從前述內(nèi)容意識到本發(fā)明提供了用作藥物的硼酸鹽，其特點(diǎn)是如下一或多種性質(zhì)(l)改良的口服生物利用度的量；(2)改良的口服生物利用度一致性；(3)改良的穩(wěn)定性；(4)無論如何在現(xiàn)有技術(shù)中未提及。藥物組合物的活性成分的選擇是一項復(fù)雜的工作，其不僅需要考慮生物學(xué)性質(zhì)(包括生物利用度)，還要考慮適于加工、配制和貯存的物理化學(xué)性質(zhì)。生物利用度自身依賴于多種因素，通常包括體內(nèi)穩(wěn)定性、溶劑化性質(zhì)及吸收性質(zhì)，每項因素反過來又潛在地依賴于多種物理、化學(xué)和/或生物學(xué)行為。有利地，至少優(yōu)選的本發(fā)明產(chǎn)物有足夠的吸收和生物利用度。就商業(yè)用途而言，可以根據(jù)優(yōu)良的性質(zhì)整體組合而選擇溶解度略低的產(chǎn)物。本發(fā)明包括如下各項的主題1.一種如化學(xué)式(I)所示的藥物可接受的硼酸的堿加成鹽-射<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>Y包含一種疏水性成分，與氨基硼酸殘基-NHCH(R,-B(OH)2—起對凝血酶的底物結(jié)合位點(diǎn)有親和性；及W是被一或多個醚鍵中斷的一個直鏈烷基基團(tuán)，其中氧和碳原子的總數(shù)是3,4，5或6，或者R9是《CH2)mW，其中m是2，3，4或5及W是-OH或鹵素(F，Cl,Br或I)。2.第1項中的鹽，其中RS是一個烷氧基烷基基團(tuán)。3.第1或第2項中的鹽，其中YCO-包含與凝血酶的S2亞位點(diǎn)結(jié)合的一個氨基酸，該氨基酸在N末端與結(jié)合凝血酶的S3亞位點(diǎn)的一個基團(tuán)連接。4.第1或第2項中的鹽，其中Y是一個任選N末端保護(hù)的二肽，其結(jié)合凝血酶的S3和S2結(jié)合位點(diǎn)，酸中的肽鍵是任選及獨(dú)立地由任選含有鏈內(nèi)或環(huán)內(nèi)氮、氧或硫的C,-C,3烴基在N末端取代，及任選由選自卣素、羥基和三氟甲基的一個取代基取代。5.第4項中的鹽，其中所述二肽是N末端保護(hù)的。6.第4或第5項中的鹽，其中酸中的所有肽鍵均是未被取代的。7.第1一6項中任一項的鹽，其中S3結(jié)合氨基酸殘基是R構(gòu)型，S2結(jié)合殘基是S構(gòu)型，片段-NHCH(R"-B(OH)是R構(gòu)型。8.第1一7項中任一項的鹽，其中所述硼酸對凝血酶的Ki為大約100nM或更低。9.第8項中的鹽，其中所述硼酸對凝血酶的Ki為大約20nM或更低。10.—種如化學(xué)式(II)所示的藥物可接受的硼酸堿加成鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>其中X是H(以形成NH2)或者一個氨基保護(hù)基；a^是具有烴基側(cè)鏈的一個氨基酸，該側(cè)鏈含有不超過20個碳原子并包含至少一個具有最多13個碳原子的環(huán)狀基團(tuán)；aa"是有4一6個環(huán)成員的一個亞氨基酸；R'是如化學(xué)式《CH2)s-Z所示的一個基團(tuán)，其中s是2，3或4，Z是-OH，~OMe，一OEt或鹵素(F,Cl，Br或I)。11.第10項中的鹽，其中a^選自Phe,Dpa及其完全或部分氫化的類似物。12.第10項中的鹽，其中aa選自Dpa,Phe，Dcha和Cha。13.第10—12項中任一項的鹽，其中aa'是R-構(gòu)型。14.第10項中的鹽，其中aa"是(R)-Phe或(R)-Dpa。15.第10項中的鹽，其中aa"是(R)-Phe。16.第10—15項中任一項的鹽，其中aa2是如化學(xué)式(1V)所示亞氨基酸的一個殘基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula>其中R"是-CH2-,-CH2-CH2-，-S-CH2-，-S-C(CH3)2-或—CH2-CH2-CH2-，當(dāng)該環(huán)是5或6個成員時，這個基團(tuán)任選在一或多個-CH2-基團(tuán)由l一3個c,-cv烷基基團(tuán)取代。17.第16項中的鹽，其中a^是S-構(gòu)型。18.第16項中的鹽，其中a^是(S)-脯氨酸殘基。19.第10項的鹽，其中aa、a2是(R)-Phe-(S)-Pro。20.第10—19項中任一項的鹽，其中片段-NH-CH(R')-B(OH)2是R構(gòu)型。21.第10—20項中任一項的鹽，其中R'是2-溴乙基、2-氯乙基、2-甲氧乙基、3-甲氧丙基、3-溴丙基、3-氯丙基或3-甲氧丙基。22.第10—20項中任一項的鹽，其中R'是3-甲氧丙基。23.第io項中的鹽，其是如化學(xué)式(vm)所示的一種化合物的鹽X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg誦B(OH)2(VIII).24.第10—23項中任一項的鹽，其中X是R6-(CH2)p-C(0)-、r6-(CH2)p-S(0)2-、r6-(CH2)p國NH-C(0)-或r6-(CH2)p-0-C(0)國，其中p是0，1，2，3，4，5或6，W是H或5—13個成員的環(huán)基團(tuán)，任選由選自鹵素、氨基、硝基、羥基、C5-C6環(huán)狀基團(tuán)、CrC4垸基及含有和/或通過鏈內(nèi)0與環(huán)狀基團(tuán)連接的C,-Q烷基的1、2或3個取代基取代，前述烷基基團(tuán)任選由選自鹵素、氨基、硝基、羥基和C5-C6環(huán)狀基團(tuán)的一個取代基取代。25.第24項中的鹽，其中所述5—13個成員的環(huán)狀基團(tuán)是芳香族或雜芳族的。26.第25項中的鹽，其中所述5—13個成員的環(huán)狀基團(tuán)是苯基或一個6個成員的雜芳香族基團(tuán)。27.第24—26項中任一項的鹽，其中X是R6-(CH2)P-C(0)-或R6-(CH2)p-0-C(0)-，p是0或l。28.第10—22項中任一項的鹽，其中X是芐氧基羰基。29.第1一28項中任一項的鹽，其不包含膽堿或銨鹽。30.第1—29項中任一項的鹽，其包含衍生自硼酸的硼酸根離子和單價平衡離子。31.第1一29項中任一項的鹽，其是肽硼酸與一種堿金屬或強(qiáng)堿性有機(jī)含氮化合物的鹽。32.第21項的鹽，其中所述強(qiáng)堿性有機(jī)氮化合物的pKb為大約7或更多，例如大約7.5或更多。33.第31或32項的鹽，其中所述強(qiáng)堿性有機(jī)含氮化合物是胍、胍類似物或胺。34.第1一33項中任一項的鹽，其是硼酸與金屬的鹽。35.第1一28項中任一項的鹽，其是硼酸與一種堿金屬、氨基糖、胍或式(XI)所示胺的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage93</formula>其中n是l一6，f是H、羧酸酯或衍生的羧酸酯，W是H、C,-C4垸基或者天然或非天然的氮基酸殘基。36.第1一28項中任一項的鹽，其是硼酸與胍或與式(IX)所示胺的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>其中n是l一6，W是H、羧酸酯或衍生的羧酸酯，W是H、Q-C4烷基或者天然或非天然的氨基酸殘基。37.第36項中的鹽，其是硼酸的胍鹽。38.第37項中的鹽，其是硼酸與L-精氨酸或L-精氨酸類似物的鹽。39.第38項中的鹽，其中L-精氨酸類似物是D-精氨酸，或者高精氨酸的D-或L-異構(gòu)體，胍基丁胺[(4-氨基丁基)胍]，NG-硝基-L-精氨酸甲基酯，或者2-氨基噴啶。40.第37項中的鹽，其是硼酸與式(VII)所示胍的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>其中n是l一6，f是H、羧酸酯或衍生的羧酸酯，W是H、C廣C,烷基或者天然或非天然氨基酸的殘基。41.第40項的鹽，其中衍生的羧酸酯形成d-C4垸基酯或酰胺。42.第40項或41項中的鹽，其中式(VII)所示化合物是L-構(gòu)型。43.第37項中的鹽，其是肽硼酸的L-精氨酸鹽。44.第36項中的鹽，其是硼酸與式(IX)所示胺的鹽。45.第41項中的鹽，其中衍生的羧酸酯形成d-CV烷基酯或酰胺。46.第44或45項中的鹽，其中式(IX)所示胺是L-構(gòu)型。47.第44項中的鹽，其是硼酸的L-賴氮酸鹽。48.第1一28項的任一項的鹽，其是一種鉀鹽。49.第1一28項中任一項的鹽，其是一種鈉鹽。50.第l一28項中任一項的鹽i其是一種鋰鹽。51.第1一28項中任一項的鹽，其是一種氨基糖鹽。52.第51項中的鹽，其中所述氨基糖是開放環(huán)的糖。53.第52項中的鹽，其中所述氨基糖是葡糖胺。54.第51項中的鹽，其中所述氨基糖是一種環(huán)形氨基糖。55.第51—54項中的鹽，其中所述氨基糖是N末端未取代的。56.第51—54項中任一項的鹽，其中所述氨基糖是由一或兩個取代基在N末端取代的。57.第56項中的鹽，其中所述取代基或每個取代基均是一個烴基基團(tuán)。58.第57項中的鹽，其中所述取代基或每個取代基均是選自C,，C2,C3，C4，C5，C6,C7和Cs烷基基團(tuán)的一個基團(tuán)。59.第56—58項中任一項的鹽，其中有一個單一N末端取代。60.第51項中的鹽，其中所述葡糖胺是N-甲基-D-葡糖胺。61.第1一60項中任一項的鹽，其包含衍生自肽硼酸的硼酸根離子，并具有與攜帶單一負(fù)電荷的硼酸根離子一致的化學(xué)計量。62.第1一60項中任一項的鹽，其中所述鹽基本由酸式鹽組成，其中硼酸根基團(tuán)的一個B-OH基團(tuán)當(dāng)以三角形表示時保持質(zhì)子化。63.第1一62項中任一項的鹽，其中所述鹽包含衍生自肽硼酸的一個硼酸根離子及一個平衡離子，其中所述鹽基本由具有單一類型的平衡離子的鹽組成。64.第1一28項中任一項的鹽，其是一種單鋰鹽或單鈉鹽。65.第23項中的鹽，其是一種單鋰鹽或單鈉鹽。66.—種固相的Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(0H)2單鈉鹽或單鋰鹽，其含有重量不超過1%的水。67.第66項中的鹽，其含有重量不超過0.5%的水。68.第66項中的鹽，其含有重量不超過0.1%的水。69.第66—68項中任一項的鹽，其是單鈉鹽。70.第1一65項中任一項的鹽，其是固相的。71.第70項中的鹽，其是基本干燥的。72.—種用作藥物的產(chǎn)物，其包含第1一71項中任一項的鹽。73.—種口服劑型的藥物制劑，其包含第1一71項中任一項的鹽及一種藥物可接受的稀釋劑、賦形劑或載體。74.第73項中的制劑，其是一種固體制劑。75.第74項中的藥物制劑，其適于在十二指腸中釋放所述鹽。76.第75項中的藥物制劑，其是腸衣制劑。77.第1一71項中任一項的鹽在生產(chǎn)治療血栓形成的藥物中的應(yīng)用。78.第77項中的應(yīng)用，其中所述疾病是一種急性冠狀動脈綜合征。79.第77項中的應(yīng)用，其中所述疾病是急性心肌梗塞。80.第77項中的應(yīng)用，其中所述疾病是靜脈血栓栓塞，選自深部靜脈血栓形成和肺栓塞。81.第1一71項中任一項的鹽在生產(chǎn)口服藥物中的應(yīng)用，所述口服藥物用以預(yù)防患者血液透析通路中的血栓形成、預(yù)防晚期腎病患者中的心血管疾病、預(yù)防通過留置導(dǎo)管接受化療的患者中靜脈血栓栓塞、或預(yù)防經(jīng)過下肢動脈重建手術(shù)的患者中的血栓栓塞。82.第1一71項中任一項的鹽在生產(chǎn)用以治療或預(yù)防動脈疾病的口服藥物中的應(yīng)用，所述動脈疾病選自急性冠狀動脈綜合征、腦血管血栓形成、周圍動脈閉塞及得自心房纖顫、心臟瓣膜疾病、動靜脈支路、留置導(dǎo)管或冠狀動脈狹窄的動脈血栓形成。83.—種口服藥物制劑，其包含(i)第l一71項中任一項的鹽，及(ii)一種藥物活性劑的組合。84.—種口服藥物制劑，其包含(i)第l一71項中任一項的鹽，及(ii)另一種心血管治療劑的組合。85.第84項中的制劑，其中另一種心血管治療劑包括降脂藥物、貝特類藥、煙酸、抑制素、CETP抑制劑、膽酸螯合劑、抗氧化劑、1Ib/IIIa拮抗劑、醛甾酮抑制劑、A2拮抗劑、A3激動劑、p-阻斷劑、乙酰水楊酸、袢利尿劑、ace抑制劑、具有不同作用機(jī)制的抗血栓形成劑、抗血小板制劑、血栓烷受體和/或合成酶抑制劑、纖維蛋白原受體拮抗劑、前列環(huán)素模擬物、磷酸二酯酶抑制劑、ADP受體(P2T)拮抗劑、溶血栓制劑、保心劑或COX-2抑制劑。86.第83—85項中任一項的制劑，其是基本干燥的。87.第1一71項中任一項的鹽在生產(chǎn)一種藥物中的應(yīng)用，例如共同給予所述藥物及另一種心血管治療劑以預(yù)防心血管疾病。88.—種口服藥物，其包含一種硼酸鹽，所述硼酸是一種選擇性凝血酶抑制劑并且具有一中性氨基硼酸殘基以及經(jīng)一肽鍵與該中性氨基硼酸殘基相連接的疏水性基團(tuán)，所述中性氨基硼酸殘基能結(jié)合凝血酶Sl亞位點(diǎn)，所述疏水性基團(tuán)能結(jié)合凝血酶S2和S3亞位點(diǎn)，所述的鹽包含一n價的陽離子，其觀察化學(xué)計量與理論化學(xué)計量n:l(硼酸陽離子)一致。89.第88項中的藥物，其中所述硼酸對凝血酶的Ki為大約100nM或更低，任選大約20nM或更低。90.—種適于口服的藥物制劑，其包含固相的一種化合物，該化合物是相應(yīng)于酸Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)2的硼酸鹽物質(zhì)的來源及是藥物可接受的除了膽堿和銨之外的陽離子的來源。91.一種形成式(I)所示的硼酸或者能是這種硼酸體內(nèi)來源的產(chǎn)物的方法Y-CO-NH-H-B(I)OH其中Y包含一個疏水性基團(tuán)，其與氨基硼酸殘基-NHCH(R"-B(OH)2—起對凝血酶的底物結(jié)合位點(diǎn)具有親和性；及W是一個由一或多個醚鍵中斷的直鏈烷基基團(tuán)，其中氧和碳原子的總數(shù)是3,4,5或6，或者119是-(CH2)mW，其中m是2，3，4或5，W是-OH或鹵素(F，Cl,Br或I);所述方法包括提供所述酸的酯的二乙醚溶液；將二乙醇胺溶解于該溶液中；允許或?qū)е乱环N沉淀形成并回收該沉淀；及將沉淀物轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N終產(chǎn)物，所述終產(chǎn)物選自游離有機(jī)硼酸或者能是這種硼酸的體內(nèi)來源的一種產(chǎn)物。92.第91項中的方法，其進(jìn)一步包括將所述終產(chǎn)物配制為藥物組合物。93.—種形成第1一71項中任一項的鹽的方法，包括將相應(yīng)的硼酸的乙腈溶液與一種藥物可接受的堿組合以形成鹽。94.一種使一種有機(jī)硼酸穩(wěn)定的方法，包括以其鹽形式提供。95.—種將有機(jī)硼酸藥物以穩(wěn)定形式呈遞作為藥物應(yīng)用的方法，包括提供固相的藥物可接受的其堿加成鹽形式的有機(jī)硼酸藥物。96.適于口服的一種藥物制劑，其包含a)選自式(l)所示硼酸、所述硼酸的硼酸根離子及所述硼酸及所述硼酸根離子的平衡形式的第一個物質(zhì)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage99</formula>其中Y包含一個疏水性基團(tuán)，其與氨基硼酸殘基-NHCH(R"-B(OH^—起對凝血酶的底物結(jié)合位點(diǎn)具有親和性；及W是由一或多個醚鍵中斷的一個直鏈烷基基團(tuán)，其中氧和碳原子的總數(shù)是3，4,5或6，或者R9是—(CH2)mW，其中m是2，3，4或5，W是-OH或鹵素；及(b)選自藥物可接受的金屬離子、賴氨酸、精氨酸和氨基糖的第二個物質(zhì)，所述金屬離子的化合價為m其中當(dāng)所述第二種物質(zhì)是化合價為1的金屬離子或者是賴氨酸、精氨酸或氨基糖時，所述制劑中第一種與第二種物質(zhì)的觀察化學(xué)計量與理論化學(xué)計量l:l基本一致；當(dāng)所述第二種物質(zhì)是化合價高于l的金屬離子時，觀察化學(xué)計量為n:l。權(quán)利要求1.一種藥物可接受的如化學(xué)式(I)所示硼酸的堿加成鹽其中Y包含一種與氨基硼酸殘基-NHCH(R9)-B(OH)2一起對凝血酶的底物結(jié)合位點(diǎn)具有親和性的疏水性基團(tuán)；且R9是一個由一或多個醚鍵中斷的直鏈烷基基團(tuán)，其中氧和碳原子的總數(shù)是3、4、5或6，或者R9是-(CH2)m-W，其中m是2、3、4或5，W是-OH或鹵素(F、Cl、Br或I)。2.權(quán)利要求1的鹽，其中W是垸氧基烷基基團(tuán)。3.權(quán)利要求1或2的鹽，其中YCO-包含結(jié)合凝血酶S2亞位點(diǎn)的一個氮基酸，該氨基酸與結(jié)合凝血酶S3亞位點(diǎn)的基團(tuán)在N末端連接。4.權(quán)利要求1或2的鹽，其中Y是一種任選的N末端保護(hù)的二肽，該二肽殘基結(jié)合凝血酶的S3和S2結(jié)合位點(diǎn)，而且所述酸中的肽鍵是由d-C,3烴基在N末端任意及獨(dú)立地取代，所述烴基任選含有鏈內(nèi)或環(huán)內(nèi)氮、氧或硫，及任選地由一個選自鹵素、羥基和三氟甲基的取代基取代，及任選其中所述二肽是N末端保護(hù)的和/或所述酸中所有肽鍵均是非取代的。5.權(quán)利要求4的鹽，其中結(jié)合S3的氨基酸殘基是(R)-構(gòu)型，結(jié)合S2的殘基是(S)-構(gòu)型，及片段-NHCH(R"-B(OH)是(R)-構(gòu)型。6.—種如化學(xué)式(II)所示的藥物可接受的硼酸的堿加成鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(II)其巾X是H(形成NH2)或氨基保護(hù)基；aa'是一種氨基酸，其具有含有不超過20個碳原子的一個烴基側(cè)鏈及包含至少一個具有最多13個碳原子的環(huán)狀基團(tuán)；a^是具有4一6個環(huán)成員的一種亞氨基酸；R'是如化學(xué)式《CH2)s-Z所示的一個基團(tuán)，其中s是2、3或4，而Z是—OH、—OMe、—OEt或卣素(F、Cl、Br或I)。7.權(quán)利要求6的鹽，其中aa'選自Phe、Dpa及其全部或部分氫化的類似物，并任選選自Dpa、Phe、Dcha和Cha，例如是(R)-Phe或(R)-Dpa。8.權(quán)利要求10—15任一的鹽，其中a^是化學(xué)式(IV)所示的一種亞氨基酸殘基其中RU是-CHr、-CH2-CH2-、-S-CH2-、-5-<:(013)2-或~012-012-CH2-，當(dāng)所述環(huán)是5或6個成員時，該基團(tuán)任選在一或多個-CH2-基團(tuán)處由1—3個d-C3烷基基團(tuán)取代，并任選aa2是一個(S)-脯氨酸殘基，例如aa"a2是(R)-Phe-(S)-Pro。9.權(quán)利要求16的鹽，其中^是(R)-構(gòu)型和減a^是(S)-構(gòu)型禾口/或片段-NH-CH(R')-B(OH)2是R構(gòu)型。10.權(quán)利要求6—9任一的鹽，其中Ri是2-溴乙基、2-氯乙基、2-甲氧基乙基、3-溴丙基、3-氯丙基或者3-甲氧基丙基，例如是3-甲氧基丙某。11.權(quán)利要求6—10任一的鹽，其中X是R6-(CH2)p-C(0)-、R6-(CH2)p-S(0)2-、R6-(CH2)p-NH-C(0)-或R6-(CH2)p畫0-C(0)畫，其中p是CH-COOH0、1、2、3、4、5或6，RS是H或5—13個成員的環(huán)狀基團(tuán)，該環(huán)狀基團(tuán)任選由選自鹵素、氨基、硝基、羥基、C5-C6環(huán)狀基團(tuán)、d-C4垸基及含有鏈內(nèi)0和/或通過鏈內(nèi)O與所述環(huán)狀基團(tuán)連接的Q-CV烷基的1、2或3個取代基取代，前述垸基基團(tuán)任選由選自鹵素、氨基、硝基、羥基和Cs-C6環(huán)狀基團(tuán)的取代基取代，任選所述5—13個成員的環(huán)狀基團(tuán)是芳環(huán)或雜環(huán)的，例如是苯基或者6元雜環(huán)基團(tuán)，例如X是芐氧基羰基。12.權(quán)利要求6或ii的鹽，其是如化學(xué)式(vm)所示的一種化合物的鹽X畫(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)2(雨)。13.權(quán)利要求1一12任一的鹽，其不包含膽堿或銨鹽。14.權(quán)利要求1一13任一的鹽，其包含所述硼酸肽與一種堿金屬或強(qiáng)堿性有機(jī)含氮化合物的鹽，任選其中所述強(qiáng)堿性有機(jī)含氮化合物是胍、胍類似物或胺，例如包含硼酸與堿金屬、氨基糖、胍或化學(xué)式(XI)所示的胺的鹽,NHR3R2其中n是l—6，f是H、羧酸鹽或衍生的羧酸鹽，RS是H、Q-Q烷基或者一種天然或非天然的氨基酸的殘基，例如賴氨酸、精氨酸或葡糖胺的鹽。15.權(quán)利要求1一12任一的鹽，其是硼酸與金屬的鹽。16.權(quán)利要求1一60任一的鹽，其包含衍生自硼酸肽的硼酸根離子，并與攜帶一個單負(fù)電荷的硼酸根離子具有一致的化學(xué)計量。17.包含權(quán)利要求1一16任一的鹽的口服劑型的藥物制劑。18.權(quán)利要求17的制劑，其是固體制劑，任選適于在十二指腸釋放所述鹽，例如是腸溶包衣形式的。19.權(quán)利要求1一16任一的鹽在生產(chǎn)一種藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療血栓形成如急性冠狀動脈綜合征(例如急性心肌梗塞)、靜脈血栓栓塞(例如深部靜脈血栓形成或肺栓塞)，預(yù)防患者血液透析通路中的血栓形成，預(yù)防晚期腎病患者的心血管事件，預(yù)防通過留置導(dǎo)管接受化療的患者的靜脈血栓栓塞事件，或者預(yù)防下肢動脈重建的患者中血栓栓塞事件。20.—種包含(i)權(quán)利要求l一16任一的鹽及(ii)一種藥物活性制劑的組合的口服藥物制劑，所述藥物活性制劑例如是另一種心血管治療劑例如降脂藥、貝特類藥、煙酸、抑制素、CETP抑制劑、膽酸螯合劑、抗氧化劑、nb/ma拮抗劑、醛固酮抑制劑、A2拮抗劑、A3興奮劑、p-阻斷劑、乙酰水揚(yáng)酸、袢利尿劑、ace抑制劑、具有不同作用機(jī)制的抗血栓制劑、抗血小板制劑、血栓烷受體和/或合成酶抑制劑、纖維蛋白原受休拮抗劑、前列環(huán)素模擬物、磷酸二酯酶抑制劑、ADP-受體(P2T)拮抗劑、溶栓劑、保心劑或COX-2抑制劑。21.—種口服藥物，其包含一種硼酸鹽，所述硼酸是選擇性凝血酶抑制劑并具有一能結(jié)合凝血酶S1亞位點(diǎn)的中性氨基硼酸殘基以及經(jīng)一肽鍵與該中性氨基硼酸殘基相連接的能結(jié)合凝血酶S2和S3亞位點(diǎn)的疏水性基團(tuán)，所述的鹽包含具有化合價為n的一個陽離子，及具有與n:l的概念化學(xué)計量(硼酸:陽離子)一致的觀測到的化學(xué)計量。22.—種形成(i)如權(quán)利要求l一16任一所述的鹽，(ii)如權(quán)利要求l一12任一所述的硼酸或者(iii)能在體內(nèi)作為這種硼酸的來源的任何其它產(chǎn)物的方法，所述方法包括將一種溶劑例如二乙醚、二乙醇胺和權(quán)利要求1一12任一所述硼酸的一種酯例如頻哪醇酯組合；允許或?qū)е乱环N沉淀形成并回收該沉淀；將該沉淀物轉(zhuǎn)變?yōu)樗Ｍ慕K產(chǎn)物，例如將其轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x有機(jī)硼酸，例如通過將該沉淀物與一種水相酸或堿接觸，然后將該酸與一種藥物可接受的堿接觸形成權(quán)利要求l一16任一所述的鹽。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述終產(chǎn)物是一種藥物可接受的堿加成鹽，所述方法進(jìn)一步包括將所述鹽配制為藥物組合物。24.形成權(quán)利要求1一16任一的鹽的方法，包括將相應(yīng)的硼酸的乙腈溶液與一種藥物可接受的堿組合形成所述鹽。全文摘要一種硼酸肽藥物的鹽，例如Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂。與硼酸平衡的離子可以是堿金屬或者衍生自一種有機(jī)含氮化合物。所述鹽用于治療血栓形成。文檔編號A61K31/69GK101392002SQ20081017044公開日2009年3月25日申請日期2003年9月9日優(yōu)先權(quán)日2002年9月9日發(fā)明者安東尼·詹姆斯·肯尼迪,戴維·喬納森·瑪奇,桑賈伊·庫馬爾·卡卡爾,索菲·瑪麗·庫姆-馬澤勒,約翰·約瑟夫·戴德曼,馬克·多爾曼申請人:特里根有限公司