專利名稱：：白木香果實(shí)及其提取物在制備抗腫瘤藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥、天然藥物領(lǐng)域，具體涉及白木香果實(shí)及其提取物在制備抗腫瘤藥物中的用途，本發(fā)明公開了它的制備方法和用于醫(yī)藥的用途。
背景技術(shù)：
：白木香[^4《w7an'aw'"e"w;(Lour.)Gilg]為瑞香科(Thymelaeaceae)沉香屬植物，是一禾中熱帶、亞熱帶常綠喬木，為我國特有的珍貴藥用植物，現(xiàn)已被列為國家二級瀕危保護(hù)樹種。沉香屬植物全世界約有15種，分布于印度、馬來西亞以及亞洲東南部。我國僅產(chǎn)2種，分別是海南的白木香[^(《"http://0773w'we"w'51(Lour.)Gilg]禾口云南沉香[/^w7av'ayw""a"era/sS.C.Huang]。白木香含樹脂的木材，稱為國產(chǎn)沉香。國產(chǎn)沉香用途廣泛，為我國傳統(tǒng)中藥，其味辛、苦，性微溫，具行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效，用于胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急。傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)及現(xiàn)有報(bào)道中用的無論是國產(chǎn)沉香還是進(jìn)口沉香，都是白木香的木質(zhì)部。然而不論是天然結(jié)香還是人工結(jié)香都比較困難，且耗費(fèi)時間較長，很大程度限制沉香藥材的應(yīng)用。白木香為常綠喬木，其果實(shí)資源非常豐富，但國內(nèi)外有關(guān)白木香果實(shí)藥理活性均未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供白木香果實(shí)新的醫(yī)療用途，即白木香果實(shí)及其提取物在制備抗腫瘤藥物中的新用途。本發(fā)明的內(nèi)容是白木香果實(shí)提取物在制備抗癌藥物中的新用途，所述用途特征在于1、白木香果實(shí)提取物可通過下述步驟獲得白木香果實(shí)經(jīng)冷浸、或滲漉、回流提取，將提取液減壓回收即得，其中用于滲漉或回流提取的溶劑選自水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮中的一種或幾種。即所用溶劑即可以是上述溶劑中的任何一種，也可以上上述任意幾種的混合溶劑。優(yōu)選的提取溶劑是水或乙醇。用乙醇提取時乙醇的濃度優(yōu)選10~95%，進(jìn)一步優(yōu)選75%，均為重量百分比。2、白木香果實(shí)經(jīng)冷浸或滲漉、回流提取后，溶液可進(jìn)一步濃縮得浸膏，浸膏可添加適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制各種制劑；也可將浸膏進(jìn)一步干燥后再制備成各種制劑。本發(fā)明的白木香果實(shí)提取物經(jīng)體外活性篩選，統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果顯示均有較好的抗腫瘤的活性。由白木香果實(shí)提取物的體外活性篩選結(jié)果和初步臨床療效觀察可以推導(dǎo)白木香果實(shí)提取物可用于制備抗癌藥物，即白木香果實(shí)提取物在制備抗癌藥物方面的新用途。本發(fā)明的有益效果是提供了白木香在通常用于產(chǎn)香以外的新用途，即白木香果實(shí)提取物在制備抗腫瘤藥物方面的新用途，對提取物添加適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成口服和注射藥物制劑。一、體外活性篩選下面是白木香果實(shí)提取物的體外活性篩選試驗(yàn)及其結(jié)果。1.抗癌活性測試。采用MTT法對人胃癌細(xì)胞SGC-7901、慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562、人口腔表皮癌細(xì)胞KB、骨纖維肉瘤HT-1080、肝癌細(xì)胞SMMC-7721等細(xì)胞株的體外抑瘤活性。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法。其原理為MTT化學(xué)名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑，水溶液為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍(lán)色的甲臜結(jié)晶(formazane)，formazane結(jié)晶的生成量僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原)。2.活性測試方法為實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對照組(水)、DMSO溶劑對照組、陽性對照組(絲裂霉素C)和8個不同濃度(O.l,0.2,0.4，0.8，1.6，3.2,6.3，12.5)的待測樣品，每個濃度設(shè)3個平行。收集對數(shù)生長期細(xì)胞，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，按每孔4500個癌細(xì)胞量接種于96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于5%0)2、濕度90%以上、37'C溫箱中培養(yǎng)。24h后取出加入一定量的待測樣品，繼續(xù)培養(yǎng)3d后取出置于顯微鏡下觀察每孔細(xì)胞形態(tài)，記錄細(xì)胞形態(tài)變化情況，接著每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡鹽溶液PBS)50^L，37'C反應(yīng)4h后，將細(xì)胞培養(yǎng)液吸出，每孔加入100pLDMSO將formazane充分溶解，將細(xì)胞培養(yǎng)板置于MK3酶標(biāo)儀上，用570nm波長測各孔的吸光度(A)，按下列公式求生長抑制率。生長抑制率=(1-鵬組平輔)譜o、陰性對照組平均A值以樣品濃度為橫坐標(biāo)，以抑制率為縱坐標(biāo)，作圖并求出抑制率為50°/。時樣品的濃度(1<:50)，樣品活性結(jié)果即以半數(shù)抑制濃度(IC50)表示。3.活性測試結(jié)果為樣品對K562S、GC-7901等腫瘤細(xì)胞株的毒性作用<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>注毒性值IC5G，即藥物對細(xì)胞殺滅50%時的濃度值。IC50值越大則毒性越小。二、初步臨床療效觀察下面是白木香果實(shí)提取物制劑治療100例胃癌的臨床療效情況統(tǒng)計(jì)1.病例選擇IOO例病人，均經(jīng)各大醫(yī)院確診為胃癌晚期患者，其中男47例，女53例，年齡最小者35歲，最大者57歲。2.治療方法對確診為胃癌晚期患者，給予本發(fā)明成藥(約含O.Olg白木香果實(shí)提取物膠囊)服用，一日二次，每次一粒，開水沖服。每40天為一個療程，連續(xù)兩個療程后停藥休息一周，詳細(xì)觀察病情變化進(jìn)行檢査。然后進(jìn)行第三個療程治療，在服藥期間停服其它藥品。3.療效標(biāo)準(zhǔn)臨床治愈癥狀及客觀檢査陽性征象消失，連續(xù)半年無復(fù)發(fā)者。臨床顯著癥狀基本消失，癌灶縮小一半以上，其它客觀檢查有明顯好轉(zhuǎn)，觀察半年以上不再發(fā)展者。臨床有效癥狀有所改善，病灶基本穩(wěn)定，觀察在一個月以上者。臨床無效癥狀及客觀檢査無改善，或僅有短期改善，而又迅速惡化者。4.療效觀察結(jié)果-Fl總例數(shù)百分比￥1^臨床治愈^^臨床顯著3535%臨床有效3939%臨床無效99%擴(kuò)散轉(zhuǎn)移本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是-1、本發(fā)明無須煎煮，治療方便，有效率達(dá)91%。2、本發(fā)明能夠控制癌細(xì)胞增生，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散，使癌細(xì)胞枯萎脫落消失。具體實(shí)施方式實(shí)施例1取白木香果實(shí)500g，自然晾干粉碎后，用10倍量95%乙醇浸泡1小時，加熱回流提取2次，每次1小時，收集合并濾液，回收乙醇，濃縮后干燥得提取物91.8克。將其打成細(xì)粉，混勻，裝入膠囊。實(shí)施例2取白木香果實(shí)300g，自然晾干粉碎后，用10倍量75%乙醇，浸漬提取3次，每次1小時，收集合并濾液，回收乙醇，濃縮后干燥得提取物63.4克。加適量輔料，混勻，裝入膠囊。實(shí)施例3取白木香果實(shí)400g，自然晾干粉碎后，用10倍量50%乙醇浸泡1小時，加熱回流提取2次，每次1小時，收集合并濾液，回收乙醇，濃縮后干燥得提取物79.7克。將其打成細(xì)粉，混勻，過篩，分包制成散劑。實(shí)施例4取白木香果實(shí)300g，自然晾干粉碎后，用10倍量30%乙醇，滲漉提取2次，每次l小時，收集合并濾液，回收乙醇，濃縮后干燥得提取物70.5克。加適量輔料，混勻，裝入膠囊。實(shí)施例5取白木香果實(shí)500g，自然晾干粉碎后，用10倍量10%乙醇浸泡1小時，反復(fù)提取3次，每次1小時，收集合并濾液，回收乙醇，濃縮后干燥得提取物89.7克。將其打成細(xì)粉，混勻，過篩，分包制成散劑。權(quán)利要求1、白木香在制備抗腫瘤藥物中的新用途，其特征在于所述白木香為瑞香科沉香屬(Aquilaria)植物白木香[Aquilariasinensis(Lour.)Gilg]，藥用其果實(shí)。2、白木香果實(shí)提取物在制備抗腫瘤藥物中的新用途，其特征在于白木香果實(shí)提取物可通過如下步驟獲得白木香果實(shí)經(jīng)多次冷浸、或滲漉、回流提取，再濃縮干燥即得，其中用于滲漉或回流提取的溶劑選自水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮中的一種或幾種。3、權(quán)利要求2的白木香果實(shí)提取物，其中用于冷浸、滲漉或回流提取的溶劑是乙醇或水。4、權(quán)利要求2的白木香果實(shí)提取物，其中用于冷浸、滲漉或回流提取的溶劑是10~95%的乙醇，為重量百分比。5、權(quán)利要求4的白木香果實(shí)提取物，其中乙醇濃度為75%。6、根據(jù)權(quán)利要求1-5所述用途，其特征在于將白木香果實(shí)提取物，添加適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、口服液等口服藥物制劑和凍干粉針、水針等注射藥物制劑。全文摘要本發(fā)明涉及中藥、天然藥物領(lǐng)域，具體涉及白木香果實(shí)及其提取物，本發(fā)明還公開了它在制備抗腫瘤藥物中的新用途。文檔編號A61K36/185GK101411789SQ20081018690公開日2009年4月22日申請日期2008年12月5日優(yōu)先權(quán)日2008年12月5日發(fā)明者嬌吳,戴好富,峰林,梅文莉申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所