專利名稱：：膦異香豆素酰胺及其合成方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種膦異香豆素酰胺類化合物及其合成方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：有機(jī)磷化合物與生命化學(xué)息息相關(guān)，在農(nóng)藥和醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。在當(dāng)今的醫(yī)藥行業(yè)屮，有機(jī)磷藥物不僅在抗腫瘤藥中占有重要地位，而且在抗菌、抗病毒、強(qiáng)心、降壓、酶抑制劑和治療骨科疾病等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用(Engel,R.，Ed.o尸Qr卵op力osp力oriAC/e啦'stiT;MarcelDekker:NewYork,1992,Chapter11;Quin，L.D.,Ed.J6""ic/eto(2r卵"。p力osp力ortAsC/e孤'stir;JohnWiley&Sons:NewYork,2000,Chapter11)。如何去尋找新的有生物活性的有機(jī)磷化合物已經(jīng)成為當(dāng)今有機(jī)磷化學(xué)研究的重點(diǎn)課題之在發(fā)明人以前的工作中，首次合成了一類具有潛在生物活性的新型磷雜環(huán)化合物，即膦異香豆素酯A(專利號(hào)ZL03151003.5)和膦異香豆素鹽(CN101143880A),通過(guò)初步的生物活性測(cè)試表明，這類化合物對(duì)蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTPIB有中等的抑制活性，對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC和人肝癌細(xì)胞H印G2有中等的細(xì)胞毒性(Peng,A.-Y.;Ding,Y.-X./力瓜C力e瓜5bc.2003,15006-15007;Peng,A.-Y.:Ding,Y.—X.Org.￡e".2004，《1119-1121;Peng,A.-Y.;Ding,Y.-X.7tetr3力ef^o/，2005,W,10303-10308)?？梢栽O(shè)想，將膦異香豆素酯A的環(huán)外酯基轉(zhuǎn)化成胺基，得到的膦異香豆素酰胺很可能具有新的或更好的生物活性，因?yàn)榱?膦)酰胺類化合物大多具有較好的生物活性，最典型的例子是廣泛用于臨床的抗腫瘤藥環(huán)磷酰胺。合成膦酰胺通常是先將膦酸酯水解成膦酸，再與氯化試劑(如磺酰氯、三氯化磷、五氯化磷或草酰氯)反應(yīng)生成膦酰氯，膦酰氯與胺反應(yīng)制備膦酰胺(Malachowski,W.P.;Coward,J.K.0r《.Oe瓜1994,朋，7616-7634)。此合成膦酰胺的路線較長(zhǎng)，且總產(chǎn)率在20%左右，產(chǎn)率較低。合成方法t的落后嚴(yán)重地影響了對(duì)此類化合物的生物活性研究。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供一類膦異香豆素酰胺化合物，該類化合物具有良好的抑制膽固醇酯酶的作用。本發(fā)明的另一目的還提供一種所述膦異香豆素酰胺的合成方法。該方法克服了傳統(tǒng)方法中需要用到強(qiáng)毒性或高腐蝕性的氯化試劑的不足，從膦酸酯出發(fā)直接合成相應(yīng)膦酰胺，為膦酰胺的合成提供了一種步驟簡(jiǎn)單、成本低、產(chǎn)率高、較環(huán)保的方法。本發(fā)明的另一目的是提供一種所述膦異香豆素酰胺的應(yīng)用。本發(fā)明提供的膦異香豆素酰胺具有如下分子式B:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中，R'為H，C「w的烷基，C.3-7的環(huán)烷基，芳基，或C「,。的烷基，G「7的環(huán)烷基，芳基的取代衍生物；R2，R3分別獨(dú)立為H,C門。的垸基，C,-5的垸氧基，C廠7的環(huán)垸基，芳基，或C門。的垸基，C3-7的環(huán)烷基，芳基的取代衍生物；X=H，鹵素，芳基，芳基乙炔基；Y=H，C「s的烷基，d-5的垸氧基，羰基、鹵素，CN,CF3，N02,0H，或胺基；所述的烷基、環(huán)垸基、芳基取代衍生物的取代基為C"的烷基、羰基、羥基、C,-5的垸氧基、鹵素、N02、氨或胺基；其中，f和R3還可與N-起形成5或6元碳環(huán)，該環(huán)中也可包含至少一個(gè)選自0、N禾B/或S的雜原子。所述的芳基包括碳芳環(huán)和雜芳環(huán)，優(yōu)選為苯基、萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基等。上述的垸基均可以含有不飽和鍵。所述的羰基優(yōu)選為羧基、垸氧羰基、酮基，后二者的烷基部分和R'代表的范圍相同，例如R'二H，d、的垸基，C3-7的環(huán)垸基，芳基。本發(fā)明提供的膦異香豆素酰胺的合成方法如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式中R1、R2、R3、R、X、Y如前所述，具體包括以下歩驟(1)胺(氨)或胺(氨)的鹽酸鹽溶解于有機(jī)溶劑中，一154(TC滴加金屬試劑，080°C反應(yīng)O.510小時(shí)，得到胺(氨)的金屬鹽溶液，直接用于下步反應(yīng)；(2)膦異香豆素酯溶解于有機(jī)溶劑中，一154(TC緩慢滴加入上述胺(氨)的金屬鹽溶液中，080°C反應(yīng)l72小時(shí)，得膦異香豆素酰胺。步驟(1)所述的金屬試劑優(yōu)選為NaH，麵K，rf3uLi，或各種鋁試劑，如R，,A1，R42A1C1，RUlH，RA10R5,其中R4，R5為烷基，如甲基、乙基、丙基或異丁基等。步驟(1)和(2)所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為丙酮、甲苯、1,4-二氧六環(huán)、乙腈、氯仿、二氯甲烷、THF((四氫呋喃)、DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、HMPA(六甲基磷酸三胺)或DMS0(二甲基亞砜)。優(yōu)選地，在所述反應(yīng)中，膦異香豆素酯、胺或胺的鹽酸鹽、金屬試劑的反應(yīng)摩爾比為1:1.220:1.220。上述合成反應(yīng)具有高度的化學(xué)選擇性，只斷開(kāi)環(huán)外的烷氧鍵，而磷雜環(huán)仍然保持完整，從而制備了一類從未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的新型膦酰胺。所述膦異香豆素酰胺在制備降血脂藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的膦異香豆素酰胺不僅合成方法簡(jiǎn)便高效，而且該類化合物具有良好的抑制膽固醇酯酶的作用，為制備降血脂藥物提供新的選擇。具體實(shí)施例方式通過(guò)下述實(shí)施例將有助于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不用于限制本發(fā)明的內(nèi)容。實(shí)施例一:DIBAL-H作為金屬試劑的典型操作氮?dú)獗Ｗo(hù)下，50mL干燥圓底燒瓶?jī)?nèi)，加入PhCH2NH2(0.96mL，8.8,1),甲苯(5.0mL)，冰水浴下，緩慢滴加1M的DIBAL-H甲苯溶液(8.80mL，8.8誦o丄)，滴完后繼續(xù)O'C反應(yīng)1小時(shí)。向上述反應(yīng)液中緩慢滴加3-苯基一7—甲氧基膦異香豆素乙酯(475mg，1.5mmol)的甲苯(5.0mL)溶液，滴加完后自然升至室溫反應(yīng)12小時(shí)，將反應(yīng)液冷卻至0卩，分別經(jīng)過(guò)水(10mL)洗，1M的KHSOa水溶液洗，乙酸乙酯(3X10mL)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸去溶劑，剩余物柱層析(P:E=6:1-1:1)得370mg白色固體，為相應(yīng)的膦異香豆素酰胺，產(chǎn)率65%。4N艦57.72(d,/-7.5Hz，2H),7.25-7.39(m,10H),7.11(d'/=7.5Hz,1H)，6.61(s，1H),3.97-4.16(m，2H),3.90(s,3H)，3.70(brs,1H)。實(shí)施例二<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>正丁基鋰(^BuLi)作為金屬試劑的典型操作氮?dú)獗Ｗo(hù)下，50mL干燥圓底燒瓶?jī)?nèi)，加入環(huán)已胺(0.27mL，2.5咖ol),無(wú)水1,4-二氧六環(huán)(5.0mL)，一15。C緩慢滴加1.6M的正丁基鋰正己烷溶液(1.30mL,2.l隱ol)，滴完后繼續(xù)一15。C反應(yīng)1小時(shí)。向上述反應(yīng)液中緩慢滴加3-苯基膦異香豆素乙酯(286mg，l.Ommol)的無(wú)水1,4-二氧六環(huán)(5.0mL)溶液，滴加完后升至0'C反應(yīng)2小時(shí)，然后加入水(10mL)，乙酸乙酯(3X10mL)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸去溶劑，剩余物柱層析(P:E=6:1-1:1)得237mg白色固體，為相應(yīng)的膦異香豆素酰胺，產(chǎn)率70%。'HMR:5L29-7.52(m,9H)，6.52(s，1H),3.47(brs，1H),2.57-2.68(m，1H),2.05-2.18(m，4H)，1.38—1.62(m,6H)。氫化鈉(NaH)作為金屬試劑的典型操作氮?dú)獗Ｗo(hù)下，50mL干燥圓底燒瓶?jī)?nèi)加入含量為60%的NaH粉末(264mg，6.6誦ol)和無(wú)水四氫呋喃(THF,5.0mL)，O'C緩慢滴加"BuNH2(0.50mL，5.0mmol)，滴完后升至室溫反應(yīng)1小時(shí)。實(shí)施例三:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>向上述反應(yīng)液中室溫緩慢滴加3-苯基一7_氯膦異香豆素乙酯(320mg，1.0ramol)的無(wú)水THF(5.0mL)溶液，滴加完后升至6(TC反應(yīng)3小時(shí)，冷至室溫，加入水(10mL)，乙酸乙酯(3X10mL)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸去溶劑，剩余物柱層析(P:E=6:1-1:1)得209mg白色固體，為相應(yīng)的膦異香豆素酰胺，產(chǎn)率60%。'HNMR:^7.76-7.89(m,3H)，7.29-7.59(m'5H),6.65(d,/=2.1Hz'1H)，3.68(brs,1H),2.83—2.96(m,2H),1.45—1.54(m,2H)，1.34—1.42(m'2H)，0.88(t,/=7.5Hz,3H)。實(shí)施例四<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>叔丁醇鉀(tBuOK)作為金屬試劑的典型操作氮?dú)獗Ｗo(hù)下，50mL干燥圓底燒瓶?jī)?nèi)，加入出uOK粉末(370mg，3.3誦ol)和無(wú)水,(5.0mL)，室溫滴加PhNH2(0.20mL,2.2ramol)，滴完后室溫反應(yīng)3小時(shí)。向上述反應(yīng)液中緩慢室溫滴加3-環(huán)丙基一7—氯膦異香豆素乙酯(284mg,1.0ramol)的無(wú)水DMF(5.0tnL)溶液，滴加完后升至8CTC反應(yīng)2小時(shí)，冷至室溫，加入水(10mL)，乙酸乙酯(3X10niL)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸去溶劑，剩余物柱層析(P:E=6:1-1:1)得166mg白色固體，為相應(yīng)的膦異香豆素酰胺，產(chǎn)率50%。'H麗R:57.50-7.72(m,2H)，6.65—7.16(m，6H)，5.89(s'1H),3.87(brs,1H)，1.68-1.78(m,1H)，0.83—0.93(m,4H)。實(shí)施例五:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>實(shí)驗(yàn)操作基本同實(shí)施例一，不同的是所用的胺為四氫吡咯，所用的金屬試劑是濃度為1M的(^2A1C1的甲苯溶液，所用的溶劑為二氯甲烷，膦異香豆素酯、四氫吡咯、EWUC1的反應(yīng)摩爾比為1:20:20,產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)物62%。'HNMR:c7.30-8.15(m，14H),2.80-2.93(m,2H),1.44—1.53(m,2H)。實(shí)施例六:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>實(shí)驗(yàn)操作基本同實(shí)施例一，不同的是所用的胺為Me(MeO)N.HCl，所用的溶劑為DMSO(二甲亞砜)，膦異香豆素酯、Me(MeO)N.HCl、DIBALH的反應(yīng)摩爾比為1:10:10,產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)物620/。。lH固R:58.70-7.32(m,7H),3.54(d,/=3.4Hz,3H)，2.73(q，/=7.5Hz,2H),2.58(d，/=11.4Hz,3H)'1.28(t,/=7.5Hz，3H)。實(shí)施例七:CICI實(shí)驗(yàn)操作基本同實(shí)施例二，不同的是所用的胺為Et2NH，所用的溶劑為THF(四氫呋喃)，相應(yīng)膦異香豆素酯、Eh麗、；7^uLi的反應(yīng)摩爾比為1:10:10,產(chǎn)物為白色固體，產(chǎn)率68%。'HNMR:57.57—7.81(m,5H),7.35-7.38(m，3H)，2.68-2.97(m,4H)，1.08(dt,乂二7.9Hz，；=3.0Hz'6H)。實(shí)施例八3-苯基一7—甲氧基膦異香豆素酯在DIBALH與芐胺形成的胺鋁試劑作用下，除了所用溶劑不同外，實(shí)驗(yàn)操作同實(shí)施例一'分離產(chǎn)率分別為40%(氯仿)，45%(丙酮)；60%(二氧六環(huán))；58%(乙腈);68%(THF);55%(DMSO);50%(HMPA)。實(shí)施例九:3-苯基一7—甲氧基膦異香豆素酯在DIBALH與芐胺形成的胺鋁試劑作用下，以甲苯做溶劑，除了相應(yīng)膦異香豆素酯、PhCH2NH2、DIBALH的反應(yīng)摩爾比不同外，實(shí)驗(yàn)操作同實(shí)施例一，分離產(chǎn)率分別為30%(1丄2丄2);45%(1:3:3);62%(1:5:5);68%(1:10:10);70%(1:20:20)。實(shí)施例十按上述方法得到的其他一些含膦異香丑素酰胺見(jiàn)下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例十一一些膦異香豆素酰胺化合物的抑制膽固醇酯酶(簡(jiǎn)寫(xiě)為pCE)生物活性膽固醇酯酶抑制劑可望用于治療高脂血癥等疾病，抑制活性測(cè)定參照文獻(xiàn)方法(Feaster，S.R.;Lee，K.;Baker,N.;Hui，D.Y.;Quinn，D.M.腸c力e加.5^ir,1996，35，16723-16734)，采用pNPB為底物進(jìn)行。在1.5mL的離心管中加入975uLpH=7.04的0.1M的磷酸鈉緩沖溶液(含有O.lMNaCl)和一定體積的樣品溶液(DMS0溶解)，用DMS0稀釋至990uL，然后加入5uL膽固醇酯酶水溶液(5L/mL)，充分混合。然后加入5uLpNPB溶液(濃度為2mgZmL)，迅速混合均勻，測(cè)定波長(zhǎng)為405mn處的吸光度，由其隨時(shí)間增長(zhǎng)而上升的斜率計(jì)算出IC50值。由于酶的活力會(huì)隨著放置時(shí)間增長(zhǎng)而下降，因此測(cè)量時(shí)可適當(dāng)調(diào)整酶的濃度(底物濃度固定為0.26mM)，使吸光度的變化保持在每分鐘改變G.1個(gè)單位。測(cè)定時(shí)溫度恒定為25'C。部分膦異香豆素酰胺化合物的抑制膽固醇酯酶IC50如下R1=Ph，R2=H，R3=我X=HY=MeO,IC50=1.3R1=Ph，R2=H，R:i=/Bu，X=HY=CI,IC50=7.3nM;R1=Ph，R2=H,R3=cC6H12,X=H，Y=H,IC50=27.1R1=cC3H5,R2=H,R3=Ph，X=H，Y=Cl，IC50=17.5一；R1="Bu，R2=H，R3=CH2Ph，X=H,Y=H'IC50=60.8jiM;R1=4—EtC6H4,R2二Me'R3=Me0，X=Br,Y=N02,IC50=15.7pM。權(quán)利要求1.膦異香豆素酰胺，其特征是，具有如下分子式B其中，R1為H，C1-10的烷基，C3-7的環(huán)烷基，芳基，或C1-10的烷基，C3-7的環(huán)烷基，芳基的取代衍生物；R2，R3分別獨(dú)立為H，C1-10的烷基，C1-5的烷氧基，C3-7的環(huán)烷基，芳基，或C1-10的烷基，C3-7的環(huán)烷基，芳基的取代衍生物；X＝H，鹵素，芳基，芳基乙炔基；Y＝H，C1-5的烷基，C1-5的烷氧基，羰基、鹵素，CN，CF3，NO2，OH，或胺基；所述的烷基、環(huán)烷基、芳基取代衍生物的取代基為C1-5的烷基、羰基、羥基、C1-5的烷氧基、鹵素、NO2、氨或胺基。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述膦異香豆素酰胺，其特征是，所述的芳基是苯基、萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基或吡啶基。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述膦異香豆素酰胺，其特征是，所述的羰基為羧基、烷氧羰基或酮基。4.根據(jù)權(quán)利要求l一3任一項(xiàng)所述膦異香豆素酰胺，其特征是，分子式B中的f和W與N—起形成5或6元碳環(huán)，該環(huán)中包含至少一個(gè)選自0、N和S的雜原子。5.—種合成權(quán)利要求1所述膦異香豆素酰胺的方法，其特征在于，包括以下步驟-(1)胺(氨)或胺(氨)的鹽酸鹽溶解于有機(jī)溶劑中，—1540°C滴加金屬試劑，080°C反應(yīng)0.510小時(shí)，得到胺(氨)的金屬鹽溶液，直接用于下步反應(yīng)；(2)膦異香豆素酯溶解于有機(jī)溶劑中，—1540°C緩慢滴加入上述胺(氨)的金屬鹽溶液中，080°C反應(yīng)l72小時(shí)，得膦異香豆素酰胺；反應(yīng)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式中R1、R2、R3、X、Y如權(quán)利要求l所述，R為垸基。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述膦異香豆素酰胺的合成方法，其特征是，步驟(l)所述的金屬試劑是NaH，tBuOK，/BuLi，或鋁試劑。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述膦異香豆素酰胺的合成方法，其特征是，所述鋁試劑為RA1，RA1C1，RU1H，或RU10R5，其中R4,R5為甲基、乙基、丙基或異丁基。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述膦異香豆素酰胺的合成方法，其特征是，所述有機(jī)溶劑為丙酮、甲苯、1,4-二氧六環(huán)、乙腈、氯仿、二氯甲烷、THF、DMF、服PA或函SO。9.根據(jù)權(quán)利要求5所述膦異香豆素酰胺的的合成方法，其特征是，在所述反應(yīng)中，膦異香豆素酯、胺或胺的鹽酸鹽、金屬試劑的反應(yīng)摩爾比為1:1.220:1.220。10.權(quán)利要求l一4任一項(xiàng)所述膦異香豆素酰胺在制備降血脂藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種新型膦異香豆素酰胺及其制備方法和應(yīng)用。具有通式B的所述膦異香豆素酰胺，其中，R¹為H，C_1-10的烷基，C_3-7的環(huán)烷基，芳基，或C_1-10的烷基，C_3-7的環(huán)烷基，芳基的取代衍生物；R²，R³分別獨(dú)立為H，C_1-10的烷基，C_1-5的烷氧基，C_3-7的環(huán)烷基，芳基，或C_1-10的烷基，C_3-7的環(huán)烷基，芳基的取代衍生物；X＝H，鹵素，芳基，芳基乙炔基；Y＝H，C_1-5的烷基，C_1-5的烷氧基，羰基、鹵素，CN，CF₃，NO₂，OH，或胺基。本發(fā)明所述膦異香豆素酰胺具有良好的抑制膽固醇酯酶的作用，可為制備治療高脂血癥等疾病的藥物提供新的選擇。文檔編號(hào)A61K31/665GK101367840SQ20081019894公開(kāi)日2009年2月18日申請(qǐng)日期2008年10月6日優(yōu)先權(quán)日2008年10月6日發(fā)明者彭愛(ài)云,李保健,杜一丹,正王,郭御卷申請(qǐng)人:中山大學(xué)