專利名稱：：一種具有降血糖和減肥作用的菧類天然藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有新化學(xué)結(jié)構(gòu)的一種葳類天然藥物樹豆酮酸A，可以制造降血糖和降脂減肥藥物或保健食品；以及一種植物來(lái)源的含有這種新葳類化合物樹豆酮酸A的組合物，可以制造降血糖藥物或保健食品?！?br>背景技術(shù)：
：糖尿病是由胰島素分泌不足和(或)胰島素抵抗引起的以高血糖為主要表現(xiàn)，涉及多種物質(zhì)代謝紊亂的綜合征。隨著人們生活方式的改變，糖尿病的患病率呈上升趨勢(shì)，流行病學(xué)調(diào)查顯示糖尿病高發(fā)于發(fā)展中國(guó)家，2005年全球有2.2億人患糖尿病，我國(guó)就有4000萬(wàn)患者。另外還有更多的人存在著糖耐受性降低的風(fēng)險(xiǎn)。約90%為2型糖尿病。糖尿病發(fā)病緩慢，癥狀隱匿，病情復(fù)雜，病情進(jìn)展常伴心腦血管、腎、眼及神經(jīng)病變等并發(fā)癥。據(jù)Research&Martcets公司公布的《2011年糖尿病市場(chǎng)前景》報(bào)告顯示，2005年全球的糖尿病藥物己達(dá)到了186億美元的市場(chǎng)規(guī)模，據(jù)推測(cè)目前己超過(guò)250億美元。糖尿病在臨床上分成1型和2型。1型多以胰島素及其類型物進(jìn)行治療。2型糖尿病的治療藥物較多，目前常見的抗糖尿病藥物按藥物來(lái)源與作用機(jī)理進(jìn)行分類，主要有胰島素及其類似物(主要用于1型糖尿病)，黃酰脲類，雙胍類，a-葡萄糖苷酶抑制劑，非黃脲類胰島素分泌促進(jìn)劑，胰島素增敏劑(噻唑烷二酮類)及以天然藥物和中成藥等類型?；请孱愂桥R床應(yīng)用最早且目前也仍在廣泛使用的口服降糖藥。常用的有格列本脲，格力吡嗪，格列齊特，格列喹酮和格列美脲等，這類藥物可刺激B-細(xì)胞分泌和釋放胰島素，因此其降糖作用有賴于還有相當(dāng)數(shù)量有功能的胰腺B-細(xì)胞?？傮w來(lái)講，這類藥物比較安全，不良反應(yīng)率較低，只是長(zhǎng)期使用容易引起低血糖。雙胍類降糖藥早在1957年就開始用于臨床，常用的有二甲雙胍，苯乙雙胍等。雙胍類藥物可促進(jìn)周圍組織對(duì)葡萄糖的攝取與利用，增加肌肉組織中的糖的無(wú)氧酶解，減少葡萄糖在腸道的吸收，還可抑制膽固醇的生物合成和貯存，降低甘油三酯和總膽固醇的水平。雙胍類藥物不刺激胰腺分泌胰島素，它不僅抑制葡萄糖在腸道中的吸收，還阻礙維生素B12的吸收，可引起營(yíng)養(yǎng)吸收不良，體重降低，特別適合于肥胖和伴有高血脂的病人。但它常伴著嚴(yán)重的毒副作用(高達(dá)50%)，如乳酸酸性中毒，甚至酮脲等，嚴(yán)重地限制了它的應(yīng)用。a--葡萄糖苷酶抑制劑。有別于前面兩類抗糖藥物，a—葡萄糖苷酶抑制劑的降糖機(jī)制為在小腸中競(jìng)爭(zhēng)性抑制-葡萄糖苷酶的活性，淀粉等碳水化合物水解產(chǎn)生葡萄糖減慢，延緩腸道對(duì)葡萄糖的吸收，因此有利于降低餐后的血糖水平。其副作用主要是由于碳水化合物在腸道停留和酶解所引起的腸道不適。目前常用的藥物是阿卡波糖和優(yōu)格列波等。非磺脲類胰島素分泌促進(jìn)劑。有瑞格列奈和那格列奈，其作用機(jī)制是通過(guò)關(guān)閉ATP依賴性鉀通道，使-細(xì)胞去極化、打開鈣通道而使鈣流入增加，最后誘導(dǎo)B-細(xì)胞分泌胰島素。這類藥物比較適合于調(diào)節(jié)用餐時(shí)調(diào)節(jié)血糖，而且它無(wú)論空腹或進(jìn)食時(shí)均吸收良好，對(duì)空腹及餐后2小時(shí)血糖控制均有很好的效果。胰島素增敏劑。如噻吩烷二酮類(TZDs)的"胰島素增敏劑"，通過(guò)改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)糾正糖與脂代謝異常。它對(duì)胰島素的分泌沒有影響。這類藥物先后上市的有曲格列酮(Troglitazone,TRG)，羅格列酮(Rosiglitazone,RSG)，恩格列酮(Englitazone,ENG)等。早期上市的曲格列酮發(fā)現(xiàn)具有嚴(yán)重的肝毒性，甚至出現(xiàn)肝衰竭而死亡，現(xiàn)已停止使用。羅格列酮的降糖作用較毒副作用相對(duì)較小，己被批準(zhǔn)在我國(guó)正式臨床使用。由于這類藥物可能具有巨大的市場(chǎng)潛力和應(yīng)用前景，國(guó)際上對(duì)該類藥物的研究與開發(fā)仍為熱點(diǎn)，目前正在等待上市的有英國(guó)葛蘭素史克公司的法格列酮(Farglitazar)和日本武田制藥公司的達(dá)格列酮(Darglitazone)等。這類藥物的作用機(jī)制之一，是通過(guò)作用于核受體過(guò)氧化物酶體增殖子活化受體-r(peroxisomeproliferation-activatedreceptor,PPAR-r)起作用，它們通過(guò)激活PPAR-r核受體而提高胰島素受體的敏感性從而改善糖代謝紊亂從而起到降血糖的作用。冃前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)還可見一些有效中西藥復(fù)方制劑，如消渴丸等；但純中藥或植物來(lái)源的糖尿病藥，限于其作用和機(jī)理不夠確切，臨床應(yīng)用面還十分有限。盡管市場(chǎng)上有許多的治療糖尿病的藥物，但它們或多或少都存在著療效不足或(和)毒副作用較大等問(wèn)題。比如說(shuō)，由于2期糖尿病主要是由于胰島素抵抗所致，而其機(jī)體內(nèi)本身的胰島素水平并不低。因此不難想象單純刺激胰島素分泌的藥物對(duì)這批胰島素抵抗的患者是沒有作用的。過(guò)多的胰島素分泌并不能起到降低血糖的效果，而且在胰島素抵抗地情況下過(guò)多地分泌胰島素可能導(dǎo)致胰島素過(guò)高癥(hyperinsulinemia)，增加IGF-1等生長(zhǎng)因子的水平，影響NF-kB和PPAR-r核轉(zhuǎn)錄因子的信號(hào)途徑，最終可能影響直腸細(xì)胞的正常功能而導(dǎo)致直腸癌[KomnouD,etal.，Insulinresistanceanditscontributiontocoloncarcinogenesis.Eup.Biol.Med.2003,228(4):396-405]。即使被作為最有前景、研究也最為活躍的屬"胰島素增敏劑"的TZD類抗糖尿病藥物，在安全性和副作用等方面也存在隱患。除曲格列酮(TRG)由于嚴(yán)重的肝毒(甚至導(dǎo)致肝壞死而需肝移植)而被市場(chǎng)召回外，另一個(gè)同類藥物羅格列酮(RSG,Avandra)由于可能導(dǎo)致心臟出現(xiàn)問(wèn)題而被FDA要求在生產(chǎn)包裝上提出"警示"(.http:〃www.fda.gov/consumer/updates/avandia052507.html)，因此，人們對(duì)這一家族藥物的其它成員的安全性也提高了警惕。另一方面，這類藥物通過(guò)激活PPAR-r受體活性從而增強(qiáng)胰島素敏感性的同時(shí)，還可增加脂肪細(xì)胞的增殖，從而導(dǎo)致體重增加甚至肥胖等。所有這些都限制了現(xiàn)有抗糖尿病藥物的廣泛使用。因此，人們迫切需要活性更強(qiáng)同時(shí)又更加安全的抗糖尿病新藥。我國(guó)有長(zhǎng)期使用中草藥和天然藥物治療糖尿病的歷史，市場(chǎng)上也有許多的抗糖尿病中藥制劑，有些取得了不錯(cuò)的療效，至于中醫(yī)藥典籍中記載有抗糖尿病作用的中草藥或者植物藥或者植物藥就更多了。雖然這些中藥制劑可能存在質(zhì)量和療效不夠穩(wěn)定，但是它們都有一個(gè)共同的特點(diǎn)就是毒副作用比較小和作用機(jī)制"多耙"的特點(diǎn)。這就提示其中可能會(huì)有抗糖尿病的活性成分，且可能毒副作用要較傳統(tǒng)的化學(xué)藥物要小，正是基于這樣一個(gè)前提，我們對(duì)一些有記載用于治療肥胖和糖尿病的中藥和植物進(jìn)行化學(xué)成分研究，并結(jié)合與糖尿病和肥胖有關(guān)的細(xì)胞和分子模型進(jìn)行活性篩選，以圖發(fā)現(xiàn)新型和有良好應(yīng)用前景和市場(chǎng)潛力的天然抗糖尿病新藥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供了一種與已知降血糖藥物或降脂減肥藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)均不相同的具有特定葳類化合物結(jié)構(gòu)的新藥樹豆酮酸A。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的具有結(jié)構(gòu)式I所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)；結(jié)構(gòu)式I本發(fā)明所說(shuō)的具有特定葳類化合物結(jié)構(gòu)的新藥，是指具有如結(jié)構(gòu)式I所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物樹豆酮酸A，并首次公開了其降血糖和降脂減肥方面的藥用價(jià)值。本發(fā)明所說(shuō)的一種植物來(lái)源的蔵類化合物樹豆酮酸A的組合物，是指含有樹豆酮酸A的組合物，并首次公開了其降血糖方面的藥用價(jià)值。本發(fā)明所說(shuō)的特定葳類化合物新藥樹豆酮酸A,可以從豆科植物樹豆提取得到，樹豆又名木豆或賴P豆，學(xué)名是Cq/a鵬cq/朋(L.)Millsp.。本發(fā)明所說(shuō)的一種植物來(lái)源的蔵類化合物樹豆酮酸A的組合物，可以從豆科植物樹豆提取得到，樹豆又名木豆或柳豆，學(xué)名是Cq/a聰;(L.)Millsp.。本發(fā)明所說(shuō)的提取，是本領(lǐng)域工作人員都能夠理解和采用的方法。用含水占體積百分?jǐn)?shù)1%-90%的甲醇或乙醇或丙醇或丙酮，或水飽和的乙酸乙酯、水飽和的氯仿、水飽和的二氯甲垸或者水飽和的正丁醇，在室溫條件下或者在加熱條件下，從植物，特別是從樹豆葉中溶出化學(xué)結(jié)構(gòu)符合結(jié)構(gòu)式I的葳類化合物。加熱提取時(shí)需要加熱至3(TC以上，溶劑沸點(diǎn)溫度以下。提取物再采用本領(lǐng)域工作人員都能夠掌握和采用的柱色譜或薄層色譜的方法分離純化。所用色譜柱填料為硅膠，或辛烷基烷化硅膠，或十八垸基垸化硅膠，或葡聚糖凝膠；所用薄層色譜分離材料為硅膠，或辛垸基烷化硅膠，或十八烷基垸化硅膠。色譜法分得的純品化合物經(jīng)過(guò)對(duì)該化合物測(cè)得的核磁共振、質(zhì)譜、紅外光譜、紫外光譜數(shù)據(jù)的綜合解析，識(shí)別和確定為所述結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的特點(diǎn)在于(1)新的具有顯著降血糖和降脂減肥作用的樹豆酮酸A的結(jié)構(gòu)；而且揭示了這種化合物降血糖作用的機(jī)理適用于治療糖尿病患者包括超重和伴有高血脂的糖尿病患者。(2)—種植物來(lái)源的蔵類化合物樹豆酮酸A的組合物，具有顯著的降血糖藥效，可以制備降血糖藥物或保健食品。(3)藥物樹豆酮酸A可以從完全無(wú)毒的植物樹豆葉中提取，安全性高。經(jīng)發(fā)明人研究，從樹豆葉中提取的降血糖和降脂減肥活性成分樹豆酮酸A的含量達(dá)到藥材干重的0.02%，有較好工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)意義。本發(fā)明所述的具有葳類結(jié)構(gòu)特征的降血糖和減肥藥物的主要藥效學(xué)研究結(jié)果。本發(fā)明所述的具有蔵類結(jié)構(gòu)特征的降血糖和減肥藥物樹豆酮酸A，可以制成片劑、膠囊、顆粒劑、口服液、緩釋制劑、控釋制劑、納米制劑、注射劑等任何一種藥學(xué)上可接受的劑型，運(yùn)用于臨床治療；同時(shí)公開的一種植物來(lái)源的葳類化合物樹豆酮酸A的組合物，具有顯著的降血糖藥效，可以制備降血糖藥物或保健食品。因此，本專利的應(yīng)用前景十分廣闊。植物藥抗糖尿病研究的部分成果，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了豆科植物樹豆(CajanusCajan(L.)Millsp.)提取物(100mg/Kg，腹腔注射)在ob/ob型先天肥胖小鼠以及db/db型糖尿病小鼠試驗(yàn)中表現(xiàn)出明顯的降血糖作用，對(duì)糖的耐受性也明顯提高。隨后進(jìn)行的化學(xué)成分研究分離和鑒定了一系列的蔵類(二苯乙烯類)化合物并發(fā)現(xiàn)其中化合物4(見結(jié)構(gòu)式圖)，在動(dòng)物體內(nèi)具有良好的降血糖和減肥活性，它的化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)紅外光譜(IR)、質(zhì)譜(MS)和核磁共振光譜(NMR)分析，證明為具有全新結(jié)構(gòu)的蔵類衍生物，命名為樹豆酮酸A。圖1從樹豆葉分離純化的化合物結(jié)構(gòu)。試驗(yàn)組8mg/Kg(n=6)對(duì)照組(n=6)圖2樹豆酮酸A(8mg/Kg，腹腔注射)對(duì)成年ob/ob小鼠空腹血糖的影響。圖3樹豆酮酸A(8mg/Kg,腹腔注射)促使ob/ob小鼠糖耐受性提高試驗(yàn)組8mg/Kg(n=6)對(duì)照組(n=6)圖4樹豆酮酸A(8mg/Kg，腹腔注射)明顯減輕ob/ob小鼠的體重具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠了解本發(fā)明具有蔵類結(jié)構(gòu)特征的降血糖和減肥藥物成分的獲取方法和及其藥理作用特點(diǎn)，但是這些實(shí)施例不得理解為對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求的限制。實(shí)施例1提取分離乙醇、甲醇、石油醚、氯仿等溶劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?；層析硅膠為青島海洋化工廠分廠產(chǎn)品。取樹豆葉20kg用95%的乙醇回流提取三次，合并提取液減壓回收乙醇得浸膏1300g。取適量浸膏，于60°(:熱水中充分?jǐn)嚢韬箪o置沉淀，過(guò)濾。沉淀加甲醇溶解，拌硅膠，除去甲醇后依次用石油醚、氯仿提取。得石油醚提取物、氯仿提取物、殘?jiān)齻€(gè)部分。將氯仿提取物上硅膠柱，依次用50-50、30-70、10-90石油醚-氯仿及90:10石油醚-丙酮洗柱。取50-50石油醚-氯仿洗脫部分再上硅膠柱，98-2石油醚-丙酮洗柱，流出液濃縮后析出白色針狀結(jié)晶，甲醇洗滌得化合物3;在30-70石油醚氯-仿洗脫部分析出白色針狀結(jié)晶，石油醚-氯仿中重結(jié)晶得化合物1;10-90石油醚-氯仿洗脫部分析出白色針狀結(jié)晶，經(jīng)石油醚-氯仿中重結(jié)晶得化合物2;90:10石油醚-丙酮洗脫部分分別析出無(wú)色結(jié)晶化合物4和5。實(shí)施例2化合物的結(jié)構(gòu)鑒定紫外光譜用北京普析通用儀器公司TU-1901紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定；紅外光譜用美國(guó)ANALECTRFX65A型光譜儀測(cè)定；質(zhì)譜用QP5000質(zhì)譜儀或美國(guó)API2000LC/MS/MS系統(tǒng)測(cè)定；核磁共振譜用德國(guó)-瑞士Broker公司的DRX-400型400兆超導(dǎo)核磁共振儀測(cè)定，TMS做內(nèi)標(biāo)。結(jié)構(gòu)式參見附圖1，13C核磁共振數(shù)據(jù)見表1?；衔飈:C2()H2202;白色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、微溶于甲醇；與FeCl3反應(yīng)呈黃色。質(zhì)譜給出m/z294的分子離子峰，結(jié)合碳譜的20個(gè)碳信號(hào)和氫譜顯示的22個(gè)質(zhì)子信號(hào)得出分子式為C2CH2202;紅外光譜在3303cm"有強(qiáng)吸收，提示有羥基；核磁共振氫譜信號(hào)表明存在一個(gè)異戊烯基:53.41(2H，d，J=7Hz),S5.10(1H，t，J=7Hz)，S1.67，L76(各3H,s);—個(gè)甲氧基S3.78(3H,s);—個(gè)反式取代雙鍵56.92,7.32(各1H，dd，片16Hz)及一個(gè)單取代苯結(jié)構(gòu)S7.47(2H，d，J=7.5Hz)，7.35(2H，t,J=7.5Hz)，7.25(lH，t，J=7.5)。碳譜的20個(gè)碳信號(hào)中，除去一個(gè)異戊烯基和一個(gè)甲氧基還余下14個(gè)碳，且全為spZ碳，據(jù)此推測(cè)化合物l為反式二苯乙烯類化合物，所有取代基都處于其中的一個(gè)苯環(huán)上；氫譜中S6.68和6.36(各1H，d，J=2.5Hz)信號(hào)表明該取代苯環(huán)上只有兩個(gè)處于間位質(zhì)子，取代基分別為異戊烯基、甲氧基及羥基。經(jīng)與樹豆中已分離出的單體longistylinC的光譜數(shù)據(jù)對(duì)照脾迪華，等.樹豆葉化學(xué)成分研究.中草藥，1985;16(10):2-7]，二者的數(shù)據(jù)完全相符，可知化合物l為longistylinC，即2-異戊烯基-3甲氧基-5羥基葳。說(shuō)結(jié)構(gòu)參數(shù)化合物l:質(zhì)譜m/z:294(M+)，279，251，226，203,188，162，77;紅外光譜Vmaxcm-1:3303，3057，3022，2959，2924，1630(w),1595，1461，1433;^-麗R(CDC13)5ppm:7.47(2H，d，風(fēng)5Hz，2',6'-H)，7.35(2H，t，J=7.5Hz，3'，5'-H)，7.26(1H，t，J=7.5，4'陽(yáng)H)，7.32，6.92(各1H，d，J=16Hz，7，8墨H)，6.68，6.36(各1H，d，J=2.5Hz，4，6鄰，5.10(1H，t，J=7Hz，2"陽(yáng)H)，4.87(1H，m，OH)，3.78(3H，s，OCH3)，3.41(2H，d，J-7Hz，l"-H)，1.67，1.76(各3H，s，4"，5"-CH3)?；衔?:C2()H2202;白色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、丙酮，微溶于甲醇；與FeCb反應(yīng)呈黃色。質(zhì)譜給出m/z294的分子離子峰，結(jié)合碳譜和氫譜得出分子式為C2oH2202;與化合物1一樣，2的核磁共振譜中也出現(xiàn)異戊烯基、一個(gè)甲氧基、一個(gè)反式取代雙鍵、一個(gè)單取代苯基及兩個(gè)處于間位質(zhì)子信號(hào)，僅化學(xué)位移有差別。經(jīng)與樹豆中已分離出的單體longistylinA的光譜數(shù)據(jù)對(duì)照[陳迪華,等.樹豆葉化學(xué)成分研究.中草藥，1985;16(10):2-7],各信號(hào)均相符合,由此確定化合物2為kmgistylinA，即2-異戊烯基-3甲氧基-5羥基蔵。結(jié)構(gòu)參數(shù)化合物2:質(zhì)譜m/z:294(M+)，279，239，226，209，178,165，152，128，115，91，77;紅外光譜vcm":3557，3022，2966，2924，2853，1581,1510，1454;丄H-NMR(CDC13)Sppm:7.50(2H，d,J=7.5Hz，2',6'陽(yáng)H)，7.35(2H，t，J=7.5Hz，3'，5'-H)，7.25(1H，t，J=7.5，4'-H)，7.04，7.00(各1H，d，J=16.5Hz，7，8誦H)，6.65，6.63(各1H，d，J=1.5Hz，4,6-H)，5.29(1H，s，OH)，5.24(1H，t，J=7Hz，2"-H)，3.87(3H，s，OCH3)，3.41(2H，d，J=7Hz，r-H),1.81'1.74(各3H，s，4"，5"-CH3)?；衔?:C21H2()04;白色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、微溶于甲醇；與FeCl3反應(yīng)呈灰黑色。質(zhì)譜給出m/z336的分子離子峰，結(jié)合碳譜和氫譜得出分子式為C2iH2o04;3的核磁共振譜同樣顯示存在一個(gè)異戊烯基、一個(gè)甲氧基、一個(gè)單取代苯基及兩個(gè)孤立質(zhì)子信號(hào)(無(wú)遠(yuǎn)程偶合)，但反式取代雙鍵質(zhì)子偶合信號(hào)消失、同時(shí)多出一個(gè)酯基碳(8166.3)信號(hào)。鑒于前人曾從樹豆葉中分離到一個(gè)含2-羧基的蔵類化合物(6)[陳迪華,等.木豆葉化學(xué)成分研究.中草藥，1985;16(10):2-7]，3與之相比少兩個(gè)氫，我們推測(cè)3為羧基與反式取代雙鍵碳之間形成內(nèi)酯鍵的產(chǎn)物。經(jīng)遠(yuǎn)程ncJH相關(guān)譜證實(shí)其內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，同時(shí)證明羥基，甲氧基，異戊烯基分別存在于3，5，6位。3為新化合物，命名為樹豆內(nèi)酯A(cajanolactoneA)。結(jié)構(gòu)參數(shù)化合物3:UVW匿265，318，350;IRv匪cm管、3426，2975，1687,1629，1612，1575，1498，1469，1380;質(zhì)譜m/z:336,321，268，215，105，77;'H-NMR(CDC13)Sppm:11.28(1H，s,OH)，7.82(2H，d，J=8.0Hz，2',6'-H)，7.44(3H，m，3'，4'，5'-H)，7.04(1H,s,7-H)，6.52(1H，s，3-H)，5.05(1H，brs，2"隱H)，3.89(3H，s，OCH3)，3.45(2H，brd，J=4Hz，r-H)，1.84，1.68(各3H，s，4"，5"-CH3)?；衔?:C21H2()04;白色條狀結(jié)晶，易溶于氯仿、微溶于甲醇；與FeCl3反應(yīng)呈灰黑色。質(zhì)譜給出m/z354的分子離子峰，結(jié)合碳譜和氫譜得出分子式為C21H2205。4的13C核磁共振譜與3比較，大部分?jǐn)?shù)據(jù)一致，但反式取代雙鍵碳信號(hào)消失，多出S41.1(CH2)，196.6(C)兩個(gè)碳信號(hào)，而酯碳化學(xué)位移向低場(chǎng)移動(dòng)了3ppm，同時(shí)^-NMR譜中出現(xiàn)513.5的COOH信號(hào)。由此推測(cè)化合物4為3分子內(nèi)內(nèi)酯環(huán)開環(huán)形成酮基和羧基的產(chǎn)物。經(jīng)比較二者的氫譜數(shù)據(jù)，進(jìn)一步確證4的結(jié)構(gòu)(見附圖l)。4為新化合物，命名為樹豆酮酸A(CajanonicacidA)。結(jié)構(gòu)參數(shù)化合物4:IRVmaxcm":3296，2976，1640，1580，1460，1370;MSm/z:354(M+)，105(C6H5-CO)，77;!H-NMR(DMSO-d6)Sppm:13.50(1H，s,COOH),12.01(1H，OH)，8.02(2H，d，J=7.2Hz，C2'，C6'-H)，7.64-7.40(3H，m，C3'，C4'，C5'-H)，6.49(1H，s，C6-H)，4.85(1H，s,8-OH)，4.66(1H，brs，2"-H)，3.82(3H，s，OCH3)，3.17(2H，s，7-H)，3.16(2H,d,J=4Hz,l"-H)，1.60，1.50(各3H，s，4"，5"-CH3)。化合物5:化合物5:C21H2()04;白色條狀結(jié)晶，易溶于氯仿、微溶于甲醇；與FeCl3反應(yīng)呈灰黑色。質(zhì)譜給出m/z354的分子離子峰，結(jié)合碳譜和氫譜得出分子式為<321!12205,分子量比3多18。5的13C核磁共振譜與3比較，大部分?jǐn)?shù)據(jù)一致，但反式取代雙鍵碳信號(hào)消失，同時(shí)多出S37.4(CH2),106.8(C)兩個(gè)碳信號(hào),單取代苯基1-碳化學(xué)位移向低場(chǎng)移動(dòng)5.2ppm。由此推定5為3的雙鍵與一個(gè)水分子加成形成的半縮酮內(nèi)酯。經(jīng)比較二者的氫譜數(shù)據(jù)，進(jìn)一步確定5的結(jié)構(gòu)(見附圖1，從樹豆葉分離純化的化合物結(jié)構(gòu))。5為新化合物，命名為樹豆內(nèi)酯B(cajanolactoneB)。結(jié)構(gòu)參數(shù)IRvm狀cm":3296，2976，1640，1580，1460，1370;MSm/z:354(M+)，336，321，268，77;iH-NMR(DMSO-d6)Sppm:11.41(1H，OH)，8.02(2H，d，J=7.2Hz，C2'，C6'-H),7.64-7.40(3H，m，C3'，C4'，C5'-H)，6.49(1H，s，C6-H)，4.90(1H,s,8-OH),4.66(1H，brs，2"-H)，3.82(3H，s，OCH3)，3.25(2H，s，7-H)，3.16(2H，d，J=4Hz,l"-H)，1.65，1.50(各3H，s，4"，5"-CH3)。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實(shí)施例3一種天然植物來(lái)源的蔵類化合物組合物的降血糖作用待測(cè)試活性的藥物樹豆葉甲醇提取物的氯仿部位?；瘜W(xué)成分特征前已述及，該氯仿部位含有新發(fā)現(xiàn)的三種芪類化合物樹豆內(nèi)酯A(cajanolactoneA，3)，樹豆酮酸A(CajanonicacidA，4)和樹豆內(nèi)酉旨B(cajanolactoneB，5);以及已知的芪類化合物longistylinC(1),LongstylinA(2)。稱為樹豆酮酸A組合物。藥理實(shí)驗(yàn)方法空腹血糖的測(cè)定:在動(dòng)物空腹4小時(shí)后取血(從早上9:00開始)第0天(未給藥)、第5天和第12天(最后一天給藥)。尾靜脈取血。血糖在下午l.OOpm用葡萄糖分析儀測(cè)定(HemocueAB'Angelholm,Sweden)。見表2表2ob/ob小鼠在給予樹豆酮酸A組合物(100mg/kg)后血糖水平(mg/dL)變化<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結(jié)果ob/ob鼠在第0天有很高的空腹血糖(239±15.0)mg/dL。給藥5天后，血糖水平明顯降低[(170±16.0)mg/dL;對(duì)照組(246土17.0)mg/dL;P<0.01]。給藥12天后，ob/ob鼠的糖水平已到正常水平[(126±20.0)mg/dL;對(duì)照組(240±14.5)mg/dL;P<0.01]，說(shuō)明給藥5天，樹豆酮酸A組合物，即樹豆葉甲醇提取物的氯仿部位就能顯著降低ob/ob鼠的空腹血糖值。實(shí)施例4新蔵類化合物的降血糖作用待測(cè)試活性的藥物樹豆酮酸A方法空腹血糖的測(cè)定動(dòng)物空腹4小時(shí)，給藥后，在第0天(未給藥)、第5天和第12天的上午9點(diǎn)，尾靜脈取血，在下午1:00用葡萄糖分析儀測(cè)定血糖(HemocueAB，Angelholm，Sweden)。結(jié)果見圖2，樹豆酮酸A(8mg/Kg，腹腔注射)對(duì)成年ob/ob小鼠空腹血糖的影響。試驗(yàn)組8mg/kg(n=6)對(duì)照組(n=6)血糖水平在給藥第5天和第12天與對(duì)照組比較，均明顯降低(P<0.01)與糖尿病患者一樣，ob/ob小鼠在第0天有很高的空腹血糖(238士21.5)mg/dL。給藥5天后，血糖水平明顯降低[(161土15.4)mg/dL;對(duì)照組(243士21)mg/dL;P<0.01]。給藥12天后，ob/ob小鼠的血糖水平已到正常水平[(119土3.3)mg/dL;對(duì)照組(240±12.9)mg/dL;P<0.01]，說(shuō)明給藥5天，樹豆酮酸A就能顯著降低ob/ob小鼠的空腹血糖值。實(shí)施例5新蔵類化合物的降血糖作用待測(cè)試活性的藥物樹豆酮酸A方法糖耐受試驗(yàn)。在第0天(未給藥)和第12天(最后一天給藥)進(jìn)行。動(dòng)物空腹4小時(shí)，腹腔注射葡萄糖2g/Kg，然后在時(shí)間點(diǎn)O(未注射前)，給糖后30、60和120分鐘點(diǎn)取尾靜脈血測(cè)血糖。結(jié)果見圖3，樹豆酮酸A(8mg/Kg，腹腔注射)促使obZob小鼠糖耐受性提高。從圖中可以看出，在第0天時(shí)，對(duì)照組的ob/ob小鼠的血糖呈現(xiàn)基線高血糖(basalhyperglyemia)。腹腔注射葡萄糖后，高血糖癥明顯加深，120分鐘以后仍未能回到基線，表明它為糖不耐受性，給藥12天后，ob/ob小鼠的糖耐受性明顯改善，達(dá)到22%。(A)圖為給藥組結(jié)果(n=6)，(B)圖為不給藥的對(duì)照組結(jié)果(n=6)。說(shuō)明在60至120分鐘后，給藥組的血糖下降較對(duì)照組有顯著差別(P〈0.01)。實(shí)施例6新葳類化合物的降脂減肥作用對(duì)照組從0到12天體重有增加的趨勢(shì)。給藥組的ob/ob小鼠的體重明顯降低，從第0天(給藥前)的(62.5士2.9)g到第12天的(58.1i3.2)g(P<0.05)結(jié)果見圖4,樹豆酮酸A(8mg/Kg，腹腔注射)明顯減輕ob/ob小鼠的體重8mg/kg(n=6)對(duì)照組(n=6)實(shí)施例7新蔵類化合物的降血糖作用機(jī)理(一)蛋白酪氨酸磷酸酶IB試驗(yàn)A方法原理蛋白酪氨酸磷酸酶IB(proteintyrosinephosphatase1B，PTP1B)是典型的非受體型PTPase家族的成員之一，在胰島素信號(hào)通路中起著重要的負(fù)調(diào)控作用。是治療糖尿病和肥胖癥的新耙點(diǎn)。尋找PTPIB的特異性抑制劑，通過(guò)抑制PTPIB的活性來(lái)提高胰島素信號(hào)通路的敏感性。對(duì)糖尿病和肥胖癥治療有著重要的應(yīng)用前景.PTPIB的抑制活性是通過(guò)以j5-nitrophenylphosphate(PNPP)為底物的方法來(lái)測(cè)定的[Shreslha，S.et.al.,Bioorg.Med.Chem.2007,15,6535]。測(cè)定時(shí)，PTPIB和待測(cè)化合物共同培養(yǎng)10分鐘后加入底物PNPP來(lái)啟動(dòng)催化反應(yīng)。IC5。則為其抑制50%PTPase酶活性的濃度。Reseveratral作為陽(yáng)性對(duì)照物。IC5Q=100pM,另一陽(yáng)性對(duì)照物鉬酸鈉(Na2MoO(2H20)的IC50=21pM，另外一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照物RK-682的IC5G=45pM。B結(jié)果見表3。表3樹酮酸A明顯抑制PEP1B的活性，IC5o=3.5|_iM<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>RK-682是從微生物提取的代謝產(chǎn)物，現(xiàn)已常規(guī)用作PTPase酶抑制實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照物，從上述結(jié)果可以看到樹酮酸A具有很強(qiáng)的抑制PTPIB的活性，從機(jī)理上證明它的降血糖和減肥作用。(二)PPAR試驗(yàn)A方法原理PPAR-r是一類對(duì)脂類代謝，糖尿病以及炎癥密切相關(guān)的重要核轉(zhuǎn)錄因子。它是噻吩垸二酮(TZDs)類抗糖尿病藥物"胰島素增敏"的重要作用靶點(diǎn)。上市的TZD類藥物都是PPAR-r的活化劑(agonist)。它們通過(guò)激活PPAR-r核受體而提高胰島素受體的敏感性從而改善糖代謝紊亂而起到降血糖的作用。然后，PPAR-r活化劑作為抗糖尿病藥物有-…個(gè)明顯的缺陷就是PPAR-r的活化劑在提高胰島素敏感性的同時(shí)，同樣會(huì)刺激脂肪細(xì)胞的增殖，因此，患者長(zhǎng)期服用這類藥物后身體會(huì)發(fā)胖[Harrington，wwetal.,PPARResearch,2007，2007:97125]。這一問(wèn)題的存在，有可能使得這種療法陷入"肥胖一2型糖尿病一TZD藥物治療一降糖+肥胖一胰島素抵抗一2型糖尿病"的怪圈。很顯然，特異性的PPAR-r激活劑并不是最佳的2型糖尿病治療藥物。材料與方法利用基于細(xì)胞的報(bào)告基因檢測(cè)法(cell-basedreportergeneassay)[Krey,G.etal.,MolecualrEndocrinology1997;11:779-791].B結(jié)果見表4。表4樹酮酸A明顯抑制PPAR-r的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>結(jié)果表明樹酮酸A能明顯抑制PPAR-r的活化，IC5o=6.9pM。樹豆酮酸A對(duì)PPAR—a和PPAR-5無(wú)作用，是PPAR-r的特異性配體。但與TZD藥物的作用機(jī)制不同的是，它是PPAR-r的特異性抑制齊i」(antagonist)(IC50=6.9^M)。前已證明，樹豆酮酸A在體內(nèi)具有減肥作用，因此，這一發(fā)現(xiàn)無(wú)論從理論上和應(yīng)用前景上都有重大意義。它與文獻(xiàn)報(bào)道的特異性的PPAR-r抑制劑具有的降糖和減肥的雙重作用[Rieusset,J.etal.MolecularEndocrinology2002;16(11):2628-2644;Nishiu,丄etal.,Diabetes,Obesityaremetabolism2006;8:508-516]相似。因此，樹豆酮酸A為新的天然產(chǎn)物PPAR-r抑制劑，并具有降糖和減肥的雙重功效。樹豆酮酸A還同時(shí)作用在另一個(gè)耙點(diǎn)PTPIB上，兩者都佐證了它的降糖和減肥作用機(jī)制。權(quán)利要求1.一種具有降血糖和降脂減肥作用的菧類天然藥物，其特征在于這種菧類化合物具有結(jié)構(gòu)式I所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)；結(jié)構(gòu)式I2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的蓆類天然藥物，其特征在于這種組合物含有結(jié)構(gòu)式I所示結(jié)構(gòu)的蔵類化合物樹豆酮酸A。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的蓆類天然藥物，其特征在于所述的蔵類化合物樹豆酮酸A從豆科植物樹豆提取得到，樹豆又名木豆或柳豆，學(xué)名是C咖"M,'朋(L.)Millsp.。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的蓆類天然藥物，其特征在于所述的含有蔵類化合物樹豆酮酸A的組合物可以從豆科植物樹豆提取和制備，樹豆又名木豆或賴P豆，學(xué)名是(L.)Millsp.。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的葸類天然藥物，其特征在于所述的含有雖類化合物樹豆酮酸A的組合物有明顯的降血糖作用；通過(guò)腹腔注射該蔵類化合物100mg/kg，與對(duì)照組動(dòng)物相比，可使db/db型糖尿病小鼠的血糖比對(duì)照組動(dòng)物明顯降低；試驗(yàn)組動(dòng)物到給藥的第5天時(shí)血糖明顯降低；在給藥的第12天，試驗(yàn)組動(dòng)物的空腹血糖水平下降到對(duì)照組水平；對(duì)糖的耐受性也明顯提高。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的蔵類天然藥物，其特征在于所述的甚類化合物樹豆酮酸A有明顯的降脂減肥作用；通過(guò)腹腔注射該甚類化合物8mg/kg，可使ob/ob型先天性肥胖小鼠的體重比對(duì)照組動(dòng)物明顯降低；到給藥的第12天時(shí)體重降低達(dá)7%以上。7.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的葸類天然藥物，其特征在于所述的甚類化合物樹豆酮酸A降血糖的作用機(jī)理涉及到作用于包括PPAR7和PTP1B在內(nèi)的分子靶點(diǎn)；經(jīng)測(cè)定，該樹豆酮酸A對(duì)PPARY和PTP1B的半數(shù)有效濃度IC5G分別是8pM和4.5^M。8.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的蔵類天然藥物，其特征在于所制備的糖尿病或肥胖癥藥物是以所述直類化合物樹豆酮酸A作為藥物的活性成分，制成的片劑、膠囊、顆粒劑、口服液、緩釋制劑、控釋制劑、納米制劑、注射劑等任何一種藥劑學(xué)上可接受的劑型。9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的蔵類天然藥物，其特征在于所制備的糖尿病藥物是以所述甚類化合物樹豆酮酸A的組合物作為藥物的活性成分，制成的片劑、膠囊、顆粒劑、口服液、緩釋制劑、控釋制劑、納米制劑、注射劑等任何一種制劑學(xué)上可接受的劑型。10.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的一種具有降血糖和降脂減肥作用的蔵類天然藥物，其特征在于所制備的有益于糖尿病人群的保健食品是以所述葳類化合物樹豆酮酸A或者其組合物作為保健食品的活性成分，制成的片劑、膠囊、顆粒劑、口服液、緩釋制劑、控釋制劑、納米制劑等任何一種制劑學(xué)上可接受的劑型。全文摘要本發(fā)明公開了一種具有降血糖和降脂減肥作用的天然藥物，該藥物為菧類化合物樹豆酮酸A，可制成藥物制劑治療糖尿病或肥胖癥，也可以制造有益于糖尿病患者或肥胖患者的保健食品。本發(fā)明同時(shí)公開了含有樹豆酮酸A的一種植物來(lái)源的組合物，及其用來(lái)治療糖尿病的藥物及保健食品用途。文檔編號(hào)A61K31/192GK101422450SQ20081019901公開日2009年5月6日申請(qǐng)日期2008年10月9日優(yōu)先權(quán)日2008年10月9日發(fā)明者沈小玲,邱聲祥申請(qǐng)人:廣州市允中投資發(fā)展有限公司