專(zhuān)利名稱(chēng)：含蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含,丁 、柚皮苷的抗痔瘡提取物的制備方法。
技術(shù)背景痔瘡是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，中國(guó)自古就有"十人九痔"之說(shuō)。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00710124647.5，名稱(chēng)為"一種抗痔瘡藥物組合物，，文獻(xiàn)公開(kāi)了含 蘆丁、柚皮苷重量百分比為0. 8~4:1的抗誇瘡組合物，具備顯著的抗誇瘡作 用。并具體公開(kāi)了兩種制備方法， 一是直接混合,丁、柚皮苷；二是直接水 提法或含水乙醇提取法，即選中藥材枳殼、槐花(或槐米)，加水煎煮，收集 提取液，提取液濃縮，千燥，收集，得到的中藥提取物；或取中藥材加乙醇 回流提取，收集提取液，濃縮，干燥，所得。直接混合法所用的,丁、柚皮 苷均是純品，這兩種化合物純品通過(guò)中藥提取的制備工藝及純化非常復(fù)雜， 純化路線煩瑣，成本代價(jià)很高；通過(guò)西藥合成的代價(jià)成本也很大，制備抗痔 疳組合物的成本也會(huì)比較高。而直接水提法或含水乙醇提取法制備的組合物 中所含其他水溶性成分會(huì)較多，如蛋白質(zhì)、糖、氨基酸等，且在制備過(guò)程中 提取了部分生物堿成分如辛弗林(能興奮a受體，使血壓升高，且能強(qiáng)心， 抗休克)及N —曱基酪胺等，這些生物堿成分為非黃酮類(lèi)物質(zhì)、非抗痔瘡成 分，會(huì)影響了抗痔瘡組合物的純度。也正因?yàn)樗苄猿煞侄啵瑯悠窞檎掣酄睿?濃縮、干燥轉(zhuǎn)移操作極其麻煩，轉(zhuǎn)移過(guò)程中有效成分損失較大，重復(fù)性不好， 形成的樣品也不便于保存，極易吸潮，生菌霉變。同時(shí)，由于原粗提物為浸 膏，樣品其他雜質(zhì)多，樣品分析前的前處理比較復(fù)雜，稀釋和轉(zhuǎn)移步驟較多， 導(dǎo)致直接分析方法煩瑣。另外，申請(qǐng)人也采取了常規(guī)的大孔樹(shù)脂的制備工藝，從藥材提取，上樣、 洗脫乙醇濃度、干燥等任意工藝參數(shù)去制備，發(fā)現(xiàn)制備的產(chǎn)品較難符合專(zhuān)利
申請(qǐng)?zhí)?00710124647. 5文獻(xiàn)公開(kāi)的含蘆丁、柚皮苷一定重量百分比為0. 8 ~ 4:1，且產(chǎn)品性狀，粘度，吸濕性均太強(qiáng)、含糖量高、非黃酮類(lèi)成分生物堿類(lèi) 成分難去除。且保存，制劑加工非常不便。本發(fā)明正是基于以上制備及分析方法存在問(wèn)題，對(duì)該抗痔瘡組合物進(jìn)行 了深入系統(tǒng)的研究和試驗(yàn)，完成了新的制備工藝，實(shí)施了新的適合工業(yè)化生 產(chǎn)的制備方法，較好地完成了其工業(yè)化的制備工藝，并建立了快速的高效液 相的質(zhì)量分析方法。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種含聲丁、柚皮苷抗誇瘡提取物的制備方法。本發(fā)明的主要方面，首次對(duì)二者藥材進(jìn)行大孔樹(shù)脂吸附制備工藝的研究， 實(shí)質(zhì)是提供了一種總黃酮的大孔樹(shù)脂吸附純化方法，該純化方法是將二者藥 材液經(jīng)上樹(shù)脂柱、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得純化的總黃酮，從 而有效地富集了總黃酮，并去除了雜質(zhì)等。該提取物的制備方法，提取藥材選自枳殼、槐花或槐米，包括以下步驟1)藥材用含水乙醇或水提??；2 )減壓濃縮步驟1)所得提取液；3) 以水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4) 取上清液，過(guò)大孔樹(shù)脂柱吸附，棄流出液，然后用水(用1%鹽酸調(diào)節(jié) PH為5~6)洗滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性水溶液洗脫，棄水洗液， 之后，采用乙醇洗脫吸附柱并收集該乙醇洗脫液；5) 濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到總黃酮提取物。 其中步驟1)中，所述含水乙醇提取是指以含水乙醇或水作溶劑，采用本領(lǐng)域 內(nèi)已知的常規(guī)技術(shù)提取。例如，熱回流提取、滲漉法提取、連續(xù)逆流提取等。 其中，所述含水乙醇是指IO倍體積(與藥材重量比)濃度為50~80°/。的乙醇 水溶液。舉例來(lái)說(shuō)，對(duì)于熱回流提取，其溶劑用量為藥材重量的8~10倍(溶 劑體積/藥材重量，V/W);提取次數(shù)為2 3次；加熱溫度可以為60 ~ 85°C。步驟2)中，提取液濃縮后，其體積(L)優(yōu)選為原藥材(kg)的6~10 倍體積。步驟3 )中，濃縮液優(yōu)選以加3 ~ 5倍體積的水稀釋。步驟4 )中，吸附柱吸附提取液后，優(yōu)選用1 ~ 5BV (用1%鹽酸調(diào)節(jié)PH為 5 ~ 6 )的水洗滌，洗脫液流速優(yōu)選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr;再用中性水溶液洗脫， 棄水洗液，1 ~ 5BV,洗脫液流速優(yōu)選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr。(上述BV ( Bed Volum ) 為樹(shù)脂柱裝載的樹(shù)脂后的柱床體積。樹(shù)脂柱的處理能力與它的樹(shù)脂裝載量成 正比。洗脫液的流量和速率以BV或BV/hr為計(jì)算單位。)所述大孔樹(shù)脂通常為苯乙烯型共聚體的含有酯基或氰基的中等極性吸附 樹(shù)脂，其結(jié)構(gòu)為大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，例如D-101大孔樹(shù)脂、SIPI-40大孔樹(shù)脂、 SIPI-21大孔樹(shù)脂或SIPI-8大孔樹(shù)脂等。在上樣前，應(yīng)當(dāng)對(duì)大孔樹(shù)脂進(jìn)行前處理，，防止無(wú)樹(shù)脂殘存的有害物質(zhì)、 污染及樹(shù)脂再生。在樹(shù)脂前處理時(shí)，通常先用5%HC1洗脫，后用純化水洗至 中性，再用2y。Na0H洗脫，后用純化水洗至中性，連續(xù)生產(chǎn)時(shí)，用95%乙醇洗 柱，后用純化水洗至醇為零度，即可再次使用。步驟5中，得到的抗誇齊提取物進(jìn)行干燥處理，得到干燥形式的提取物， 所用的干燥方法包括真空千燥、噴霧干燥和冷凍干燥等。在采用上迷工藝制備提取物之前，通常需要先將該抗疳瘡藥材進(jìn)行前處 理，即將藥材洗凈，曬干，粉碎，過(guò)篩。本發(fā)明的積極效杲1、 提取效率高。本發(fā)明提供的制備工藝能有效地富集主要活性成分一一 總黃酮，但,丁、柚皮苷重量百分比仍在O. 8-4:1范圍內(nèi)。2、 本發(fā)明和常失見(jiàn)大孔樹(shù)脂制備方法不同，采取兩步溶液去雜法，同時(shí)去 除了各種糖類(lèi)及生物堿等非黃酮類(lèi)成雜質(zhì)先用ly。鹽酸調(diào)節(jié)PH為5~6，洗 滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性水溶液洗脫，棄水洗液。該關(guān)鍵步驟中， 先用酸性水溶液，將非黃酮類(lèi)成分生物堿如辛弗林和N —甲基酪胺能及時(shí)洗 除，后用中性水溶液洗脫，將糖類(lèi)等成分去除。為本發(fā)明的大孔樹(shù)脂制備方
法的創(chuàng)新。3、 該制備工藝重復(fù)性好，工藝參數(shù)可控，溶劑安全無(wú)污染。4、 提取物體積小，提高了中藥的內(nèi)在質(zhì)量；去除了大量的無(wú)機(jī)鹽、粘液 質(zhì)等，從而增強(qiáng)了產(chǎn)品的穩(wěn)定性。5、 減少了產(chǎn)品的吸潮性所得產(chǎn)物為固體黃色粉末，非浸膏狀，不易吸 濕，不易吸潮。非常便于保管，保存，6、 便于成型及使用容易制備成外觀美觀的各種劑型；直接便于臨床及 制劑使用。7、 產(chǎn)物雜質(zhì)去除的多，導(dǎo)致分析方法前處理簡(jiǎn)單，方便，使建立的高效 液相分析方法更加靈敏，準(zhǔn)確，快速(其質(zhì)量控制方法可通過(guò)紫外分光光度 方法和高效液相分析方法進(jìn)行含量測(cè)定和高效液相指紋圖譜進(jìn)行分析，該分 析方法簡(jiǎn)單易控)。8、 大孔樹(shù)脂再生處理方便，大大降低了工藝成本。9、該總黃酮提取物具有明顯的抗痔瘡的作用，二者含量的適合配比能夠 達(dá)到良好治療效果；與其中所含單一成分相比，提取物作用均較單一黃酮明 顯。急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，該提取物的毒性低，具有很好的用藥安全性， 這充分提示了本工藝制備的抗疳瘡提取物的臨床用藥的安全性?？傊景l(fā)明提供的抗疳瘡提取物制備工藝簡(jiǎn)便、快捷、重現(xiàn)性好，污 染小，適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很大的實(shí)用性。為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面結(jié)合附圖，通過(guò)對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施 方式的描述，詳細(xì)說(shuō)明但不限制本發(fā)明。


圖1是蘆丁對(duì)照品HPLC圖譜。圖2是柚皮苷對(duì)照品HPLC圖譜。圖3是含^"丁、柚皮苷抗癢瘡提取物實(shí)施例樣品HPLC代表性圖譜。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所用的抗誇瘡藥材均經(jīng)鑒定為槐米為豆科植物槐(S叩horaJaponicaL.)的干燥花蕾，其千燥花為槐花，枳殼為蕓香科植物酸橙(C"r^ awra/ 〃咖Z..)及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)。實(shí)施例1含，丁、柚皮普抗疳掩提取物的制備方法。從二者藥材中提取 總黃酮提取物取中藥材枳殼、槐花(或槐米)各100/>斤，加入800kg的5W乙醇， 加熱回流提取3h，濾過(guò)，藥渣繼續(xù)加700公斤50%乙醇回流提取2h,濾過(guò)， 藥渣繼續(xù)加600 />斤50%乙醇，濾過(guò)，三次提取液合并，減壓回收溶劑，溫度 45~80°C，濃縮到原藥材的IO倍體積，將濃縮液加3倍熱水稀釋?zhuān)尤脒m量 中藥澄清劑ZTCA+B，離心，去沉淀，取上清液，上樣于D101大孔樹(shù)脂柱(在 上樣前分別用酸，堿，水，醇對(duì)樹(shù)脂柱進(jìn)行前處理)，上樣后先用1BV水(用 1%鹽酸調(diào)節(jié)PH為5 ~ 6 )洗滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性1BV水溶液洗 脫，水溶液棄除，改用2BV的70°/。乙醇洗脫，洗脫液流速為0. 5BV/h，收集該 乙醇洗脫液。繼續(xù)減壓回收溶劑，收集漫膏，噴霧干燥，即得。實(shí)施例2含蘆丁、柚皮苷抗疳齊提取物的制備方法。從二者藥材中提取 總黃酮提取物取中藥材枳殼、槐花(或槐米)各100公斤，加入1噸的85°/。乙醇，力口 熱回流提取3h,濾過(guò)，藥渣繼續(xù)加1噸乙醇回流提取2h，濾過(guò)，兩次提取液 合并。減壓回收溶劑，溫度45 8(TC，濃縮到原藥材的8倍體積，將濃縮液 加5倍熱水稀釋?zhuān)尤脒m量中藥澄清劑ZTC A+B,離心，去沉淀，取上清液， 上樣于DIOI大孔樹(shù)脂柱(在上樣前分別用酸，堿，水，醇對(duì)樹(shù)脂柱進(jìn)行前處 理)，上樣后先用5BV水(用1%鹽酸調(diào)節(jié)PH為5 ~ 6 )洗滌所述吸附柱，棄水 洗液；再用中性5BV水溶液洗脫，水溶液棄除，改用5BV的70y。乙醇洗脫，洗 脫液流速為2. 5BV/h,收集該乙醇洗脫液。繼續(xù)減壓回收溶劑，收集浸膏，噴 霧干燥，即得。實(shí)施例3抗痔疳提取物的質(zhì)量分析下列質(zhì)量分析中所用樣品包括按實(shí)施例1的方法，制備的抗痔瘡總黃酮提取物，共2個(gè)批號(hào)。
按實(shí)施例2的方法，制備的抗癢瘡總黃酮提取物，共3個(gè)批號(hào) 1、含量分析1. 1蘆丁、柚皮香的含量測(cè)定采用高效液相色譜法(HPLC)，以,丁、柚皮苷為對(duì)照品，測(cè)定總黃酮提 取物中二者的含量比例為0. 8 ~ 4: 1。 1. 2. 1色譜條件高效液相色譜儀HP1100系列(美國(guó)惠譜公司)，用十八烷基硅烷健合硅 膠為填充劑，C18色譜柱，用十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑，色譜柱依利 特Kromasil C18， 5 ju m 4. 6 x 250mm， E1812223。流動(dòng)相乙腈-0. 05M醋酸 銨溶液(醋酸調(diào)PH-5 ) (20: 80)柱溫3(TC。；險(xiǎn)測(cè)波長(zhǎng)283nm、 257nm (DAD^企測(cè)儀)。1. 2. 2標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制(1) 柚皮苷對(duì)照品精密稱(chēng)取在105。C下干燥至恒重的柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)品 18.53mg，置100ml容量瓶中，加曱醇溶解，定容，即得0. 1853mg/ml的柚皮 苷對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取上述柚皮普對(duì)照品儲(chǔ)備液3ml，用曱醇稀釋定容至 10ml,即得濃度為0. 05559mg/ml對(duì)照品溶液。(2) 蘆丁對(duì)照品精密稱(chēng)取減壓干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10. 08mg，置 100ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容，即得0. 1008mg/ml的,丁對(duì)照品儲(chǔ)備液。 供試品溶液的制備將定容至500ml的提取液樣品分別精密吸取2ml，用曱醇 稀釋定容至50ml，搖勻，即得。1.2.3測(cè)定方法將對(duì)照品和供試品溶液濾過(guò)，進(jìn)樣量10jal，注入色譜儀 測(cè)定，即得。1. 2. 4結(jié)果柚皮苷、蘆丁對(duì)照品及實(shí)施例樣品HPLC代表性圖譜如圖l-3所示。五批 測(cè)定結(jié)果表明；,丁和柚皮香的含量范圍在1.05-2.1:1。2、 雜質(zhì)分析糖類(lèi)成分分析重蒸水為空白對(duì)照，與蒽酮.碌u酸試液顯色后，于625nm
處測(cè)吸光度。以吸光度(對(duì)葡萄糖質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析，得出其回歸方程， 表明葡萄糖質(zhì)量濃度在，據(jù)吸光度來(lái)計(jì)算其含量。結(jié)果五批測(cè)定結(jié)果表明，含量分別為7%, 8%， 9%， 7%， 5%，平均含量為7%，而直接水提或醇提后粗提 的結(jié)果，多糖含量為20%。顯然通過(guò)兩種方法能直接明顯降低雜質(zhì)多糖含量。生物堿成分分析取實(shí)施例1和2的5個(gè)批號(hào)的樣品曱醇液超聲15 min, 以辛弗林和N —甲基酪胺作對(duì)照品，以氯仿曱醇丙酮氨水(3: 3: 3: l)作展開(kāi)劑。噴O. 5%茚三酮乙醇液，結(jié)果5個(gè)批號(hào)的樣品均無(wú)這兩個(gè)對(duì)照品， 而直接水提或醇提的粗提物均有這兩個(gè)對(duì)照品，說(shuō)明雜質(zhì)得到去除。3、吸濕性實(shí)驗(yàn)分別取實(shí)施例1和實(shí)施例2的5個(gè)批號(hào)的樣品，均放在25°C ± rC恒溫干 燥器(下部放置氯化銨飽和溶液)，相對(duì)濕度為80% ±2%,放置24h,稱(chēng)重， 結(jié)果，實(shí)施例1和實(shí)施例2樣品增重百分率為4%~ 6%,而水提物的增重率為 28%,醇提物的增重率為25%,可見(jiàn)，實(shí)施例1和實(shí)施例2的吸濕性遠(yuǎn)優(yōu)于水 提物或醇提物，易于進(jìn)一步制劑，生產(chǎn)及保存。以上對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本 發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附 權(quán)利要求所定義的范圍。
權(quán)利要求
1、一種含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物制備方法，提取藥材選自枳殼、槐花或槐米，包含下列步驟1)藥材用含50～80％的乙醇或水溶液提?。?)減壓濃縮步驟1)所得提取液；3)以水稀釋濃縮液，并作澄清處理，取上清液；4)取上清液，過(guò)大孔樹(shù)脂柱吸附，棄流出液；然后用PH值為5～6的水洗滌所述吸附柱，棄水洗液；再用中性水溶液洗脫，棄水洗液，之后，采用乙醇洗脫吸附柱并收集該乙醇洗脫液；5)濃縮、干燥乙醇洗脫液，得到總黃酮提取物；其中，所述的含有蘆丁、柚皮苷的抗痔瘡提取物，蘆丁與柚皮苷二者重量百分比為0.8～4∶1。
2、 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中，在 上樣前，對(duì)大孔樹(shù)脂進(jìn)行前處理；所述大孔樹(shù)脂為苯乙烯型共聚體的含有酯 基或氰基的中等極性吸附樹(shù)脂，其結(jié)構(gòu)為大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
3、 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的對(duì)大孔樹(shù)脂前處 理采用5%HC1洗脫，后用純化水洗至中性，再用2WaOH洗脫，后用純化水洗 至中性。
4、 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于連續(xù)生產(chǎn)時(shí)，用95%乙 醇洗柱，后用純化水洗至醇為零度。
5、 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述的步驟l)中，其溶劑用量為藥材重量的8~ IO倍；提取次數(shù)為2 3次；加熱溫度為60~85°C;所述的步驟2)中，提取液濃縮后，其體積為原藥材的6~10倍； 所述的步驟3 )中，濃縮液以加3 ~ 5倍體積的水稀釋?zhuān)? 所述的步驟4)中，吸附柱吸附提取液后，優(yōu)選用1 5BV用1%鹽酸調(diào)節(jié) H為5 ~ 6的水洗滌，洗脫液流速優(yōu)選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr;再用中性水溶液洗 脫，棄7K洗液，1~5BV，洗脫液流速優(yōu)選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr;洗脫乙醇優(yōu)選50 ~ 90%乙醇水溶液，洗脫2 ~ 5BV，洗脫液流速優(yōu)選為0. 5 ~ 2. 5BV/hr。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗痔瘡提取物及其制備方法。該提取物是從槐米、槐花或枳殼提取而得，總黃酮的含量為55％～90％；其中蘆丁、柚皮苷二者含量百分比為0.8～4∶1。從槐米和枳殼藥材為源頭，按照了大孔樹(shù)脂的制備工藝及水煮醇沉的方法，較好地完成了其工業(yè)化的制備工藝方法。所選用大孔樹(shù)脂制備工藝具有簡(jiǎn)單、方便，重現(xiàn)性好，有效地富集了黃酮類(lèi)成分，祛除了其非黃酮類(lèi)成分如三萜類(lèi)化合物、甾體等，成品質(zhì)量易控制，含量高，提取效率高，可工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還提供了包含所述抗痔瘡總黃酮提取物的藥物組合物。該抗痔瘡總黃酮提取物具有良好的抗痔瘡作用、各種炎癥等疾病。
文檔編號(hào)A61P9/14GK101396460SQ20081021698
公開(kāi)日2009年4月1日 申請(qǐng)日期2008年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月29日
發(fā)明者嚴(yán)啟新, 馮漢林, 勇 李, 姿 李, 趙金華, 媛 高 申請(qǐng)人:深圳海創(chuàng)醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司