專利名稱：：一種新的降鈣素的水溶液鼻用噴霧制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地涉及一種新的降鈣素的水溶液鼻用噴霧制劑。
背景技術(shù)：
：降鈣素屬于多肽激素類，用于治療骨質(zhì)疏松、Paget病和惡性高鈣血癥。降鈣素可從多種來源提取，包括鮭魚、鰻、豬和人。其中氨基酸序列與天然形式相同的降鈣素以通過化學(xué)合成和重組技術(shù)制得。降鈣素國內(nèi)現(xiàn)有市售劑型有注射液、凍干粉針劑、鼻用液體噴霧劑三種，給藥途徑有皮下注射、肌肉注射和鼻腔噴霧給藥三種。其中，鼻腔給藥劑型因其用藥方便、依從性好等特點(diǎn)，應(yīng)用性更強(qiáng)，在市場(chǎng)上占據(jù)了越來越多的市場(chǎng)份額。然而，國內(nèi)市場(chǎng)上鼻用液體噴霧劑只有三家上市銷售，其中還有諾華一家為進(jìn)口產(chǎn)品，其產(chǎn)品遠(yuǎn)不能滿足國內(nèi)市場(chǎng)的需要，產(chǎn)品價(jià)格也居高不下。本發(fā)明旨在為國內(nèi)患者提供一種新的鼻腔給藥的液體制劑，從而給國內(nèi)消費(fèi)者更多的用藥選擇，降低廣大患者的用藥成本。由于降鈣素產(chǎn)品在治療骨質(zhì)疏松、Paget病和惡性高鈣血癥等方面良好的療效己經(jīng)為市場(chǎng)認(rèn)可，加上鼻腔給藥較其他給藥方式具有很大優(yōu)勢(shì)，因而本發(fā)明具有良好的應(yīng)用前景。依據(jù)鼻腔給藥降鈣素噴霧劑的專利，采用檸檬酸鹽作為穩(wěn)定劑和促透劑，其報(bào)道的生物利用度還較低，為13.36±3.38%(中國專利CN01807605.X)。本發(fā)明依據(jù)降鈣素的特點(diǎn)和鼻用液體噴霧劑的要求，在眾多的輔料選擇與配比中進(jìn)行篩選，最終確定本發(fā)明中各種輔料的種類以及比例，通過選擇合適的工藝，制備出生物利用度高、穩(wěn)定性良好的鮭降鈣素的液體鼻用噴霧制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種新的降鈣素水溶液鼻用噴霧制劑。評(píng)價(jià)鼻用液體噴霧劑的評(píng)價(jià)指標(biāo)主要是藥物的生物利用度和穩(wěn)定性。由于許多藥物與輔料對(duì)鼻腔纖毛運(yùn)動(dòng)有不良影響，引起比強(qiáng)刺激，長期使用出現(xiàn)鼻粘膜損傷、鼻塞、過敏等不良反應(yīng)。因此選擇不具纖毛毒性、對(duì)患者呼吸保護(hù)功能無影響的輔料是評(píng)價(jià)制劑是否實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的另一重要指標(biāo)。鼻用液體噴霧劑主要通過鼻粘膜被動(dòng)吸收，分子量小于1000、脂溶性的藥物容易被吸收。鮭降鈣素分子量為3431.9，親水性較強(qiáng)，其吸收經(jīng)細(xì)胞間隙的慢速轉(zhuǎn)運(yùn)，生物利用度低，需要添加促透劑，以滿足制劑的要求。pH值是制劑質(zhì)量控制的另一指標(biāo)。低pH值環(huán)境有利于鮭降鈣素的穩(wěn)定性和藥物的吸收，然而低pH值同時(shí)也會(huì)造成表皮細(xì)胞的萎縮，引起鼻腔的不適。滲透壓也是制劑需要考慮的指標(biāo)，為減少刺激性，避免溶血等不良反應(yīng)，制劑應(yīng)維持與細(xì)胞液的等滲或高滲，具體的，應(yīng)該等于或高于250mOsm/L。由于本品設(shè)計(jì)為多次給藥，為防止微生物污染，還需要添加適當(dāng)?shù)姆栏瘎４偻竸┠壳俺Ｓ玫谋钦衬ご偻竸┯心懰猁}、表面活性劑、鰲合劑、脂肪酸、蛋白酶抑制劑等。已知的膽酸鹽、脂肪酸的促透作用與其對(duì)機(jī)體的損傷成正比。在表面活性劑中，十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉等陰離子表面活性劑對(duì)鼻腔有明顯刺激性，因此考慮在非離子表面活性劑中選擇合適的促透劑及用量。對(duì)常用的吐溫20、吐溫80、芐澤(Brij-78)以0.1%的濃度進(jìn)行穩(wěn)定性考察。常用于促透劑的鰲合劑有乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)、乙二胺四乙酸鈉鈣、環(huán)糊精及其衍生物。由于單獨(dú)使用人體生物利用度不能達(dá)到要求，因此考慮選擇乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)或二甲基一P—環(huán)糊精(MD-f3-CD)與非離子表面活性劑組合使用。其中EDTA-Na2在液體制劑中通常作為抗氧穩(wěn)定劑與抑菌劑，常用濃度為l-50mmol/L。同時(shí)，EDTA-Na2用于鼻用制劑，還可以促進(jìn)藥品在鼻粘膜的吸收，其作用機(jī)制可能在于與粘膜上一些活性離子如鈣離子等結(jié)合，造成膜通透性增加而促進(jìn)藥物的吸收。乙二胺四乙酸鈉鈣作為螯合劑也經(jīng)常被應(yīng)用，但由于本制劑可能被用于治療高血鈣癥，乙二胺四乙酸鈉鈣的加入可能造成局部血鈣的增加，因此，不進(jìn)行乙二胺四乙酸鈉鈣的試驗(yàn)。由于鼻腔內(nèi)酶對(duì)進(jìn)入鼻腔的蛋白質(zhì)與多肽類藥物有很強(qiáng)的降解破壞作用，因此抑肽酶存在可以提高多肽類藥物在鼻腔的吸收。pH值穩(wěn)定劑鮭降鈣素在低pH值環(huán)境下穩(wěn)定性較好，且在3.0-5.0范圍內(nèi)pH值越低，穩(wěn)定性越好。過低的pH值會(huì)引起不適的感覺，當(dāng)pH值2.9時(shí)，會(huì)造成表皮細(xì)胞的萎縮。綜合考慮，選擇3.5-4.5pH值有利于本品的穩(wěn)定性，同時(shí)盡可能減少對(duì)鼻腔的刺激。依據(jù)中國專利CN01807605.X，控制pH值為3.7。依據(jù)中國藥典2005年版二部規(guī)定的常用緩沖鹽體系，緩沖范圍在pH值3.5-4.5的有磷酸-三乙胺緩沖體系、磷酸-磷酸鹽緩沖體系、醋酸-醋酸鈉緩沖體系、檸檬酸-檸檬酸鹽緩沖體系、擰檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液體系、乙醇-三乙胺緩沖液體系、甲酸鈉緩沖液等。由于甲酸、醋酸具有刺激性氣味，對(duì)鼻腔粘膜具有刺激性，因此對(duì)不同濃度的磷酸-磷酸鹽緩沖體系、磷酸-三乙胺緩沖體系、檸檬酸-檸檬酸鹽緩沖體系、檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液體系pH值緩沖能力進(jìn)行了考察。在該pH值范圍內(nèi)，檸檬酸-檸檬酸鹽緩沖體系、檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液體系、磷酸-磷酸鹽緩沖體系均有較強(qiáng)的pH緩沖能力，因此采用磷酸-磷酸鹽緩沖體系，對(duì)比檸檬酸-檸檬酸鹽緩沖體系作為考察對(duì)象。滲透壓調(diào)節(jié)劑鼻用溶液需要適當(dāng)?shù)臐B透壓，常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑有氯化鈉、甘露醇、乳酸等。經(jīng)過試驗(yàn)，0.75%的氯化鈉或者5%的甘露醇濃度均可給與制劑適當(dāng)?shù)臐B透壓。防腐劑由于本品設(shè)計(jì)為多次給藥，為防止微生物污染，需要添加適當(dāng)?shù)姆栏瘎?。在常用的抑菌劑中，選擇了苯乙醇、苯甲醇、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、苯扎溴銨進(jìn)行本品的試驗(yàn)。以尼泊金類防腐劑常用用量，用于本制劑的溶液中，不能完全溶解。而采用苯乙醇、苯甲醇作為防腐劑，制劑含量回收率有明顯的降低。采用0.01%苯扎溴銨作為防腐劑對(duì)纖毛毒性較小，經(jīng)試驗(yàn)其抑菌效果良好，可在40日內(nèi)抑制約10—6cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的生長。依據(jù)研究結(jié)果，確定了一種新的降鈣素水溶液鼻用噴霧制劑，其主要組成是0.222mg/ml的降鈣素、20mmol/L的磷酸緩沖液、20隱ol/L的乙二胺四乙酸二鈉、lug/ml抑肽酶，0.75%的氯化鈉或5%的甘露醇、0.1%的節(jié)澤、0.01%的苯扎溴銨，制備成規(guī)格為0.222mg/ml的制劑。依據(jù)臨床用藥量，適于制成每個(gè)包裝O.l-5ml的制劑。在制劑研究中，目標(biāo)產(chǎn)品的穩(wěn)定性是制劑成功與否的關(guān)鍵所在，該指標(biāo)的決定因素除了主藥的性質(zhì)外，最重要的就是輔料的組成種類及配比。因此，各種輔料按照一定比例組合是所有制劑研究的難點(diǎn)和焦點(diǎn)。經(jīng)過大量的處方考察，我們從眾多處方中獲得了一種不同于目前任何文獻(xiàn)報(bào)道的處方組成(一種藥物組合物)，穩(wěn)定性良好，為降鈣素水溶液制劑領(lǐng)域的又一可選實(shí)用方案，具有很好的產(chǎn)業(yè)化前景。由本品所需組分及預(yù)試驗(yàn)情況，設(shè)計(jì)正交設(shè)計(jì)法，以影響因素試驗(yàn)(高溫4(TC、強(qiáng)光4000土5001xx分別放置10天)后鮭降鈣素鼻用噴霧劑含量和有關(guān)物質(zhì)的變化作為制劑穩(wěn)定性的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行處方篩選。處方設(shè)計(jì)如表l。5表l鮭降鈣素鼻用噴霧劑處方的篩選(mg/ml)處方甜.成RlR2R3R4R5R6R7R8R9鮭降鈣素0.2220.2220.2220.2220.2220.2220.2220.2220.222氯化鈉7.57.57.57.57.57.57.57.57.5苯扎漠銨1.01.01.01.01.01.01.01.01.0吐溫-201.01.01.0吐溫-801.01.01.0芐澤-781.01.01.0EDTA-Na27.447.447.44MD-P-CD10.010.010.0磷酸氫一鈉2.842.842.842.842.842.842.842.842.84磷酸調(diào)".pH3.7調(diào)節(jié)pH3.7調(diào)節(jié)pH3.7調(diào)pH3.7調(diào)節(jié)pH3.7調(diào)節(jié)pH3.7調(diào)ApH3.7調(diào)節(jié)pH3.7調(diào)節(jié)pH3.7對(duì)以上處方的穩(wěn)定性考察結(jié)果表明，增加EDTA-Na2或MD-e-CD，樣品穩(wěn)定性增加，但添加兩種輔料樣品穩(wěn)定性無明顯差異。同時(shí)，添加吐溫-20、吐溫-80或芐澤-78樣品穩(wěn)定性無明顯差異。對(duì)處方R2、R3、R5、R6、R8、R9測(cè)定其生物利用度，結(jié)果表明生物利用度R8>R9大于其余處方，表明在試驗(yàn)劑量下，使用芐澤的制劑生物利用度高，促透效果好；EDTA-Na2促透效果比試驗(yàn)量MD-P-CD強(qiáng)，由于EDTA-Na2同時(shí)還有抗氧劑和抑菌劑的作用，因此選用EDTA-Na2作為制劑的促透劑。依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果再次設(shè)計(jì)處方，結(jié)果見表2。6表2鮭降鈣素鼻用噴霧劑處方的再次篩選(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>對(duì)表2處方的影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明，采用5%甘露醇比采用0.75%氯化鈉制劑具有更好的穩(wěn)定性；增加EDTA-Na2用量到20mmol/L可提高樣品的穩(wěn)定性，但繼續(xù)增加其用量不會(huì)對(duì)穩(wěn)定性造成明顯的影響。因此在制劑中選用EDTA-Na2的濃度為20mmol/L。同時(shí)使用抑肽酶可以增強(qiáng)樣品的穩(wěn)定性。依據(jù)權(quán)利要求l-4，本品處方組成為作為主藥的降鈣素、作為促透劑的芐澤和乙二胺四乙酸二鈉、作為滲透壓調(diào)節(jié)劑的甘露醇或氯化鈉、作為pH值穩(wěn)定劑的磷酸氫二鈉和磷酸、作為防腐劑的苯扎溴銨，還可以含有作為促透劑的抑肽酶。按照每月28次的用量確定制品規(guī)格為每支3.5ml。制劑處方為鮭降鈣素777mg(以降鈣素計(jì))芐澤3.5g乙二胺四乙酸二鈉3.5g氯化鈉31.5g磷酸氫二鈉25.07g5%苯扎溴銨溶液7ml磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.7加注射用水至3500ml制成1000支鮭降鈣素鼻用噴霧劑制備工藝內(nèi)包材的清洗與滅菌制劑所用內(nèi)包裝為5.mlU-save玻璃瓶和定量鼻用噴霧泵。其中定量鼻用噴霧泵為微生物限度檢驗(yàn)合格包裝，檢驗(yàn)合格后直接使用。U-save玻璃瓶分別使用純化水、注射用水洗滌，滅菌高壓空氣吹干，經(jīng)隧道烘箱35(TC烘干15分鐘，備用。內(nèi)包裝使用前檢驗(yàn)澄清度和可見異物。鮭降鈣素鼻用噴霧劑的配制按處方量取芐澤、乙二胺四乙酸二鈉、氯化鈉、磷酸氫二鈉、5%苯扎溴銨溶液、加入到80%處方量水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.7;按處方量取鮭降鈣素，用10%處方量水溶解。混合，用0.45um濾膜過濾除菌，加水至處方量。其中所用工藝用水均為注射用水。半成品檢驗(yàn)溶液配制后取樣檢驗(yàn)，控制項(xiàng)目pH值、含量、有關(guān)物質(zhì)。灌裝根據(jù)標(biāo)示裝量以注射用水調(diào)整灌裝裝量，換藥液開始灌裝。取樣檢查灌裝裝量。灌裝過稃中隨時(shí)檢驗(yàn)裝量穩(wěn)定性。灌裝機(jī)灌裝、壓蓋同機(jī)同步進(jìn)行。灌裝完畢清場(chǎng)。初檢灌裝完畢后，產(chǎn)品進(jìn)行初檢，燈檢溶液的澄清度與可見異物。入庫初檢合格產(chǎn)品計(jì)數(shù)，入庫。檢驗(yàn)取樣，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)。外包裝產(chǎn)品檢驗(yàn)合格后，貼標(biāo)簽，進(jìn)行外包裝。樣品的穩(wěn)定性考察依照處方設(shè)計(jì)制備各個(gè)處方的樣品，分別置于40。C、光照強(qiáng)度4000士5001xx條件下10天，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果見表3。表3處方考察其穩(wěn)定性考察<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>藥品的生物利用度與血漿濃度的測(cè)定參照中國藥典2005年版二部降鈣素生物測(cè)定法，通過測(cè)定樣品鼻腔給藥與靜脈給藥造成血鈣降低的程度，測(cè)定降鈣素效價(jià)，確定藥品通過鼻腔給藥的生物利用度。溶劑的配制稱取牛血清白蛋白0.2g,加水20ml，混勻，置56'C水浴種保溫1小時(shí)，取出放至室溫，于-lcrc-2crc下凍存。實(shí)驗(yàn)前取出，于36'c士a5'c水浴中融化。加至含有2g醋酸鈉的水溶液中，加入濃鹽酸約3.5ml，再加水至總量近200nd，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至3.54.5，最后加水至200ml。供試品溶液的配制用上述溶劑，按高低劑量組配成2種濃度的溶液，高濃度溶液濃度控制在10ug/25ul。高低濃度的比值(r)為2:1。取健康合格、同一來源、體重220250g、體重差不超過20g的雌性Wistar大鼠，試驗(yàn)前禁食16小時(shí)，自由飲用蒸餾水，按體重隨即分組，每組不少于5只。組合使用氯胺酮和塞拉嗪麻醉大鼠，然后在頸動(dòng)脈中插入導(dǎo)管。該導(dǎo)管上固定三通閥，由該閥可對(duì)血液進(jìn)行取樣，并可用包含肝素的生理鹽水替換血液。將微量移液管的尖部插入大鼠鼻腔中8mm，由此向大鼠鼻腔中給藥經(jīng)過配制的鮭降鈣素(sCT)。對(duì)照組尾靜脈注射相同劑量的鮭降鈣素(sCT)。對(duì)于單劑量研究，高低劑量組分別給藥10ug和5ug的sCT。在多劑量研究中，在0、30、60和90分鐘時(shí)分四次給藥sCT,每次給藥體積為25ul，總劑量高低劑量組分別為40ug和20ug。在單劑量研究中，在給藥前以及給藥后5、15、30、60和120分鐘時(shí)收集血樣。在多劑量研究中，在給藥前以及首次給藥后的30、60、90、120和150分鐘時(shí)收集血樣。在任何其他給藥前總是進(jìn)行血樣的收集。將每個(gè)血樣(0.5ml)收集在lml經(jīng)肝素化的注射器中，然后轉(zhuǎn)移至冷凍的1.5ml聚丙烯管中，該聚丙烯管包含10ul的肝素(500U/ml)。在約3000rpm、2-8。C下離心該管20分鐘，然后將血漿上清夜轉(zhuǎn)移至在-2(TC下儲(chǔ)存的微離心管中。用鄰甲酚酞絡(luò)合劑測(cè)定血鈣值。照生物檢定統(tǒng)計(jì)法(中國藥典2005年版二部附錄XIV)中量反應(yīng)平行測(cè)定法計(jì)算效價(jià)及實(shí)驗(yàn)誤差。由血漿sCT效價(jià)對(duì)時(shí)間所作的圖中的曲線下面積計(jì)算生物利用度的值(相當(dāng)于靜脈注射)。表4不同處方組成的sCT大鼠鼻內(nèi)給藥時(shí)的生物利用度與血漿濃度處方生物利用度(％±sdev)最大血漿濃度(％±sdev)R825.73±0.4725.84±0.82R924.46±0.3824.43±0.76Rl-2(含抑肽酶)28.54±2、7928.62±3.03Rl-6(含抑肽酶，檸檬酸鹽)24.13±3.1424.45±3.459具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取鮭降鈣素777mg用注射用水溶解制成含鮭降鈣素2.22mg/ml的溶液；將芐澤3.5g、乙二胺四乙酸二鈉鹽3.5g、磷酸氫二鈉25.07g、氯化鈉31.5g、5%苯扎溴銨溶液7ml溶解于80%量注射用水，用磷酸調(diào)解pH值至3.7，混合，用0.45txm濾膜過濾除菌，補(bǔ)加注射用水至3500ml，即得。實(shí)施例2取鮭降鈣素777mg用注射用水溶解制成含鮭降鈣素2.22mg/ml的溶液；將芐澤3.5g、乙二胺四乙酸二鈉鹽3.5g、磷酸氫二鈉25.07g、3.5mg抑肽酶、氯化鈉31.5g、5%苯扎溴銨溶液7ml溶解于80。/。量注射用水，用磷酸調(diào)解pH值至3.7，混合，用0.45um濾膜過濾除菌，補(bǔ)加注射用水至3500ml，即得。權(quán)利要求1、一種降鈣素的水溶液鼻用噴霧制劑，其主要組成是0.05-1mg/ml降鈣素、10-50mmol/L磷酸緩沖液、0.5-50mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉、0.5-2％的氯化鈉或0.5％-10％的甘露醇、0.01％-5％的芐澤、0.01％-0.2％的苯扎溴銨，制備成單位體積為0.1-10ml的制劑。2、如權(quán)利要求l所述的制劑，其主要組成是0.222mg/ml降鈣素、20mmol/L磷酸緩沖液、20誦ol/L的乙二胺四乙酸二鈉、0.75%的氯化鈉或5%的甘露醇、0.1%的芐澤、0.01%-0.2%苯扎溴銨，制備成規(guī)格為0.222mg/ml，每支0.1-5ml的制劑。3、如權(quán)利要求l所述的制劑，其又一特征是還可以含有0.06-2ug/ml抑肽酶。4、如權(quán)利要求3所述的制劑，其主要組成是0.222mg/ml降鈣素、20鵬ol/L磷酸緩沖液、20咖ol/L的乙二胺四乙酸二鈉、lug/ml抑肽酶，0.75%的氯化鈉或5%的甘露醇、0.1%的芐澤、0.01%的苯扎溴銨，制備成規(guī)格為0.222mg/ml，每支0.l-5ml的制劑。5、權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的制劑在制備用于治療骨質(zhì)疏松、Paget病和惡性高鈣血癥等的藥物中的應(yīng)用。全文摘要一種新的降鈣素的水溶液鼻用噴霧制劑，本發(fā)明屬于制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，通過對(duì)多種輔料的篩選，從眾多處方中獲得了一種不同于目前任何文獻(xiàn)報(bào)道的組成，在制備用于治療骨質(zhì)疏松、Paget病和惡性高鈣血癥等的藥物中的應(yīng)用。這種新制劑的主要組成是0.05-1mg/ml降鈣素、10-50mmol/L磷酸緩沖液、0.5-50mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉、0.06-2ug/ml抑肽酶、0.5-2％的氯化鈉或0.5％-10％的甘露醇，0.01％-5％的芐澤、0.01％-0.2％的苯扎溴銨，制備成單位體積為0.1-10ml的制劑。文檔編號(hào)A61P19/10GK101549149SQ200810222319公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2008年9月17日優(yōu)先權(quán)日2008年9月17日發(fā)明者劉成東,強(qiáng)史,吳彥卓,張甲鵬,徐明波,李振武,王俊玲,白玉倩,竇學(xué)義,遙陳申請(qǐng)人:北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司;北京雙鷺立生醫(yī)藥科技有限公司