專利名稱：：氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及三肽芐酯，尤其涉及一系列氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯及其制備方法，本發(fā)明還進一步涉及它們的抗腫瘤藥理作用；屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：癌癥是全球死亡率最高的病因之一。DNA嵌合類型的抗癌藥以DNA為直接靶點，已成為抗癌藥的重要分支，引起廣泛關(guān)注。本發(fā)明認識到色氨酰_色氨酸芐酯可能嵌入腫瘤細胞的DNA，在它們的N端引入天然氨基酸之后，可協(xié)助嵌入作用，因而可增強抗腫瘤作用。按照這種構(gòu)想，發(fā)明人發(fā)明了具有抗腫瘤作用的氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供一類具有抗腫瘤活性的氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯。本發(fā)明的目的之二是提供一種制備上述具有抗腫瘤活性的氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯的制備方法。本發(fā)明的目的之三是提供一種能夠治療腫瘤的藥物組合物。本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的—類具有抗腫瘤活性的氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯，其結(jié)構(gòu)為通式I所示AA—Trp—Trp—0BzlI其中，AA選自丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸或酪氨酸殘基。—種制備上述氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯的方法，該方法包括(1)將叔丁氧羰基保護的色氨酸和色氨酸芐酯耦聯(lián)，合成叔丁氧羰基色氨酰色氨酸節(jié)酯；(2)脫去叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯的叔丁氧羰基，制備得到色氨酰色氨酸芐酯；(3)將色氨酰色氨酸芐酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯(lián)，制備得到叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯；(4)將叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯脫去叔丁氧羰基，即得。其中，步驟(l)中優(yōu)選在DCC、HOBt、NMM和THF存在下將叔丁氧羰基保護的色氨酸和色氨酸芐酯耦聯(lián)，合成叔丁氧羰基色氨酰色氨酸芐酯；步驟(2)中優(yōu)選的在氯化氫/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯，脫去叔丁氧羰基，制備得到色氨酰色氨酸芐酯；步驟(3)中優(yōu)選在DCC、HOBt、NMM和THF存在下將色氨酰色氨酸節(jié)酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯(lián)，制備得到叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯；所述的叔丁氧羰基保護的氨基酸優(yōu)選自叔丁氧羰基保護的丙氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬氨酸、叔丁氧羰基保護的谷氨酸、叔丁氧羰基保護的苯丙氨酸、叔丁氧羰基保護的甘氨酸、叔丁氧羰基保護的組氨酸、叔丁氧羰基保護的異亮氨酸、叔丁氧羰基保護的賴氨酸、叔丁氧羰基保護的亮氨酸、叔丁氧羰基保護的蛋氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬酰胺、叔丁氧羰基保護的谷氨酰胺、叔丁氧羰基保護的精氨酸、叔丁氧羰基保護的絲氨酸、叔丁氧羰基保護的蘇氨酸、叔丁氧羰基保護的纈氨酸、叔丁氧羰基保護的色氨酸或叔丁氧羰基保護的酪氨酸；步驟(4)中優(yōu)選在氯化氫/乙酸乙酯溶液中叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯脫去叔丁氧羰基。本發(fā)明在腫瘤細胞模型和小鼠S180肉瘤模型上評價本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性，實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明化合物具有確切的抗腫瘤活性；毒性評價結(jié)果表明，本發(fā)明化合物用藥安全，未見毒副反應(yīng)，臨床上可作為抗腫瘤劑應(yīng)用。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了一種治療治療腫瘤的藥物組合物，該藥物組合物由治療上有效量的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成。圖1本發(fā)明化合物的合成路線圖。i)DCC，H0Bt，匪，THF;ii)4NHCl/EtOAc，0°C，30min;Boc-AA選自叔丁氧羰基保護的丙氨酸、天冬氨酸單芐酯、谷氨酸單芐酯、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、二叔丁氧羰基保護的賴氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、硝基精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸或酪氨酸.圖2本發(fā)明化合物(NWW)在89iimol/kg，8.9iimol/kg和0.89iimol/kg三種劑量下對S180荷瘤小鼠的抑瘤率(n=12)。具體實施例方式為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當理解為對本發(fā)明的限制。實施例1制備Ala-Trp-Trp-0Bzl(AWW)1)制備Boc-Trp-Trp-0Bzl冰浴冷卻下往置于250ml圓底燒瓶中的由5.00g(12.6mmo1)鹽酸L-色氨酸芐酯、4.22g(l.39mmol)Boc-L-色氨酸和1.87g(l.39mmol)H0Bt與100mlTHF構(gòu)成的溶液中滴入3.43g(l.67mmol)DCC和40mlTHF構(gòu)成的溶液。往得到的溶液通過滴入NMM調(diào)pH值到8。反應(yīng)混合物0t:攪拌2小時后抽濾，濾液減壓濃縮至干。得到的殘余物用150ml乙酸乙酯溶解、置于250ml分液漏斗中、依次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mlX6)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mlX3)、5%硫酸氫鉀水溶液洗(30mlX5)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mlX3)。合并的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到7.04g(96.1%)目標化合物，為無色固體。Mp189-191°C^Sr/MSOnA^SSUM+Hr-tOC^e]2)制備HC1Trp-Trp-OBzl將2.00g(3.44mmol)Boc-Trp-Trp-OBzl置于250ml圓底燒瓶中并用5ml乙酸乙酯溶解。冰浴下往得到的溶液中緩慢滴入16ml4NHCl/EtOAc。反應(yīng)混合物0。C攪拌1.5小時后，向其中加入無水乙醚使產(chǎn)物析出，靜置，傾出上清液，反復(fù)數(shù)次后，過濾得到1.74g(97.8%)標化合物，為無色固體。Mp197-199°C;ESI+/MS(m/e)481[M+H]+.3)制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl冰浴冷卻下往置于100ml圓底燒瓶中的由517mg(l.OOmmol)HClTrp-Trp-OBzl、208mg(1.10,1)Boc-Ala-OH和149mg(1.10,1)H0Bt與15mlTHF構(gòu)成的溶液中滴入272mg(l.20mmol)DCC和5mlTHF構(gòu)成的溶液。往得到的溶液通過滴入NMM調(diào)pH值到8。反應(yīng)混合物Ot:攪拌2小時后抽濾，濾液減壓濃縮至干。得到的殘余物用50ml乙酸乙酯溶解、置于100ml分液漏斗中、依次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mlX6)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mlX3)、5X硫酸氫鉀水溶液洗(30mlX5)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mlX3)。合并的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到641mg(98.5%)目標化合物，為無色固體。Mp202-204°C;ESl7MS(m/e)652[M+H]+.4)制備Ala-Trp-Trp-OBzl將500mg(0.778mmol)Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl置于100ml圓底燒瓶中并用2ml乙酸乙酯溶解。冰浴下往得到的溶液中緩慢滴入5ml4NHCl/EtOAc。反應(yīng)混合物0。C攪拌1小時后，向其中加入無水乙醚使產(chǎn)物析出，靜置，傾出上清液，反復(fù)數(shù)次后，過濾得到449mg(98X)目標化合物，為無色固體。Mp205-207°C;ESI+/MS(m/e)552[M+H]+;[a]^=11.03(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.885(m，2H)，8.690(d，J=7.3Hz，1H)，8.591(d，J=8.lHz，1H)，7.652(d，J=7.8Hz，1H)，7.502(d，J=7.8Hz，1H)，7.153(m，13H)，5.033(m，2H)，4.675(m，2H)，3.773(m，1H)，3.092(m，4H)，1.319(m，3H)實施例2制備Gly-Trp-Trp-OBzl(GWW)1)制備Boc-Gly-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由193mg(l.lOmmol)Boc-Gly制得414mg(65.0%)目標化合物，為無色固體。Mp206-208°C;ESI+/MS(m/e)638[M+H]+.2)制備Gly-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.785mmo1)Boc-Gly-Trp-Trp-OBzl制得446mg(99.1%)目標化合物，為無色固體。Mp201-203。C;ES工7MS(m/e)538[M+H]+;1)制備Boc-Phe-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作由292mg(l.lOmmol)Boc-Phe制得682mg(93.8%)目標化合物，為無色固體。Mp200-202°C;ESI+/MS(m/e)728[M+H]+.2)制備Phe-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.688mmo1)Boc-Phe-Trp-Trp-OBzl制得432mg(97.5%)目標化合物，為無色固體。Mp199-201°C;ES工VMS(m/e)628[M+H]+;[a]，=11.23(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.962(m，2H)，8.965(d，J=8.0Hz，1H)，8.795(d，J=7.2Hz，1H)，7.642(d，J=7.9Hz，1H)，7.523(d，J=11.4Hz，1H)，7.179(m，18H)，5.032(m，2H)，4.679(m，2H)，3.408(m，1H)，3.096(m，6H).實施例4制備Leu-Trp-Trp-OBzl(LWW)1)制備Boc-Leu-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作由254mg(l.lOmmol)Boc-Leu制得675mg(97.4%)目標化合物，為無色固體。Mp206-208°C;ESI+/MS(m/e)694[M+H]+.2)制備Leu-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.72lmmo1)Boc-Leu-Trp-Trp-OBzl制得450mg(99.2%)目標化合物，為無色固體。Mp222-224。C;ES工7MS(m/e)594[M+H]+;[a]-=15.76(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.905(m，2H)，8.751(d，J=8.lHz，1H)，8.703(d，J=7.2Hz，1H)，7.625(d，J=7.9Hz，1H)，7.492(d，J=7.9Hz，1H)，7.152(m，13H)，5.023(m，2H)，4.633(m，2H)，3.748(m，1H)，3.147(m，4H)，1.590(m，1H)，0.893(m，6H).實施例5制備Ile-Trp-Trp-OBzl(I1WW)1)制備Boc-Ile-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由254mg(l.lOmmol)Boc-Ile制得687mg(99.2%)目標化合物，為無色固體。Mp212_214°C;ESI7MS(m/e)694[M+H]+2)制備Ile-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala_Trp_Trp_OBzl的操作，由500mg(0.72lmmo1)Boc-Ile-Trp-Trp-OBzl制得429mg(94.6%)目標化合物，為無色固體。Mp228-230。C;ES工7MS(m/e)594[M+H]+;[a]^=17.00(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.970(m，2H)，8.706(d，J=7.2Hz，1H)，8.640(d，J=8.0Hz，1H)，7.235(m，13H)，5.029(m，2H)，4.671(m，2H)，3.456(m，1H)，3.112(m，4H)，1.252(m，1H)，1.070(m，2H)，0.818(m，6H)實施例6制備Val-Trp-Trp-OBzl(VWW)1)制備Boc-Val-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由239mg(l.lOmmol)Boc-Val制得642mg(95%)目標化合物，為無色固體。Mp210_212°C;ESI7MS(m/e)680[M+H]+2)制備Val-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.736mmo1)Boc-Val-Trp-Trp-OBzl制得440mg(97%)目標化合物，為無色固體。Mp200-202。C;ES工7MS(m/e)580[M+H]+;[a]^=13.43(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.895(m，2H)，8.710(d，J=7.3Hz，1H)，8.574(d，J=7.9Hz，1H)，8.637(d，J=7.9Hz，1H)，7.480(d，J=7.9，1H)，7.176(m，13H)，5.042(m，2H)，4.722(dd，J=5.4Hz，J=13.5Hz，lH)，4.631(dd，J=7.lHz，J=14.3Hz，1H)，3.599(m，1H)，3.146(m，4H)，2.075(m，1H)，0.899(m，6H).實施例7制備Ser-Trp-Trp-OBzl(SWW)1)帶[J備Boc-Ser-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由226mg(l.lOmmol)Boc-Ser-OH制得563mg(84.4%)目標化合物，為無色固體。Mp195-197°C;ESI+/MS(m/e)668[M+H]+.2)制備Ser-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.750mmo1)Boc-Ser-Trp-Trp-OBzl制得418mg(92.4%)目標化合物，為無色固體。Mp218-220。C;ES工VMS(m/e)568[M+H]+;[a]^=25.37(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.972(m，2H)，8.703(m，2H)，7.283(m，15H)，5.081(m，2H)，4.631(m，2H)，4.087(m，2H)，3.450(m，1H)，3.140(m，4H).實施例8制備Thr-Trp-Trp-OBzl(TWW)1)制備Boc-Thr-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由241mg(l.lOmmol)Boc-Thr制得580mg(85.2%)目標化合物，為無色固體。Mp190-192°C;ESI+/MS(m/e)682[M+H]+.2)制備Thr-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala_Trp_Trp_OBzl的操作，由500mg(0.734mmo1)Boc-Thr-Trp-Trp-OBzl制得429mg(95%)目標化合物，為無色固體。Mpl95-197。C;ES工7MS(m/e)582[M+H]+;[a]^=6.10(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.948(m，2H)，7.307(m，15H)，5.061(m，2H)，4.645(m，2H)，3.631(m，1H)，3.388(m，2H)，3.128(m，4H)，1.148(m，3H).實施例9制備Tyr-Trp-Trp-OBzl(YWW)1)制備Boc-Tyr-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由309mg(l.lOmmol)Boc-Tyr制得708mg(95.3%)目標化合物，為無色固體。Mp220-222°C;ESI+/MS(m/e)744[M+H]+.2)制備Tyr-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.673mmo1)Boc-Tyr-Trp-Trp-OBzl制得449mg(98.1%)目標化合物，為無色固體。Mp207-209。C;ES工VMS(m/e)644[M+H]+;[a]，=9.77(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.868(m，2H)，8.764(d，J=7.3Hz，1H)，8.730(d，J=8.2Hz，1H)，7.652(d，J=8.0Hz，1H)，7.519(d，J=7.9Hz，1H)，7.051(m，17H)，5.006(m，2H)，4.696(m，2H)，3.898(m，1H)，3.035(m，6H)實施例10制備Pro-Trp-Trp-OBzl(PWW)1)制備Boc-Pro-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由237mg(l.lOmmol)Boc-Pro制得654mg(97%)目標化合物，為無色固體。Mp182_184°C;ESI7MS(m/e)678[M+H]+2)制備Pro-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.739mmo1)Boc-Pro-Trp-Trp-OBzl制得45lmg(99%)目標化合物，為無色固體。Mpl82-184。C;ES工7MS(m/e)578[M+H]+;[a]^=16.73(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.903(s，1H)，10.862(s，1H)，8.716(m，2H)，7.642(d，J=7.9Hz，1H)，7.507(d，J=7.9Hz，1H)，7.167(m，13H)，5.047(m，2H)，4.652(m，2H)，4.074(m，1H)，3.171(m，6H)，1.777(m，4H)實施例11制備Met-Trp-Trp-OBz1(MWW)1)制備Boc-Met-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由274mg(l.lOmmol)Boc-Met制得692mg(97.3%)目標化合物，為無色固體。Mp218_220°C;ESI+/MS(m/e)712[M+H]+.2)制備Met-Trp-Trp-OBz1按照制備Ala_Trp_Trp_OBzl的操作，由500mg(0.703mmo1)Boc-Met-Trp-Trp-OBzl制得448mg(98.4%)目標化合物，為無色固體。Mp215-217。C;ES工VMS(m/e)612[M+H]+;[a]^=7.77(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.988(m，2H)，8.782(d，J=7.3Hz，1H)，8.727(d，J=7.9Hz，1H)，7.737(d，J=7.8Hz，1H)，7.654(d，J=7.8Hz，lH)，7.181(m，13H)，5.044(m，2H)，4.698(dd，J=7.3Hz，J=14.2Hz，lH)，4.614(dd，J=7.3Hz，J=14.2Hz，1H)，3.189(m，5H)，2.011(m，3H)，1.621(m，4H).實施例12制備Glu(OBzl)-Trp-Trp-OBzl(E麗)1)制備Boc-Glu(OBzl)-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由370mg(l.lOmmol)Boc-Glu(OBzl)制得469mg(58.7%)目標化合物，為無色固體。Mp202_204°C;ESI+/MS(m/e)800[M+H]+.2)制備Glu(OBzl)-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.626mmo1)Boc-Glu(OBzl)-Trp-Trp-OBzl制得455mg(99%)目標化合物，為無色固體。Mp214_216°C;ESl7MS(m/e)700[M+H]+;[《=20.17(c=1，CH30H)力-畫RQ)MS0_d6，500MHz)S=10.915(m，2H)，8.782(d，J=7.2Hz，1H)，8.720(d，J=7.7Hz，1H)，7.658(d，7.8Hz，1H)，7.498(d，7.8Hz，1H)，7.173(m，18H)，5.018(m，4H)，4.670(m，2H)，3.814(m，1H)，3.082(m，4H)，2.557(m，2H)，2.062(m，2H).實施例13制備Asp(OBzl)-Trp-Trp-OBzl(DWW)1)制備Boc-Asp(OBzl)—Trp—Trp—OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由355mg(l.lOmmol)Boc-Asp(OBzl)制得473mg(60X)目標化合物，為無色固體。Mp208-210。C;ESI+/MS(m/e)786[M+H]+.2)制備Asp(OBzl)-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.637mmo1)Boc-Asp(OBzl)-Trp-Trp-OBzl制得450mg(97.9%)目標化合物，為無色固體。Mp210-212°C;ESl7MS(m/e)686[M+H]+;[a]-=10.03(cl，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.933(m，2H)，8.757(d，J=7.9Hz，1H)，7.730(d，J=7.3Hz，1H)，7.305(m，20H)，5.070(m，4H)，4.644(m，2H)，3.346(m，1H)，3.152(m，4H)，2.933(m，2H).實施例14制備Cys(4-OMeBzl)-Trp-Trp-OBzl(C麗)1)制備Boc-Cys(4-OMeBzl)-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由375mg(l.lOmmol)Boc-Cys(4-0MeBzl)制得801mg(99X)目標化合物，為無色固體。Mp221-223°C;ESI+/MS(m/e)804[M+H]+.2)制備Cys(4-OMeBzl)-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.623mmo1)Boc-Cys(4-OMeBzl)-Trp-Trp-OBzl制得441mg(96%)目標化合物，為無色固體。Mp219-221°C;ESl7MS(m/e)704[M+H]+;[a]^=14.43(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.928(m，2H)，8.940(d，J=7.9Hz，1H)，8.744(d，J=7.9Hz，1H)，7.623(d，J=7.9Hz，lH)，7.431(d，J=7.9Hz，1H)，7.106(m，17H)，4.984(m，2H)，4.725(dd，J=7.5Hz，J=10.5Hz，1H)，4.593(dd，J=7.5Hz，J=10.5Hz，1H)，3.703(m，5H)，3.396(dd，J=7.5Hz，J=10.5Hz，1H)，2.996(m，6H)實施例15制備Arg(N02)-Trp-Trp-OBzl(RWW)1)制備Boc-Arg(N02)-Trp-Trp_OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由351mg(l.lOmmol)Boc-Arg(N02)制得317mg(40.6%)目標化合物，為無色固體。Mp207_209°C;ESI+/MS(m/e)782[M+H]+.2)制備Arg(N02)-Trp-Trp-OBz1按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.638mmo1)Boc-Arg(N02)-Trp-Trp-0Bzl制得445mg(97.2%)目標化合物，為無色固體。Mp188_190°C;ESI+/MS(m/e)682[M+H]+;[a]^=18.00(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.998(m，2H)，8.516(d，J=7.5Hz，1H)，8.374(d，J=7.4Hz，1H)，7.329(m，15H)，5.111(m，2H)，4.185(m，1H)，4.038(m，2H)，3.136(m，4H)，1.729(m，2H)，1.582(m，4H)實施例16制備Lys(Z)-Trp-Trp-OBz1(KWW)1)制備Boc-Lys(Z)-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由418mg(l.lOmmol)Boc-Lys(Z)制得829mg(98.4%)目標化合物，為無色固體。Mp201-203°C;ESI+/MS(m/e)843[M+H]+.2)制備Lys(Z)-Trp-Trp-OBz1按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.594mmo1)Boc-Lys(z)-Trp-Trp-0Bzl制得459mg(99%)目標化合物，為無色固體。Mpl93-195。C;ES工7MS(m/e)743[M+H]+;[a]^=14.77(c=1，CH30H)^-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.976(m，2H)，8.960(d，J=7.9Hz，1H)，8.649(d，J=7.3Hz，1H)，7.762(d，J=7.9Hz，1H)，7.651(d，J=7.9Hz，1H)，7.185(m，18H)，5.003(m，4H)，4.703(m，1H)，4.348(m，1H)，3.354(m，1H)，3.046(m，6H)，1.498(m，6H).實施例17制備Gln-Trp-Trp[-OBzl(QWW)1)制備Boc-Gln-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由271mg(l.lOmmol)Boc-Gln制得469mg(66.2%)目標化合物，為無色固體。Mp195-197°C;ESI+/MS(m/e)709[M+H]+.2)制備Gln-Trp-Trp-OBz1按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.706mmo1)Boc-Gln-Trp-Trp-OBzl制得424mg(93.2%)目標化合物，為無色固體。Mpl88-190。C;ES工7MS(m/e)609[M+H]+;[a]^°=13.33(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.873(m，2H)，8.782(d，J=7.2Hz，1H)，8.705(d，J=7.8Hz，1H)，7.588(m，2H)，7.171(m，13H)，5.017(m，2H)，4.667(m，2H)，3.879(m，1H)，3.171(m，4H)，2.270(m，2H)，1.956(m，2H)實施例18制備Asn-Trp-Trp-OBzl(NWW)1)制備Boc-Asn-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由255mg(l.lOmmol)Boc-Asn制得633mg(91%)目標化合物，為無色固體。Mp190-192°C;ESI+/MS(m/e)695[M+H]+.2)制備Asn-Trp-Trp-OBz1按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.720mmo1)Boc-Asn-Trp-Trp-OBzl制得431mg(94.9%)目標化合物，為無色固體。Mp199-201°C;ES工7MS(m/e)595[M+H]+;[a]^=8.13°(c1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=10.988(m，92H)，8.729(m，2H)，7.579(m，2H)，7.186(m，13H)，5.037(m，2H)，4.627(m，2H)，2.956(m，7H)實施例19制備His-Trp-Trp-OBzl(HWW)1)制備Boc-His(Boc)-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由391mg(1.lOmmol)Boc-His(Boc)制得556mg(68.0%)目標化合物，為無色固體。Mpl89-191。C;ESI+/MS(m/e)818[M+H]+,2)制備His-Trp-Trp-OBzl按照制備Ala-Trp-Trp-0Bzl的操作，由500mg(0.612mmo1)Boc-His(Boc)-Trp-Trp-OBzl制得361mg(90%)目標化合物，為無色固體。Mp211_213°C;ESI+/MS(m/e)618[M+H]+;[a]^=16.43(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=11.020(s，1H)，10.953(s，1H)，9.030(s，1H)，8.913(m，2H)，8.440(s，3H)，7.667(d，J=7.9Hz，1H)，7.509(d，J=7.9Hz，1H)，7.281(m，13H)，5.044(m，2H)，4.650(m，2H)，3.210(m，6H)，2.991(m，lH).實施例20制備Trp-Trp-Trp-OBz1(WWW)1)制備Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由334mg(l.lOmmol)Boc-Trp制得664mg(86.7%)目標化合物，為無色固體。Mp180-182°C;ESI+/MS(m/e)767[M+H]+.2)制備Trp-Trp-Trp-OBz1按照制備Ala-Trp-Trp-OBzl的操作，由500mg(0.653mmo1)Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl制得416mg(91%)目標化合物，為無色固體。Mp212-214。C;ESlVMS(m/e)667[M+H]+;[a]^=-6.73(c=1，CH30H)一H-NMR(DMS0-d6，500MHz)S=11.103(m，3H)，8.028(m，2H)，7.389(m，20H)，4.568(m，4H)，3.589(s，1H)，3.431(m，6H)實驗例1本發(fā)明化合物抗腫瘤細胞增殖活性評價實驗將生長狀態(tài)良好、處于對數(shù)生長期的B16(小鼠黑色素瘤細胞)、H印GJ肝細胞癌細胞)、K562(人慢性髓性白血病細胞)、S180(小鼠腹水型肉瘤細胞)、H22(小鼠腹水型肝癌細胞)細胞以5X104個/ml密度接種于96孔板，每孔100iU，37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，加入經(jīng)滅菌處理的本發(fā)明化合物(實施例1-20所制備)溶液，對照組加入等體積溶劑。繼續(xù)培養(yǎng)48小時后，每孔加251MTT(5mg/ml，四噻唑藍)溶液，置于37"孵育4小時，離心5min(2500rpm)，小心除去上清液后每孔加入100匿SO溶解紫色殘留物(甲瓚)，振蕩約15min溶解沉淀。立即于酶標儀上檢測O.D.(吸光度)值，波長570nm。按照公式"相對生存率=(D含藥-D空白)/(D對照-D空白)X100%"計算每一個樣品濃度下的樣品對腫瘤細胞的抑制率。實驗重復(fù)3次，結(jié)果以(又士SD)表示。結(jié)果見表l。表1本發(fā)明化合物的腫瘤細胞增殖抑制率(又士SD，％)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注濃度10uM;n=6實驗例2本發(fā)明化合物抗小鼠S180肉瘤活性評價實驗在無菌條件下抽取接種6d后取生長旺盛S180腹水瘤瘤液，用生理鹽水稀釋成(1:2)的液體充分混合，將腫瘤細胞懸液用新鮮配制的0.2%臺盼藍染色，混勻后按白細胞計數(shù)方法計數(shù)[91]，染藍色者為死細胞，不染色者為活細胞，按如下公式計算細胞濃度和細胞存活率。細胞濃度二4大方格內(nèi)活細胞數(shù)/4X10^X稀釋倍數(shù)二細胞數(shù)/ml;細胞存活率=活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))X100%;將存活率大于90%的瘤液用勻漿法制備成1Xl(f個/ml的細胞懸液，于ICR雄性小鼠(體重20土2g)腋皮下接種0.2ml/只，制成實體瘤動物模型。本發(fā)明化合物及陽性對照均按8.9umol/kg溶于5%。CMC-Na溶液，0.2ml/只，腹腔給藥，每天一次，連續(xù)給藥7天，共給藥7次?？瞻讓φ崭骨唤o0.2ml5%。CMC-Na溶液，每天一次，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。每日觀察給藥各組動物的反應(yīng)小鼠的自主活動、精神狀態(tài)、毛發(fā)、呼吸、飲食，糞便性狀。連續(xù)給藥7天后，于第8天脫頸椎處死小鼠，稱取體重(處死體重)，然后用鑷子固定小鼠右腋腫瘤生長部位，剪開皮膚，暴露腫瘤，鈍性剝離，稱瘤重。按"抑瘤率％=[(陰性對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/空白對照組平均瘤重]X100X"計算抑瘤率。結(jié)果見表2。表2本發(fā)明化合物對S180荷瘤小鼠的抑瘤率結(jié)果(又士SD，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注與空白對照比較，氺表示P<0.05，林表示P<0.01實驗例3本發(fā)明化合物治療的荷S180肉瘤小鼠的毒性評價每日觀察給藥各組動物的反應(yīng)小鼠的自主活動、精神狀態(tài)、毛發(fā)、呼吸、飲食，糞便性狀。連續(xù)給藥7天后，于第8天脫頸椎處死小鼠，稱取體重(處死體重)，然后用鑷子固定小鼠右腋腫瘤生長部位，剪開皮膚，暴露腫瘤，鈍性剝離，剝離腫瘤后的小鼠采用稱重，再解剖取出肝、腦、腎、和脾，稱取肝重(g)、腦重(g)、腎重(g)、脾重(g)。按"體重增長(g)=處死體重-原始體重-瘤重"計算體重增長。并按"脾指數(shù)(g/kg)=脾重/處死體重"計算脾指數(shù)。實驗結(jié)果見表3。給藥后各組動物沒有觀察到出現(xiàn)文獻報道的震顫、跳躍、抽搐、強直、仰臥、呼吸加快的癥狀。表3本發(fā)明化合物對S180荷瘤小鼠各臟器指標的影響(又士SD，n=12)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>a)與空白對照組比較P<0.05;b)與空白對照組比較P<0.01;c)與空白對照組比較P<0.Ol，與阿糖胞苷組比較P<0.05;d)與空白對照及阿糖胞苷組比較P<0.01實驗例4本發(fā)明化合物NWW治療的荷S180肉瘤小鼠的量效關(guān)系選取活性最好的本發(fā)明化合物NWW在89iimol/kg，8.9ymol/kg和0.89ymol/kg三種劑量下評價對荷S180瘤小鼠治療作用。實驗結(jié)果見圖2，結(jié)果表明NWW對肉瘤小鼠具有劑量依賴的治療作用。權(quán)利要求具有抗腫瘤活性的氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯，其結(jié)構(gòu)為通式I所示AA-Trp-Trp-OBzlI其中，AA選自丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸或酪氨酸殘基。2.—種制備權(quán)利要求1所述氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯的方法，包括(1)將叔丁氧羰基保護的色氨酸和色氨酸芐酯耦聯(lián)，合成叔丁氧羰基色氨酰色氨酸芐酯；(2)脫去叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯的叔丁氧羰基，得到色氨酰色氨酸芐酯；(3)將色氨酰色氨酸芐酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯(lián)，得到叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯；(4)脫去叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯的叔丁氧羰基，即得。3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(1)中在二環(huán)己基羰二亞胺、N-羥基苯并三唑J-甲基嗎啉和無水四氫呋喃存在下將叔丁氧羰基保護的色氨酸和色氨酸芐酯耦聯(lián)，合成叔丁氧羰基色氨酰色氨酸芐酯。4.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(2)中在氯化氫/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯，脫去叔丁氧羰基，得到色氨酰色氨酸芐酯。5.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(3)中在二環(huán)己基羰二亞胺、N-羥基苯并三唑J-甲基嗎啉和無水四氫呋喃存在下將色氨酰色氨酸芐酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯(lián)，得到叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯。6.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(3)中所述的叔丁氧羰基保護的氨基酸選自叔丁氧羰基保護的丙氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬氨酸、叔丁氧羰基保護的谷氨酸、叔丁氧羰基保護的苯丙氨酸、叔丁氧羰基保護的甘氨酸、叔丁氧羰基保護的組氨酸、叔丁氧羰基保護的異亮氨酸、叔丁氧羰基保護的賴氨酸、叔丁氧羰基保護的亮氨酸、叔丁氧羰基保護的蛋氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬酰胺、叔丁氧羰基保護的谷氨酰胺、叔丁氧羰基保護的精氨酸、叔丁氧羰基保護的絲氨酸、叔丁氧羰基保護的蘇氨酸、叔丁氧羰基保護的纈氨酸、叔丁氧羰基保護的色氨酸或叔丁氧羰基保護的酪氨酸。7.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(4)中在氯化氫/乙酸乙酯溶液中將叔丁氧羰基氨基酰色氨酰色氨酸芐酯脫去叔丁氧羰基。8.—種治療腫瘤的藥物組合物，由有效量的權(quán)利要求1所述的氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成。9.權(quán)利要求1所述的氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯在制備抗腫瘤藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明公開了氨基酰色氨酰色氨酸三肽芐酯及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明化合物的通式結(jié)構(gòu)為AA-TrP-TrP-OBzl；其中，AA選自丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸或酪氨酸殘基。本發(fā)明在腫瘤細胞模型和小鼠S180肉瘤模型上評價該化合物的抗腫瘤活性，實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明化合物具有優(yōu)秀的抗腫瘤活性，未見毒副反應(yīng)，臨床上可作為抗腫瘤劑應(yīng)用。文檔編號A61P35/00GK101747411SQ20081022752公開日2010年6月23日申請日期2008年11月28日優(yōu)先權(quán)日2008年11月28日發(fā)明者劉鎏,彭師奇,王超,趙明申請人:北京大學(xué)