專利名稱：木瓜抗氧化精華素及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物制劑，特別涉及一種木瓜抗氧化精華素，還涉 及該抗氧化精華素的制備方法。
背景技術(shù)：
抗氧化劑無論在體內(nèi)還是體外均有很強(qiáng)的自由基清除作用，在抑菌、抗病 毒、抗輻射、抗衰老、抗腫瘤和抗心血管疾病等方面均具有良好的功效。近年 來，隨著抗氧化劑的蓬勃發(fā)展，對抗氧化劑的要求也越來越高，各種廣泛使用 的合成抗氧化劑由于其潛在毒性和致癌作用等逐漸受到人們的排斥，而從植物 中尋找天然、高效、低毒的抗氧化劑已引起各國科研人員的高度重視，成為抗 氧化劑發(fā)展的必然趨勢。目前已相繼從多種植物中提取出近百種天然抗氧化劑，
并通過體外化學(xué)測定法確證了其清除氧自由基效應(yīng)，如類胡蘿卜素、維生素c、 黃酮等，其中絕大部分天然抗氧化劑都是多酚類物質(zhì)。
但是，既往天然抗氧化劑的動(dòng)物干預(yù)及人群臨床研究結(jié)果顯示從植物中 提純的天然抗氧化劑單一化合物多數(shù)并未發(fā)揮出預(yù)期的抗氧化活性和相關(guān)疾病 防治功效，與前期直接食用原植物的研究結(jié)果不一致，究其原因，可能與破壞 了原植物抗氧化體系的完整性有關(guān)，從而難以發(fā)揮出原抗氧化體系的多種活性 成分協(xié)同效應(yīng)。近年來風(fēng)靡全球的抗氧化膳食補(bǔ)充劑多以植物天然抗氧化劑粗 提物為主要原料制成，如葡萄籽提取物制品保留了 2種以上重要的不同類型天然 抗氧化劑類黃酮和原花色素，可以同時(shí)清除HO.和O,,充分抑制脂質(zhì)過氧化， 防治氧化損傷相關(guān)疾病的功效優(yōu)于傳統(tǒng)抗氧化劑代表維生素C。因此，植物天然 抗氧化劑制品應(yīng)盡量保持原植物抗氧化體系的完整性，使各種抗氧化活性成分 相互補(bǔ)充、協(xié)調(diào)，從而使機(jī)體具有比較完善的防御體系并發(fā)揮出其潛在的生物學(xué)效應(yīng)。
此外，植物天然抗氧化劑制品的抗氧化活性還容易受到下述幾方面的影響 (1)在植物釆收后的保藏過程中，由于呼吸作用和酶催化反應(yīng)的不斷進(jìn)行，其 抗氧化體系不可避免地會(huì)發(fā)生組成和含量上的變化，且變化的總體趨勢是削弱 抗氧化能力；(2)在提取和加工過程中，植物含有的纖維素和果膠可能阻礙抗 氧化活性成分的溶出，高溫、紫外線、氧分壓等外界因素可能會(huì)引起植物中某 些抗氧化活性成分的降解或揮發(fā)，也會(huì)使抗氧化體系的組成和含量發(fā)生變化， 降低其抗氧化活性。因此，采用先進(jìn)的提取加工技術(shù)對植物抗氧化體系進(jìn)行高 效、充分、完整地提^取，并通過后期加工有效地防止抗氧化活性成分的降解或 丟失，對保持植物天然抗氧化活性、提高生物利用度具有十分重要的意義。
木瓜為薔薇科植物貼梗海裳(C力se/7咖e/")的果實(shí)，主要分為皺皮木瓜和 光皮木瓜兩大類，皺皮木瓜主要有川木瓜、云木瓜、藏木瓜和日本木瓜，光皮 木瓜主要有山木瓜。木瓜為藥食同源物品，鮮食口感不佳，多制成中藥飲片使 用，具有平肝舒筋、和胃化濕的功效?，F(xiàn)代成分分析顯示，木瓜含有豐富的膳 食纖維和有機(jī)酸，尤其含有大量的維生素C、多酚類物質(zhì)(包括黃酮類、單寧和 酚酸等化合物)和超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase, SOD )。發(fā)明人經(jīng) 過長期大量的研究發(fā)現(xiàn)，木瓜提取物具有顯著的抗氧化活性，但迄今為止，國 內(nèi)外尚未見有關(guān)木瓜天然抗氧化劑制品的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種木瓜 抗氧化精華素，具有高效、持久、穩(wěn)定抗氧化的特點(diǎn)，并且易于儲(chǔ)藏、攜帶和 使用。
本發(fā)明的目的之二在于提供一種制備所述木瓜抗氧化精華素的方法，可以 高效、充分、完整地提取木瓜抗氧化體系，并且有效地保存其抗氧化活性。
為達(dá)到上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了一種木瓜抗氧化精華素，包括木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合物和藥學(xué)上可接受的載體；所述木瓜天然 抗氧化劑由木瓜的酶解水提物和醇提物組成，包括維生素C和多酚類物質(zhì)；每 克木瓜抗氧化精華素含有維生素C不少于2毫克、總多酚以沒食子酸計(jì)不少于 22毫克。
進(jìn)一步，所述環(huán)糊精選自a-環(huán)糊精、|3-環(huán)糊精、y-環(huán)糊精、羥丙基-p-環(huán)糊精或羧曱基-P _環(huán)糊精；
進(jìn)一步，所述環(huán)糊精為y-環(huán)糊精；
進(jìn)一步，所述藥學(xué)上可接受的載體選自p-環(huán)糊精、糊精和淀粉中的一種或 多種；
進(jìn)一步，所述藥學(xué)上可接受的載體為P-環(huán)糊精和糊精。 在本發(fā)明的第二方面，提供了一種制備所述木瓜抗氧化精華素的方法，包 括以下步驟
a、 制漿將新鮮木瓜洗凈、去核、切成小塊后，按木瓜與水的重量比為1 : 0. 5~3加入水，研磨，制得木瓜果漿；
b、 酶解在步驟a所得木瓜果漿中，按木瓜果漿與水解酶的重量比為100 : 0.2 10加入水解酶，在溫度為30~50°C、壓力為-O. 11 ~-0. 09 Mpa的條件下 進(jìn)行酶解反應(yīng)，時(shí)間為40 ~ 90分鐘，制得木瓜酶解果漿；所述水解酶選自纖維 素酶或由果膠酶和纖維素酶組成的復(fù)合酶；
c、 過濾將步驟b所得木瓜酶解果漿100目過濾，分別收集濾液和濾渣， 濾液即為木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步驟c所得濾渣中，按濾渣與醇類溶劑的重量體積比為1 : 5~ 12加入醇類溶劑，回流提取1 2次，每次1 2小時(shí)，收集提取液，過濾，濾 液即為木瓜醇提物；所述醇類溶劑選自體積百分濃度為50~100%的曱醇、乙醇 或異丙醇；
e、 濃縮'.將步驟c所得木瓜酶解水提物和步驟d所得木瓜醇提物混合，濃 縮至總體積的1/3-1/5,即得木瓜天然抗氧化劑；f、 包合在步驟e所得木瓜天然抗氧化劑中，按木瓜天然抗氧化劑與環(huán)糊 精的重量比為100: 0. 3 2加入環(huán)糊精，在壓力為-O. 11 ~-0. 09 Mpa的條件下 進(jìn)行包合反應(yīng)，時(shí)間為4 6小時(shí)，制得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液；
g、 制粒將步驟f所得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液與藥學(xué)上可接受 的載體，按環(huán)糊精包合液與載體的重量比為2~3 : 1進(jìn)行頂噴流化床制粒，所 得顆粒即為木瓜抗氧化精華素。
進(jìn)一步，所述步驟b中水解酶為由果膠酶和纖維素酶組成的復(fù)合酶，木瓜 果漿與該復(fù)合酶的重量比為100 : 2，酶解反應(yīng)的溫度為40。C、壓力為-0. 09Mpa、 時(shí)間為60分鐘；
進(jìn)一步，所述步驟f中環(huán)糊精選自a-環(huán)糊精、|3-環(huán)糊精、y-環(huán)糊精、羥 丙基-p -環(huán)糊精或羧曱基-P -環(huán)糊精；
進(jìn)一步，所述步驟f中環(huán)糊精為Y-環(huán)糊精，木瓜天然抗氧化劑與Y-環(huán)糊 精的重量比為100 : 0. 5，包合反應(yīng)的溫度為2(TC、壓力為-O. 09Mpa、時(shí)間為4 小時(shí)；
進(jìn)一步，所述步驟g中藥學(xué)上可接受的載體選自(3-環(huán)糊精、糊精和淀粉中 的一種或多種，頂噴流化床制粒的進(jìn)料泵轉(zhuǎn)速為4-8轉(zhuǎn)/分鐘、流化床體中心 溫度為45 65。C、鼓風(fēng)頻率為3-7 kHz。
本發(fā)明的有益效果在于
(1) 本發(fā)明提供了一種木瓜抗氧化精華素，具有高效、持久、穩(wěn)定抗氧化 的特點(diǎn)，并且易于儲(chǔ)藏和攜帶，可以作為抗氧化保健食品直接食用，也可以作 為化妝品、動(dòng)物飼料、食品或藥物中間體，進(jìn)一步制備具有抗氧化功能的產(chǎn)品。
(2) 本發(fā)明提供了一種制備所述木瓜抗氧化精華素的方法，包括制漿、酶 解、過濾、醇提、濃縮、包合、制粒共7個(gè)步驟，可以高效、充分、完整地提 取木瓜抗氧化體系(主要抗氧化活性物質(zhì)為維生素C和多酚類物質(zhì))，并且有 效地保存其抗氧化活性。
新鮮木瓜的纖維素重量占總重量的4%以上，采用傳統(tǒng)物理榨汁方法，其出汁率非常低，從而造成從細(xì)胞中溶出的抗氧化活性成分的總量不高、抗氧化體 系組成不完整。本發(fā)明采用水解酶對木瓜果漿進(jìn)行酶解反應(yīng)，可以破壞木瓜交 錯(cuò)形成的致密組織細(xì)胞壁，有利于細(xì)胞質(zhì)及液泡中的抗氧化活性成分高效、充 分、完整地溶出，提取效率高、提取量大，而且反應(yīng)條件溫和、能耗低。研究 結(jié)果顯示，經(jīng)過酶解處理，木瓜中維生素C及多酚類物質(zhì)的提取總量分別提高
了 35. 1%和43. 8%。此外，木瓜提取物的成分分析結(jié)果顯示，木瓜提取物中含 有兒茶素、表兒茶素、槲皮素、蘆丁、綠原酸和原花青素。
抗氧化劑本身易氧化或降解失去活性，本發(fā)明采用環(huán)糊精包合技術(shù)，將木 瓜天然抗氧化劑分子包嵌在環(huán)糊精分子的空穴結(jié)構(gòu)中形成復(fù)合物，可以有效地 阻斷木瓜天然抗氧化劑與外界環(huán)境的接觸，防止其氧化、水解或揮發(fā)，從而增 加抗氧化穩(wěn)定性，同時(shí)，環(huán)糊精包合還使木瓜天然抗氧化劑具有了緩釋性，可 以持久揮發(fā)作用。發(fā)明人對比了木瓜抗氧化精華素常溫儲(chǔ)藏和新鮮木瓜冷凍儲(chǔ) 藏過程中抗氧化活性物質(zhì)的含量和活性變化情況，結(jié)果顯示，在儲(chǔ)藏近半年后， 本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素中抗氧化活性物質(zhì)的含量和活性存留率更高，維生 素C和總多酚含量分別是木瓜鮮果的2. 2倍和3. 4倍；維生素C、總多酚和S0D
活性存留率分別高出木瓜鮮果10. 7%、 8%和2. 3%，提示本發(fā)明的木瓜抗氧化 精華素具有持久、穩(wěn)定抗氧化的特點(diǎn)。發(fā)明人還采用r"環(huán)糊精分別對已鑒定的 木瓜含有的抗氧化單一化合物進(jìn)行了包合研究，結(jié)果證實(shí)，廠環(huán)糊精對木瓜中 含有的維生素C (呋喃烯醇式內(nèi)酯結(jié)構(gòu))、原花青素(單寧類多聚體結(jié)構(gòu))、綠原 酸(縮酚酸結(jié)構(gòu))和,丁 (類黃酮單元結(jié)構(gòu))均有包合作用，維生素C的包合 常數(shù)為5.7x103,多酚類物質(zhì)的包合常數(shù)在2.8xl0^4.2xl(T之間，且隨多酚類 物質(zhì)的分子量增加而增大。環(huán)糊精包合修飾的實(shí)現(xiàn)有助于后續(xù)制粒的加工穩(wěn)定 性、耐儲(chǔ)藏性及生物利用率的提高。此外，在本發(fā)明的制備方法中，酶解反應(yīng) 和包合反應(yīng)均選擇在負(fù)壓條件下進(jìn)行，這有利于保持熱敏性抗氧化活性成分的 穩(wěn)定性，防止其降解。
噴霧制粒是將嚢心物分散于嚢材溶液中，借助熱氣流霧化，溶解嚢材的溶媒被迅速蒸發(fā)而使嚢材凝固在嚢心物的表面，形成微嚢。本發(fā)明將噴霧制粒技 術(shù)和流化床干燥技術(shù)相結(jié)合，創(chuàng)新采用頂噴流化床制粒藥學(xué)上可接受的載體 (固相)從物料槽的底部上升呈流化狀態(tài)，木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液 通過安裝在擴(kuò)散(噴霧)室的噴槍噴嘴噴入流化床，在干燥空氣的不斷攪動(dòng)下， 木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液中的水分子在固相載體微細(xì)顆粒表面形成微 細(xì)膜狀態(tài)，快速氣化排出，從而使木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合物沉積在固 相載體表面。頂噴流化床制粒工藝可以確保木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液 在壓縮空氣的承載下與上升的干燥空氣進(jìn)行充分的對流，環(huán)糊精包合液與固相 載體混合時(shí)首先遇到較低溫度、較高濕度的熱氣流預(yù)熱，符合干燥的導(dǎo)濕溫性 向有利進(jìn)程發(fā)展，從而減少了噴霧制粒過程中常出現(xiàn)的"塌床"現(xiàn)象，避免固 相載體吸附環(huán)糊精包合液中的有效成分總量降低的問題。此外，頂噴流化床制 粒工藝還可提高抗氧化活性成分的"濃縮比"，縮短干燥時(shí)間，易于保持熱敏性 抗氧化活性成分的穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，采用頂噴流化床制粒工藝獲得的木瓜抗
氧化精華素每克含有維生素C、總多酚和單寧含量分別為2. 05 ± 0. 09 mg、 22. 70 ± 1. 57 mg和9. 64 ± 0. 65 mg，比制粒前才是高了 219. 8 % 、 344. 2 %和348. 4 % 。
具體實(shí)施例方式
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對本發(fā)明的優(yōu) 選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。
實(shí)施例l、木瓜抗氧化精華素的制備 包括以下步驟
a、 制漿將新鮮木瓜洗凈、去核、切成小塊(lcm3)后，按木瓜與水的重 量比為1 : 0. 5加入水，研磨，制得果漿；
b、 酶解在步驟a所得木瓜果漿中，按木瓜果漿與水解酶的重量比為100 : 0. 2加入由果膠酶和纖維素酶(重量比為1 : l)組成的水解酶，在溫度為30°C、 壓力為-O. 11Mpa、攪拌速度為180轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)，時(shí)間90分鐘，制得木瓜酶解果漿；
c、 過濾將步驟b所得木瓜酶解果漿100目過濾，分別收集濾液和濾渣， 濾液即為木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步驟c所得濾渣中，按濾渣與醇類溶劑的重量體積比為1:12 加入甲醇，回流提取2次，每次1小時(shí)，收集提取液，過濾，濾液為木瓜醇提 物；
e、 濃縮將步驟c所得木瓜酶解水提物和步驟d所得木瓜醇提物混合，濃 縮至總體積的1/5,即得木瓜天然抗氧化劑；
f、 包合在步驟e所得木瓜天然抗氧化劑中，按木瓜天然抗氧化劑與環(huán)糊 精的重量比為100 : 0. 3加入a-環(huán)糊精，在溫度為35°C、壓力為-O. 09Mpa、攪 拌速度為90轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行包合反應(yīng)，時(shí)間為4小時(shí)，制得木瓜天然抗 氧化劑的環(huán)糊精包合液；
g、 制粒將步驟f所得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液與由環(huán)糊精 和淀粉(重量比為1:3)組成的復(fù)合固相載體，按環(huán)糊精包合液與復(fù)合固相載 體的重量比為2 : 1，在進(jìn)料泵轉(zhuǎn)速為4轉(zhuǎn)/分鐘、流化床體中心溫度為45°C、 風(fēng)機(jī)頻率為3 kHz的條件下進(jìn)行頂噴流化床制粒，所得顆粒即為木瓜抗氧化精 華素。
實(shí)施例2、木瓜抗氧化精華素的制備 包括以下步驟
a、 制漿將新鮮木瓜洗凈、去核、切成小塊(1 cm3)后，按木瓜與水的重 量比為1 : l加入水，研磨，制得果漿；
b、 酶解:在步驟a所得木瓜果漿中，按木瓜果漿與纖維素酶的重量比為100 : 6加入纖維素酶，在溫度為40°C、壓力為-O. 10 Mpa、攪拌速度為220轉(zhuǎn)/分鐘 的條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)，時(shí)間70分鐘，制得木瓜酶解果漿；
c、 過濾將步驟b所得木瓜酶解果漿100目過濾，分別收集濾液和濾渣， 濾液即為木瓜酶解水提物；
10d、 醇提在步驟c所得濾渣中，按濾渣與醇類溶劑的重量體積比為1 : 10 加入體積百分濃度為50%的乙醇溶液，回流提取2次，每次1小時(shí)，收集提取 液，過濾，濾液為木瓜醇4是物；
e、 濃縮將步驟c所得木瓜酶解水提物和步驟d所得木瓜醇提物混合，濃 縮至總體積的1/4,即得木瓜天然抗氧化劑；
f、 包合在步驟e所得木瓜天然抗氧化劑中，按木瓜天然抗氧化劑與環(huán)糊 精的重量比為100 : 1加入羥丙基-|3-環(huán)糊精，在溫度為30。C、壓力為-0. lOMpa、 攪拌速度為120轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行包合反應(yīng)，時(shí)間5小時(shí)，制得木瓜天然抗 氧化劑的環(huán)糊精包合液；
g、 制粒將步驟f所得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液與由環(huán)糊精 和糊精(重量比為1:5)組成的復(fù)合固相載體，按環(huán)糊精包合液與復(fù)合固相載 體的重量比為3:1,在進(jìn)料泵轉(zhuǎn)速為5轉(zhuǎn)/分鐘、流化床體中心溫度為55°C、 風(fēng)機(jī)頻率為5 kHz的條件下進(jìn)行頂噴流化床制粒，所得顆粒即為木瓜抗氧化精 華素。
實(shí)施例3、木瓜抗氧化精華素的制備 包括以下步驟
a、 制漿將新鮮木瓜洗凈、去核、切成小塊(lcm3)后，按木瓜與水的重 量比為1 : 2加入水，研磨，制得果漿；
b、 酶解在步驟a所得木瓜果漿中，按木瓜果漿與水解酶的重量比為100 : 2加入由果膠酶和纖維素酶(重量比為1:1)組成的水解酶，在溫度為40°C、 壓力為-O. 09 Mpa、攪拌速度為200轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)，時(shí)間60分 鐘，制得木瓜酶解果漿；
c、 過濾將步驟b所得木瓜酶解果漿100目過濾，分別收集濾液和濾渣， 濾液即為木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步驟c所得濾渣中，按濾渣與醇類溶劑的重量體積比為1 : 5 加入體積百分濃度為80%的乙醇溶液，回流提取1次，時(shí)間為2小時(shí)，收集提耳又液，過濾，濾液為木瓜醇^是物；
e、 濃縮將步驟c所得木瓜酶解水提物和步驟d所得木瓜醇提物混合，濃 縮至總體積的1/3，即得木瓜天然抗氣化劑；
f、 包合在步驟e所得木瓜天然抗氧化劑中，按木瓜天然抗氧化劑與環(huán)糊 精的重量比為100 : 0. 5加入y-環(huán)糊精，在溫度為20。C、壓力為-0. 09Mpa、攪 拌速度為100轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行包合反應(yīng)，時(shí)間4小時(shí)，制得木瓜天然抗氧 化劑的環(huán)糊精包合液；
g、 制粒將步驟f所得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液與由P-環(huán)糊精 和糊精(重量比為1:3)組成的復(fù)合固相載體，按環(huán)糊精包合液與復(fù)合固相載 體的重量比為2 : 1，在進(jìn)料泵轉(zhuǎn)速為6轉(zhuǎn)/分鐘、流化床體中心溫度為50°C、 風(fēng)機(jī)頻率為4 kHz的條件下進(jìn)行頂噴流化床制粒，所得顆粒即為木瓜抗氧化精 華素。
實(shí)施例4、木瓜抗氧化精華素的制備 包括以下步驟
a、 制漿將新鮮木瓜洗凈、去核、切成小塊(lcm3)后，按木瓜與水的重 量比為1 : 3加入水，研磨，制得果漿；
b、 酶解在步驟a所得木瓜果漿中，按木瓜果漿與水解酶的重量比為100 : IO加入由果膠酶和纖維素酶(重量比為1 : U組成的水解酶，在溫度為5(TC、 壓力為-O. 09 Mpa、攪拌速度為250轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)，時(shí)間40分 鐘，制得木瓜酶解果漿；
c、 過濾將步驟b所得木瓜酶解果漿100目過濾，分別收集濾液和濾渣， 濾液即為木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步驟c所得濾渣中，按濾渣與醇類溶劑的重量體積比為1 : 7 加入異丙醇，回流提取1次，時(shí)間為2小時(shí)，收集提取液，過濾，濾液為木瓜 醇提物；
e、 濃縮將步驟c所得木瓜酶解水提物和步驟d所得木瓜醇提物混合，濃縮至總體積的1/4，即得木瓜天然抗氧化劑；
f、 包合在步驟e所得木瓜天然抗氧化劑中，按木瓜天然抗氧化劑與環(huán)糊 精的重量比為100 : 2加入羧曱基-p-環(huán)糊精，在溫度為15。C、壓力為-0. 11Mpa、 攪拌速度為150轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行包合反應(yīng)，時(shí)間為6小時(shí)，制得木瓜天然 抗氧化劑的環(huán)糊精包合液；
g、 制粒將步驟f所得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液與糊精，按環(huán)糊 精包合液與糊精的重量比為2 : 1，在進(jìn)料泵轉(zhuǎn)速為8轉(zhuǎn)/分鐘、流化床體中心溫 度為65°C、風(fēng)機(jī)頻率為7 kHz的條件下進(jìn)行頂噴流化床制粒，所得顆粒即為木 瓜抗氧化精華素。
本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素的主要抗氣化活性物質(zhì)的含量測定 1、維生素C的含量測定
方法采用熒光法(國家標(biāo)準(zhǔn)第一法)進(jìn)行測定，①取維生素C對照品約100 mg，精確稱定，加偏磷酸-乙酸溶液(稱取偏磷酸15 g,加入水乙酸40 mL及水 250 mL,攪拌，放置過夜使溶解，加水定容至50Q mL,即得)100 mL制成濃度 為lmg/raL的溶液，精密量:f又該溶液10mL,用偏磷酸-乙酸溶液稀釋并定容至100 mL，加入經(jīng)活化的活性炭2 g進(jìn)行氧化處理，過濾，收集濾液；取濾液各5 mL, 分別置2個(gè)50 mL容量瓶中，其中1個(gè)容量瓶中加入質(zhì)量百分濃度為50%的乙酸鈉 溶液5 mL，用水定容至50 mL,精密量取該溶液O. 5、 1.0、 1.5、 2.0 mL，分別 置IO mL帶塞刻度試管中，用蒸餾水定容至2mL，作為系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液；另 一個(gè)容量瓶中加入硼酸-乙酸鈉溶液(稱取硼酸3 g,加入質(zhì)量百分濃度為50% 的乙酸鈉溶液IOO mL使溶解，即得，臨用前配制)5 mL,振搖15分鐘，用水定 容至50 mL，在溫度4。C放置2小時(shí)，精密量取該溶液O. 5、 1.0、 1.5、 2. 0 mL, 分別置IO mL帶塞刻度試管中，用蒸餾水定容至2 raL，作為系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)空白 溶液；②取本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素約10 g，精密稱定，加偏磷酸-乙酸溶液 溶解并定容至lGOmL，加入經(jīng)活化的活性炭2g進(jìn)行氧化處理，過濾，收集濾液； 取濾液各5 mL，分別置2個(gè)50 mL容量瓶中，其中l(wèi)個(gè)容量瓶中加入質(zhì)量百分濃度為50%的乙酸鈉溶液5 mL,用水定容至50 mL，作為樣品溶液；另一個(gè)容量瓶中 加入硼酸-乙酸鈉溶液5 mL，振搖15分鐘，再用水定容至50 mL，在溫度4。C放置 2小時(shí)，作為樣品空白溶液；③取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)空白溶液、樣品溶液和樣 品空白溶液各2 mL，分別置IO mL帶塞刻度試管中，在避光條件下迅速向各管中 加入鄰苯二胺溶液(稱取鄰苯二胺20 mg,于臨用前用水稀釋至IOO mL,即得) 5 mL，振搖混合，在室溫下反應(yīng)35分鐘，用激發(fā)光波長338 nm、發(fā)射光波長420 nm測定熒光強(qiáng)度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的維生素C含量為橫坐標(biāo)、對應(yīng)的實(shí)際熒光強(qiáng)度(標(biāo) 準(zhǔn)溶液的爽光強(qiáng)度與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)空白溶液的熒光強(qiáng)度的差值)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線，求得回歸方程，根據(jù)樣品溶液的實(shí)際熒光強(qiáng)度(樣品溶液的熒光強(qiáng)度 與樣品空白溶液的焚光強(qiáng)度的差值)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品中維生素C的含量。
結(jié)果本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素每克含維生素C不低于2 mg。
2、總多酚的含量測定
方法采用Folin-Ciocalteu法進(jìn)行測定，①取沒食子酸對照品約30mg， 精密稱定，加無水乙醇100 mL制成濃度為0. 3 mg/mL的溶液，精密量取該溶 液0、 0.1、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 l.OmL，分別置45 mL帶塞刻度離心管中， 用蒸餾水定容至IO mL,再加入Folin-Ciocalteu試劑0.5 mL,用質(zhì)量百分 濃度為7. 5%的無水碳酸鈉溶液定容至20 mL，靜置30分鐘，作為系列濃度 的標(biāo)準(zhǔn)溶液；②取本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素約0. 5 g，精密稱定，置45mL 帶塞刻度離心管中，加蒸餾水溶解并定容至10 mL，再加入Folin-Ciocalteu 試劑G. 5 mL，用質(zhì)量百分濃度為7. 5%的無水碳酸鈉溶液定容至20 mL，靜 置30分鐘，作為樣品溶液；③取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，在波長675 nm 處分別測定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的沒食子酸含量為橫坐標(biāo)、對應(yīng)的吸光度為 縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程，根據(jù)樣品溶液的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上 查得樣品溶液中總多酚的含量。
結(jié)果本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素每克含總多酚以沒食子酸計(jì)不低于22
rag。本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素的抗氧化活性研究
1、 體外DPPH. (二苯代苦味酰肼自由基)清除實(shí)驗(yàn)
方法取本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素約1 g,精密稱定，加水50 mL制 成濃度為20 mg/mL的溶液，精密移耳又該溶液50、 100、 200、 400 ^L,分別 用含有體積百分濃度為50%的乙醇的Tris-HCl緩沖液定容至2 mL，作為系 列濃度的樣品溶液；精密移取上述不同濃度的樣品溶液各100 ^L，置96孔 酶標(biāo)板中，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，每孔加入濃度為0.4 mg/mL的DPPHW式液 100 jaL;振蕩30秒，溫度37。C保溫反應(yīng)20分鐘后，在波長517 nm處測定 吸光值(Asca)，同時(shí)測定不加DPPH.試液的樣品空白溶液吸光值(Acon) 和不加樣品溶液(以含有體積百分濃度為50%的乙醇的Tris-HCl緩沖液100 ^L代替樣品)的DPPH.空白溶液吸光值(Amax),按照下述公式計(jì)算自由基 清除率自由基清除率(％) = [1-(Asca-Acon)]/Amaxxl00% ;然后根據(jù)樣品 溶液的濃度與清除率的關(guān)系計(jì)算IC5。( IG。為DPPH.清除率為50%時(shí)所需樣品 量)。
結(jié)果本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素每克清除945 ±20網(wǎng)的DPPH.。
2、 體內(nèi)抗氧化活性研究
(1 )對血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)水平和總抗氧化能力(T-AOC ) 的影響
方法將40只ApoE基因缺陷型(ApoE+ )雄性2月齡小鼠(品系C57BL/6J ) 隨機(jī)分為5組，分別為空白對照組、樣品低劑量組、樣品高劑量組、超微茶 粉組、維生素C組；各組小鼠在SPF級動(dòng)物飼養(yǎng)室層流架中分籠喂養(yǎng)，自由 攝食飲水；以普通營養(yǎng)飼料為基礎(chǔ)飼料，樣品低劑量組和高劑量組分別在基 礎(chǔ)飼料中添加質(zhì)量百分濃度為5%和10%的本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素；超 微茶粉組在基礎(chǔ)飼料中添加質(zhì)量百分濃度為3%的超微綠茶粉(每g超微綠茶 粉含總多酚以沒食子酸計(jì)為35 mg);維生素C組在基礎(chǔ)飼料中添加質(zhì)量百 分濃度為0. 02。/。的維生素C;樣品低劑量組與超微茶粉組的總多酚添加量相
15同，樣品高劑量組與維生素C組的維生素C添加量相同；用酪蛋白調(diào)整各組 飼料的蛋白質(zhì)含量為18% ，用豬油調(diào)整飼料的脂肪含量為20%;記錄小鼠進(jìn) 食量和體重變化，喂養(yǎng)16周后，小鼠摘眼球取血，分離血清，測定GSH-PX 含量和T-A0C。
結(jié)果與空白對照組比較，樣品低劑量組分別使ApoE+小鼠血清GSH-PX 和T-A0C提高了 30. 0%和53.3%;樣品高劑量組分別使ApoE—/_小鼠血清 GSH-Px和T-A0C提高了 47. 1 %和126. 7 % ,表明本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素 具有良好的生物體內(nèi)抗氧化功效，可以顯著提高血清抗氧化能力，對動(dòng)脈粥 樣硬化(AS)發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因子氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的生成 有潛在地抑制作用。同時(shí)，將本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素與具有明確抗氧化 功效的茶葉和維生素C進(jìn)行對比，樣品低劑量組的抗氧化功效與超微茶粉組 相近，優(yōu)于維生素C組，樣品高劑量組的抗氧化功效優(yōu)于超微茶粉組，且比 超微茶粉對小鼠的食欲影響更小，提示本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素刺激性小， 安全可靠。
(2 )對體內(nèi)丙二醛(MDA)水平和S0D活力的影響
方法將60只昆明種雄性小白鼠(8~10周齡、體重18~20g)隨機(jī)分 為6組，每組10只，1個(gè)空白對照組，1個(gè)模型對照組和4個(gè)樣品劑量組，4 個(gè)樣品劑量組分別灌胃給予質(zhì)量百分濃度為4% 、 6%、 8%和10%的本發(fā)明 的木瓜抗氧化精華素G. 1 raL/kg/d,空白對照組和模型對照組均給予等量蒸 鎦水，30天后，除空白對照組外，各組給予5Gy6°Co Y射線一次性全身照射， 照射后第3天處死各組小鼠，摘眼球取血，分離血清，剖腹取腦、肝臟、心 臟和腎臟，測定血清和組織中的MDA含量和S0D活性。
結(jié)果模型對照組中小鼠體內(nèi)MDA含量和S0D活性均高于空白對照組， 提示造模成功；各樣品劑量組中小鼠血清和組織中的MDA含量和S0D活性顯 著低于模型對照組(P<0. 05)，表明本發(fā)明的木瓜抗氧化精華素能夠有效降 低小鼠體內(nèi)MDA含量和SOD活性，并呈現(xiàn)一定劑量效應(yīng)關(guān)系。最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡 管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域的普通 技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不 偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1、一種木瓜抗氧化精華素，其特征在于包括木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合物和藥學(xué)上可接受的載體；所述木瓜天然抗氧化劑由木瓜的酶解水提物和醇提物組成，包括維生素C和多酚類物質(zhì)；每克木瓜抗氧化精華素含有維生素C不少于2毫克、總多酚以沒食子酸計(jì)不少于22毫克。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的木瓜抗氧化精華素，其特征在于所述環(huán)糊精選 自oc-環(huán)糊精、0-環(huán)糊精、y-環(huán)糊精、羥丙基-P-環(huán)糊精或羧甲基-(3-環(huán)糊精。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的木瓜抗氧化精華素，其特征在于所述環(huán)糊精為 Y-環(huán)糊精。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的木瓜抗氧化精華素，其特征在于所述藥學(xué)上可 接受的載體選自P-環(huán)糊精、糊精和淀粉中的一種或多種。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的木瓜抗氧化精華素，其特征在于所述藥學(xué)上可 接受的載體為P-環(huán)糊精和糊精。
6、 一種制備權(quán)利要求l所述的木瓜抗氧化精華素的方法，其特征在于包 括以下步驟a、 制漿將新鮮木瓜洗凈、去核、切成小塊后，按木瓜與水的重量比為1 : 0. 5~3加入水，研磨，制得木瓜果漿；b、 酶解在步驟a所得木瓜果漿中，按木瓜果漿與水解酶的重量比為100 : 0. 2 10加入水解酶，在溫度為30-5(TC、壓力為-O. 11 ~-0. 09 Mpa的條件下 進(jìn)行酶解反應(yīng)，時(shí)間為40 ~ 90分鐘，制得木瓜酶解果漿；所述水解酶選自纖維 素酶或由果膠酶和纖維素酶組成的復(fù)合酶；c、 過濾將步驟b所得木瓜酶解果漿100目過濾，分別收集濾液和濾渣， 濾液即為木瓜酶解水提物；d、 醇提在步驟c所得濾渣中，按濾渣與醇類溶劑的重量體積比為1 : 5~ 12加入醇類溶劑，回流提取1 ~ 2次，每次1 ~ 2小時(shí)，收集提取液，過濾，濾液即為木瓜醇提物；所述醇類溶劑選自體積百分濃度為50~100%的曱醇、乙醇 或異丙醇；e、 濃縮將步驟c所得木瓜酶解水提物和步驟d所得木瓜醇提物混合，濃 縮至總體積的1/3 ~ 1/5，即得木瓜天然抗氧化劑；f、 包合在步驟e所得木瓜天然抗氧化劑中，按木瓜天然抗氧化劑與環(huán)糊 精的重量比為100: 0. 3 2加入環(huán)糊精，在壓力為-O. 11 ~-0. 09 Mpa的條件下 進(jìn)行包合反應(yīng)，時(shí)間為4 6小時(shí)，制得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液；g、 制粒將步驟f所得木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合液與藥學(xué)上可接受 的載體，按環(huán)糊精包合液與載體的重量比為2-3:1進(jìn)行頂噴流化床制粒，所 得顆粒即為木瓜抗氧化精華素。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備木瓜抗氧化精華素的方法，其特征在于所 述步驟b中水解酶為由果膠酶和纖維素酶組成的復(fù)合酶，木瓜果漿與該復(fù)合酶 的重量比為100 : 2,酶解反應(yīng)的溫度為4(TC、壓力為-0.09Mpa、時(shí)間為60分 鐘。
8、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備木瓜抗氧化精華素的方法，其特征在于所 述步驟f中環(huán)糊精選自oc -環(huán)糊精、(3 -環(huán)糊精、y -環(huán)糊精、羥丙基-P -環(huán)糊精 或羧曱基-P-環(huán)糊精。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備木瓜抗氧化精華素的方法，其特征在于所 述步驟f中環(huán)糊精為Y-環(huán)糊精，木瓜天然抗氧化劑與y-環(huán)糊精的重量比為 100:0.5，包合反應(yīng)的溫度為20°C、壓力為-O. 09Mpa、時(shí)間為4小時(shí)。
10、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備木瓜抗氧化精華素的方法，其特征在于 所述步驟g中藥學(xué)上可接受的載體選自p-環(huán)糊精、糊精和淀粉中的一種或多種， 頂噴流化床制粒的進(jìn)料泵轉(zhuǎn)速為4 ~ 8轉(zhuǎn)/分鐘、流化床體中心溫度為45 ~ 65°C、 鼓風(fēng)頻率為3~7 kHz。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種木瓜抗氧化精華素，包括木瓜天然抗氧化劑的環(huán)糊精包合物和藥學(xué)上可接受的載體，木瓜天然抗氧化劑由木瓜的酶解水提物和醇提物組成，包括維生素C和多酚類物質(zhì)，每克木瓜抗氧化精華素含有維生素C不少于2毫克、總多酚以沒食子酸計(jì)不少于22毫克，具有高效、持久、穩(wěn)定抗氧化的特點(diǎn)，并且易于儲(chǔ)藏和攜帶，可以作為保健食品直接食用，也可以作為化妝品、動(dòng)物飼料、食品或藥物中間體，進(jìn)一步制備具有抗氧化功能的產(chǎn)品；還公開了該木瓜抗氧化精華素的制備方法，包括制漿、酶解、過濾、醇提、濃縮、包合、制粒共7個(gè)步驟，可以高效、充分、完整地提取木瓜抗氧化體系，并且有效地保存其抗氧化活性。
文檔編號A61K36/732GK101444562SQ20081023723
公開日2009年6月3日 申請日期2008年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月24日
發(fā)明者永 周, 勇 唐, 婷 張, 張乾勇, 朱俊東, 糜漫天, 靖 趙 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)