專利名稱：：一種從植物中提取總黃酮及其藥物制劑的制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種從植物中提取總黃酮及其藥物制劑的制備和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵Abelmoschusmanihot(L.)Medic.的干燥花冠(帶雄蕊及花柱)，收載于《江蘇省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1989年版)增補(bǔ)本、《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2002年版。具有清利濕熱，消炎解毒之功效，是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用植物，入藥歷史可追溯至1500年前晉朝葛洪所著的《肘后方》，記載其"通淋，消腫，解毒。治淋病，癰疽腫毒，湯火燙傷。"在民間有較多的應(yīng)用，用以治療疔瘡、腮腺炎、尿道感染、肺熱咳嗽及燒燙傷等。近年來，隨著對(duì)其有效成分和藥理等研究的逐漸深入，黃蜀葵花潛在的開發(fā)價(jià)值越來越為人們所重視?，F(xiàn)代化學(xué)成分研究資料表明，黃蜀葵花的主要成分為黃酮類化合物，在藥理實(shí)驗(yàn)研究方面，有文獻(xiàn)報(bào)道黃蜀葵花的黃酮類成分具有抗炎解熱、抗皰疹病毒、保護(hù)心肌缺血、心腦缺氧性損傷、治療腎病綜合癥等藥理作用。還有報(bào)道黃蜀葵莖有治療糖尿病腎病的藥理活性。中國(guó)專利200610097615.6公開了一種黃蜀葵花總黃酮提取物用于制備治療腎炎藥物；中國(guó)專利200610097615.6公開了一種黃蜀葵花總黃酮提取物、其制備及用于腎炎方面的用途；我們?cè)谇捌谝呀?jīng)申報(bào)了中國(guó)專利200410035741.X，公開了一種總黃酮制備工藝。但至今未見有以黃蜀葵花總黃酮為活性成分的藥物問世，更未見以黃蜀葵花總黃酮制成的藥物制劑治療糖尿病的報(bào)道。我們?cè)趯?duì)黃蜀葵花總黃酮提取物進(jìn)行藥理預(yù)試過程中發(fā)現(xiàn)，該總黃酮提取物(0.5-lg/kg)對(duì)腹腔注射鏈脲霉素致小鼠小鼠空腹血糖值比模型組血糖值低，表明本品有較明顯的降糖作用。上述試驗(yàn)結(jié)果提示了黃蜀葵花總黃酮提取物可作為活性成分在制備降糖的藥物的應(yīng)用。因此，開發(fā)以黃蜀葵花總黃酮為原料的藥物制劑，用于治療糖尿病，尤其對(duì)于2型糖尿病，西藥雖然層出不窮，但不能從根本上解決問題，而且西藥治療具有一定的副作用及"治療失效"，充分利用中藥的毒副作用相對(duì)較小，病人可長(zhǎng)期服用的優(yōu)勢(shì)，將會(huì)具有廣闊的應(yīng)用前景。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種黃蜀葵花的總黃酮提取物。本發(fā)明所指的黃蜀葵花總黃酮有效部位特指中國(guó)發(fā)明專利200410035741.X所提取得到的黃蜀葵花總黃酮提取物，本發(fā)明嚴(yán)格遵守上述專利中的制備方法，為了確證質(zhì)量，我們用高效液相和紫外_分光光度法控制提取物中主要有效成分金絲桃苷和總黃酮含量。本發(fā)明的另一目的在于提供該總黃酮提取物制備成各種口服劑型和注射劑型的制備方法。總黃酮提取物可與藥學(xué)上可接受的載體或其他適宜賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成口服給藥和注射給藥的劑型。本發(fā)明的再一目的在于提供該總黃酮提取物制成的藥物在制備降糖藥物中的用途。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)1、總黃酮提取物的提取分離純化取黃蜀葵花藥材，加5090%乙醇回流提取，提取液濃縮，水沉24h，抽濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱，采用醇水梯度洗脫，洗脫液濃縮、干燥，得到黃蜀葵花有效部位——總黃酮提取物。2、制劑的處方片劑組成為總黃酮提取物為60-80重量份，藥用輔料為20-40重量份；顆粒劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為140-160重量份；膠囊劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為40-60重量份；滴丸劑劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為340-360重量份；口服液組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為540-560重量份；水針劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為540-560重量份；粉針劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為540-560重量份。3、制劑的制備取總黃酮提取物，加入藥劑學(xué)上可以接受的藥用輔料，用常規(guī)制藥工藝制備成片劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑、口服水針劑、粉針劑。為更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面具體說明黃蜀葵花總黃酮制成的藥物在糖尿病患者治療中的應(yīng)用。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1黃蜀葵花總黃酮提取物的制備將黃蜀葵花加80%乙醇適量，提取1次，提取2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液濃縮成6(TC時(shí)相對(duì)密度為1.131.16的濃縮液，加適量水水沉24h，抽濾，濃縮至相應(yīng)體積，通過大孔吸附樹脂柱，采用醇水梯度洗脫，水洗脫3個(gè)柱體積，10%及30%乙醇各洗脫3個(gè)柱體積，70%乙醇洗脫1個(gè)柱體積。洗脫液濃縮、干燥、粉碎后得到黃蜀葵花總黃酮提取物，其總黃酮同含量為65%。實(shí)施例2黃蜀葵花總黃酮提取物片劑的制備取黃蜀葵花總黃酮提取物150g，淀粉50g，微晶纖維素45g，混勻，乙醇濕法制粒，過20目篩。加入硬脂酸鎂5g，混勻，壓制成片重為0.25g/片的片劑1000片，每片含黃蜀葵花總黃酮提取物150mg。用法每次2片，每日三次。實(shí)施例3黃蜀葵花總黃酮提取物膠囊的制備取黃蜀葵花總黃酮提取物150g，淀粉150g，硬脂酸鎂50g，過80目篩充分混勻，干法制粒，灌裝膠囊1000粒，每粒含黃蜀葵花總黃酮提取物150mg。用法每次2粒，每日三次。實(shí)施例4黃蜀葵花總黃酮提取物顆粒劑的制備取黃蜀葵花總黃酮提取物150g，糊精450g，過80目篩充分混勻，乙醇濕法制粒，包裝成每袋6g的顆粒劑1000袋，每袋含黃蜀葵花總黃酮提取物150mg。用法每次12袋，每日三次。實(shí)施例5黃蜀葵花總黃酮提取物的降糖藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)1材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年昆明種雄性小鼠，體重20±2g1.2藥品與試劑黃蜀葵花總黃酮提取物。藥物配制取粉末500mg溶于20ml蒸餾水中。陽(yáng)性藥降糖靈(苯乙雙胍片)，250mg/片。使用時(shí)取降糖靈l片(250mg)，研碎，加水至30ml。四氧嘧啶HONGKONGFARCOChemicalSu卯lies產(chǎn)品批號(hào)42011-3E;血糖試劑盒中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)24011;SOD試劑盒南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號(hào)20030123;MDA試劑盒南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號(hào)20030107;兔抗小鼠Insulin免疫組化染色試劑盒天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品。1.3主要儀器芬蘭MK-3型酶標(biāo)儀；德國(guó)ZK15型超低溫離心機(jī)；日本OlympusVANOX型萬能顯微鏡；北京天地百年科技有限責(zé)任公司TD-2000型真彩病理細(xì)胞顯微分析系統(tǒng)。2方法2.1四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型的制備實(shí)驗(yàn)用成年雄性昆明種小鼠(體重20±2g)先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，禁食24h，自由飲水。將四氧嘧啶用生理鹽水配成0.7%注射液，每只小鼠按70mg/kg尾靜脈一次性注射。注射后第5天測(cè)空腹血糖，空腹血糖值大于10.OOmmol/L者納入糖尿病模型。2.2動(dòng)物分組及處理正常小鼠10只為正常對(duì)照組，糖尿病小鼠40只按血糖高低隨機(jī)分為4組，分別為模型對(duì)照組、藥物對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組(大、小劑量組)。實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠均給予塊料喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組每日分別灌服黃蜀葵花總黃酮提取物溶液0.5ml/kg(大劑量組)，0.2ml/kg(小劑量組)；藥物對(duì)照組每日灌服降糖靈0.2g/kg;模型對(duì)照組和正常對(duì)照組每日灌服相應(yīng)體積的蒸餾水。實(shí)驗(yàn)周期為3周。2.3檢領(lǐng)[J實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食12h后分別取眼眶靜脈竇血，分離血清，用全自動(dòng)生化儀測(cè)定小鼠空腹血糖。檢測(cè)結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠血糖水平明顯增高(P<0.001)，說明小鼠糖尿病模型造模成功。降糖樣品兩個(gè)劑量組血糖值與模型組血糖值相比，均有較明顯的降糖作用。結(jié)果詳見表l。表l降糖樣品對(duì)鏈脲霉素致小鼠糖尿病血糖水平的影響(X士SD)組另u劑量(g/kg)動(dòng)物數(shù)(只)血糖(mmol/L)P值正常對(duì)照組-105.78±0.890.00000004模型組-1019.56±5.99-降糖樣品低劑量0.51013.87±7.830.071降糖樣品高劑量1.010U.99士8.150.083降糖靈0.2108.87±1.960.00002注P值為各試驗(yàn)組與模型組比較綜上所述，黃蜀葵花總黃酮樣品具有較好的降糖活性。5實(shí)施例6黃蜀葵花總黃酮提取物片的降糖作用臨床觀察為了驗(yàn)證黃蜀葵花總黃酮提取物片降血糖和消除癥狀的療效及安全性，我們考察了159例糖尿病患者臨床應(yīng)用的情況，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。1對(duì)象和方法1.2中醫(yī)診斷和辨證分型凡有口渴多飲、消谷易饑、尿多而甜、形體漸見消瘦等三多一少癥狀者即可確診。主癥以口渴喜飲，易饑多食，或尿多色黃；次癥以倦怠乏力，自汗盜汗，氣短懶言，五心煩熱，心悸失眠，便秘，舌紅、干、少苔，脈細(xì)數(shù)無力者。1.2西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參考衛(wèi)生部《西藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》。1.3病例選擇選擇空腹血糖^7.84mmol*L_1的成人糖尿病患者，無嚴(yán)重合并癥。兩組的年齡、空腹及餐后2h血糖和24h尿糖均無顯著性差異，尿常規(guī)、血清谷氨_丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶經(jīng)檢驗(yàn)均無顯著性差異，資料具有可比性。1.4病例排除標(biāo)準(zhǔn)(1)孕婦，青少年及胰島素依賴型患者。(2)不合作者，指不能配合飲食控制或不按規(guī)定用藥影響療效者。(3)患者用藥前雖然血糖高于正常值，而由于飲食控制后空腹血糖下降至<7.28mmo1L-l，或餐后2h血糖下降<10.08mmo1L-l者。1.5實(shí)驗(yàn)方法采用隨機(jī)分組的方法，病例分為黃蜀葵花總黃酮片組和優(yōu)降糖組。黃蜀葵花總黃酮片組102例，口服黃蜀葵花總黃酮片，每次2片，每日3次，至出現(xiàn)療效時(shí)，逐漸減少為每日2次的維持劑量；優(yōu)降糖組57例，口服優(yōu)降糖(批號(hào)9405007)，每日3次，每次1.252.50mg，療程均為1個(gè)月。用藥后每周檢驗(yàn)空腹血糖、餐后2h血糖、24h尿糖，用以調(diào)整用藥劑量和觀察病情的變化。用藥前后檢查血、尿常規(guī)和測(cè)定肝、腎功能及血清膽固醇含量，以觀察藥物有無毒副作用。1.6療效標(biāo)準(zhǔn)參考衛(wèi)生部頒發(fā)的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》。1.7統(tǒng)計(jì)與分析應(yīng)用SPSS和SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)資料方差分析，均數(shù)間比較采用Studen—Newmanjfeuls法，部分?jǐn)?shù)據(jù)資料采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料方差分析和RiditAnalysis。2結(jié)果2.1總療效對(duì)比黃蜀葵花總黃酮片治療組顯效率為38.24%，總有效率為89.21%;優(yōu)降糖組顯效率為26.32%，總有效率為85.96%，兩組比較無顯著性差異(P>0.05)。2.2對(duì)血糖、尿糖的影響，結(jié)果見表2。表2試驗(yàn)組與優(yōu)降糖對(duì)糖尿病患者血糖、尿糖的影響(士s，mmolL-1)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與藥前比較，*P<0.05，**P<0.01;與給藥第1周比較，AP<0.05;與優(yōu)降糖組比較，ftP〈0.05。由表2可見兩組病人經(jīng)治療后，各周的空腹血糖、餐后2h血糖及24h尿糖與治療前相比，均有下降(P<0.05，P<0.01)。黃蜀葵花總黃酮片組餐后2h血糖及24h尿糖還有持續(xù)下降的趨勢(shì)，第2、3、4周均值與第1周相比有顯著性差異(P<0.05);其中24h尿糖的降低率低于優(yōu)降糖組(P<0.05)，至觀察結(jié)束時(shí)，黃蜀葵花總黃酮片組下降76.76%，優(yōu)降糖組下降68.07%。2.3癥狀療效對(duì)比見表3。表3兩組癥狀療效的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與優(yōu)降糖組比較，*P<0.05，**P<0.01，微P<0.001。注與用藥前比較，*P<0.05，**P<0.01。表3結(jié)果表明，對(duì)糖尿病主要癥狀如口渴喜飲，易饑多食、尿多色黃等，兩組的總有效率在83.33%88.88%，無顯著性差異；黃蜀葵花總黃酮片組對(duì)倦怠乏力、自汗、盜汗、氣短懶言、五心煩熱、心悸、失眠等氣陰兩虛等主、次癥的改善，優(yōu)于優(yōu)降糖組，差異有非常顯著性意義(P<0.001或P<0.05)。2.4對(duì)肝、腎功能及血象的影響兩組病人經(jīng)治療后，其肝、腎功能及血象較治療前無顯著變化。權(quán)利要求一種從植物中提取總黃酮的藥物的制備方法，其特征為(1)總黃酮提取物的提取分離純化取黃蜀葵花藥材，加50～90％乙醇回流提取，提取液濃縮，水沉24h，抽濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱，采用醇水梯度洗脫，洗脫液濃縮、干燥，得到黃蜀葵花有效部位——總黃酮提取物；(2)制劑的制備取總黃酮提取物，加入藥劑學(xué)上可以接受的藥用輔料，用常規(guī)制藥工藝制備成藥劑學(xué)上允許的各種口服固體制劑、口服液體制劑、注射制劑。2.如權(quán)利要求l所述的一種從植物中提取總黃酮的藥物的制備方法，其中步驟(2)所述的口服固體制劑是片劑、顆粒劑、滴丸劑和膠囊劑。3.如權(quán)利要求l所述的一種從植物中提取總黃酮的藥物的制備方法，其中步驟(2)所述的口服液體制劑是口服液。4.如權(quán)利要求l所述的一種從植物中提取總黃酮的藥物的制備方法，其中步驟(2)所述的注射制劑是水針劑和粉針劑。5.如權(quán)利要求l所述的一種從植物中提取總黃酮的藥物的制備方法，其中步驟(2)所述的制劑的制備處方為片劑組成為總黃酮提取物為60-80重量份，藥用輔料為20-40重量份；顆粒劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為140-160重量份；膠囊劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為40-60重量份；滴丸劑劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為340-360重量份；口服液組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為540-560重量份；水針劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為540-560重量份；粉針劑組成為總黃酮提取物為40-60重量份，藥用輔料為540-560重量份。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從植物中提取的總黃酮提取物的藥物，在制備治療糖尿病患者方面的藥物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種從植物中提取總黃酮及其藥物制劑的制備和應(yīng)用，其特征在于從黃蜀葵花中提取分離制備得到含量高于50％的總黃酮提取物，與藥用輔料混合制備成藥劑學(xué)上可以接受的固體制劑，藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的總黃酮藥物制劑具有降血糖的作用，可應(yīng)用于糖尿病患者的治療。文檔編號(hào)A61K9/48GK101744850SQ200810238299公開日2010年6月23日申請(qǐng)日期2008年12月12日優(yōu)先權(quán)日2008年12月12日發(fā)明者凌沛學(xué),吳永霞,尚立霞,張玲,曲延偉申請(qǐng)人:凌沛學(xué)