專利名稱：：一種祖師麻的有效組分群及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是涉及一種祖師麻的有效組分群及其制備方法，以及祖師麻有效組分群在制備抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RhemuoatdiArthritis,簡(jiǎn)稱RA)是最常見(jiàn)的、殘疾率最高的骨關(guān)節(jié)疾病之一。它是一種以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為特征的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，其病變主要發(fā)生在滑膜，累及關(guān)節(jié)軟骨、韌帶、肌腱及全身組織，引起關(guān)節(jié)腫瘤，繼而軟骨破壞，關(guān)節(jié)間隙變窄，晚期關(guān)節(jié)畸形，功能活動(dòng)障礙瞬碑。本病呈全球性分布，發(fā)病年齡多在25-55歲之間，女性患者約為男性患者的2-3倍，我國(guó)的患病率為0.32-0.36%，低于歐美國(guó)家白種人的1%，是造成我國(guó)人群?jiǎn)适趧?dòng)力和殘疾的主要病因之一。盡管越來(lái)越多的研究人員投入到這一領(lǐng)域中，但是RA的治療仍不樂(lè)觀。目前治療RA的藥物大體上可分為中藥和化學(xué)藥物，臨床應(yīng)用證明，化學(xué)藥物治療RA見(jiàn)效快，但長(zhǎng)期服用副作用大，且具有依賴性，一般臨床只起到短期控制作用。因此安全有效、可長(zhǎng)期服用的治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物成為當(dāng)前研究開(kāi)發(fā)的一個(gè)熱點(diǎn)。中藥祖師麻收載于1977年版《中國(guó)藥典》一部，為瑞香科植物黃瑞香DaphnegiraldiiNitsche、陜甘瑞香DaphnetanguticaMaxim或DaphneretusaHemsl.的干燥蓬皮和根皮，具有祛風(fēng)濕，活血止痛的功效，用于風(fēng)濕痹痛，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛。關(guān)于祖師麻治療RA有效組分的研究見(jiàn)有發(fā)明專利申請(qǐng)(1)一種祖師麻有效組分及其制備方法與應(yīng)用(200510013864.8)，該發(fā)明涉及祖師麻的有效組分及其制備方法與應(yīng)用，采用水或含水低級(jí)醇提取，樹(shù)脂精制，得到祖師麻的有效組分。該藥物由祖師麻中的祖師麻甲素、西瑞香素、瑞香辛等組成，總香豆素的含量在50-90%之間。所得到的祖師麻有效組分可作為抗炎鎮(zhèn)痛藥應(yīng)用，可制成口服劑，注射劑，外用制劑等等。(2)祛毒祖師麻及其外用透皮吸收制劑和制備工藝(200610041983.9)，該發(fā)明提供一種祛毒祖師麻及制備方法，是在一定比例的祖師麻根皮、生姜、甘草等原料中加1016倍量的水煎煮l3次，每次13小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.21.3(6(TC)的清膏；加9095%乙醇使含醇量到5070%，充分?jǐn)嚢?，放置過(guò)夜，棄去沉淀，取上清液并回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.3(6(TC)的稠膏即得。實(shí)驗(yàn)證明，該祛毒祖師麻的鎮(zhèn)痛效果明顯優(yōu)于普通工藝提取的祖師麻，而且具有無(wú)毒、無(wú)刺激，副作用小等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明同時(shí)提供了利用該祛毒祖師麻制成的復(fù)方外用透皮吸收制劑，該制劑是在祛毒祖師麻中加入促透皮吸收的中藥和透皮吸收劑制備而成，有效促進(jìn)藥理活性成分的迅速吸收，使其達(dá)到高效、速效的治療效果。其余發(fā)明專利申請(qǐng)多為制劑技術(shù)研究。綜合研究結(jié)果表明，總香豆素類成分為祖師麻的抗炎鎮(zhèn)痛的有效組分，其中瑞香素(daphnetin)為其主要成分。二砲原酸酯類成分是產(chǎn)生皮膚刺激等副作用的刺激性成分。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種祖師麻抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的有效組分群。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供祖師麻抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有效組分群的制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供祖師麻有效組分群在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用?；谏鲜鲅芯勘尘?，我們認(rèn)為總香豆素成分不是祖師麻抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的唯一有效組分，皂苷類成分也可能是抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有效組分之一。據(jù)此，進(jìn)行了祖師麻治療RA的有效組分制備及其配比研究，最終確定了由總香豆素和總皂苷按照適宜比例組合而成的有效組分群為祖師麻治療RA的有效組分群。本發(fā)明的研究人員在多次實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)分離得到了祖師麻抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的有效組分群，并確定各個(gè)部位的活性，確證了二萜原酸酯類成分有很強(qiáng)的刺激性，總香豆素成分和皂苷類成分是祖師麻抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的主要活性群。本發(fā)明去除了有毒性的二萜原酸酯類成分，并確定活性成分總香豆素和總皂苷的最佳配比。本發(fā)明實(shí)施的技術(shù)方案如下一種祖師麻有效組分群，包括有效組分總香豆素，其特征在于，該有效組分群還包括有效成分總皂苷，其中總香豆素的含量為50%-90%，總皂苷的含量為50%-90%，二者按l-9:9-l的重量配比混合制成。祖師麻有效組分群的制備方法，其制備步驟如下"(l)將祖師麻藥材粉碎成粗粉，先用含水低級(jí)醇提取，回收含水低級(jí)醇，加水分散，再先后分別用兩種不同的低極性有機(jī)溶劑萃取，回收低極性有機(jī)溶劑、回收后的藥液濃縮、干燥，其中有機(jī)溶劑I萃取得到a萃取物(二萜類成分)，有機(jī)溶劑II萃取得到b萃取物(總香豆素成分)；(2)棄去a萃取物(二萜類成分)，將b萃取物制備后的萃取母液上大孔吸附樹(shù)脂柱，用乙醇洗脫，回收乙醇，濃縮、干燥，得c提取物(總皂苷成分)；(3)將b萃取物(總香豆素成分)和C提取物(總皂苷成分)按照重量配比混合制成。上述制備步驟(1)中所述的含水低級(jí)醇為甲醇或乙醇，濃度為0-卯％，優(yōu)選50-90%。上述制備步驟(1)中所述的提取方法為浸漬、滲漉、煎煮、回流等，優(yōu)選浸漬、滲漉。上述制備步驟(1)中所述的濃縮為常壓或減壓，回收均為減壓。上述制備步驟(1)中所述的干燥方法為常壓干燥、真空干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等，優(yōu)選真空干燥、冷凍干燥。上述制備步驟(1)中所述的加水分散使藥液濃度為0.1-0.8g生藥/ml，優(yōu)選濃度為0.4-0.8g生藥/ml。上述制備步驟(1)中所述的萃取用低極性有機(jī)溶劑為環(huán)己垸、石油醚、氯仿或乙酸乙酯中的一種，其中有機(jī)溶劑I為環(huán)己垸、石油醚或氯仿，有機(jī)溶劑II為乙酸乙酯。上述制備步驟(2)中所述的大孔樹(shù)脂為DIOI、AB-8、HPD100或HPD200中的一種。上述制備步驟(2)中所述的乙醇洗脫濃度為20-95%，優(yōu)選20-60%。上述制備步驟(3)中所述的1)萃取物中總香豆素含量為50%-90%，c提取物中總皂苷的含量為50%-卯％，二者的重量比為l-9:9-1。本發(fā)明的祖師麻有效組分群在制備抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的祖師麻有效組分群的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活性成分是總香豆素、總皂苷類相互協(xié)同作用的結(jié)果，而不是簡(jiǎn)單的藥效上的疊加。本發(fā)明的祖師麻有效組分群，可與制劑技術(shù)相結(jié)合，制成藥劑領(lǐng)域的相應(yīng)的各種劑型，所述劑型如口服制劑(如片劑、顆粒劑、膠囊等)和外用制劑(如巴布劑等)等。其中，片劑輔料選自淀粉、糊精、糖粉、乳糖、纖維素衍生物、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、硬脂酸及其鹽、滑石粉、聚乙二醇等。其中，顆粒劑輔料選自糖粉、糊精、乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、羥丙基淀粉等。其中，巴布劑基質(zhì)選自聚丙烯酸(鈉)、聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、檸檬酸、三氯化鋁、明膠、高領(lǐng)土、甘油、丙二醇、山梨醇、聚乙二醇、氮酮等。該制劑是以所述的祖師麻有效組分群為主要成分，加入藥劑學(xué)可接受的輔料，按照藥劑學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法進(jìn)行制備。如將該有效組分群與一種或多種載體結(jié)合，然后制成相應(yīng)的劑型。本發(fā)明的祖師麻有效組分群的制劑，臨床上主要用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，抗炎鎮(zhèn)痛等藥物。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于在系統(tǒng)篩選和藥理活性驗(yàn)證的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)祖師麻抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的活性物質(zhì)群，發(fā)現(xiàn)抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的活性成分為總香豆素和總皂苷成分。并確定最佳配比，去除有刺激性的二萜原酸酯類成分，保證用藥安全。本發(fā)明所提供的祖師麻有效組分群，其制備工藝簡(jiǎn)單，易于操作，不需高溫、高壓設(shè)備，成本低廉。同時(shí)采用低極性溶劑萃取技術(shù)，去除了有毒的二萜類成分，降低了毒副作用，減少了用藥劑量，使用藥更加安全。經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果表明本發(fā)明的祖師麻有效組分群總香豆素和總皂苷比單組分總香豆素治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的療效更加顯著。本發(fā)明所得到的有效組分分別進(jìn)行如下藥效學(xué)試驗(yàn)1.二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)取1822g健康小鼠80只，雄性，按體重隨機(jī)分8組，每組10只。分別為模型組，阿司匹林對(duì)照組，b萃取物高、低劑量組，C提取物高、低劑量組，b+C提取物高、低劑量組。各組動(dòng)物按相應(yīng)劑量灌胃給予相對(duì)應(yīng)藥液，空白對(duì)照組灌胃給予等量蒸餾水，給藥容積均為20ml/kg，連續(xù)給藥7d。末次給藥后30min，將30ul二甲苯涂于小鼠右耳廓,左耳空白對(duì)照。lh后處死動(dòng)物，剪下兩耳，用8mm打孔器取兩耳相同部位的耳片，分析天平稱重，以兩耳差值作為腫脹度，t檢驗(yàn)比較各給藥組與模型組之間耳腫脹度差異顯著性。按下列公式計(jì)算腫脹抑制率，結(jié)果見(jiàn)表l。腫脹抑制率=(給藥組腫脹度-模型組腫脹度)/模型組腫脹度><100%表l祖師麻各部位對(duì)二甲苯致耳廓腫脹影響(n=10,x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注同空白組比較，*P<0.05，*尸<0.012.小鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)取1822g健康小鼠80只，雄性，按體重隨機(jī)分8組，每組10只。分別為模型組，阿司匹林對(duì)照組，b萃取物高、低劑量組，c提取物高、低劑量組，b+c提取物高、低劑量組。每只小鼠胸部切開(kāi)一小口，用鑷子將10mg高壓滅菌棉球(青霉素浸泡，烘干)從切口處植入左側(cè)腋下。自手術(shù)當(dāng)日開(kāi)始，開(kāi)始給藥，方法同上。連續(xù)灌胃7天，于末次給藥后24h，打開(kāi)切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，在恒溫7(TC烘箱中干燥12小時(shí)后，應(yīng)用分析天平稱重，棉球前后重量差值即為肉芽腫重。t檢驗(yàn)比較各給藥組與模型組之間耳腫脹度差異顯著性。見(jiàn)表2。表2祖師麻各部位的棉球肉芽腫試驗(yàn)(n=10,;±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注同空白組比較，*尸<0.05，*尸<0.01結(jié)果表明b+C提取物部位能較好的抑制小鼠棉球肉芽腫的形成。3.鎮(zhèn)痛試驗(yàn)選取體重為20士2g的清潔級(jí)ICR小鼠72只。？、d各半，按體重隨機(jī)分為6組，即空白組、阿司匹林對(duì)照組、b萃取物組、c提取物組、b+c提取物組。除空白組外，各給藥組按生藥量折算，體表面積換算成2倍等效劑量給藥，ig給藥，一日1次，連續(xù)一周。于末次給藥后0.5小時(shí)，腹腔注射新鮮配制的0.6%冰醋酸，0.1ml/10g。記錄注射致痛劑后15min內(nèi)各鼠扭體次數(shù)。t檢驗(yàn)比較各給藥組與空白對(duì)照組間扭體次數(shù)差異顯著性。然后按下列公式計(jì)算藥物鎮(zhèn)痛抑制率。試驗(yàn)過(guò)程中室溫維持在20irC。扭體反應(yīng)的具體表現(xiàn)為腹部?jī)?nèi)凹、軀干與后肢伸張、臀部高起、蠕行等。扭體反應(yīng)抑制率小于25%為無(wú)鎮(zhèn)痛作用，在25%40%為弱鎮(zhèn)痛作用，在40%55%為中度鎮(zhèn)痛作用，大于55%為強(qiáng)鎮(zhèn)痛作用。按下列公式計(jì)算百分抑制率。結(jié)果見(jiàn)表3。抑制率％=(對(duì)照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/對(duì)照組扭體次數(shù)><100%，表3醋酸扭體試驗(yàn)結(jié)果(n=12，S±S)組別劑量(mg.kg—1)扭體次數(shù)抑制率(％)空白組38.9±5.9阿司匹林組15019.3±7.7**50.3b萃取物組35.6436.5±10.56.1c提取物組35.2828.8±11.6*26.1b+c提取物組__25.7士13.7"_34.0注與空白對(duì)照組比較<0.05，**尸<0.01結(jié)果表明b+C提取物組鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于單獨(dú)的b萃取物組和C提取物組。4.大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎試驗(yàn)雄性SD大鼠60只，按體重隨機(jī)分為6組(1)空白對(duì)照組，(2)模型組，(3)醋酸地塞米松片組，(4)b萃取物組，(5)c提取物組，(6)b+c提取物組。致炎方法將大鼠的空白對(duì)照組的右后足拓皮內(nèi)注射0.1ml生理鹽水，其余各組每只鼠均在右后足皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑O.lml致炎。于造模一周后開(kāi)始灌胃給藥，(1)空白對(duì)照組蒸餾水；(2)模型組蒸餾水；(3)醋酸地塞米松片0.75mg/kg;(4)b萃取物組17.82mg/kg;(5)c提取物組17.64mg/kg;(6)b+c提取物組35.46mg/kg。各組大鼠每日均按10ml/kg劑量灌胃給藥一次，連續(xù)給藥三周。觀察指標(biāo)及結(jié)果如下4.1對(duì)AA大鼠足容積的影響對(duì)于致炎前、致炎后2天、7天、15天、23天、28天的不同時(shí)間點(diǎn)觀察測(cè)量大鼠左右足趾容積，連測(cè)定兩次，求平均值，按下列公式計(jì)算關(guān)節(jié)腫脹度。結(jié)果見(jiàn)表4、表5。腫脹率％=(造模后足容積一造模前足容積)+造模前足容積><100表4祖師麻各部位對(duì)AA大鼠右足腫脹度的影響(11=10，^±S)分組試驗(yàn)前足容積腫脹率(％)(ml)d2d7dl2dl8d23d28空白組1.8±0.052.8±0.45.1±1.07.2±1.812.2±2.915.5±4.416.1±4,8模型組1.80±0.1448.8±11.8AA27.3±13.5AA35.8±11.7AA44.1±15.0AA53.5±14.5AA55.6±16.9AA地塞米松1.83±0.1246.4±11.425.1±5.04.1±1.5**3.6±1.1**1.9±0.8O.O士O.Ob萃取物組1.82±0.0947.5±3.527.8±7.829.2±5.939.7±10.635.7±4.5**39.6±8.3**c提取物組1.82±0.0847.9±5.326.3±5.727.2±4.3*30.3±13.8**34.3±8.7**31.2士11.9**b+c提取物組1.80±0.1047.0±8.028.2±9.826.7±7.8*28.6±5.4**25.5±5.0**24.1士6.2"注與空白組比較Ap〈0.05,AAp〈0.01與模型組比較*卩<0.05，**p<0.01表5祖師麻各部位對(duì)AA大鼠左足腫脹度的影響(r^10，f±S)分組試驗(yàn)前足容積腫脹率(％)(ml)d2D7dl2dl8d23d28空白組1.78±0.052.78±0.314,90±0.76.3±1.412.5±2.516.24±2.0216.28±4.68模型組1.80±0.152.81士0.334.9±1.011.23±1.01AA24.1±15.031.63±2.10AA35.69±17.72AA地塞米松1.81±0.122.80±0.284.8±1.110.9士1.23.6±U"0±0"0±0**b萃取物組1.80±0.072.79±0.325.1±1.1ll.l士l.l29.7±4.618.53±1.1519.67±11.07c提取物組1.82±0.082.80±0.334.9±1.811.5±1.820.3±3.819.50±1.4918.39±12.308b+c提取物組1.79±0.102.81±0.274.9±1.211.7±1.218.6±4.418.52±1.4217.90±8.29注與空白組比較Ap〈0.05，AAp<0.01與模型組比較tp〈0.05，**p<0.014.2繼發(fā)病變分級(jí)給藥三周后，采血前對(duì)每只動(dòng)物進(jìn)行繼發(fā)病變分級(jí)，觀察左后肢，左、右前肢的腫脹情況以及耳后紅斑、尾部結(jié)節(jié)的發(fā)生情況，用五級(jí)評(píng)分法表示，0級(jí)無(wú)紅腫；I級(jí)個(gè)別足趾輕度紅腫；II級(jí)數(shù)個(gè)足趾及足掌的輕度紅腫；III級(jí)數(shù)個(gè)足掌踝以下的嚴(yán)重腫脹，出現(xiàn)耳部紅斑及尾中結(jié)節(jié)；W級(jí)紅腫超過(guò)踝關(guān)節(jié)且不能負(fù)重，出現(xiàn)耳部紅斑及尾部結(jié)節(jié)。結(jié)果見(jiàn)表6。表6各組實(shí)驗(yàn)鼠繼發(fā)病變分級(jí)統(tǒng)計(jì)組別例數(shù)0級(jí)繼發(fā)病變分級(jí)i級(jí)n級(jí)m級(jí)廳模型組8地塞米松組8b萃取物組8c提取物組8b+c提取物組84124246411秩和檢驗(yàn)結(jié)果，H-29.103,PO.Ol，結(jié)果顯著。各組與模型組比較，地塞米松組和b+c提取物組效果最好，P=0.002，有極顯著性差異。4.3對(duì)AA大鼠血沉的影響給藥三周后，大鼠頸總動(dòng)脈取血2.5ml，注于含有干燥抗凝劑的小瓶?jī)?nèi)，充分混合以抗凝，用一支細(xì)長(zhǎng)部分超過(guò)llcm的滴管吸取上述血液，將細(xì)長(zhǎng)滴管直插至壓縮體積管(Wintrobe管)管底，慢慢將血液注入管內(nèi)，邊注邊將滴管退出，使血液灌滿至100mm刻度處。血液中不可含有氣泡。將管口以橡皮塞緊塞，將管垂直放lh，讀取紅細(xì)胞下沉的mm數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表7。表7祖師麻各部位對(duì)AA大鼠血沉的影響(^±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與空白組比較AAp〈0.01;與模型組比較fp〈0.05，**p<0.014.4祖師麻有效成分對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)病理組織學(xué)的影響切開(kāi)膝關(guān)節(jié)皮膚及皮下組織，暴露關(guān)解囊，取下滑膜組織，用10%甲醛溶液固定，HE染色，常規(guī)光鏡下觀察滑膜上皮細(xì)胞有無(wú)變性，壞死，增生，滑膜下組織有無(wú)充血，水腫，炎細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)果見(jiàn)表8。表8關(guān)節(jié)滑膜病變輕重程度評(píng)分結(jié)果組別動(dòng)物數(shù)(只)病變?cè)u(píng)分(Z±S)空白組60.o士o.oo模型組81.94±1.37AA地塞米松組60.75±0.42*b萃取物組62.75±0.61c提取物組62.42±0.80b+c提取物組60.75±0.27*注與空白組比較厶Ap〈0.01;與模型組比較*<0.054.5滑液細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量改變的影響第28天，脫頸椎處死，吸取0.2ml生理鹽水(NS)，沿臏上囊部位進(jìn)針刺入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，反復(fù)沖洗關(guān)節(jié)腔，抽出沖洗液，1000rmin—1，離心10min，吸取上清液，取20iU與下層沉淀吹打均勻，涂片，經(jīng)HE染色后，電子顯微鏡下檢查滑液中細(xì)胞形態(tài)的變化，并記錄4周和中間5個(gè)視野下的細(xì)胞數(shù)，取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果見(jiàn)表9。表9祖師麻各部位對(duì)AA大鼠滑液中細(xì)胞增殖的影響(n=10,^±s)組別淋巴細(xì)胞巨噬細(xì)胞滑膜細(xì)胞空白23.33±2.5812.00±2.5310.67±1.63模型38.67±1.21AA23.00±2.37AA18.17±0.75AA地塞米松21.50±2.59**11,67±2.80**9.17±1.72**b萃取物組28.50±3.45*22.33±2.1614.33±1.63**c提取物組30.17士2.32"20.17±1.94*12.67±1.03**b+c提取物組29.17士1.17"17.33士1.86"11.50±1.38**注與空白組比較AAp〈0.01;與模型組比較*卩<0.05，**p<0.0具體實(shí)施方式實(shí)施例l祖師麻有效組分群的制備方法IO公斤粉碎的祖師麻藥材，以15Ll(P/。乙醇浸泡2小時(shí)，裝入滲漉桶，收集100L滲漉液，濃縮。濃縮液先后用石油醚萃取三次，每次石油醚用量分別為1L，棄除石油醚萃取部位，萃取后的水層再用乙酸乙酯萃取三次，每次乙酸乙酯用量為1L，合并乙酸乙酯萃取液，減壓回收乙酸乙酯，濃縮液進(jìn)一步濃縮，噴霧干燥，得b萃取物。乙酸乙酯萃取后的水層液吸附于D101型樹(shù)脂，先以10%乙醇洗去雜質(zhì)，再以60%乙醇洗脫，洗脫液經(jīng)減壓回收乙醇后濃縮，濃縮液噴霧干燥，得c提取物。采用分光光度法分別測(cè)得總香豆素的含量為78%，總皂苷含量為65%。將b萃取物和c提取物按照l(shuí):9的比例混合。實(shí)施例2祖師麻有效組分群的制備方法IO公斤粉碎的祖師麻藥材，裝入回流裝置，分別以8L、8L、6L的20。/。乙醇回流提11取，1.5小時(shí)(共三次)，合并提取液，減壓濃縮蒸去乙醇，分別用石油醚萃取三次，每次石油醚用量為1L，棄除石油醚萃取物。石油醚萃取后的母液再用乙酸乙酯萃取三次，每次乙酸乙酯用量為1L，減壓回收乙酸乙酯并濃縮，真空干燥，得b萃取物。乙酸乙酯萃取后的水層液吸附于AB-8型樹(shù)脂，先以10%乙醇洗去雜質(zhì)，再以60%乙醇洗脫，乙醇洗脫液經(jīng)減壓回收乙醇并濃縮后，真空干燥，得c提取物。采用分光光度法測(cè)得總香豆素的含量85%，總皂苷含量為65%。將b萃取物和c提取物按照2:l的比例混合。實(shí)施例3祖師麻有效組分群的制備方法IO公斤粉碎的祖師麻藥材，以10L的40。/。乙醇浸漬12小時(shí)，過(guò)濾，藥S再以8L的40。/o乙醇浸泡12小時(shí)，合并兩次乙醇浸漬液，減壓回收乙醇，濃縮液加石油醚萃取三次，每次石油醚用量為1L，棄除石油醚萃取液，石油醚萃取后的水層再用乙酸乙酯萃取二次，每次乙酸乙酯用量為1L，合并乙酸乙酯萃取液，減壓回收乙酸乙酯并濃縮，噴霧干燥，得b萃取物(總香豆素)。乙酸乙酯萃取后的水層液吸附于XAD-4型樹(shù)脂，先以20%乙醇洗去雜質(zhì)，再以60%乙醇洗脫，濃縮洗脫液，噴霧干燥，得c提取物(總皂苷)，分光光度法測(cè)得總香豆素的含量為88%,總皂苷含量為75%。將b萃取物總香豆素和c提取物總皂苷按照9:l的比例混合。實(shí)施例4祖師麻有效組分群的制備方法IO公斤粉碎的祖師麻藥材，以10L的40。/。乙醇滲漉，收集50L滲漉液，合并，濃縮，減壓回收乙醇，濃縮液加石油醚萃取三次，每次石油醚用量為1L,棄除石油醚萃取液，石油醚萃取后的水層再用乙酸乙酯萃取三次，每次乙酸乙酯用量為1L，合并乙酸乙酯萃取液，減壓回收乙酸乙酯并濃縮，噴霧干燥，得b萃取物(總香豆素)。乙酸乙酯萃取后的水層液吸附于XAD-4型樹(shù)脂，先以20%乙醇洗去雜質(zhì)，再以60%乙醇洗脫，濃縮洗脫液，噴霧干燥，得c提取物(總皂苷)，分光光度法測(cè)得總香豆素的含量為68%，總皂苷含量為75%。將b萃取物總香豆素和c提取物總皂苷按照9:l的比例混合。實(shí)施例5片劑的制備方法取祖師麻有效組分群250g(b:c=l:9)，加淀粉250g，乳糖500g，以75%乙醇制粒，干燥、壓片，得片劑，每片含祖師麻有效組分群20mg。實(shí)施例6膠囊劑的制備方法取祖師麻有效組分群200g(b:c=9:1)，加微晶纖維素200，乳糖550g，以10。/。PVP乙醇制粒，干燥、填充于膠囊，得膠囊劑，每粒膠囊含祖師麻有效組分群為25mg。實(shí)施例7巴布劑的制備方法取卡波姆589.5g溶于水中，充分溶脹，在400r/min下攪拌30min，作為A相；取祖師麻有效組分群350g(b:c=2:5)、甘油5423g、丙二醇1179g與15ml乙醇互溶，超聲15min，低速攪拌下分別加入聚丙烯酸鈉1415g和高嶺土943g，攪拌均勻，作為B相；取檸檬酸35g與三氯化鋁65g溶解于水中作為C相。攪拌下將B相與C相混合，然后在200r/min下加入A相，充分?jǐn)嚢璩烧吵頎畎牍虘B(tài)流體后立即涂于無(wú)紡布上，干燥得巴布劑。權(quán)利要求1、一種祖師麻有效組分群，包括有效組分總香豆素，其特征在于，該有效組分群還包括有效組分總皂苷，其中，總香豆素的含量為50-90％，總皂苷的含量為50-90％，二者按1-99-1的重量配比混合制成。2、一種制備權(quán)利要求1所述的祖師麻有效組分群的方法，其特征在于制備步驟如下(1)取祖師麻藥材粉碎成粗粉，先用含水低級(jí)醇提取，回收含水低級(jí)醇，加水分散，再先后分別用兩種不同的低極性有機(jī)溶劑萃取，回收低極性有機(jī)溶劑，回收后的藥液經(jīng)濃縮、干燥，其中有機(jī)溶劑〗萃取得到a萃取物二萜類成分，有機(jī)溶劑II萃取得到b萃取物總香豆素成分；(2)棄去a萃取物二萜類成分，將b萃取物制備后的萃取母液上大孔吸附樹(shù)脂柱，用乙醇洗脫，回收乙醇，濃縮、干燥，得c提取物總皂苷成分；(3)將b萃取物總香豆素成分和c提取物總皂苷成分按照重量配比混合制成。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于在步驟(1)中所述的含水低級(jí)醇為甲醇或乙醇，濃度為0-90%。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于在步驟(1)中所述的提取方法為浸漬、滲漉、煎煮或回流；所述的加水分散使藥液濃度為0.1-0.8g生藥/ml。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于在步驟(1)中所述的低極性有fl溶劑為環(huán)己垸、石油醚、氯仿或乙酸乙酯中的一種，其中有機(jī)溶劑I為環(huán)己烷、石油醚或氯仿，有機(jī)溶劑II為乙酸乙酯。6、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于在步驟(1)中所述的b萃取物總香豆素含量為50°/。-90%。7、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于在步驟(2)中所述的大孔樹(shù)脂為DIOI、AB-8、HPD100或HPD200中的一種。8、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于在步驟(2)中所述的c提取物中總皂苷含量為50%-90%。9、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于在步驟(3)中所述的b萃取物總香豆素和c提取物總皂苷的重量配比為l-9:9-1。10、如權(quán)利要求l所述的祖師麻有效組分群在制備抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。全文摘要一種祖師麻抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的有效組分群，其活性成分為總香豆素和總皂苷，按一定重量配比所制成；其制法為將祖師麻藥材粉碎成粗粉，先用醇提，醇提液回收醇后，加水分散，再分別先后用兩種有機(jī)溶劑萃取、回收、濃縮，先得到a萃取物(二萜類成分)，再得到b萃取物(總香豆素成分)；棄去a萃取物(二萜類成分)，將b萃取物萃取后的藥液上大孔吸附樹(shù)脂柱，用乙醇洗脫，回收乙醇，濃縮得c提取物(總皂苷成分)；將總香豆素成分和總皂苷成分按一定重量配比混合制成。本發(fā)明的祖師麻有效組分群，制備工藝簡(jiǎn)單、易操作，不需高溫、高壓設(shè)備，成本低，去除有毒的二萜類成分，降低了毒性，提高了安全性，藥理試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明有效組分群治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎效果顯著優(yōu)于單一組分總香豆素。文檔編號(hào)A61K36/83GK101474315SQ20081024332公開(kāi)日2009年7月8日申請(qǐng)日期2008年12月26日優(yōu)先權(quán)日2008年12月26日發(fā)明者單進(jìn)軍,皓吳,張新莊,秋杜,畢肖林,狄留慶,許惠琴,趙曉莉,靜蕓蕓申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)