專利名稱：：用于兒童或嬰幼兒的含有滅活益生菌的產(chǎn)品的制作方法用于兒童或嬰幼兒的含有滅活益生菌的產(chǎn)品相關專利和專利申請的交叉引用本申請是非臨時專利申請，但要求2007年2月28日申請的美國臨時專利申請順序號60/904,122的優(yōu)先權的權益，該臨時專利申請通過51用全部結合到本文中。
背景技術：
：(1)發(fā)明領域本發(fā)明總的來講涉及含有至少一種滅活益生菌(inactivatedprobiotics)的產(chǎn)品和使用至少一種滅活益生菌的方法。(2)相關領域的描述炎癥反應是在身體受到感染因子侵襲、抗原攻擊或者物理、化學或外傷損害后恢復和維持穩(wěn)態(tài)的努力。局部性炎癥限于特定部位，可表現(xiàn)出不同的癥狀，包括發(fā)紅、腫脹、發(fā)熱和疼痛。雖然一般認為炎癥反應是對損害的有益于健康的反應，但是如果免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)不當，則可能出現(xiàn)不良的生理反應。在這種情況下，身體的正常保護性免疫系統(tǒng)通過像對待受感染或異常組織那樣對待健康組織，從而對自身組織造成損害?；蛘撸绻霈F(xiàn)損害，則炎癥反應與引起損害的威脅不成比例。當出現(xiàn)這種情況時，炎癥反應給身體造成的損害可能比因子本身所造成的損害大得多。研究表明，炎癥反應部分由促炎細胞因子和抗炎細胞因子兩者的表達增加組成。細胞因子是低分子量的生物活性蛋白，參與免疫反應和炎癥反應的協(xié)調(diào)，以及特定免疫細胞群之間的溝通。在炎癥反應期間多種細胞類型產(chǎn)生細胞因子，包括嗜中性粒細胞、單核細胞3和'淋巴細胞。炎癥部位產(chǎn)生的細胞因子由存在的多種機制影響炎癥反應。然而，如果促炎反應無法被抗炎細胞因子成功抵銷，則可能發(fā)生不受控制的全身性炎癥。與局部性炎癥相比，全身性炎癥是遍及全身分布的。這種類型的炎癥可包括特定部位的局部性炎癥，但是也可能與普通"流感樣"癥狀有關，包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、疲勞或活力減退、頭痛、食^t減退和肌肉僵硬。全身性炎癥可導致蛋白質(zhì)降解、分解代謝和代謝亢進。因此，重要器官(例如^l肉、心臟、免疫系統(tǒng)和肝臟)的結構和功能可能受損，并且可能引起多器官衰竭，最終導致死亡。Jeschke等,/raw//"j/fe"wafey//e/"y7a附/wato77as^o"se7T7e/7w"/7>awwo(月夷島素減弱對燒傷的全身性炎癥反應)，Mol.Med.8(8):443-450(2002)。雖然在對全身性炎癥機制的了解方面已經(jīng)取得了重大進展，但是由此病引起的死亡率之高仍然令人無法接受。呼吸道感染極其普遍，尤其在嬰兒中。在生命的第一年內(nèi)，嬰兒易反復患呼吸道感染，常常僅在第一年就經(jīng)歷3次~6次感染。僅在美國，每年就有約6%不滿1歲的嬰兒因下呼吸道感染而住院治療。呼吸道感染及其癥狀的范圍可介于輕微到嚴重之間，這取決于病毒類型和感染部位。上呼吸道感染本身常常表現(xiàn)為感冒，引起鼻、咽喉和鼻竇粘膜炎癥和肺脹。流行性感冒，通常稱為流感，是高度傳染性的上呼吸道病毒感染。流感癥狀包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛、肌肉痛、頭暈、咳嗽、咽喉痛、流鼻弟、惡心和腹瀉。另一種上呼吸道感染，即格魯布(croup)，主要是在吸氣時，引起非常嚴重的咳嗽和不同程度的呼吸困難?！阏J為下呼吸道感染比上呼吸道感染更嚴重。呼吸道合胞病毒(RSV)是嬰兒和4歲以下兒童下呼吸道感染的最常見的病因。VanWoensel，J.等,FZna/bovver及asp/rato^y7>acf/"Acf/ow47bwwgCM&w(嬰兒與低齡兒童的病毒性下呼吸道感染)，BMJ327:36-40(2003)。這是一種如此常見的病毒，以致于實際上所有兒童到3歲時都被RSV感染過。在多數(shù)嬰幼兒和兒童中，RSV是與感冒沒有區(qū)別的輕微呼吸道感染。它一般引起鼻塞、流鼻弟和咳嗽。針對RSV的保護包括T細胞應答和B細胞應答兩者、抗體應答(IgM、IgG和IgA)以及被細菌感染和病毒感染激活的其它免疫系統(tǒng)應答。研究表明嬰兒期RSV感染與后來在兒童期反復發(fā)生喘息、哞喘和特異性變態(tài)反應之間的關聯(lián)性。因此，控制RSV感染可預防延續(xù)到兒童期的嚴重呼吸系統(tǒng)并發(fā)癥。支氣管炎是累及支氣管的下呼吸道感染，是由病毒性炎癥引起的支氣管狹窄和腫脹。細支氣管炎與支氣管炎類似，但主要發(fā)生在嬰幼兒中。它是支氣管分支網(wǎng)中較小口徑氣管的炎癥。感染引起呼吸困難、頻繁劇烈的咳嗽和喘息，并可能需要住院治療。對于嬰幼兒可能最嚴重的下呼吸道感染是肺炎。肺炎是由肺泡感染引起的，使肺泡充滿常常是粘稠膿性性質(zhì)的液體，干擾二氧化碳的正常交換。肺炎的嚴重程度將取決于所累及的肺組織的量。多數(shù)上、下呼吸道感染是由病毒引起的，現(xiàn)時還沒有對這些病毒特別有效的預防或治療措施。一些呼吸道感染，包括流行性感冒，可用接種疫苗來預防。然而，即-使開發(fā)出對特定呼吸道感染的接種疫苗，它們也十分昂貴，而且并不是普遍可獲得的。同樣地，治療這些感染的藥物的可獲得性有限，并且價格不菲。因此，提供治療或預防嬰幼兒的呼吸道感染的非藥物方法是有益的。頻繁的呼吸道感染常常與急性中耳炎(AOM)(亦稱中耳感染)有關。AOM的特征是急性短期炎癥和中耳內(nèi)有流體。AOM可伴發(fā)鼻炎、咳嗽、發(fā)熱、咽喉痛、耳痛、聽覺減退、煩燥、易怒、食欲減退、嘔吐或腹瀉。經(jīng)由穿孔鼓膜的膿性耳溢液也被視為構成AOM的部分。50%的兒童到1歲時發(fā)作過至少一次AOM。80%的兒童到3歲生日時發(fā)作過至少一次。在1歲和3歲之間，35%的兒童可能重復發(fā)作AOM。AOM可由病毒或細菌引起。引起AOM最常見的細菌菌林是肺炎鏈球菌OS^eptococcws;"ewwow'ae)(35%的病例)、流感嗜血菌(//aewop/n7iw/"ywe"zae)(30%的病例)和粘膜炎莫拉氏菌(Moraxe〃acato庁/2flto)(10%的病例)。因為細菌菌抹常常引起感染，所以一般通過給予抗生素來治療AOM。實際上，因AOM開出的抗生素處方比嬰兒期的任何其它疾病的都多。通常，細胞因子反應是促炎還是抗炎取決于在任何特定時間定居在腸腔內(nèi)各種微生物的平衡。腸道粘膜表面定居著數(shù)量非常多、組成極其復雜且不斷變化的微生物是眾所周知的。腸道微生物區(qū)系的組成隨消化道以及不同的小環(huán)境(例如上皮粘膜層、隱窩深粘膜層和粘膜上皮細胞表面)而變化。具體的定居狀況取決于內(nèi)外因素，包括腔內(nèi)可獲得的分子、粘膜性質(zhì)以及宿主與微生物間的相互作用和微生物與微生物間的相互作用。Murch，S.H.,7b〃o/A/wgyAec/wc^/尸ra歸cs(益生菌降低Toll的變態(tài)反應)，Lancet,357:1057-1059(2001)。這些微生物構成了腸道微生物區(qū)系，主動參與免疫應答。在存在雙方互利共生關系(互利共生)的條件下，或者在對一方有利而對另一方并無害(偏利共生)的條件下，它們與上皮相互作用。HooperAeMawza//a/"feW"e(宿主與微生物的相互作用如何形成哺乳動物腸道的營養(yǎng)環(huán)境)，Annu.Rev.Nutr.22:283-307(2002)。實際上，有大量證據(jù)顯示腸道微生物區(qū)系與腸粘膜中不同細胞群之間強的相互作用或"相互影響，，。Bomiioux等,7Tze/她Wwea"<i/toM/cra/7craare"772e/wfe〃/geW/"tes^e"(腸及其微生物區(qū)系是保護宿主的伙伴達能專題研討會報告"巧妙的腸")，2002年6月14日在巴黎舉行，Am.J.Clin.Nutr.78:675(2003);Hooper,L.V.和Gordon,J丄，Cow附e"^///a^-Sa"en'a/i^/a"ora/j^s/"(腸內(nèi)共生的宿主與細菌之間的關系)，Sci.292:1115(2001);Haller等，A^"-尸a決ogew'c￡//c"aCo-Cw/fw^(腸上皮細胞/白細胞共培養(yǎng)物中非致病性細菌誘導不同的細胞因子反應)，GUT47:79(2000);Walker,W.A.，Wo/eo/Wwfn'e"&aw/養(yǎng)物和細菌定居在腸宿主防御發(fā)展中的作用)，J.Pediatr.Gastroenterol.Nutr.30:S2(2000)。另外，研究表明腸道微生物區(qū)系在成人局部和全身水平上誘導特異性免疫應答。Isolauri,E.等，尸rah'of^:垃》加o"/wmw"^(益生菌對免疫力的作用)，Am.J.Clin.Nutr.73:444S-50S(2001)。已知嬰幼兒體內(nèi)腸道微生物區(qū)系的發(fā)育程度遠不及成人。雖然成人的微生物區(qū)系由10"個以上的微生物和接近500種菌種組成，但是有一些是有害的，有一些是有益的，在絕對數(shù)和菌種多樣性兩者上，嬰幼兒的微生物區(qū)系僅含有這些微生物的一小部分。嬰幼兒與生具有無菌腸道，但是從產(chǎn)道、他們最初的環(huán)境和他們攝入的食物中獲得腸內(nèi)微生物區(qū)系。因為腸道微生物區(qū)系在新生兒早期生命中非常不穩(wěn)定，嬰幼兒的腸道通常難以維持有害細菌和有益細菌之間脆弱的平衡，因此降低了免疫系統(tǒng)正常發(fā)揮作用的能力。對于配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒(formula-fedinfant)尤其難以維持由配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒和母乳喂養(yǎng)的嬰幼兒(breast-fedinfant)腸內(nèi)細菌菌種之間的差異所引起的這種平衡。母乳喂養(yǎng)的嬰幼兒糞便中主要含有雙歧桿菌屬C^y^ok^en'ww)，和作為不常見貢獻者的鏈球菌屬(5Vre/tococcw力和乳桿菌屬(i:acto6acz7/1^)。相比之下，配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒體內(nèi)微生物區(qū)系更為多樣化，含有雙歧桿菌屬和擬桿菌屬(5a"eraWas)以及更多種致病菌-葡萄球菌CSto//^/ococci^)、大腸桿菌CEsc/zm'c/2/a//)和梭菌(<^0^/^0。母乳喂養(yǎng)的嬰幼兒和配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒的糞便中，雙歧桿菌屬的各種菌種也有不同。研究提出了作為母乳喂養(yǎng)的嬰幼兒和配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒不同糞便菌群的原因的多個因素，包括人乳中蛋白質(zhì)含量較低、蛋白質(zhì)組成不同，人乳中磷含量較低，人乳中有大量寡糖以及母乳中多種有免疫功能的體液介質(zhì)和纟田刀包介質(zhì)。Agostoni等,/Vo&(9dcZ)/efe/fc尸radwc^幼兒食品中的益生細菌ES^G7i4iV委員會對營養(yǎng)的意見)，J.Pediatr.Gastro.Nutr.38:365-374(2004年4月)。因為配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒體內(nèi)微生物區(qū)系非常不穩(wěn)定，而且腸道微生物區(qū)系在很大程度上參與刺激腸免疫，所以配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒發(fā)生炎癥性疾病的可能性更高。許多影響嬰幼兒的主要疾病，包括慢性肺病、腦室周圍白質(zhì)軟化、新生兒腦膜炎、新生兒肝炎、膿毒癥和壞死性小腸結腸炎本質(zhì)上都是炎癥性質(zhì)的。根據(jù)具體疾病，伴發(fā)的炎癥可發(fā)生在特定器官(例如肺、腦、肝或腸)中，或者炎癥可能完全是全身性質(zhì)的。例如，慢性肺病引起肺內(nèi)組織發(fā)炎，而新生兒腦膜炎包括腦膜(liningsofthebrain)炎癥和脊髓炎癥。腦室周圍白質(zhì)軟化由正在發(fā)育中的腦的腦室周圍區(qū)域的炎性損害所引起。壞死性小腸結腸炎引起可導致部分或全部腸被破壞的腸炎，而新生兒肝炎包括發(fā)生于嬰兒早期的肝炎。膿毒癥，亦稱全身性炎癥反應綜合征，是由產(chǎn)毒素細菌對血流的致死性感染所引起的嚴重疾病。該病中，血流中的病原體引起遍及全身的炎癥反應。在腸免疫發(fā)展和全身性炎癥預防方面，也是對早產(chǎn)嬰兒和患嚴重疾病的嬰兒的嚴重挑戰(zhàn)。常常將早產(chǎn)嬰兒或患嚴重疾病的嬰兒及時放入無菌恒溫箱，使他們保持不暴露于健康足孕嬰兒可正常暴露于其中的細菌群體中。這可延遲或削弱天然定居過程。這些嬰兒還常常用廣譜抗生素治療，該抗生素可殺死力圖定居在嬰兒腸道中的共生細菌。另外，這些嬰兒常常用嬰兒配方奶粉喂養(yǎng)，而不是用母乳喂養(yǎng)。這些因素的每一個都可引起嬰兒腸內(nèi)微生物區(qū)系的產(chǎn)生不當，因此引起或加快危及生命的全身性炎癥。近年來，有研究提議向配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒飲食中補充益生細菌以便促進有益^:生物的腸定居。益生細菌是對宿主健康發(fā)揮有益作用的活的微生物。Fuller,R.尸ra6/o"csz'"Ma"""cMw'wa/s(人與動物中的益生菌)，J.Appl.Bacteriol.66:365-78(1989)。雖然有活力的益生細菌(viableprobioticbacteria)可有效地使腸道微生物區(qū)系正?；且压嫉脑u價其在早產(chǎn)嬰兒和受免疫抑制嬰幼兒中的安全性的研究卻非常少。這些特定群體的腸防御屏障尚未成熟，這就增加了腔內(nèi)細菌(luminalbacteria)發(fā)生轉移的風險，引起感染風險的可能性增高。在許多情況下，有活力的益生菌劑(viableprobiotics)—般不推薦給受免疫抑制的患者、心臟手術后患者、患胰腺功能障礙的患者或患有便血的患者使用。已經(jīng)報道了在受免疫抑制個體中有至少一宗死亡事件是由于補充益生菌所致的。MacGregorG.等,酪生物制劑療法在受免疫抑制的患者中的禁忌)？PostgradMedJ.78:366-367(2002)。因此，對于受免疫抑制的患者或早產(chǎn)嬰兒，提供可治療或預防全身性炎癥的無活力的補充劑(non-viablesupplement)可能是有益的。有活性的益生菌(activeprobiotics)或有活力的益生菌(viableprobiotics)的無活力替^品(non-viablealternative)可具有其它益處，例如存放期較長?；畹囊嫔鷮?、濕度和光敏感，理想的是應冷藏以保持其存活力。即使利用這些預防措施，典型的益生菌的存放期仍相對較短。活益生菌的無活力替代品可避免冷藏需要，可提供具有較長存放期的產(chǎn)品。然后無需易于利用的冷藏條件便可將該產(chǎn)品配送到世界各地。另外，益生菌的無活力替代品可能與與其它食物組分發(fā)生相互作用的風險較小，例如發(fā)酵以及產(chǎn)品味道、質(zhì)地和新鮮度的改變。因此，提供用于減輕或預防配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒的全身性炎癥的方法將會是有益的，該方法包括給予滅活益生菌。發(fā)明概述因此簡單來講，本發(fā)明涉及包含至少一種滅活益生菌的新產(chǎn)品，其中益生菌是無活力的，但是滅活益生菌的細胞組分仍保持與益生菌有活力的或未滅活細胞相同或相似的生物反應屬性。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及使用益生菌的一種或多種滅活菌林的方法，該滅活菌抹與有活力的益生菌或活益生菌有相同或相似的生物反應益處。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及用于治療、預防或減輕受治療者的全身性炎癥和/或呼吸道炎癥的方法，該方法包括給予受治療者治療有效量的至少一種滅活益生菌，其中以其有活力的形式的益生菌可用于治療、預防或減輕受治療者的這類全身性炎癥和/或呼吸道炎癥。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及用于治療、預防或減輕受治療者的呼吸道炎癥的方法，該方法包括給予受治療者治療有效量的至少一種滅活益生菌，其中以其有活力的形式的益生菌可用于這類治療、預防或減輕受治療者的呼吸道炎癥。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及用于減輕或預防受治療者的一種或多種促炎細胞因子或趨化因子的全身性釋放的方法，該方法包括給予受治療者治療有效量的至少一種滅活益生菌。在一個具體的實施方案中，本發(fā)明涉及用于治療、預防或減輕受治療者的全身性炎癥的方法，該方法包括給予受治療者治療有效量的至少一種滅活益生菌與至少一種長鏈多不飽和脂肪酸(LCPUFA)和/或至少一種有活力的益生菌聯(lián)用。在具體實施方案中，LCPUFA可以是二十二碳六烯酸(DHA)或花生四烯酸(ARA)。通過本發(fā)明獲得的若干優(yōu)勢之一是可減輕或預防全身性炎癥或呼吸道炎癥。本發(fā)明還可減輕肝、血漿、肺和腸的炎癥。另夕卜，(IL-l卩)、IL-8、CINC-l)的釋放和生長相關性癌基因(GRO/KC)水平。因為本發(fā)明可用于改善炎癥狀況，所以它還可防止發(fā)生造成傷害的感染(deleteriousinfection)和疾病。附圖簡述為了更全面地理解本發(fā)明，下面結合附圖進行下列描述以供參考。圖1表示采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定的有活性的益生菌和滅活益生菌對肝中的細胞因子誘導的嗜中性粒細胞化學引誘物-1(CINC-1)肽產(chǎn)生的作用。滅活鼠李糖乳桿菌GG(丄acto^c"/wsr/2aw"osusGG)(LGG)，一種示例性滅活益生菌，故標記為"熱-LGG(heat-LGG)"。圖2表示采用ELISA測定的有活性的益生菌和滅活益生菌對血漿中的CINC-1肽產(chǎn)生的作用。滅活LGG被標記為"熱-LGG，，。圖3表示采用ELISA測定的有活性的益生菌和滅活益生菌對肺中的CINC-1肽產(chǎn)生的作用。滅活LGG被標記為"熱-LGG"。圖4表示采用細胞因子多重測定法測定的有活性的益生菌和滅活益生菌對肝中的生長相關性癌基因(GRO/KC)產(chǎn)生的作用。滅活LGG被標記為"熱-LGG"。圖5表示采用細胞因子多重測定法測定的有活性的益生菌和滅活益生菌對肺中的GRO/KC產(chǎn)生的作用。滅活LGG被標記為"熱-LGG"。圖6表示采用細胞因子多重測定法測定的有活性的益生菌和滅活益生菌對肝中的白介素-l卩(IL-l(3)水平的作用。滅活LGG被標記為"熱-LGG"。優(yōu)選實施方案詳述下面將提供下文所述的本發(fā)明實施方案、一個或多個實施例的詳情以供參考。提供各實施例是為了解釋本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制。實際上，對本領域技術人員顯而易見的是，在不偏離本發(fā)明的范圍或精神的情況下，可以對本發(fā)明進行各種修改和變動。例如，所說明或描述的特征作為一個實施方案的組成部分，可被用于另一個實施方案中以便得到更進一步的實施方案。因此，本發(fā)明旨在涵蓋落入所附權利要求書及其等同內(nèi)容范圍內(nèi)的這些修改和變動。本發(fā)明的其它目的、特征和方面^Hf于下面的詳述中，或者從下面的詳述來看是顯而易見的。本領域普通技術人員應當了解的是，本發(fā)明的論述只是對示例性實施方案的描述，不是對本發(fā)明更多方面的限制。本文使用了下列縮寫LGG,鼠李糖乳桿菌GG;LCPUFA，長鏈多不飽和脂肪酸；LPS,脂多糖；IL，白介素；CINC-l,細胞因子誘導的嗜中性粒細胞化學引誘物-l;GRO/KC，生長相關性癌基因；ELISA，酶聯(lián)免疫吸附測定法；RT-PCR,逆轉錄-聚合酶鏈式反應；ANOVA,方差分析；SD，標準差；RMS,大鼠奶代用品，TLR，Toll樣受體；核因子kB，NF-kB;EPA，二十碳五烯酸；DHA，二十二碳六烯酸；ARA,花生四烯酸。TLR是脊推動物識別受體的家族。它們在先天免疫和適應性免疫中進化成關鍵分子。它們在保守的微生物組分的識別中起至關重要的作用。生物的細胞壁組分、DNA和雙鏈RNA顯然由不同的TLR識別。這些細菌衍生的組分(不論是LPC、肽聚糖還是CpGDNA)都是天然的TLR配體，可在通?？捎烧＜毦鲋钞a(chǎn)生的致病結果(腹瀉、組織破壞、全身性炎癥、屏障通透性)不存在時保持較強的免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)。細菌組分通常對適應性免疫應答起作用，而細菌本身則由先天免疫應答感知。術語"益生菌(probiotic)"是指對宿主健康發(fā)揮有益作用的活的、有活性的或有活力的微生物。術語"益生素(prebiotic)"是指刺激益生菌生長和/或活性的非消化性食物成分。本文所用術語"治療"是指改善、改進或醫(yī)治疾病、病癥或者疾病或病癥的癥^1夫。術語"減輕"是指范圍、數(shù)量減小或程度降低。術語"預防"是指通過某些措施終止或阻礙疾病、病癥或者疾病或病癥的癥狀。本文所用術語"全身性"是指與整個身體有關或者累及整個身體。術語"呼吸道感染(respiratoryinfection)"或"呼吸道疾病，，是指累及負責將氧氣從空氣輸送至血流中并負責排出二氧化-友的器官組的疾病或感染。術語"滅活益生菌"或"滅活LGG"是指益生菌或LGG生物的內(nèi)部代謝活性或繁殖能力P爭低或遭到破壞。一舶j人為"滅活益生菌"或"滅活LGG"在細胞水平上仍然保持至少部分其天然TLR配體，它進而保持至少部分免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)。本文所用術語"滅活"與"無活力"同義。術語"治療有效量"是指使疾病、病癥或者疾病或病癥的癥狀得到醫(yī)治或改善的量。術語"早產(chǎn)兒(preterm)"是指在妊娠第37周結束前出生的嬰兒。術語"嬰(幼)兒"是指出生后不滿1歲的人。術語"兒童"是指年齡介于1歲左右和12歲左右之間的人。在某些實施方案中，兒童的年齡介于1歲左右和6歲左右之間。在其它實施方案中，兒童的年齡介于7歲左右和12歲左右之間。本文所用術語"嬰幼兒配方奶粉(infantformula)"是指通過替代人乳以滿足嬰幼兒營養(yǎng)需要的組合物。本發(fā)明發(fā)明了一種使用益生菌的新產(chǎn)品和新方法。該產(chǎn)品和方法包括使用治療有效量的至少一種滅活益生菌并將其給予受治療者。在一些實施方案中，受治療者是嬰幼兒。以前有效給予滅活益生菌的嘗試都遇到了巨大的障礙。例如，Kirjavainen,P.等人報道了在有活力的LGG和熱滅活LGG的比較中，接近40%補充了滅活LGG的兒童經(jīng)歷了嚴重腹瀉。尸ra6/oric/wporto"ceo/F/a&7W(特應性疾病控制中的益生細菌強調(diào)存活力的重要性)，J.Ped.Gastro.36:223-227(2Q03)。未報道在安慰劑或有活力的LGG組中出現(xiàn)不良反應(出處同上，P225)。因為腹瀉在很大程度上與炎癥有關，所以Kirjavainen的研究表明滅活LGG實際上可引起胃腸炎癥。實際上，該研究指出，"熱滅活方法可引起表面肽變性和熱激蛋白表達，因此以可誘導炎癥反應從而增加腸通透性的熱滅活形式的這種方式，改變了LGG的免疫刺激性質(zhì)"(出處同上，P226)。相比之下，本發(fā)明的發(fā)明人研發(fā)出用于通過攝入含有這類滅活益生菌的產(chǎn)品給予至少一種滅活益生菌來治療或預防炎癥的新方法。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，可使用滅活益生菌以便使攝取所述滅活益生菌的人獲得的有益作用與攝取相同活益生菌或有活力的益生菌的人可能獲得的有益作用相同或相似。除了繁殖性質(zhì)和其它活性性質(zhì)與活的生物密切有關以外，本發(fā)明的滅活益生菌還保持細胞和分子性質(zhì)，并在攝取滅活益生菌的宿主體內(nèi)誘導相同或相似的生物反應性應答。因此，本發(fā)明的滅活益生菌可以是任何益生菌或本領域已知任何益生菌的組合。在其它實施方案中，滅活益生菌可以是乳桿菌屬(丄a"o6ac/〃w)的一員。例如，滅活益生菌可以是嗜酸乳桿菌(丄.ac鄉(xiāng)/zz7—、食淀粉乳桿菌(丄.考/o曹—、保力口利亞乳桿菌(丄.Zw/gaWcw力、巻曲乳4干菌(丄.cn'5^afw力、德、氏乳4干菌(丄.<ie/6n/ech'/)、鼠李糖乳桿菌(丄.^wm"ow力、干酪乳桿菌(丄.ca化/)、雞乳桿菌(丄.ga腸ar謂)、發(fā)酵乳桿菌(丄.，wewf,)、力口氏乳桿菌(丄.g譜m)、瑞士乳桿菌(丄./2e/v"/cws)、約古特乳桿菌(丄.JwgwW/)、約氏乳桿菌(丄.j'o/zraow//)、希賴曼氏乳才干菌(丄./e/c/zmaww7)、才直物乳4干菌(厶//a"torww)、路氏乳桿菌(丄.rewfeW)或唾液乳桿菌(I.^/zVan'w)。在某些實施方案中，滅活益生菌可以是嗜酸乳桿菌(丄.ac/c/opW/w)LA-5、嗜酸乳桿菌NCFM、嗜酸乳桿菌AS-1、嗜酸乳桿菌DDS-1、嗜酸乳桿菌HPIO、嗜酸乳桿菌HP100、嗜酸乳桿菌HP101、嗜酸乳桿菌HP102、嗜酸乳桿菌HP103、嗜酸乳桿菌HP104、嗜酸乳桿菌HP15、嗜酸乳桿菌PIM703、嗜酸乳桿菌SBT2062、干酪乳桿菌DN-114001、干酪乳桿菌LCIO、干酪乳桿菌PIM61、干酪乳桿菌431(CRL431)、干酪乳桿菌F19、干酪乳桿菌Shirota、干酪乳桿菌immunitass、巻曲乳桿菌BG2F04、德氏乳桿菌保加利亞亞種(丄.t/e/6n^ch7ssp.6w/gan'cw"、德氏乳桿菌保加利亞亞種2038、德氏乳桿菌保加利亞亞種MR120、德氏乳桿菌保加利亞亞種PIM695、植物乳桿菌299V、路氏乳桿菌1063-S、路氏乳桿菌11284、路氏乳桿菌SD2112、路氏乳桿菌T-l、路氏乳桿菌ATTC55730、路氏乳桿菌SD2112、路氏乳桿菌iC-"、鼠李糖乳桿菌GG(LGG)ATCC53013、鼠李糖乳桿菌G7-7、鼠李糖乳桿菌LB21、鼠李糖乳桿菌R-OU、鼠李糖乳桿菌R-049、鼠李糖乳桿菌MX1、加氏乳桿菌ADH、瑞士乳桿菌MR220、瑞士乳桿菌NCK388、約氏乳桿菌11088(NCK088)、約氏乳桿菌La-l、唾液乳桿菌UCC500、唾液乳桿菌UCC118或德氏乳桿菌乳亞種(丄./acfe)San。如上所述，在本發(fā)明的一個具體實施方案中，滅活益生菌可以是LGG。LGG是自健康人體腸內(nèi)微生物區(qū)系分離出的益生菌菌株。它公開于Gorbach等人的美國專利號5,032,399,該專利通過引用全部結合到本文中。LGG對多數(shù)抗生素具有耐藥性，在酸和膽汁存在下保持穩(wěn)定，與人腸道粘膜細胞的附著具有親合力。在多數(shù)個體中存活l-3天，在30%受治療者中存活長達7天。除其定居能力以外，LGG還有益地影響粘膜免疫應答。LGG保藏于保藏權威機構美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection),保藏號為ATCC53103。在另外其它的實施方案中，滅活益生菌可以是雙歧桿菌15屬(說y^o6a"en'wm)的一員。例如，滅活益生菌可以是動物雙歧桿菌(及am'mafc)、短雙歧桿菌(及6reve)、嬰兒雙歧桿菌CB/"/朋to)、乳雙歧桿菌(及/ac&)、豬雙歧桿菌(5.ra/"或長雙歧桿菌(及/o"gwm)。在某些實施方案中，滅活益生菌可以是動物雙歧桿菌動物亞種(^/WoZa"en'Mwssp.am'附afc)、動物雙歧桿菌DN-173010、動物雙歧桿菌乳亞種(及ssp./ac他)(BB-12)、短雙歧桿菌Yakult、短雙歧桿菌R-070、嬰兒雙歧桿菌BBI、嬰兒雙歧桿菌35624、乳雙歧桿菌HN019(DR10)、長雙歧桿菌BB46、長雙歧桿菌BBL或長雙歧桿菌BB536。正如所注意到的一樣，滅活益生菌可以是動物雙it支桿菌乳亞種(BB-12⑧)，可獲自位于Milwaukee,WI的Chr.HansenBiosystems。BB-12⑧是革蘭氏陽性厭氧桿狀細菌，可存在于多數(shù)哺乳動物(包括人)的大腸中。在另外其它的實施方案中，滅活益生菌可以是大腸桿菌、糞腸5求菌(五wferacoccus々e"'wm)、酉良酒酵母(5^cc/zaram;/cascerev/s/ae)、乳酸乳5求菌(丄(3ctococcws/acris)、凝結芽孑包4干菌(萬acz7/uscoagWam)、戊糖片？求菌(i^c/z'ococci^/e"tosacew力、乳酸片J求菌(尸e(i/ococcus""Wz7ac"d)、血鏈球菌0SVre，coc譜sa"g—或嗜熱鏈球菌OS^e/tococcws^zenwo;/H7MJ)。在一個具體的實施方案中，滅活益生菌可以是大腸桿菌Nissle1917。在另一個實施方案中，滅活益生菌可以是釀酒酵母(boularii)lyo。在又一個實施方案中，滅活益生菌可以是乳酸乳球菌L1A。在又一個實施方案中，滅活益生菌可以是嗜熱鏈球菌TH-4丁m。在本發(fā)明的一個實施方案中，可以使用不止一種滅活益生菌。滅活益生菌的任何組合都包括在該實施方案中，只要該組合能達到預期效果。在一個具體的實施方案中，組合可包括雙歧桿菌屬的一個或多個成員和乳桿菌屬的一個或多個成員，例如可以使用BB-12⑧和LGG。在單獨的實施方案中，可使用BB-12⑧和LA-5⑧的組合。16在本發(fā)明的方法中，滅活益生菌的治療有效量是足以減輕或預防受治療者的全身性炎癥的量。該量相當于約lxl0"個細胞等同物/kg體重/天和lxlO"個細胞等同物/kg體重/天。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括給予從約lx106個細胞等同物/kg體重/天到lx109個細胞等同物/kg體重/天。在又一個實施方案中，本發(fā)明包括給予約lxl(^個細胞等同物/kg體重/天。在另外又一個實施方案中，本發(fā)明包括給予約lxlO"個細胞等同物/kg體重/天。在本發(fā)明中，使用至少一種已被滅活的益生菌，可通過本領域任何目前已知或者仍待研發(fā)的方法進行滅活。例如，可通過熱處理、凍干、紫外線、y輻射、加壓、化學分解或機械破壞來實現(xiàn)滅活。例如，可將益生菌保存在80。C和IO(TC之間10分鐘經(jīng)熱處理滅活。益生菌還可通過距離為5cm的30瓦UVC燈照射5分鐘經(jīng)紫外線滅活。或者，益生菌可使用距離為20cm的鈷-60源通過2kg-Gray(kGy)照射經(jīng)y輻射滅活。在本發(fā)明的方法中，滅活益生菌的給藥方式并不是關4建，只要給予治療有效量即可。在一些實施方案中，通過片劑、丸劑、包嚢劑(encapsulation)、嚢片劑、軟膠嚢劑、膠嚢劑、油滴劑或小藥嚢劑給予受治療者至少一種滅活益生菌。在另一個實施方案中，滅活益生菌用糖、脂肪或多糖包封。在又一個實施方案中，滅活益生菌加到食物或飲品中食用。食物或飲品可以是兒童營養(yǎng)品，例如改良配方乳品(follow-onformula)、成長奶(growingupmilk)、飲料、奶、酸乳酪、果汁、果汁型飲料、咀嚼片、餅干、薄脆餅(cracker)或奶粉。在其它實施方案中，產(chǎn)品可以是嬰幼兒營養(yǎng)品，例如嬰幼兒配方奶粉或人乳強ib齊'J(humanmilkfortifier)。如果通過嬰幼兒配方奶粉給予至少一種滅活益生菌，則嬰幼兒配方奶粉營養(yǎng)齊全，含有適當類型和適量的脂質(zhì)、糖、蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)。脂質(zhì)或脂肪的含量通?？?gt;^人約3g/100kcal到約7g/100kcal不等。脂質(zhì)源可以是本領域任何已知或使用的脂質(zhì)源，例如植物油，例如棕櫚油、大豆油、棕櫚油精、椰子油、中鏈甘油三酯油、高油酸葵花籽油、高油酸紅花油等。蛋白質(zhì)的含量通?？蓮募s1g/100kcal到約5g/100kcal不等。蛋白質(zhì)源可以是本領域任何已知或使用的蛋白質(zhì)源，例如脫脂奶、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、水解蛋白、氨基酸等。糖的含量通?？蓮募s8g/100kcal到約12g/100kcal不等。糖源可以是本領域任何已知或使用的糖源，例如乳糖、葡萄糖、玉米糖漿干粉(cornsyrupsolid)、麥芽糖糊精、蔗糖、淀粉、米糖漿干粉(ricesyrupsolid)等?？蛇m當?shù)?使用市售嬰幼兒配方奶^)^分。例如Enfamil、Enfamil⑧早產(chǎn)兒配方奶粉、力口鐵Enfami1⑧、Lactofree、Nutramigen、Pregestimil和ProSobee(可獲自MeadJohnson&Company,Evansville,IN,U.S.A.)可以補充適當水平的滅活益生菌，并用于實施本發(fā)明的方法。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少一種滅活益生菌可與一種或多種有活力的益生菌組合以治療或預防配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒的全身性炎癥。在該實施方案中，本領域任何已知的有活力的益生菌都是可以接受的，只要它能達到預期效果。在一個具體的實施方案中，有活力的益生菌可選自本文所述益生菌的任何屬或種。如果有活力的益生菌與滅活益生菌聯(lián)用，則有活力的益生菌的量可相當于約lxl(f菌落形成單位(cfU)/kg體重/天和lxl(P菌落形成單位(cfli)/kg體重/天之間。在另一個實施方案中，有活力的益生菌可包含從約cfb/kg體重/天lxl()G到lxlO、fU/kg體重/天之間。在又一個實施方案中，有活力的益生菌可包含約lxl(^cfii/kg體重/天。此外又一個實施方案中，有活力的益生菌可包含約lxl(Tcfb/kg體重/天。在本發(fā)明的另一個實施方案中，至少一種滅活益生菌可與一種或多種益生素組合以治療或預防配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒的全身性炎癥或呼吸道炎癥。在該實施方案中，本領域已知的任何益生素都是可以接受的，只要它能達到所需效果?？捎糜诒景l(fā)明的可益生素包括乳果糖、低聚半乳糖(galacto-oligosaccharide)、菊糖(inulin)、聚葡萄糖、低聚半乳糖、低聚果糖、低聚異麥芽糖、大豆低聚糖、低聚乳薦、并唐(lactosucrose)、j氐聚木泮唐和j氐聚龍月旦并唐(gentio畫oligosaccharide^在本發(fā)明的又一個實施方案中，嬰幼兒配方奶粉可含有其它活性劑，例如LCPUFA。合適的LCPUFA包括但不限于a-亞油酸、，亞油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、ARA和/或DHA。在一個實施方案中，滅活益生菌與DHA聯(lián)用。在另一個實施方案中，滅活益生菌與ARA聯(lián)用。在又一個實施方案中，滅活益生菌與DHA和ARA兩者耳關用。含有DHA、ARA或其組合的市售嬰幼兒配方奶4分可以補充至少一種滅活益生菌并用于本發(fā)明。例如含有有效水平的DHA和ARA的Enfamil、LIPIL⑧是市售的，可以補充至少一種滅活益生菌并用于本發(fā)明。在一個實施方案中，DHA和ARA同時與至少一種滅活益生菌聯(lián)用以治療嬰幼兒的全身性炎癥。在該實施方案中，ARA:DHA的重量比通常為約1:3到約9:1。在本發(fā)明的一個實施方案中，該比率為約1:2至約4:1。在又一個實施方案中，該比率為約2:3至約2:1。在一個具體實施方案中，該比率約為2:1。在本發(fā)明的另一個具體實施方案中，該比率約為1:1.5。在其它實施方案中，該比率約為1:1.3。在另外其它的實施方案中，該比率約為1:1.9。在一個具體的實施方案中，該比率約為1.5:1。在又一個實施方案中，該比率約為1.47:1。在本發(fā)明的某些實施方案中，DHA的水平以重量計是脂肪酸的約0.0%和1.00%之間。DHA的水平可約為0.32%(重量)。在一些實施方案中，DHA的水平可約為0.33%(重量)。在另一個實施方案中，DHA的水平可約為0.64%(重量)。在另一個實施方案中，DHA的水平可約為0.67%(重量)。在又一個實施方案中，DHA的水平可約為0.96%(重量)。在又一個實施方案中，DHA的水平可約為1.00%(重量)。在本發(fā)明的實施方案中，ARA的水平以重量計是脂肪酸的0.0%和0.67%之間，在另一個實施方案中，ARA的水平可約為0.67%(重量)。在另一個實施方案中，ARA的水平可約為0.5%(重量)。在又一個實施方案中，DHA的水平可介于約0.47%和0.48%(重量)之間。在本發(fā)明的實施方案中如果包括DHA,則DHA的有效量通常為約3mg/kg體重/天至約150mg/kg體重/天。在本發(fā)明的一個實施方案中，該量為約6mg/kg體重/天至約100mg/kg體重/天。在另一個實施方案中，該量為約10mg/kg體重/天至約60mg/kg體重/天。在又一個實施方案中，該量為約15mg/kg體重/天至約30mg/kg體重/天。在本發(fā)明的實施方案中如果包括ARA,則ARA的有效量通常從約5mg/kg體重/天到約150mg/kg體重/天不等。在本發(fā)明的一個實施方案中，該量從約10mg/kg體重/天到約120mg/kg體重/天不等。在另一個實施方案中，該量從約15mg/kg體重/天到約90mg/kg體重/天不等。在又一個實施方案中，該量從約20mg/kg體重/天到約60mg/kg體重/天不等。如果使用嬰幼兒配方奶粉，則嬰幼兒配方奶粉中DHA的量可從約5mg/100kcal到約80mg/100kcal不等。在本發(fā)明的一個實施方案中，DHA從約10mg/100kcal到約50mg/100kcal不等;在另一個實施方案中，從約15mg/100kcal到約20mg/100kcal不等。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，DHA的量約為17mg/100kcal。如果使用嬰幼兒配方奶粉，則嬰幼兒配方奶粉中ARA的量可從約10mg/100kcal到約100mg/100kcal不等。在本發(fā)明的一個實施方案中，ARA的量從約15mg/100kcal到約70mg/100kcal不等。在另一個實施方案中，ARA的量從約20mg/100kcal到約40mg/100kcal不等。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，ARA的量約為34mg/100kcal。如果使用嬰幼兒配方奶粉，則嬰幼兒配方奶粉可采用本領域已知的標準技術補充含有DHA和ARA的油。例如，可通過替換正常存在于配方奶粉中的等量的油(例如高油酸葵花籽油)，將DHA和ARA加到配方奶粉中。又如，可通過替換等量的其余正常存在于不含DHA和ARA的配方奶粉中的總脂肪混合物，將含有DHA和ARA的油加到配方奶4分中。如果4吏用DHA源和ARA源，則DHA源和ARA源可以是本領域已知的任何來源，例如海產(chǎn)油、魚油、單細胞油、蛋黃脂質(zhì)、腦脂質(zhì)等。在一些實施方案中，DHA和ARA來源于單細胞Martek油，DHASCO⑧或其改性油。DHA和ARA可以是天然形式，只要LCPUFA源的其余成分不會對嬰幼兒產(chǎn)生任何重大的有害作用?；蛘撸梢允褂镁珶捫问降腄HA和ARA。在本發(fā)明的一個實施方案中，DHA源和ARA源為單細胞油，參見美國專利號5,374,567、5,550,156和5,397,591，該專利的公開內(nèi)容通過引用全部結合到本文中。然而，本發(fā)明不僅僅限于這類油。在一個實施方案中，含有EPA的LCPUFA源與至少一種滅活益生菌聯(lián)用。在另一個實施方案中，基本上不含EPA的LCPUFA源與至少一種滅活益生菌聯(lián)用。例如，在本發(fā)明的一個實施方案中，含有不超過約16mgEPA/100kcal的嬰幼兒配方奶粉補充了至少一種滅活益生菌，并用于本發(fā)明的方法中。在另一個實施方案中，含有不超過約10mgEPA/100kcal的嬰幼兒配方奶粉補充了至少一種滅活益生菌，并用于本發(fā)明的方法中。在又一個實施方案中，含有不超過約5mgEPA/100kcal的嬰幼兒配方奶粉補充了至少一種滅活益生菌，并用于本發(fā)明的方法中。本發(fā)明的另一個實施方案包括補充了至少一種滅活益生菌并且即使痕量的EPA都不存在的嬰幼兒配方奶粉。我們認為對于含有這些成分的制劑的抗炎性質(zhì)，提供至少一種滅活益生菌與DHA和/或ARA的組合便:提供了互補效應(complimentaryeffect)或協(xié)同效應。雖然無意受該理^侖或任何其它理論的束縛，但是我們認為通過防止抑制性-kB(IkB)的遍在蛋白化而部分賦予滅活益生菌抗炎作用。在正常細胞中，IkB與胞質(zhì)內(nèi)的核因子kB(NFkB)結合。當發(fā)生IkB遍在蛋白化時，NFkB被釋放出來，進入到細胞核中，并激活負責炎癥反應的基因。我們認為正是這種特異性相互作用和所引起的基因表達的改變參與了炎癥的調(diào)節(jié)。我們認為滅活益生菌防止IkB的遍在蛋白化，從而防止NFkB的釋放，并減輕或預防炎癥。相比之下，co-3脂肪酸(例如DHA)^皮認為是通過改變廣義上稱為類二十烷酸的脂肪酸衍生的促炎介質(zhì)的產(chǎn)生而賦予抗炎作用。細胞膜磷脂層(phospholipidpool)中的①-6脂肪酸(例如ARA)在炎癥反應期間釋放出來，并釋出一層游離的ARA。該層ARA然后通過被稱為脂加氧酶和環(huán)加氧酶的兩類酶起作用，它產(chǎn)生各種類二十烷酸，包括2系列前列腺素類激素(prostanoids),例如前列腺素、血栓烷和白三烯。已知這些類二十烷酸在許多細胞類型和器官中的促炎作用過剩。已知富含co-3脂肪酸(例如EPA和DHA)的飲食在該過程的若干步驟中是co-6脂肪酸的竟爭劑，因此，降低了ARA的促炎效果。例如，co-3脂肪酸調(diào)節(jié)co-6脂肪酸延長至ARA、ARA摻入細胞膜磷脂層和由ARA產(chǎn)生促炎類二十烷酸。因此，DHA和ARA的組合在多個組織中提供調(diào)節(jié)炎癥反應的獨特而又互補的作用。另外，在本發(fā)明的一些實施方案中，有活力的益生菌和滅活益生菌相互聯(lián)用。對于含有這些成分的制劑的抗炎性質(zhì)，我們認為有活力的益生菌和滅活益生菌的組合提供互補效應或協(xié)同效應。雖然無意受該理論或任何其它理論的束縛，但是我們認為有活力的益生菌部分通過與特定免疫細胞表面的特異性受體(稱為Toll樣受體(TLR))相互作用而賦予抗炎作用。有活力的益生菌和這些受體之間的直接或間接相互作用啟動胞內(nèi)信號轉導級聯(lián)，這導致了在這些靶細胞中基因22表達的改變。我們認為正是這種特異性相互作用以及在基因表達和其它細胞作用中所引起的改變參與了炎癥的調(diào)節(jié)。正是因為我們認為有活力的益生菌和滅活益生菌通過不同的機制起作用，所以相信這些組分的組合可提供互補或協(xié)同的抗炎作用。另外，在本發(fā)明的一些實施方案中，至少一種有活力的益生菌、至少一種滅活益生菌與至少一種LCPUFA聯(lián)用。因為有活力的益生菌、滅活益生菌和LCPUFA是分別通過不同機制起作用的，所以我們認為對于含有這些成分的制劑的抗炎性質(zhì)，這些組分的組合提供互補，丈應或協(xié)同效應。在本發(fā)明的一些實施方案中，受治療者有治療、減輕或預防全身性炎癥的需要。受治療者可能由于遺傳體質(zhì)、飲食、生活方式、疾病、病癥等而有患全身性炎癥的風險。例如，早產(chǎn)兒或受免疫抑制的嬰幼兒可能有患全身性炎癥的風險，因此可能需要這類治療、減輕或預防。在某些實施方案中，可將滅活益生菌給予嬰幼兒或兒童以預防、治療或減輕全身性炎癥。在一個實施方案中，嬰幼兒可不滿1歲。在另一個實施方案中，兒童的年齡可介于1歲和6歲之間。在又一個實施方案中，兒童的年齡可介于7歲和12歲之間。在本發(fā)明的一個實施方案中，受治療者是配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒。在一個實施方案中，嬰幼兒是自出生起就用配方奶粉喂養(yǎng)。在另一個實施方案中，嬰幼兒是自出生起就用母乳喂養(yǎng)直到不滿1歲，之后用配方奶粉喂養(yǎng)，期間開始補充滅活益生菌。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，該方法包括治療或預防配方奶粉喂養(yǎng)的早產(chǎn)兒的全身性炎癥。在該方法中，可以嬰幼兒配方奶粉、人乳強化劑或任何其它合適的形式，給予早產(chǎn)兒滅活益生菌。另外，如有需要，滅活益生菌與DHA、ARA和/或一種或多種有活力的益生菌組合給予早產(chǎn)兒以產(chǎn)生潛在的協(xié)同抗炎作用。在本發(fā)明的一個實施方案中，滅活益生菌減少或防止一種或多種促炎細胞因子或趨化因子的全身性釋放。本文所用"促炎"細胞因子或趨化因子包括本領域已知的參與上調(diào)炎癥反應的促炎細胞因子或趨化因子。實例包括但不限于TNF-a、IL-1(3、IL-6、IL-8、IL畫18和GRO/KC。趨化因子是能夠使白細胞從血液遷移到炎癥部位組織的一組細胞因子。當趨化因子過量產(chǎn)生時，可導致健康組織受到損害。生長相關性癌基因(GRO/KC)是向炎癥部位募集免疫細胞的趨化因子。它是大鼠細胞因子誘導的嗜中性粒細胞化學引誘物(CINC-1)的人的對應物，在功能上與白介素-8家族有關。在本發(fā)明的又一個實施方案中，滅活益生菌顯示出抑制核因子kB(NFkB)的轉運。NFkB是存在于所有細胞類型中的主要轉錄因子，據(jù)信在炎癥發(fā)生時起重要作用。在多數(shù)細胞中，NF-kB以潛伏的無活性的抑制性kB(IkB)結合復合物形式存在于胞質(zhì)中。當細胞接受例如來自細胞因子、細菌抗原或自由基的大量胞外信號之一時，NF-kb便快速進入核中，并激活負責炎癥反應的基因。研究表明在炎癥開始時抑制NFkB導致炎癥反應降低。Lawrence等，尸c^A/eio/e/orA^/cBf"f/zei&so/油'owo//"/7amm加'o"(NFkB在消除炎癥中的可能的新作用)，NatureMed.7:1291(2001)。因此，在本發(fā)明中，通過補充滅活益生菌抑制NFkB有助于減輕或預防全身性炎癥。如實施例中所示，滅活益生菌顯示減輕配方奶粉喂養(yǎng)的嬰幼兒的全身性炎癥。在配方奶粉喂養(yǎng)的幼大鼠中，當補充滅活益生菌時，CINC-1和各種細胞因子水平降低到與母乳喂養(yǎng)的幼大鼠類似的水平。如實施例中所示，滅活益生菌還顯示出在腸上皮中顯著減少IL-8產(chǎn)生、降低NF-kB轉運并增加IkB產(chǎn)生。另外，本發(fā)明的發(fā)明人預料不到地發(fā)現(xiàn)滅活益生菌防止IkB的遍在蛋白化，而有活力的益生菌則不能。下面的實施例描述了本發(fā)明的各種實施方案。鑒于本文24所公開的說明書或本發(fā)明的實踐，落入所附權利要求書范圍內(nèi)的其它實施方案對于本領域技術人員而言是顯而易見的。本說明書連同實施例一起被視為只是示例性的，落入實施例之后所附權利要求書中所限定的本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)。在實施例中，除非另有說明，否則所有給出的百分比都是重量百分比。實施例1本實施例說明補充滅活益生菌對配方奶粉喂養(yǎng)的新生大鼠幼仔的全身性炎癥的作用。在本實施例中，LGG用作益生菌。材料與方法在兩個獨立的實驗中，將Sprague隱Dawley(Taconic,Germantown，NY)幼大鼠隨機分成以下4個胃造口進食組，每組5只大鼠對照組(無LPS或LGG)、LPS組、LPS加有活力的LGG組和LPS加滅活LGG組。用相同齡期的母鼠喂養(yǎng)大鼠作為對照。使用幼大鼠"pup-in-the-cup"模型，從幼大鼠出生第7天開始進行胃造口進食。在插入幼鼠胃中的聚乙烯管的24cm截面上放置胃造口術進食管。在異氟烷麻醉下進行胃造口術放置。將定時器控制的注射泵與進食管相連接，并設置成按依賴于體重的流速，在每小時的頭20分鐘內(nèi)飼喂大鼠。在2天適應期內(nèi)，給胃造口進食幼大鼠喂以大鼠奶代用品(RMS)。適應期過后，給予RMS飼喂組之一補充lxl()S個細胞等同物/kg體重/天的滅活LGG。LGG經(jīng)致死熱處理滅活。給予第二組補充lx108cfii/L/kg體重/天的有活力的LGG。給第三組飼喂未補充任何類型LGG的RMS。這些飼喂法持續(xù)6天。所有胃造口進食組接受同等量的脂肪和糖，蛋白質(zhì)組分近似于正常生長所需要的量。用相同齡期的母鼠喂養(yǎng)大鼠作為對照。將得自大腸桿菌0127:B8的脂多糖(LPS)(LPS;Sigma，25StLouis,MO)按2mg/ml的濃度通過渦旋溶于水。在開始人工銅;，畏后2天，開始通過胃造口術進食管給予胃造口進食大鼠0.25mg/kg/天至0.5mg/kg/天的LPS。給予幼鼠LPS補充6天。該劑量是在導致偶發(fā)戰(zhàn)栗、立毛和體重增加緩慢但在6天時間內(nèi)與死亡顯著增加無關的初步研究中確定的。在6天治療時間結束時，用過量的戊巴比妥鈉使幼大鼠安樂死。摘取小腸并分成三部分回腸、空腸和十二指腸，保存在-80。C下用于酶測定和ELISA，或者在10%中性緩沖福爾馬林中固定用于腸形態(tài)研究。將肺、肝和血漿保存在-80。C下用于酶測定和ELISA。應用Sigmastat統(tǒng)計軟件(SPSS，Chicago,IL)分析體重、CINC-1的ELISA和細胞因子/趨化因子多重測定的結果。所有數(shù)據(jù)都用平均值±標準差(SD)報告。采用組間單因素方差分析(ANOVA)以確定所有治療組中是否存在顯著差異。當ANOVA為顯著時(p〈0.05),應用Holm-Sidak方法進行兩兩比較。結果與討論生長本實施例說明在胃造口進食后給予益生菌對幼鼠生長的作用。在胃造口進食后每天給幼大鼠稱重，并與母鼠喂養(yǎng)的對照動物進行比較。母鼠喂養(yǎng)動物的生長比LPS處理的胃造口進食幼鼠的快。給予胃造口進食的LPS處理幼鼠有活力的益生菌或滅活益生菌無法改善體重。CINC-1在本發(fā)明中，有活力的益生菌和滅活益生菌均降低CINC-1水平。通過用于大鼠生長相關性癌基因/CINC-l的TiterZyme酶免疫測定試劑盒(AssayDesigns,AnnArbor,MI)測定CINC-1水平。從肝、腸、血漿和肺的整個組織的細胞提取物中分離出組織樣品，在450nm下測定吸光度，利用從線性標準曲線推導出的公式計算出濃度。如圖1至圖3所示，ELISA結果顯示LPS增加肝、肺和血漿中的CINC-1水平。有活力的益生菌和滅活益生菌兩者在肝(圖l)和血漿(圖2)中都降低LPS誘導的CINC-1產(chǎn)生(p005)，在肺(圖3)中也顯示出這種趨勢&=0.09)。圖1表明當與LPS組相比時，補充有活力的益生菌使肝中的CINC-1水平降低約50%。然而當與LPS組相比時，滅活益生菌使肝中的CINC-1水平降低約75%。因此，滅活益生菌對肝CINC-1水平的降低作用比有活力的益生菌的顯著較大，這就表明較強的抗炎作用。同樣地，圖2表明滅活益生菌組中血漿的CINC-1水平比有活力的益生菌組中的低。在肺中，有活力的益生菌和滅活益生菌兩者均降低CINC-1水平到同樣的程度(圖3)。GRO/KC如圖4和圖5所示，細胞因子多重測定法顯示同樣降低肝和肺中的GRO/KC水平。在肝中，滅活益生菌降低GRO/KC水平的程度比有活力的益生菌的大。這就表明較強的抗炎作用(圖4)。在肺中，有活力的益生菌和滅活益生菌兩者均降低GRO/KC水平到同樣的程度(圖5)。在本實驗中，在肺中觀察到CINC-1和GRO/KC水平的降低表明滅活益生菌的抗炎作用延伸到遠端器官。因此，滅活益生菌的抗炎作用實質(zhì)上完全是全身性的。在肝中，補充滅活益生菌降低CINC-1水平至實際上低于母乳喂養(yǎng)的幼大鼠的水平。在肺和血漿中，滅活益生菌降低CINC-1水平至非常近似于母乳喂養(yǎng)的幼大鼠的水平。這些結果表明，滅活益生菌具有減輕配方奶粉喂養(yǎng)的幼鼠的全身性炎癥的水平至近似于以及在某些情況下低于母乳喂養(yǎng)的幼鼠的水平的能力。有活力的益生菌和滅活益生菌還降低細胞因子和趨化因子水平。多重微珠試劑盒(Multiplexbeadkit)購自LINCOResearch,Inc.(St.Charles,MO，USA)。通過試劑盒進行了分析的細胞因子/趨化因子包括粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)、干擾素-入(IFN畫人)、白介素-la(IL-la)、IL國1(3、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-IO、IL-12p70、IL-18、單核細胞化學引誘物蛋白-1(MCP-1)、GRO/KC(大鼠CINC-l)和TNP-a。按照生產(chǎn)商的說明書進行了多重測定法。通MasterPlex定量軟件(MiraiBio，Inc.,Alameda，CA，USA)對原始數(shù)據(jù)(平均熒光強度)進行了分析得到濃度值。如圖6所示，比起對照幼鼠，胃造口進食的LPS處理幼鼠肝中的IL-1卩水平顯著較高。有活力的益生菌和滅活益生菌均使LPS誘導的IL-ip的升高顯著鈍化。實際上，滅活益生菌降〗氐IL-1卩水平的程度比補充有活力的益生菌降低的大。滅活益生菌降^氐IL-1卩表達至近似于對照幼鼠的水平。因此，本項實驗的這一部分也表明了滅活益生菌的全身性抗炎活性?？傊?，這些結果表明，補充滅活益生菌減輕全身性炎癥。此外，結果表明，滅活益生菌降低配方奶粉喂養(yǎng)的幼鼠的全身性炎癥至近似于母乳喂養(yǎng)的幼鼠的水平。這在本文所述的通過滅活益生菌治療組和僅喂母乳組比較的結果中進行了說明。在一些情況下，給予滅活益生菌引起的炎癥反應與母乳喂養(yǎng)組的炎癥反應非常相似。實施例2本實施例進一步表明補充滅活益生菌對配方奶粉喂養(yǎng)的新生大鼠幼仔的炎癥的作用。在本實施例中，使用LGG作為益生菌。腸上皮細胞用有活力的LGG或UV滅活LGG按lx108cfu/L預處理，然后用鞭毛蛋白500ng/mL刺激。通過ELISA測定IL-8的產(chǎn)生。通過蛋白質(zhì)印跡法和免疫沉淀法測定IkB和遍在蛋白化-IkB(UbQ-IkB)的表達。通過免疫焚光染色法評價了NFkB定位。實驗期間，鞭毛蛋白誘導細胞IL-8產(chǎn)生顯著增加(p<0.05)。用有活力的LGG或UV滅活LGG預處理，然后通過l便毛蛋白刺激的細胞顯示IL-8、NFKB核轉運、IkB和UbQ-IkB的變化顯著(p0.05)。結果見表l。上指箭頭表示參數(shù)升高，而下指箭頭則表示參數(shù)降低。表l.由于補充有活力的益生菌或滅活益生菌引起的表達變化<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>如表1中所示，鞭毛蛋白誘導腸上皮細胞的IL-8產(chǎn)生顯著增加(p〈0.05)。IL-8的產(chǎn)生在有活力的LGG和滅活LGG兩者的存在下顯著下調(diào)。另外，由鞭毛蛋白刺激的細胞顯示出NFKB核轉運，有活力的LGG和滅活LGG可防止這種NFkB核轉運。鞭毛蛋白降低IkB產(chǎn)生，但是有活力的LGG和滅活LGG預處理使這種作用逆轉(p<0.05)。鞭毛蛋白和有活力的LGG增加UbQ-IkB(p<0.05)，而滅活LGG則降4氐UbQ-IkB。本實施例表明有活力的益生菌和滅活益生菌有效降低促炎細胞因子IL-8的產(chǎn)生，因此具有抗炎作用。因為鞭毛蛋白和有活力的益生菌增加UbQ-IkB,但滅活益生菌降低UbQ-IkB，所以滅活益生菌很可能通過防止IkB的遍在蛋白化的機制起作用，而有活力的益生菌則很可能不是通過防止IkB的遍在蛋白化的機制起作用。因此，本實施例進一步表明有活力的益生菌和滅活益生菌很可能通過不同的機制起作用，并且當同時給予時可具有協(xié)同效應。本發(fā)明表明在肝、血漿和肺中減輕炎癥。因為本發(fā)明可用于改善炎癥狀況，所以它還可防止發(fā)生造成傷害的感染和疾病。本說明書所引用的所有參考文獻，包括但不限于所有的論文、出版物、專利、專利申請、簡報、教科書、報告、手稿、小冊子、書籍、互聯(lián)網(wǎng)上傳文獻、雜志文章、期刊等均通過引用全部結合到本說明書中。有關參考文獻的論述只是概述其作者提出的主張，并非認定所有參考文獻均構成現(xiàn)有技術。申請人保留對所引用的參考文獻的準確性和關聯(lián)性提出異議的權利。本領域普通技術人員無需偏離本發(fā)明的精神和范圍便可實施本發(fā)明的這些》務改和變動以及其它的修改和變動，這些將在所附權利要求書中予以更具體的描述。另外，應當了解的是，各個實施方案的方面可完全或部分互換。此外，本領域普通技術人員應了解的是，僅通過實施例進行了前面的描述，并不是對在所附權利要求書中所進一步描述的本發(fā)明的限制。因此，所附權利要求書的精神和范圍不應局限于對其中所包括的優(yōu)選形式的描述。權利要求1.一種兒童或嬰幼兒產(chǎn)品，該產(chǎn)品包含至少一種滅活益生菌，其中所述產(chǎn)品配制成給予兒童或嬰幼兒約1x104個細胞等同物的滅活益生菌/kg體重/天到約1x1010個細胞等同物的滅活益生菌/kg體重/天，并且其中除繁殖性質(zhì)以外，至少一種滅活益生菌仍保持有活力的益生菌的細胞和分子生物學反應性質(zhì)。2.權利要求1的產(chǎn)品，其中所述至少一種滅活益生菌選自所有已知的益生菌及其組合。3.權利要求1的產(chǎn)品，其中所述至少一種滅活益生菌選自乳桿菌屬(丄acto6ac"/附)、雙歧桿菌屬CS折(iokcteWww)的成員及其組合。4.權利要求1的產(chǎn)品，其中所述滅活益生菌包含乳桿菌屬的一個或多個成員和雙歧桿菌屬的一個或多個成員的組合。5.權利要求1的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品配制成遞送約lxl(^個細胞等同物/kg體重/天至約lx109個細胞等同物/kg體重/天。6.權利要求1的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品配制成遞送約lxl(^個細胞等同物/kg體重/天。7.權利要求1的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品還包含至少一種有活力的益生菌。8.權利要求7的產(chǎn)品，其中所述有活力的益生菌選自鼠李糖乳桿菌GG(ZactoZac"/wsGG)(LGG)、動物雙》支桿菌乳亞種(5,0^故"'簡酒'顧tossp./ac納(BB-12⑧)及其組合。9.權利要求1的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品還包含至少一種長鏈多不飽和脂肪酸(LCPUFA)。10.權利要求9的產(chǎn)品，其中所述LCPUFA選自二十二碳六烯酸(DHA)、花生四烯酸(ARA)及其組合。11.權利要求10的產(chǎn)品，其中ARA:DHA之比介于約2:3至約2:1之間。全文摘要本發(fā)明提供一種兒童或嬰幼兒產(chǎn)品，該產(chǎn)品包含至少一種滅活益生菌，其中該產(chǎn)品配制成給予兒童或嬰幼兒約1x10⁴個細胞等同物的滅活益生菌/kg體重/天到約1x10¹⁰個細胞等同物的滅活益生菌/kg體重/天，并且其中除繁殖性質(zhì)以外，至少一種滅活益生菌仍保持有活力的益生菌的細胞和分子生物學反應性質(zhì)。文檔編號A61K35/74GK101636172SQ200880006384公開日2010年1月27日申請日期2008年2月22日優(yōu)先權日2007年2月28日發(fā)明者J·諾伊,R·J·麥馬洪,U·赫爾茨,W·M·拉塞爾申請人:美贊臣營養(yǎng)品公司