專利名稱：：磺酰基氨基脲、羰基氨基脲、氨基脲和脲、其藥物組合物和治療出血熱病毒的方法，包括治...的制作方法磺酰基氨基脲、羰基氨基脲、氨基脲和脲、其藥物組合物和治療出血熱病毒的方法，包4舌治療與沙粒病毒相關(guān)的感染本申請是國際專利申請系列號PCT/US2005/043931(2005年12月6曰申請)的部分繼續(xù)申請，并要求以其為優(yōu)先權(quán)，后者要求以美國臨時專利申請系列No.60/632,990(2004年12月6日申請)為優(yōu)先權(quán)。將兩個優(yōu)先申請整體引入本文作為參考，用于所有目的。與聯(lián)邦資助的研究或開發(fā)有關(guān)的陳述本發(fā)明部分地由美國政府(NationalInstitutesofHealthSBIRGrantNos.1R43AI056525-01,R43AI056525-02和R44AI056525畫04)提供資金支持，美國政府可因此具有本發(fā)明的某些權(quán)利。領(lǐng)域磺?；被?、羰基氨基脲、氨基脲和脲以及其衍生物和類似物、包含它們的藥物組合物用于治療或預防病毒感染和與此相關(guān)的疾病的用途。尤其是，可以治療由出血熱病毒例如沙粒病毒所引起的那些病毒感染和相關(guān)疾病。背景在科學文獻中已經(jīng)討論了出血熱病毒。在本申請中按上標數(shù)字引用下列出版物、專利和專利申請1.Charrel，R.N.禾口deLamballedeX.,AntiviralResearch.57:89-100(2003).2.PetersC.J.,^^2m^>z^"inPorterfieldJ.,ed.,EXOTICViralInfection,London:Chapman和HallMedical,227-246(1995).3.Buchmeier,M丄，Clegg,J.C.S.,Franze-Fernandez,M.T.，Kolakofsky,D.,Peters,C.J.,和Southern,P.J.,"Wrz^7"oxo/歸乂.57義f/zAe/orto/f/2e/"&/"憩"0憩/Co/wwz/teeowZ"oxcwo附y(tǒng)o/P7rw《es,"Murphy,F.A.,Fauquet,C.M.爭乂，Eds.Sprnger-Verlag,NewYork,319-323(1995).84.Clegg，J.C.S.,Bowen,M.D.,爭乂，"Aew脂V油a/"inVanRegenmortel,M.H.V.,Fauquet,C.M.,Bishop,D.H.L.,Carsten,E.B.,Estes,M.K.,Lemon,S.M.,Maniloff,J.,Mayo,M.A.,McGeoch,D丄，Pringle,C.R.,Wickner,R.B,(Eds)F/y"sroxcw畫y.5WewAe/oWo//"fe/7a/7'owa/Comm她e/or7kx;cw謂yq/"Writes,AcademicPress,NewYork,pp633-640(2000).5.McCormick,J.B.,五pz'tiewz.o/ogy"wt/cow"o/o/Z/^x^a/ever,CURR.Top.Microbiol.Immunol,134:69-78(1987).6.Leifer,E.,Gocke,D.J.,等人,AepoWa/a6orafo，ac，^d，e，Am.J.Trop.Med.Hyg.,19:677-679(1970).7.McCormick,J.B.,King,I.J,,Webb,P.A.,爭乂，丄"扁^zera/y術(shù)f/z雄頻W",N.ENGL.J.Med.,314:20-26(1986).8.Kilgore,P.E.,Ksiazek,T.G.,Rollin,P.E.,爭乂，7>￡<2/膨/^o/Bo/h^'awT7ewo/r/z(3g7'cFeverwzY/zz'w/nan^wowsrz力avz'"."，CLIN.INFECT.PlS.,24:718-722(1997).9.Enria,D.A.,和Maiztegui,J.I.,J她Vz'ra//yea加ewf//eworr/zag/cFever,ANTIVIRALRES.,23:23-31(1994).10.Huggins,J.W.,尸rospec"ForTyea^mew/1(9/Fz>a///e附o^r/zagz'cFeve^肌/7zWZ)"vzWw，j份o"(i-5^e"r謹J油.Wra/Z>wg，Rev.Infect.DlS.,ll:Suppl.4:S750-S761(1989).11.Candurra,N.A.,Maskin,L.,禾口Pamonte,E.B.,/"/n力"/owo/are，vzV船ww/印/z'C(3"owW/roZ，/zewohazz'we《，ANTIVIRALRES.,31(3):149-158(1996).12.Glushakova,S.E.，Lakuba,A.I.,Vasiuchkov,A.P.,Mar'iankova,R.F.,Kukareko,T.M.,Stel'makh,T.A.,K扁sh,T.P.,和Lukashevich,I.S.,am/verace仏，VOPROSYVlRUSOLOGII.35(2):146-150(1990).13.Petkevich,A.S.,Sabynin,V.M.,Lemeshko,N.N.,Lukashevich,I.S.,和Belomss,N.,5Ywt/yo//7zeo/h'/waw/W/we/7zerejwWwc"cw0/腳era/a簡,V認s,Epidemiol.Mikrobiol.,138-143(1982).14.Wachsman,M.B.,Lopez,E.M.F.,Ramirez,丄A.，Galagovsky，L.R.，和Coto,C.E.,^4w"'vz'ra/q/Zms^/wo他ra^agaz'慮/zerpesvz>ws(3Tew"Wn^,Antiviral.Chem.Chemother.,11(1):71-77(2000).15.Rawls,W.E.,Banerjee,S.N.,McMillan,C.A.,和Buchmeier,M.J.,/"/n力Wowo/T^c/nWevz>wsrep/z'ca/7》w"c〃力o，"力Z),J.GEN.VlROL.,33(3):421-434(1976).16.Enria,D.A.,Feuillade,M.R.,Levis,S.,Briggiler,A.M.,Ambrosio,A.M.,Saavedra,M.C,Becker,J.L.,Aviles，G.,Garcia,J.,Sabattini,M.,"/mp""vac"力Wow/n'g/z-"^A:/o/w/a^ow/orSaluzzo,J.F.,Dodet,B.,(eds)FactorsintheEmergenceandControlforRodent-BorneViralDiseases,Paris:Elsevier,1999,pp.273-279(1999).17.Bagai,S.和Lamb,R.A.,J.CellBiol.,135:73-84(1996).18.Beyer,W.R.,爭乂，J.VlROL.,77:2866-72(2003).19.Bowen,M.D.,爭乂，virology,219:285-90(1996).20.Castagna,A.,爭乂，DRUGS，65:879-904(2005).21.C固s,J.E.,和Peters,C.J.,"JTze"EdSalvato(ed.),PlenumPress,NewYork,pp.331-84(1993).22.Cianci,C.,夢乂，AntimicrobAgentsChemother,48:2448-54(2004).23.Clegg,J.C.,CurrTopMicrobiolImmunol,262:1-24(2002).24.Froeschke,M.,爭乂，J.BiolChem.,278:41914-20(2003).25.Garcia,C.C.,爭乂，AntivirChemChemother,11:231-7(2000).26.Hall,W.C.,夢乂，AmJT證MedHyg，55:81-8(1996).27.Ha麗n,A.,爭乂，JViROL,76:10708-16(2002),28.Jeetendra,E.,爭乂，JVirol,77:12807-18(2003).29.Kinomoto,M.,爭乂，JVirol,79:5996-6004(2005).30.Kunz,S.,爭人，Virology,314:168-78(2003).31.Lenz,O.，爭乂，ProcNatlAcadSciUSA，98:12701-5(2001).32.Maron，M.D.和Ames,B.N.,MUTATRES,113:173-215(1983).33.Oldfield,V.,夢乂，DRUGS,65:1139-60(2005).34.Peters,C.j.,爭入，CurrTopMicrobiolImmunol,134:5-68(1987).35.Petkevich,A.S.,夢乂，VoprVirusol,244-5(1981).36.Southern,P.j.,Virology,2:1505-51(2001).37.Weissenbacher,M.C.,爭乂，I鵬CTlMMUN,35:425-30(1982).38.West,j,T.,爭乂，jVirol,75:9601-12(2001).39.Yao,Q.和Compans,R.W.,JVirol,69:7045-53(1995).40.Beyer,W.R.,爭乂,"(9wcor"n9Wruy<3"<i/ew"v&w5*ve"c^/wewtfo妙e(iw"/z(y附//zoc,.cc/2諮.o置m力g他gco/7n9化z力gewera/7.o"，cowcew加/7.ow,awJ6n9"t/rawge.，，J.VlROL.76:1488-1495(2002).41.Connor,R.I.,爭乂，"印r&rew>e<ire///ca"ow0/Virology206:935-944(1995).42.Naldini,L.,爭乂,"Invivogewe加6/e/7vms<iwc〃ow0/ce〃sa/e油》z'ra/veC"Sc正NCE272:263-267(1996).43.Rojek,J.M.,爭乂，"CharacterizationofthecellularreceptorsfortheSouthAmericanhemorrhagicfevervirusesJunin,Guanarito，andMachupo."Virology349:476-491(2006).44.Simmons,G.,爭乂，"Characterizationofsevereacuterespiratorysyndrome-associatedcoronavirus(SARS-CoV)spikeglycoprotein-mediatedviralentry."Proc.Natl.Acad.Sci.USA101:4240-4245(2004).45.Wool-Lewis,R.J.,和P.Bates,"C72(3ra"e"'zWow0/易0/""Wm廳力g/^ez^o妙e(iWmy睡"一ca〃owrece/旨-(iW"'ewfce〃"織，，J.VIROL72:3155-3160(1998).將本申請中引用的所有出版物、專利和專利申請以其整體？1入本文作為參考，其程度如同每個單一的出版物、專利或?qū)＠暾埍痪唧w地和單獨地注明以其整體引入作為參考那樣。過敏性和傳染病國家學會(NIAID)和疾病控制和預防中心(CDC)已經(jīng)將許多病毒歸類為生物恐怖的潛在藥劑(www.bt.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp)。最具有威月辦的藥劑(A類病原體)，如果以惡意的方式使用，將最大可能地造成不利的公眾健康影響和大量傷亡。在A類病原體之內(nèi)，有許多可以引起具有高疾病死亡率的病毒性出血熱的病毒。A類出血熱病毒作為潛在的生物武器可造成嚴重的威脅，因為l)它們可以通過氣溶膠散布；2)小劑量(1-10個噬斑形成單位(pfu))可以引起疾??；3)它們可引起嚴重的發(fā)病和死亡(疾病死亡率15-30%);4)它們可以在公眾中引起恐懼和恐慌；5)沒有美國批準的有效疫苗或具體可利用的抗病毒藥；6)這些病原體容易獲得，并且可以容易地大量生產(chǎn)；和7)已經(jīng)進行了對各種出血熱病毒武器化的研究。1沙粒病毒是包膜病毒，其具有由兩個單鏈RNA片段組成的基因組，兩個片I^稱為小(S,3.5Kb)和大(L,7.5Kb),兩個都具有雙義編碼配置36。SRNA片段編碼主要結(jié)構(gòu)蛋白，核殼蛋白(NP)和前體包膜蛋白(GPC)(其編碼兩個包膜糖蛋白(外部GP1和橫跨膜GP2))18'24'3Q'31,LRNA片段編碼RNA聚合酶蛋白L和11KDa蛋白，Z蛋白，具有假定的調(diào)節(jié)功能19。GP1和GP2(其形成四聚體表面糖蛋白刺突)可導致病毒進入到乾向宿主細月包中。,在病^科由單屬(/,在4#)組成，其包括一些可在人中導致嚴重的出血熱疾病2的病毒(目前辨別23個病毒"。按照基于序列的種系發(fā)生，沙粒病毒科分為兩類。"舊世界"類，來源于非洲，包括人病原體淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎(LCM)病毒和拉沙病毒。"新世界"類，來源于拉丁美洲，凈皮分成3個進化枝。除了Tacaribe和Amapari病毒之外，進化枝B還包括A類致人生病的病毒Junfn(阿才艮廷出血熱)，Machupo(波利維亞出血熱)，Guanarito(委內(nèi)瑞4立出血熱)，和Sabid(巴西出血熱)。這些A類病毒能夠在人中導致嚴重的和常常致命的出血熱疾病。嚙齒類是沙粒病毒的天然寄主，雖然Tacaribe病毒可在蝙蝠中找到。沙粒病毒特異性地在它們的天然寄主中產(chǎn)生慢性病毒血癥感染15,隨后在它們的尿和排泄物中釋出病毒，最終通過氣霧劑或直接與表面擦傷或割口接觸而將與這些感染物質(zhì)緊密接觸的人感染。通過病毒的致病性、它的地域分配、嚙齒類儲存寄主的棲息地和嗜好和人-嚙齒類動物相互作用的性質(zhì)來確定人疾病的自然史。21一些沙粒病毒與人類的嚴重出血性疾病有關(guān)。在人中，拉沙病毒(來源于舊世界組)可導致拉沙出血熱，而新世界組的4種病毒(所有的都源于進化枝B)可在人中引起嚴重的出血熱。那些病毒是引起阿根廷出血熱的Junin病毒，引起波利維亞出血熱的Machupo病毒，和引起委內(nèi)瑞才立出血熱的Guanarito病毒。乂人巴西出血熱的致命病例中分離出Sabia病毒。據(jù)估計，拉沙病毒每年可導致100,000-300,000例感染和大約5,000例死亡。5迄今為止，已經(jīng)證明了評估的30,000例Junin感染的確定病例，大約2,000例的Machupo,200例的Guanarito和僅僅2例Sabia。1最近對于使用沙粒病毒作為生物武器的擔心，著重強調(diào)需要開發(fā)靶向這些病毒的小分子治療劑。1利用直接針對這些病毒的抗病毒藥物可提供治療，并且針對這些病毒用作生物戰(zhàn)藥劑可提供強烈的威懾。由于抗病毒藥物容易給予(口服、丸劑或液體)，并且在給藥幾小時之內(nèi)就可產(chǎn)生抗病毒效果，它們可用來有效地治療患病的患者，對懷4是接觸病原體的那些人提供保護(接觸后預防)，和幫助及時抑制蔓延。目前，還沒有批準針對沙粒病毒出血熱所4吏用的病毒特異療法。這種疾病控制通常包括支持性的護理監(jiān)控和校正流體、電解質(zhì)和滲透不平衡，用凝血因子或血小板替代品治療出血。恢復健康的病人的免疫血清治療可以有效治療Junin和Machupo病毒病，但這種血清的利用受到嚴格限制。在Lassa發(fā)熱患者中，使用利巴韋林(核苷類似物)獲得一定的成功。在小試驗中，在發(fā)熱之后的頭6天之內(nèi)靜脈內(nèi)給予患者利巴韋林可將致死率從76%降低至9%"。與未治療的患者40%致死率相比較，在治療患者中，18個患有阿根廷出血熱的患者的對照試驗產(chǎn)生13%致死率10。利巴韋林治療與不利影響有關(guān)，包括劑量相關(guān)的可逆性溶血性貧血，并且在一些動物品種中出現(xiàn)了致畸性和胚胎致死性。因此將其歸類為妊娠類型X藥物，在妊娠期間禁忌使用。靜脈內(nèi)給藥的利巴韋林可在美國在受限的供應下提供，用于在FND應用條件下照顧性使用。在Lassa發(fā)熱的情況下，已經(jīng)使用的利巴韋林治療的給藥方案包括初始30mg/kg靜脈內(nèi)(IV)負荷劑量，而后每6小時給予16mg/kglV,持續(xù)4天；然后每8小時給予8mg/kglV,持續(xù)6天(全部治療時間10天)。成年男子的治療成本是大約$800。利巴韋林的特性使得其用于治療沙粒病毒出血熱不太理想。文獻中已經(jīng)報道了沙粒病毒復制的許多體外抑制劑，包括吩噻溱，三氟曱哌丙。秦和氯丙。秦、金剛烷胺12'13,蕓苔類固醇(brassinosteroids)13"和放線菌素D15。這些化合物的抗沙粒病毒活性通常是弱的和非特異性的。已經(jīng)進行研究以便開發(fā)針對性疫苗的唯一的沙粒病毒出血熱是由Junin病毒所引起的阿根廷出血熱(AHF)。在AHF地方病地區(qū)，在農(nóng)業(yè)工作人員之中進行的對照試驗中，已經(jīng)評價了活性減毒疫苗(稱為Candidl),看起來其可以降低所報道的AHF病例的數(shù)目，沒有嚴重的副作用16。還不知道是否Candid1疫苗可針對其它沙粒病毒出血熱，且這種疫苗在美國不可以獲得。Tacaribe病毒是生物安全水平2(BSL2)的新世界沙粒病毒(NWA),其可在進化枝B中找到，并且與A類NWA(Juni'n,Machupo,Guanarito和Sabid)系統(tǒng)發(fā)生學相關(guān)。對于所有四個病毒蛋白的氨基酸水平，Tacaribe病毒與Juni'n病毒相同67%至78%。為了篩選NWA的抑制劑，使用Tacaribe病毒作為A類NWA的替代品，開發(fā)了病毒復制的高通過量篩選(HTS)試驗。使用這種HTS試驗，篩選了400,000個小分子庫?；谒幬镄阅苓x擇導向系列，并通過迭代化學將這種系列最佳化，產(chǎn)生高活性的特性和Tacaribe病毒的特定小分子抑制劑，針對人類致病的NWA(Juni'n,Machupo,Guanarito和Sabi&)具有選擇性的活性。這種分子顯示了有利的藥效性能，在仔鼠模型中表明了體內(nèi)抗沙粒病毒的活性。導致出血熱的所有的人類病原體沙粒病毒(得自于新世界組)來自于進化枝B。這些人類病原體病毒需要在高水平容量(BSL-4)的條件下操作。然而，使同樣得自于進化枝B的Amapari和Tacaribe病毒在BSL-2(低水平的)容量的條件下在組織培養(yǎng)物中生長。對于這些病毒，在低水平的容量條件下工作使得實驗更容易和更安全。同時，Amapari病毒產(chǎn)生低的細胞病變效果，Tacaribe病毒可以容易地生長在細胞培養(yǎng)物中，并且在4至6天內(nèi)產(chǎn)生實用的CPE。由于這種CPE與病毒復制直接相關(guān)，在細胞培養(yǎng)物中抑制病毒復制的化合物在賦予對病毒誘導的CPE的保護的情況下可以被容易地鑒別(盡管抑制CPE而不抑制病毒復制僅僅是理論上可能的)。此外，如果在這些病毒之間具有高度同源性(相比于Junin病毒(具有理想的同一性的長段蛋白)，Tacaribe病毒的所有4個蛋白具有大約70%同一性)，對Tacaribe病毒具有確定活性的化合物，對可導至丈出血熱的沙4立病毒人病原體(Junin,Machupo,Guanarito禾口Sabia)也可能具有活性。本領(lǐng)域需要的是對于病毒感染和相關(guān)疾病(例如由出血熱病毒例如沙粒病毒所引起的疾病)的治療的新療法和預防法。提供了在有生命的宿主中治療和預防病毒感染以及與病毒感染相關(guān)的疾病的化合物和組合物和/或方法。尤其是，提供了治療和預防出血熱病毒例如沙粒病毒的化合物和組合物和/或方法。在一個實施方案中，提供了治療或預防病毒感染或與此相關(guān)疾病的方法，包括給予需要其的哺乳動物治療有效量的式I化合物或其可藥用鹽。在另一個實施方案中，提供了藥物組合物，其包含藥學有效量的該化合物或其可藥用鹽和可藥用載體。另外，提供了式I的化合物以及其可藥用鹽。式I的化合物包括概述^巾n是0-6的整數(shù)；m是O-l的整數(shù)；p是O-l的整數(shù)；Ri選自H和烷基;R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中&和112結(jié)合在一起形成取代或未取代的C^。環(huán)狀飽和雜烷基；R3選自H和烷基；或其可藥用鹽。其它的式I化合物包括^巾R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其可藥用鹽。進一步的式I化合物包括#巾Rj選自H和烷基；R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中Ri和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的CVK)環(huán)狀飽和雜烷基；或其可藥用鹽。在其它實施方案中，在式I的化合物中，n是0或l。同樣，在其它實施方案中，在式I的化合物中，m是l,和p是l,或者，m是O,和p是0。在進一步的實施方案中，在式I中，其中Ri和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的C4-K)環(huán)狀飽和雜烷基，選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>在更進一步實施方案中，在式I中，R2選自其中R5、R6、R7、R8和R9中的每一個獨立地選自氫，乙?；?，曱氧基，三氟甲基，氟，氯，溴，碘，酰氨基，曱基，磺酰胺，三氟曱氧基，羧基，氰基和1,1,2,2-四氟乙氧基。尤其是，某些實施方案涉及選自下列的式l的化合物N-2-(l,l,l,3，3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(4-(苯基)-苯磺酰]肼-l-甲酰胺；N-2-(U,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(4-(2-曱基-2-丙基)-苯磺酰]肼-l-曱酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[7-(4-曱基-3,4-二氫-2H-苯并[1,4]嗜。秦基)磺?；鵠肼-1-曱酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[5-(l-二甲基氨基-萘基)磺?；鵠肼-l-甲酰胺；N-2-(l,U,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(2,4,6-三曱基苯基)磺?；鵠肼-l-曱酰胺；N-2-(l,U,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(3-氯-6-曱氧基苯基)磺?；鵠肼l-曱酰胺；N-2-(l,1,1,3,3,3-l-曱酰胺；氟-2-曱基丙基)-2-[(3,6-二曱氧基苯基盧黃?；鵠肼N陽2?；鵠肼-N-2胺；N國2胺；N畫2胺；N-2酰胺；N-2.-l-曱酰胺N-2-曱酰胺；N-2--l-甲酰胺N-2-胺；N-2-酰胺；N-2-'胺；N-2-'曱酰胺；N-2-'-l-曱酰胺N-2-磺?；鵠fN-2-U,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(4-(4-[l,2,3]噻二唑基)苯基)磺-甲酰胺；1,1,1,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(3-溴苯基)磺?；鵠肼-1-曱酰U,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(4-溴苯基)磺?；鵠肼-l-曱酰U,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(4-甲基苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰U,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]肼-l-甲U,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(4-二氟曱氧基苯基)磺?；鵠肼1,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(3-氟-4-氯-苯基)磺?；鵠肼-1-1,U,3,33-六氟-2-甲基丙基)-2-[(4-三氟曱氧基苯基)磺?；鵠肼U,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(4-氟-苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰U，l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(3-曱氧基苯基)磺?；鵠肼-l-甲1,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(2-曱基苯基)磺酰基]肼-1-甲酰1,1,1,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(3-三氟甲基苯基)磺?；鵠肼-1-1,1,1,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(2,4-二甲氧基苯基)磺?；鵠肼1,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[2-(5-氯-l,3-二甲基-lH-吡唑基)-l-曱酰胺；1,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(3-曱基苯基)磺?；鵠肼-1-曱酰胺；N-2-(l,甲酰胺；N-2-(l,甲酰胺；N-2-(l,畫l畫甲醜胺；N鄰，胺；N-2-(l,肼-l-甲酰胺N-2-(l,-l-甲酰胺；N-2-(l,酰胺；N-2-(l,N-2-(l,-l-曱酰胺；N-2-(l,胺；N-2-(l,胺；N-2-(l,(dioxinyl))碌N鄰，-l-甲酰胺；N鄰，胺；N鄰，酰胺；N-2-(l,肼-l-甲酰胺;,1,3,3，3-六氟-2-曱基丙基,1,3,3,3-六氟-2-曱基丙基,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基1,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(2-氯苯基)磺?；鵠肼-1-曱酰1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基,1,3，3，3-六氟畫2畫曱基丙基,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基,1,3，3,3-六氟-2-曱基丙基,1,3,3,3畫六氟畫2隱甲基丙基,1,3,3,3-六氟-2-曱基丙基,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基,1,3，3,3陽六氟-2畫甲基丙基?；鵠肼_1_曱酰胺；,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基,1,3，3,3-六氟-2-曱基丙基,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基,1,3，3,3-六氟-2-甲基丙基.2-[(4-三氟曱基苯基)磧酰基]肼-1-.2-[(2-三氟曱基苯基)磺?；鵠肼-1-.2-[4-(吡咯烷-1-磺?；?苯磺酰]肼-2-[2-(5-嗎啉-4-基)吡啶基磺?；鵠-2-[(2-三氟甲氧基苯基)磺?；鵠肼-2-[(2,4-二氯苯基)磺?；鵠肼-1-曱2-[苯磺酰]肼-l-曱酰胺；-2-[(3-二氟甲氧基苯基)磺?；鵠肼-2-[(3-氰基苯基)磺?；鵠肼-1-甲酰-2-[(4-氰基苯基)磺?；鵠肼-1-曱酰2-[5-(2，3-二氫苯并[l,4]二喁英基_2-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-1-甲基肼)-2-[(3_氟苯基)磺?；鵠肼-1-甲酰-2-[(3,4-二氟苯基)磺酰基]肼-l-曱-2-[(2,4-二甲基噻唑-5-基)磺?；絅-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(4-乙酰基苯基)磺?；鵠肼-l-曱酰胺；N-2-(l,U,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(2,6-二氟苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰胺；N-2-(U,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(2-氟苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(2,5-二氟苯基)磺?；鵠肼-l-曱酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(4-曱基苯基)磺?；鵠-2-曱基肼-l-甲酰胺；N-2-(l,U,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(2,6-二氯苯基)磺?；鵠肼-l-曱酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(2,6-二(三氟曱基)苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(4-曱基苯基)磺?；鵠肼-l-甲基甲酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(3,5-二曱基異嘈唑-5-基)磺?；鵠肼-l-曱酰胺；N-2-(l,U,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[(4-硝基苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(l-甲基咪唑-4-基)磺酰基]肼-l-甲酰胺；N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)-2-[曱基磺?；鵠肼-l-甲酰胺；4-苯基哌嗪-l-(2，2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-甲酰胺；4-嗎啉基-l-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-甲酰胺；1-(2-乙?；交?-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-脲；l-哌啶子基-l-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-甲酰胺；l-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-3-(3，4,5-三曱氧基苯基)-脲；l-(4-三氟甲基苯基)-3-(2,2，2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；4-曱基p底。秦-l-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟甲基乙基)-曱酰胺；1_萘-1_基_3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟甲基乙基)-脲；l-(4-氯苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；4-苯基哌啶-l-基-l-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟曱基乙基)-曱酰胺；1-(2-苯基(苯基))-3_(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-脲；1-(2,6-二氟苯基)-3-(2,2,2-三氟-1-曱基-1-三氟曱基乙基)-脲；2-[3-(l，l-二-三氟甲基乙基)-脲基]苯甲酰胺；l一(2-氯-6-氟苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；l一(3-三氟甲基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；2-[3-(l,l-二-三氟甲基乙基)-脲基]苯磺酰胺；l-(2,2,3,3-四氟-2,3-二氫苯并[l,4]二夢惡英-5-基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟曱基乙基)-脲；l-(3-三氟甲氧基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；l一(4-三氟甲氧基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-脲；4-甲基-i-哌啶-i-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-甲酰胺；1-萘-2-基-3-(2,2,2-三氟-1-甲基-1-三氟曱基乙基)-脲；l-(2-氟苯基)-3-(2,2，2-三氟-l-甲基-l-三氟曱基乙基)-脲；l-(2,6-二曱氧基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟甲基乙基)-脲；3-三氟曱氧基-4-[3-(l,l-二-三氟甲基乙基)-脲基]苯曱酸；1-苯基_3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟曱基乙基)-脲；l-(3-氰基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-脲；1_(3_甲氧基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟曱基乙基)-脲；1誦(2-(1,1,2,2-四氟乙氧基)苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟曱基乙基)-脲；3-[3-(l,l-二-三氟曱基乙基)-脲基]苯磺酰胺；l-(3-氟苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟甲基乙基)-脲；1_(4-溴苯基)-3-(2,2,2-三氟-1-甲基-1-三氟曱基乙基)-脲；l-(2-氰基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；1_(4-氰基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-脲；l-(2,2-二氟苯并[l,3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；1_(4_氯苯基)_3_(2,2,2-三氟-1-甲基-1-三氟曱基乙基)-脲；l-(3-甲基苯基)-3-(2,2，2-三氟-l-曱基-l-三氟甲基乙基)-脲；4-[3-(l,l-二-三氟曱基乙基)-脲基]苯磺酰胺；l-(2,6-二溴苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟甲基乙基)-脲；221-(2-甲基苯基)-3-(2,2,2-三氟-1-曱基-1-三氟曱基乙基)-脲；1-(4-曱基苯基)-3-(2,2,2-三氟-1-曱基-1-三氟曱基乙基)-脲；l-吡咯烷基-l-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-甲酰胺；l-(4-氟苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-脲；l-(2,4-二溴苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；氮雜環(huán)庚烷-l-羧酸(2,2,2-三氟-l-甲基-l-三氟曱基乙基)-酰胺；l-(4-溴-2-三氟曱氧基苯基)-3-(2,2，2-三氟-l-甲基-l-三氟甲基乙基)-脲；l-(2-三氟甲氧基苯基)-3-(2,2,2-三氟-l-曱基-l-三氟甲基乙基)-脲；l-(2-三氟甲基苯基)-3-(2，2,2-三氟-l-曱基-l-三氟曱基乙基)-脲；1-(2-甲氧基苯基)-3-(2,2,2-三氟-1-甲基-1-三氟曱基乙基)-脲；和N-2-(l,l,l,3，3，3-六氟-l-甲基丙基)-2-[(4-二氟甲氧基苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰胺。在另一個實施方案中，提供了治療或預防病毒感染或與此相關(guān)疾病的方法，包括給予需要其的哺乳動物治療有效量的式II化合物或其可藥用鹽。在另一個實施方案中，提供了藥物組合物，其包含藥學有效量的該化合物或其可藥用鹽和可藥用載體。另外，提供了式II的化合物以及其可藥用鹽。式II的化合物包括其中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>式IIn是0-6的整數(shù)；m是0-l的整數(shù)；選自H和烷基；R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中R^和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的C4-K)環(huán)狀飽和雜烷基；R3和R4獨立地選自H和烷基；或其可藥用鹽。尤其是，某些實施方案涉及選自下列的式n的化合物2-[2,5-二(2,2,2-三氟乙氧基)苯甲酰基]-^[-[1，1-二(三氟甲基)丙基]肼曱酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-叔丁基苯曱?；?肼甲酰胺；2-(1,1'-聯(lián)苯-4-基羰基)-N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(l-萘酰)肼曱酰胺；2-(l,l'-聯(lián)苯-2-基羰基)-N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-甲基苯曱?；?肼甲酰胺；N-[1，1-二(三氟甲基)丙基]-2-(2-萘酰)肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(2,5-二曱氧基苯甲酰)肼曱酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(3,4-二氯苯甲?；?肼曱酰胺；N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-溴苯甲酰基)肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-異丙基苯曱?；?肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(3,5-二曱基苯甲酰基)肼曱酰胺；N-[U-二(三氟甲基)丙基]-2-(茶基(mesityl)羰基)肼甲酰胺；和N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]-2-(5-氯-2-曱氧基苯甲酰)肼曱酰胺。在實施方案中，所治療的哺乳動物是人。在具體實施方案中，所治療的病毒感染是出血熱病毒，例如》:^病#。^:^病善可以選自Junin,Machupo,Guanarito,Sabia，Lassa,Tacaribe,Pinchinde和VSV。在下面更充分地描述方法和制劑的詳細內(nèi)容。附圖的若干視圖的簡要說明圖l提供了ST-336的化學結(jié)構(gòu)、化學式和分子量。圖2顯示了加入ST-336的時間對Tacaribe病毒產(chǎn)率和噬斑形成的效果。在圖2A中，Vero細胞感染了Tacaribe病毒，MOI=0.01。在Tacaribe感染之前或在Tacaribe感染期間(感染后-l、3、6、9、12、15、18或21小時)加入ST-336。感染后24小時，通過噬菌斑法確定病毒產(chǎn)率。在圖2B中，Vero細胞感染了400pfuTacaribe病毒。在感染之前1小時(-l)、在吸收期間1小時(O)和在感染之后1小時，加入ST-336。用PBS洗滌感染的單層，并用包含瓊膠糖的介質(zhì)覆蓋。感染后五天，將細胞用戊二醛固定并用龍膽紫染色，而后進行噬斑計數(shù)。圖3表明，在沒有細胞的情況下，ST-336與完好的Tacaribe病毒體結(jié)合，具有緩慢的K。ff。在圖3A中，提供了在涂覆之前病毒稀釋流程圖。病毒與ST-336混合、稀釋(左側(cè))，或病毒稀釋和稀釋之后加入ST-336(右側(cè))。在圖3B中，提供了斑塊的照片，斑塊是在給Vero細胞涂覆每個稀釋物(示于圖3A)之后得到的。圖4顯示了ST-336耐藥變體("DRVs，，)的標記圖。在圖4A中，提供了糖蛋白前體("GPC")的線性圖，其顯示了信號肽("SP")、跨膜結(jié)構(gòu)域("TM，，)、GP1和GP2之間切割位點(K261-A262)的位置、四個ST-336抗性突變體("DR#l-4")的位置和各自的氨基酸變化。在圖4B中，顯示了得自于自然型NWA和ST336DRVs的GP2的氨基酸序列排列。顯示的是包含跨膜結(jié)構(gòu)域(由垂直線標明)的GP2的C端部分(氨基酸397至457)的氨基酸序列、DR#l-4的突變位置(下劃線)和Amapari中的氨基酸差別(粗體)。圖5提供了ST-294的化學結(jié)構(gòu)、化學式和分子量。圖6顯示了ST-294在仔鼠中抵御Tacaribe病毒的效果。用30xLD50Tacarbide病毒使四天大的BALB/c小鼠感染IP,用U武形劑(對照物)、利巴韋林(25mg/kg)、ST-294(每天兩次(BID)，50mg/kg，或一天一次(SID)，100mg/kg)每天治療，持續(xù)10天。示于圖6中的是在感染之后的第9天和第10天每個試^r組中的存活百分比。i羊細i兌明本發(fā)明提供了可有效用于治療和預防有生命宿主的病毒感染以及與病毒感染相關(guān)的疾病的化合物。尤其是，提供了治療和預防出血熱病毒例如沙粒病毒的化合物和組合物和/或方法。然而，在提供進一步的詳細內(nèi)容之前，首先定義下列術(shù)語。定義按照該詳細說明，應用下列縮寫和定義。必須指出，本文中使用的單數(shù)形式"一種"、"一個"和"此"包括它們的相應的復數(shù)形式，除25非上下文另外清楚地規(guī)定。本文討論的出版物僅僅以它們的公開形式提供。本文中的任何記載均不被理解為承認有早于本發(fā)明的出版物。進一步的，所提供的出版日期可以不同于實際出版日期，其可能需要獨立地確定。在提供了值的范圍的地方，應理解為包含了每個介于其間的值。這些較小的范圍的上下限可能^^皮獨立地包括在較小的范圍內(nèi)，以在所宣稱的范圍內(nèi)存在任何具體排除限制為條件。如果所宣稱的范圍包括一個或兩個限制，排除所包括限制的二者之一的范圍也包括在本發(fā)明中。還包括的是落入所引用范圍中的任何值。除非另外限定，本文使用的所有技術(shù)和科學名詞具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同含義。與本文所描述那些相似的任何方法和物質(zhì)或等效物，也可以在本發(fā)明的實踐或試驗中使用。本文引入本文提及的所有出版物作為參考，以便結(jié)合出版物所引用的方法和/或物質(zhì)來公開和描述方法和/或物質(zhì)。"患者"或"受試者"包括任何哺乳動物。對治療來說，"哺乳動物，，是指可歸類為哺乳動物的任何動物，包括但不局限于人，家畜和農(nóng)畜，和動物園、運動或玩賞動物，例如狗，馬，貓，牛，等等。在長期劑量方式的背景下，本文使用的術(shù)語"效果"是指具體治療方式的效果。效果可以基于疾病的病程對藥劑的響應變化來測定。在長期劑量方式的背景下，本文使用的術(shù)語"成功"是指具體治療方式的效果。這包括效果、毒性(例如制劑或劑量單位的副作用和患者耐受性)、患者依從性等等的平衡。對于認為是"成功"的長期給藥方式，必須平衡病人監(jiān)護和效果的不同方面，以產(chǎn)生對患者有利的結(jié)果。本文使用的術(shù)語"治療，，、"醫(yī)治，，等等指的是獲得所需要的藥理學和生理效應。就預防或部分地預防疾病、癥狀或其病癥而言，效果可以是預防性的，和/或就部分或完全治愈疾病、病癥、癥狀或疾病所造成的不良影響而言，效果可以是治療性的。本文使用的術(shù)語"治療"包括哺乳動物例如人的疾病的任何治療，并且包括(a)預防患者中可能存在的疾病，該患者可能傾向于患有疾病、^f旦還沒有i貪斷為患有疾病，即在患者中引起疾病的臨床癥狀但還沒有形成疾病，該患者可能傾向于患有疾病、但還沒有經(jīng)歷或顯示疾病的癥狀；(b)抑制疾病，即延滯或降4氐疾病或其臨床癥狀的發(fā)展；和(c)減輕疾病，即引起疾病和/或其癥狀或病癥的衰退。包"fe治療患有疾病(與病理炎癥相關(guān))的患者。還包4舌的是預防、抑制或減輕病理炎癥長時間造成的和/或由對存在于生物系統(tǒng)中的、-:使用的"酰基"是指基團H-C(O二烷基-C(O)-,取代的烷基-C(O)-,烯基-C(O)-,取代的烯基-C(O)-,炔基-C(O)-,取代的炔基-C(O)-環(huán)烷基-C(O)-，取代的環(huán)烷基-C(O)-,芳基-C(O)-，取代的芳基-C(O)-,雜芳基-c(o)-,取代的雜芳基-c(o),雜環(huán)-c(o)-和取代的雜環(huán)-c(o)-,其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)如本文所定義。"酰氨基"是指基團-C(O)NRR,其中每個R獨立地選自氫，烷基，取代的烷基，烯基，取代的烯基，炔基，取代的炔基，芳基，取代的芳基，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，且其中每個R與氮原子一起相連形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)，其中烷基，取代的烷基，烯基，取代的烯基，炔基，取代的炔基，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)和取代的雜環(huán)是如本文所定義。"烯基，，是指優(yōu)選具有2至10個碳原子、且更優(yōu)選2至6個碳原子、并且具有至少1個、優(yōu)選l-2個烯基不飽和位點的烯基。"低級烯基，，是指優(yōu)選具有2至6個碳原子和具有至少1個、優(yōu)選只有1個烯基不飽和位點的烯基(即>0<:<)?？梢杂苫鶊F例如烯丙基、乙烯基、丙烯基、丁烯基等等來舉例說明該術(shù)語。"取代的烯基，，是指具有1至5個獨立選自下列的取代基的烯基烷氧基，取代的烷氧基，?；０被?，硫基羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫基脒基，氨酰基，氨基羰基氨基，氨基硫基羰基氨基，氨基羰基氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，卣素，羥基，氰基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-環(huán)烷基，羧基-取代的環(huán)烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基雜芳基，羧基-取代的雜芳基，羧基雜環(huán)，羧基-取代的雜環(huán)，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，胍基，胍基砜，硫醇，烷硫基，取代的烷硫基，硫基芳基，取代的硫基芳基，硫基環(huán)烷基，取代的硫基環(huán)烷基，硫基雜芳基，取代的硫基雜芳基，硫基雜環(huán)，取代的硫基雜環(huán)，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，氧基羰基氨基，氧基硫基羰基氨基，環(huán)烷基氧基，取代的環(huán)烷基氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，-os(o)r烷基，-os(o:b-取代的烷基，-os(o)2-芳基，-03(0)2-取代的芳基，-OS(0)2-雜芳基，-OS(O)r取代的雜芳基，-OS(O)r雜環(huán)，-OS(0)2-取代的雜環(huán)；-OS02-NRR,其中R是氫或烷基；-NRS(0)2-烷基，-忖1^(0)2-取代的烷基，"NRS(0)2-芳基，-NRS(0)2-取代的芳基，^118(0)2-雜芳基，^1^(0)2-取代的雜芳基，-^^(0)2-雜環(huán)，-NRS(0)2-取代的雜環(huán)，-NRS(0)2-NR-烷基，-NRS(O)rNR-取代的烷基，-NRS(0)2-NR-芳基，-NRS(0)2-NR-取代的芳基，"^1^(0)2^11-雜芳基，^118(0)2^11-取代的雜芳基，^1^(0)2~^尺-雜環(huán)，-服8(0)2^11-取代的雜環(huán)，其中R是氬或烷基；單和二-烷基氨基，單和二-(取代的烷基)氨基，單和二-芳氨基，單和二-取代的芳氨基，單和二-雜芳基氨基，單和二-取代的雜芳基氨基，單和二-雜環(huán)氨基，單和二-取代的雜環(huán)氨基；不對稱的二-取代的胺，其具有獨立地選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)和取代的烯基的不同取代基，具有由常規(guī)封端基團例如Boc、Cbz、甲?；鹊确舛说陌被?；或烯基/被下列取代基取代的烯基-S02-烷基，-SCV取代的烷基，-S02-烯基，-SCV取代的烯基，-302-環(huán)烷基，-S02-取代的環(huán)烷基，-so2-芳基，-302-取代的芳基，-S(V雜芳基，-S02-取代的雜芳基，-SCV雜環(huán)，-S02-取代的雜環(huán)和-S02NRR，其中R是氬或烷基。"烷氧基"是指基團"烷基-O-",其包括例如甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，叔丁氧基，仲丁氧基，正戊氧基，正己氧基，1,2-二甲基丁氧基，等等。"取代的烷氧基"是指基團"取代的烷基-O-"。"烷基，，是指具有1至10個碳原子或者1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基?？梢杂苫鶊F例如曱基、叔丁基、正庚基、辛基等等來舉例說明該術(shù)語。"低級烷基"是指具有1至5個碳原子的單價烷基，包括直鏈和支鏈烷基。可以由基團例如甲基、乙基、異丙基、正丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基等等來舉例說明該術(shù)語。"低級烷基，，可以任選被卣素例如氯、氟、溴等等取代。28"取代的烷基"是指具有1至5個獨立地選自下列取代基的1至10個碳原子的烷基烷氧基，取代的烷氧基，?；?，酰氨基，硫基羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫基脒基，氨?；?，氨基羰基氨基，氨基硫基羰基氨基，氨基羰基氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，氰基，卣素，羥基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-環(huán)烷基，羧基-取代的環(huán)烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基雜芳基，羧基-取代的雜芳基，羧基雜環(huán)，羧基-取代的雜環(huán)，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，胍基，胍基砜，硫醇，烷石?；?，取代的烷碌u基，石克基芳基，取代的硫基芳基，石克基環(huán)烷基，取代的硫基環(huán)烷基，硫基雜芳基，取代的硫基雜芳基，硫基雜環(huán)，取代的硫基雜環(huán)，雜芳基，取代的芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，氧基羰基氨基，氧基硫基羰基氨基，環(huán)烷基氧基，取代的環(huán)烷基氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，-os(o)2-烷基，-os(o;b-取代的烷基，-08(0)2-芳基，-os(o:h-取代的芳基，-os(o)2-雜芳基，-03(0)2-取代的雜芳基，-08(0)2-雜環(huán)，-08(0)2-取代的雜環(huán)，-OS02-NRR,其中R是氬或烷基；~^1^(0)2-烷基，-忖1^(0)2-取代的烷基，-NRS(O:h-芳基，^1^(0)2-取代的芳基，-NRS(0)2-雜芳基，-NRS(0)2-取代的雜芳基，-NRS(0)2-雜環(huán)，~^113(0)2-取代的雜環(huán)，-NRS(0)2-NR-烷基，^118(0)2-服-取代的烷基，-NRS(0)2-NR-芳基，-NRS(0)2-NR-取代的芳基，-NRS(0)2-NR-雜芳基，-NRS(0)2-NR-取代的雜芳基，-NRS(0)2-NR-雜環(huán)，-NRS(0)2-NR-取代的雜環(huán)，其中R是氫或烷基；單和二-烷基氨基，單和二-(取代的烷基)氨基，單和二-芳氨基，單和二-取代的芳氨基，單和二-雜芳基氨基，單和二-取代的雜芳基氨基，單和二-雜環(huán)氨基，單和二-取代的雜環(huán)氨基，不對稱的二-取代的胺，其具有獨立地選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)和取代的烷基的不同取代基，具有由常規(guī)封端基團例如Boc、Cbz、曱?；鹊确舛说陌被换蛲榛?被下列取代基取代的烷基-302-烷基，-SCV取代的烷基，-S02-烯基，-SCV取代的烯基，-SCV環(huán)烷基，-S02-取代的環(huán)烷基，-S02-芳基，-S02-取代的芳基，-so2-雜芳基，-SCV取代的雜芳基，-SCV雜環(huán)，-S02-取代的雜環(huán)和-S02NRR,其中R是氬或烷基。"脒基"是指基團H2NC(=NH>，術(shù)語"烷基脒基"是指具有1至3個烷基的化合物(例如，烷基HNC^NH)-)。"氨基"是指基團-NH2。"取代的氨基，，是指基團-NRR,其中每個R基團獨立地選自氫，烷基，取代的烷基，烯基，取代的烯基，炔基，取代的炔基，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，-302-烷基，-SCb-取代的烷基，-802-烯基，-SCV取代的烯基，-802-環(huán)烷基，-SOr取代的環(huán)烷基，-S(V芳基，-S(V取代的芳基，-S02-雜芳基，-S(V取代的雜芳基，-S(V雜環(huán)，-SCV取代的雜環(huán)，條件是，兩個R基團都不是氫；或R基團可以與氮原子連接在一起形成雜環(huán)或取代的雜環(huán)。"氨?；?是指基團-NRC(O)烷基，-NRC(O)取代的烷基，-NRC(O)環(huán)烷基，-NRC(O)取代的環(huán)烷基，-NRC(O)烯基，-NRC(O)取代的烯基，-NRC(O)炔基，-NRC(O)取代的炔基，-NRC(O)芳基，-NRC(O)取代的芳基，-NRC(O)雜芳基，-NRC(O)取代的雜芳基，-NRC(O)雜環(huán)，和-NRC(O)取代的雜環(huán)，其中R是氫或烷基，其中烷基，取代的烷基，烯基，取代的烯基，炔基，取代的炔基，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)和取代的雜環(huán)如本文所定義。"芳基"或"Ar"是指6至14個碳原子的不飽和芳族碳環(huán)基團，具有單環(huán)(例如苯基)或多個稠合環(huán)(例如萘基或蒽基)，該稠合環(huán)可以是或可以不是芳香烴(例如，2-苯并嗜唑啉酮，2H-l，4-苯并哺嗪-3(4H)-S同-7-基，等等)，條件是，連結(jié)點通過芳香環(huán)原子。"取代的芳基"是指被1至3個選自下列的取代基取代的芳基羥基，酰基，酰氨基，硫基羰基氨基，酰氧基，烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，烯基，取代的烯基，炔基，取代的炔基，脒基，烷基脒基，硫基脒基，氨基，氨?；被驶趸?，氨基羰基氨基，氨基硫基羰基氨基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-環(huán)烷基，羧基-取代的環(huán)烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基雜芳基，羧基-取代的雜芳基，羧基雜環(huán)，羧基-取代的雜環(huán)，羧基酰胺基，氰基，硫醇，烷硫基，取代的烷硫基，硫基芳基，取代的硫基芳基，硫基雜芳基，取30代的硫基雜芳基，硫基環(huán)烷基，取代的硫基環(huán)烷基，硫基雜環(huán)，取代的硫基雜環(huán)，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，胍基，胍基砜，卣素，硝基，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，氧基羰基氨基，氧基硫基羰基氨基，-S(0)2-烷基，-S(0)2-取代的烷基，-S(0)2-環(huán)烷基，-s(o)2-取代的環(huán)烷基，-s(o;h-烯基，-3(0)2-取代的烯基，-s(o)2-芳基，-3(0)2-取代的芳基，-S(0)2-雜芳基，-S(0)2-取代的雜芳基，-S(0)2-雜環(huán)，-8(0)2-取代的雜環(huán)，-03(0)2-烷基，-OS(O)r取代的烷基，-OS(0)2-芳基，-OS(O;h-取代的芳基，-08(0)2-雜芳基，-08(0)2-取代的雜芳基，-OS(0)2-雜環(huán)，-03(0)2-取代的雜環(huán)，-OS02-NRR,其中R是氫或烷基；-NRS(O)r烷基，-NRS(0)2-取代的烷基，-NRS(O;h-芳基，-NRS(O)r取代的芳基，"^113(0)2-雜芳基，"NRS(0)2-取代的雜芳基，-NRS(0)2-雜環(huán)，-NRS(O)r取代的雜環(huán)，-NRS(0)2-NR-烷基，"NRS(0)2-NR-取代的烷基，-NRS(0)2-NR-芳基，-NRS(0)2-NR-取代的芳基，"NRS(0)2-NR-雜芳基，-NRS(0)2-NR-取代的雜芳基，-NRS(O;h-NR-雜環(huán)，-NRS(0)2-NR-取代的雜環(huán)，其中R是氫或烷基；單和二-烷基氨基，單和二-(取代的烷基)氨基，單和二-芳氨基，單和二-取代的芳氨基，單和二-雜芳基氨基，單和二-取代的雜芳基氨基，單和二-雜環(huán)氨基，單和二-取代的雜環(huán)氨基，不對稱的二-取代的胺，其具有獨立地選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)的不同取代基，取代的芳基上的氨基由常規(guī)封端基團例如Boc、Cbz、曱?；鹊确舛?，或被-S02NRR取代，其中R是氳或烷基。"環(huán)烯基"是指具有單個或多個不飽和現(xiàn)象(但不是芳香烴)的3至8個碳原子的環(huán)狀烯基。"環(huán)烷氧基"是指-O-環(huán)烷基基團。"取代的環(huán)烷氧基"是指-O-取代的環(huán)烷基基團。在式I和II的化合物和PEG衍生物方面，"環(huán)烷基"是指具有單個或多個稠合環(huán)的3至12個碳原子的環(huán)狀烷基，包括例如金剛烷基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)辛基等等。"環(huán)烷基"是指具有單個環(huán)的3至8個碳原子的環(huán)狀烷基，包括例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)辛基等等。由此定義中排除的是多環(huán)烷基，例如金剛烷基，等等。"低級環(huán)烷基"是指具有單個環(huán)的3至6個碳原子的環(huán)狀烷基，包括例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。"取代的環(huán)烷基"和"取代的環(huán)烯基，，是指具有1至5個獨立地選自下列的取代基的3至8個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基氧代(=0),硫代(=S),烷氧基，取代的烷氧基，?；?，酰氨基，硫基羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫基脒基，氨酰基，氨基羰基氨基，氨基硫基羰基氨基，氨基羰基氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，卣素，羥基，氰基，硝基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-環(huán)烷基，羧基-取代的環(huán)烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基雜芳基，羧基-取代的雜芳基，羧基雜環(huán)，羧基-取代的雜環(huán)，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，胍基，胍基砜，硫醇，烷硫基，取代的烷硫基，硫基芳基，取代的硫基芳基，硫基環(huán)烷基，取代的硫基環(huán)烷基，硫基雜芳基，取代的硫基雜芳基，硫基雜環(huán)，取代的硫基雜環(huán)，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，氧基羰基氨基，氧基硫基羰基氨基，-08(0)2-烷基，-03(0)2-取代的烷基，-08(0)2-芳基，-03(0)2-取代的芳基，-03(0)2-雜芳基，-OS(0)2-取代的雜芳基，-OS(0)2-雜環(huán)，-03(0)2-取代的雜環(huán)，-OS02-NRR,其中R是氫或烷基；"^1^(0)2-烷基，-NRS(0)2-取代的烷基，"^118(0)2-芳基，-NRS(0)2-取代的芳基，-NRS(0)2-雜芳基，-NRS(O)r取代的雜芳基，-NRS(0)2-雜環(huán)，-NRS(0)2-取代的雜環(huán)，-NRS(0)2-NR-烷基，-NRS(0)2-NR-取代的烷基，~^1^(0)2^11-芳基，-NRS(O;h-NR-取代的芳基，-NRS(0)2-NR-雜芳基，~^113(0)2^11-取代的雜芳基，-NRS(0)2-NR-雜環(huán)，-NRS(0)2-NR-取代的雜環(huán)，其中R是氫或烷基；單和二-烷基氨基，單和二-(取代的烷基)氨基，單和二-芳氨基，單和二-取代的芳氨基，單和二-雜芳基氨基，單和二-取代的雜芳基氨基，單和二-雜環(huán)氨基，單和二-取代的雜環(huán)氨基，不對稱的二-取代的胺，其具有獨立地選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)和取代的炔基的不同取代基，具有由常規(guī)封端基團例如Boc、Cbz、曱?；鹊确舛说陌被?；或炔基/被下列取代基取代的炔基-SCV烷基，-S02-取代的烷基，-302-烯基，-SCV取代的烯基，-802-環(huán)烷基，-S02-取代的環(huán)烷基，-SCV芳基，-802-取代的芳基，-302-雜芳基，-S02-取代的雜芳基，-302-雜環(huán)，-S02-取代的雜環(huán)和-S02NRR，其中R是氫或烷基。"鹵代"或"鹵素"是指氟、氯、溴和碘。"雜芳基"是指2至10個碳原子和1至4個環(huán)內(nèi)雜原子的芳香碳環(huán)基團，雜原子選自氧、氮和硫或其氧化物。這種雜芳基可以具有單環(huán)(例如吡咬基或呋喃基)或多稠合環(huán)(例如茚溱基或苯并噻吩基)，其中一個或多個稠合環(huán)可能或可能不是芳香烴，條件是，連結(jié)點通過芳香環(huán)原子。另外，雜芳基的雜原子可以被氧化，即形成吡啶N-氧化物或1,1-二氧代-l,2,5-噻二唑等等。另外，環(huán)的碳原子可以被氧代(K))取代。術(shù)語"在雜芳基環(huán)中具有兩個氮原子的雜芳基"是指在雜芳基環(huán)中具有兩個并且只有兩個氮原子和在雜芳基環(huán)中任選包含1或2個其它雜原子例如氧或硫的雜芳基。"取代的雜芳基"是指被1至3個選自下列的取代基取代的雜芳基羥基，?；?，酰氨基，硫基羰基氨基，酰氧基，烷基，取代的烷基，烷氧基，取代的烷氧基，烯基，取代的烯基，炔基，取代的炔基，脒基，烷基脒基，硫基脒基，氨基，氨?；?，氨基羰基氧基，氨基羰基氨基，氨基硫基羰基氨基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，羧基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-環(huán)烷基，羧基-取代的環(huán)烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基雜芳基，羧基-取代的雜芳基，羧基雜環(huán)，羧基-取代的雜環(huán)，羧基酰胺基，氰基，硫醇，烷硫基，取代的烷硫基，硫基芳基，取代的硫基芳基，疏基雜芳基，取代的硫基雜芳基，硫基環(huán)烷基，取代的硫基環(huán)烷基，硫基雜環(huán)，取代的硫基雜環(huán)，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，胍基，胍基砜，卣素，硝基，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，氧基羰基氨基，氧基硫基羰基氨基，-8(〇)2-烷基，-3(0)2-取代的烷基，-S(0)2-環(huán)烷基，-3(〇)2-取代的環(huán)烷基，-3(0)2-烯基，-8(0)2-取代的烯基，-S(0)2-芳基，-S(0)2-取代的芳基，-3(0)2-雜芳基，-S(O:h-取代的雜芳基，-S(0)2-雜環(huán)，-8(〇)2-取代的雜環(huán)，-03(0)2-烷基，-OS(0)2-取代的烷基，-OS(0)2-芳基，-03(0)2-取代的芳基，-08(0)2-雜芳基，-03(0)2-取代的雜芳基，-08(0)2-雜環(huán)，-08(0)2-取代的雜環(huán)，-OS02-NRR,其中R是氳或烷基；-NRS(0)2-烷基，"^1^(0)2-取代的烷基，-忖113(0)2-芳基，~^1^(0)2-取代的芳基，-服8(0)2-雜芳基，-NRS(0)2-取代的雜芳基，-服8(〇)2-雜環(huán)，-NRS(0)2-取代的雜環(huán)，^113(0)2-服-烷基，^1^(0)2-忖11-取代的烷基，-NRS(0)2-NR-芳基，-NRS(O)rNR-取代的芳基，"^118(0)2^11-雜芳基，-NRS(0)2-NR-取代的雜芳基，-NRS(0)2-NR-雜環(huán)，^118(0)2"^11-取代的雜環(huán)，其中R是氬或烷基；單和二-烷基氨基，單和二-(取代的烷基)氨基，單和二-芳氨基，單和二-取代的芳氨基，單和二-雜芳基氨基，單和二-取代的雜芳基氨基，單和二-雜環(huán)氨基，單和二-取代的雜環(huán)氨基，不對稱的二-取代的胺，其具有獨立地選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)的不同取代基，取代的芳基上的氨基由常規(guī)封端基團例如Boc、Cbz、曱?；鹊确舛?，或被-S02NRR取代，其中R是氫或烷基。"雜芳氧基"是指基團-O-雜芳基，"取代的雜芳氧基"是指基團-O-取代的雜芳基。"雜芳烷氧基"是指基團雜芳基-亞烷基-O-。"取代的雜芳烷氧基，，是指取代的雜芳基-亞烷基-O-基團。"雜環(huán)"或"雜環(huán)的"是指具有單環(huán)或多個稠合環(huán)的、1至10個碳原子和1至4個環(huán)內(nèi)雜原子的飽和或不飽和基團，雜原子選自氮、硫或氧，其中，在稠環(huán)系統(tǒng)中，一個或多個環(huán)可以是芳基或雜芳基。"取代的雜環(huán)"是指被1至3個選自下列的取代基取代的雜環(huán)基團氧代(K)),硫代(-S),烷氧基，取代的烷氧基，?；?，酰氨基，硫基羰基氨基，酰氧基，氨基，脒基，烷基脒基，硫基脒基，氨?；?，氨基羰基氨基，氨基硫基羰基氨基，氨基羰基氧基，芳基，取代的芳基，芳氧基，取代的芳氧基，芳氧基芳基，取代的芳氧基芳基，囟素，羥基，氰基，硝基，疑基，羧基烷基，羧基-取代的烷基，羧基-環(huán)烷基，羧基-取代的環(huán)烷基，羧基芳基，羧基-取代的芳基，羧基雜芳基，羧基-取代的雜芳基，羧基雜環(huán)，羧基-取代的雜環(huán)，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，胍基，胍基砜，硫醇，烷硫基，取代的烷硫基，硫基芳基，取代的硫基芳基，硫基環(huán)烷基，取代的硫基環(huán)烷基，硫基雜芳基，取代的硫基雜芳基，硫基雜環(huán)，取代的硫基雜環(huán)，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)，取代的雜環(huán)，環(huán)烷氧基，取代的環(huán)烷氧基，雜芳氧基，取代的雜芳氧基，-C(O)O-芳基，-C(O)O-取代的芳基，雜環(huán)基氧基，取代的雜環(huán)基氧基，氧基羰基34氨基，氧基硫基羰基氨基，-OS(O)r烷基，-03(0)2-取代的烷基，-0S(0)2-芳基，-0S(0)2-取代的芳基，-03(0)2-雜芳基，-08(0)2-取代的雜芳基，-OS(O)r雜環(huán)，-OS(O)r取代的雜環(huán)，-OS02-NRR,其中R是氫或烷基；-NRS(0)2-烷基，-NRS(0)2-取代的烷基，-NRS(OV芳基，-NRS(O)r取代的芳基，-NRS(O;h-雜芳基，^118(0)2-取代的雜芳基，-NRS(0)2-雜環(huán)，誦NRS(0)2-取代的雜環(huán)，曙NRS(0)2畫NR畫烷基，^1^(0)2誦忖11-取代的烷基，-服3(0)2-服-芳基，-NRS(O)rNR-取代的芳基，-NRS(O)rNR-雜芳基，-NRS(0)2-NR-取代的雜芳基，-NRS(0)2-NR-雜環(huán)，-服3(0)2-服-取代的雜環(huán)，其中R是氫或烷基；單和二-烷基氨基，單和二-(取代的烷基)氨基，單和二-芳氨基，單和二-取代的芳氨基，單和二-雜芳基氨基，單和二-取代的雜芳基氨基，單和二-雜環(huán)氨基，單和二-取代的雜環(huán)氨基，不對稱的二-取代的胺，其具有獨立地選自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、雜環(huán)和取代的雜環(huán)和取代的炔基的不同取代基，具有由常規(guī)封端基團例如Boc、Cbz、曱?；鹊确舛说陌被?；或炔基/被下列取代基取代的炔基-SCV烷基，-S02-取代的烷基，-302-烯基，-SCV取代的烯基，-S02-環(huán)烷基，-SCV取代的環(huán)烷基，-S02-芳基，-SCV取代的芳基，-S02-雜芳基，-SCV取代的雜芳基，-S02-雜環(huán)，-S02-取代的雜環(huán)和-S02NRR,其中R是氫或烷基。雜環(huán)和雜芳基的例子包括但不局限于吖丁啶，吡咯，咪唑，吡唑，吡啶，吡溱，嘧啶，噠。秦，中氮茚，異吲咮，p引咮，二氫吲咮，p引哇，噤呤，p奎漆，異喹啉，p查啉，酞n秦，萘基吡啶，會喔啉，喹唑淋，噌啉，蝶啶，呼唑，。卡啉，菲啶，吖啶，菲咯啉，異噻唑，吩。秦，異嗜唑，吩嗜。秦，吩噻。秦，咪唑烷，咪唑啉，哌啶，哌嗪，二氬吲哚，苯鄰二曱酰亞胺，1,2,3,4-四氫異唾啉，4,5,6,7-四氳苯并[b]硫茂，噻唑，四氫瘞唑，碌u茂，苯并[bp危茂，嗎啉并，嗎啉基，錄u嗎啉并，；充嗎啉基(還稱為碌u代嗎啉基)，哌啶基，吡咯烷，四氬呋喃基，等等。"任選取代的，，是指所列舉基團可以是未取代的，或所列舉基團可以是取代的。"可藥用載體"是指用于制備藥物組合物或制劑的載體，其通常是安全的、無毒的，既不是生物學不合需要的也不是其他方面不合需要的，并且包括可為獸用以及人類藥學用途所接受的載體?？伤幱幂d體或賦形劑包括一個或一個以上這種載體。"可藥用陽離子"是指可藥用鹽的陽離子。"可藥用鹽"是指保持化合物的生物有效性和特性的鹽，其不是生物學或其他方面不合需要的鹽。可藥用鹽指的是化合物的可藥用鹽，該鹽源自于本領(lǐng)域眾所周知的各種有機和無機反離子，并且包括例如鈉、鉀、鈣、鎂、銨、四烷基銨等等；當分子包含堿性官能團時，包括有機或無機酸的鹽例如鹽酸鹽、氬溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、醋酸鹽、馬來酸鹽、草酸鹽等等?？伤幱檬碳映甥}可以由無才幾和有枳"喊制備。衍生自無積J威的鹽包括例如鈉、鉀、鋰、銨、釣和鎂鹽。衍生自有機堿的鹽包括但不局限于伯、仲和叔胺的鹽，例如烷基胺，二烷基胺，三烷基胺，取代的烷基胺，二(取代的烷基)胺，三(取代的烷基)胺，烯基胺，二烯基胺，三烯基胺，取代的烯基胺，二(取代的烯基)胺，三(取代的烯基)胺，環(huán)烷基胺，二(環(huán)烷基)胺，三(環(huán)烷基)胺，取代的環(huán)烷基胺，二取代的環(huán)烷基胺，三取代的環(huán)烷基胺，環(huán)烯基胺，二(環(huán)燁基)胺，三(環(huán)烯基)胺，取代的環(huán)烯基胺，二取代的環(huán)烯基胺，三取代的環(huán)烯基胺，芳基胺，二芳基胺，三芳基胺，雜芳基胺，二雜芳基胺，三雜芳基胺，雜環(huán)胺，二雜環(huán)胺，三雜環(huán)胺，混合的二-和三-胺，其中胺上的至少兩個取代基是不同的，并且選自烷基，取代的烷基，烯基，取代的烯基，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，環(huán)烯基，取代的環(huán)烯基，芳基，雜芳基，雜環(huán)，等等。還包括的是其中兩個或三個取代基與氨基氮一起形成雜環(huán)或雜芳基的胺。合適胺的例子包括例如異丙胺，三曱胺，二乙基胺，三(異丙基)胺，三(正丙基)胺，乙醇胺，2-二甲氨基乙醇，氨基丁三醇，賴氨酸，精氨酸，組氨酸，咖啡因，普魯卡因，哈胺(hydrabamine),膽堿，甜菜堿，乙二胺，氨基葡糖，N-烷基葡糖胺，可可堿，噤呤，哌漆，哌啶，嗎啉，N-乙基艱咬，等等。還應該理解，可以使用其它羧酸衍生物，例如羧酸酰胺，包括甲酰胺、低級烷基甲酰胺、二烷基曱酰胺，等等?？伤幱盟峒映甥}可以由無才幾和有才幾酸制備。衍生自無才幾酸的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸鹽，等等。衍生自有機酸的鹽包括乙酸鹽，丙酸鹽，羥基乙酸鹽，丙酮酸鹽，草酸鹽，蘋果酸鹽，丙二酸鹽，琥珀酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽，枸櫞酸鹽，苯曱酸鹽，肉桂酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，對曱苯-磺酸鹽，水楊酸鹽，等等。化合物可以以前體藥物形式起作用。前體藥物是指當這種前體藥物給予溫血動物患者時可在體內(nèi)釋放活性母體藥物的任何化合物。通過修飾所存在的官能團來制備前體藥物，要求該修飾可以體內(nèi)裂解釋放母體化合物。前體藥物包括其中羥基、氨基或巰基與可以體內(nèi)裂解而分別再生成游離羥基、氨基或巰基的任何基團鍵合的化合物。前體藥物的例子包括但不局限于羥基官能團的酯(例如，醋酸酯，甲酸酯和苯曱酸酯衍生物)，氨基曱酸酯(例如，N,N-二曱基氨基-羰基)，等等。"治療有效量"是指化合物或抗體的數(shù)量，當給予哺乳動物用于治療疾病時，該數(shù)量足以實現(xiàn)針對疾病的這種治療。"治療有效量"可根據(jù)化合物、疾病和它的嚴重程度和所治療哺乳動物的年齡、重量等等來變化。化合物的藥學制劑通常，可以利用這些化合物的任何可接受的給藥沖莫式來給予治療有效量的化合物?？梢杂酶鞣N方法給予化合物，包括但不限于口服，腸胃夕卜(例如皮下、硬膜下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、鞘內(nèi)、腹腔內(nèi)、腦內(nèi)、動脈注射或病灶內(nèi)給藥途徑)，局部，鼻內(nèi)，定位(例如手術(shù)應用或手術(shù)用栓劑)，直腸和肺部(例如，氣霧劑、吸入劑或粉末)。相應地，注射和口H組合物形式的這些化合物是有效的?？梢杂幂斠夯蚩焖贊庾⒌姆绞竭B續(xù)地給予化合物?；衔?即活性組分)的實際數(shù)量取決于許多因素，例如疾病(即所治療的病癥或疾病)的嚴重程度，患者的年齡和相對健康情況，所使用化合物的效能，給藥的方法和形式，及其它因素。在細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏校脴藴仕帉W方法，可以確定這種化合物的毒性和治療效能，例如，測定LD5o(種群的50%致命劑量)和ED(種群的50%治療有效劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比例是療效指數(shù)，并且它可以用比值LD5q/ED5Q來表示?？梢栽谂渲朴糜谌祟惖拇髣┝恐惺褂糜杉毎囵B(yǎng)試^r和動物研究獲得的數(shù)據(jù)。這種化合物的劑量在循環(huán)濃度(其包括幾乎沒有毒性的ED^)的范圍之內(nèi)。根據(jù)所使用的劑型和所使用的給藥途徑，劑量可以在該范圍之內(nèi)變化。對于所-使用的任何化合物，可以由細胞培養(yǎng)試驗來開始評估治療有效劑量?？梢杂脛游锬Ｐ蛠砼渲苿┝浚垣@得在細胞培養(yǎng)中測定的循環(huán)血漿濃度范圍，其包括IC50(即，達到癥狀的一半最大抑制的試驗化合物的濃度)。這種信息可用于更準確地測定人類使用劑量。血漿中的水平可以例如用高效液相色i普測定。給予患者的藥物組合物的量將根據(jù)所給予的對象、給藥目的(例如預防或治療)、患者的狀態(tài)、給藥方式等等來變化。在治療應用中，將組合物給予患有疾病的患者，其數(shù)量應足以治愈或至少部分地延滯疾病的癥狀和它的并發(fā)癥。將足夠?qū)崿F(xiàn)該目標的數(shù)量定義為"治療有效量"。有效用于這種用途的數(shù)量取決于所治療的疾病癥狀以及臨床醫(yī)師的判斷，臨床醫(yī)師根據(jù)例如炎癥的嚴重程度、患者的年齡、重量和一般條件等等因素來判斷。給予患者的組合物是上文描述的藥物組合物形式?？梢杂贸Ｒ?guī)殺菌技術(shù)將這些組合物消毒，或可以進行無菌過濾?？梢詫⒌玫降乃芤喊b，用于原態(tài)使用，或凍干，在給藥之前，將凍干的制劑與無菌的含水載體混合?？梢岳斫猓褂媚承┥鲜鲑x形劑、載體或穩(wěn)定劑可以導致藥學鹽的形成?；钚曰衔镌趯拕┝糠秶鷥?nèi)是有效的，并且通常給予藥學或治療有效量?；衔锏闹委焺┝繉⒏鶕?jù)例如進行治療的具體用途、化合物的給藥方式、患者的健康情況和癥狀和處方醫(yī)生的判斷來變化。例如，對于靜脈內(nèi)給藥，劑量典型地在大約每千克體重0.5mg至大約100mg范圍之內(nèi)。由來源于體外或動物才莫型測試系統(tǒng)的劑量反應曲線，可以將有效劑量外延。典型地，臨床醫(yī)師可以給予化合物，直到劑量達到預期效果所需要的劑量為止。當用作藥物時，通常以藥物組合物形式給予化合物。藥物組合物包含作為活性組分的一或多種上面的化合物與一或多種可藥用載體或賦形劑。所使用的賦形劑典型地是適合于給予人類患者或其它哺乳動物的賦形劑。在制備組合物過程中，通常將活性組分與賦形劑混合，用賦形劑稀釋，或密封在載體內(nèi)，這種載體可以是膠嚢、小袋、用紙包裝或其它容器形式。當賦形劑充當稀釋劑時，它可以是固體、半固體或液體物質(zhì)，其起到活性組分的賦形劑、載體或介質(zhì)的作用。由此，組合物可以是下列形式片劑，丸劑，粉末，糖錠，小袋，扁嚢劑，酏劑，懸浮液，乳化液，溶液，漿液，氣霧劑(固體或在液體介質(zhì)中)，油膏(包含例如至多10%重量的活性化合物)，軟和硬月交嚢，栓劑，無菌注射溶液，和無菌包裝的粉末。在制備制劑過程中，可能需要碾磨活性化合物，以便在與其它組分混合之前提供合適的粒徑。如果活性化合物基本上不能溶解，通常將其碾磨至小于200目的粒徑。如果活性化合物基本上是水溶性的，通常利用碾磨來調(diào)節(jié)粒徑，以便在制劑中提供基本上均勻的分布，例如，大約40目。合適賦形劑的一些例子包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇，淀粉，阿拉伯樹膠，磷酸鈣，海藻酸鹽，黃芪膠，凝膠，硅酸鈣，微晶纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素，無菌水，漿液和甲基纖維素。制劑可以另外包含潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；濕潤劑；乳化和懸浮劑；防腐劑，例如曱基和丙基羥基-苯曱酸酯；甜味劑；和調(diào)味劑。可以利用本領(lǐng)域已知的方法配制本發(fā)明的組合物，以便在給予患者之后提供活性組分的快速、持續(xù)或延遲釋放。在藥物組合物和其單位劑型中，根據(jù)具體化合物的具體應用、引入方式、效能和所需要的濃度，可以廣泛地改變或調(diào)節(jié)活性化合物的數(shù)量。術(shù)語"單位劑型"是指適合作為人類患者及其它哺乳動物的單元劑量的物理離散單位，每個單位包含預定數(shù)量的、適于產(chǎn)生所需要的治療效果的活性物質(zhì)與合適藥學賦形劑?？梢栽诤线m惰性載體例如無菌生理鹽溶液中配制化合物，用于腸胃外給藥。所給予的劑量可以通過給藥途徑來確定。利用靜脈內(nèi)制劑來給予治療劑在制藥行業(yè)中是眾所周知的。除了剛好構(gòu)成了其中治療劑是可溶解的這樣的組合物以外，靜脈內(nèi)制劑還應該擁有某些性質(zhì)。例如，制劑應該促進活性組分的總穩(wěn)定性，制劑的制備還應該有成本效益。所有這些因素最終確定了靜脈內(nèi)制劑的總體成功和使用。可以包含在藥學制劑和化合物中的其它輔助添加劑如下溶劑乙醇，丙三醇，丙二醇；穩(wěn)定劑EDTA(乙二胺四乙酸)，枸櫞酸；抗菌防腐劑苯曱醇，對羥基苯曱酸甲酯，對羥苯曱酸丙酯；緩沖劑枸櫞酸/枸一緣酸鈉，酒石酸氪4甲，酒石酸氬鈉，乙酸/乙酸鈉，馬來酸/馬來酸鈉，鄰苯二曱酸氪鈉，磷酸/磷酸二氬鉀，磷酸/磷酸氬二鈉；和張力調(diào)節(jié)劑氯化鈉，甘露糖醇，葡萄糖。需要存在緩沖液，以保持水溶液pH值在大約4至大約8范圍內(nèi)。緩沖系統(tǒng)通常是弱酸和其可溶性鹽的混合物，例如枸櫞酸鈉/枸櫞酸；或二元酸的單陽離子或二陽離子鹽，例如酒石酸氫鉀；酒石酸氬鈉，磷酸/磷酸二氪鉀，和磷酸/磷酸氬二鈉。所使用的緩沖系統(tǒng)的量取決于(l)所需要的pH值；和(2)藥物的量。通常，所使用的緩沖液的量是制劑的緩沖阿倫膦酸鹽的摩爾比(buffer:alendronate)為0.5:1至50:1(其中將緩沖液的摩爾數(shù)視為緩沖液組分例如枸櫞酸鈉和枸櫞酸的混合摩爾數(shù))，以保持pH值在4至8范圍內(nèi)，通常，對存在的藥物使用的緩沖液(混合)摩爾比為1:1至10:1。使用的緩沖液是枸櫞酸鈉/枸櫞酸，使用范圍是每ml5至50mg的枸櫞酸鈉對每ml1至15mg的枸櫞酸，這足以保持組合物的4-6的水溶液pH值。還可以存在緩沖劑，以預防藥物通過可溶解的金屬配合物形式(與可溶解的金屬離子，例如Ca、Mg、Fe、Al、Ba，其可以從玻璃容器或橡皮塞當中浸出，或存在于普通飲用水中)而沉淀出來。該試劑可以充當與藥物的竟爭性絡合劑，并且產(chǎn)生能溶解的金屬配合物，導致不合需要的微粒的存在。另外，可以存在試劑例如氯化鈉，其數(shù)量大約為1-8mg/ml，以便將張力調(diào)節(jié)至與人類血液相同的值，一旦給予靜脈內(nèi)制劑，可以避免紅血球的溶脹或收縮，避免產(chǎn)生不合需要的副作用，例如惡心或腹瀉和可能與血液相關(guān)的病癥。通常，制劑的張力與人類血液的張力(其在282至288mOsm/kg范圍之內(nèi))匹配，通常是285mOsm/kg，其相當于與0.9%氯化鈉溶液相當?shù)臐B透壓力?？梢酝ㄟ^直接靜脈注射(i.v.丸劑)來給予靜脈內(nèi)制劑，或可以加入到合適的輸液溶液例如0.9%氯化鈉注射液或其它相容的輸液溶液中、通過輸液來給予。優(yōu)選，將組合物配制在單位劑型中，每劑量包含大約5到大約100mg活性組分，更通常大約IO到大約30mg。術(shù)語"單位劑型，，是指適合作為人類患者及其它哺乳動物的單元劑量的物理離散單位，每個單位包含預定數(shù)量的、適于產(chǎn)生所需要的治療效果的活性物質(zhì)與合適藥學賦形劑?；钚曰衔镌趯拕┝糠秶鷥?nèi)是有效的，并且通常給予藥學有效量。然而，應該理解，按照有關(guān)情況，包括所治療的病癥、選擇的給藥途徑、40實際給予的化合物、個體患者的年齡、重量和響應、患者癥狀的嚴重程度，等等，實際上給予的化合物的量可以由醫(yī)生確定。為了制備固體組合物例如片劑，將主要的活性組分與藥學賦形劑混合，形成包含本發(fā)明化合物的均勻混合物的固體預制劑組合物。當參照這些預制劑組合物作為均相時，意味著將活性組分均勻地分散在整個組合物中，以使組合物可以容易地被平均再分成有效的單位劑型，例如片劑、丸劑和膠嚢。然后將這種固體預制劑再分成上述類型的單位劑型，包含例如0.1至大約500mg的活性組分?？梢詫⑵瑒┗蛲鑴┻M行涂漬，或進行混配，提供可得到延長作用的優(yōu)點的劑型。例如，片劑或丸劑可以包含內(nèi)部劑量和外部劑量組份，后者是^隻蓋在前者上的包膜形式。可以用腸溶層來將兩個組分分開，腸溶層用來抵御在胃中的崩解，并且可使內(nèi)部組份完好的進入到十二指腸中，或延遲釋放。對于這種腸溶層或涂層，可以使用各種物質(zhì)，這種物質(zhì)包括許多聚合酸和聚合酸與物質(zhì)例如片膠、鯨蠟醇和醋酸纖維素的混合物。液態(tài)劑型(新組合物引入其中，用于口服或注射給藥)包括適合調(diào)，味漿液的水溶液、水或油懸浮液，和用食用油例如棉子油、芝麻油、浙卩子油或花生油調(diào)味的乳化液，以及酏劑和類似的嗜"劑輔料。用于吸入劑或吹入劑的組合物包括溶液和懸浮液(其在可藥用的含水或有機溶劑或其混合物中)和粉末。液體或固體組合物可以包含合適的上文描述的可藥用賦形劑。可以通過利用惰性氣體將藥用溶劑中的組合物霧化?？梢灾苯訌撵F化裝置中呼吸進霧化的溶液，或霧化裝置可以與面具或間歇性正壓呼吸才幾連接?？梢砸院线m的方式、用遞送制劑的裝置給予溶液、懸浮液或粉末組合物。化合物可以以持續(xù)釋放形式給予。緩釋制劑的合適例子包括含有蛋白的固體疏水性聚合物的半滲透性基質(zhì)，該基質(zhì)是成形制品形式，例如膜或微膠嚢。緩釋基質(zhì)的例子包括聚酯，水凝膠(例如，下列中描述的聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)Langer等人，J.AoweJ.7W"&r15:167-277(1981)和Langer,C/zew.rec/z.12:98-105(1982)或聚(乙烯醇))，聚交酯(美國專利No.3,773,919)，L-谷氨酸和Y乙基-L-谷氨酸酯的共聚物(Sidman等人，Ac^owe^22:547-556,1983),不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯(等人，上文)，可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物，例如LUPRONDEPOT(即，由乳酸-羥基乙酸共聚物和亮丙瑞林醋酸鹽組成的注射孩i球體)，和聚D-(-)-3-羥丁酸(EP133,988)?；衔镞€可以以緩釋形式給予，例如長效針劑、植入片制劑或滲透泵，可以將其用這樣的方式進行配制，以使活性組分緩釋。用于緩釋制劑的植入片在本領(lǐng)域是眾所周知的。植入片可以用可生物降解的或不能生物降解的聚合物配制成以下形式，包括但不局限于，微球體、厚片。例如，乳酸和/或羥基乙酸的聚合物形成易蝕的聚合物，宿主對其具有較好的耐受性。下列制劑實施例舉例說明了藥物組合物。制劑實施例1制備包含下列組分的硬明膠膠嚢數(shù)量組分_(mg/膠嚢)活性組分淀粉硬脂酸鎂30.0305.05.0將上述組分混合并填充到硬明膠膠嚢中，數(shù)量340mg。制劑實施例2使用下面組分制備片劑數(shù)量組分_(mg服嚢)活性組分25.0微晶纖維素200.0膠體二氧化硅10.0硬脂酸5.0將組分摻合并壓縮，形成片劑，每個重量240mg。制劑實施例3制備包含下列組分的干粉吸入制劑組分_重量％活性組分5乳糖95將活性混合物與乳糖混合，并將混合物加入到干粉吸入裝置中。制劑實施例4如下制備每個包含30mg活性組分的片劑數(shù)量組分_(mg/膠囊)活性組分30.0mg淀粉45.0mg孩i晶纖維素35.0mg聚乙烯吡咯烷酮(腦7jc溶液)4.0mg羧曱基淀粉鈉4.5mg硬脂酸鎂0.5mg滑石粉1.0mg總計120mg將活性組分、淀粉和纖維素通過20目U.S.篩，并徹底地混合。將聚乙烯-p比咯烷酮溶液與得到的粉末混合，然后將其通過16目U.S.篩。將如此產(chǎn)生的顆粒在50至6(TC干燥，并通過16目U.S.篩。然后將預先通過30目U.S.篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石粉加入到顆粒中，混合之后，將其在壓片機上壓縮，產(chǎn)生片劑，每個重量150mg。制劑實施例5如下制備每個包含40mg藥物的膠嚢數(shù)量組分_(mg服嚢)活性組分40.0mg淀粉硬脂酸鎂總計109.0mg1.0mg150.0mg將活性組分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂摻合，通過20目U.S.篩，并填充到硬明膠膠嚢中，數(shù)量150mg。制劑實施例6如下制備每個包含25mg活性組分的栓劑組分_^±活性組分25mg飽和脂肪酸甘油酯，至2,000mg使活性組分通過60目U.S.篩，并懸浮在預先溶化(使用必需的最小熱量)的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物倒入額定2.0g容量的栓劑模中，使之冷卻。制劑實施例7如下制備每個包含50mg藥物(每5.0ml劑量)的懸浮液組分_數(shù)量活性組分50.0mg黃原(Xanthan)膠4.0mg羧曱基纖維素鈉(11%)微晶纖維素(89%)500mg蔗糖1.75g苯甲酸鈉10.0mg調(diào)味劑和著色劑q.v.純水至5.0ml將藥物、蔗糖和黃原膠摻合，通過10目u.s.篩，而后與預先制備的微晶纖維素和羧曱基纖維素鈉的水溶液混合。將苯甲酸鈉、調(diào)味劑和顏色劑用一些水稀釋，加入，同時攪拌。然后加入足夠的水，產(chǎn)生所需44體泰制劑實施例8如下制備每個包含15mg活性組分的硬凝膠片(mg/膠嚢)組々活性組分淀粉硬脂酸鎂總計15.0mg407.0mg3.0mg425.0mg將活性組分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂摻合，通過20目U.S.篩并填充到硬明膠膠嚢中，數(shù)量560mg。制劑實施例9如下可以制備肩爭樂Jc內(nèi)制劑組分_活性組分等滲鹽水250.0mg1000ml通常將治療化合物的組合物放入容器中，容器具有無菌的入口(例如，容器可以是靜脈內(nèi)溶液袋或具有塞子的管瓶，可以用皮下注射針或類似的銳利工具刺穿)。制劑實施例10如下可以制備局部制劑組分_活性組分1-10g乳化蠟30g液體石蠟20g白色軟石蠟至100g將白色軟石蠟加熱，直到溶化為止?；烊胍后w石蠟和乳化蠟，攪拌，直到溶解為止。加入活性組分，繼續(xù)攪拌，直到分散為止。然后冷卻混合物，直到變成固體為止。制劑實施例11如下可以制備氣霧劑使用下列方法，制備候選化合物的0.5%石友酸氬鈉/鹽水0/v)溶液，濃度30.0mg/mL:A.制備0.5%碳酸氬鈉/鹽水儲備溶液lOO.OmL組分克/100.0mL最后濃度碳酸氬鈉0.5g0.5%鹽水q.s.ad100.0mLq.s.ad100%方法1.將0.5g碳酸氫鈉加入到100mL容量瓶中。2.加入大約90.0mL鹽水，超聲處理，直到溶解為止。3.用鹽水Q.S.至100.0mL,徹底混合。B.30.0mg/mL候選化合物的制備10.0mL組分克/10.0mL最后濃度候選化合物0.300g30.0mg/mL0.5%碳酸氫鈉/鹽水儲備溶液q.s.ad10.0mLq.sad100%方法1.將0.300g候選化合物加入到10.0mL容量瓶中。2.加入大約9.7mL0.5%碳酸氫鈉/鹽水儲備溶液。3.超聲處理，直到候選化合物完全溶解為止。4.用0.5Q/o碳酸氬鈉/鹽水儲備溶液Q.S.至10.0mL,混合。還可以使用透皮遞送裝置("貼片")。這種透皮貼片可用來以可控數(shù)量提供化合物的連續(xù)或不連續(xù)的注入。遞送藥學試劑的透皮貼片的構(gòu)成和《吏用在本領(lǐng)域是眾所周知的。參見，例如，美國專利No.5,023,252,1991年6月11日頒發(fā)，本文引入作為參考?？梢栽O(shè)計這種貼片，使其可以連續(xù)、脈動或按要求遞送藥學試劑。當需要或必須將藥物組合物《1入腦部時，可以使用直接或間接放置技術(shù)。直接技術(shù)通常包括將給藥導管放置到宿主的腦室系統(tǒng)中，以避開血腦屏障。用于將生物因素輸送至身體的特定解剖學區(qū)域的一種這樣的可植入遞送系統(tǒng)描述在美國專利No.5,011,472中，將其結(jié)合到本文中作為參考。間接技術(shù)通常包括配制組合物，通過親水性藥物轉(zhuǎn)化為脂質(zhì)能溶解的藥物，提供藥物潛伏化作用。潛伏化作用通常可通過藥物上存在的羥基、羰基、硫酸基和伯胺基團的封閉來實現(xiàn)，以使藥物更具脂質(zhì)可溶性，并且可容易地輸送穿過血腦屏障?；蛘?，可以通過動脈內(nèi)注入高滲溶液(其可以短暫地打開血腦屏障)來增加親水性藥物的遞送。為了提高血清半衰期，可以將化合物密封、引入脂質(zhì)體的內(nèi)腔中，以膠體形式制備，或可以使用可提供化合物的延長的血清半衰期的其它傳統(tǒng)方法?？墒褂弥苽渲|(zhì)體的各種方法，例如Szoka等人在美國專利Nos.4,235,871、4,501,728和4,837,028中描述的方法，將其每個結(jié)合到本文中作為參考。藥物組合物適合于在各種給藥系統(tǒng)中使用。用于本發(fā)明的合適制劑可在下歹寸中得到Aemz'wg/o's尸/w/7wacew"'ca/iScz'ewces,MacePublishingCompany,Philadelphia,PA,第17版(1985)。應用在治療和預防病毒感染和相關(guān)疾病方面，所^是供的化合物和藥物組合物顯示了生物活性，相應地，在治療哺乳動物(包括人)病毒感染和相關(guān)疾病例如出血熱病毒方面具有應用性。出血熱病毒(HFVs)是RNA病毒，其可引起具有類似的臨床特征的各種疾病綜合癥?？勺鳛闈撛谏镂淦鞯腍FVs包括但不局限于沙粒病毒(Junin,Machupo，Guanarito,Sabia,Lassa,Tacaribe,Pinchinde和vsv),絲狀病毒(埃博拉和馬爾堡病毒)，黃熱病毒(黃熱病，鄂木斯克出血熱和賈薩努爾森林熱病毒)，和布尼亞科病毒(里夫特山谷熱)。按照疾病控制和預防中心的目錄，天然存在的沙粒病毒和潛在i殳計的沙粒病毒被歸入在A類病原體中，因為那些試劑具有造成大量傷亡的最大潛力。危險因素包括到非洲或亞洲旅行，處理動物尸體，與感染動物或人接觸和/或節(jié)肢動物的叮咬。直接與感染的血液和/或身體分泌物接觸之后，沙粒病毒具有高度的感染性。人通過與感染的嚙齒類接觸、感染的節(jié)肢動物的嚇咬、直接接觸動物尸體、吸入感染的嚙齒類動物的排泄物和/或注入纟皮嚙齒類動物排泄物污染的食品而被感染。Tacaribe病毒與蝙蝠有關(guān)。出血熱的空氣傳播是另一種模式，但有點少見。在某些情況下，還發(fā)生于人與人之間的接觸中。所有出血熱顯示出類似的臨床癥狀。然而，通常，臨床表現(xiàn)是非特異性的和可變的。潛伏期大約為7-14天。發(fā)病是逐漸的，伴隨著發(fā)熱和不適，呼吸增塊，相對心動過緩，低血壓，循環(huán)休克，結(jié)膜充血，咽炎，淋巴結(jié)病，腦炎，肌痛，背痛，頭痛和眩暈，以及皮膚感覺過敏。一些感染患者可能不形成出血現(xiàn)象。專門實驗室的診斷方法包括抗原檢測(通過抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)),IgM抗體檢測(通過抗體捕獲酶聯(lián)免疫吸附試-驗)，逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和病毒分離。在急性臨床背景下，抗原;險測(通過酶聯(lián)免疫吸附試驗)和逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈式反應是最有效的診斷技術(shù)。病毒分離具有有限的價值，因為它需要生物安全水平4(BSL-4)實驗室。實施例雖然已經(jīng)努力保證所使用數(shù)字(例如數(shù)量，溫度，等等)的精確性，但還應該考慮一些實驗誤差和偏差。除非另外指明，份數(shù)是重量份數(shù)，分子量是平均分子量，溫度是攝氏度，壓力是常壓或接近常壓。上面沒有規(guī)定的縮寫取其通?？梢越邮艿囊饬x?；衔锏暮铣赏ㄟ^若干相異的合成路線可以容易地制備這些化合物，同時針對化合物制備的容易程度、起始原料的工業(yè)可利用性等等來選擇具體方法。使用下列一般方法和工藝，由容易獲得的起始原料可以制備化合物。應理解，在給予了工藝條件(即，反應溫度，時間，反應物的摩爾比，溶劑，壓力，等等)，還可以使用其它工藝條件，除非另有說明。最佳反應條件可以隨具體反應物或所使用的溶劑而變化，但這種條件可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化過程來確定。另外，對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可能需要常規(guī)保護基，以防止某些官能團進行所不希望的反應。各種官能團的合適保護基以及保護和去保護具體官能團的適宜條件在本領(lǐng)域是眾所周知的。例如，許多保護基描述在下列中T.W.Greene和G.M.Wuts,Gtow/w&Org聽c第二版，Wiley,NewYork,1991,和其中引用的參考文獻。此外，化合物典型地包含一個或多個手性中心。相應地，如果需要的話，可以將這種化合物制備或分離為純立體異構(gòu)體，即作為單一對映體或非對映體，或立體異構(gòu)體富集的混合物。本文包括所有的這種立體異構(gòu)體(和富集混合物)，除非另有陳述?？梢允褂美绫绢I(lǐng)域眾所周知的光學活性的起始原料或立體選擇性試劑來制備純立體異構(gòu)體(或富集混合物)。或者，可以使用例如手性柱色譜、手性拆解試劑等等來分離這種化合物的外消旋混合物。除非另有陳述，產(chǎn)物是R、S對映體的混合物。然而，當需要手性產(chǎn)物時，可以通過純化技術(shù)獲得手性產(chǎn)物，該技術(shù)可以由R、S混合物分離對映體，提供一個或另一個立體異構(gòu)體。這種技術(shù)在本領(lǐng)域是已知的。在另一個實施方案中，可以以前體藥物形式提供化合物，前體藥物可以體內(nèi)轉(zhuǎn)化(例如水解，代謝，等等)為上面的化合物。下列方法用于制備下面列出的化合物。實施例1-12、14-45、47-50按照下面提及的實施例13的一般方法，使用化合物13(a)并使其與下列苯磺酰肼反應，制備實施例1-50的化合物4-苯基苯石黃酰肼，4-叔丁基苯磺酰肼，4-曱基-3,4-二氫-2,7-苯并[l,4]嗜嗪-7-磺?；?，5-(1-二曱基氨基萘基)磺?；?，2,4,6-三曱基苯磺酰肼，3-氯-6-甲氧基苯磧酰肼，2,5-二曱氧基苯磺酰肼，4-(4-[l,2,3]噻二唑基)苯磺酰肼，3-溴苯磺酰肼，4-溴苯磺酰肼，4-曱基苯磺酰肼，4-甲氧基苯磺酰肼，3-氟-4-氯苯磺酰肼，4-三氟甲氧基苯磺酰肼，4-氟苯磺酰肼，3-甲氧基苯石黃酰肼，2-曱基苯磺酰肼，3-三氟曱基苯磺酰肼，2,4-二甲氧基苯磺酰肼，5-氯-l,3-二甲基-lH-吡唑基磺?；拢?-曱基苯磺酰肼，4-三氟曱基苯磺酰肼，2-三氟曱基苯磺酰肼，4-(吡咯烷-l-磺?；?苯磺酰肼，2-氯苯石黃酰肼，5-(2-嗎啉-4-基)吡啶基磺酰基肼，2-三氟曱氧基苯磺酰肼，2,4-二氯苯磺酰肼，苯磺酰肼，3-二氟曱基苯磺酰肼，3-氰基苯磺酰肼，4-氰基苯磺酰肼，5-(2,3-二氫苯并[l,4]二氧六環(huán)基(dioxinyl))磺?；拢?-(4-甲基苯磺酰)-l-甲基肼，3-氟苯磺酰肼，3,4-二氟苯磺酰肼，2,4-二甲基p塞唑-5-基磺?；?，4-乙酰基苯磺酰肼，2,6-二氟苯磺酰肼，2-氟苯磺酰肼，2,5-二氟苯磺酰肼，l-(4-甲基苯磺酰)-l-甲基肼，2,6-二氯苯磺酰肼，2,6-二(三氟曱基)苯磺酰肼，3,5-二甲基異嘈、唑-5-基磺?；?，4-硝基苯磺酰肼，(l-甲基咪唑-4-基)磺酰基肼，和曱基磺酰基肼。實施例13,2-"/,/,3,3，3-f差/^差」-2-yY(二戚f賓差,差X應差J身f瘋麟翔務a.U丄3丄3-六氟-2-異氰酸根合-2-甲基丙烷，化合物13(a)的制備在0°C,將疊氮三甲基硅烷(26mL,180mmol)溶液慢慢地滴加到2,2-二(三氟曱基)丙酰氟(38g,179mmol)和千基三乙基氯化銨(0.065g,0.28mmol)的二甲苯(120mL)溶液中。加入完畢后，將得到的混合物在110。C加熱。4小時之后，在760mmHg下蒸餾混合物，在40-50。C沸騰的餾份包含13(a)。液體產(chǎn)物的產(chǎn)率是60%。b.N-2-n丄l，3丄3-六氟-2-曱基丙基V2-IY4-二氟甲氧基苯基)磺?；鵯肼-l-甲酰胺的制備13(a)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>在室溫下，向4-二氟代苯磺酰氯(60mg，0.25mmol)的三乙胺(25mg，0.25mmol)(在1mL無水THF中)溶液中加入無水肼(15mg,0.26mmol)。在室溫下攪拌2小時之后，加入1,1,1,3,3,3-六氟-2-異氰酸根合-2-甲基丙烷(13a)(54mg，0.26mmol)的lmL二乙醚溶液。在室溫下攪拌反應混合物12小時。真空除去溶劑，對粗品進行反相HPLC,得到產(chǎn)物白色蠟樣固體(83mg,75%)。實施例46iV隱；p，/，/,3，3，3扁六處-2匿f差^差」一2-/^-f差^^」碌魔差J身-/-f差f應發(fā)賴務<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>向上述制備的N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(4-甲基苯基)磺?；鵠肼-l-甲酰胺(100mg,0.254mmol)和碳酸銫(165mg,0.51mmol)的1.6mLNMP溶液中力口入》典曱烷(17.5mL,0.28mmol)。將黃色混合物在室溫下攪拌2小時，而后加入5mL水。用EtOAc提取混合物，用水和鹽水連續(xù)地洗滌有機相。用MgS04千燥有機相，真空濃縮。將粗品在硅月交上進行色譜，用10Q/oEtOAc/己烷。實施例514一苯差喊#_/—P,2,2-三處-f差-7-三戚f差乙4^f^麼^對務向1-苯基哌。秦(0.04mL,0.25mmol)中加入1,1,1,3,3,3-六氟-2-異氰酸根合-2-甲基丙烷(13a)(124mg,0.6mmol)的1mL二乙醚溶液。在緊密封蓋的管瓶中，在室溫下攪拌混合物12小時。對反應混合物進行反相HPLC(CH3CN/H20)，將分離的產(chǎn)物凍干，提供產(chǎn)物白色固體。實施例52-98按照上述實施例51的一般方法，使用化合物13(a)并使其與下列胺或苯胺反應，制備實施例52-98的化合物嗎啉，2-乙酰苯胺，哌啶，3,4,5-三甲氧基苯胺，4-三氟曱基苯胺，4-曱基哌嗪，l-氨基萘，2-氯苯胺，4-苯基哌啶，2-苯基苯胺，2,6-二氟苯胺，2-氨基苯曱酰胺，2-氯-6-氟苯胺，3-三氟甲基苯胺，2-氨基苯磺酰胺，5-氨基(2,2,3,3-四氟-2,3-二氫苯并[1,4]二嗜烷)，3-三氟曱氧基苯胺，4-三氟甲氧基苯胺，4-甲基哌啶，2-氨基萘，2-氟苯胺，2,6-二曱氧基苯胺，4-氨基-3-三氟曱氧基苯甲酸，苯胺，3-氰苯胺，3-甲氧基苯胺，2-(l，l,2,2-四氟乙氧基)苯胺，3-氨基苯磺酰胺，3-氟苯胺，對溴苯胺，2-氰苯胺，4-氰苯胺，3-氨基-2，2-二氟苯并[l,3]二p惡烷，4-氯苯胺，3-曱基苯胺，4-氨基苯磺酰胺，2,6-二溴苯胺，2-曱基苯胺，4-甲基苯胺，吡咯烷，4-氟苯胺，2,4-二溴苯胺，氮雜環(huán)庚烷，4-溴-2-三氟曱氧基苯胺，2-三氟曱氧基苯胺，2-三氟甲基苯胺和2-曱氧基苯胺。<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>N鄰,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2陽[(4-(2-甲基國2陽丙基)-苯磺酰]肼-l-曱酰胺N鄰,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[7-(4-甲基-3,4-二氫-2H-苯并[1，4F惡溱基)磺?；鵠肼-1-甲酰胺_N-2畫(1,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[5-(l-二曱基氨基-萘基)磺?；鵠肼-1-甲酰胺_N-2-(l,l,l,3，3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(2,4,6-三甲基苯基)磺?；鵠肼-l-曱酰胺_N鄰,1,1,3,3,3-六氟-2-甲基丙基)-2-[(3-氯-6-曱氧基苯基)磺?；鵠肼陽l-甲酰胺_N鄰,1,1,3,3,3-六氟-2-曱基丙基)陽2隱[(3,6-二甲氧基苯基)磺?；鵠肼-l-曱酰胺53<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>向酰肼(l叫)的無水THF溶液中加入異氰酸酯(leq)的無水THF溶液。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。使用HPLC分離所需產(chǎn)物，用10-80%乙腈/水(含有0.1%TFA)溶劑系統(tǒng)洗脫。一般方法如下，使用酰基氯作為起始試劑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>向無水肼(l叫)的無水THF溶液中慢慢地加入?；?leq)的無水THF溶液。在室溫下攪拌反應混合物1小時，而后加入異氰酸酯(leq)的無水THF溶液。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。使用HPLC分離所需產(chǎn)物，用10-80%乙腈/水(含有0.1。/。TFA)溶劑系統(tǒng)洗脫。<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>用HPLC純4匕；純度98%。用HPLC純化；純度99%。用HPLC純化；純度97%。用HPLC純化；純度96%。試驗1在該試-驗中，試-驗了化合物庫中的大約400,000個化合物。如下裝配試驗平皿。將Vero細胞以80%融合度涂覆在96孔平皿上。將來源于庫中的試-瞼化合物(每個平皿80個)加入到孔中，最后濃度為5pM。然后72以病毒稀釋物形式加入Tacaribe病毒(TRVL11573)，其在5天之后將會導致90%CPE(預先確定為病毒原料的800倍稀釋物；多重性感染[MOI]大約為0.001)。將平皿在37。C和5。/。C02中培養(yǎng)5天，然后用5%戊二醛固定，用0.1%龍膽紫染色。使用MolecularDevicesVersaMax可調(diào)微板讀數(shù)器，用OD57。光譜定量病毒CPE的程度。每個化合物的抑制活性是通過從病毒感染細胞孔的平均OD57()中減去試驗化合物孔的OD57G,然后除以模擬感染細胞孔的平均ODs7o來計算的。結(jié)果表示化合物所賦予的抗Tacaribe病毒CPE活性的保護百分數(shù)。在該試馬全中，將"命中物(Hits)"定義為在試驗濃度下，被抑制的病毒引起的CPE大于50y。的化合物。在Tacaribe病毒HTS階段篩選的大約400,000個化合物中，確定2,347個命中物(0.58%命中率)。將優(yōu)質(zhì)命中物定義為抑制劑化合物(命中物)，其顯示可接受的化學結(jié)構(gòu)、抗病毒效能和選才奪性和抗病毒活性i普。具體地i兌，4十對四個標準評價HTS試驗(如上所述)中確定為命中物的化合物(i)化學易處理性，(ii)抑制效能，(iii)抑制選擇性，和，(iv)抗病毒特異性?；贖TS參數(shù)，所有的命中物具有〈5pM的EC5o值。對于化學易處理性，可以一見覺上枱r驗滿足這種初始標準的化合物的化學結(jié)構(gòu)。將化學上易處理的化合物定義為使用合理的化學方法容易合成的實體，并且其擁有化學上穩(wěn)定的官能團和(潛在的)藥物性質(zhì)?？梢栽u價通過這種藥物化學篩選的命中物的抑制效能。由化合物抑制活性圖(典型地通過8個化合物濃度(50,15,5，1.5,0.5,0.15，0.05和0.015inM))測定EC5。值。為了評價命中物(hit)是否是選擇性的抑制劑，使用標準細胞增殖試驗測定其對細胞功能的效果。使用基于四唑鏃的比色法測定50。/。細胞毒性濃度(CC50),該比色法測定代謝活性細胞中3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-聯(lián)苯四唑像溴化物(MTT)通過線粒體酶原位還原為不能溶解的藍色甲臘(formazane)晶體。光譜定量溶解的晶體。使用EC5o值和CC5o值，計算選擇性系數(shù)(SI)(SI=CC5。/EC5Q)。進一步研究具有至少IO的SI值的命中物。通過化合物抗許多相關(guān)和不相關(guān)病毒的試驗，測定命中化合物所顯示的特異抗病毒活性。針對各種無關(guān)的DNA(HSV,CMV，牛痘病毒)和RNA(RSV，輪狀病毒，里夫特山谷熱，埃博拉病毒，埃博拉GP-假模標本，LassaGP-假模標本，HIVenv-假模標本)病毒來試驗化合物?？梢赃x擇進一步開發(fā)的化合物是那些針對所選擇的原始靶向病毒具有選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>越特性空間的寬的覆蓋范圍，包括下列化學描述信息辛醇/水分配系數(shù)的計算對數(shù)(ClogP),極性(水可及表面區(qū)域(PSA))，球狀(三維結(jié)構(gòu))和分子量(平均值394.5道爾頓)。細月包和病毒使Vero(非洲綠猴腎臟皮膜，ATCC弁CCL-81)細胞在補充有2mML-谷酰胺、25jug/ml慶大霉素和10。/。熱失活的胎兒牛血清(FBS)的Eagle's極限必需培養(yǎng)基(MEM,Gibco)中生長。為了感染介質(zhì)(IM),將血清濃度降低至2%。將HEp-2細胞(人類喉頭狀癌瘤皮膜；ATCC弁CCL-23)在包含10°/。熱失活的FBS和1%青霉素/鏈霉素的MEM中培養(yǎng)。將MRC-5細胞(人正常的肺纖維母細胞；ATCC弁CCL-171)在MEM中培養(yǎng)，MEM包含10%熱失活的FBS、1%青霉素/鏈霉素、1%L-谷酰胺(Invitrogen25030-081)、P/。非必要的氨基酸(Invitrogen#11140-050)、1%丙酮酸鈉(Invitrogen#11360-070)和2%碳酸氫鈉。將MA104細胞(非洲綠猴腎臟皮膜，ATCCCRL-2378.1)在MEM中培養(yǎng)，MEM含有1%青霉素/鏈霉素、1%L-谷酰胺、1%非必要的氨基酸、1%丙酮酸鈉和2%石友酸氬鈉和62.5ug/ml胰蛋白酶，并且在病毒感染期間沒有血清。所有的細月包系在37。C和5。/。C02中培養(yǎng)。從ATCC獲得呼吸道合胞病毒(RSV;A分離)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV;ArmstrongE350分離)、巨細胞病毒(CMV;AD-169分離)、單純皰滲病毒l(HSV-l;KOS分離)、牛痘病毒(StrainWR)、Tacaribe病毒(strainTRVL11573)和輪狀病毒(strainWA)(分別為弁VR曙1422,#VR-1540,#VR-134，#VR-538,#VR-1493，#VR-1354,#VR-114和弁VR畫2018)。從Dr.RobertTesh(在UniversityofTexasMedicalBranch(Galveston,TX))處獲得Candid1和AmapariBeAn70563。合作者在USAMRIID(FortDetrick,MD)進行了用BSL4病毒(Lassa,Machupo，Guanarito和Juni'n)以及嚴重的急性呼吸性綜合癥(與冠狀病毒相關(guān))(SARS-CoV)進行的工作。特異性篩選的抗病毒試驗細胞病變("CPE")試驗、病毒斑塊減少試驗和ELISA病毒CPE試-驗用于評價化合物針對下列病毒的抗病毒效果Tacaribe病毒(Vero細月包)，Candid-1疫苗病毒(Vero細月包)，Amapari病毒(Vero細胞)，SARS陽CoV(Vero細胞)，HSV隱l(Vero細胞)，RSV(HEp-2細胞)，牛痘病毒(Vero細胞)和輪狀病毒(MA104)。酶聯(lián)免疫吸附試-驗("ELISA")用于評價化合物針對CMV(MRC-5細胞)和LCMV(Vero細胞)的抗病毒效果。所有這些試驗是在包含2%熱失活的FBS的合適介質(zhì)中進行的。在使用之前24小時，播種96孔細胞培養(yǎng)平皿，每個孑L1.5X104個(Vero)、2.2X104個(HEp-2和MA104)和4.5X104個(MRC-5)細胞。對于化合物敏感性試驗，將化合物(用100%DMSO溶解)加入到雙倍孔中，最后濃度為50、15.8、5、1.6、0.5、0.16、0.05、0.016和0juM。在試^瞼中，DMSO的最后濃度是0.5%。在單獨實^險中滴定病毒原料，以測定3天(HSV-1，輪狀病毒和牛痘)或4天(SARS-CoV,RSV,Tacaribe病毒，Candid1疫苗病毒和Amapari病毒)之后導致細胞單層90%破壞的濃度(CPE試驗)，或3天(LCMV)或4天(CMV)之后產(chǎn)生2.5的ELISA信號(在650nm的吸光度(0065()))的濃度。將這些預先形成的病毒稀釋物加入到包含化合物的系列稀釋物的孔中。在每個試驗平皿上包括未感染的細胞和接受病毒的細胞(沒有化合物)。另外，在每個試驗平亞上包含參比藥劑(當合適時)(更昔洛韋針對HSV-1和CMV,Sigma#G2536;利巴韋林針對LCMV和RSV,Sigma#R9644;利福平針對牛痘病毒，Sigma弁R3501)。將平皿在37。C和5%C〇2中培養(yǎng)3天(HSV-1,輪狀病毒，LCMV，牛痘病毒)或4天(Tacaribe病毒，Amapari病毒，Candid1病毒，SARS-CoV,RSV和CMV)。將HSV-1、SARS-CoV、4侖狀病毒、牛痘病毒、RSV、Tacaribe病毒、Amapari病毒、Candid1疫苗病毒感染的平皿用龍膽紫染色，同時將感染上CMV和LCMV的平皿進4亍處理，用于ELISA分析。為了龍膽紫染色，用5%戊二醛固定平皿，用0.1%龍膽紫染色。沖洗和干燥之后，使用微板讀數(shù)器測定570nm處的吸光度(OD570)。為了ELISA分析，/人LCMV和CMV感染的平皿中除去介質(zhì)，在室溫下用100。/。曱醇(Fisher,CAS#67-56-1,HPLC等級)固定細胞20分鐘。除去曱醇溶液，用PBS洗滌平皿3次。在37。C加入130juLSuperblock封閉緩沖液(Pierce#37515)，保持1小時，將非特異性的結(jié)合位點封閉。除去封閉劑，用PBS將孔洗滌3次。加入30juLLCMV核內(nèi)蛋白(NP)特定單克隆抗體(JuanCarlosdelaTorre,TheScrippsResearchInstitute,LaJollaCA的慷慨捐贈)的1:20稀釋物或30|iLCMV(蛋白52和獨特長基因44產(chǎn)物)特定混合單克隆抗體(Dako,弁M0854)的1:200稀釋物(在Superblock封閉緩沖液中，包含0.1%Tween-20)。在37。C培養(yǎng)1小時之后，除去原始抗體溶液，用包含0.P/。Tween-20的PBS將孔洗滌3次。將40|uL山羊抗小鼠辣根過氧化酶共軛的單克隆抗體(Bio-Rad#172-1011)(在包含0.1%Tween-20的Superblock封閉緩沖液中稀釋至1:4000(LCMV)或1:400(CMV))加入到孔中,在37。C將平皿培養(yǎng)1小時。除去二次抗體溶液，用PBS將孔洗滌5次。通過加入130]uL的3,3',5,5-四甲基聯(lián)苯胺基質(zhì)(Sigma#T0440)，將試驗進行15分鐘，以定量過氧化物酶活性。使用MolecularDevicesKinetic微板讀數(shù)器(帶有650nm濾光鏡)，測定所得到反應產(chǎn)物的OD650。用三個方法評價針對Tacaribe病毒的抗病毒活性CPE試馬全，斑塊減少，和病毒產(chǎn)量抑制試驗。對于HTSCPE試驗，將Vero細胞以800/0融合度涂覆在96孔平亞上。將來源于庫中的試驗化合物(每個平皿80個)加入到孔中，最后濃度為5juM。然后以病毒稀釋物形式加入Tacaribe病毒，其在5天之后將會導致90%CPE(多重性感染[MOI]大約為0.001)。將平亞在37。C和5%C02中培養(yǎng)5天，然后用5%戊二醛固定，用0.1%龍膽紫染色。使用Envision微板讀數(shù)器，用OD57。光譜定量病毒CPE的程度。每個化合物的抑制活性是通過從病毒感染細胞孔的平均OD570中減去試驗化合物孔的OD57。，然后除以才莫擬感染細胞孔的平均OD57o來計算的。結(jié)果表示每個化合物所賦予的抗Tacaribe病毒CPE活性的百分數(shù)。在該試驗中，將"命中物"定義為在試驗濃度(5jiM)下，可抑制病毒引起的CPE大于50%的化合物?？梢赃M一步評價擁有化學易處理性的命中物的抑制效能。由化合物抑制活性圖(在通過8個化合物濃度(50,15,5,1.5，0.5,0.15,0.05和0.015juM)的CPE試驗之后)測定抑制濃度50。/。(EC50)值。所有測定都以雙f分進4t。在斑塊減少試驗中，在不存在或存在各種濃度化合物的條件下，使生長在6孔平亞中的單層Vero細胞感染大約50PFU/孔。在37。C進行病毒吸附1小時之后，將殘余的接種物用1%seaplaque瓊膠糖(在去離子水中)和2xMEM的50:50混合物替代。在WC培養(yǎng)5-7天之后，統(tǒng)計斑塊。以減少病毒斑塊數(shù)量50%所要求的化合物濃度形式來計算EC5Q。在BSL4條件下(在USAMRIID),斑塊減少試-驗(用Lassa、Machupo、Guananto和Junfn病毒)如下進行將200PFU的每個病毒用于感染Vero細胞。病毒吸附之后，將細胞單層沖洗，并用包含1%瓊膠糖完全培養(yǎng)基(無試驗化合物或用15juM至0.05|uM的不同濃度范圍的試驗化合物)覆蓋。在37。C培養(yǎng)5天之后，將單層用中性紅染色，統(tǒng)計斑塊的數(shù)目。在病毒產(chǎn)量減少試驗中，在不同濃度化合物的存在下(每個濃度兩個孔)，使生長在24孔平皿中的Vero細胞感染Tacaribe病毒(O.l的多重性感染("MOI"))。在WC培養(yǎng)48小時之后，采集病毒，用Vero細胞中形成的噬斑測定病毒產(chǎn)量。按照如上所述計算EC5。值，進行類似的計算，以測定EC9o和EC99。細胞毒性試-驗利用細胞增殖試驗測定細胞壽命，以測定化合物對細胞功能的影響，以便可以計算50。/。細胞毒性濃度(CC5o);將該值與ECso值的比值稱為選擇性系數(shù)(S丄二CC5o/EC5())。兩個類型的試^r用于測定細胞毒性。一個是比色法，其測定3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-聯(lián)苯-四唑镲溴化物(MTT)的減少，另一個^f吏用熒光測定法，測定刃天青(阿爾瑪藍)的減少。兩個方法產(chǎn)生類似的數(shù)據(jù)。使96孔平i中的融合培養(yǎng)物接觸不同濃度的化合物，每個濃度兩個孔，使用與抗病毒試驗中所使用條件相當?shù)臈l件。藥物化學用TacaribeHTS確定一些有效的化合物，并分成若干組的結(jié)構(gòu)類型?；诳共《净钚院突瘜W易處理性，選擇一個組的化合物，用ST-336(FW二407.3)代表原型，用于進一步的研制。通過ST-336的逆向合成分析，可以確定，可以用單一合成步驟、通過異氰酸酯與?；ｋ碌幕旌蟻砑兄苽漕愃莆锏膸臁Ｊ褂眠@種化學過程，制備165個類似物，并且將最有效的進行了體外代謝檢驗。加入時間實-驗設(shè)計該實驗，以表征抗病毒化合物的作用機理。使Vero細胞生長在24孔培養(yǎng)亞中。當細胞達到70-80%融合時，除去介質(zhì)，并用感染介質(zhì)代替。用Tacaribe病毒感染細胞(MOI=0.1)。吸收1小時之后，除去病毒接種物，用新的感染介質(zhì)代替。在感染之前l(fā)小時、在感染的時爿(i美或在感染后的特定時間(^人1至20hp丄)，用3juMST-336處理雙孔。只用藥物賦形劑(DMSO)處理對照物感染的細I包培養(yǎng)物。^J史后1小時，除去ST-336，用冷PBS-M洗滌單層兩次，并用新的感染介質(zhì)代替。在感染后24h采集細胞，并按照如上所述進行滴定。在單獨的實-瞼中，使涂覆在6孑L盤中的Vero細胞感染Tacaribe病毒(M0I=4)。吸收進行1小時。在感染之前1小時、在感染期間和在感染之后l小時，加入3yM的ST-336,保持1小時。加入藥物和病毒感染之后，用完全培養(yǎng)基洗滌單層3次。最后的藥物加入之后四個小時，用1%瓊膠糖(沒有化合物)覆蓋單層，直到斑塊形成為止。感染后5至7天，固定單層，進行龍膽紫染色，統(tǒng)計斑塊數(shù)量?；衔锱c完整病毒結(jié)合的試驗設(shè)計該實驗，以試驗ST-336針對Tacaribe病毒的結(jié)合/融合抑制特性。使Vero細胞生長在含有2%胎牛血清的MEM中。對于該實-驗，使細胞在24孔培養(yǎng)亞中生長至70-80%的融合度。在一組管中，用1%DMSO處理Tacaribe病毒(4000pfu),在感染介質(zhì)中連續(xù)地稀l奪十倍，并用特定濃度的ST隱336(400pfu+0.5|uMST-336,40pfu+0.05juMST-336)或只用DMSO(400pfu或40pfu+DMSO)處理。在另一組管中，用5|uMST-336處理Tacaribe病毒(4000pfu)，然后在感染介質(zhì)中連續(xù)稀釋十倍。將懸浮液涂覆在孔中，表面吸收一小時之后，除去接種物，用0.5%Seaplaque瓊膠糖(在MEM中)覆蓋。在37。C培養(yǎng)平皿，直到在DMSO對照孔中觀察到細胞病變?yōu)橹?。將細胞?%戊二醛固定，用0.1%龍膽紫染色，4吏斑塊可以看見。在病毒體上試-瞼ST-336與預融合F-蛋白的結(jié)合特性所使用的另一個試驗是滲析實驗。用5juMST-336或0.5%DMSO培養(yǎng)純化的Tacaribe病毒(IOOOpfu)。將懸浮液在滲析搶中、在4。C滲析過夜。滲析后24小時，在Vero細胞上滴定病毒懸浮液。表面吸收一'J、時后，除去接種物，應用0.5%Seaplaque瓊膠糖(在MEM中)覆蓋。在37。C培養(yǎng)平皿，直到觀察到細胞病變?yōu)橹?。將細胞?%戊二醛固定，用0.1%龍膽紫染色。為了確定在滲析的病毒-藥物樣品中不存在游離藥物，在感染時，在滲析混合物中刺入病毒，形成如上所述的斑塊。耐藥變體病毒的分離開始，將WTTacaribe病毒的單個斑塊分離。為了該斑塊-純化，在37°C,使6孔平皿中的Vero細胞感染50pfu/孔的WTTacaribe病毒1小時。在病毒吸附之后，除去接種物，用0.5%Seaplaque瓊l交糖(在MEM中)覆蓋每個孔，在37。C培養(yǎng)，直到看得見斑塊為止(5-7天)。采集四個斑塊，在24孔平亞中、在Vero細胞中進一步的擴大，直到形成CPE為止(5-7天)。通過將細胞敲碎到介質(zhì)中來采集病毒感染的細胞提取物，而后收集在1.5ml微量離心管中。在150mm平皿中，將純化分離的每個斑塊進一步的擴大，而后將來源于一個病毒斑塊的每個病毒原料進行滴定。為了分離耐化合物的Tacaribe病毒變體，在所描述的3|uMST-336的存在下，將純化分離的每個野生型斑塊進行滴定。在包含3juMST-336的介質(zhì)中，使6孔平i中的Vero細胞感染104-106pfu/孔(1小時)，然后用0.5%seaplaque瓊膠糖(在MEM中，包含3nMST-336)覆蓋細胞，培養(yǎng)，直到斑塊形成為止。采集斑塊，用于感染24孔平皿(沒有化合物)中的Vero細胞。當CPE形成時，采集感染的孔。然后在96孔平jei上以0.51og稀釋物滴定每個抗藥的分離物，從25juL純病毒原料開始，沒有化合物以及具有1iliM和3|uMST-336。使每個突變抹通過若干斑塊純化的圓，而后制備最終的病毒原料。定序從每一TacaribeWT分離物(1-4)和四個耐藥分離物(DR#1-4)中提取RNA,并用于逆轉(zhuǎn)錄PCR。將對于GPC(Tac-正向5，GCCTAACTGAACCAGGTGAATC(SEQIDNO:l)和Tac-反向5，TAAGACTTCCGCACCACAGG(SEQIDNO:2))特異性的引物(得自于Tacaribe)用于擴增和排序。溶解性兩個試-瞼用于評價化合物溶解性在細胞培養(yǎng)物介質(zhì)(有和沒有各種濃度的血清)中的溶解性，和在含水緩沖液(pH7.4)中的溶解性。將溶液攪拌過夜，而后通過具有30,000MW截留分子量的AmiconCentrifreeYM-30柱過濾，以除去潛在沉淀的化合物和與蛋白結(jié)合的化合物。通過LC/MS或UV光譜法定量化合物。穩(wěn)定性使用均化肝(得自于各種物種)的9000xg上清液(S9)作為氧化共軛酶(例如細胞色素P450,UdP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶)的來源(對于大部分藥物，其是已知的生物轉(zhuǎn)化的原始途徑)，通過吸收系統(tǒng)(Exton，PA)測定體外代謝穩(wěn)定性。利用質(zhì)譜，以S9餾份中母體化合物對培養(yǎng)時間的持久性形式來測定代謝穩(wěn)定性。簡要地說，從Xenotech(Lenexa，KS)獲得人、大鼠、小鼠和豚鼠S9餾份。制備反應混合物(減去輔因子的雞尾酒混合物)(lmg/ml肝S9餾份，1mMNADPH,1mMUDPGA,lmMPAPS,lmMGSH,100mM磷酸鉀(pH7.4),10mM氯化鎂，lO]uM試馬全制品)，并在37。C平衡3分鐘。將等份的反應混合物作為陰性對照物。通過向反應混合物中只加入輔因子混合物來引發(fā)反應，而后在37。C、在搖動水浴中培養(yǎng)反應混合物和陰性對照物。在0、15、30和60分鐘一式三份地取出等分樣品(100pl),并與900jli1冰冷的50/50乙腈/dH20合并，以終止反應。通過LC/MS/MS分析每個樣品。將百分數(shù)殘留的自然對數(shù)對時間作圖。線型擬合法用于測定比例常數(shù)。當試驗制品的殘余百分數(shù)小于10%時，截斷擬合。測定與試^^和對照制品的消失相關(guān)的消除半衰期，以比較它們的相對代謝穩(wěn)定性?；蚨拘钥疾煨缘募毦T變性試驗(艾姆斯試驗)用于評價化合物基因毒性的潛力。在有和沒有預先描述的代謝活化(氯化三聯(lián)苯誘導的大鼠肝臟S9)的條件下，該試-驗爿使用鼠傷寒沙門氏菌測交品系TA7007和TA7006(單基對突變)和TA98(移碼突變)。32大鼠和仔鼠中的藥物動力學("PK")評價在SpragueDawley大鼠中(用在24小時周期獲取的血清樣品進行單一劑量研究)，進行所選擇化合物的口服藥物動力學分析。為了仔鼠PK評價，將4天大的BALB/c小鼠腹膜內(nèi)給藥(IP)，在24小時周期中獲取血清樣品。在1.5ml離心管中，將50jul血漿等分樣品與150jli1的100%乙腈(包含內(nèi)標(100ng/ml甲苯磺丁脲))混合。在13,000rpm下將樣品旋轉(zhuǎn)和離心十分鐘。然后將得到的上清液的80nl等分樣品轉(zhuǎn)入HPLC,用于管瓶分析。通過LC/MS/MS測定每個化合物的血漿水平，使用WinNolin軟件測定藥物動力學參數(shù)。仔鼠模型效果為了測定ST-294的耐受性，將新生的(4天大)BALB/c小鼠給予IP劑量O、10、25或100mg/kg/天的ST-294,給予5天，每天評價臨床狀太心■>為了試驗ST-294在Tacaribe仔鼠模型中的效果，通過IP注射，用3xl03PFU(30XLD50)Tacaribe病毒(每個小鼠)激發(fā)四天大的BALB/c小鼠(每個給藥組8只)，死亡作為終點。用安慰劑(賦形劑)、利巴韋林(MPBiomedical)(IP給予25mg/kg,—天一次，持續(xù)10天)或ST-294(IP給予100mg/kg,—天一次，或50mg/kg,每天兩次，持續(xù)10天)治療小鼠。在整個研究中，每天監(jiān)控小鼠，每隔一天稱重。通過C02窒息使顯示發(fā)病跡象的任何小鼠安樂死。所有的動物研究符合實驗動物研究學會的要求，并通過合適的IACUC評審來批準。結(jié)果在Tacaribe及其它BSL4NWA之間的同源性目前有23個已經(jīng)辨別的沙粒病毒科的病毒物種4。將這些病毒區(qū)分為兩個組舊世界(Lassa/LCM)沙粒病毒和新世界(Tacaribe復合物)組。新世界Tacaribe復合物包括3個系統(tǒng)發(fā)育譜系，稱為進化枝A、B和C。進化枝B包括原型Tacaribe病毒，Amapari病毒和四個南美A類病原體(Junin,Machupo,Guanarito和Sabi&)。只于于戶斤有四個病毒蛋白的氨基酸水平，Tacaribe病毒與Junfn病毒相同67%至78%23?？尚诺腁類沙粒病毒的研究工作需要最高的實驗室安全性(BSL-4),因此存在顯著的后勤和安全問題。由于Tacaribe病毒與A類病原體密切相關(guān)，因此將其選作替代品BSL2NWA,用于HTS試驗的開展，以篩選病毒復制的抑制劑。TacaribeHTS試驗由于Tacaribe病毒在細胞培養(yǎng)物中生長較好，并且可引起純病毒誘導的細胞病變(CPE),因此在96孔平皿中進行實用的HTSCPE試驗。該CPE試驗是在病毒生命周期中計算化合物的選擇性系數(shù)和鑒別任何實質(zhì)步驟的抑制劑的完全細胞試驗。在Tacaribe病毒HTS試驗中篩選的400,000個化合物中，確定2,347個命中物(0.58%hit比率)。所有這些命中物具有《5juM的EC5o值。然后，基于下列四個標準來定性2,347個命中物i)化學易處理性，ii)抑制效能，iii)抑制選擇性，和，iv)抗病毒特異性。將化學上易處理的化合物定義為使用合理的化學方法容易合成的實體，并且其擁有化學上穩(wěn)定的官能團和潛在的藥物性質(zhì)?？梢栽u價通過這種藥物化學篩選的命中物的抑制效能。測定EC5o值、CCso值和選擇性系數(shù)(SI),以評價命中物是否是選擇性的抑制劑。進一步研究具有至少10的SI值的命中物。在確定的2,347個命中物當中，36個化合物顯示了優(yōu)質(zhì)命中物的所有特征。這些化合物是化學上易處理的，具有《5juM的EC5o值和》10的SI值。在36個優(yōu)質(zhì)命中物之中，有若干結(jié)構(gòu)類型的組。選擇一個結(jié)構(gòu)類型用于進一步的研究，ST-336是該系列的代表性的原型。ST-336是407.33dalton化合物，它的結(jié)構(gòu)示于圖1中。表l:ST-336的特異性病毒(試驗)"M、NWATacaribe(CPE)EC500.055(CPE)EC900.125(病毒產(chǎn)量)EC900.068(病毒產(chǎn)量)EC990.085(斑塊減少)EC500.100Candidl(CPE)EC50O雄Amapari(CPE)EC50>20*Machupo(斑塊減少)EC500.150Guanarito(斑塊減少)EC500.300Junin(斑塊減少)EC500,150OWALassa(斑塊減少)EC50>20LCMV咖sa)EC50>20結(jié)果表示至少兩個獨立測定的平均值*20jaM表示化合物溶解性的P艮度ST-336的特征如表1所示，ST^36針對Tacanbe病毒以及A類NWA具有亞微摩爾效能、良好的選4奪性和抗病毒特異性。在針對Tacaribe病毒的病毒產(chǎn)量降低試驗中，ST-336的評價分別產(chǎn)生0.068mM和0.085juM的EC90和EC99值。在Vero細胞上，ST-336的CC5o值〉20mM,其表示該化合物在細胞培養(yǎng)介質(zhì)中的溶解度極限，其選擇性系數(shù)>363。在多細胞系上試驗ST-336針對Tacaribe病毒的活性，所有的EC5o值與Vero細胞上所得到的相似(未顯示數(shù)據(jù))。當針對若干沙粒病毒試^r時，ST-336針對OWA(LCM病毒或真實的Lassa病毒)沒有顯示抑制活性(表1)。該藥物針對NWAAmapari病毒也缺少活性?？紤]到Amapari和Tacaribe病毒之間的緊密的種系發(fā)生關(guān)系，這是令人驚訝的結(jié)果。23'19這種差異在所有NWA的GP2定序后在后面進行討論。然而，重要的是，ST-336對Juni'n病毒的疫苗抹(Candidl)以及Machupo、Guanarito牙口Juni'n顯示了有效的抗病毒活性(表l)。表2:ST-336的選擇性<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>結(jié)果表示至少兩個獨立的測定的平均值*20jaM代表化合物溶解度限度通過4十對許多相關(guān)和不相關(guān)病毒的試^險，測定ST-336所顯示的抗病毒活性的特異性。如表2所示，ST-336對各種無關(guān)的DNA(HSV，CMV,牛痘病毒)和RNA(RSV,輪狀病毒，SARS和埃博拉病毒)病毒顯示沒有活性。ST-336的作用才幾理進4亍加入實一驗的單周期(24h)時間，以測定病毒復制周期期間，ST-336發(fā)揮其抗病毒活性的時間。在感染前或后的不同時間將化合物加85入到Vero細月包培養(yǎng)物中之后，測定ST-336對Tacaribe病毒產(chǎn)量的歲支果。在感染之前1小時(-lh)、在病毒吸附(Oh)和在感染之后幾次，加入ST-336。在順序加入之后，在實驗的整個時間內(nèi)，使藥物保持在受感染的細胞培養(yǎng)物上。只用藥物賦形劑(DMSO)處理對照物感染的培養(yǎng)物。感染后24小時，收集樣品，通過噬菌斑法測定病毒產(chǎn)量。如圖2A所示，只是在病毒生命周期的很早階段，ST-336發(fā)揮其抑制效果。在感染后的任何時間點加入ST-336對病毒產(chǎn)量沒有影響。這些數(shù)據(jù)揭示，ST-336是病毒復制的初期階段抑制劑。在第二個類型的時間加入實驗中，這些結(jié)果得到了證明。在該實驗中，在感染之前1小時(-lh)、在感染期間(O)和在感染后1小時(+lh)將化合物刺入培養(yǎng)基中僅僅1小時，而后除去。洗滌培養(yǎng)物，除去任何殘余化合物，用瓊膠糖覆蓋。然后在感染后第5天測定病毒斑塊數(shù)量。圖2B中的數(shù)據(jù)表明，雖然在病毒吸附前、后1小時加入化合物的時候，對噬斑形成沒有影響，但在lh吸附/進入過程期間加入化合物，Tacaribe噬斑形成顯著地減少。這些數(shù)據(jù)與ST-336是吸附/進入抑制劑相一致。如果ST-336與完整病毒體結(jié)合，采用兩個方法來測定。在第一個實驗中，用ST-336或DMSO培養(yǎng)純化的Tacaribe病毒的1000PFU，并在4。C滲析過夜，滴定。雖然滲析袋(最初用藥物培養(yǎng))中沒有病毒^f皮滴定，^f旦超過300PFU的病毒/人DMSO賦形劑滲才斤袋中一皮滴定(數(shù)據(jù)未顯示)。通過病毒失活加上藥物滲析混合物(抑制新加入的Tacaribe病毒(！300PFU))來測定，在最初包含5juM藥物的滲析袋中沒有生物學檢測到的藥物。這些數(shù)據(jù)揭示，ST-336與完整病毒體結(jié)合，具有非常緩慢的離解常數(shù)。在第二個實-驗(圖3)中，在試管中用5mMST-336或DMSO培養(yǎng)Tacaribe病毒。進行系列1:10稀釋，對于一些樣品，以規(guī)定的稀釋物形式(表示樣品稀釋之后所期望的藥物濃度)加入ST-336。當用介質(zhì)稀釋病毒和化合物時，化合物濃度可以達到?jīng)]有抑制效果的濃度，除非化合物能夠與病毒結(jié)合。在初始管中，將沒有化合物的試驗病毒也在介質(zhì)中稀釋，并將與在病毒和化合物一起稀釋的管中所得到濃度相當?shù)幕衔餄舛燃尤氲矫總€病毒稀釋物中。在Vero細胞上的滴定表明，在初始管中過量存在的ST-336通過特定的病毒結(jié)合轉(zhuǎn)入兩個另外的1:10稀釋物中，并抑制病毒感染。然而，當在具體稀釋病毒中加入藥物時，與用藥物稀釋病毒相比，病毒沒有^皮抑制到用藥稀釋的病毒的相同的程度(未顯示數(shù)據(jù))。這些數(shù)據(jù)揭示，ST-336與Tacanbe病毒上存在的完整蛋白的結(jié)合，具有至少緩慢的K。ff。耐藥變體的分離RNA病毒的預期突變率是很高的(在10,000個中~1個突變株)，測定抗病毒藥耙向的常見方法是分離對于抗病毒藥具有抗性的病毒，而后標記抗性位點。/人野生型Tacaribe病毒原料(在ST-336的存在下涂^隻)中分離對ST-336的敏感性降低的病毒變體。ST-336耐藥(ST-336D"變體的觀測頻數(shù)象對RNA病毒所期望的那樣。將得自于四個獨立的野生型Tacaribe病毒原料的16個ST-336DR獨立型分離，并且將斑塊純化3次。測試所有的ST-336DR獨立型在ST-336存在下的生長能力。ST-336DR獨立型的生長不受ST-336的存在(以完全抑制野生型Tacaribe病毒復制的濃度存在)所影響(未顯示數(shù)據(jù))。耐藥病毒變體的分離和確認強烈地揭示，ST-336可作為直接的抗病毒抑制劑起作用。為了測定ST-336的耐受性和分子靶向的遺傳基礎(chǔ)，從野生型和ST-336DR獨立型中分離RNA?；诩尤霑r間實-瞼，估計病毒糖蛋白可能是ST-336的草巴向。將S片段的整個糖蛋白前體GPC區(qū)域排序。對四個野生型獨立型(WT弁l-4)和四個ST-336DR獨立型(衍生自施加到每個相應母體野生型獨立型的藥物選捧(DRi/1.1得自于WT#1,DR#2.1得自于WT#2，DR#3.1得自于WT#3,DR#4.1得自于WT弁4))進行序列分析。序列分析表明，得自于四個母體野生型獨立型的GPC基因具有相同的排序。當與四個耐藥變體的GPC排序相比時，每個擁有單一核苷酸變化，在所有情況下，其導致氨基酸變化。圖4A顯示了每一突變的位置，其位于GP2的跨膜結(jié)構(gòu)域或跨膜結(jié)構(gòu)域周圍。包含該變化的GP2區(qū)域的序列對比提供于圖4B中。在DR#1.1中的單個變化在氨基酸位置418(I418T),在DR存2.1中是氨基酸416(T416N),在DR弁3.1中是氨基酸433(S433I),在DR弁4.1中是氨基酸436(F4361)。1418在所有的進化枝B新世界沙粒病毒中是相似地保守的(I或L,但決不是T),而T416在所有的進化技BNWA之中是保守的。F436也類似地保守，具有一個例外；Amapan病毒編碼位置436的亮氨酸。Amapari病毒的這種變化可以解釋其對ST-336的敏感性的缺乏(表2)。1418、T416、S433和F436位于GP2的假定跨膜結(jié)構(gòu)域(已知在包膜病毒融合中起到重要作用的區(qū)域)的N端和C端界限附近。17'27'28'38'39結(jié)合在一起，這些數(shù)據(jù)揭示，在沙粒病毒GP2的位置416、418、433或436的氨基酸變化足以與對ST-336的敏感性的降低相一致，并且與病毒實驗推薦的融合抑制機理一致。命中至先導的優(yōu)化原始數(shù)據(jù)表明，在嚙齒類(小鼠和大鼠，數(shù)據(jù)未顯示)中，ST-336盡管顯示了重要的抗病毒活性和特異性，但具有不良的藥物動力學(PK)特性。為了改善ST-336的PK特性，開始先導優(yōu)化化學階段。優(yōu)化程序的目標是形成擁有與最終藥物產(chǎn)品特性一致特性的化合物。先導優(yōu)化行為包括一系列迭代法(包括先導結(jié)構(gòu)的類似物的設(shè)計和化學合成)，而后進4亍新化合物的一系列生物學、生理化學和藥理學評^介?；瘜W類似物通過化合物評價范型(其包括第一個體外病毒和細胞毒性評價)，而后按照所列出的進行一系列評價體外代謝穩(wěn)定性(S9),溶解性，探查細菌誘發(fā)發(fā)生和藥物動力學評價。制備165個類似物，并且對在S9肝提出物中的體外代謝檢驗出最有效的類似物。使大鼠服用最穩(wěn)定的類似物，并且ST-294顯現(xiàn)作為化合物的有效的、口服可生物利用性表征。ST-294的特征ST-294(N-2-(l,l,l,3,3,3-六氟-l-甲基丙基)-2-[(4-二氟甲氧基苯基)磺酰基]肼-l-甲酰胺)的結(jié)構(gòu)示于圖5中。針對耐藥Tacaribe突變抹(用ST-336(DRJl-4)產(chǎn)生)試驗ST-294,所有突變抹對ST-294引起交叉抗藥性，表明該化合物與ST-336都耙向相同的GP2區(qū)域(未顯示數(shù)據(jù))。ST-294抗Tacaribe、Machupo、Gua腿ito和Jun〖n病毒的活性與所看到的ST-336的活性相似(表3)。ST-294對Vero細胞的CC50>50juM,得到〉416的選擇性系數(shù)。ST-294的進一步特征表明，該化合物在包含10%胎牛血清的介質(zhì)中至多溶解23juM,在pH7.4的i爰沖液中至多溶解480juM(表3)。用大鼠、小鼠、人和豚鼠的S9肝提出物試驗ST-294的代謝穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)其在人S9中最穩(wěn)定，而后分別是小鼠、大鼠和豚鼠(表3)。在大鼠中開始進行ST-294的口服藥物動力學的分析，因為對于這類研究該物種能夠較好地表征。通過口服填喂法使大鼠服用ST-294,超過24h周期獲取樣品。血清水平很高(C腿^6670ng/ml),ST-294具有良好的口服生物利用性(68.2%)(表3)。表3:st-294的表征<table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table>在仔鼠模型中的ST-294的效杲研究ST-294針對NWA具有有效的抗病毒活性和良好的類藥物特性，因此，下一步將在動物才莫型中試驗ST-294抑制NWA誘發(fā)的疾病的能力。對于A類藥劑，實驗需要BSL4安全防護。然而，在努力獲得初始資料的過程中，在仔鼠中建立Tacaribe病毒激發(fā)模型。在準備該研究過程中，在仔鼠中用ST-294進行PK和耐受性實驗，而后進行效果試一驗。使新生的(4天大)BALB/c小鼠IP服用10mg/kgST-294,并收集血樣進行分析。相對于抑制Tacaribe病毒CPE所要求的體外抗病毒藥濃度(EC5f66ng/ml),仔鼠中的平均血漿濃度遠遠超過該水平，持續(xù)了延長時間周期(給藥之后，經(jīng)過8h〉15x，在24h時是6x,未顯示數(shù)據(jù))。在該模型中，通過IP方法遞送藥物，這是由于對仔鼠很難進行多次的口服填喂。為了試-驗耐受性，IP給予仔鼠0-100mg/kg/天劑量范圍的ST-294,給予5天。仔鼠能夠較好地耐受100mg/kg/天(5天)的劑量，因為沒有臨床的毒性跡象，并且小鼠以與對照小鼠相同的比例增加重量(未顯示數(shù)據(jù))。在Tacaribe動物效果研究中使用100mg/kg/天的ST-294的最高試-驗濃度。在仔鼠中，PK研究所表明的藥物水平和半衰期與在大鼠中所看到的不相當，但血清水平似乎足夠在Tacaribe動物沖莫型中進^f亍原理性(proof-of隱concept)動物研究的檢驗。用Tacaribe病毒的30XLD50激發(fā)四天大的小鼠，用安慰劑、利巴韋林作為對照物或ST-294治療。結(jié)果如圖6所示，ST-294在Tacaribe感染的仔鼠中顯示了效果，存活率和延遲死亡率與藥物對照物(利巴韋林)相似。將這些數(shù)據(jù)結(jié)合在一起，表示，ST-294是發(fā)展到限定動物研究的有前途和合適的藥物候選物，在這種動物研究中，豚鼠和靈長類可以用可靠的NWA(Junfn和Guanarito病毒)激發(fā)，并在感染后的不同時間用ST-294治療和預防。討論通過成功的HTS和藥物化學程序，已經(jīng)確定NWA抗病毒藥物候選物ST-294。該藥物可體外有效和選擇性地抑制NWA病毒，包括3種NIAID/CDCA類病毒(Junfn,Machupo和Guanarito病毒)。也評價了該化合物在S9肝提出物中的穩(wěn)定性和其藥物動力學特性，并且發(fā)現(xiàn)其是代謝穩(wěn)定的和具有口服生物可利用性。在初步動物效果研究中，ST-294在仔鼠中顯示了針對Tacaribe病毒所誘發(fā)疾病的顯著保護性。通過作用機理研究，該化合物系列很明顯地靶向GP2,并且是病毒進入抑制劑。從滲析和稀釋實驗(圖3)來看，4艮明顯，該藥物與病毒結(jié)合，并在整個稀釋期間被攜帶。當在其它實驗期間滴定病毒樣品時，這種現(xiàn)象可以潛在地具有效果。然而，在加入時間實驗中，沒有足夠的藥物攜帶，這是由于當感染之后1小時或更多小時加入時，高稀釋度影響了滴度(圖2)。由于ST-294比ST-336具有更好的S9穩(wěn)定性，人們認為，代謝發(fā)生于芳香環(huán)上的曱基(圖1)。千型位置對氧化敏感。當在ST-294中沒有千型氫存在時(圖2),氧化受到阻滯，由此消除最快速的代謝途徑。在ST-294中加入二氟曱氧基基團可以賦予這種化合物提高的S9穩(wěn)定性，但不會降4氐抗病毒活性。在Tacaribe仔鼠才莫型中，小鼠看起來死于神經(jīng)系統(tǒng)疾病(通過后軀癱瘓表明)，并且不知道是否ST-294可以穿過血腦屏障。此外，IP給予仔鼠的這種藥物候選物的藥物水平和半衰期與口服給予大鼠那樣好，因此，在這種模型中，血清水平和到達腦的化合物可能危害獲得完全保護的能力。出血熱(由沙粒病毒所引起)的更合適動物模型是豚鼠和非人的靈長類動物模型，其中病毒復制主要在脾、淋巴結(jié)和骨髓中，引起出血素質(zhì)。對于Juni'n、Machupo和Guanarito病毒病，較好地建立了豚鼠模型，并且表現(xiàn)了最好的小動物模型，對于在臨床前研究期間的評價。26'34感染上Junfn病毒的致病菌株的豚鼠形成了與人類AHF類似的不治之癥。37有許多在病毒融合蛋白的功能中橫跨膜區(qū)域作用的報道。在流感病毒血凝素的情況下，對于全部融合行為，顯然需要跨膜固定。27相反，已經(jīng)確定了在跨膜區(qū)域內(nèi)的特定排序要求，例如，艾滋病毒(HIV)1型、鼠白血病病毒、泡沫病毒、冠狀病毒、新i成疫病毒和麻滲病毒中。27基于在這些研究期間產(chǎn)生的耐藥變體，化合物的ST-336種類靶向GP2包膜蛋白，同時引起對藥物的敏感性降低的突變出現(xiàn)在橫跨膜區(qū)域或其周圍(圖4)。靶向病毒包膜和細胞受體之間相互作用的藥物代表了新類的抗病毒藥物。對于HIV治療，進入抑制劑最近極大的提高了人們的興趣，這是由于它們針對多耐藥病毒具有活性。最近FDA批準了針對HIV的新抗病毒藥，稱為恩夫韋地。恩夫韋地(Fuzeoi^)是有效的融合抑制劑，其可阻滯六個螺旋束的形成，由此防止膜融合。"在HIV-感染患者的治療中，恩夫韋地已經(jīng)成功地提高了病毒和免疫響應。33有一些對抗HIV在不同發(fā)展階段進入的其它化合物，其中1)連接抑制劑糊精-2-硫酸酉旨；2)糖蛋白(gp)120/CD4相互作用的抑制劑PRO542、TNX355和BMS488043;和3)輔助受體抑制劑，在靶向CCR5或CXCR4方面那些抑制劑得到細分。2Q在開發(fā)途徑中，恩夫韋地及其它在發(fā)展途徑中的成功是病毒進入抑制劑可用于治療人類病毒病的證據(jù)。ST-294還具有預防性使用的潛力，這是由于該藥物似乎可以與病毒結(jié)合(圖3),并且可以防止感染。當預防性給予時，其它病毒進入抑制劑顯示了保護性。22本文提供的結(jié)果表明，ST-294是新世界沙粒病毒(包括A類出血熱病毒(Juni'n,Machupo和Guanarito))的有效的特定抑制劑。更重要的是，ST-294的耙向(病毒進入到細胞中)可充當抗病毒藥研制的可行的草巴向。由于病毒感染可以以納摩爾范圍的濃度完全抑制，ST-294的靶向似乎容易受影響并且對于可中斷其在感染過程中作用的藥劑高度敏感。試驗3細胞病變效應("CPE")試驗病毒CPE試馬全用于評價實施例100-113針對下列病毒的抗病毒效果Tacaribe病毒(Vero細J包)，Candid-1疫苗病毒(Vero細i包)，Amapari病毒(Vero細胞)，SARS-CoV(Vero細胞)，HSV-l(Vero細胞)，RSV(HEp國2細月包)，牛痘病毒(Vero細胞)和輪狀病毒(MA104)。酶聯(lián)免疫吸附試-驗("ELISA")用于評價化合物針對CMV(MRC-5細胞)和LCMV(Vero細胞)的抗病毒效果。所有這些試驗是在包含2%熱失活的FBS的合適介質(zhì)中進行的。在使用之前24小時，播種96孔細胞培養(yǎng)平亞，每個孔7x104個(Vero)、2.2x104個(HEp-2和MA104)和4.5x104個(MRC-5)細胞。對于化合物敏感性試驗，將化合物(用100%DMSO溶解)力口入到雙孔中，最后濃度為50、15.8、5、1.6、0.5、0.16、0.05、0.016和OjuM。在試驗中，DMSO的最后濃度是0.5%。在單獨實-驗中滴定病毒原料，以測定3天(HSV-l,4侖狀病毒和牛痘)或7天(SARS-CoV,RSV,Tacaribe病毒，Candid1疫苗病毒和Amapari病毒)之后導致細胞單層90%石皮壞的濃度(CPE試驗)，或3天(LCMV)或4天(CMV)之后產(chǎn)生2.5的ELISA信號(在650nm的吸光度(OD65Q))的濃度。將這些預先形成的病毒稀釋物加入到包含化合物的系列稀釋物的孔中。在每個試^驗平亞上包括未感染的細胞和接受病毒的細胞(沒有化合物)。另外，在每個試驗平皿上包含參比藥劑(當合適時)(更昔洛韋針對HSV-1和CMV，Sigma#G2536;利巴韋林針對LCMV和RSV,Sigma#R9644;利福平針對牛痘病毒，Sigma#R3501)。將平皿在37°C和5%C02中培養(yǎng)3天(HSV-1，輪狀病毒，LCMV,牛痘病毒)或7天(Tacaribe病毒，Amapari病毒，Candid1病毒，SARS畫CoV,RSV和CMV)。將HSV-1、SARS畫CoV、輪狀病毒、牛痘病毒、RSV、Tacaribe病毒、Amapari病毒、Candid1疫苗病毒感染的平皿用龍膽紫染色，同時將感染上CMV和LCMV的平皿進行處理，用于ELISA分析。為了龍膽紫染色，用5%戊二醛固定平皿，并用0.1%龍膽紫染色。沖洗和干燥之后，使用微板讀數(shù)器測定570nm處的吸光度(OD570)。為了ELISA分析，從LCMV和CMV感染的平皿中除去介質(zhì)，在室溫下用1(K)o/o甲醇(Fisher，CAS#67-56-1,HPLC等級)固定細胞20分鐘。除去曱醇溶液，用PBS洗滌平皿3次。在37。C加入130jliLSuperblock封閉緩沖液(Pierce#37515)，保持1小時，將非特異性的結(jié)合位點封閉。除去封閉劑，用PBS將孔洗滌3次。加入30]uLLCMV核內(nèi)蛋白(NP)特定單克隆抗體(JuanCarlosdelaTorre，TheScrippsResearchInstitute,LaJollaCA的慷慨禮物)的1:20稀釋物或30yLCMV(蛋白52和獨特長基因44產(chǎn)物)特定混合單克隆抗體(Dako，弁M0854)的1:200稀釋物(在Superblock封閉緩沖液中，包含0.1%Tween-20)。在37。C培養(yǎng)1小時之后，除去原始抗體溶液，用包含0.P/QTween-20的PBS將孔洗滌3次。將40juL山羊抗小鼠-束根過氧化酶共扼的單克隆抗體(Bio-Rad#172-1011)(在包含0.1%Tween-20的Superblock封閉緩沖液中稀釋至1:4000(LCMV)或1:400(CMV))加入到孔中,在37。C將平皿培養(yǎng)1小時。除去二次抗體溶液，用PBS將孔洗滌5次。通過加入130inL的3,3'，5,5-四甲基聯(lián)苯胺基質(zhì)(Sigma弁T0440)，將試驗進行15分鐘，以定量過氧化物酶活性。使用MolecularDevicesKinetic微板讀數(shù)器(帶有650nm濾光鏡)，測定所得到的反應產(chǎn)物的OD65G。用三種方法評^f介4f對Tacaribe病毒的抗病毒活性CPE試-瞼，斑塊減少，和病毒產(chǎn)量抑制試驗。對于HTSCPE試驗，將Vero細胞以800/。融合度涂覆在96孔平皿上。將來源于庫中的試驗化合物(每個平皿80個)力口入到孔中，最后濃度為5nM。然后以病毒稀釋物形式加入Tacaribe病毒，其在7天之后將會導致90%CPE(多重性感染("MOI")大約為0.001)。將平皿在37。C和50/。CO2中培養(yǎng)7天，然后用5%戊二醛固定，并用0.1%龍膽紫染色。使用Envision微板讀數(shù)器，用0057()光譜定量病毒CPE的程度。每個化合物的抑制活性是通過從病毒感染細胞孔的平均OD57。中減去試驗化合物孔的OD57o，然后除以才莫擬感染細胞孔的平均OD570來計算的(TheinhibitoryactivityofeachcompoundwascalculatedbysubtractingfromtheOD57。oftestcompoundwellfromtheaverageOD570ofvirusinfectedcellwells,thendividingbytheaverageOD570ofmock-infectedcellwells。結(jié)果表示每個4t合物所l!武予的4元Tacaribe病毒CPE活性的百分數(shù)。由化合物抑制活性圖(在通過8個化合物濃度(50,16,5,1.6，0.5,0.16，0.05和0.016|uM)的CPE試-瞼之后)測定抑制濃度50。/0(EC5())值。所有測定都以雙份進行。在斑塊減少試驗中，在不存在或存在各種濃度化合物的條件下，<吏生長在6孔平亞中的單層Vero細胞感染大約50PFU/孔。在37。C和5%C02中進行病毒吸附1小時之后，將殘余的接種物用"/。seaplaque瓊月交糖(在去離子水中)和2xMEM的50:50混合物替代。在37。C培養(yǎng)5-7天之后，統(tǒng)計斑塊。以減少病毒斑塊數(shù)量50%所要求的化合物濃度形式來計算EC5。。在BSL4條件下(在USAMRIID)，斑塊減少試-驗(用Lassa、Machupo、Guanarito和Juni'n病毒)如下進行將每個病毒的200PFU用于感染Vero細胞。病毒吸附之后，將細胞單層沖洗，并用包含1%瓊膠糖的完全培養(yǎng)基(無試驗化合物或用15mM至0.05juM的不同濃度范圍的試驗化合物)覆蓋。在37。C和5。/。C02中培養(yǎng)5天之后，將單層用中性紅染色，統(tǒng)計斑塊的數(shù)目。在病毒產(chǎn)量減少試-驗中，在不同濃度化合物的存在下(每個濃度兩個孔)，使生長在24孔平皿中的Vero細胞感染Tacaribe病毒(O.Ol的多重性感染("MOI"》。在"。C培養(yǎng)48小時之后，采集病毒，用Vero細胞中形成的噬斑塊測定病毒產(chǎn)量。按照如上所述計算EC5o值，進行類似的計算，以測定EC9。和EC99。細胞毒性試-瞼利用細胞增殖試-驗測定細胞壽命，以測定化合物對細胞功能的影響，以便可以計算50%細胞毒性濃度(0:50);將該值與EC5o值的比值稱為選擇性系數(shù)(S.I.K:C5()/EC5())。三個類型的試驗用于測定細胞毒性。一個是比色法，其測定3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-聯(lián)苯-四唑錙溴化物(MTT)的減少，一個使用熒光測定法測定刃天青(阿爾瑪藍)的減少，最后的方法使用龍膽紫的吸光度測定法。所有的三個方法產(chǎn)生類似的數(shù)據(jù)。使96孔平皿中的融合培養(yǎng)物接觸不同濃度的化合物，每個濃度兩個孔，使用與抗病毒試驗中所使用條件相當?shù)臈l件。為了龍膽紫染色，用5%戊二醛固定平亞，用0.1%龍膽紫染色。沖洗和干燥之后，使用Envision樣吏板讀數(shù)器測定570nm處的吸光度(00570)。<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table>在組織培養(yǎng)細胞(通常是29!3T(人胚腎)或MRC^(人肺))中試驗假型病毒感染。將細胞播種到96孔平亞中，以使它們在第二天稍微融合。為了試驗所給予化合物的抑制特性，在DMSO中制備系列化合物稀釋物。然后將這些稀釋物中的每一個在細胞培養(yǎng)介質(zhì)中稀釋IOO倍。用化合物稀釋物(在介質(zhì)中)代替細胞培養(yǎng)介質(zhì)，而后加入相等體積的假型病毒原料。將假型病毒在細胞培養(yǎng)介質(zhì)中稀釋，以使加入到每個孔中的病毒量足以產(chǎn)生熒光素酶信號，提供20至50的信號-噪聲比。感染2-3天后，使用標準瑩光素基生物發(fā)光4企測方法，例如Promega's熒光素酶試驗系統(tǒng)，測定熒光素酶活性。在孔(一式三份)中試-瞼每個化合物稀釋物，基于相同平皿中的陽性(沒有化合物)和陰性(沒有病毒)對照物，將熒光素酶活性轉(zhuǎn)變?yōu)楦腥玖Φ陌俜謹?shù)。用MicrosoftExcel的IDBSXLfit4.1軟件計算50。/。有效濃度(EC5。s),使用符合于下列的四個參數(shù)對數(shù)模型y=A+B/(l+(x/C)AD),其中A(底部)和B(頂部)分別固定在0和100%,C=EC50,D-斜率因數(shù)，xH匕合物濃度，y二響應。<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage97</column></row><table>對于所有目的，將本文引用的所有參考文獻以其整體結(jié)合到本文中作為參考。權(quán)利要求1.治療或預防病毒感染或與此相關(guān)疾病的方法，包括給予需要其的哺乳動物治療有效量的下面式II化合物id="icf0001"file="A2008800082970002C1.tif"wi="60"he="33"top="45"left="59"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式II其中n是0-6的整數(shù)；m是0-1的整數(shù)；R1選自H和烷基；R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中R1和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的C4-10環(huán)狀飽和雜烷基；R3和R4獨立地選自H和烷基；或其可藥用鹽。2.權(quán)利要求l的方法，其中n是0、l或2。3.權(quán)利要求l的方法，其中n是l。4.;k利要求l的方法，其中m是l。5.權(quán)利要求l的方法，其中m是l,且n是l。6.權(quán)利要求l的方法，其中式II的化合物選自2-[2,5-二(2,2,2-三氟乙氧基)苯甲?；鵠-N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]肼曱酰胺；N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(4-叔丁基苯甲?；?肼曱酰胺；2-(U'-聯(lián)苯-4-基羰基)-N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]肼甲酰胺；N-[1,1-二(三氟曱基)丙基]-2-(1-萘酰)肼甲酰胺；2-(1,1'-聯(lián)苯-2-基羰基)-N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-甲基苯甲?；?肼曱酰胺；N-[l，][-二(三氟甲基;>丙基]-2-(2-萘酰)肼甲酰胺；N畫[l,][隱二(三氟甲基:>丙基]-2-(2,5-二甲氧基苯曱酰)肼甲酰胺；N-[l,]l腸二(三氟曱基〕>丙基]-2-(3,4-二氯苯曱?；?肼甲酰胺；N-[U[-二(三氟甲基〕>丙基]_2-(4-溴苯曱酰基)肼曱酰胺；N-[l,]"二(三氟曱基〕丙基]_2_(4-異丙基苯曱?；?肼曱酰胺；N-[l,]l-二(三氟曱基〕丙基]-2-(3,5-二曱基苯甲?；?肼曱酰胺；N-[l,〗國二(三氟甲基〕丙基]-2-(茶基羰基)肼甲酰胺；和N畫[l,]-二(三氟甲基〕丙基]-2-(5-氯-2-甲氧基苯曱酰)肼甲酰胺。7.權(quán)利要求i的方法，其中式n的化合物是N-[i,i-二(三氟曱基)丙基]_2-(4-甲基苯甲?；?肼甲酰胺。8.權(quán)利要求l的方法，其中式II的化合物是N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(2,5-二曱氧基苯甲酰)肼甲酰胺。9.權(quán)利要求l的方法，其中哺乳動物是人。10.4又利要求1的方法，其中病毒感染是出血熱病毒。11.權(quán)利要求10的方法，其中出血熱病毒是,在病#。12.^又利要求11的方法，其中^、在4#選自Tacaribe、Guanarito、Machupo、Pichinde和VSV。13.權(quán)利要求1的方法，其進一步包括共同給予西多福韋、環(huán)狀西多福韋或其鹽、酯或前體藥物。14.治療或預防病毒感染或與此相關(guān)疾病的方法，包括給予需要其的哺乳動物治療有效量的下面式I化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>n是0-6的整數(shù)；m是O-l的整數(shù)；p是O-l的整數(shù)；R^選自H和烷基；R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中R^和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的C4-K)環(huán)狀飽和雜烷基；R3選自H和烷基；或其可藥用鹽；且進一步包括共同給予西多福韋、環(huán)狀西多福韋或其鹽、酯或前體藥物的組合。15.藥物組合物，其包含可藥用載體和藥學有效量的式II化合物^巾n是0-6的整數(shù)；m是O-l的整數(shù)；Ri選自H和烷基；R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中Ri和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的CM。環(huán)狀飽和雜烷基；R3和R4獨立地選自H和烷基；或其可藥用鹽。16.—又利要求15的藥物組合物，其中n是0、l或2。17.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中n是l。18.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中m是l。19.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中m是l,且n是l。20.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中式II的化合物選自2-[2,5-二(2,2,2-三氟乙氧基)苯甲?；鵠-N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]肼甲酰胺；N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-叔丁基苯曱酰基)肼甲酰胺；2-(1,1'-聯(lián)苯-4-基羰基)-N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]肼曱酰胺；N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(l-萘酰)肼甲酰胺；2-(1,1'-聯(lián)苯-2-基羰基)-N-[1,1-二(三氟曱基)丙基]肼曱酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]隱2-(4-曱基苯曱?；?肼甲酰胺；N隱[l,l-二(三氟甲基)丙基]國2-(2-萘酰)肼甲酰胺；N畫[l,l-二(三氟甲基)丙基]國2畫(2,5-二曱氧基苯曱酰)肼甲酰胺;N畫[l,l-二(三氟曱基)丙基]國2腸(3,4-二氯苯甲酰基)肼甲酰胺；N-[l,l-,二(三氟曱基)丙基]-2-(4-溴苯甲酰基)肼曱酰胺；N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(4-異丙基苯甲?；?肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(3,5-二曱基苯曱?；?肼甲酰胺;N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(茶基羰基)肼曱酰胺；和N畫[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(5-氯-2-甲氧基苯甲酰)肼曱酰胺21.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中式II的化合物是N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(4-曱基苯曱?；?肼甲酰胺。22.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中式II的化合物是N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(2,5-二甲氧基苯甲酰)肼甲酰胺。23.權(quán)利要求15的藥物組合物，其進一步包含西多福韋、環(huán)狀西多福韋或其鹽、酯或前體藥物。24.藥物組合物，其包含可藥用載體和藥學有效量的式I化合物H3C(H2C)nCF3NR4、NR，(NR3)m^巾(so2)pR2n是0-6的整數(shù)；m是O-l的整數(shù)；p是O-l的整數(shù)；R丄選自H和烷基；R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中R4和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的C4J環(huán)狀飽和雜烷基；Rs選自H和烷基；或其可藥用鹽；且進一步包含西多福韋、環(huán)狀西多福韋或其鹽、酯或前藥。25.式II的4匕合物R，o式II其中n是0-6的整數(shù)；m是O-l的整數(shù);Ri選自H和烷基；R2選自取代或未取代的苯基，取代和未取代的芳基，取代和未取代的雜芳基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的支鏈烷基，和取代或未取代的不飽和環(huán)雜烷基；或其中Ri和R2結(jié)合在一起形成取代或未取代的C^K)環(huán)狀飽和雜烷基；R3和R4獨立地選自H和烷基；或其可藥用鹽。26.權(quán)利要求25的化合物，其中n是0、1或2。27.權(quán)利要求25的化合物，其中n是l。28.權(quán)利要求25的化合物，其中m是l。29.權(quán)利要求25的化合物，其中m是l,且n是l。30.權(quán)利要求25的化合物，其中式II的化合物選自2-[2,5-二(2,2，2-三氟乙氧基)苯甲酰基]-N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-叔丁基苯甲?；?肼甲酰胺；2-(U'-聯(lián)苯-4-基羰基)->^-[1,1-二(三氟甲基)丙基]肼曱酰胺；N-[1,1-二(三氟曱基)丙基]-2-(1-萘酰)肼曱酰胺；2-(l,l'-聯(lián)苯-2-基羰基)-N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]肼甲酰胺；N-[U-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-甲基苯甲?；?肼曱酰胺；N-[1,1-二(三氟曱基)丙基]-2-(2-萘酰)肼曱酰胺；N-[1,1-二(三氟曱基)丙基]-2-(2,5-二曱氧基苯甲酰)肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟甲基)丙基]-2-(3,4-二氯苯甲?；?肼曱酰胺；N-[1,1-二(三氟曱基)丙基]-2-(4-溴苯曱?；?肼曱酰胺；N-[1,1-二(三氟甲基)丙基]-2-(4-異丙基苯甲?；?肼甲酰胺；N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(3,5-二曱基苯甲酰基)肼曱酰胺；N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2_(萊基羰基)肼甲酰胺；和N-[l，l-二(三氟曱基)丙基]-2-(5-氯-2-甲氧基苯曱酰)肼曱酰胺。31.權(quán)利要求25的化合物，其中式II的化合物是N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(4-曱基苯甲?；?肼曱酰胺。32.權(quán)利要求25的化合物，其中式II的化合物是N-[l,l-二(三氟曱基)丙基]-2-(2,5-二曱氧基苯曱酰)肼曱酰胺。全文摘要公開了通過給予治療有效量的某些新的磺酰基氨基脲、羰基氨基脲、氨基脲、脲和相關(guān)化合物治療病毒感染的化合物、方法和藥物組合物。還公開了制備該化合物的方法和使用該化合物的方法和其藥物組合物。尤其是，公開了例如由出血熱病毒所引起的病毒感染的治療和預防，出血熱病毒包括但不局限于沙粒病毒Arenaviridae(Junin、Machupo、Guanarito、Sabia、Lassa、Tacaribe、Pinchinde和VSV)，絲狀病毒Filoviridae(埃博拉和馬爾堡病毒)，黃熱病毒Flaviviridae(黃熱病，鄂木斯克出血熱和賈薩努爾森林熱病毒)，和布尼亞科病毒Bunyaviridae(流行性肝炎)。文檔編號A61K31/185GK101641092SQ200880008297公開日2010年2月3日申請日期2008年1月16日優(yōu)先權(quán)日2007年1月17日發(fā)明者D·E·赫魯比,D·戴,T·R·拜利,T·博爾肯申請人:西加科技公司