專利名稱：：鈷胺素紫杉烷生物結(jié)合物的制作方法鈷胺素紫杉烷生物結(jié)合物本非臨時(shí)申請(qǐng)要求享有于2007年3月19日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)60/919，121的權(quán)益，該臨時(shí)申請(qǐng)引入本文作為參考。
背景技術(shù)：
：某些藥物治療疾病的功效通常取決于有效量的藥物能夠被遞送到受治療者體內(nèi)的特定位置、特別是遞送到特定類型的組織或細(xì)胞群體的容易性。確保藥物或活性劑主要被適當(dāng)細(xì)胞利用可以帶來許多好處，例如以較小的劑量獲得功效、降低非靶標(biāo)的細(xì)胞毒性和降低對(duì)受治療者腎臟系統(tǒng)的影響。因此，有助于藥物尋靶的方法和組合物對(duì)于制藥和醫(yī)療領(lǐng)域是相當(dāng)有價(jià)值的。針對(duì)該需求的一種途徑包括使用這樣的分子其轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制通常已經(jīng)被了解并能夠被誘導(dǎo)以部位特異性方式釋放藥物?！N該機(jī)制包括使用鈷胺素(Cbl)。鈷胺素是必需的生物分子，它的大小阻礙了其通過簡單擴(kuò)散由腸道攝取并進(jìn)入細(xì)胞，而是通過兼性轉(zhuǎn)運(yùn)(facultativetransport)進(jìn)行。鈷胺素必須與特定的蛋白質(zhì)結(jié)合，該復(fù)合物可以通過受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制被主動(dòng)吸收。在小腸中，鈷胺素與胃內(nèi)層分泌的內(nèi)因子(IF)結(jié)合。Cbl-IF復(fù)合物在回腸中在細(xì)胞的腔(l咖enal)表面上與IF受體結(jié)合，并且穿過這些細(xì)胞被胞轉(zhuǎn)至血流中。一旦到那里，鈷胺素與三種鈷胺遞送蛋白(TC)之一結(jié)合以促進(jìn)其被細(xì)胞吸收。鈷胺素吸收的受體介導(dǎo)性質(zhì)賦予了鈷胺素代謝一定程度的細(xì)胞特異性，這是因?yàn)殁挵匪貙H僅被呈現(xiàn)正確受體的細(xì)胞所吸收和代謝。在將藥物或其它活性劑靶向于某種細(xì)胞類型中已經(jīng)利用了這種特異性。通過將活性劑與鈷胺素直接或間接結(jié)合，人們能夠促進(jìn)其優(yōu)先被非常多地利用鈷胺素的細(xì)胞所吸收?！＠呀?jīng)將鈷胺素用于各種目的。例如，Grissom等人已經(jīng)使用有機(jī)鈷復(fù)合物獲得了一些專利6，790，827;6，777，237;和6，776，976。Russell-Jones等人也已經(jīng)利用了鈷胺素來增加活性劑的吸收，如包括5，863，900、6，159，502和5，449，720在內(nèi)的專利系列中所述。除此之外，一直在尋求用于增加各種藥物活性劑的生物利用度的方法和組合物的研究和開發(fā)。發(fā)明概述已知認(rèn)可開發(fā)用于遞送紫杉烷(taxanes)的組合物和方法是有益的。簡言之，概括地說，本發(fā)明涉及包括作為鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物的與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷的方法和組合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，紫杉醇(paclitaxel)與羥鈷胺的鈷原子共價(jià)鍵合，或者更通常而言，與維生素B^的各種形式之一的鈷原子共價(jià)鍵合。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，可將生物結(jié)合物與其它抗癌化合物一起配制成組合物。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物可具有至少0.5mg/ml或者甚至超過100mg/ml的水溶性。例如，施用方法和/或治療癌癥的方法包括在化學(xué)療法或抗血管生成方案中采用最大耐受劑量或節(jié)奏性給藥(metronomicdosing)來施用作為口服、胃腸道外或經(jīng)皮組合物的鈷胺素_紫杉烷結(jié)合物。本發(fā)明另外的特征和優(yōu)點(diǎn)將由隨后的詳細(xì)描述結(jié)合附圖而變得清楚，它們一起通9過舉例的方式對(duì)本發(fā)明的特征進(jìn)行了解釋說明。發(fā)明詳述在公開和描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于本文所公開的具體結(jié)構(gòu)、方法步驟或材料，而是擴(kuò)展到如相關(guān)領(lǐng)域的那些普通技術(shù)人員將認(rèn)可的其等同物。也應(yīng)當(dāng)理解本文所用的術(shù)語僅僅是為了描述具體的實(shí)施方案，而不是為了進(jìn)行限制。在描述和要求保護(hù)本發(fā)明時(shí)，將按照下文給出的定義使用下述術(shù)語。必須指出，除非上下文中有明確指示，否則如本說明書和所附權(quán)利要求書中所用的單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)形式。因此，例如，稱謂"紫杉烷"可包括一種或多種這類紫杉烷，稱謂"抗癌化合物的量"可包括抗癌化合物的一份或多份量，稱謂"鈷胺素"可包括一種或多種鈷胺素的稱謂。如本文所用的術(shù)語"制劑"和"組合物"可互換使用，表示至少一種藥物活性劑如通過共價(jià)鏈接與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷。術(shù)語"藥物"、"活性劑"、"生物活性劑"、"藥物活性劑"和"藥用物質(zhì)"也可互換使用，表示當(dāng)以有效量施用于受治療者時(shí)具有可測量的所述或所選擇的生理活性的活性劑或化合物。如本文所用的"載體"或"惰性載體"表示用于攜帶藥物的典型化合物或組合物，例如聚合物載體、液體載體或其它載體介質(zhì)，生物活性劑可以與它們組合而獲得特定的劑型。作為一個(gè)通用原則，載體基本上不與生物活性劑以基本上降解或在其它方面不利地影響生物活性劑或其治療效力的方式發(fā)生反應(yīng)。如本文所用的"施用"指藥物、制劑或組合物被弓I入受治療者體內(nèi)的方式。各種本領(lǐng)域已知的途徑如口服、胃腸道外、經(jīng)皮和經(jīng)粘膜途徑可實(shí)現(xiàn)施用。因此，口服施用可通過吞咽、咀嚼、經(jīng)由吸收至可口服遞送的固體介質(zhì)的溶出或吮吸包含活性劑的口服劑型來完成。胃腸道外施用可通過經(jīng)靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌內(nèi)、鞘內(nèi)或皮下等注射藥物組合物來完成。經(jīng)皮施用可通過將經(jīng)皮制劑應(yīng)用、貼、滾軋、粘附、澆淋、按壓、摩擦到皮膚表面上等方式來實(shí)現(xiàn)。經(jīng)粘膜施用可通過使組合物與任意可達(dá)到的粘膜接觸足以允許吸收治療有效量的組合物的時(shí)間來完成。經(jīng)粘膜施用的實(shí)例包括將栓劑插入直腸或陰道內(nèi)；將組合物置于口腔粘膜上如頰內(nèi)、舌上或舌下；或?qū)⒄羝㈧F或氣溶膠吸入鼻道內(nèi)。這些和其它施用方法是本領(lǐng)域熟知的。術(shù)語"有效量"指成分當(dāng)包括在組合物中時(shí)足以達(dá)到預(yù)期的組成或生理作用的量。因此，"治療有效量"指活性劑在治療已知或本文教導(dǎo)了該活性劑對(duì)其有效的病癥時(shí)足以達(dá)到治療結(jié)果的非致死量。各種生物因素可以影響藥物實(shí)行其預(yù)期任務(wù)的能力。因此，"有效量"或"治療有效量"可以取決于這類生物因素。而且，雖然醫(yī)生或其他有資質(zhì)的醫(yī)務(wù)人員可以采用本領(lǐng)域已知的評(píng)價(jià)來測定治療作用的完成，公認(rèn)的是個(gè)體對(duì)治療的差異和響應(yīng)可以使得治療作用的完成成為一個(gè)主觀的決定。在某些情況中，藥物的"治療有效量"可達(dá)到接受藥物的受治療者可測量的治療作用。例如，在節(jié)奏性給藥中，"治療有效量"在治療期間可以由于固有的遺傳變異而升高或降低。有效量的確定良好地在藥物、醫(yī)學(xué)和健康科學(xué)領(lǐng)域中的普通技術(shù)范疇內(nèi)。如本文所用的"治療"指對(duì)受治療者給予醫(yī)學(xué)援助的方法或結(jié)果，其中醫(yī)學(xué)援助可抵抗疾病、其癥狀或其它相關(guān)的有害生理表現(xiàn)。此外，這些術(shù)語可表示給患者施用或應(yīng)用醫(yī)藥救助或用于疾病或創(chuàng)傷；例如藥物或治療。因此，如此應(yīng)用的物質(zhì)或醫(yī)藥救助(例如提供操作或應(yīng)用的過程)是為了減輕疾病或損傷。如本文所用的"減少"指降低、減小或減輕的過程，例如在其廣度、量或程度方面減少。此外，該術(shù)語的使用可包括生理過程或效應(yīng)的任何最小的降低至完全消除。如本文所用的"受治療者"指可以受益于施用抗癌劑和/或生物結(jié)合化合物、包括包含這類抗癌劑和/或生物結(jié)合化合物的制劑或組合物的動(dòng)物、例如哺乳動(dòng)物。如本文所用的術(shù)語"紫杉烷"通常指由紫杉屬植物(紅豆杉)產(chǎn)生的二萜類別。該術(shù)語還包括已經(jīng)人工合成的那些紫杉烷。例如，該術(shù)語包括紫杉醇和多西他賽及其衍生物。如本文所用的術(shù)語"鈷胺素"指具有下示基本結(jié)構(gòu)的有機(jī)鈷復(fù)合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>以及如下定義的該結(jié)構(gòu)的衍生物其中R可以是-CHJ甲鈷胺)、-CN(氰鈷胺)、-OH(羥鈷胺)、-C1QH12N503(脫氧腺苷鈷胺素)，或者包括咕啉環(huán)并被鈷胺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、受體和酶所識(shí)別的合成復(fù)合物。該術(shù)語還包括不消除其與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的結(jié)合的在咕啉環(huán)上的取代基團(tuán)。術(shù)語"有機(jī)鈷復(fù)合物"指含有鈷原子的有機(jī)復(fù)合物，其中鈷原子具有與之連接的4-5個(gè)calcogens作為多不飽和雜環(huán)系統(tǒng)的一部分，特別是包括咕啉環(huán)的任意這類復(fù)合物。有機(jī)鈷分子鈷胺素是具有穩(wěn)定的金屬-碳鍵的必需生物分子。除了其它方面，鈷胺素在胸苷(DNA的必需結(jié)構(gòu)單元)的葉酸依賴性合成中發(fā)揮作用。因?yàn)殁挵匪厥谴蠓肿樱遭挵匪氐募?xì)胞攝取通過受體介導(dǎo)的胞吞作用完成。細(xì)胞中的受體密度可以按照細(xì)胞在給定時(shí)間對(duì)鈷胺素的需求進(jìn)行調(diào)節(jié)。例如，在對(duì)鈷胺素有高需求的期間，細(xì)胞可以上調(diào)鈷胺素受體的表達(dá)。一個(gè)這種時(shí)期是當(dāng)細(xì)胞在準(zhǔn)備有絲分裂或減數(shù)分裂中復(fù)制其DNA時(shí)。這種兼性上調(diào)(facultativeupregulation)的一個(gè)結(jié)果是與較慢生長的細(xì)胞群體相比，在進(jìn)行快速增殖的細(xì)胞群體中鈷胺素的攝取將較高。這種不均勻的攝取性質(zhì)使得能夠通過將活性劑與鈷胺素連接來將生物活性劑靶向遞送于高需求的細(xì)胞群體。鈷胺素是維生素的最多的化學(xué)復(fù)合物。鈷胺素分子的核心結(jié)構(gòu)是由4個(gè)吡咯亞單元組成的咕啉環(huán)，其中2個(gè)亞單元直接與經(jīng)由亞甲基連接的剩余部分連接。每個(gè)吡咯具有從環(huán)輻射狀延伸的丙酰胺取代基。在環(huán)中心是鈷原子，鈷原子位于與4個(gè)咕啉環(huán)氮和二甲基苯并咪唑基的氮配位的八面環(huán)境中。第六個(gè)配位伴侶可以如前所述進(jìn)行變化；由式I中的R表示。6個(gè)丙酰胺基團(tuán)從環(huán)的外沿延伸，第7個(gè)丙酰胺基團(tuán)通過磷酸基和核糖基將二甲基苯并咪唑基連接到環(huán)上。在本領(lǐng)域通常已經(jīng)以兩種不同方式使用了術(shù)語"維生素B^"或"B^"。在廣義上講，其已經(jīng)與4種常見的鈷胺素互換使用氰鈷胺、羥鈷胺、甲鈷胺和腺苷鈷胺素。在更具體的方面，該術(shù)語僅指這些形式之一、即氰鈷胺，它是用于食品和營養(yǎng)補(bǔ)充劑的主要B12形式。對(duì)于本發(fā)明的目的而言，該術(shù)語包括氰鈷胺、羥鈷胺、甲鈷胺和腺苷鈷胺素，上下文另有指示除外。如本文所用的術(shù)語"生物結(jié)合物"指含有直接與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合或者經(jīng)由共價(jià)鏈接與鈷胺素的鈷原子間接連接的紫杉烷的分子。由于本文提供的生物結(jié)合物已經(jīng)被證明具有抗血管生成性質(zhì)并且由于鈷胺素生物結(jié)合物在本領(lǐng)域已經(jīng)被證明具有抗癌作用，在本文中術(shù)語"生物結(jié)合物"已經(jīng)被用于指"抗癌"和"抗血管生成"化合物。如本文所用的"抗癌化合物"指可用于癌癥治療的任意化合物、藥物、活性劑或者分子。該術(shù)語包括本發(fā)明公開的鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物以及其它已知的抗癌劑和藥物，包括在如下文獻(xiàn)中找到的那些GordonM.Cragg、DavidG.I.Kingston和DavidJ.Newman，《來自天然產(chǎn)物的抗癌齊U》(AnticancerAgentsfromNaturalProducts),CRC出版社，(2005)ISBN:9780849318634;和DavidE.Thurston,《抗癌藥物的化學(xué)和藥理學(xué)》(ChemistryandPharmacologyofAnticancerDrugs)，CRC出版社，(2006)ISBN9780849392191。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，生物結(jié)合物功能的范例是靶向遞送系統(tǒng)，其中待遞送的活性劑或化合物可以結(jié)合或在其它方面附加到鈷胺素上而不影響鈷胺素與適當(dāng)受體結(jié)合的能力。因此，常見的情況是，鈷胺素的受體結(jié)合域未被改變。同樣，為了成功地靶向遞送，活性劑或化合物應(yīng)當(dāng)在正確的位置以治療有效的形式從鈷胺素上釋放出。在靶向位置應(yīng)當(dāng)存在某些事件、物質(zhì)或條件將導(dǎo)致活性劑從載體上分離出。成功的藥物靶向方法可包括對(duì)在靶向位置普遍存在的特定條件或過程敏感的活性劑_鈷胺素鏈接。如本文所用的術(shù)語"共價(jià)鏈接"或"共價(jià)鍵"指共價(jià)地或配位共價(jià)地將兩個(gè)組分結(jié)合到一起的原子或分子。對(duì)本發(fā)明而言，共價(jià)鏈接意欲包括可用于將紫杉烷共價(jià)結(jié)合到鈷胺素的鈷原子上的原子和分子。雖然沒有排除在外，但是優(yōu)選共價(jià)鏈接不會(huì)通過在空間上阻礙鈷胺素與蛋白質(zhì)之間的相互作用或者通過以使得其與蛋白質(zhì)在構(gòu)象上不相容的方式改變鈷胺素的結(jié)合域來阻止鈷胺素與其轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)的結(jié)合。同樣，優(yōu)選共價(jià)鏈接不應(yīng)當(dāng)以這些方式發(fā)揮作用來阻止鈷胺素_轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白復(fù)合物與鈷胺素受體的結(jié)合。如本文所用的術(shù)語"節(jié)奏性給藥"通常指長期低劑量地頻繁施用口服化學(xué)治療藥物。例如，一個(gè)節(jié)奏性給藥治療可包括施用慣例上21天化學(xué)治療方案的標(biāo)準(zhǔn)劑量的大約四分之一(一天所接受的量的四分之一)并將該劑量在21天化學(xué)治療期間分開。通常，所施用的量是可以不殺死腫瘤細(xì)胞的量，但是其足以防止新血管生成，該過程稱為抗血管生成(血管的形成稱為血管生成)。照此，可以改變?cè)谌我饨o定節(jié)奏性給藥治療中所施用的量。通過循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞向發(fā)生進(jìn)一步募集的腫瘤部位的遷移而形成新血管。因?yàn)樗x擇的劑量遠(yuǎn)低于產(chǎn)生毒副作用的范圍，所以節(jié)奏性或低頻率的給藥可降低傳統(tǒng)化學(xué)治療的毒副作用。另外，由于患者正在接受頻繁和低劑量的治療藥物而沒有傳統(tǒng)的化學(xué)治療中斷，正在遷移至腫瘤的內(nèi)皮細(xì)胞現(xiàn)在被化療藥物所靶向并通常作為細(xì)胞凋亡的結(jié)果被殺死。最終結(jié)果是沒有形成功能性血管；因此，腫瘤缺乏營養(yǎng)素并死亡。如本文所用的術(shù)語"最大耐受劑量"或"MTD"指在化學(xué)治療期間當(dāng)施用于受治療者時(shí)將有效對(duì)抗腫瘤、但不產(chǎn)生受治療者不能忍受的過度毒性(副作用，例如中性白細(xì)胞減少、神經(jīng)紊亂、疹、發(fā)熱等)的抗癌劑的最高劑量。通常，MTD是受治療者特異性的，根據(jù)患者的體表面積進(jìn)行調(diào)節(jié)；這是一種與血液體積相關(guān)的測量。最后，MTD可以由那些具有必需技能和經(jīng)驗(yàn)的人員如腫瘤學(xué)專家來確定。如本文所用的術(shù)語"血管生成(的)"指涉及新血管生長的生理過程。新血管生長是健康和患病人體內(nèi)均發(fā)生的重要自然過程。對(duì)于腫瘤，術(shù)語"抗血管生成(的)"指抑制新血管生長的那些化合物或活性劑，其有效地切斷了腫瘤的現(xiàn)有血液供應(yīng)。例如，這類抗血管生成化合物包括但不限于貝伐單抗、蘇拉明、舒尼替尼、沙利度胺、他莫昔芬、vatalinib(伐他拉尼)、cilenigtide(西侖吉肽)、塞來考昔、厄洛替尼、來那度胺、雷珠單抗、培加他尼、索拉非尼及其混合物。如本文所用的術(shù)語"癌(癥)"指特征在于細(xì)胞分布或者這些細(xì)胞通過直接生長或增殖經(jīng)由侵襲進(jìn)入臨近組織或通過經(jīng)由轉(zhuǎn)移(其中癌細(xì)胞通過血流或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn))植入遠(yuǎn)距離的位置進(jìn)行傳播的能力失控的一類疾病或紊亂。各種類型的癌癥包括但不限于腎上腺皮質(zhì)癌、基底細(xì)胞癌(皮膚)、膀胱癌、腸癌、腦和CNS腫瘤、乳癌、類癌瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、絨毛膜癌、結(jié)腸直腸癌、內(nèi)分泌癌、子宮內(nèi)膜癌、食管癌、尤因肉瘤、眼癌、胃癌、胃腸癌、生殖泌尿系統(tǒng)癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、婦科癌癥、頭頸癌、肝細(xì)胞癌、霍奇金病、喉咽癌、胰島細(xì)胞癌、卡波西肉瘤、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、間皮瘤、骨髓瘤(多發(fā)性)、鼻咽癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非黑素瘤皮膚癌、食道癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰癌、垂體癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、鱗狀細(xì)胞癌(皮膚)、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、移行細(xì)胞癌(膀胱)、滋養(yǎng)層癌、子宮癌和陰道癌。如本文所用的術(shù)語"約"通過規(guī)定給定值可以"稍微高于"或"稍微低于"端值來給數(shù)值范圍端值提供靈活性。為方便起見，如本文所用的多個(gè)項(xiàng)目、結(jié)構(gòu)元素、組成元素和/或材料可以以共同名目呈現(xiàn)。但是，這些名目應(yīng)當(dāng)被解釋為如同名目的每個(gè)成員被單個(gè)地識(shí)別為單獨(dú)和獨(dú)特的成員那樣。因此，當(dāng)沒有相反指示時(shí)，該名目的單個(gè)成員不應(yīng)當(dāng)僅僅基于與同一名目的任意其它成員在共同名目中呈現(xiàn)而被解釋為是所述任意其它成員的事實(shí)上的等同物。濃度、量和其它的數(shù)字型數(shù)據(jù)在本文中可以以范圍的模式來表示或呈現(xiàn)。應(yīng)當(dāng)理解，該范圍模式僅僅為了方便和簡要而使用的，因此應(yīng)當(dāng)被靈活地解釋為不僅包括作為范圍界限而明確記載的數(shù)值，而且還包括該范圍內(nèi)囊括的所有單個(gè)數(shù)值或亞范圍，如同明確記載了各個(gè)數(shù)值和亞范圍那樣。作為舉例說明，數(shù)字范圍"約1微米至約5微米"應(yīng)當(dāng)解釋為不僅包括明確記載的數(shù)值約1微米至約5微米，而且還包括所述范圍內(nèi)的單個(gè)值和亞范圍。因此，該數(shù)值范圍包括諸如2、3.5和4的單個(gè)值以及諸如l-3、2-4和3_5的亞范圍等等。該同樣的原則也適用于僅記載一個(gè)數(shù)值的范圍。而且，不論范圍或特征的寬度是如何描述的，都應(yīng)當(dāng)應(yīng)用該解釋。根據(jù)這些定義，本發(fā)明提供了具有抗癌化合物的方法和組合物，其中紫杉烷或衍生物可與鈷胺素的鈷原子共價(jià)連接。需要注意的是，當(dāng)討論含有鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物的組合物或施用該組合物的方法時(shí)，這些討論各自可以被認(rèn)為是適用于本文所述的其它實(shí)施方案的，無論它們是否在該實(shí)施方案的上下文中明確討論。因此，例如，當(dāng)討論抗癌組合物的紫杉烷時(shí)，那些紫杉烷也可用于施用抗癌組合物的方法中，反之亦然。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，抗癌化合物可包含與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，口服遞送紫杉烷的方法可包括給受治療者口服施用鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物，其中該生物結(jié)合物具有與鈷胺素的鈷原子共價(jià)連接的紫杉烷。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，治療癌癥的方法可包括給受治療者施用治療有效量的抗癌化合物，所述化合物包括與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，在受治療者中減少流向癌性腫瘤的血流的方法可包括給腫瘤受治療者施用抗血管生成化合物，其中該化合物包含與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷。通常，將紫杉烷與鈷胺素的鈷原子連接更接近于在鈷胺素的穩(wěn)定和具有生物活性的形式如腺苷鈷胺素中所看到的結(jié)合安排。已經(jīng)確定，將紫杉烷與鈷胺素的鈷原子連接可顯著增加作為鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物的紫杉烷的水溶性。照此，本發(fā)明的組合物和方法提供了可溶于水的鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物。通常，紫杉烷是不溶于水的。例如，紫杉醇的水溶性低于0.004mg/ml。然而，當(dāng)如下述結(jié)構(gòu)式中所示和如本文所述的那樣與鈷胺素的鈷原子結(jié)合時(shí)，鈷胺素_紫杉醇生物結(jié)合物可具有超出100mg/ml的水溶性。因此，在一項(xiàng)實(shí)施方案中，鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物可具有至少0.5mg/ml的水溶性。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物可具有至少10mg/ml的水溶性。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，水溶性可以是至少50mg/ml。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，水溶性可以是至少100mg/ml。照此，本文提供的鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物可口服施用于受治療者。具體而言，鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物可以是具有以下結(jié)構(gòu)的鈷胺素_紫杉醇生物結(jié)合物14<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>或者，鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物可以是具有以下結(jié)構(gòu)的鈷胺素_多西他賽生物結(jié)合物在以上兩個(gè)結(jié)構(gòu)的每一個(gè)中和在其它類似的實(shí)施方案中，可以理解雖然顯示了Cl—抗衡離子，但是可替代地使用其它類似的可藥用抗衡離子。鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物可具有比未結(jié)合的紫杉烷高數(shù)個(gè)數(shù)量級(jí)的水溶性。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，與未結(jié)合的紫杉烷相比，鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物的水溶性可增加至少10倍。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，可增加至少100倍。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，可增加至少1000倍。此外，已經(jīng)確認(rèn)本文公開的鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物在受治療者內(nèi)可具有提高的生物利用度?；衔锏纳锢枚瓤扇Q于P-糖蛋白(P-gp)，P-糖蛋白是一種ATP依賴性的藥物泵，可將寬范圍的疏水性化合物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外。這可導(dǎo)致多重耐藥現(xiàn)象。在人中P-gp的表達(dá)可以是非常不同的。通常，在血-腦/睪丸屏障的頂膜、腸、肝和腎中可發(fā)現(xiàn)最高水平。由于藥物通過該泵而泵出，因此癌癥患者中的過表達(dá)可破壞化學(xué)治療。P-gp也可影響藥物向?qū)嶓w瘤的滲透。此外，在HIV患者中已經(jīng)顯示，腸中的P-gp影響藥物在這些患者中的治療水平。P-gp已經(jīng)顯示出影響紫杉烷如紫杉醇或多西他賽進(jìn)入細(xì)胞和變得可生物利用的能力。因此，本發(fā)明的生物結(jié)合物可以在結(jié)構(gòu)方面是不同的，以便繞過P-gp途徑，從而導(dǎo)致生物結(jié)合物的生物利用度提高。此外，鈷胺素生物結(jié)合物可利用兼性轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，其也將繞過P-gp途徑而導(dǎo)致生物利用度提高。所用的紫杉烷可選自紫杉醇和多西他賽、其衍生物及其混合物。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，紫杉烷可以是紫杉醇。鈷胺素可選自氰鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；羥鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；甲鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；腺苷鈷胺素，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；水鈷胺素(叫獄obal咖in);cyanocobal咖incarb,lide(氰鈷胺二苯脲)；去二甲基鈷胺素；單乙基酰胺鈷胺素；甲基酰胺鈷胺素；5'_脫氧腺苷鈷胺素；腺苷鈷胺衍生物；氯鈷胺；亞硫酸鈷胺素(sulfitocobalamin);硝基鈷胺素；氰硫基鈷胺素；苯并咪唑衍生物，包括5，6-二氯苯并咪唑、5-羥基苯并咪唑、三甲基苯并咪唑，和腺苷氰鈷胺；鈷胺素內(nèi)酯；鈷胺素內(nèi)酰胺；5-0-甲基芐基鈷胺素；其衍生物；其混合物；及其類似物，其中鈷被另一種金屬代替。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，鈷胺素可以是鈷胺素的維生素B^類型之一，在一項(xiàng)特定的實(shí)施方案中可以是羥鈷胺。特別地，本發(fā)明涉及紫杉烷及其衍生物經(jīng)由鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物的增溶和遞送至各種癌細(xì)胞和/或腫瘤的口服藥物遞送。此外，需要注意的是，可能有經(jīng)由鈷胺素分子的固有尋靶作用。當(dāng)進(jìn)入受治療者的血流或胃腸道時(shí)，該生物結(jié)合物可利用吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和結(jié)合鈷胺素的現(xiàn)有系統(tǒng)。通過這種方式，紫杉烷可以被轉(zhuǎn)運(yùn)至載有鈷胺素受體的細(xì)胞并被那些細(xì)胞攝取。如上所述，給定受治療者中的一些細(xì)胞或細(xì)胞群體可以在給定時(shí)間比其它細(xì)胞更多地利用鈷胺素；其結(jié)果是，在那些時(shí)間內(nèi)在這類細(xì)胞中的鈷胺素受體表達(dá)被上調(diào)。因此，當(dāng)生物結(jié)合物施用于受治療者時(shí)，這些細(xì)胞可以比其它細(xì)胞攝取更多的紫杉烷。因此，本發(fā)明提供了將紫杉烷濃縮到細(xì)胞更多利用鈷胺素的位置的方法。除了其它以外，對(duì)鈷胺素的需求增加與快速細(xì)胞增殖有關(guān)。因此，本發(fā)明可用于在患有增殖性疾病如癌癥的受治療者中將紫杉烷濃縮在贅生細(xì)胞中。紫杉烷已經(jīng)用于生產(chǎn)各種化學(xué)治療藥物。紫杉烷類藥物的主要機(jī)理是抑制微管功能。紫杉烷可以穩(wěn)定微管中的鳥苷二磷酸(GDP)結(jié)合的微管蛋白。這種穩(wěn)定導(dǎo)致通常所稱的"凍結(jié)的有絲分裂"。由于微管是細(xì)胞分裂所必需的，所以這類抑制提供了對(duì)各種癌癥的有效治療。關(guān)于紫杉烷機(jī)理的其它信息可在"IntheG2/MPhase"(Allman等人，BritishJ.CancerResearch(2003)88，1649-1658)中找到，該文獻(xiàn)引入作為參考。這類癌癥包括但不限于腎上腺皮質(zhì)癌、基底細(xì)胞癌(皮膚)、膀胱癌、腸癌、腦和CNS腫瘤、乳癌、類癌瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、絨毛膜癌、結(jié)腸直腸癌、內(nèi)分泌腺癌、子宮內(nèi)膜癌、食管癌、尤因肉瘤、眼癌、胃癌、胃腸癌、生殖泌尿系統(tǒng)癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、婦科癌癥、頭頸癌、肝細(xì)胞癌、霍奇金病、喉咽癌、胰島細(xì)胞癌、卡波西肉瘤、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、間皮瘤、骨髓瘤(多發(fā)性)、鼻咽癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非黑素瘤皮膚癌、食道癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰癌、垂體癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、鱗狀細(xì)胞癌(皮膚)、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、移行細(xì)胞癌(膀胱)、滋養(yǎng)層癌、子宮癌和陰道癌。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，癌癥可以是腎/腎臟癌。在另一實(shí)施方案中，癌癥可以是結(jié)腸癌。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，癌癥可以是前列腺癌。在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，癌癥可以是乳癌。紫杉烷可以直接或通過共價(jià)鏈接與鈷原子共價(jià)鍵合。鏈接作為鈷胺素和紫杉烷之間的聯(lián)系起作用，可用于在這兩種組分之間獲得預(yù)期的距離，同時(shí)優(yōu)選不會(huì)對(duì)生物結(jié)合物與鈷胺素代謝中所涉及的蛋白質(zhì)的結(jié)合產(chǎn)生消極影響。具體而言，鏈接可包括酯鏈接。或者或另外地，鏈接可包括季胺。在另一項(xiàng)供選的實(shí)施方案中，鏈接可以是腙鏈接。本發(fā)明的生物結(jié)合物還可包括包含聚亞甲基、碳酸酯、醚、縮醛或這些單元的任意組合的鏈接。在上文所示的更通用的實(shí)施方案中，鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物可以如下連接其中Y是含1-4個(gè)碳的任意烷基；且X是任選被取代的飽和的支鏈或直鏈(V5。亞烷基、亞環(huán)烷基或芳香基團(tuán)，任選地在鏈內(nèi)有一個(gè)或多個(gè)碳被N、0或S代替，并且其中任選的取代基選自羰基、羧基、羥基、氨基和其它基團(tuán)。"酸"可以是任意有機(jī)或無機(jī)酸，優(yōu)選能夠形成可藥用鹽的那些。發(fā)揮上述功能的其它鏈接將是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且包括在本發(fā)明中。該鏈接可作為裂解該鏈接、從而從鈷胺素釋放出紫杉烷的酶的靶點(diǎn)。這類酶可存在于受治療者的血流中，由此將紫杉烷釋放到全身循環(huán)中，或者其可以特異性地局限于紫杉烷遞送的預(yù)期靶標(biāo)的位置或細(xì)胞類型。或者，鏈接可以是當(dāng)接觸某種環(huán)境或特別是該環(huán)境的特征如某個(gè)PH范圍或溫度范圍時(shí)將裂解或分解的類型。鏈接可以是"自毀"類型，即，它將在裂解過程中被消耗，以致所述裂解將僅產(chǎn)生原來的鈷胺素和紫杉烷分子而沒有任何殘留的鏈接的大片段。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道來自可以按照本發(fā)明進(jìn)行使用的各種鏈接的其它釋放機(jī)理。本發(fā)明的化合物還可作為藥物組合物施用來治療各種癌癥。該組合物可進(jìn)一步包含一種或多種賦形劑，包括粘合齊U、填充齊U、潤滑劑、崩解齊U、矯味齊iJ、著色齊iJ、甜味齊iJ、增稠劑、包衣劑及其組合。本發(fā)明的組合物可以配制成多種劑型，包括糖漿劑、酏劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、膠囊劑、片劑、錠劑和栓劑。不同的施用方案將需要不同的劑型，這取決于多種因素如受治療者的年齡、醫(yī)學(xué)病癥、治療的需求水平以及預(yù)期的治療效果時(shí)程。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道，各種類型的賦形劑可以各自給藥物組合物提供不同的特性，并且它們可以按照本發(fā)明以某種方式合并以獲得適當(dāng)?shù)膭┬?。本發(fā)明提供了可經(jīng)口服、經(jīng)皮或胃腸道外施用于受治療者的化合物。本發(fā)明的一個(gè)方面是，在治療癌癥中施用生物結(jié)合物可以比施用單獨(dú)分子的紫杉烷和鈷胺素更有效。考慮到單獨(dú)的紫杉烷能提供抗血管生成作用的事實(shí)，本發(fā)明提供了作為抗血管生成化合物來治療各種癌癥的鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物。紫杉烷與鈷胺素的量通?？梢允窍嗟鹊模?，紫杉烷鈷胺素的摩爾比可以是約i:1。但是，抗癌組合物可以具有過量的未共價(jià)鍵合的鈷胺素或紫杉烷。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，組合物可以具有約i.2:i至約io:i的鈷胺素鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物的摩爾比。此外，生物結(jié)合物可進(jìn)一步包括另外的抗血管生成化合物。這類另外的抗血管生成化合物包括但不限于貝伐單抗、蘇拉明、舒尼替尼、沙利度胺、他莫昔芬、vatalinib(伐他拉尼)、cilenigtide(西侖吉肽)、塞來考昔、厄洛替尼、來那度胺、雷珠單抗、培加他尼、索拉非尼及其混合物。本發(fā)明的組合物還可包括另外的未與鈷胺素共價(jià)連接的抗癌化合物。這類另外的抗癌化合物包括但不限于環(huán)磷酰胺、5_氟尿嘧啶、fluoruracil(氟尿嘧啶)、多柔比星、iridotecan(伊多替康)、甲氨喋呤、巰嘌呤、柔紅霉素、依托泊苷、長春花堿、吉西他濱、長春花新堿、厄洛替尼、卡培他濱、卡鉑、異環(huán)磷酰胺、甲磺酸伊馬替尼、依立替康、來曲唑、亞葉酸、絲裂霉素C、米托蒽醌、帕米膦酸或其鹽、帕尼單抗、他莫昔芬、沙利度胺、托泊替康、曲妥單抗及其混合物。此外，本發(fā)明的方法和組合物考慮了其它癌癥化合物和抗血管生成化合物，包括但不限于在如下文獻(xiàn)中找到的那些GordonM.Cragg、DavidG.I.Kingston禾口DavidJ.Newman,《來自天然產(chǎn)物的抗癌齊U》(AnticancerAgentsfromNaturalProducts)，CRC出版社，(2005)ISBN:9780849318634;和DavidE.Thurston,《抗癌藥物的化學(xué)和藥理學(xué)》(ChemistryandPharmacologyofAnticancerDrugs)，CRC出版社，(2006)ISBN9780849392191，所述兩篇文獻(xiàn)均整體引入作為參考。因此，本發(fā)明提供了含有抗癌化合物和鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物的組合物。該組合物可具有約io:i至約i:io的抗癌化合物鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物的摩爾比。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該比例可以是約5:i至約i:5。如前面所討論的那樣，癌癥治療是可受益于采用鈷胺素作為藥物遞送載體的一個(gè)領(lǐng)域。而且，因?yàn)榭焖俜至鸭?xì)胞在DNA復(fù)制中需要鈷胺素用于胸苷合成，所以鈷胺素受體在快速增殖的腫瘤細(xì)胞中高度上調(diào)。這使得鈷胺素成為一種優(yōu)先將藥物遞送到癌細(xì)胞的有用載體。這些可能的益處在常規(guī)化學(xué)治療中是最明顯的，其中有效尋靶能加強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的攻擊并同時(shí)減輕對(duì)良性細(xì)胞的損害。因此，鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物可以以如常規(guī)化學(xué)治療中所用的最大耐受劑量進(jìn)行施用。但是，由于已經(jīng)研究和開發(fā)了抗血管生成化學(xué)治療，鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物也可以有效地用于這些化學(xué)治療方案中，特別是因?yàn)楸景l(fā)明已經(jīng)提供了能夠通過與鈷胺素的生物結(jié)合物來口服遞送紫杉烷的方法和組合物，這在本領(lǐng)域中是顯著的進(jìn)步。照此，鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物可通過節(jié)奏性給藥來施用。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，施用本發(fā)明的生物結(jié)合物可用于在受治療者中達(dá)到約0.lng/ml至約20，000ng/19ml的血清水平。而且，本發(fā)明的鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物的紫杉烷可以以約lmg/kg/天至約10mg/kg/天施用。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，速率可以是約2mg/kg/天至約6mg/kg/天。應(yīng)當(dāng)理解，上述安排僅僅是對(duì)應(yīng)用本發(fā)明的原理進(jìn)行舉例說明。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以設(shè)計(jì)各種變通和供選的安排而不背離本發(fā)明的宗旨和范圍，并且所附的權(quán)利要求意欲覆蓋這類變通和安排。因此，雖然本發(fā)明已經(jīng)在上文具體和詳細(xì)地描述了什么目前被認(rèn)為是本發(fā)明最實(shí)用和優(yōu)選的實(shí)施方案，但是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的是，可以做出各種變通、包括但不限于大小、材料、形狀、形式、功能以及操作、裝配和使用方式的變化而不背離本文所給出的原理和概念。下文提供了前面所公開的組合物和方法的口服紫杉烷的實(shí)施例。此外，一些實(shí)施實(shí)施例例包括顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案口服紫杉烷對(duì)動(dòng)物的作用的研究。實(shí)施例1-鈷胺素_紫杉醇生物結(jié)合物的制備采用以下反應(yīng)流程制備了鈷胺素_紫杉醇生物結(jié)合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>工作。紅豆杉醇(Taxol)Zn/NH4CI/CI(CH2)3NHCH3(CICH2CO)20-DIEACICH2COO-2'-PTX(1)Cbl-OHCW-(CH2>3NHCH3.HCI(2)DIEACbKCH2)3N(CH3)CH2COO-2'-PTX.HCI(3)縮寫Cbl-:P-取代的鈷胺素PTX:紫杉醇DIEA:二異丙基乙胺具體而言，使用WatersAlliance2695HPLC系統(tǒng)和2996PDA檢測器進(jìn)行該分析使用50mMH3P04(用氨調(diào)至pH3.0)(緩沖液A)和乙腈/水(9:1)(緩沖液B)分別作為水性和有機(jī)洗脫液，另有說明除外。還使用了WatersDelta-PakC1815ymlOOA3.9x300mm柱(P/NWAT011797)和lml/分鐘的流速。在PE-SciexAPI2000質(zhì)譜儀上獲得質(zhì)譜。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>于0°C向攪拌的含有在CH2Cl2(7ml)中的紫杉醇(1.074g，1.258mmol)的溶液中依次加入2-氯乙酸酐(0.236g，1.376,1)和DIEA(O.26ml，1.376,1)。將反應(yīng)物緩慢溫?zé)嶂潦覝亍?4小時(shí)后，將反應(yīng)混合物通過快速色譜法(硅膠，在己烷中的0-80%乙酸乙酯)進(jìn)行濃縮純化，得到0.987g(84.33%)白色固體。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>將乙酸羥鈷胺(0.5g，0.355mmol)溶于DIH20(25ml)中，向溶液中加入N-甲基_3-氯丙胺(0.108g，0.751,1)和NH4C1(0.195mg，3.63,1)。將溶液通入N2脫氣30分鐘。然后，一次性加入鋅粉(<10微米)(0.238g，3.63mmol)。在N2下將反應(yīng)物攪拌3.5小時(shí)，之后原料全部消耗。然后將反應(yīng)混合物用WhatmanNo.42濾紙進(jìn)行過濾以除去鋅。將濾液加載到用60ml甲醇、然后100ml水沖洗進(jìn)行預(yù)沖洗的WatersC18S印-Pak柱(10gC18Sorbant)上。用100ml水從柱子上除去所有鹽，用CH30H_H20(9:1)洗脫出產(chǎn)物并將其濃縮至干。將殘留物重新混懸于4ml甲醇中，在lOOmll:1(V/V)CH2C12/無水Et20中進(jìn)行沉淀。過濾出紅色固體，用丙酮(20ml)和乙醚(20ml)洗滌，得到0.482g(產(chǎn)率94.6%，純度98%)產(chǎn)物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>4別七^f勿l(0.743g，0.799mmol，1.Oeq)、2(1.976g，1.374mmol，1.72eq)和DIEA(O.24ml，1.374mmol，1.72eq)在DMS0(48ml)中的溶液于室溫?cái)嚢?天。HPLC顯示原料1耗盡。將反應(yīng)混合物加入攪拌的CH2C12/乙醚(1:2，450ml)中。收集所得沉淀，用CH2C12(20mlx3)和乙醚(20mlx3)洗滌，風(fēng)干。將粗產(chǎn)物用0.01NHC1(200ml)稀釋，應(yīng)用于依次用7體積的甲醇和水預(yù)沖洗的C18反相43g柱上。將柱子首先用水(50ml)沖洗，然后用B在緩沖液A中的5_40%溶液洗脫(每200ml增加5X)。通過HPLC檢查級(jí)分的純度。合并所需級(jí)分，用1體積的水稀釋，吸收到WatersC18S印-Pak柱(10g，P/NWAT043350，依次用3體積的甲醇和水進(jìn)行預(yù)沖洗)上。產(chǎn)物用水(20mlx3)、0.01MHC1(20mlx3)、水(20mlx3)洗滌并用9:1乙腈/水(50ml)從柱上洗脫出。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑。將殘留物溶于0.01N鹽酸溶液(40ml，借助于數(shù)滴0.1N鹽酸溶液)中，通過0.45iimNYLON膜濾器過濾，冷凍干燥。得到780mg(41.9%)紅色粉末。ES(+)-MS:1148.9[(M+H)2+]，1329.9(Cbr)，665.7[(Cbl+H)2+]，971.6[(Cbl-359)+]，359.l(來自C-OP(0)鍵斷裂的片段)。HPLC顯示產(chǎn)物純度為約98.6%。所得化合物具有以下結(jié)構(gòu)實(shí)施例2-鈷胺素_多西他賽生物結(jié)合物的制備如實(shí)施例1所述進(jìn)行類似操作，但是用多西他賽作為主要的紫杉烷，產(chǎn)生以下結(jié)構(gòu)實(shí)施例3-鈷胺素_紫杉醇生物結(jié)合物劑量研究歷經(jīng)28天給6只小鼠的組施用不同劑量的按照實(shí)施例1制備的鈷胺素_紫杉醇生物結(jié)合物。在28天后測定對(duì)活的循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞前體和白細(xì)胞的影響。相應(yīng)的鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物、活的循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞前體和白細(xì)胞的量示于表1中表1作為鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物遞送的紫杉醇的量(紫杉醇mg/kg)每微升外周血中的活CEP每104個(gè)外周血細(xì)胞中的白細(xì)胞o.o(對(duì)照)1.56800301.2810023<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>如表l所示，在每個(gè)劑量下，鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物的施用均具有抗血管生成作用(活CEP顯著減少)。但是，最有效的劑量不與紫杉醇的施用量成比例。事實(shí)上，在該特定研究中，最有效的劑量是約2mg/kg。而且，白細(xì)胞計(jì)數(shù)沒有降低證明該劑量對(duì)小鼠的毒性較小(無中性白細(xì)胞減少)。實(shí)施例4-通過基質(zhì)膠塞灌流(MatrigelPlugPerfusion)分析法測定鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物的抗血管生成功效進(jìn)行基質(zhì)膠塞灌流體內(nèi)試驗(yàn)來測定實(shí)施例1的鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物(Cob-Pac)的抗血管生成功效。該試驗(yàn)采用基質(zhì)膠(Matrigel)來復(fù)制組織環(huán)境，基質(zhì)膠是小鼠腫瘤細(xì)胞分泌的膠凝狀蛋白質(zhì)混合物，由BD生物科學(xué)公司(BDBiosciences)銷售。基質(zhì)膠在室溫下是液體，但當(dāng)注射到動(dòng)物中時(shí)形成固體塞。如果血管生長剌激物如堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)與基質(zhì)膠混合，那么bFGF剌激固體塞中的新血管形成，這可通過熒光技術(shù)在動(dòng)物中進(jìn)行監(jiān)測。在目前的研究中，基質(zhì)膠單獨(dú)或與bFGF—起皮下注射到小鼠中。然后，如表2所示，各組小鼠通過口服管飼鈷胺素_紫杉烷結(jié)合物或者在最后一組中用鼠抗-VEGF受體抗體DC101進(jìn)行處理。DC101被很多人看作是小鼠的抗血管生成的黃金標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果示于表2:表2<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>可以看出，如基質(zhì)膠+bFGF中的熒光比所顯示的那樣，在基質(zhì)膠分析中加入bFGF剌激了血管生長。在每個(gè)實(shí)例中，加入鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物抑制了新血管生長。但是，最大的作用是在2mg/kg(以紫杉醇單元表示)和6mg/kg(以紫杉醇單元表示)劑量的作用。鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物提供了比DC101更好的功效，DC101是本領(lǐng)域已知的有效的嚙齒動(dòng)物特異性抗血管生成化合物。雖然本發(fā)明已經(jīng)參考某些優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，可以做出各種變通、改變、省略和替換而不背離本發(fā)明的宗旨。因此，本發(fā)明僅由所附權(quán)利要求的范圍進(jìn)行限定。權(quán)利要求生物結(jié)合物，包含與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷。2.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其中紫杉烷包括選自紫杉醇和多西他賽、其衍生物及其混合物的成員。3.權(quán)利要求2的生物結(jié)合物，其中紫杉烷是紫杉醇。4.權(quán)利要求2的生物結(jié)合物，其中紫杉烷是多西他賽。5.權(quán)利要求1的生物結(jié)合物，其中鈷胺素包括選自如下的成員氰鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸或三元羧酸衍生物；羥鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸或三元羧酸衍生物；甲鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸或三元羧酸衍生物；腺苷鈷胺素，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸或三元羧酸衍生物；水鈷胺素；cyanocobalamincarbanalide(氰鈷胺二苯脲)；去二甲基鈷胺素；單乙基酰胺鈷胺素；甲基酰胺鈷胺素；5'_脫氧腺苷鈷胺素；腺苷鈷胺衍生物；氯鈷胺；亞硫酸鈷胺素；硝基鈷胺素；氰硫基鈷胺素；苯并咪唑衍生物，包括5，6-二氯苯并咪唑、5-羥基苯并咪唑、三甲基苯并咪唑，或腺苷氰鈷胺；鈷胺素內(nèi)酯；鈷胺素內(nèi)酰胺；5-0-甲基芐基鈷胺素；其衍生物；其混合物；及其類似物。6.權(quán)利要求1的生物結(jié)合物，其中鈷胺素是羥鈷胺。7.權(quán)利要求1的生物結(jié)合物，其中鈷胺素是維生素812。8.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其配制在口服遞送的組合物中。9.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其配制在胃腸道外遞送的組合物中。10.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其配制在經(jīng)皮遞送的組合物中。11.權(quán)利要求1的生物結(jié)合物，其中該生物結(jié)合物具有至少50mg/ml的水溶性。12.權(quán)利要求1的生物結(jié)合物，其中該生物結(jié)合物具有至少100mg/ml的水溶性。13.權(quán)利要求1的生物結(jié)合物，其配制在紫杉烷鈷胺素的摩爾比為約1:1的組合物中。14.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其配制在具有未與鈷胺素共價(jià)連接的抗癌化合物的組合物中。15.權(quán)利要求14的生物結(jié)合物，其中抗癌化合物包括選自如下的成員環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、fluoruracil(氟尿嘧啶)、多柔比星、伊多替康、甲氨喋呤、巰嘌呤、柔紅霉素、依托泊苷、長春花堿、吉西他濱、長春花新堿、厄洛替尼、卡培他濱、卡鉑、異環(huán)磷酰胺、甲磺酸伊馬替尼、依立替康、來曲唑、亞葉酸、絲裂霉素C、米托蒽醌、帕米膦酸或其鹽、帕尼單抗、他莫昔芬、沙利度胺、托泊替康、曲妥單抗及其混合物。16.權(quán)利要求i4的生物結(jié)合物，其中組合物具有約i0:i至約i:io的抗癌化合物生物結(jié)合物的摩爾比。17.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其中生物結(jié)合物存在于具有過量的未與紫杉烷共價(jià)鍵合的鈷胺素的組合物中。18.權(quán)利要求17的生物結(jié)合物，其中組合物具有約i.2:i至約io:i的鈷胺素生物結(jié)合物的摩爾比。19.權(quán)利要求1的生物結(jié)合物，其配制在具有未與鈷胺素共價(jià)連接的抗血管生成化合物的組合物中。20.權(quán)利要求19的生物結(jié)合物，其中抗血管生成化合物選自貝伐單抗、蘇拉明、舒尼替尼、沙利度胺、他莫昔芬、vatalinib(伐他拉尼)、cilenigtide(西侖吉肽)、塞來考昔、厄洛替尼、來那度胺、雷珠單抗、培加他尼、索拉非尼及其混合物。21.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其中紫杉烷通過酯鏈接與鈷胺素共價(jià)鍵合。22.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其中紫杉烷通過季胺與鈷胺素共價(jià)鍵合。23.權(quán)利要求l的生物結(jié)合物，其中與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷是與羥鈷胺的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉醇。24.鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物，包括如下結(jié)構(gòu)25.權(quán)利要求24的生物結(jié)合物，其中鈷胺素-紫杉醇生物結(jié)合物的水溶性是至少50mg/ml。26.權(quán)利要求24的生物結(jié)合物，其中鈷胺素_紫杉醇生物結(jié)合物的水溶性是至少100mg/ml。27.權(quán)利要求24的生物結(jié)合物，其中該生物結(jié)合物被配制在用于給受治療者口服施用的組合物中。28.權(quán)利要求24的生物結(jié)合物，其中該生物結(jié)合物被配制在用于治療癌癥的組合物中。29.鈷胺素-多西他賽生物結(jié)合物，包括如下結(jié)構(gòu)30.權(quán)利要求29的生物結(jié)合物，其中鈷胺素-多西他賽生物結(jié)合物的水溶性是至少50mg/ml。31.權(quán)利要求29的生物結(jié)合物，其中鈷胺素-多西他賽生物結(jié)合物的水溶性是至少100mg/ml。32.權(quán)利要求29的生物結(jié)合物，其中該生物結(jié)合物被配制在用于給受治療者口服施用的組合物中。33.權(quán)利要求29的生物結(jié)合物，其中該生物結(jié)合物被配制在用于治療癌癥的組合物中。34.口服遞送紫杉烷的方法，該方法包括給受治療者口服施用鈷胺素-紫杉烷生物結(jié)合物，其中鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物具有與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷，并且其中鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物的水溶性是至少50mg/ml。35.權(quán)利要求34的方法，其中鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物的水溶性是至少100mg/ml。36.權(quán)利要求34的方法，其中鈷胺素_紫杉烷生物結(jié)合物包括如下結(jié)構(gòu)37.<image>imageseeoriginaldocumentpage4</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>38.治療癌癥的方法，該方法包括給受治療者施用治療有效量的包含與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷的生物結(jié)合物。39.權(quán)利要求38的方法，其中紫杉烷包括選自紫杉醇和多西他賽、其衍生物及其混合物的成員。40.權(quán)利要求38的方法，其中紫杉烷是紫杉醇。41.權(quán)利要求38的方法，其中鈷胺素包括選自如下的成員氰鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；羥鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；甲鈷胺，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；腺苷鈷胺素，包括其酰苯胺、乙基酰胺、丙酰胺、一元羧酸、二元羧酸和三元羧酸衍生物；水鈷胺素；cyanocobalamincarbanalide(氰鈷胺二苯脲)；去二甲基鈷胺素；單乙基酰胺鈷胺素；甲基酰胺鈷胺素；5'_脫氧腺苷鈷胺素；腺苷鈷胺衍生物；氯鈷胺；亞硫酸鈷胺素；硝基鈷胺素；氰硫基鈷胺素；苯并咪唑衍生物，包括5，6_二氯苯并咪唑、5_羥基苯并咪唑、三甲基苯并咪唑，和腺苷氰鈷胺；鈷胺素內(nèi)酯；鈷胺素內(nèi)酰胺；5-0-甲基芐基鈷胺素；其衍生物；其混合物；及其類似物。42.權(quán)利要求38的方法，其中鈷胺素是羥鈷胺。43.權(quán)利要求38的方法，其中鈷胺素是維生素812。44.權(quán)利要求38的方法，其中癌癥選自腎上腺皮質(zhì)癌、基底細(xì)胞癌、膀胱癌、腸癌、腦腫瘤、CNS腫瘤、乳癌、類癌瘤、子宮頸癌、軟骨肉瘤、絨毛膜癌、結(jié)腸直腸癌、內(nèi)分泌癌、子宮內(nèi)膜癌、食管癌、尤因肉瘤、眼癌、胃癌、胃腸癌、生殖泌尿系統(tǒng)癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、婦科癌癥、頭頸癌、肝細(xì)胞癌、霍奇金病、喉咽癌、胰島細(xì)胞癌、卡波西肉瘤、腎/腎臟癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、間皮瘤、骨髓瘤、鼻咽癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非黑素瘤皮膚癌、食道癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰癌、垂體癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、皮膚癌、鱗狀細(xì)胞癌、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、移行細(xì)胞癌、滋養(yǎng)層癌、子宮癌、陰道癌及其組合。45.權(quán)利要求44的方法，其中癌癥是腎/腎臟癌。46.權(quán)利要求44的方法，其中癌癥是結(jié)腸直腸癌。47.權(quán)利要求44的方法，其中癌癥是前列腺癌。48.權(quán)利要求44的方法，其中癌癥是乳癌。49.權(quán)利要求38的方法，其中施用步驟是通過口服遞送進(jìn)行的。50.權(quán)利要求38的方法，其中施用步驟是通過胃腸道外遞送進(jìn)行的。51.權(quán)利要求38的方法，其中施用步驟是通過經(jīng)皮遞送進(jìn)行的。52.權(quán)利要求38的方法，其中施用步驟是通過節(jié)奏性給藥進(jìn)行的。53.權(quán)利要求38的方法，其中施用步驟是通過最大耐受劑量進(jìn)行的。54.權(quán)利要求38的方法，其中施用步驟在受治療者中達(dá)到約0.lng/ml至約20，000ng/ml的血清水平。55.權(quán)利要求38的方法，其中生物結(jié)合物的紫杉烷部分以約lmg/kg/天至約10mg/kg/天施用。56.權(quán)利要求38的方法，其中生物結(jié)合物的紫杉烷部分以約2mg/kg/天至約6mg/kg/天施用。57.權(quán)利要求38的方法，其中生物結(jié)合物具有至少50mg/ml的水溶性。58.權(quán)利要求38的方法，其中生物結(jié)合物具有至少100mg/ml的水溶性。59.權(quán)利要求38的方法，其中生物結(jié)合物是抗血管生成化合物。60.權(quán)利要求38的方法，該方法還包括共同施用抗癌化合物。61.權(quán)利要求60的方法，其中抗癌化合物和生物結(jié)合物存在于共同的組合物中。62.權(quán)利要求60的方法，其中組合物具有約io:i至約i:io的抗癌化合物生物結(jié)合物的摩爾比。63.權(quán)利要求60的方法，其中抗癌化合物包括選自如下的成員環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、fluoruracil(氟尿嘧啶)、多柔比星、伊多替康、甲氨喋呤、巰嘌呤、柔紅霉素、依托泊苷、長春花堿、吉西他濱、長春花新堿、厄洛替尼、卡培他濱、卡鉑、異環(huán)磷酰胺、甲磺酸伊馬替尼、依立替康、來曲唑、亞葉酸、絲裂霉素C、米托蒽醌、帕米膦酸或其鹽、帕尼單抗、他莫昔芬、沙利度胺、托泊替康、曲妥單抗及其混合物。64.權(quán)利要求38的方法，其中與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷是與羥鈷胺的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉醇。65.在受治療者中減少流向癌性腫瘤的血流的方法，該方法包括給腫瘤受治療者施用抗血管生成化合物，所述的化合物包含與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷。66.權(quán)利要求65的方法，其中施用步驟是口服的。67.權(quán)利要求65的方法，其中施用步驟是胃腸道外的。68.權(quán)利要求67的方法，其中胃腸道外遞送是直接進(jìn)入腫瘤部位的。69.權(quán)利要求65的方法，其中施用步驟是經(jīng)皮的。70.權(quán)利要求65的方法，其中紫杉烷通過酯鏈接基與鈷原子共價(jià)鍵合。71.權(quán)利要求65的方法，其中紫衫烷通過包括季胺在內(nèi)的鏈接基與鈷原子共價(jià)鍵合。72.權(quán)利要求65的方法，其中施用步驟是通過節(jié)奏性給藥進(jìn)行的。73.權(quán)利要求65的方法，其中施用步驟是通過最大耐受劑量進(jìn)行的。74.權(quán)利要求65的方法，其中抗血管生成化合物具有至少50mg/ml的水溶性。75.權(quán)利要求65的方法，其中抗血管生成化合物具有至少100mg/ml的水溶性。76.權(quán)利要求65的方法，其中與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷是與羥鈷胺的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉醇。全文摘要本發(fā)明涉及包括與鈷胺素的鈷原子共價(jià)鍵合的紫杉烷的方法和組合物。該組合物可通過任意有效的途徑來遞送，但是可特別用作口服抗癌或抗血管生成化合物。抗癌/抗血管生成化合物可單獨(dú)或與其它抗癌/抗血管生成化合物聯(lián)合用于各種化學(xué)治療、包括抗血管生成化學(xué)治療。文檔編號(hào)A61K31/335GK101715342SQ200880016513公開日2010年5月26日申請(qǐng)日期2008年3月14日優(yōu)先權(quán)日2007年3月19日發(fā)明者C·多爾蒂,D·帕特爾,D·沃爾默,J·R·格布哈特申請(qǐng)人:因弗拉布洛克制藥公司