專利名稱：：人il-18和抗cd20抗體癌癥聯(lián)合治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：一般而言，本發(fā)明涉及與針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體組合的IL-18(也稱為干擾素Y誘導(dǎo)因子(IGIF))的用途。
背景技術(shù)：
：活性人IL-18含有157個(gè)氨基酸殘基。它具有有力的生物學(xué)活性，包括誘導(dǎo)T細(xì)胞和脾細(xì)胞生成干擾素-Y,增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性，和促進(jìn)幼稚004+T細(xì)胞分化成Thl細(xì)胞。另外，人IL-18提升GM-CSF的生成，并降低IL-10的生成。CD4+T細(xì)胞是所有免疫應(yīng)答的中樞調(diào)控元件。它們分成兩個(gè)子集，即Thl和Th2。每個(gè)子集以其分泌不同細(xì)胞因子的能力來限定。有趣的是，最有力的分化誘導(dǎo)物是細(xì)胞因子自身。幼稚前體發(fā)育成Th2細(xì)胞是由IL-4誘導(dǎo)的。在發(fā)現(xiàn)IL-18前，認(rèn)為IL-12是主要的Thl誘導(dǎo)性細(xì)胞因子。Thl細(xì)胞分泌IL-2、干擾素-Y、和TNP-I3。干擾素-y(特征性的Thl細(xì)胞因子)直接對(duì)巨噬細(xì)胞起作用以增強(qiáng)它們殺微生物的和吞噬細(xì)胞的活性。結(jié)果，活化的巨噬細(xì)胞能有效地破壞胞內(nèi)病原體和腫瘤細(xì)胞。Th2細(xì)胞生成IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13,它們通過幫助B細(xì)胞發(fā)育成抗體生成細(xì)胞而起作用?？傊?，Thl細(xì)胞主要負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，而Th2細(xì)胞負(fù)責(zé)體液免疫?；趶V譜的免疫刺激特性，已經(jīng)在多種臨床前腫瘤模型中研究了IL-18。在免疫原性腫瘤中觀察到作為單一療法使用的IL-18的抗腫瘤活性。在MOPC-315漿細(xì)胞瘤(高度免疫原性肺瘤)的晚期腫瘤(大于100cm3)模型中觀察到最有力的抗腫瘤效果。在這種模型中，每日施用鼠IL-18(5mg/Kg)持續(xù)約30天導(dǎo)致可再現(xiàn)的肺瘤消退和治愈。用親本肺瘤再次考驗(yàn)導(dǎo)致胂瘤排斥，提示對(duì)免疫記憶的誘導(dǎo)。關(guān)于此模型中牽涉細(xì)胞免疫的別的證據(jù)來自在攜帶晚期MOPC-315腫瘤的重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠(SCID)中進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，所述晚期MOPC-315腫瘤在使用類似的IL-18日程表后未能消退。關(guān)于IL-18介導(dǎo)細(xì)胞免疫的進(jìn)一步支持還來自對(duì)對(duì)照和經(jīng)IL-18處理的小鼠中建立的MOPC-315肺瘤實(shí)施的免疫組織化學(xué)。這表明相對(duì)于對(duì)照而言，經(jīng)IL-18處理的動(dòng)物中由008+T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、活化的巨噬細(xì)胞、和樹突細(xì)胞組成的細(xì)胞浸潤(rùn)增加。在體外，來自用IL-18處理的動(dòng)物的PBMC或脾細(xì)胞顯示了針對(duì)腫瘤的NK和CTL細(xì)胞毒性。另外，看起來完整的Fas/Fas配體途徑對(duì)抗腫瘤應(yīng)答是有益的。利妥昔單抗(rituximab)是一種嵌合單克隆抗體，其由識(shí)別人CD20抗原的鼠抗原結(jié)合位點(diǎn)與人IgGl恒定區(qū)融合而組成。利妥昔單抗(作為單一藥劑)在無痛性NHL中具有顯著活性。在166名復(fù)發(fā)性或頑固性無痛性NHL患者的樞要(pivotal)單臂臨床研究中，總體應(yīng)答率是48%，而完全應(yīng)答(CR)率是60/。。McLaughlin等，JC〃".Owco/.16:2825-2833(1998)。在先前未治療的無痛性NHL患者中，利妥昔單抗療法具有64-73。/。的總體應(yīng)答率和15-26。/。的CR率。Hainsworth等，說ooc/95:3052-3056(2000);Colombat等，丑/ood97:101-106(2001)。此外，多項(xiàng)隨機(jī)化m期研究顯示了，向常規(guī)化療添加利妥昔單抗改善了NHL患者的存活。Marcus等，脅od105:1417-1423(2005);Marcus等,腸W104:3064-3071(2004);Hiddemann等,脅od106:3725-3732(2005);Feugier等，JC7/".0"co/.23:4117-4126(2005)。然而，由于化療的毒性較高，利妥昔單抗單一療法仍被認(rèn)為是無痛性淋巴瘤患者中的一個(gè)選項(xiàng)。正在進(jìn)行研究，以確定增強(qiáng)抗腫瘤活性的方式，并改善利妥昔單抗的功效。數(shù)種機(jī)制可有助于利妥昔單抗的體內(nèi)功效。利妥昔單抗對(duì)淋巴瘤細(xì)胞表面上的CD20的結(jié)合能觸發(fā)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，導(dǎo)致凋亡或程序性細(xì)胞死亡。Shan等,膝od91:1644-1652(1998);Pedersen等，99:1314-1319(2002)。此外，利妥昔單抗能活化補(bǔ)體種類，引起補(bǔ)體依賴性細(xì)胞溶解。Cragg等，101:1045-1052(2003);Manches等，101:949-954(2003)。越來越多的證據(jù)提示，在施用利妥昔單抗后ADCC與CDC在消除腫瘤細(xì)胞方面協(xié)作。Manches等，Golay等，i^ewato/o&ca88:1002-1012(2003);Clynes等，Ato.Med6:443-446(2000)。在抗體的恒定(Fc)區(qū)結(jié)合至效應(yīng)細(xì)胞(諸如NK細(xì)胞或單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞)表面上的Fc受體時(shí)，ADCC被觸發(fā)。在人B細(xì)胞淋巴瘤的鼠模型中，在缺乏活化性Fc受體的小鼠中，利妥昔單抗的功效被消除。相比之下，在缺乏抑制性Fc受體的小鼠中，單克隆抗體療法得到增強(qiáng)。攜帶FC受體的效應(yīng)細(xì)胞對(duì)于利妥昔單抗在此模型中的功效是至關(guān)重要的。人體內(nèi)的主要活化性Fc受體是CD16a(FcyRIIIa),其由NK細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)。已經(jīng)顯示了，人FcYRIIIa基因中第158位的多態(tài)性(苯丙氨酸對(duì)纈氨酸)與對(duì)利妥昔單抗的響應(yīng)相關(guān)。158VV純合基因型與在體外較強(qiáng)的IgG結(jié)合人NK細(xì)胞和觸發(fā)通過NK細(xì)胞進(jìn)行的ADCC有關(guān)(Koene等，90:1109-1114(1997);Dall，Ozzo等，Ca"ceri仏64:4664-4669(2004))，而且還與利妥昔單抗療法后較高的應(yīng)答率有關(guān)。Weng等，JC7/".(9"co/.21:3940-3947(2003);Cartron等，104:2635-2642(2004)。這些數(shù)據(jù)支持如下假設(shè)，即NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC對(duì)于利妥昔單抗療法在淋巴瘤患者中的效力也是重要的。一種用于改善利妥昔單抗功效的策略是施用能引起攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)胞(包括NK細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞語系的細(xì)胞)擴(kuò)充和/或活化的細(xì)胞因子。I期臨床試驗(yàn)顯示了，利妥昔單抗能安全地與IL-2、IL-12、或GM-CSF組合地給予淋巴瘤患者。Rossi等，106:2760(摘要2432)(2005);McLaughlin等，(9"co/.16(增刊5):v68(摘要104)(2005);Ansell等，B/ooJ99:67-74(2002);Eisenbeis等,C7/".C離wL10:6101-6110(2004);GIuck等，C"".C朋cer10:2253-2264(2004);Friedberg等，Br.J//aemato/.117:828-834(2002)。在這些研究中觀察到22-79%的總體客觀應(yīng)答率(overallobjectiveresponserate)和5-45%的完全應(yīng)答率(completeresponserate)。另夕卜，生物標(biāo)志(諸如絕對(duì)NK計(jì)數(shù)和離體ADCC活性)與應(yīng)答率相關(guān)。這些研究中的大多數(shù)主要包括患有復(fù)發(fā)性和頑固性疾病的和患有攻擊性淋巴瘤亞型(DLBCL和套細(xì)胞淋巴瘤)的患者。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及一種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，包括同時(shí)或序貫地給所述患者施用(i)人IL-18多肽(SEQIDNO:16);和(ii)針對(duì)CD20抗原的抗體(其它地方簡(jiǎn)稱為抗CD20抗體)的步驟，用于預(yù)防和/或治療致瘤性疾病。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，包括交錯(cuò)施用(i)人IL-18多肽(SEQIDNO:16);和(ii)針對(duì)CD20抗原的抗體(其它地方簡(jiǎn)稱為抗CD20抗體)的步驟，用于預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)。一方面，本發(fā)明涉及在預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)中使用的人IL-18多肽(SEQIDNO:16)和抗CD20抗體。一方面，本發(fā)明涉及在預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)中同時(shí)或序貫使用(施用)的人IL-18多肽(SEQIDNO:16)和抗CD20抗體。一方面，本發(fā)明涉及人IL-18多肽(SEQIDNO:16)在制備藥物中的用途，所述藥物與抗CD20抗體組合地用于預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)。一方面，本發(fā)明涉及抗CD20抗體在制備藥物中的用途，所述藥物與人IL-18多肽(SEQIDNO:16)組合地用于預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)。一方面，本發(fā)明涉及人IL-18多肽(SEQIDNO:16)和抗CD20抗體在制備藥物中的用途，所述藥物用于預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)。一方面，本發(fā)明涉及在預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)中與抗CD20抗體組合使用的人IL-18多肽(SEQIDNO:16)。一方面，本發(fā)明涉及在預(yù)防和/或治療致瘤性疾病(癌癥)中與人IL-18多肽(SEQIDNO:16)組合使用的抗CD20抗體。人IL-18多肽和抗CD20抗體可以分開、序貫和/或同時(shí)施用。此外，人IL-18多肽和抗CD20抗體可以以交錯(cuò)方式施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，在所述抗CD20抗體前施用所述人IL-18多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，在所述人IL-18多肽前施用所述抗CD20抗體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗CD20抗體是單克隆的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗CD20抗體具有Fc介導(dǎo)的效應(yīng)器功能。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗CD20抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗CD20抗體是嵌合的、人源化的或人的單克隆抗體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的單克隆抗體(抗CD20抗體)是選自下組的全長(zhǎng)抗體全長(zhǎng)IgGl抗體、全長(zhǎng)IgG2抗體、全長(zhǎng)IgG3抗體、全長(zhǎng)IgG4抗體、全長(zhǎng)IgM抗體、全長(zhǎng)IgAl抗體、全長(zhǎng)IgA2抗體、全長(zhǎng)分泌性IgA抗體、全長(zhǎng)IgD抗體、和全長(zhǎng)IgE抗體，其中所述抗體在真核細(xì)胞中糖基化。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗CD20抗體是全長(zhǎng)抗體，諸如全長(zhǎng)IgGl抗體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗CD20抗體是抗體片段，諸如scFv或UniBodyTM(如WO2007/059782中所披露的單價(jià)抗體)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體是結(jié)合域免疫球蛋白融合蛋白，其包含(i)與免疫球蛋白鉸鏈區(qū)多肽融合的處于SEQIDNO:l的重鏈可變區(qū)或SEQIDNO:2的輕鏈可變區(qū)形式的結(jié)合域多肽，(ii)與鉸鏈區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，和(iii)與CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體以至少與對(duì)人CD20相同的親和力結(jié)合突變型P172SCD20(第172位脯氨酸突變成絲氨酸)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體結(jié)合CD20上的如下表位(i)其不包含或者不需要氨基酸殘基第172位脯氨酸；(ii)其不包含或者不需要氨基酸殘基第170位丙氨酸或第172位脯氨酸；(iii)其包含或者需要氨基酸殘基第163位天冬酰胺和第166位天冬酰胺；(iv)其不包含或者不需要氨基酸殘基第172位脯氨酸，但是其包含或者需要氨基酸殘基第163位天冬酰胺和第166位天冬酰胺；或(v)其不包含或者不需要氨基酸殘基第170位丙氨酸或第172位脯氨酸，但是其包含或者需要氨基酸殘基第163位天冬酰胺和第166位天冬酰胺。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體結(jié)合人CD20的第一胞外小環(huán)中的表位。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體結(jié)合CD20上的不連續(xù)表位。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體結(jié)合CD20上的不連續(xù)表位，其中所述表位包含第一胞外小環(huán)的一部分和第二胞外環(huán)的一部分。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體結(jié)合CD20上的不連續(xù)表位，其中所述表位具有第一胞外d、環(huán)的殘基AGIYAP和第二胞外環(huán)的殘基MESLNFIRAHTPYI。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體具有一項(xiàng)或多項(xiàng)選自下組的特征(i)能夠在存在補(bǔ)體的情況中對(duì)表達(dá)CD20的細(xì)胞誘導(dǎo)補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC);(ii)能夠在存在補(bǔ)體的情況中對(duì)表達(dá)CD20和高水平的CD55和/或CD59的細(xì)胞誘導(dǎo)補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC);(iii)能夠?qū)Ρ磉_(dá)CD20的細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡；(iv)能夠在存在效應(yīng)細(xì)胞的情況中對(duì)表達(dá)CD20的細(xì)胞誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC);(v)能夠?qū)Ρ磉_(dá)CD20的細(xì)胞誘導(dǎo)同型粘附；(vi)能夠在結(jié)合CD20后移位入脂筏中；(vii)能夠消減表達(dá)CD20的細(xì)胞；(viii)能夠消減表達(dá)低水平CD20的細(xì)胞(低CD20細(xì)胞)；和(ix)能夠有效地消減人組織中原位的B細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體包含選自SEQIDNO:5、9、或U的VHCDR3序列。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體包含SEQIDNO:3的VHCDR1、SEQIDNO:4的VHCDR2、SEQIDNO:5的VHCDR3、SEQIDNO:6的VLCDR1、SEQIDNO:7的VLCDR2和SEQIDNO:8的VLCDR3序列。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體包含SEQIDNO:IO的VHCDR1-CDR3跨越序列。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述針對(duì)CD20的抗體具有這樣的人重鏈可變區(qū)和人輕鏈可變區(qū)，它們分別包含SEQIDNO:l和SEQIDNO:2中所列出的氨基酸序列；或分別與SEQIDNO:l和SEQIDNO:2中所列出的氨基酸序列至少95%同源，且更優(yōu)選至少98%，或至少99%同源的氨基酸序列。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述CD20結(jié)合分子選自WO2004/035607中所披露的抗CD20抗體之一，諸如Ofatumumab(2F2)、11B8、或7D8;WO2005/103081中所披露的抗體之一，諸如2C6;WO2004/103404中所披露的抗體之一，AME-133(—種人源化的且經(jīng)過優(yōu)化的抗CD20單克隆抗體，由AppliedMolecularEvolution所開發(fā)的)；US2003/0118592中所披露的抗體之一，TRU-015(CytoxB20G，自抗CD20抗體上的關(guān)鍵域衍生的小模塊免疫藥學(xué)融合蛋白，由TrubionPharmaceuticalsInc所開發(fā)的)；WO2003/68821中所披露的抗體之一，IMMU-106(—種人源化抗CD20單克隆抗體)；WO2004/56312中所4皮露的抗體之一，Ocrelizumab(2H7.v16、PRO-70769、R-1594);Bexxar(托西莫單抗(Tositumomab));和Rituxan⑧/MabThera(利妥昔單抗)。術(shù)語"CD20"和"CD20抗原"在本文中可互換使用，包括由細(xì)胞天然表達(dá)的或者在經(jīng)CD20基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞上表達(dá)的人CD20的任何變體、同等型和物種同系物。如本領(lǐng)域中所公認(rèn)的，CD20的同義詞包括B淋巴細(xì)胞表面抗原B1、Leu-16和Bp35。人CD20具有UniProtKB/Swiss-Prot條目Pl1836。如本文中所使用的，術(shù)語"免疫球蛋白"指一類結(jié)構(gòu)上相關(guān)的糖蛋白，其由兩對(duì)多肽鏈組成，即一對(duì)低分子量的輕(L)鏈和一對(duì)重(H)鏈，所有四者通過二硫鍵而相互連接。免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)已經(jīng)被充分表征。參見例如FundamentalImmunology第7章(Paul,W.編,第2版RavenPress,N.Y(1989))。簡(jiǎn)言之，每條重《連通常由重鏈可變區(qū)(在本文中縮寫為VH)和重鏈恒定區(qū)構(gòu)成。重鏈恒定區(qū)CH通常由三個(gè)結(jié)構(gòu)域(即CH1、CH2、和CH3)構(gòu)成。每條輕鏈通常由輕鏈可變區(qū)(在本文中縮寫為VL)和輕鏈恒定區(qū)構(gòu)成。輕鏈恒定區(qū)通常由一個(gè)結(jié)構(gòu)域(即CL)構(gòu)成。VH區(qū)和VL區(qū)可以進(jìn)一步細(xì)分成高變異性的區(qū)域(或可在結(jié)構(gòu)限定環(huán)的形式和/或序列方面高變的高變區(qū))，也稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR),其用更保守的、稱為框架區(qū)(FR)的區(qū)域點(diǎn)綴。每個(gè)VH和VL通常由三個(gè)CDR和四個(gè)FR構(gòu)成，以如下次序從氨基端至羧基端排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4(還可參見Chothia和LeskJ.Mol.Biol.196,901-917(1987))。典型地，通過Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991)中所描述的方法來實(shí)施此區(qū)域中氨基酸殘基的編號(hào)(諸如如Kabat中的或依照Kabat的可變域殘基編號(hào)(方式)等短語在本文中指用于重鏈可變域或輕鏈可變域的這種編號(hào)系統(tǒng))。使用此編號(hào)系統(tǒng)，肽的實(shí)際線性氨基酸序列可以含有較少或額外的氨基酸，對(duì)應(yīng)于可變域FR或CDR的縮短或插入。例如，重鏈可變域可包含VHCDR2殘基52后的單一氨基酸插入(例如依照Kabat的殘基52a)及重鏈FR殘基82后的多個(gè)插入殘基(例如依照Kabat的殘基82a、82b和82c等)。給定抗體的Kabat殘基編號(hào)可通過將抗體序列與"標(biāo)準(zhǔn)"Kabat編號(hào)序列比對(duì)同源區(qū)來確定。如本文中所使用的，術(shù)語"抗體"指這樣的免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的片段、或其中任一者的衍生物，其具有在典型的生理學(xué)條件下特異性結(jié)合抗原達(dá)顯著的一段時(shí)間的能力，諸如至少約30分鐘、至少約45分鐘、至少約1小時(shí)、至少約2小時(shí)、至少約4小時(shí)、至少約8小時(shí)、至少約12小時(shí)、約24小時(shí)或更長(zhǎng)、約48小時(shí)或更長(zhǎng)、約3天、4天、5天、6天、7天或更長(zhǎng)等，或任何其它有關(guān)的功能限定的時(shí)間段(諸如足以誘導(dǎo)、促進(jìn)、增強(qiáng)、和/或調(diào)效應(yīng)器活性的時(shí)間)。免疫球蛋白分子的重鏈和輕鏈可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合域?？贵w的恒定區(qū)可以介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，包括免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞(諸如效應(yīng)細(xì)胞)和補(bǔ)體系統(tǒng)的成分，諸如Clq(補(bǔ)體激活經(jīng)典途徑中的第一種成分)?？笴D20抗體可以是單特異性的、雙特異性的、或多特異性的。實(shí)際上，在CD20的一部分之外，本發(fā)明所提供的雙特異性抗體、雙抗體等還可以結(jié)合任何合適的耙物。如上文所指明的，術(shù)語"抗體"在本文中使用時(shí)(除非另有說明或者內(nèi)容明顯相矛盾)包括通過任何已知技術(shù)(諸如酶促切割、肽合成和重組技術(shù))所提供的保留特異性結(jié)合抗原的能力的抗體片段。已經(jīng)顯示了，可以通過全長(zhǎng)(完整)抗體的片段來實(shí)施抗體的抗原結(jié)合功能。術(shù)語"抗體"內(nèi)所涵蓋的抗原結(jié)合片段的例子包括但不限于(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1域組成的單價(jià)片段；(ii)F(ab)2和F(ab，)2片段，即包含由鉸鏈區(qū)處的二硫橋相連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(iii)Fd片段，其基本上由VH和CH1域組成；(iv)Fv片段，其基本上由抗體單臂的VL和VH域組成；(v)dAb片段(Ward等,Nature341，544546(1989))，其基本上由VH域組成，也稱為域抗體(Holt等(2003年11月)TrendsBiotechnol.21(11):484-90);(vi)羊駝(camelid)抗體或納米體(nanobody)(Revets等(2005年1月)ExpertOpinBiolTher.5(1):111-24);(vii)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，諸如VHCDR3;(viii)UniBodyTM(WO2007/059782中所披露的一種單價(jià)抗體)；(ix)單鏈抗體或單鏈Fv(scFv),參見例如Bird等，Science242,423-426(1988)和Huston等，PNASUSA85，5879-5883(1988);(x)雙抗體(scFv二聚物)(其可以是單特異性的或雙特異性的)(關(guān)于雙抗體的說明參見例如PNASUSA90(14),6444-6448(1993)、EP404097或WO93/11161)、三抗體或四抗體。雖然此類片段一般包括在抗體的定義之內(nèi)，但是它們共同地和各自獨(dú)立地是本發(fā)明的獨(dú)特特征，展現(xiàn)出不同的生物學(xué)特性和效用。在本文中進(jìn)一步討論了本發(fā)明語境中的這些和其它有用的抗體片段。應(yīng)當(dāng)理解的是，術(shù)語抗體一般包括單克隆抗體以及多克隆抗體?？贵w可以是人的、人源化的、嵌合的、鼠的等。所生成的抗體可以擁有任何同種型。如本文中所使用的，術(shù)語"人抗體"意圖包括具有自人種系免疫球蛋白序列衍生的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可以包括不是由人種系免疫球蛋白序列所編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機(jī)或位點(diǎn)特異性誘變或通過體內(nèi)體細(xì)胞突變而導(dǎo)入的突變)。不過，如本文中所使用的，術(shù)語"人抗體"并不意圖包括如下的抗體，其中自另一種哺乳動(dòng)物物種(諸如小鼠)種系衍生的CD蔣列已經(jīng)被嫁接入人框架序列中。如本文中所使用的，若人抗體是自使用人免疫球蛋白序列的系統(tǒng)獲得的，例如通過免疫攜帶人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或者通過篩選人免疫球蛋白基因文庫(kù)來實(shí)現(xiàn)，且其中選定的人抗體與由種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列在氨基酸序列方面至少90%，諸如至少95%，例如至少96%,諸如至少97%,例如至少98%,或諸如至少99%相同，則所述人抗體"衍生自"特定的種系序列。典型地，自特定人種系序列衍生的人抗體會(huì)展示出相對(duì)于由種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列的不超過10處氨基酸差異，諸如不超過5處，例如不超過4處、3處、2處、或l處氨基酸差異。對(duì)于VH抗體序列，VHCDR3域不包括在此比較之中。術(shù)語"嵌合抗體"指含有一個(gè)或多個(gè)來自一種抗體的區(qū)域和一個(gè)或多個(gè)來自一種或多種其它抗體的區(qū)域的抗體。術(shù)語"嵌合抗體"包括單價(jià)的、二價(jià)的、或多價(jià)的抗體。單價(jià)嵌合抗體是由經(jīng)由二硫橋與嵌合L鏈相聯(lián)合的嵌合H鏈所形成的二聚物(HL)。二價(jià)嵌合抗體是由經(jīng)由至少一個(gè)二硫橋相聯(lián)合的兩個(gè)HL二聚物所形成的四聚物(H2L2)。也可以生成多價(jià)嵌合抗體，例如通過采用裝配成具有2個(gè)以上結(jié)合位點(diǎn)的分子的CH區(qū)(例如來自IgMH鏈，或p鏈的)來實(shí)現(xiàn)。典型地，嵌合抗體指如下的抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與自特定物種衍生或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與自另一物種衍生或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(參見例如US4,816,567和Morrison等，PNASUSA81,6851-6855(1984))。通過本領(lǐng)域中/>知的重組方法來生成嵌合抗體(參見例如Cabilly等，PNASUSA81,3273-3277(1984);Morrison等，PNASUSA81,6851-6855(1984);Boulianne等,Nature312，643-646(1984);EP125023;Neuberger等，Nature314,268-270(1985);EP171496;EP173494;WO86/01533;EP184187;Sahagan等，J.Immunol.137，1066-1074(1986);WO87/02671;Liu等，PNASUSA84,3439-3443(1987);Sun等,PNASUSA84,214-218(1987);Better等，Science240，1041-1043(1988)和Harlow等，Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.，(1988))。術(shù)語"人源化抗體，，指最低限度含有自非人抗體衍生的序列的人抗體。典型地，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區(qū)殘基用具有期望特異性、親和力和/或能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、家兔或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的高變區(qū)殘基替換得到的抗體。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。可以進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。一般而言，人源化抗體會(huì)包含至少一個(gè)、通常兩個(gè)基本上整個(gè)如下的可變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還會(huì)包含至少部分人免疫球蛋白恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones等，Nature321,522-525(1986);Riechmann等，Nature332，323-329(1988)和Presta,CumOp.Struct.Biol.2,593-596(1992)。如本文中所使用的，術(shù)語"單克隆抗體"或"單克隆抗體組合物"指單一分子組成的抗體分子的制備物。單克隆抗體組合物展示對(duì)特定表位的單一結(jié)合特異性和親和力。因而，術(shù)語"人單克隆抗體，，指具有自人種系免疫球蛋白序列衍生的可變區(qū)和恒定區(qū)的、展示單一結(jié)合特異性的抗體。人單克隆抗體可以由包括與永生化細(xì)胞融合的B細(xì)胞的雜交瘤生成，所述B細(xì)胞自具有包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組的轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體非人動(dòng)物(諸如轉(zhuǎn)基因小鼠)獲得。如本文中所使用的，術(shù)語"重組人抗體，，包括通過重組手段所制備、表達(dá)、創(chuàng)建或分離的所有人抗體，諸如(a)自人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體動(dòng)物(諸如小鼠)或自其制備的雜交瘤(在本文中別處進(jìn)一步描述的)分離的抗體，(b)自為了表達(dá)該抗體而轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞(諸如轉(zhuǎn)染瘤)分離的抗體，(c)自重組的、組合的人抗體文庫(kù)分離的抗體，和(d)通過牽涉將人免疫12球蛋白基因序列剪接至其它DNA序列的任何其它手段所制備、表達(dá)、創(chuàng)建或分離的抗體。此類重組人抗體具有自人種系免疫球蛋白序列衍生的可變區(qū)和恒定區(qū)。然而，在某些實(shí)施方案中，此類重組人抗體可以進(jìn)行體外誘變(或者，在使用人Ig序列的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，進(jìn)行體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，如此重組抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列是如下的序列，所述序列雖然衍生自人種系VH和VL序列并與其相關(guān)，但是可以并非天然存在于體內(nèi)人抗體種系全集內(nèi)。術(shù)語"轉(zhuǎn)基因的非人動(dòng)物"指具有包含一種或多種人重鏈和/或輕鏈轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體(或是整合入或是未整合入動(dòng)物的天然基因組DNA中)的基因組且能夠表達(dá)完全人的抗體的非人動(dòng)物。例如，轉(zhuǎn)基因小鼠可以具有人輕鏈轉(zhuǎn)基因和人重鏈轉(zhuǎn)基因或人重鏈轉(zhuǎn)染色體，使得該小鼠在用CD20抗原和/或表達(dá)CD20的細(xì)胞免疫時(shí)生成人抗CD20抗體?？梢詫⑷酥劓溵D(zhuǎn)基因整合入小鼠的染色體DNA中，正如轉(zhuǎn)基因小鼠的情況，例如HuMAb-Mouse⑧，諸如HCo7或HCol2小鼠，或者可以將人重鏈轉(zhuǎn)基因在染色體外維持，正如WO02/43478中所記載的轉(zhuǎn)染色體KM-Mouse⑧的情況。此類轉(zhuǎn)基因和轉(zhuǎn)染色體小鼠(在本文中統(tǒng)稱為"轉(zhuǎn)基因小鼠")能夠通過經(jīng)歷V-D-重組和同種型轉(zhuǎn)換而生成針對(duì)給定抗原的人單克隆抗體的多種同種型(諸如IgG、IgA、IgM、IgD和/或IgE)。轉(zhuǎn)基因的非人動(dòng)物還可以用于生成針對(duì)特定抗原的抗體，其通過導(dǎo)入編碼此特定抗體的基因來實(shí)現(xiàn)，例如通過將所述基因可操作連接至動(dòng)物乳汁中所表達(dá)的基因。能預(yù)防和/或治療的致瘤性疾病(癌癥)包括B細(xì)胞淋巴瘤，例如非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin，slymphoma,NHL)，包括前體B細(xì)胞成淋巴細(xì)胞性白血病/'淋巴瘤(precursorBcelllymphoblasticleukemia/lymphoma)禾口成熟B纟田胞新生物(matureBcellneoplasm),諸如B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病(Bcellchroniclymhocyticleukemia,CLL)/小淋巴纟田胞性淋巴瘤(smalllymphocyticlymphoma,SLL)、B細(xì)月包幼淋巴細(xì)月包寸生白血病(Bcellprolymphocyticleukemia)、淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤(lymphoplasmacyticlymphoma)、套細(xì)胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma,MCL)、濾泡性'淋巴瘤(follicularlymphoma,FL)，包括低級(jí)、中級(jí)和高級(jí)FL,皮膚濾泡中心淋巴瘤(cutaneousfolliclecenterlymphoma)、邊緣區(qū)B細(xì)月包、淋巴瘤(marginalzoneBcelllymphoma)(MALT型、結(jié)和脾型)、毛細(xì)胞性白血病(hairycellleukemia)、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuselargeBcelllymphoma)、伯基特氏、淋巴瘤(Burkitt，slymphoma)、漿細(xì)胞瘤(plasmacytoma)、漿細(xì)月包性骨髓瘤(plasmacellmyeloma)、移植后淋巴增殖'f生病癥(post-transplantlymphoproliferativedisorder)、瓦爾登其斤凈爭(zhēng)4侖氏巨J求蛋白血癥(AValdenstrom，smacroglobulinemia)、間變寸生大纟田月包淋巴瘤(anaplasticlarge-celllymphoma,ALCL)、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤(T-cellNon-Hodgkin，slymphoma);何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin，slymphoma);和黑素瘤(melanoma)。附圖簡(jiǎn)述圖l顯示了天然人IL-18的氨基酸序列(SEQIDNO:16)。圖2顯示了鼠IL-18的氨基醋列(SEQIDNO:17)。圖3顯示了與Rituxan⑧組合的mlL-18(SEQIDNO:17)在人B細(xì)胞淋巴瘤鼠模型中的抗肺瘤活性。CR代表完全消退。圖4顯示了在使用GraphPadPrism⑧對(duì)來自圖3的數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖和分析時(shí)的統(tǒng)計(jì)顯著性。具體地，此圖比較植入后第19天的腫瘤體積。圖5顯示了人B細(xì)胞淋巴瘤模型中鼠IL-18(SEQIDNO:17)/Rituxan⑧組合的植入后第25天胂瘤體積。圖6A和圖6B顯示了人B細(xì)胞淋巴瘤模型中鼠IL-18(SEQIDNO:17)/Rituxan⑧組合的肺瘤生長(zhǎng)體積中值和均值。圖7和圖8顯示了人B細(xì)胞淋巴瘤模型中鼠IL-18(SEQIDNO:17)/Rituxan⑧組合的植入后第27天腫瘤體積，與任一單獨(dú)的藥劑相比。圖9顯示了作為單一療法或與鼠IL-18(SEQIDNO:17)組合的Ofatumumab(HuMax-CD20⑧)對(duì)皮下Ramos人淋巴瘤在SCID小鼠中生長(zhǎng)的影響(11=6只小鼠/組；均值和SD)。(HuMax指Ofatumumab。)圖10顯示了接種后第28天作為單一療法或與鼠IL-18(SEQIDNO:17)組合的Ofatumumab在SCID小鼠中在皮下Ramos人淋巴瘤模型中的效果(n=6只小鼠/組；均值+/-SD)。(HuMax指Ofatumumab。)發(fā)明詳述因?yàn)槟[瘤通常是非免疫原性的，所以臨床前研究的焦點(diǎn)聚焦于IL-18與單克隆抗體的聯(lián)合療法。組合兩種不同藥劑(每種藥劑具有不同的腫瘤殺傷機(jī)制)導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性。下文呈現(xiàn)IL-18聯(lián)合療法的例子。實(shí)施例l聚焦于與Rituxan⑧組合的IL-18在人B細(xì)胞淋巴瘤中的應(yīng)用。此14研究的目的是調(diào)查IL-18和Rituxan⑧的組合在人B細(xì)胞淋巴瘤模型中是否提供超過單獨(dú)的IL-18或Rituxan⑧的單一療法的益處。IL-18與單克隆抗體的組合(例如IL-18與利妥昔單抗(Rituxan⑧))在晚期肺瘤模型(SCID小鼠異種移植物)中顯示協(xié)同性抗肺瘤活性。因?yàn)槔孜魡慰箖H結(jié)合表達(dá)CD20的人胂瘤細(xì)胞，所以在SCID小鼠中在人淋巴瘤異種移植物模型中實(shí)施抗肺瘤活性的評(píng)估。另一個(gè)實(shí)施例是調(diào)查IL-18與其它臨床上有關(guān)的癌癥治療的組合是否會(huì)導(dǎo)致優(yōu)于單獨(dú)的單一療法的增強(qiáng)的抗腫瘤活性?，F(xiàn)在我們已經(jīng)證明了，Ofatumumab與IL-18—起在聯(lián)合療法中使用時(shí)在Ramos人異種移植物模型中具有協(xié)同效應(yīng)。如此，抗CD20抗體與IL-18的組合提供超過單獨(dú)的IL-18或抗CD20抗體的單一療法的益處。與單克隆抗體的組合提供增強(qiáng)殺死腫瘤細(xì)胞的ADCC機(jī)制的潛力。針對(duì)CD20的抗體在與mlL-18(SEQIDNO:17)組合時(shí)顯示抗肺瘤活性的增強(qiáng)。數(shù)種機(jī)制可能4足成例如Rituxan⑧的功效；然而，越來越多的證據(jù)提示，ADCC在施用Rituxan⑧后的腫瘤細(xì)胞消除中起重要作用。在抗體的恒定(Fc)區(qū)結(jié)合至效應(yīng)細(xì)胞(諸如天然殺傷(NK)細(xì)胞或單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞)表面上的Fc受體后ADCC被觸發(fā)。缺乏Fc受體的小鼠中的一項(xiàng)研究顯示了，Rituxan對(duì)人B細(xì)胞淋巴瘤的效果被消除(Uchida等2004;199(12):1659)。如此，攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)^^對(duì)于Rituxan⑧的功效是至關(guān)重要的。CD16a(FcYRina)是人體內(nèi)的重要Fc受體，其由NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表達(dá)。實(shí)施例l中的數(shù)據(jù)支持如下假說，即NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC對(duì)于Rituxan⑧療法在淋巴瘤患者中的效力是重要的。一種用于改善Rituxan⑧功效的有希望的策略是施用能？1起攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)胞(包括NK細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞)擴(kuò)充和/或活化的細(xì)胞因子，諸如IL-18。實(shí)施例l中用IL-18與Rituxan⑧組合進(jìn)行的臨床前小鼠腫瘤模型研究顯示了超過單一療法的益處。在這種模型中，無法測(cè)試IL-18的全部益處，因?yàn)樵撃Ｐ鸵髢H具有NK功能性細(xì)胞的SCID免疫受損小鼠中的人異種移植物。實(shí)施例l中的數(shù)據(jù)支持的是，這些ADCCNK效應(yīng)細(xì)胞的擴(kuò)充在IL-18和Rituxan⑧組合中顯示益處。Rituxan⑧作為單一療法在所測(cè)試的最高劑量是有活性的。然而，在與mlL-18(SEQIDNO:17)聯(lián)合使用較低劑量的Rituxan⑧時(shí)能看到類似水平的活性，指明兩點(diǎn)，即該才莫型對(duì)Rituxan⑧的才凡制敏感，和響應(yīng)能由IL-18增強(qiáng)。此外，我們?cè)谶@里(圖9，圖10)顯示了，另一種抗CD20抗體(Ofatumumab,HuMax-CD20)具有類似的與IL-18的協(xié)同效應(yīng)。因此，認(rèn)為IL-18與任何其它抗CD20抗體的組合會(huì)顯示相同協(xié)同效應(yīng)。實(shí)施例3是I期臨床方案，用以評(píng)估11^18與利妥昔單抗組合在0020+B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)患者中的安全性和生物學(xué)活性。此研究使用利妥昔單抗與劑量漸增的IL-18的組合的標(biāo)準(zhǔn)治療方案以鑒定安全的且可耐受的，而且給出最大限度的生物學(xué)效應(yīng)(如由選定的生物標(biāo)志例如活化的NK細(xì)胞所表明的)的劑量。鑒于IL-18在以單一療法給轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者施用時(shí)優(yōu)良的安全性和耐受性概況，預(yù)期不會(huì)在該研究中達(dá)到組合的最大限度耐受劑量(MTD);然而，若在非何杰金氏淋巴瘤患者中鑒定出劑量限制性毒性，則將此研究設(shè)計(jì)成限定MTD。實(shí)施例l中的這些數(shù)據(jù)顯示了，抗癌劑與IL-18的組合具有臨床益處，因?yàn)檫@些組合提供了兩種不同作用機(jī)制一種是對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接作用，而IL-18能夠提升患者的免疫細(xì)胞。這兩種機(jī)制能彼此互補(bǔ)，而且潛在地導(dǎo)致持久的、卓越的抗肺瘤活性，這是由于IL-18產(chǎn)生免疫記憶的能力?？偟膩碚f，實(shí)施例1證明IL-18與針對(duì)CD20的抗體的組合導(dǎo)致協(xié)同性和卓越的活性。人IL-18多肽披露于EP0692536A2、EP0712931A2、EP0767178A1、和W097/2441。天然人IL-18("hlL-18，，)的氨基酸序列列于SEQIDNO:16中。人IL-18多肽是干擾素-Y誘導(dǎo)多肽。它們?cè)趯?duì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的誘導(dǎo)中起主要作用，包括誘導(dǎo)T細(xì)胞和脾細(xì)胞生成干擾素i、增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性、和促進(jìn)未接觸抗原的004+T細(xì)胞分化成Thl細(xì)胞。IL-18多肽可以通過公知方法自重組細(xì)胞培養(yǎng)物回收并純化本發(fā)明的IL-18多肽，包括硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水相互作用層析、親和層析、羥磷灰石層析、凝集素層析、和高效液相層析。若多肽在胞內(nèi)合成、分離和/或純化過程中變性，則可采用用于重折疊蛋白質(zhì)的公知技術(shù)來重建活性構(gòu)象。用于純化和生成活性人IL-18的方法在WO01/098455中列出。本發(fā)明還提供了包含人IL-18多肽(SEQIDNO:16)的藥物組合物。此類組合物包含治療有效量的化合物，并可進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。此類藥用載體可以是無菌的液體，諸如水和油，包括那些石油、動(dòng)物、植物或合成起源的，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。可在靜脈內(nèi)施用藥物組合物時(shí)使用水作為載體。也可采用鹽水溶液和右旋糖和甘油水溶液作為液體載體，例如用于可注射溶液。合適的藥用賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。若想要的話，組合物還可含有少量的潤(rùn)濕劑或乳化劑，或pH緩沖劑。這些組合物可以采取溶液、懸浮液、乳液、片劑、丸劑、膠嚢、粉劑、持續(xù)釋放配制劑等形式。組合物可用傳統(tǒng)的粘合劑和載體(諸如甘油三酸酯)配制成栓劑?？诜渲苿┛砂?biāo)準(zhǔn)的載體，諸如藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。合適的藥用載體的例子記載于E.W.Martin的REMINGTON'SPHARMACEUTICALSC正NCES。此類組合物會(huì)含有治療有效量的化合物(通常以純化形式)以及合適量的載體，以便提供用于向患者正確施用的形式。配制劑應(yīng)當(dāng)適合施用模式。在本申請(qǐng)中，具體例示人或鼠IL-18(分別為SEQIDNO:16或17)。然而，本發(fā)明的精神不限于具體的人和鼠IL-18。如此，與SEQIDNO:16或SEQIDNO:17的氨基酸序列具有至少80。/。、85%、90%、95%、或99%同一性的任何多肽可以替代任一SEQIDNO:16或SEQIDNO:17。如此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，與SEQIDNO:16或SEQIDNO:17的氨基酸序列具有至少80。/。、85%、90%、95%、或99。/。同一性的任何多肽定義為IL-18(或IL-18多肽)。對(duì)于氨基酸(多肽)序列，術(shù)語"同一性"指明在用合適的插入或刪除最佳地比對(duì)和比較時(shí)兩種氨基酸序列之間的同一性程度。兩種序列之間的百分比同一性是序列所共享的相同位置的數(shù)目的函數(shù)(即°/。同一性=相同位置數(shù)/位置總數(shù)乘100)，其考慮缺口的數(shù)目，和每處缺口的長(zhǎng)度，這些缺口是實(shí)現(xiàn)兩種序列的最佳比對(duì)而需要導(dǎo)入的。可以使用數(shù)學(xué)算法來實(shí)現(xiàn)兩種序列之間的序列比較和百分比同一性測(cè)定，如下文非限制性實(shí)施例中所描述的。可以使用已經(jīng)收入ALIGN程序(第2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl,Biosci.,4:11-17(1988))算法來測(cè)定兩種氨基酸序列之間的百分比同一性，其使用PAM120權(quán)重殘基表、缺口長(zhǎng)度罰分12和缺口罰分4來進(jìn)行。另外，可以使用已經(jīng)收入GCG軟件包(在http:〃www.gcg.com可獲得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(丄Mol.Biol.48:444-453(1970))算法來測(cè)定兩種氨基酸序列之間的百分比同一性，其使用Blossum62矩陣或PAM250矩陣、和缺口權(quán)重16、14、12、10、8、6、或4和長(zhǎng)度權(quán)重1、2、3、4、5、或6來進(jìn)行。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，依照常規(guī)規(guī)程將組合物配制成適應(yīng)向人類靜脈內(nèi)施用的藥物組合物。通常，用于靜脈內(nèi)施用的組合物是無菌的、等張的水緩沖液中的溶液。在合適的情況中，組合物還可以包括增溶劑和在注射位置減輕疼痛的局部麻醉劑諸如利多卡因(lignocaine)。一般而言，以單位劑量形式分開地或混合在一起地提供各成分，例如指明活性劑數(shù)量的密封容器諸如安瓿或小袋(sachette)中的干的凍干粉或無水濃縮液。若要通過輸注來施用組合物，則其可用裝有無菌的藥用級(jí)水或鹽水的輸液瓶來分配。若通過注射來施用組合物，則可提供一安瓿的無菌注射用水或鹽水，以便可在施用前混合各成分。因而，可以在藥物制造中使用所述多肽。本發(fā)明的藥物組合物可以配制成供胃腸外施用的溶液或凍干粉。使用前可通過添加合適的稀釋劑或其它藥學(xué)可接受載體來使粉末重建。液體配制劑可以是緩沖的、等張的水溶液。合適的稀釋劑的例子是正常的、等張的鹽水溶液、水中的標(biāo)準(zhǔn)的5。/。右旋糖或緩沖的醋酸鈉或醋酸銨溶液。此類配制劑尤其適合于胃腸外施用，但也可用于口服施用或裝在供吸入用的定量吸入器或霧化器中。可能希望向此類藥物組合物添加賦形劑，諸如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉、或檸檬酸鈉?；蛘?，可以以乳劑或糖槳包嚢、制片或制備多肽，供口服施用。可添加藥學(xué)可接受的固體或液體載體以增強(qiáng)或穩(wěn)定組合物，或促進(jìn)組合物的制備。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸4丐二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯膠、瓊脂、或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水、和水。載體還可包括單獨(dú)的或與蠟一起的持續(xù)釋放物質(zhì)，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。固體載體的量有所不同，但是會(huì)在每劑量單位約20mg至約1g之間。藥物制劑遵循常規(guī)藥學(xué)技術(shù)來制備，對(duì)于片劑形式，在合適時(shí)牽涉碾磨、混合、?；?、和壓緊；或者對(duì)于明膠硬膠嚢形式，牽涉碾磨、混合和填料。在使用液體載體時(shí)，制劑會(huì)采取糖漿、酏劑、乳劑、或水的、或非水的懸浮液形式。這樣的液體配制劑可通過口(p.o.)直接施用或填充入明膠軟膠嚢中。人IL-18多肽可制備為在藥學(xué)可接受載體中含有有效量的作為活性成分的多肽的藥物組合物。在本發(fā)明的組合物中，可以采用含有多肽的、緩沖于生理學(xué)pH的、準(zhǔn)備好進(jìn)行注射的形式的水懸浮液或溶液。供胃腸外施用的組合物通常會(huì)包含在藥學(xué)可接受的載體(諸如水性載體)中溶解的本發(fā)明多肽或其混合物的溶液。可以采用多種水性載體，例如0.4%鹽水、0.3%甘氨酸等。這些溶液是無菌的，且通常沒有顆粒物。這些溶液可以通過常規(guī)的、公知的滅菌技術(shù)(例如過濾)來滅菌。組合物可以含有接近生理學(xué)條件所要求的藥學(xué)可接受的輔助物質(zhì)，諸如pH調(diào)節(jié)和緩沖劑等。依照選定的特定施用模式，本發(fā)明的多肽在此類藥物配制劑中的濃度可以有廣泛變化，即從小于約0.5%，通常為或至少約1%，至多達(dá)15或20%(按重量計(jì))，并且主要會(huì)根據(jù)液體體積、粘度等來選擇。如此，用于肌肉內(nèi)注射的本發(fā)明藥物組合物可以制備成含有1mL無菌緩沖水，和約lng-約100mg之間(例如約50ng-約30mg,或約5mg-約25mg)的本發(fā)明多肽。類似地，用于靜脈內(nèi)輸注的本發(fā)明藥物組合物可以制成含有約250mL無菌林格氏(Ringer)溶液，和約lmg-約30mg、或約5mg-約25mg的本發(fā)明多肽。用于制備可胃腸外施用的組合物的現(xiàn)行方法是公知的或者對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)是顯而易見的，而且更詳細(xì)地記載于例如REMINGTON，SPHARMACEUTICALSCIENCE,第15版，MackPublishingCompany,Easton,Pennsylvania。本發(fā)明的多肽在以藥物制劑制備時(shí)可以以單位劑量形式存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地確定合適的治療有效劑量。若合適的話，可以在響應(yīng)期期間以內(nèi)科醫(yī)生酌情選定的合適時(shí)間間隔重復(fù)這樣的劑量。另外，任選的是，可以采用體外測(cè)定法來幫助鑒定最佳劑量范圍。配制劑中要采用的精確劑量還會(huì)取決于施用路徑、和疾病或病癥的嚴(yán)重性，并且應(yīng)當(dāng)依照從業(yè)人員的判斷和每名患者的情況決定。有效劑量可以從自體外或動(dòng)物模型測(cè)試系統(tǒng)推導(dǎo)的劑量-響應(yīng)曲線外推。對(duì)于多肽，給患者施用的劑量通常是0.1mg/kg至100mg/kg患者體重。給患者施用的劑量可以在0.1mg/kg和20mg/kg患者體重之間，或者，lmg/kg至10mg/kg患者體重。一般而言，人多肽具有比來自其它物種的多肽要長(zhǎng)的人體內(nèi)半衰期，這是由于對(duì)外來多肽的免疫應(yīng)答。如此，人多肽的較低劑量和較不頻繁的施用通常是有可能的。此外，可通過f務(wù)飾諸如例如脂化(lipidation)來增強(qiáng)抗體的攝取和組織穿透(例如進(jìn)入腦中)，從而降低本發(fā)明多肽的施用劑量和頻率。本發(fā)明還提供了藥物包或試劑盒，其包含裝有本發(fā)明藥物組合物的一種或多種成分的一個(gè)或多個(gè)容器。任選地，此類容器可以結(jié)合有由管理藥物或生物產(chǎn)品的制備、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的形式的通知，該通知反映該機(jī)構(gòu)對(duì)針對(duì)人體施用的制備、使用或銷售的批準(zhǔn)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒可以裝備有滿足用于治療特定適應(yīng)癥的劑量要求所需要的合適數(shù)目的容器。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物或組合物可以在媒介物(特別是脂質(zhì)體)中投遞(參見Langer,Science249:1527-1533(1990);Treat等，于LIPOSOMESINTHETHERAPYOFINFECTIOUSDISEASEANDCANCER,Lopez-Berestein和Fidler(編)，Liss，NewYork,頁353-365(1989);Lopez-Berestein,同上，頁317-327;通常參見同上)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，化合物或組合物可以在受控釋放系統(tǒng)中投遞。在一個(gè)實(shí)施方案中，可使用泵(參見Langer，見上文；Sefton,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201(1987);Buchwald等,Surgery88:507(1980);Saudek等,N.Engl.J.Med.321:574(1989))。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可使用聚合材料(參見MEDICALAPPLICATIONSOFCONTROLLEDRELEASE,Langer和Wise(編)，CRCPres.,BocaRaton,Fla.(1974);CONTROLLEDDRUGBIOAVAILABILITY,DRUGPRODUCTDESIGNANDPERFORMANCE,Smolen和Ball(編)，Wiley,NewYork(1984);Ranger等，J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61(1983);還可參見Levy等，Science228:190(1985);During等，Ann.Neurol.25:351(1989);Howard等，J.Neurosurg.71:105(1989))。在又一個(gè)實(shí)施方案中，受控釋放系統(tǒng)可放置在治療靶(即腦)的附近，如此僅需要系統(tǒng)劑量的一部分(參見例如Goodson,于MEDICALAPPLICATIONSOFCONTROLLEDRELEASE,見上文，巻2,頁115-138(1984))。Langer(Science249:1527-1533(1990))的綜述中討論了其它受控釋放系統(tǒng)。人IL-18多肽(SEQIDNO:16)可以通過任何合適的內(nèi)部3各徑施用，而且可以根據(jù)需要重復(fù)，例如頻率為每天l-3次持續(xù)l天-約3周之間至每周一次或兩周一次?；蛘?，可改變所述肽以降低電荷密度，如此容許口服生物利用度。且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)所治療的疾患和患者的一般健康來調(diào)整。本發(fā)明提供了通過給人患者施用有效量的包含人IL-18多肽(SEQIDNO:16)的本發(fā)明藥物組合物或化合物來治療、抑制和預(yù)防的方法。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，化合物是基本上純化的(例如基本上沒有限制其效果或產(chǎn)生不想要的副作用的物質(zhì))?？稍诨衔锇衔乃枋龅亩嚯臅r(shí)采用配制劑和施用方法；可從那些下文中所描述的之中選擇別的合適的配制劑和施用路徑。多種投遞系統(tǒng)是已知的，并且可用于施用本發(fā)明的化合物，例如脂質(zhì)體、微粒、微膠嚢中的包嚢，能夠表達(dá)該化合物的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的胞吞(參見例如Wu等，J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))、構(gòu)建作為逆轉(zhuǎn)錄病毒或其它載體的一部分的核酸等。導(dǎo)入方法包括但不限于真皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜外、和口服路徑。化合物或組合物可通過任何便利路徑，例如通過輸注或推注，通過經(jīng)由上皮或粘膜皮膚襯里(例如口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)的吸收來施用，并且可以與其它生物學(xué)活性劑一起施用。施用可以是系統(tǒng)的或局部的。另外，可能想要的是，通過任何合適的路徑(包括腦室內(nèi)和鞘內(nèi)注射)將本發(fā)明的藥物化合物或組合物導(dǎo)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)中；可用例如附接至貯器(諸如Ommaya貯器)的腦室內(nèi)導(dǎo)管來促進(jìn)腦室內(nèi)注射。還可采用肺部施用，例如通過使用吸入器或噴霧器和含霧化劑的配制劑實(shí)現(xiàn)?？笴D20抗體具有本領(lǐng)域普通技術(shù)的內(nèi)科醫(yī)生或獸醫(yī)能容易地確定和規(guī)定有效量的包含抗CD20抗體的藥物組合物。例如，內(nèi)科醫(yī)生或獸醫(yī)可以以低于實(shí)現(xiàn)想要的治療效果所要求水平的水平開始藥物組合物中所采用的本發(fā)明化合物的劑量，并逐漸增加劑量，直至實(shí)現(xiàn)想要的效果。一般而言，本發(fā)明組合物的合適的日劑量會(huì)是有效產(chǎn)生治療效果的最低劑量的化合物量。優(yōu)選的是，施用是靜脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、或皮下的。若想要的話，可以作為一整天中以合適的時(shí)間間隔分開施用的2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)或更多亞劑量，任選地，以單位劑量形式施用治療組合物的有效日劑量。雖然抗CD20抗體可能凈皮單獨(dú)施用，但是優(yōu)選以藥物配制劑(組合物)施用該化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以通過輸注以周劑量10至2000mg/m2,通常10至500mg/m2，諸如200至400mg/m2，諸如375mg/n^施用依照本發(fā)明的人單克隆抗體。此施用可以重復(fù)，例如1至8次，i者如3至5次?？梢酝ㄟ^連續(xù)輸注在2至24小時(shí)，諸如2至12小時(shí)的一段時(shí)間里實(shí)施施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過緩慢的連續(xù)輸注在一長(zhǎng)段時(shí)間(諸如大于24小時(shí))里施用抗體以降低毒副作用。在又一個(gè)實(shí)施方案中，以周劑量250mg至2000mg,諸如例如300mg、500mg、700mg、1000mg、1500mg或2000mg施用抗體達(dá)多至8次，諸如4至6次?？梢酝ㄟ^連續(xù)輸注在2至24小時(shí)，諸如2至12小時(shí)的一段時(shí)間里實(shí)施施用。此方案可以根據(jù)需要重復(fù)一次或多次，例如在6個(gè)月或12個(gè)月后。通過使用靶向抗CD20抗體的抗獨(dú)特型抗體來測(cè)量施用后生物學(xué)樣品中的循環(huán)抗CD20抗體量，能測(cè)定或調(diào)節(jié)劑量。在又一個(gè)實(shí)施方案中，通過維持療法(諸如例如一周一次持續(xù)6個(gè)月或更長(zhǎng)的一^a時(shí)間)來施用抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含治療有效量的抗CD20抗體的藥物組合物?？梢杂盟帉W(xué)可接受的載體或稀釋劑以及任何其它已知的佐劑和賦形劑依照常規(guī)技術(shù)(諸如那些披露于Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,第19片反，Geimaro編，MackPublishingCo.,Eastern,PA,1995的)來酉己制藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物可以包括稀釋劑、填充劑、鹽、緩沖劑、去污劑(例如非離子型去污劑，諸如Tween-80)、穩(wěn)定劑、穩(wěn)定劑(例如糖類或無蛋白質(zhì)的氨基酸)、防腐劑、組織固定劑、增溶劑、和/或其它適合于包含于藥物組合物中的物質(zhì)。各活性成分在本發(fā)明的藥物組合物中的實(shí)際劑量水平可以有所變化，以便獲得這樣的活性成分量，其有效實(shí)現(xiàn)特定患者、組合物、和施用模式的想要的治療應(yīng)答，而對(duì)該患者沒有毒性。選定的劑量水平會(huì)取決于多種藥動(dòng)學(xué)因素，包括本發(fā)明所采用的特定組合物的活性、施用路徑、施用時(shí)間、所采用的特定化合物的排泄速率、處理的持續(xù)時(shí)間、與所采用的特定組合物聯(lián)合使用的其它藥物、化合物和/或物質(zhì)、所治療的患者的年齡、性別、重量、狀況、一般健康和先前的醫(yī)學(xué)史、及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中公知的類似因素?？梢越?jīng)由任何合適的路徑來施用本發(fā)明的抗CD20抗體，諸如口服、鼻、可吸入、支氣管內(nèi)、肺泡內(nèi)、表面(包括口腔、經(jīng)皮和舌下)、直腸、陰道和/或胃腸外的路徑。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是胃腸外施用的。如本文中所使用的，短語"胃腸外施用，，和"胃腸外施用的，，指除腸施用和表面施用之外的施用模式，通常通過注射實(shí)現(xiàn)，且包括表皮、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、嚢內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、腱內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、嚢下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、顱內(nèi)、胸內(nèi)、硬膜外和胸骨內(nèi)注射和輸注。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過靜脈內(nèi)或皮下注射或輸注來施用藥物組合物。例如，可以在2-8小時(shí)，諸如4小時(shí)里施用藥物組合物，以便降^^副作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過吸入來施用藥物組合物?？笴D20抗體的Fab片段可以適合于此施用路徑，參見Crowe等(1994年2月15日)ProcNatlAcadSciUSA,91(4):1386-13卯。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過皮下注射以晶體形式施用藥物組合物，參見Yang等，PNASUSA100(12),6934-6939(2003)。不管所選定的施用路徑，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法來將抗CD20抗體(其可以以藥學(xué)可接受的鹽的形式或者以合適的水合形式使用)配制成藥學(xué)可接受的劑量形式。"藥學(xué)可接受的鹽"指保持母體化合物想要的生物學(xué)活性，且不給予任何不想要的毒物學(xué)效應(yīng)的鹽(參見例如Berge，S.M.等，J.Pharm.Sci.66,1-19(1977))。此類鹽的例子包括酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括那些衍生自非毒性無機(jī)酸的，諸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸等，以及衍生自非毒性有機(jī)酸的，諸如脂肪族單羧酸和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等。堿加成鹽包括那些衍生自堿土金屬的，諸如鈉、鉀、鎂、鈣等，以及衍生自非毒性有機(jī)胺的，諸如N，N，-二芐基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因等。有合適的溶劑、分散介質(zhì)、涂層、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等張力(調(diào)節(jié))劑、抗氧化劑和吸收延遲劑等。本發(fā)明的藥物組合物中可采用的合適的水性和非水性載體的例子包括水、鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水、乙醇、右旋糖、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其合適的混合物、植物油(諸如橄欖油、玉米油、花生油、棉籽油、和芝麻油)、羧曱基纖維素膠體溶液、黃蓍膠和可注射的有機(jī)酯(諸如油酸乙酯)、和/或多種緩沖劑。其它載體是藥學(xué)領(lǐng)域中公知的。藥學(xué)可接受的載體包括無菌水溶液或分散體和供即時(shí)制備無菌可注射溶液或分散體用的無菌粉劑。對(duì)藥學(xué)活性物質(zhì)使用此類介質(zhì)和藥劑是本領(lǐng)域中已知的。除非任何常規(guī)的介質(zhì)或藥劑與活性化合物不相容，涵蓋其在本發(fā)明的藥物組合物中的應(yīng)用?？梢岳缤ㄟ^使用涂層物質(zhì)(諸如卵磷脂)、在分散體的情況中通過維持所要求的粒度、及通過使用表面活性劑來維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。含有抗CD20抗體的藥學(xué)組合物還可以包含藥學(xué)可接受的抗氧化劑，例如(l)水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉/偏亞硫酸氬鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁羥基茴香醚(BHA)、丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、a-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。本發(fā)明的藥物組合物還可以包含該組合物中的等張劑，諸如糖類、多元醇諸如甘露醇、山梨醇、甘油或氯化鈉。藥學(xué)可接受的稀釋劑包括鹽水和水性緩沖溶液。含有抗CD20抗體的藥物組合物還可以含有一種或多種適合于選定施用路徑的佐劑(諸如防腐劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、分散劑、防腐劑或緩沖劑)，其能增強(qiáng)該藥物組合物的保存期或效力。例如，本發(fā)明的抗CD20抗體可以與乳糖、蔗糖、粉劑(例如淀粉)、鏈烷酸的纖維素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸和硫酸的鈉鹽和鈣鹽、阿拉伯膠、明膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷、和/或聚乙烯醇混合。佐劑的其它例子是QS21、GM-CSF、SRL-172、二鹽酸組胺、胸腺卡汀(thymocartin)、Tio-TEPA、單磷酰脂質(zhì)A/細(xì)桿菌組合物(microbacteriacomposition),明石凡、不完全弗氏佐劑、MontanideISA、Ribi佐劑系統(tǒng)、TiterMax佐劑、Syntex佐劑配制劑、免疫刺激復(fù)合物(ISCOM)、Gerbu佐劑、CpG寡脫氧核苷酸、月旨多糖、和聚肌苷酸:聚胞苷酸?？梢酝ㄟ^以下兩點(diǎn)來確保阻止微生物的存在，即滅菌規(guī)程及包含各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑，例如對(duì)羥苯曱酸酯、氯丁醇、酚、抗壞血酸等。另外，可以通過包含延遲吸收的藥劑諸如單硬脂酸鋁和明膠來引起可注射藥學(xué)形式的吸收延長(zhǎng)。含有抗CD20抗體的藥物組合物可以處于多種合適的形式。此類形式包括例如液體、半固體和固體劑量形式，諸如液體溶液(例如可注射的和可輸注的溶液)、分散體或懸浮液、乳液、微乳液、凝膠、乳劑、粒劑、粉劑、片劑、丸劑、粉劑、脂質(zhì)體、樹狀聚體和其它納米顆粒(參見例如Baek等,MethodsEnzymol.362，240-9(2003),Nigavekar等，PharmRes.21(3)，476-83(2004))、微粒、和栓劑。最佳形式取決于選定的施用模式和組合物的性質(zhì)。配制劑可以包括例如粉劑、糊劑、軟膏劑、凝膠劑、蠟、油、脂質(zhì)、含有脂質(zhì)(陽離子的或陰離子的)嚢泡、DNA偶聯(lián)物、無水吸收糊劑、水包油乳液和油包水乳液、乳液Carbowax(多種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠、和含有Carbowax的半固體混合物。以上各項(xiàng)之任一項(xiàng)在依照本發(fā)明的處理和療法中可能是適合的，在生理學(xué)上與施用路徑相容且可耐受。還可參見例如Powell等，"Compendiumofexcipientsforparenteralformulations"PDAJPharmSciTechnol.52，238-311(1998)及其中關(guān)于涉及對(duì)藥物化學(xué)工作者公知的賦形劑和載體的別的信息的引用?？笴D20抗體可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體一起制備，諸如受控釋放配制劑，包括植入物、透皮貼、和微嚢化投遞系統(tǒng)。此類載體可以包括明膠、甘油單硬脂酸酯、甘油二硬脂酸酯、生物可降解的、生物相容的聚合物，諸如乙烯-乙酸乙烯、聚(酸)肝、聚乙醇酸、膠原、多正酯、和單獨(dú)的或者與蠟一起的聚乳酸、或本領(lǐng)域中公知的其它材料。用于制備此類配制劑的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員一般所知道的。參見例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson編，MarcelDekker,Inc.,NewYork,1978。為了通過某些依照本發(fā)明的施用路徑來施用含有抗CD20抗體的藥物組合物，可能有必要用某種物質(zhì)包被抗CD20抗體，或者共施用抗CD20抗體及某種物質(zhì)，以阻止抗CD20抗體失活。例如，抗CD20抗體可以在合適的載體(例如脂質(zhì)體)或稀釋劑中向受試者施用。脂質(zhì)體包括水包油包水CGF乳液以及常規(guī)的脂質(zhì)體(Strejan等，J.Neuroimmunol.7，27(1984))。根據(jù)施用路徑，可以以某種物質(zhì)包被抗CD20抗體以保護(hù)該抗體免于能使該化合物失活的酸及其它天然條件的作用。例如，抗CD20抗體可以在合適的載體(例如脂質(zhì)體)中向受試者施用。脂質(zhì)體包括水包油包水CGF乳液以及常規(guī)的脂質(zhì)體(Strejan等，J.Neuroimmunol.7,27(1984))。供胃腸外施用的藥學(xué)可接受的載體包括無菌水溶液或分散體和供即時(shí)制備無菌可注射溶液或分散體用的無菌粉劑。對(duì)藥學(xué)活性物質(zhì)使用此類介質(zhì)和藥劑是本領(lǐng)域中已知的。除非任何常規(guī)的介質(zhì)或藥劑與活性化合物不相容，涵蓋其在本發(fā)明的藥物組合物中的應(yīng)用。還可以將輔助的活性化合物摻入該纟且合物。注射用的藥物組合物在制備和貯存條件下通常必須是無菌且穩(wěn)定的。該組合物可以配制為溶液、微乳液、脂質(zhì)體、或適于高藥物濃度的其它有序結(jié)構(gòu)。載體可以是水性或非水性溶劑或分散介質(zhì)，其包含例如水、乙醇、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其合適的混合物、植物油(諸如橄欖油)、和可注射的有機(jī)酯(諸如油酸乙酯)?？梢岳缤ㄟ^使用涂層(諸如卵磷脂)、在分散體的情況中通過維持所要求的粒度、及通過使用表面活性劑來維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。在許多情況中，會(huì)優(yōu)選在組合物中包含等張劑，例如糖類、多元醇諸如甘油、甘露醇、山梨醇、或氯化鈉?？梢酝ㄟ^在組合物中包含延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽和明膠)來引起可注射組合物的吸收延長(zhǎng)?？梢匀缦轮苽錈o菌可注射溶液，即在根據(jù)需要含有一種成分或成分組合(例如如上文所列舉的)的合適溶劑中摻入需要量的活性化合物，接著滅菌微濾。一般而言，分散體通過將活性化合物摻入無菌媒介中而制備，所述無菌媒介含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)及其它所需成分，例如來自那些上文所列舉的。在供制備無菌可注射溶液用的無菌粉劑的情況中，制備方法的例子是真空干燥和冷凍干燥(凍干)，其自先前經(jīng)過無菌過濾的溶液產(chǎn)生含有活性成分和任何別的所需成分的粉末?？梢匀缦轮苽錈o菌可注射溶液，即在根據(jù)需要含有上文所列舉的一種成分或成分組合的合適溶劑中摻入需要量的活性化合物，接著滅菌微濾。一般而言，分散體通過將活性化合物摻入無菌媒介中而制備，所述無菌媒介含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)及來自那些上文所列舉的成分的其它所需成分。在供制備無菌可注射溶液用的無菌粉劑的情況中，制備方法的例子是真空干燥和冷凍干燥(凍干)，其自先前經(jīng)過無菌過濾的溶液產(chǎn)生含有活性成分和任何別的所需成分的粉末。在不背離本發(fā)明的精神或本質(zhì)屬性的前提下，本發(fā)明可以以其它特定的形式體現(xiàn)，因而，應(yīng)當(dāng)參考指明本發(fā)明范圍的所附的權(quán)利要求書，而非上述說明書或下列實(shí)施例。術(shù)語表提供了下列定義以便于理解上文中頻繁使用的某些術(shù)語。如本文中所使用的，"抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)"和"抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能"都屬于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的機(jī)制，由此免疫系統(tǒng)的效應(yīng)細(xì)胞活躍地裂解已經(jīng)被特異性抗體所結(jié)合的靶細(xì)胞。ADCC是抗體(作為體液免疫應(yīng)答的一部分)可經(jīng)由它們而起作用以限制并遏制感染的機(jī)制之一。經(jīng)典的ADCC是由天然殺傷(NK)細(xì)胞介導(dǎo)的，但是嗜曙紅細(xì)胞使用另一種ADCC來殺死某些稱為蠕蟲的寄生蟲。由于ADCC依賴于在先抗體應(yīng)答，其是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的一部分。典型的ADCC牽涉NK細(xì)胞的活化，并依賴于NK細(xì)胞表面上的Fc受體對(duì)被抗體包被的受感染細(xì)胞的識(shí)別。Fc受體識(shí)別結(jié)合至被病原體感染的靶細(xì)胞的表面的抗體(諸如IgG)的Fc(恒定的)部分。NK細(xì)胞表面上存在的Fc受體稱為CD16a或FcyRina。一旦結(jié)合至IgG的Fc受體，天然殺傷細(xì)胞便釋放細(xì)胞因子(諸如IFN-Y)和細(xì)胞毒性顆粒(諸如穿孔素和粒酶)，它們進(jìn)入靶細(xì)胞并通過觸發(fā)凋亡來促進(jìn)細(xì)胞死亡。這種ADCC效應(yīng)器功能類似于，^f旦獨(dú)立于細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的應(yīng)答。如本文中所使用的，術(shù)語"載體"指與治療劑一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒介物。"分離的，，指自其天然狀態(tài)"人為"改變的，即若它在自然界中存在，則它已經(jīng)自其最初環(huán)境改變或取出，或改變和取出兩者。例如，在本文中采用該術(shù)語時(shí)，活生物體中天然存在的多核苷酸或多肽不是"分離的"，但是與其天然狀態(tài)中至少一種與其共存的細(xì)胞物質(zhì)分開的相同多核苷酸或多肽是"分離的"。此外，通過轉(zhuǎn)化、遺傳操作或通過任何其它重組方法導(dǎo)入生物體中的多核香酸或多肽是"分離的"，即使它仍存在于所述生物體中，所述生物體可以是活的或無生命的。如本文中所使用的，術(shù)語"藥物的"或"藥學(xué)的"或"藥用的"包括本發(fā)明的獸醫(yī)應(yīng)用。術(shù)語"治療有效量"指對(duì)緩和選定的疾患有用的治療劑量。如本文中所使用的，術(shù)語"藥學(xué)可接受的"意味著獲得聯(lián)邦或州政府管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或美國(guó)藥典或其它普遍認(rèn)可的藥典中所列的在動(dòng)物中，更具體地在人中^f吏用的。"多肽，，指任何包含兩個(gè)或更多個(gè)彼此由肽鍵或修飾的肽鍵(即肽等排體)相連接的氨基酸的多肽。"多肽，，指短鏈(通常稱為肽、寡肽或寡聚物)和較長(zhǎng)的鏈(通常稱為蛋白質(zhì))兩者。多肽可以含有20種基因編碼的氨基酸以外的氨基酸。"多肽"包括通過天然過程(諸如翻譯后加工)或通過本領(lǐng)域中公知的化學(xué)修飾技術(shù)修飾的氨基酸序列。此類修飾詳細(xì)記載于基礎(chǔ)教科書和更詳細(xì)的專著，以及多巻的研究文獻(xiàn)中。修飾可以在多肽中的任何地方發(fā)生，包括肽主鏈、氨基酸側(cè)鏈和氨基或羧基末端?？梢灶I(lǐng)會(huì)的是，相同類型的修飾可以以相同或不同程度存在于給定多肽中的數(shù)個(gè)位點(diǎn)。還有，給定多肽可以含有許多類型的修飾。多肽可以由于遍在蛋白化而分支，并且它們可以是環(huán)狀的、有分支的或沒有分支的。環(huán)狀的、分支的和分支環(huán)狀的多肽可以源自翻譯后天然過程或者可以通過合成方法制備。修飾包括乙?；?、?；?、ADP-核糖基化、酰胺化、生物素化、黃素的共價(jià)附著、血紅素模塊的共價(jià)附著、核普酸或核苷酸衍生物的共價(jià)附著、脂質(zhì)或脂質(zhì)衍生物的共價(jià)附著、磷脂酰肌醇的共價(jià)附著、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、脫曱基化、共價(jià)交聯(lián)的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、曱?；?、Y-羧化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、曱基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊烯化、外消旋化、硒化(selenoyktion)、硫酸化、轉(zhuǎn)移RNA介導(dǎo)的氨基酸向蛋白質(zhì)的添加(諸如精氨酰化)、和遍在蛋白化(參見例如PROTEINS-STRUCTUREANDMOLECULARPROPERTIES,第2版，T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NewYork,1993;Wold,F.,Post-translationalProteinModifications:PerspectivesandProspects,l-l'2，于POST-TRANSLATIONALCOVALENTMODIFICATIONOFPROTEINS,B.C.Johnson,編，AcademicPress,NewYork,1983;Seifter等,MethEnzymol，182,626-646,1990;Rattan等，Ann.NYAcad.Sci.,663:48-62(1992))。生物學(xué)方法/實(shí)施例實(shí)施例1:用于鼠人B細(xì)胞淋巴瘤模型中IL-18與Rituxan⑧聯(lián)合療法的實(shí)驗(yàn)方案人IL-18(SEQIDNO:16)是在大腸桿菌(五sc/zen'c/2/aco/f)的非病原性菌抹中表達(dá)的人白介素-18的重組成熟形式。IL-18是18Kd的非糖基化單體，具有與IL-1三葉(trefoil)亞家族的IL-1{3最緊密相關(guān)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。鼠和人IL-18cDNA編碼由192個(gè)和193個(gè)氨基酸組成的前體蛋白(分別是SEQIDNO:17和16)。IL-18原要求由胱天蛋白酶加工成有生物活性的成熟蛋白質(zhì)(157個(gè)氨基酸)，以便介導(dǎo)其生物學(xué)活性。人和鼠IL-18之間的同源性是650/。。在下文所概述的臨床前研究中，使用鼠IL-18(SEQIDNO:17)，以便提供體內(nèi)同基因系統(tǒng)，在那里能分析IL-18的全部免疫學(xué)潛力。在缺乏T細(xì)胞和B細(xì)胞兩者的遠(yuǎn)交雌性純合SCID小鼠(ICR-ZV^/,")中實(shí)施該研究。使用遠(yuǎn)交系與使用近交系相比的優(yōu)點(diǎn)在于遠(yuǎn)交的ICRSCID系不展現(xiàn)泄漏(leakiness)(即使在10-12月齡小鼠中)。給小鼠注射最初自患有伯基特氏淋巴瘤的3歲患者衍生的人RamosB細(xì)胞淋巴瘤系(ATCC目錄，CRL1596)。將腫瘤1:10勻漿物以每只小鼠0.5ml的劑量接種入6-8周齡小鼠中。一周2-3次測(cè)量腫瘤體積，并將小鼠隨機(jī)分配入處理組中以使得各組具有相等的腫瘤體積分配(distribution)。在每組腫瘤體積中值達(dá)到80-150mmS時(shí)(接種腫瘤后第12天時(shí))啟動(dòng)療法。另外，從該研究中排除那些生長(zhǎng)有體積在設(shè)置限度以外的腫瘤的小鼠。在第一項(xiàng)研究中，處理組(rr^6)包括對(duì)照組(沒有療法)、3個(gè)Rituxan⑧I.V.單一療法組(分別為12.5、25、和50tig/小鼠BIW)、鼠IL-18S.C.單一療法組(100嗎/小鼠q.d.)、和3個(gè)聯(lián)合療法組，每組分別接受100pg/小鼠IL-18S.C.q.d.加上12.5、25、或50pg/小鼠RITUXAN⑧I.V.。在第二項(xiàng)研究中，劑量給藥由以SID日程表的100(ag/小鼠mIL-18(SEQIDNO:17)和以qd4/3日程表的25和12.5)igRituxan⑧組成。動(dòng)物數(shù)目增加至n-12，以便具有測(cè)量統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的更好窗口。使用viener測(cè)徑器一周2-3次測(cè)量腫瘤體積。在人B細(xì)胞淋巴瘤模型中IL-18和Rituxan⑧的聯(lián)合療法提供超過單獨(dú)的IL-18或Rituxan⑧的單一療法的益處。下文詳述的兩個(gè)實(shí)-驗(yàn)顯示耳關(guān)合療法在此模型中的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著益處。在圖3中所捕獲的第一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，高劑量的Rituxan⑧(100(ag/劑)顯示了作為單一藥劑療法的強(qiáng)烈抗腫瘤活性，而在較低的劑量(12.5g/劑)，Rituxan沒有活性。鼠IL-18(SEQIDNO:17)作為單一藥劑(100jag/劑)沒有活性。然而，在與較低劑量的Rituxan⑧組合時(shí)，mIL-18(SEQIDNO:17)顯示加性/協(xié)同性活性(12.5嗎/劑Rituxan⑧與100嗎mIL-18(SEQIDNO:17)組合)。在使用GraphPadPrism⑧對(duì)數(shù)據(jù)繪圖并分析后，在下文圖4和圖5中表明統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在這些圖的第一幅(圖4)中，在植入后第19天比較腫瘤體積。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示與未處理對(duì)照組相比所有處理組中腫瘤生長(zhǎng)的顯著降低(*p<0.05,**p<0.01，***p<0.00l)。第二幅圖(圖5)顯示了聯(lián)合療法比單獨(dú)的單一療法更有效(統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的，*p<0.05，**p<0.01)。在第二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，將動(dòng)物數(shù)目從11=6增加至11=12提高確定響應(yīng)聯(lián)合療法的加性/協(xié)同性抗腫瘤活性的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的能力(power)。圖6A和圖6B中的圖代表肺瘤生長(zhǎng)體積中值和均值。圖7和圖8描繪了對(duì)植入腫瘤后第27天腫瘤體積的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)表明與單獨(dú)的Rituxan(25pg/小鼠)或單獨(dú)的mlL-18(SEQIDNO:17)單一療法(腳g/小鼠)相比,用聯(lián)合療法(25/層嗎/小鼠)處理的小鼠中腫瘤體積的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著降低。此臨床前數(shù)據(jù)表明IL-18與利妥昔單抗的組合導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性。利妥昔單抗作為單一療法在所測(cè)試的最高劑量是有活性的。然而，在與鼠IL-18聯(lián)合使用較低劑量的利妥昔單抗時(shí)能看到類似水平的活性，指明該模型對(duì)利妥昔單抗是敏感的，并且該響應(yīng)能由IL-18增強(qiáng)。鼠IL-18增強(qiáng)利妥昔單抗的活性，推測(cè)通過提升NK細(xì)胞中的ADCC活性來實(shí)現(xiàn)。因?yàn)镾CID小鼠缺乏B和T細(xì)胞應(yīng)答兩者，所以IL-18經(jīng)由NK細(xì)胞活化來提升抗腫瘤應(yīng)答。實(shí)施例2:人淋巴瘤異種移植物模型中IL-18與Ofatumumab的聯(lián)合療法。我們的目的是確定用IL-18(鼠的)和Ofatumumab的聯(lián)合療法治療皮下人Ramos淋巴瘤(SCID小鼠中的異種移植物)是否會(huì)導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性。背景和方法在已建立的Ramos人淋巴瘤異種移植物模型(也稱為"實(shí)體瘤，，模型，或"皮下肺瘤"模型)中測(cè)試Ofatumumab單抗的劑量-應(yīng)答。SCID(ICR背景，Taconic)雌性小鼠在第0天皮下接受Ramos淋巴瘤勻漿物(0.5ml來自供體SCID雌性小鼠的l:8勻漿物)。觀察小鼠，并使用測(cè)徑器一周兩次地測(cè)量肺瘤體積。使用以下公式確定腫瘤體積(0.5xL)xW2(腫瘤長(zhǎng)度=匕腫瘤寬度^W)。在植入后第17天在大多數(shù)胂瘤達(dá)到約100-150mn^體積時(shí)將小鼠隨機(jī)化成治療組(從該研究中排除較大/較小體積的腫瘤)。一周兩次靜脈內(nèi)施用Ofatumumab療法，而一天一次皮下施用IL-18細(xì)胞因子療法。治療組列于表l(下文)中。我們?cè)诖隧?xiàng)研究中每組使用了6只小鼠。來自該模型的讀出是腫瘤體積測(cè)量和％治愈的/消退的/未治愈的腫瘤。治愈的小鼠定義為3次連續(xù)測(cè)量的腫瘤體積都小于10mmS的小鼠。具有部分消退的小鼠定義為那些具有3次連續(xù)測(cè)量都顯示小于50%起始體積的腫瘤體積的小鼠。未治愈的小鼠定義為沒有顯示腫瘤體積改善的小鼠(如上文所述的)。表l:RAMJ10研究中的處理日程表(Wl60260253605046100561002566100507610008(媒介物)600圖9顯示了作為單一療法或與IL-18組合的Ofatumumab(HuMax-CD20)對(duì)皮下Ramos人淋巴瘤在SCID小鼠中生長(zhǎng)的影響(n=6只小鼠/組；均值&SD)。另外，數(shù)據(jù)也表示為％治愈的、％消退的和％未治愈的小鼠。定義在方法(上文)中進(jìn)行了描述。無法對(duì)圖9中的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，因?yàn)槭褂秒p因素ANOVA進(jìn)行的貫穿所有時(shí)間點(diǎn)的總體分析需要所有—時(shí)間點(diǎn)中所有組的所有數(shù)據(jù)點(diǎn)，這個(gè)我們無法收集。這是因?yàn)槟[瘤研究的性質(zhì)一一我們由于實(shí)施安樂死(腫瘤體積達(dá)到瀕死標(biāo)準(zhǔn))或者由于自發(fā)死亡而損失了小鼠(因此損失數(shù)據(jù)點(diǎn))。因此，在選定的時(shí)間點(diǎn)該研究的第28天對(duì)腫瘤體積數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。選擇此時(shí)間點(diǎn)作為該研究中的最遲點(diǎn)，那時(shí)可從所有處理組中獲得腫瘤體積數(shù)據(jù)(在此時(shí)間媒介物組由于倫理原因(極端腫瘤體積)而實(shí)施安樂死)。圖10顯示了接種后第28天作為單一療法或與IL-18組合的Ofatumumab在SCID小鼠中在s.c.Ramos人淋巴瘤模型中的效果。(n二6只小鼠/組；均值+/-SD)。Log轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)通過了用于參數(shù)檢驗(yàn)處理的所有標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論(對(duì)log轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)的^:分析)我們的數(shù)據(jù)證明，用以低劑量施用的Ofatumumab單克隆抗體(單抗)進(jìn)行的單一療法導(dǎo)致對(duì)Ramos'淋巴瘤生長(zhǎng)的顯著抑制性效應(yīng)，不過，這種生物學(xué)效應(yīng)不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。然而，在與細(xì)胞因子IL-18療法組合時(shí)，Ofatumumab單抗的效果得到顯著加強(qiáng)。用Ofatumumab單抗和IL-18兩者進(jìn)行的聯(lián)合療法導(dǎo)致所有劑量給藥組中的顯著腫瘤生長(zhǎng)延遲，其中具有最高劑量(50ug/mOfatumumab+100ug/mIL-18)的組中具有最大的顯著性(p0.001)。最高的組合組(50/100)還顯示比所有(低劑量)Ofatumumab單一療法組，和IL-18單一療法組顯著更好的結(jié)果?？傊琌fatumumab在Ramos人異種移植物模型中顯示與IL-18聯(lián)合療法的協(xié)同性。數(shù)據(jù)顯示了劑量依賴性抗腫瘤活性，與用IL-18和利妥昔單抗的組合處理相同腫瘤異種移植物類似的概況。實(shí)施例3:用于IL-18與利妥昔單抗的組合的I期臨床試驗(yàn)的方案劑量擴(kuò)大(dose-escalation)研究，其調(diào)查12劑每周一次上升劑量(l-100嗎/kg)的人IL-18在CD20+B細(xì)胞NHL受試者中的安全性和耐受性。利妥昔單抗和人IL—18的劑量給藥是交錯(cuò)的。因此，在第1-4周的第1天，受試者每周一次地接受利妥昔單抗(375mg/m"的IV輸注。在第l-4周的第2天和第5-12周的第2天(+/-1天)，以每周一次的IV輸注施用人IL-18。人IL-18的起始劑量是1jiig/kg，并且計(jì)劃將劑量擴(kuò)大進(jìn)行至名義上的最大限度劑量100嗎/kg。每個(gè)分組(cohort)內(nèi)的劑量給藥是交錯(cuò)的，其中一名受試者在第1天接受首劑利妥昔單抗，在第2天接受首劑人IL-18，然后內(nèi)部監(jiān)測(cè)至少24小時(shí)。若沒有安全性或耐受性顧慮，則在至少24小時(shí)后給分組內(nèi)的下一名受試者服藥，并也會(huì)在其人IL-18首劑后內(nèi)部監(jiān)測(cè)24小時(shí)。在隨后的各周(第2周-第12周)，人IL-18服藥后對(duì)受試者監(jiān)測(cè)6小時(shí)，然后可以離開診所。所有受試者相隔至少2小時(shí)進(jìn)行給藥?？梢栽谌魏畏纸M中每天給不超過兩名受試者服藥。以首劑水平(l昭/kg/周)處理3名受試者。若完成分組中的劑量給藥后沒有與研究藥物具有"懷疑的，，或"可能的"關(guān)系的、大于等級(jí)2的毒性的證據(jù)(即所有3名受試者都完成了第l周-第6周的研究)，則在每個(gè)隨后的分組中以下列劑量水平處理3名受試者3jig/kg/周、10昭/kg/周、20路/kg/周、30叱/kg/周、和100昭/kg/周。-對(duì)于利妥昔單抗的所有輸注，整個(gè)劑量投遞(自輸注啟動(dòng)至輸注結(jié)束)必須不小于4小時(shí)。人IL-18輸注在2小時(shí)時(shí)間段里發(fā)生。本研究的目標(biāo)是確定人IL-18在CD20十B細(xì)胞淋巴瘤受試者中與標(biāo)準(zhǔn)利妥昔單抗處理聯(lián)合使用時(shí)安全的最大限度生物學(xué)有效劑量。為了對(duì)人IL-18評(píng)估劑量-響應(yīng)相關(guān)性(發(fā)現(xiàn)其在先前的I期研究中是鐘形的)，使用1-100i!g/kg的劑量范圍來檢查0020+B細(xì)胞淋巴瘤患者中的生物學(xué)活性范圍的下端(低劑量)和上端(中程或高劑量)。利妥昔單抗的劑量是用于CD20十B細(xì)胞NHL患者的批文中所推薦的標(biāo)準(zhǔn)方案。根據(jù)來自牽涉腎細(xì)胞癌瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者的研究的先前的I期安全性、藥動(dòng)學(xué)、和藥效學(xué)數(shù)據(jù)選擇人IL-18的劑量。Robertson等，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.22:178(摘要713)(2003);Robertson等，J.Clin.Oncol.22:176s(摘要2553)(2004);Robertson等，J.Clin.Oncol.23:169s(摘要2513)(2005);Koch等，J.Clin.Oncol.23:174s(摘要2535)(2005);Koch等，Eur.J.Cancer4(12):86(270)(2006)。所測(cè)試的最高劑量(每周一次施用2000ug/kg,可長(zhǎng)至24周)沒有產(chǎn)生顯著的毒性，使得沒有鑒定出最大限度的耐受劑量；因此，使用藥效學(xué)數(shù)據(jù)來為本研究選擇劑量范圍的上限。從本實(shí)施例可以看出，施用IL-18及抗CD20抗體的另一個(gè)實(shí)施方案是交錯(cuò)施用，由此在交替基礎(chǔ)上給予IL-18和抗CD20抗體。為了避免懷疑，在交4普施用中可以先施用IL-18或先施用抗CD20抗體。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>權(quán)利要求1.一種在患者中治療或預(yù)防癌癥的方法，包括給所述患者施用(i)人IL-18多肽(SEQIDNO16)；和(ii)抗CD20抗體的步驟。2.—種在患者中治療或預(yù)防癌癥的方法，包括給所述患者施用(i)人IL-18多肽(SEQIDNO:16);和(ii)Ofatumumab的步驟。3.—種在患者中治療或預(yù)防癌癥的方法，包括給所述患者施用(i)人IL-18多肽(SEQIDNO:16);和(ii)利妥昔單抗的步驟。4.權(quán)利要求l、2或3的方法，其中所述人IL-18多肽(SEQIDNO:16)和抗體的施用是同時(shí)的。5.權(quán)利要求l、2或3的方法，其中所述人IL-18多肽(SEQIDNO:16)和抗體的施用是序貫的，其中先施用所述人IL-18多肽(SEQIDNO:16)。6.權(quán)利要求l、2或3的方法，其中所述人IL-18多肽(SEQIDNO:16)和抗體的施用是序貫的，其中先施用所述抗體。7.權(quán)利要求l、2或3的方法，其中所述人IL-18多肽(SEQIDNO:16)和抗體的施用是交錯(cuò)的。8.權(quán)利要求l的方法，其中所述抗體具有Fc介導(dǎo)的效應(yīng)器功能。9.權(quán)利要求l、2或3的方法，其中所述癌癥是B細(xì)胞淋巴瘤。10.權(quán)利要求l、2或3的方法，其中所述癌癥選自下組非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、B細(xì)胞成淋巴細(xì)胞性白血病/淋巴瘤、成熟B細(xì)胞新生物、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)/小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(SLL)、B細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞性白血病、淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)包括低級(jí)、中級(jí)和高級(jí)FL、皮膚濾泡中心淋巴瘤、邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(MALT型、結(jié)和脾型)、毛細(xì)胞性白血病、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、漿細(xì)胞瘤、漿細(xì)胞性骨髓瘤、移植后淋巴增殖性病癥、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥、間變性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤；和黑素瘤。全文摘要一般而言，本發(fā)明涉及人IL-18組合在癌癥治療中的用途。具體地，本發(fā)明涉及人IL-18和抗CD20抗體的組合。文檔編號(hào)A61K38/20GK101678102SQ200880017106公開日2010年3月24日申請(qǐng)日期2008年3月20日優(yōu)先權(quán)日2007年3月23日發(fā)明者茲登卡·L·喬納克,茲登卡·哈斯科瓦,斯蒂芬·H·特魯利,瑪格麗特·N·惠特克,約翰·F·托索申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司