專利名稱：基于肉毒毒素的神經(jīng)毒成分供應(yīng)溫度-穩(wěn)定性固體肌肉松弛劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種在高溫下供應(yīng)肌肉松弛劑的方法，其中所述肌肉 松弛劑為包含不含復(fù)合蛋白的肉毒毒素神經(jīng)毒成分的干固體組合物。
背景技術(shù)：
肉毒毒素由細(xì)菌梭狀芽孢桿菌產(chǎn)生。肉毒毒素有七種抗原不同的
血清型，即A、 B、 C、 D、 E、 F和G型肉毒毒素。肉毒毒素通常以 復(fù)合物，即負(fù)責(zé)肉毒毒素毒性的亞單元(即所稱的"神經(jīng)毒成分")與 其他細(xì)菌蛋白復(fù)合在一起形成的毒素復(fù)合物的形式，從裂解的梭狀芽 孢桿菌培養(yǎng)物中釋放出來。該復(fù)合物的分子量從約300,000 Da至約 900,000 Da不等。復(fù)合蛋白為，例如，各種血凝素。這種毒素復(fù)合物
的蛋白本身沒有毒性，但被認(rèn)為能為神經(jīng)毒成分提供穩(wěn)定性，并能導(dǎo) 致肉毒桿菌口服中毒。與毒素復(fù)合物不同，神經(jīng)毒成分以其分離和提
純形式，即不含任何復(fù)合梭菌蛋白的形式存在，其為不穩(wěn)定酸并且對(duì) 胃腸道中的侵蝕性環(huán)境不耐受。
肉毒毒素復(fù)合物的神經(jīng)毒成分最初形成為單鏈多肽，在血清型A 的情況下分子量約為150kDa。在另一種血清型中，觀察到神經(jīng)毒成 分的分子量根據(jù)細(xì)菌的來源在約145kDa和170kDa間變化。在血清 型A的情況下，例如，多肽的酶解加工產(chǎn)生了一種以雙鏈多肽形式 存在的活性多肽，該雙鏈多肽由通過二硫鍵連接的重鏈和輕鏈組成。 在人體中，重鏈介導(dǎo)內(nèi)毒毒素與突觸前的膽堿能神經(jīng)末梢相結(jié)合并將 毒素內(nèi)轉(zhuǎn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。輕鏈被認(rèn)為具有毒性效應(yīng)，起鋅-肽鏈內(nèi)切酶 的作用并切割負(fù)責(zé)膜融合的特異性蛋白(SNARE復(fù)合物)(參見例如 Montecucco Cl Shiavo G.， Rosetto 0: The mechanism of action oftetanus and Botulinum neurotoxins. Arch Toxicol. 1996; 18 (Suppl.): 342-354》。
通過干擾細(xì)胞內(nèi)的膜融合過程，肉毒毒素阻止乙酰膽堿釋放進(jìn)入 突觸間隙。肉毒毒素在神經(jīng)-肌肉接頭處的總效應(yīng)是阻斷神經(jīng)-肌肉間 的傳導(dǎo)，并在實(shí)際上，使肌肉去神經(jīng)。肉毒毒素對(duì)其他周邊膽堿能神 經(jīng)突觸也有活性，造成流涎或出汗減少。
本申請將肉毒毒素復(fù)合物的神經(jīng)毒亞單元稱為"神經(jīng)毒成分，，或 "不含復(fù)合蛋白的神經(jīng)毒成分"。
本發(fā)明中通篇使用的術(shù)語"肉毒毒素"或"肉毒毒素類"，不僅指不 含任何其他梭菌蛋白的神經(jīng)毒成分，也指"肉毒毒素復(fù)合物"當(dāng)毒素 復(fù)合物與神經(jīng)毒成分不必或不要求有區(qū)別時(shí)，在本發(fā)明中使用術(shù)語 "肉毒毒素"。復(fù)合物通常含有其他的，所謂的"無毒蛋白"，我們將稱
之為"復(fù)合蛋白"或"細(xì)菌蛋白"。
"BoNT"或"NT"為常用的縮寫，涉及不含復(fù)合蛋白的肉毒毒素的 NT化合物。
盡管有毒性作用，肉毒毒素復(fù)合物已被用作許多疾病的治療藥 物。1989年A型肉毒毒素在美國獲準(zhǔn)可供人類使用以治療斜視、眼 瞼痙攣以及其他疾病。A型肉毒毒素蛋白復(fù)合物可巿購獲得，例如， 以商標(biāo)名BOTOX (Allergan Inc.)或以商標(biāo)名DYSPORT (Ipsen Ltd)。 用于治療應(yīng)用的復(fù)合物可直接注入需治療的肌肉。在生理PH值下， 毒素從蛋白復(fù)合物中釋放出來并產(chǎn)生所需的藥效。
在施予病人之前， 一般是直接肌肉內(nèi)注射至受影響的肌肉之前， 將所述組合物溶于生理鹽水中。
關(guān)于基于肉毒毒素的組合物和藥物劑量，以及基于肉毒毒素的神 經(jīng)毒成分的藥物組合物、劑量和給藥頻率，可參閱US 60/817 756。
除了上述功能，據(jù)推測復(fù)合蛋白還能保護(hù)肉毒毒素的神經(jīng)毒成分 免受嚴(yán)酷的環(huán)境條件的影響，因?yàn)樯窠?jīng)毒成分對(duì)降解和/或失活高度敏感，特別是當(dāng)經(jīng)受短期溫度應(yīng)力時(shí)，例如在溫暖到炎熱的氣候或通 常在夏季期間。
為此，在過去 一般會(huì)采取極為謹(jǐn)慎的措施以防止基于肉毒毒素， 特別是基于肉毒毒素的神經(jīng)毒成分的藥物的溫度達(dá)到4"C以上，例如 接近20°C。大多數(shù)情況下，將裝有含有肉毒毒素的干固體組合物的
藥瓶在冰上或至少在冰箱(約4°C )中冷凍貯存(約-2(TC )。這種必
需的冷卻意味著在供應(yīng)藥物時(shí)會(huì)產(chǎn)生額外的費(fèi)用。
鑒于上述情況，本發(fā)明人對(duì)基于肉毒毒素的肌肉松弛劑的溫度穩(wěn) 定性進(jìn)行了研究。令人驚訝的是，發(fā)現(xiàn)肉毒毒素的神經(jīng)毒成分與現(xiàn)有 技術(shù)相比，呈現(xiàn)了顯著的意想不到的溫度穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種在20。C以上的高溫，例如30。C以上，或40。C
以上供應(yīng)肌肉松弛劑的方法，其中所述肌肉松弛劑為包含不含復(fù)合蛋 白的肉毒毒素的神經(jīng)毒成分的干固體組合物，優(yōu)選地所述方法包括貯
存和/或運(yùn)輸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述供應(yīng)為制備所述肌肉松弛 劑的方法中的一個(gè)步驟，例如在包含肉毒毒素的神經(jīng)毒成分的蛋白被 干燥以后實(shí)施的一個(gè)步驟。
在一個(gè)實(shí)施方案中，在45X:以上供應(yīng)肌肉松弛劑，其中所述肌 肉松弛劑為包含不含復(fù)合蛋白的肉毒毒素的神經(jīng)毒成分的干固體組 合物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述供應(yīng)涉及貯存和/或運(yùn)輸和/或?yàn)橹苽?所述肌肉松弛劑的方法中的一個(gè)步驟。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述肌肉松弛劑在45。C以上和高達(dá)70°C 的溫度下經(jīng)歷一段不超過90天的時(shí)期。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述 時(shí)期為從10分鐘到90天。在又一個(gè)實(shí)施方案中，溫度在45"C到60°C 之間且時(shí)期為從10分鐘到90天。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述時(shí)期為從10分鐘到30天。在又一個(gè)實(shí)施方案中，溫度在65。C到7(TC之間
且時(shí)期為從10分鐘到10天。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述肌肉松弛劑在不需任何人工冷卻裝置
存在的情況下進(jìn)行運(yùn)輸和/或貯存。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物為肉毒毒素神經(jīng)毒成分的凍干物。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物還包含蔗糖和/或人血清白蛋白。
在另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物還包含至少 一種選自不同于蔗 糖和人血清白蛋白的冷凍保護(hù)劑、穩(wěn)定劑、pH緩沖液、賦形劑及其 混合物的成分。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述神經(jīng)毒成分為A型肉毒毒素的神經(jīng) 毒成分。


圖1顯示6(TC下貯存多達(dá)30天后溫度對(duì)Xeomin②的生物活性的
影響；所述生物活性在指示點(diǎn)及時(shí)進(jìn)行檢測；
圖2顯示7(TC下lfc存多達(dá)10天后溫度對(duì)Xeomin^的生物活性的
影響；所述生物活性在指示點(diǎn)及時(shí)進(jìn)行檢測；
圖3顯示8(TC下貯存多達(dá)10天后溫度對(duì)Xeomin②的生物活性的 影響；所述生物活性在指示點(diǎn)及時(shí)進(jìn)行檢測。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明涉及在2(TC以上供應(yīng)肌肉松弛劑的方法，其中所述肌肉 松弛劑為包含不含復(fù)合試劑的肉毒毒素神經(jīng)毒成分的干固體組合物。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述肌肉松弛劑在45"和/或以上供應(yīng)，其中 所述肌肉松弛劑為包含不含復(fù)合試劑的肉毒毒素神經(jīng)毒成分的干固 體組合物。在本發(fā)明中，術(shù)語"供應(yīng)"包括本發(fā)明限定的肌肉松弛劑的 任何一種供應(yīng)，尤其是貯存、運(yùn)輸或?yàn)樵谥苽渌黾∪馑沙趧┲械囊?個(gè)步驟。術(shù)語"供應(yīng)"還包括這樣的步驟，其中所述肌肉松弛劑經(jīng)歷從冷凍態(tài)(-20°C)，或冷卻態(tài)(+4°C)到20。C以上的溫度升高。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述肌肉松弛劑在45'C和/或以上供應(yīng)，其中所述 肌肉松弛劑為包含不含復(fù)合藥物的肉毒毒素神經(jīng)毒成分的干固體組 合物。
在本發(fā)明中,可釆用任何形式的肉毒毒素的神經(jīng)毒成分，尤其是 各種血清型。此外，包括突變、缺失等改性和/或重組制備的肉毒毒 素的神經(jīng)毒成分也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。關(guān)于適合的突變，可參閱 WO 2006/027207 Al和WO 2006/114308 Al ，以及EP 07014785.5， 其以參閱的方式全文并入于此。此外，在本發(fā)明中，可采用各種血清 型的混合物(以神經(jīng)毒成分形式和/或其重組形式，例如A型和B型 肉毒神經(jīng)毒素的混合物)。然而，本發(fā)明還涉及化學(xué)改性的神經(jīng)毒素，
例如聚乙二醇化、糖基化、硫酸化、磷酸化或任何其他改性，尤其是 一種或多種表面或溶劑暴露的氨基酸。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包括A型肉毒毒素的神經(jīng)毒成 分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，肉毒毒素為抗原不同的血清型A、 B、 C、 D、 E、 F或的肉毒毒素。在所有提及血清型A、 B、 C、 D、 E、 F或 G的肉毒毒素中，也包括血清型的已知變種，例如血清型A1、 A2、 A3、 Bl、 B2、 B3、 Cl、 C2、 C3、 Dl、 D2、 D3、 El、 E2、 E3、 Fl、 F2、 F3、或Gl、 G2、 G3。本發(fā)明中可以使用 一種血清型或不同血 清型的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，肉毒毒素為A型肉毒毒素。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，還包括肉毒毒素的亞型、同源物、直系同 源物和旁系同源物，其顯示至少50%、至少60%、至少70%、至少 80%、至少90%或達(dá)到100%的序列同一性。序列同一性可以通過適 于得到可靠結(jié)果的任何算法進(jìn)行計(jì)算，例如，使用FASTA算法(W.R. Pearson & D丄Lipman PNAS (1988)85:2444-2448 )。
術(shù)語"神經(jīng)毒成分"還包括在肉毒梭菌的其他血清型中發(fā)現(xiàn)的功 能性同源物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)毒成分不含任何其他
7的肉毒梭菌蛋白，在一個(gè)實(shí)施方案中，還不含可能與神經(jīng)毒成分有潛
在聯(lián)系的RNA。神經(jīng)毒成分可為約150kDa的單鏈前體蛋白或經(jīng)過蛋 白酶解加工的神經(jīng)毒成分，其包括由一個(gè)或多個(gè)二硫鍵連接的約 50kDa的輕鏈(U)和約100kDa的重鏈(Hc)(參見例如SimpsonLL， Ann Rev Pharmacol Toxicol. 2004; 44:167-93 )。在另 一個(gè)實(shí)施方案中， 可使用單鏈和加工過的神經(jīng)毒成分的混合物。
根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)，除了神經(jīng)毒成分之外，藥物可不含有在肉毒 毒素復(fù)合物中除神經(jīng)毒成分外發(fā)現(xiàn)的蛋白。神經(jīng)毒成分的前體可切割 或不切割，然而在一個(gè)實(shí)施方案中，前體被切成重鏈和輕鏈。如本發(fā) 明其他部分所指出的，多肽可為野生型序列或可在 一個(gè)或多個(gè)殘基上 改性。改性包括化學(xué)改性，例如通過糖基化、乙?；?、?；蝓０坊?等，這些可能對(duì)例如攝取或多肽的穩(wěn)定性是有益的。然而，神經(jīng)毒成 分的多肽鏈可通過添加、取代或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基進(jìn)行選擇 性改性或其他改性。
本發(fā)明上述所指的神經(jīng)毒成分可為組合物或藥物組合物的一部
分。本發(fā)明中使用的藥物組合物可包含肉毒毒素，例如以神經(jīng)毒成分 作為唯一活性成分或可含有其他的藥物活性成分，例如鎮(zhèn)痛藥和/或
還有神經(jīng)毒素。
"藥物組合物"是含有或包括用作藥物或診斷藥劑的活性成分的 制劑。這種藥物組合物可能適用于診斷性或治療性施予(即通過肌肉 注射或皮下注射)人類患者。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，組合物可包括神經(jīng)毒成分和透明質(zhì) 酸和/或聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙二醇，通過合適的pH緩沖液，尤 其是醋酸鈉緩沖液和/或冷凍保護(hù)劑多元醇，可使該組合物在任選的 pH下穩(wěn)定。
在一個(gè)實(shí)施方案中，小鼠LD5。試驗(yàn)測定結(jié)果顯示，神經(jīng)毒成分 的生物活性為每ng神經(jīng)毒成分50至50個(gè)LDso單位。在另 一實(shí)施方案中，神經(jīng)毒成分的生物活性為約150個(gè)LDs。單位。其中這里所述 的單位指的是每亳微克單位。通常，本發(fā)明的藥物組合物包含重量約
為6pg至約30ng的神經(jīng)毒成分。包含分離形式為A型肉毒毒素的神 經(jīng)毒成分的藥物組合物可以從德國Merz Pharmaceuticals GmbH巿購 獲得，商標(biāo)名為Xeomh^。 A型和B型肉毒毒素的神經(jīng)毒成分的制備 描述于例如國際申請WO 00/74703和WO 2006/133818。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包括A型肉毒毒素的神經(jīng)毒成 分。所述組合物為肉毒毒素的神經(jīng)毒成分的干固體組合物。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，組合物還包括蔗糖或人血清白蛋白或兩者兼而有之，在 另一個(gè)實(shí)施方案中，人血清白蛋白和蔗糖的比例為1: 5。在一個(gè)實(shí) 施方案中，組合物為Xeomi^。在另一個(gè)實(shí)施方案中，人血清白蛋白 為重組人血清白蛋白?？蛇x地，所述組合物不含來源于哺乳動(dòng)物的蛋 白，例如人血清白蛋白。通過用其他非蛋白穩(wěn)定劑取代血清白蛋白任 何這些方案均可提供足夠的神經(jīng)毒素穩(wěn)定性(infra)。
在本專利申請中，可應(yīng)用基于A型肉毒毒素神經(jīng)毒成分的藥物， 在另一個(gè)實(shí)施方案中，可使用由Merz Pharmaceutical以商標(biāo)名 Xeomi,分銷的藥品。這是因?yàn)橥┯杌贏型肉毒毒素復(fù)合物相 比，當(dāng)施用基于肉毒毒素神經(jīng)毒成分的組合物例如Xeomh^時(shí)，發(fā)現(xiàn) 在患者體內(nèi)產(chǎn)生抗體的趨向更低。不受制于任何理論約東，肉毒毒素 復(fù)合物中的血凝素被認(rèn)為有激活免疫系統(tǒng)的能力。
關(guān)于基于肉毒毒素的組合物和藥物劑量，以及基于肉毒毒素的神 經(jīng)毒成分的藥物組合物、劑量和給藥頻率，可參閱 PCT/EP2007/005754。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物為肉毒毒素神經(jīng)毒成分的凍干 物，所述組合物還包括蔗糖和/或人血清白蛋白。在所述在后組合物 中，人血清白蛋白和蔗糖的比例可為例如1: 5。在一個(gè)實(shí)施方案中， 組合物為Xeomin 。這種組合可包括其他賦形劑。術(shù)語"賦形劑"指的是組合物中存在 的除了活性成分之外的物質(zhì)。賦形劑可以是緩沖液、載體、抗粘劑、 粘合劑、崩解劑、填料、稀釋劑、防腐劑、輔料、環(huán)糊精和/或填充 劑，例如白蛋白、明膠、膠原蛋白、氯化鈉、防腐劑、冷凍保護(hù)劑和
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/歡條疋刑。
"pH緩沖液"是指能夠?qū)⒔M合物、溶液等的pH調(diào)至一定值或一 定pH范圍的化學(xué)物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，pH值范圍可為5至8， 在另一個(gè)實(shí)施方案中，pH值可為7至8，在另一個(gè)實(shí)施方案中，pH 值可為7.2至7.6,在另一個(gè)實(shí)施方案中，pH值為7.4。在另 一個(gè)實(shí) 施方案中，重組或注射后，藥物組合物的pH值在4至7.5之間，在 另一個(gè)實(shí)施方案中，pH值在約6.8至7.6之間，在另一個(gè)實(shí)施方案中 pH值在約7.4至7.6之間。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包括1-100 mM醋酸鈉緩沖液，在 另一個(gè)實(shí)施方案中，包含10mM醋酸鈉緩沖液。
上述給出的pH值范圍僅為典型實(shí)例。實(shí)際值可能包含上述數(shù)值 間的任何區(qū)間。根據(jù)本發(fā)明教導(dǎo)的適合的緩沖液為，例如磷酸鈉緩沖 液、醋酸鈉緩沖液、三羥甲基氨基甲烷(TRIS)緩沖液或任何適于 緩沖至上述pH值范圍的緩沖液。
本申請中術(shù)語"室溫"是指在+20。C至+25°C間的任意溫度，甚至更 優(yōu)選在+2(TC、 +21°C、 +22°C、 +23°C、十24。C或+25'C間的任意溫度 以及這些溫度之間的任意值。
"穩(wěn)定的"、"使穩(wěn)定"、"穩(wěn)定化"是指活性成分，即，在藥物組合 物的重組溶液或水溶液中的神經(jīng)毒成分的毒性超過被加入到藥物組 合物之前的生物活性的神經(jīng)毒成分的毒性的20%、 30%、 40%， 50°/。、 60%、 70%、 80%、 90%,直到約為100%。
在一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑的示例為明膠或人源或重組來源的白 蛋白。還包括非人類或非動(dòng)物來源的蛋白?？赏ㄟ^化學(xué)方法或基因重組對(duì)穩(wěn)定劑進(jìn)行改性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，設(shè)想用醇，例如， 肌醇、甘露醇、作為冷凍保護(hù)賦形劑來穩(wěn)定冷凍干燥過程中的蛋白質(zhì)。 在本發(fā)明的另 一實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑可以是包含透明質(zhì)酸或聚乙 烯吡咯烷酮或聚乙二醇或其任意組合的非蛋白穩(wěn)定劑。在另 一個(gè)實(shí)施 方案中，穩(wěn)定劑為(Kollid0n )。進(jìn)一步的穩(wěn)定劑可以是羥乙基淀粉 和/或海藻酸鹽。通過合適的pH緩沖液，尤其是醋酸鈉緩沖液或冷凍 保護(hù)劑或兩者聯(lián)用可使該組合物在任選的pH下穩(wěn)定。除了上述提到 的穩(wěn)定劑，所述組合物可包括水和至少一種多元醇，例如甘露醇或山 梨糖醇或其混合物。它也可包括單糖、雙糖或更高的多糖，例如葡萄 糖，蔗糖或果糖。這樣的組合物被認(rèn)為是具有高穩(wěn)定性的更加安全的 組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明藥物組合物中的透明質(zhì)酸以在200 U/ml肉毒毒素溶液中，每亳升含有0.1至10mg,優(yōu)選lmg透明質(zhì)酸 的量與神經(jīng)毒成分聯(lián)用。
當(dāng)本發(fā)明的組合物中存在聚乙烯吡咯烷酮時(shí)，其以能夠制備出重 組溶液的量，例如以在200 U/ml神經(jīng)毒成分的肉毒毒素溶液中，每 亳升含有10到500mg，優(yōu)選100mg聚乙烯吡咯烷酮的量與神經(jīng)毒成 分聯(lián)用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在多達(dá)8ml的溶液中進(jìn)行重組。這導(dǎo) 致在25U/ml神經(jīng)毒成分溶液中，其濃度降至每亳升含12.5mg/ml聚 乙烯吡咯烷酮。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所得溶液還含有l(wèi)-100mM， 在另一個(gè)實(shí)施方案中含有l(wèi)OmM醋酸鈉緩沖液。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明藥物組合物中的聚乙二醇以在200 U/ml的肉毒毒素溶液中，每亳升含有10至500mg，優(yōu)選100mg聚乙 二醇的量與神經(jīng)毒成分聯(lián)用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所得溶液還含有 l-100mM醋酸鈉緩沖液，在另一實(shí)施方案中，還含有10mM醋酸鈉
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物在約+3(TC至-20。C的貯存溫度下，其藥效在六個(gè)月、 一年、兩年、三年和/或四年內(nèi)基本保持不變。此外，所述藥物組合物經(jīng)重組后具有藥效，或可恢復(fù)到20%
至100%。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑選自現(xiàn)有技術(shù)中除了硫代烷類、乙硫嫌或海藻糖的其他穩(wěn)定劑。
"冷凍保護(hù)劑"J^能導(dǎo)致組合物的重組溶液或水溶液中的神經(jīng)毒成分具有比在藥物組合物中凍干之前的生物活性的神經(jīng)毒成分的
毒性大20%、 30%、 40%, 50%、 60%、 70%、 80%、卯％,直到具有約為100%的毒性的賦形劑。所述冷凍保護(hù)劑是指能導(dǎo)致活性成分的
賦形劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物可包含多羥基化合物，例如作為冷凍保護(hù)劑的多元醇?？捎玫亩嘣嫉氖纠?，例如，肌醇、甘露醇和其他非還原醇。組合物的一些實(shí)施方案不包含蛋白穩(wěn)定劑，或不含有有時(shí)用作冷凍保護(hù)劑的海藻糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖或相關(guān)糖類。
術(shù)語"防腐劑"和"防腐劑類"分別指一種或一類物質(zhì)，其能阻止微生物、昆蟲、細(xì)菌或其他污染性微生物在所述組合物中的生長或存活。防腐劑還能防止所述組合物發(fā)生不希望有的化學(xué)變化?？稍诒緦＠秶鷥?nèi)應(yīng)用的防腐劑，可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的所有防腐劑?？捎玫姆栏瘎┑氖纠?，尤其是，例如芐基醇、苯甲酸、苯扎氯銨、丙
酸鉤、硝酸鈉，亞硝酸鈉、亞硫酸鹽(二氧化硫、亞硫酸氫鈉、亞硫
酸氫鉀等)、乙二胺四乙酸(EDTA) 二鈉、甲醛、戊二醛、硅藻土、乙醇、甲基氯代異噻唑啉酮、丁基羥基苯甲醚和/或丁基羥基甲苯。
術(shù)語"鎮(zhèn)痛劑"涉及以多種方式作用于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鎮(zhèn)痛藥，包括特別是撲熱息新對(duì)乙酰氨基酚)、非甾體抗炎藥(NSAIDs)，例如水楊酸鹽、麻醉藥品例如嗎啡、具有麻醉性的合成藥物例如曲馬多，及其他藥物。還包括任何帶有局部鎮(zhèn)痛作用的化合物，例如利多卡因、節(jié)醇、苯甲酸及其他化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，鎮(zhèn)痛劑是組合物的一部分，在另一個(gè)實(shí)施方案中，鎮(zhèn)痛劑在化學(xué)去神經(jīng)劑治療前、治療中或治療后施予。
典型地，上述肌肉松弛劑的供應(yīng)包含在高溫下貯存或運(yùn)輸或兩者皆有，或?yàn)橹苽渌黾∪馑沙趧┲械囊粋€(gè)步驟，更優(yōu)選在包括肉毒毒素神經(jīng)毒成分的蛋白被干燥之后進(jìn)行的一個(gè)步驟。"高溫"是指2(TC以
L 25。Ci^LL^ 30。C以匕在龍他愔況下,即在基于肉毒毒素神經(jīng)毒成分的肌肉松弛劑貯存在0'C以下的環(huán)境中時(shí)，術(shù)語"高溫"分別是指0。C以上，或4。C以上，或1(TC以上，或者20。C、 25T:或3(TC以上。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，肌肉松弛劑在不超過卯天的一段時(shí)間期限內(nèi)經(jīng)受上述30'C以上至高達(dá)7(TC范圍間的某個(gè)溫度。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，肌肉松弛劑經(jīng)受各個(gè)溫度的時(shí)間期限可為幾分鐘至14天間的任何時(shí)間間隔。通常，考慮到供應(yīng)該種肌肉松弛劑的情況，
尤其是貯存和/或運(yùn)輸或兩者兼而有之所涉及地點(diǎn)的情況，時(shí)間期限不應(yīng)少于10分鐘。這些短期限在某些情況下尤為重要，其中在炎熱
氣候下運(yùn)輸后或貯存后，肌肉松弛劑經(jīng)受陽光直接照射。例如在機(jī)場或街道上。因此本發(fā)明典型的時(shí)間期限為IO分鐘、30分鐘、l小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)、5小時(shí)、6小時(shí)、7小時(shí)、8小時(shí)、l天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、IO天、2周、3周、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月(90天)。毋庸贅述，上述提到的時(shí)間期限僅為典型示例，實(shí)際的時(shí)間期限可或長或短并且包括上述給出的數(shù)值間的任何間隔。
對(duì)于肌肉松弛劑所經(jīng)受的溫度，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到典型的溫度下限為20。C以上。對(duì)于本發(fā)明詳細(xì)記載的溫度和溫度范圍，本
領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能理解肌肉松弛劑/組合物所經(jīng)受的溫度上限優(yōu)選不高于70°C 。即肌肉松弛劑所經(jīng)受的溫度優(yōu)選在20°C以上至70°C的范圍。因此，在本發(fā)明中，肌肉松弛劑分別經(jīng)受2(TC以上或25。C以上、或3(TC以上、或35°。以上、或40。C以上、或45。C以上、或5(TC以上、或55。C以上、或6(TC以上、或65。C以上，直到70。C的溫度。另外，上述給出的2(TC以上至7(TC之間的任一特定溫度及各個(gè)溫度間隔可邰縣由供K 7肌由WV鈾.糸l Ehf的環(huán)據(jù)沐定的.所3未Y4i 1^7 #: 3先^云輸或
存或兩者兼而有之，所述特定溫度及各個(gè)溫度間隔在本發(fā)明的范圍之內(nèi)a
下述溫度和時(shí)間間隔代表本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。根據(jù)第一實(shí)施
方案，使肌肉松弛劑在3(TC以上到高達(dá)7(TC間的某一溫度經(jīng)歷一段
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町別'ib^、觀現(xiàn)yu入，1兀邁佐佐ju l m工到同3ii /u l pj的杲一;/益度纟i歷10分鐘到90天，更優(yōu)選在40。C以上到6(TC間的某一溫度經(jīng)歷10分鐘到90天。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)時(shí)期范圍是從10分鐘到30天時(shí)，溫度從30°C以上到高達(dá)70°C ，優(yōu)選從40°C到60°C ，更優(yōu)選從50°C到60°C。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，代表極端情況下，溫度在65。C至7(TC的范圍，且肌肉松弛劑在所述溫度下經(jīng)歷的時(shí)期從10分鐘到10天，或者從10分鐘到3天。
由于這個(gè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明現(xiàn)在能夠提供上述不需使用人工冷卻裝置的肌肉松弛劑。這個(gè)發(fā)現(xiàn)對(duì)肌肉松弛劑的運(yùn)輸和/或貯存尤其重要。
此外，本發(fā)明與高溫、可能還伴有高濕度的環(huán)境有很大關(guān)系。
下面將通過非限制性的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例
實(shí)施例是使用巿購獲得的產(chǎn)品Xeomin⑧進(jìn)行的。Xeomin⑧是一種含有以A型肉毒毒素(150kDa)為活性成分的凍干粉。這種毒素以有缺口的(nicked)雙鏈形式存在，即它包含重鏈和輕鏈。該毒素是從肉毒梭菌培養(yǎng)物(ATCC3205菌株)中獲得的。已被提純至不含任何復(fù)合蛋白。Xeomin⑧還含有人血清白蛋白和蔗糖。
將Xeomh^樣品(未開封的小瓶沒有重組)分別在6CTC貯存3天(實(shí)施例1)，在70。C貯存10天(圖2),在80。C貯存10天(比較例3)。使用窄溫度耐受度(±2°C)的合格培養(yǎng)箱進(jìn)行貯存，隔天不間斷的取出樣品并在5"貯存，待分析之用。
為了評(píng)估Xeomin，的穩(wěn)定性，分別用公知的小鼠LDso檢測法檢測生物活性，按pg/瓶xl0檢測神經(jīng)毒成分的含量、蔗糖含量(％)以及HAS含景(%X卜—i術(shù)方法是桉照歐洲藥典擄霡的要龍實(shí)施的。實(shí)施例l
根據(jù)本實(shí)施例，將Xeomh^在6(TC貯存達(dá)一個(gè)月。結(jié)果示于圖1。由圖1可以清楚地看到，在6(TC貯存達(dá)一個(gè)月，Xeomi,的質(zhì)量未受影響。在貯存時(shí)間結(jié)東后，生物活性(LDso檢測)以及神經(jīng)毒濃度(ELISA)均未有絲亳變化。人血清白蛋白(HSA)和蔗糖的水平?jīng)]有隨時(shí)間發(fā)生顯著變化?？傊?，在60'C貯存一個(gè)月后，檢測了貨架壽命說明書中的所有參數(shù)。類似的，由6(TC以下的貯存情況中得到的所有穩(wěn)定性數(shù)據(jù)均顯示未對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量有不利的影響(數(shù)據(jù)未示出)。
實(shí)施例2
根據(jù)本實(shí)施例，將Xeomin②在7(TC貯存達(dá)10天。結(jié)果示于圖2。由圖1可以清楚地看到，在70。C貯存達(dá)10天，Xeomit^的質(zhì)量
未受影響。同樣，生物活性以及神經(jīng)毒濃度還有HSA和蔗糖的含量
沒有隨時(shí)間發(fā)生顯著變化?？傊緦?shí)施例表明Xeomir^的質(zhì)量未受在
在7(TC貯存達(dá)10天的影響。
實(shí)施例3(比較)
在本比較例中，將Xeomir^在8(TC貯存多達(dá)10天。與在60。C和7(TC下貯存相比，觀測到生物活性(LDso檢測)迅速降低，神經(jīng)毒在5天內(nèi)完全滅活，在貯存的第三天，活性進(jìn)一步降低。本實(shí)施例表明在一個(gè)相對(duì)不長的時(shí)期后，至少80。C這個(gè)溫度對(duì)基于肉毒毒素神經(jīng)毒成分的肌肉松弛劑的穩(wěn)定性有不利影響。
權(quán)利要求
1、在20℃以上供應(yīng)肌肉松弛劑的方法，其中所述肌肉松弛劑為包含不含復(fù)合蛋白的肉毒毒素神經(jīng)毒成分的干固體組合物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中所述供應(yīng)涉及貯存和/或運(yùn) 輸和/或?yàn)橹苽渌黾∪馑沙趧┑姆椒ㄖ械?一個(gè)步驟。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述肌肉松弛劑在20'C 以上至高達(dá)70。C的溫度下經(jīng)歷一段不超過90天的時(shí)期。
4、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述時(shí)期從10分 鐘到90天。
5、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述溫度在2(TC 到60。C之間且所述時(shí)期從10分鐘到90天。
6、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述時(shí)期從10分 鐘到30天。
7、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中溫度在2(TC到 7(TC之間且所述時(shí)期從10分鐘到10天。
8、 根據(jù)權(quán)利要求2-7任一項(xiàng)所述的方法，其中所述肌肉松弛劑 在運(yùn)輸和/或貯存時(shí)不需任何人工冷卻裝置。
9、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物為肉 毒毒素神經(jīng)毒成分的凍干物。
10、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物還包 含蔗糖和/或人血清白蛋白。
11、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物還包 含至少 一種選自不同于蔗糖和人血清白蛋白的冷凍保護(hù)劑、穩(wěn)定劑、 pH緩沖液、賦形劑及其混合物的成分。
12、 根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述神經(jīng)毒成分 為A型肉毒毒素的神經(jīng)毒成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種在20℃以上供應(yīng)穩(wěn)定的肌肉松弛劑的方法，其中所述肌肉松弛劑為包含不含復(fù)合蛋白的肉毒毒素的神經(jīng)毒成分的干固體組合物。
文檔編號(hào)A61K38/48GK101687018SQ200880018442
公開日2010年3月31日 申請日期2008年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月1日
發(fā)明者斯文·格萊茵, 蓋德·J.·曼德, 馬提亞斯·馬克思 申請人:德國麥?zhǔn)洗笏帍S