專利名稱：：葫蘆巴種子加工物及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及a-淀粉酶抑制作用被增強(qiáng)的葫蘆巴種子加工物及其制造方法。本發(fā)明還涉及葫蘆巴種子所具有的強(qiáng)烈苦味被同時(shí)降低、具有易于攝取的味道的葫蘆巴種子加工物及其制造方法。
背景技術(shù)：
：a-淀粉酶是具有在體內(nèi)將淀粉水解為糖的作用的酶。如果能夠抑制a-淀粉酶的活性，就能夠抑制糖在體內(nèi)的吸收。因此，a-淀粉酶抑制物質(zhì)可以有效地用作特定飲食或抗糖尿病的食品原料、片劑等的有效成分。葫蘆巴是豆科的一年生草本植物。早已知道葫蘆巴的種子被用作咖喱用的香料。非專利文獻(xiàn)1中，公開了一種使用提取物進(jìn)行的體外實(shí)驗(yàn)(invitro)，該提取物通過用30%乙醇對(duì)葫蘆巴粉末進(jìn)行提取而得到。該實(shí)驗(yàn)中，確認(rèn)了該提取物具有a-淀粉酶抑制作用。但是，非專利文獻(xiàn)l所示的葫蘆巴粉末的a-淀粉酶抑制作用并不能令人滿意。非專利文獻(xiàn)2中，記載了使狗攝入葫蘆巴的皂苷，在消化道內(nèi)形成糖苷配基而排泄，還記載了對(duì)皂苷進(jìn)行P-葡萄糖苷酶處理，則26位的糖切斷，3位切不斷。但是，非專利文獻(xiàn)2中完全沒有提及a-淀粉酶抑制作用。非專利文獻(xiàn)1:MolCellBiochem.2006Jan，281(1-2):173-83.Biochemicalstudyoftheanti_diabeticactionoftheEgyptianplantsFenugreekandBalanites.非專利文獻(xiàn)2丄ipids.1991Mar，26(3):191-7.Implicationofsteroidsaponinsands即ogeninsinthehypocholesterolemiceffectoffenugreek.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于增強(qiáng)葫蘆巴種子成分所具有的a-淀粉酶抑制作用。本發(fā)明的發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過使P-葡萄糖苷酶作用于來自葫蘆巴種子的材料而得到的葫蘆巴種子加工物，與處理前的材料相比，具有顯著提高的a-淀粉酶抑制作用，并且苦味得到抑制，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明包括以下方面。(1)—種葫蘆巴種子加工物，其通過使P-葡萄糖苷酶作用于葫蘆巴種子或來自葫蘆巴種子的材料而得到。(2)如上述(1)所述的葫蘆巴種子加工物，上述P-葡萄糖苷酶來自微生物。(3)如上述(1)或(2)所述的葫蘆巴種子加工物，作為上述P-葡萄糖苷酶，使用含有P-葡萄糖苷酶的酶制劑。(4)如上述(3)所述的葫蘆巴種子加工物，上述酶制劑含有多糖類分解酶。(5)如上述(1)(4)中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物，上述來自葫蘆巴種子的材料含有選自葫蘆巴種子的粉末、由葫蘆巴種子調(diào)制的糊狀物和葫蘆巴種子提取物中的至少一種。3(6)—種用于抑制a-淀粉酶的醫(yī)藥組合物，其含有上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物作為有效成分。(7)—種食品組合物，其含有上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫戸巴種子加工物。(8)—種葫蘆巴種子加工物的制造方法，其包括糊化步驟，在葫蘆巴種子的粉末中加水混合并進(jìn)行糊化，或者將葫蘆巴種子或其蒸煮物加水并進(jìn)行糊化；酶添加步驟，在通過糊化步驟得到的糊狀物、或者糊化步驟中使用的原料中添加并混合P-葡萄糖苷酶；和酶反應(yīng)步驟，在經(jīng)過糊化步驟和酶添加步驟得到的混合物中進(jìn)行酶反應(yīng)。(9)如上述(8)所述的方法，進(jìn)一步包括干燥步驟。(10)—種葫蘆巴種子加工物的制造方法，其包括糊化步驟，在葫蘆巴種子的粉末中加入添加混合有13_葡萄糖苷酶的水，混合并進(jìn)行糊化，或者將葫蘆巴種子或其蒸煮物加入添加并混合有P_葡萄糖苷酶的水進(jìn)行磨碎并糊化；和酶反應(yīng)步驟，在經(jīng)過糊化步驟得到的混合物中進(jìn)行酶反應(yīng)。(11)如上述(10)所述的方法，進(jìn)一步包括干燥步驟。(12)—種葫蘆巴種子加工物的制造方法，其包括提取步驟，使用溶劑從葫蘆巴種子或其粉末中提取，得到提取物；酶添加步驟，在該提取物中添加并混合P-葡萄糖苷酶；和酶反應(yīng)步驟，在通過酶添加步驟得到的混合物中進(jìn)行酶反應(yīng)。(13)如上述(12)所述的方法，進(jìn)一步包括干燥步驟。(14)—種a-淀粉酶抑制劑，其含有上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物作為有效成分。(15)如上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫戸巴種子加工物，其用于在體內(nèi)(invivo)或者體外(invitra)抑制a-淀粉酶。(16)如上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物，其具有預(yù)防或治療通過抑制a-淀粉酶而能夠得到改善的疾病的用途。(17)—種醫(yī)藥組合物，其含有上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物作為有效成分。該醫(yī)藥組合物還可以含有醫(yī)藥上允許的載體、添加物和賦形劑。(18)—種食品組合物，其含有上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫戸巴種子加工物作為有效成分。該食品組合物還可以含有作為食品允許的材料。(19)—種a-淀粉酶的抑制方法，其包括在a-淀粉酶中添加上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物的步驟。(20)—種通過抑制a-淀粉酶而能夠得到改善的疾病的預(yù)防或治療方法，其包括向需要預(yù)防或治療該疾病的對(duì)象給予有效量的上述(1)(5)中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物的步驟。該對(duì)象包括人等的哺乳動(dòng)物。(21)如上述(20)所述的方法，上述疾病為糖尿病或肥胖。發(fā)明效果通過用|3-葡萄糖苷酶對(duì)葫蘆巴種子進(jìn)行酶處理，能夠獲得增強(qiáng)了a-淀粉酶抑制效果的葫蘆巴種子加工物。并且，將該加工物用于醫(yī)藥或食品、飲料等中時(shí)，與未處理的葫蘆巴種子相比，能夠通過少量的添加得到a-淀粉酶的抑制效果。同時(shí)能夠降低葫蘆巴種子特有的苦味。另外，由于4-羥基異亮氨酸(以下，記為4-0H-異亮氨酸)等的成分量變化和味道變化小，能夠易于攝取。因此，本發(fā)明的葫蘆巴種子加工物，能夠抑制a-淀粉酶將攝入體內(nèi)的淀粉分解為糖的作用，能夠適用于用于特定飲食或抗糖尿病的醫(yī)藥組合物或食品組合物、食品原料、片劑等。本說明書包括作為本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的日本專利申請(qǐng)2007-274006號(hào)和日本專利申請(qǐng)2007-108525號(hào)的說明書和/或附圖中記載的內(nèi)容。圖1表示利用SPEZYMECP處理后的葫蘆巴種子提取物的濃度與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。圖2表示利用從SPEZYMECP分離的P-葡萄糖苷酶處理后的葫蘆巴種子提取物的濃度與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。圖3表示利用來自巴旦杏仁的13-葡萄糖苷酶處理后的葫蘆巴種子提取物的濃度與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。圖4表示實(shí)施例4中HPLC的代表性圖。圖5表示實(shí)施例4中HPLC的代表性圖。圖6表示葫蘆巴種子粉末中有無利用SPEZYMECP的處理與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。圖7表示利用SPEZYMECP處理后的葫蘆巴種子提取物的濃度與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。圖8表示利用從SPEZYMECP分離的P-葡萄糖苷酶處理后的葫蘆巴種子提取物的濃度與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。圖9表示利用來自巴旦杏仁的13-葡萄糖苷酶處理后的葫蘆巴種子提取物的濃度與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。圖10表示實(shí)施例21中HPLC的代表性圖。圖11表示實(shí)施例21中HPLC的代表性圖。圖12表示葫蘆巴種子粉末中有無利用SPEZYMECP的處理與a-淀粉酶活性抑制率的關(guān)系。具體實(shí)施例方式1.葫蘆巴種子本發(fā)明中使用的葫蘆巴，可以直接使用種子，或者使用將種子粉碎后的全粒粉、或者由種子的胚乳或種皮等特定部分形成的粉末。本說明書中的"葫蘆巴種子"不僅包括發(fā)芽前的種子，也包括發(fā)芽后的種子。使用的葫蘆巴種子的含水量沒有特別限定，優(yōu)選為812質(zhì)量％左右，最優(yōu)選約為10質(zhì)量％。2.來自葫蘆巴種子的材料本發(fā)明中的"來自葫蘆巴種子的材料"沒有特別限定，作為典型例有葫蘆巴種子的粉末、由葫蘆巴種子調(diào)制的糊狀物、和葫蘆巴種子的提取物等。葫蘆巴種子的粉末只要是通過將種子粉碎而得到的產(chǎn)物即可，顆粒子的大小、形狀等沒有特別限定。粉碎的手段沒有特別限定，例如可以使用輥式粉碎機(jī)等進(jìn)行粉碎。另5外，也可以使用含有由種子的胚乳或種皮等特定部分形成的粉末的葫蘆巴種子粉末。使用的葫蘆巴種子粉末的含水量沒有特別限定，優(yōu)選為812質(zhì)量％左右，最優(yōu)選約為10質(zhì)"由葫蘆巴種子調(diào)制的糊狀物"可以通過兩種代表性的方法進(jìn)行調(diào)制。第一種為由葫蘆巴種子粉末進(jìn)行調(diào)制的方法。第二種為由葫蘆巴種子或其蒸煮物進(jìn)行調(diào)制的方法。糊狀物的第一種制造方法中，在上述葫蘆巴種子粉末中加水混合，得到糊狀物。通過加水，使后述的P-葡萄糖苷酶的酶反應(yīng)有效地進(jìn)行。加水量沒有特別限定，優(yōu)選相對(duì)于葫蘆巴種子粉末的重量，為1倍以上，優(yōu)選為120倍，更優(yōu)選為310倍。如果該加水量過少，則由于粘度過高，可能導(dǎo)致難以獲得均勻的糊狀物。反之，如果加水量過多，則可能出現(xiàn)干燥時(shí)間增長(zhǎng)、操作效率降低，并且成本上不能令人滿意的問題。并且，這樣得到的糊狀物最好在添加P-葡萄糖苷酶等酶之前，進(jìn)行加熱處理。這是由于能夠通過加熱處理進(jìn)行殺菌，并且能夠使作為青草味的產(chǎn)生根源的脂加氧酶和分解蛋白的蛋白酶等的酶失活，并且使成分容易從組織中溶出，使P-葡萄糖苷酶等的酶反應(yīng)順利進(jìn)行。加熱溫度優(yōu)選在10(TC進(jìn)行5分鐘左右。在糊狀物的第二種制造方法中，將葫蘆巴種子或其蒸煮物與水共同磨碎得到糊狀物。這里的"蒸煮物"是指通過對(duì)種子進(jìn)行煮和/或蒸而得到的產(chǎn)物。對(duì)該方法的典型例進(jìn)行說明。首先，將葫蘆巴種子加入沸水(例如，葫蘆巴種子重量的3倍以上，優(yōu)選320倍，更優(yōu)選310倍的沸水)中，進(jìn)行5分鐘左右的加熱處理。通過該加熱，進(jìn)行種子的殺菌，同時(shí)，種子中的脂加氧酶等酶也失活，能夠防止出現(xiàn)青草味。并且，葫蘆巴特有的苦味成分容易從組織中溶出，因而使后續(xù)步驟中的P-葡萄糖苷酶的反應(yīng)順利進(jìn)行。將這樣得到的葫蘆巴種子蒸煮物與水一起進(jìn)行磨碎，得到糊狀物。磨碎的方法，簡(jiǎn)便的是對(duì)上述煮汁和種子的混合物進(jìn)行磨碎處理，但并不限定于此。利用食物加工器、均化器、MassColloider等進(jìn)行磨碎直至形成順滑的糊狀。之后，優(yōu)選在4(TC左右，用可食用性的酸或堿將上述糊狀物調(diào)節(jié)至13-葡萄糖苷酶最適合的pH附近。葫蘆巴種子的提取物可以利用通常的提取物的提取方法、即使用溶劑的提取方法得到，沒有特別限定。葫蘆巴種子的提取物典型地可以通過使用溶劑從葫蘆巴種子的粉末進(jìn)行提取，對(duì)得到的提取物進(jìn)行濃縮而得到。另外，本發(fā)明中的"提取物"也包括用適當(dāng)溶劑對(duì)濃縮物進(jìn)行稀釋后的產(chǎn)物。作為提取用溶劑，可以有熱水或者水、低級(jí)醇(甲醇、乙醇等)、和它們的混合物，其中優(yōu)選使用熱水或水與乙醇的混合液。為了將濃縮物(具有粘性的固態(tài)物)應(yīng)用于P-葡萄糖苷酶的酶反應(yīng)，最好加水。相對(duì)于lg上述濃縮物(具有粘性的固態(tài)物)，加水量?jī)?yōu)選為lml100ml，更優(yōu)選為4ml20ml。如果上述濃縮物的量過多，則會(huì)對(duì)味道帶來不良影響、并且容易生成沉淀。3.P-葡萄糖苷酶本發(fā)明中使用的P-葡萄糖苷酶，可以來自微生物、來自植物等，沒有特別限定，但從酶的活性強(qiáng)、底物的適合性的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選使用來自微生物的P-葡萄糖苷酶。作為該微生物，可以有Trichodermareesei(TrichodermareeseiRUT-C30(ATCCNo.56765)、TrichodemareeseiQM9414(ATCCNo.26921))。作為來自植物的P-葡萄糖苷酶，可以有來自巴旦杏仁的P-葡萄糖苷酶。另外，作為P-葡萄糖苷酶，除了可以使用經(jīng)過精制的P-葡萄糖苷酶之外，還可以使用含有P-葡萄糖苷酶的酶制劑。作為酶制劑，可以有來自微生物的MultifectBGL、SPEZYMECP(Genencor協(xié)和)、柚苷酶(田邊制藥)等。其中，MultifectBGL和SPEZYMECP(Genencor協(xié)和)是液態(tài)的酶制劑，柚苷酶是粉末狀的酶制劑。該酶制劑除了含有P-葡萄糖苷酶之外，最好含有甘露聚糖酶等多糖類分解酶。另外，可以含有纖維素酶作為多糖類分解酶。在用e-葡萄糖苷酶對(duì)葫蘆巴種子或來自葫蘆巴種子的材料進(jìn)行處理時(shí)，由于葫蘆巴種子具有的多糖類的影響，反應(yīng)混合物高粘度化，有時(shí)13-葡萄糖苷酶的反應(yīng)難以進(jìn)行，但如果也存在上述甘露聚糖酶等多糖類分解酶，上述多糖類就會(huì)被該多糖類分解酶分解，因此能夠降低反應(yīng)混合物的粘性，提高反應(yīng)效率，并且能夠提高制造時(shí)的機(jī)械適應(yīng)性。對(duì)P-葡萄糖苷酶的添加量沒有特別限定，例如，使用葫蘆巴種子的粉末作為反應(yīng)原料、使用SPEZYMECP作為含有P-葡萄糖苷酶的酶制劑時(shí)，優(yōu)選對(duì)20g粉末添加適量的水后，添加0.OOlml至20ml的SPEZYMECP;或者在適量的水中添加0.OOlml至20ml的SPEZYMECP后，將其加入20g粉末中。或者，使用葫蘆巴種子的粉末作為反應(yīng)原料、使用SPEZYMECP作為含有P_葡萄糖苷酶的酶制劑時(shí)，也可以對(duì)lg粉末添加適量的水后，添加0.OOlml至20ml的SPEZYMECP;或者在適量的水中添加0.OOlml至20ml的SPEZYMECP后，將其加入lg粉末中。另外，使用由20g葫蘆巴種子的粉末形成的糊狀物作為反應(yīng)原料、使用SPEZYMECP作為含有13_葡萄糖苷酶的酶制劑時(shí)，優(yōu)選在糊狀物中添加0.OOlml至20ml的SPEZYMECP?；蛘?，使用由lg葫蘆巴種子的粉末形成的糊狀物作為反應(yīng)原料、使用SPEZYMECP作為含有P_葡萄糖苷酶的酶制劑時(shí)，也可以在糊狀物中添加0.OOlml至20ml的SPEZYMECP。另外，使用葫蘆巴種子的提取物作為反應(yīng)原料、使用SPEZYMECP作為含有P-葡萄糖苷酶的酶制劑時(shí)，在提取物(例如提取物的約70倍濃縮物)(具有粘性的固態(tài)物)為lg時(shí)，優(yōu)選添加0.05ml至10ml的SPEZYMECP。或者，也可以以此為基準(zhǔn)，實(shí)施者適當(dāng)確定酶制劑的添加量。另外，向由葫蘆巴種子調(diào)制的糊狀物中添加P-葡萄糖苷酶時(shí)，可以按照上述順序調(diào)制糊狀物后，添加P-葡萄糖苷酶；也可以在糊化步驟前向其原料(即，上述第一種方法中的葫蘆巴種子、其粉末或水，或者上述第二種方法中的葫蘆巴種子、其蒸煮物或水)中添加e-葡萄糖苷酶后，進(jìn)行糊化步驟。4.酶反應(yīng)本發(fā)明中的"酶反應(yīng)"指由P-葡萄糖苷酶引起的反應(yīng)，但是，在酶制劑中含有甘露糖苷酶、纖維素酶等多糖類分解酶時(shí)，也指由這些酶引起的反應(yīng)。為了進(jìn)行酶反應(yīng)，優(yōu)選在酶的最適合的溫度區(qū)域、最適合的pH區(qū)域進(jìn)行。用于進(jìn)行酶反應(yīng)的溫度優(yōu)選為20°C以上，更優(yōu)選為40°C60°C。反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為48小時(shí)以下，更優(yōu)選為2小時(shí)24小時(shí)。如果該溫度超過6(TC，則可能導(dǎo)致13-葡萄糖苷酶的活性降低。為了保持上述反應(yīng)溫度，可以使用適當(dāng)?shù)募訙匮b置。另外，酶反應(yīng)中，與靜置相比，優(yōu)選進(jìn)行振蕩或攪拌。由此，能夠使酶均勻分散，提高酶反應(yīng)的效率，并且能夠有效防止產(chǎn)生不均勻的塊。振蕩或攪拌的方法可以由實(shí)施者適當(dāng)確定。作為酶反應(yīng)的pH，優(yōu)選在反應(yīng)混合物中添加可食用性的酸或堿，調(diào)節(jié)至最適合的pH區(qū)域。5.酶的失活如果考慮作為食品或食品原材料使用，優(yōu)選在酶反應(yīng)后，使達(dá)到目的并發(fā)揮作用后的P-葡萄糖苷酶等的酶加熱失活。加熱失活的處理?xiàng)l件沒有特別限定，可以在例如80°CIO(TC進(jìn)行加熱處理5分鐘10分鐘。6.干燥、粉末化酶失活后的混合物可以直接用作本發(fā)明的葫蘆巴種子加工物，也可以進(jìn)一步進(jìn)行干燥，例如，干燥至含水量為6質(zhì)量％以下、優(yōu)選為26質(zhì)量％?；蛘咭部梢詫?duì)干燥物進(jìn)行適當(dāng)粉碎。干燥方法，可以使用熱風(fēng)干燥或噴霧干燥等一般方法，但從味道的角度出發(fā)，優(yōu)選冷凍干燥。冷凍干燥方法按照常規(guī)方法實(shí)施即可。作為粉碎中使用的粉碎裝置，可以用例如搗碎機(jī)、MassColloider、Comitrol、研磨棒等。粉碎物的粒度可以根據(jù)需要用篩子進(jìn)行調(diào)節(jié)。7.葫蘆円,種子加工物的形狀通過本發(fā)明的方法制造的葫蘆巴種子加工物，可以以粉末狀、糊狀、高粘度固態(tài)物狀、由種子加工物形成的提取物等的各種形狀提供。8.葫蘆巴種子加工物的用途本發(fā)明的葫蘆巴種子加工物，與作為原料的葫蘆巴種子或來自葫蘆巴種子的材料相比，a-淀粉酶抑制作用增強(qiáng)。因此，本發(fā)明的葫蘆巴種子加工物能夠用作a-淀粉酶抑制劑。本發(fā)明的葫蘆巴種子加工物，可以根據(jù)需要，與醫(yī)藥上允許的載體、添加物、賦形劑等組合而制劑化，以具有a-淀粉酶抑制作用的醫(yī)藥組合物的形態(tài)使用。該醫(yī)藥組合物的給藥方式?jīng)]有特別限定，可以根據(jù)需要適當(dāng)選擇，通?？梢宰鳛槠瑒?、膠囊劑、顆粒劑、微粒劑、散劑、液劑、糖漿劑、懸濁劑、乳劑、酏劑等口服劑，或者注射劑、點(diǎn)滴劑、栓劑、吸入劑、經(jīng)皮吸收劑、粘膜吸收劑、貼劑、軟膏劑等非口服劑進(jìn)行給藥。該醫(yī)藥組合物中的載體、添加劑、賦形劑等可以根據(jù)給藥方式適當(dāng)選擇。該醫(yī)藥組合物能夠治療或預(yù)防的疾病，可以有糖尿病、肥胖等。本發(fā)明的葫蘆巴種子加工物，可以根據(jù)需要，與作為食品允許的其它材料組合，以具有a-淀粉酶抑制作用的食品組合物的形態(tài)使用。該食品組合物，可以在其本體、包裝、說明書、宣傳物或宣傳用電子信息中標(biāo)注功能顯示，例如，具有a-淀粉酶抑制作用的顯示、降血糖值的顯示等。食品組合物的形態(tài)沒有特別限定，可以是固態(tài)、半固態(tài)、液態(tài)等各種形態(tài)。實(shí)施例以下實(shí)施例中，如果沒有特別說明，"葫蘆巴"意味著"葫蘆巴種子"。以下實(shí)驗(yàn)中使用的酶制劑(SPEZYMECP、MultifectBGL、柚苷酶)，除了分別含有具有13_葡萄糖苷酶活性的酶以外，還含有具有纖維素酶活性、甘露糖苷酶活性等的酶。實(shí)施例1使用市售酶制劑SPEZYMECP的提取物的制作方法與a-淀粉酶抑制效果的測(cè)l定述提取物的制作方法和提取物的酶處理按照以下方法進(jìn)行。使用索格利特抽提器，將葫蘆巴(印度產(chǎn))粉末400g用1500ml二乙醚在85。C進(jìn)行3小時(shí)脫脂處理后，將粉末風(fēng)干。用500ml30%甲醇對(duì)脫脂粉末50g提取2小時(shí)，將得到的甲醇組分濃縮，得到黃褐色固體7.Og。之后，將該固體溶解于36mM的4-嗎啉代乙磺酸(以下記為MES)水溶液中，將得到的液體作為提取物。濃度以單位量的提取物中含有的黃褐色固體重量表示。在濃度為O.25g/ml的提取物200ul中混合SPEZYMECP(Genencor協(xié)和)35ul、36mM的MES4765ul，將混合物在55t:保持2小時(shí)，進(jìn)行酶反應(yīng)。反應(yīng)后，在IO(TC加熱10分鐘，使酶失活。將該失活后得到的酶反應(yīng)物作為酶處理提取物(此時(shí)為O.Olg/ml)。另一方面，用于對(duì)照，用MES稀釋濃度為0.25g/ml的提取物，調(diào)制成0.Olg/ml的產(chǎn)物，作為未處理提取物。提取物的a-淀粉酶抑制效果的測(cè)定方法按照以下方法進(jìn)行。準(zhǔn)備底物溶液，該底物溶液由45mM的4_嗎啉代乙磺酸、45mM的氯化鈉、312.5mM的硫氰酸鉀、1.5mM的乙酸鈣、0.2mM的2-氯-4-硝基苯基麥芽三糖苷(2_chloro_4_nitrophenylmaltotrioside)(Oriental酵母)的組成構(gòu)成。另夕卜，將豬胰臟a_淀粉酶(Sigma)(23U/mg)在36mM的MES溶液中溶解至0.25mg/ml的濃度，調(diào)制成酶液。將酶處理提取物與36mM的MES溶液混合，使得吸光度測(cè)定時(shí)提取物濃度為0.5mg/ml、1.Omg/ml、l.5mg/ml，在lOOul得到的溶液中添加酶液10ul，在32。C預(yù)孵育5分鐘。之后添加400ul底物溶液，反應(yīng)2分鐘后，使用分光光度計(jì)(島津制作所)測(cè)定405nm的吸光度。另外，作為對(duì)照，使用同濃度的未處理提取物代替酶處理提取物，進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)。使用下式計(jì)算a-淀粉酶的抑制率。抑制率=(無提取物時(shí)的吸光度增加_添加提取物(未處理提取物或酶處理提取物)時(shí)的吸光度增加)/無提取物時(shí)的吸光度增加X100，吸光度增加二有酶時(shí)的吸光度-沒有酶時(shí)的吸光度表1和圖1表示提取物濃度與抑制率的關(guān)系。提取物濃度以最終的測(cè)定試樣中含有的來自葫蘆巴的黃褐色固體的重量表示。通過SPEZYME處理，提高了a-淀粉酶的抑制效果(各n=3)。[表1]<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例2使用分離P-葡萄糖苷酶制作的提取物的a-淀粉酶抑制效果測(cè)l定將用5mM磷酸緩沖液(pH7.0)平衡化后的離子交換樹脂DE52(OH-型)約16g填充到lOmmX200mm的柱子中，將SPEZYMECPlml(相當(dāng)于蛋白量72mg)上樣至柱子中，用5mM磷酸緩沖液pH7.0展開，以1部分0.5ml(2.5min)分離為110部分。收集部分1040，得到不具有纖維素酶活性而具有P-葡萄糖苷酶活性的組分。與實(shí)施例1相同，在0.25g/ml的提取物40ul中混合分離得到的13_葡萄糖苷酶組分140iU、36mM的MES溶液820ul，按照與實(shí)施例l相同的操作進(jìn)行酶處理。同樣進(jìn)行a-淀粉酶抑制效果測(cè)定。表2和圖2表示提取物濃度與抑制率的關(guān)系。通過從SPEZYMECP分離的P-葡萄糖苷酶活性組分的處理，抑制效果與用SPEZYMECP進(jìn)行處理時(shí)有相同程度的增強(qiáng)。[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>0.56.924.7135.546.31.554.364.0實(shí)施例3側(cè)P-鶴M魏(円,旦賴二)先l隱翻又麵a-體,纖果游與實(shí)施例1相同，在0.25g/ml的提取物40ul中混合來自巴旦杏仁的P-葡萄糖苷酶(Oriental酵母)(37U/mg)0.lmg、36mM的MES溶液860ul，將混合物在37。C保持4天，進(jìn)行酶反應(yīng)。反應(yīng)后在IO(TC加熱10分鐘，使酶失活。之后，與實(shí)施例1同樣進(jìn)行a-淀粉酶抑制效果測(cè)定。表3和圖3表示提取物濃度與抑制率的關(guān)系。通過P-葡萄糖苷酶活性組分的處理，抑制效果增強(qiáng)至用SPEZYMECP進(jìn)行處理時(shí)的同等程度以上。[表3]抑制率％檢測(cè)液中的葫蘆巴提取物濃度(mg/ml)未處理酶處理上升值0.540.184.244.1169.696.226.61.578.197.119.0實(shí)施例4酶處理粉末的a-淀粉酶抑制效果測(cè)定葫蘆巴粉末的酶處理按照以下方法進(jìn)行。在20g葫蘆巴粉末中加入水115g并進(jìn)行混合，得到糊狀物。用鹽酸將該糊狀物的pH調(diào)節(jié)至5.0。添加1.9mlSPEZ預(yù)ECP(Genencor協(xié)和)，在55。C孵育6小時(shí)，進(jìn)行酶反應(yīng)。反應(yīng)后在IO(TC進(jìn)行10分鐘失活處理，將糊狀物冷卻后，進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。由此得到SPEZYMECP處理過的葫蘆巴粉末。在粉末的a-淀粉酶抑制效果測(cè)定中，作為試劑使用與實(shí)施例l相同的物質(zhì)?；旌?6mM的MES溶液200ul和酶液20ul，添加上述SPEZYMECP處理過的葫戸巴粉末10mg，充分混合。在37t:預(yù)孵育5分鐘后，添加底物溶液800ul，進(jìn)行5分鐘反應(yīng)。反應(yīng)后煮沸10分鐘使酶反應(yīng)終止，以13000rpm離心分離10分鐘，得到上清液。上清液通過0.45um過濾器后，向HPLC(島津制作所生產(chǎn)，柱:PEGASILODS-24.6①X250mm(Senshu科學(xué))，移動(dòng)相:甲醇和31.25mM磷酸緩沖液p朋.79以2:8混合得到的溶液，流速0.5ml/min)注入，測(cè)定405nm的吸光度。保持時(shí)間為13.2分鐘左右的峰為酶反應(yīng)的生成物，由該峰面積比計(jì)算抑制率(表4)。抑制率=(無粉末時(shí)的峰面積-添加粉末時(shí)的峰面積)/無粉末時(shí)的峰面10積X100圖4、5中表示代表性的圖，圖6表示處理方法與抑制率之間的關(guān)系(各n=2)。[表4]<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實(shí)施例5種子的苦味稃度和4-0H-異亮氡酸量的測(cè)l定在鍋中加入130180g的水，沸騰后加入葫蘆巴種子(印度產(chǎn))20g，在沸水中加熱15分鐘后，加水至總量為135g。加水后添加2mllM的HC1，用ExcelAutoHomogenizer(日本精機(jī))以9000rpm進(jìn)行1分鐘磨碎。經(jīng)過1分鐘后，停止磨碎，添加1.9mlSPEZYMECP(Genencor協(xié)和)，再以9000rpm進(jìn)行4分鐘磨碎。將磨碎得到的糊狀物移至50ml的離心管，在55°C的恒溫水浴槽中孵育39小時(shí)。孵育后，在沸水中加熱2分鐘，使SPEZYMECP失活后，進(jìn)行冷卻，將pH調(diào)節(jié)至中性附近。對(duì)這樣得到的SPEZYMECP處理過的糊狀物進(jìn)行感官評(píng)價(jià)(以參照苦味為io分，完全沒有苦味時(shí)為o分，進(jìn)行打分，隨機(jī)選擇IO人作為評(píng)判員。評(píng)價(jià)時(shí)也考慮順序效果)。作為對(duì)照，使用除了未添加SPEZYMECP以外同樣處理得到的糊狀物。感官檢查的結(jié)果，10人中有10人判斷苦味降低，以二點(diǎn)比較法中0.1%的臨界系數(shù)確認(rèn)有效差。結(jié)果表示于表5中。4-0H-異亮氨酸的測(cè)定，對(duì)上述處理后的糊狀物進(jìn)行冷凍干燥，將用70%甲醇提取得到的物質(zhì)為檢測(cè)液，使用氨基酸分析儀(島津制作所)進(jìn)行分析。作為對(duì)照，使用將葫蘆巴種子在70%甲醇中粉碎并提取得到的檢測(cè)液。結(jié)果表示于表6中。對(duì)各處理區(qū)的4-0H-異亮氨酸量進(jìn)行1維配置分散分析，結(jié)果在臨界系數(shù)為5%時(shí)，未確認(rèn)到有效差異。因此，可知處理物的味道優(yōu)異，沒有伴隨4-0H-異亮氨酸等其它的成分變化。[表5]以對(duì)照作為10分時(shí)的酶處理區(qū)的苦味強(qiáng)度<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>[表6]每lg葫蘆巴的4-0H-異亮氨酸分析值(峰面積)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例6使用酶制劑SPEZYMECP的糊狀物的a-淀粉酶抑制效果在180g沸水中添加葫蘆巴種子20g，加熱5分鐘。之后冷卻，加水至總量為135g，添加1M的鹽酸2.7ml，之后使用均化器以9000rpm處理5分鐘，得到pH5.0的糊狀物。接著，準(zhǔn)備2份30g的該糊狀物，在其中一份中添加混合422ill酶SPEZYMECP。另一份作為無添加試樣，在上述糊狀物30g中添加混合422iU水。這樣得到的上述2個(gè)試樣在55t:孵育6小時(shí)之后，以90°C、15分鐘的條件加熱，使酶處理試樣中的酶失活。之后，利用水恢復(fù)到室溫，將PH調(diào)節(jié)至7.0，在-S(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定方法以下述方法進(jìn)行。底物溶液使用除了乙酸鈣的濃度為4.5mM以外都與實(shí)施例1相同的物質(zhì)。加入36mM的MES溶液200y1和上述SPEZYMECP處理過的葫蘆巴粉末10mg，輕輕混合。在其中輕輕混合與實(shí)施例1相同的酶液20l，在37t:孵育5分鐘，通過除了a-淀粉酶的反應(yīng)時(shí)間為37t:、10分鐘以外，與實(shí)施例4相同的方法測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表7中。用酶SPEZYMECP處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)到2倍。[表7]<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例7使用來自円.旦杏仁的g-葡萄糖苷tt的a-淀粉tt的抑制效果在180g沸水中添加葫蘆巴種子20g，加熱5分鐘。之后冷卻，加水至總量為135g，添加1M的鹽酸2.6ml，之后使用均化器以9000rpm處理5分鐘，得到pH5.3的糊狀物。接著，準(zhǔn)備10g該糊狀物，添加將來自巴旦杏仁的13_葡萄糖苷酶30mg與蒸餾水500ii1混合得到的混合物，之后在37t:反應(yīng)48小時(shí)。之后，以90°C、15分鐘的條件加熱，使酶處理試樣中的酶失活。之后，利用水恢復(fù)到室溫，將pH調(diào)節(jié)至7.O，在-S(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定方法以與實(shí)施例6相同的方法，測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表8中。用來自巴旦杏仁的P-葡萄糖苷酶處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)2倍。[表8]<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例8使用酶制劑SPEZYMECP的糊狀物的a-淀粉酶抑制效果使用輥式粉碎機(jī)將葫蘆巴種子粉碎，得到穿過60網(wǎng)目左右的粉末。在得到的穿過60網(wǎng)目左右的葫蘆巴粉末10g中添加并混合57.5g水，得到糊狀物。接著，準(zhǔn)備2份25g的上述糊狀物，在其中一份中添加混合酶SPEZYMECP826iU。另一份中作為無添加試樣，在上述糊狀物25g中添加并混合蒸餾水826iU。將由此得到的上述2份試樣在55t:孵育24小時(shí)后，以90°C、15分鐘的條件加熱，使酶處理試樣中的酶失活。之后，在-8(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。采用與實(shí)施例6相同的測(cè)定方法，測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表9中。用酶SPEZYMECP處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)。[表9]實(shí)施例9使用酶制劑SPEZYMECP的糊狀物的a-淀粉酶抑制效果使用輥式粉碎機(jī)將葫蘆巴種子粉碎得到穿過60網(wǎng)目左右的葫蘆巴粉末，在180g沸水中添加該粉末20g，加熱5分鐘之后，加水至合計(jì)為135g。然后準(zhǔn)備2份25g的得到的糊狀物，在其中一份中添加混合酶SPEZYMECP826ill。另一份作為無添加試樣，在上述糊狀物25g中添加混合水826iil。將由此得到的上述2份試樣在55t:孵育24小時(shí)后，以90°C、15分鐘的條件加熱，使酶處理試樣中的酶失活。之后，在-8(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。采用與實(shí)施例6相同的測(cè)定方法，測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表10中。用酶SPEZYMECP處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)。[表IO]<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例10酶濃度的添加量與a-淀粉酶抑制效果在180g沸水中添加葫蘆巴種子20g，加熱5分鐘。之后冷卻，加水至總量為135g，添加1M的鹽酸2.6ml，之后使用均化器以9000rpm處理5分鐘，得到pH4.8的糊狀物。進(jìn)行該處理2次，將得到的糊狀物分成40g每份，準(zhǔn)備相對(duì)于葫蘆巴種子20g、酶SPEZYMECP的濃度為IP1、10yl、100iil、20ml的4份試樣。S卩，酶SPEZYMECP的濃度為liU時(shí)，在糊狀物40g中添加22ill酶SPEZYMECP的100倍稀釋液。酶SPEZYMECP的濃度為10y1時(shí)，在糊狀物40g中添加222ill酶SPEZYMECP的100倍稀釋液。酶SPEZYMECP的濃度為100ii1時(shí)，在糊狀物40g中添加222ill酶SPEZYMECP的10倍稀釋液。酶SPEZYMECP的濃度為20ml時(shí)，在糊狀物40g中添加4.4ml酶SPEZYMECP液。將由此得到的上述4份試樣在55t:孵育10天后，以90°C、15分鐘的條件加熱，使酶處理試樣中的酶失活。之后，在-8(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。采用以與實(shí)施例6相同的測(cè)定方法，測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表11中。a-淀粉酶的抑制活性的效果，酶處理的樣品比酶未處理樣品的a-淀粉酶的抑制活性優(yōu)異。另外，酶SPEZYMECP的濃度小至liU，效果優(yōu)異。[表ll]<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例11糊狀物時(shí)1倍加水量的a-淀粉酶抑制效果使用輥式粉碎機(jī)將葫蘆巴種子粉碎得到穿過60網(wǎng)目左右的葫蘆巴粉末，在25g該粉末中添加25g水，攪拌混合后得到糊狀物，從其中分取20g每份，在其中一份中添加混合酶SPEZYMECP2.85ml。在另一份中添加混合水2.85ml。之后，在55。C孵育24小時(shí)后，以9(TC加熱15分鐘，使酶失活。之后，在-S(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。由此得到1倍加水量的酶處理品。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。采用與實(shí)施例6相同的測(cè)定方法，測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表12中。用酶SPEZYMECP處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)。[表12]<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例12賴廳謝20柳口綠白勺a-體,纖果使用輥式粉碎機(jī)將葫蘆巴種子粉碎得到穿過60網(wǎng)目左右的葫蘆巴粉末，在10g該粉末中添加200g水，攪拌混合后得到糊狀物，從其中分取100g每份，在其中一份中添加混合酶SPEZYMECP2.26ml。在另一份中添加混合水2.26ml，除此之外按照與實(shí)施例11相同的方法、在相同條件下進(jìn)行。其結(jié)果表示于表13中。用酶SPEZYMECP處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)。[表12]<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)施例13沸水時(shí)的9倍加水量和3倍加水量的a-淀粉酶抑制效果將20g葫戸巴種子在180g沸水中煮5分鐘后，冷卻，加水至總量為135g，在其中添加1M的鹽酸2.6ml，使用均化器以9000rpm、5分鐘的條件進(jìn)行粉碎，得到pH4.9的糊狀物。之后，取糊狀物30g每份，在其中一份中添加混合酶SPEZYMECP422iU，在另一份中添加混合蒸餾水422iU。將酶添加區(qū)作為處理區(qū)，將蒸餾水添加區(qū)作為未處理區(qū)。之后，在55t:孵育22.5小時(shí)后，以9(TC加熱15分鐘，使酶失活。之后，用水恢復(fù)至室溫，將pH調(diào)節(jié)至7.O，在-S(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。采用與實(shí)施例6相同的側(cè)定方法，測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。并且，將葫蘆巴種子20g在60g沸水中煮5分鐘后，冷卻，加水至總量為80g，粉碎后得到pH5.0的糊狀物，在30g糊狀物中添加混合酶SPEZYMECP712.5y1，除此以外按照與沸騰時(shí)的9倍加水量相同的方法、在相同條件下進(jìn)行。其結(jié)果表示于表14中。9倍加水量時(shí)的酶SPEZYMECP的樣品比3倍時(shí)的酶SPEZYMECP的樣品優(yōu)異，兩者比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果均增強(qiáng)。[表14]<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)施例14葫蘆R種子磨碎時(shí)添加酶SPEZYMECP情況下的a-淀粉酶抑制效果將葫戸巴種子lkg在5.75kg沸水中煮5分鐘后，冷卻，加水至總量為6.75kg。在其中添加酶SPEZYMECP95g，充分?jǐn)嚢韬蠼n20分鐘。之后使用MassColloider(增幸產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社)以間隔(clearance)300iim的條件進(jìn)行粉碎，用12M的鹽酸將pH調(diào)節(jié)為5.0，得到糊狀物。之后，將得到的糊狀物移至斜軸釜中，在55t:孵育8小時(shí)后，以9(TC加熱15分鐘，使酶失活。之后，用水恢復(fù)至室溫，將pH調(diào)節(jié)至7.0，在-S(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。另一方面，作為酶未處理品，用輥式粉碎機(jī)將葫蘆巴種子粉碎，得到穿過60網(wǎng)目左右的粉末。對(duì)這樣得到的兩份粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。采用與實(shí)施例6相同的測(cè)定方法，測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表15中。用酶SPEZYMECP處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)。[表15]<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實(shí)施例15驢翻又麵a-體,纖果以95t:、15分鐘的條件由葫戸巴種子進(jìn)行熱水提取得到提取物，準(zhǔn)備2份25g的該提取物，在其中一份中添加混合酶SPEZYMECP275iU。在另一份中添加混合蒸餾水275iU。之后，在55t:孵育24小時(shí)后，以9(TC加熱15分鐘，使酶失活。對(duì)這樣得到的兩份熱水提取物的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定方法如下所述。使用與實(shí)施例6相同的底物溶液。將熱水提取物200mg與上述酶SPEZYMECP處理過的葫蘆巴粉末10mg輕輕混合。之后，添加與實(shí)施例1相同的酶液20ul，輕輕攪拌，在37t:孵育5分鐘，以后通過與實(shí)施例6相同的方法測(cè)定a-淀粉酶的抑制活性。其結(jié)果表示于表16中。用酶SPEZ預(yù)ECP處理后的樣品比不用酶SPEZYMECP處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶的抑制活性的效果增強(qiáng)。[表16]<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實(shí)施例16使用柚苷酶時(shí)的a-淀粉酶抑制效果用500ml30%甲醇對(duì)脫脂粉末50g提取2小時(shí)，將得到的甲醇組分濃縮，得到黃褐色固體7.Og。之后，將該固體溶解于36mM的4-嗎啉代乙磺酸(以下記為MES)水溶液中，將得到的液體作為提取物。濃度以單位量的提取物中含有的黃褐色固體重量表示。在濃度為0.25g/ml的提取物200ul中混合1.8ml柚苷酶(田邊制藥)100mg/ml、36mM的MES3ml，將混合物在7(TC保持12小時(shí)，進(jìn)行酶反應(yīng)。反應(yīng)后，在IO(TC加熱IO分鐘，使酶失活。將該失活后得到的酶反應(yīng)物作為酶處理提取物(此時(shí)為0.Olg/ml)。另一方面，作為對(duì)比，用MES稀釋濃度為0.25g/ml的提取物，調(diào)制成0.Olg/ml的產(chǎn)物，作為未處理提取物。采用與實(shí)施例l相同的測(cè)定方法，測(cè)定提取物的a-淀粉酶抑制效果。其結(jié)果表示于表17中。用柚苷酶處理后的樣品比不用柚苷酶進(jìn)行處理時(shí)的樣品，a-淀粉酶抑制效果增強(qiáng)。[表17]<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)施例17發(fā)芽葫蘆円,的a-淀粉tt抑制效果在葫蘆巴種子20g中添加水53.lg，添加酶SPEZYMECP1.9ml，在恒溫槽中在25°C的溫度下靜置48小時(shí)，之后，從恒溫槽中取出，僅取出發(fā)芽后的種子，添加20ml水，進(jìn)一步按照殘留浸漬液量(ml)X取樣發(fā)芽種子(g)/種子總量(g)的量添加殘留浸漬液。之后，使用均化器(日本精機(jī))以9000rpm進(jìn)行粉碎處理5分鐘，之后為了使酶失活，在10(TC加熱10分鐘。之后，在-S(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。另一方面，作為酶未處理品，使用輥式粉碎機(jī)將葫蘆巴種子粉碎，得到穿過60網(wǎng)目左右的粉末。對(duì)這樣得到的粉末的a-淀粉酶的抑制活性進(jìn)行測(cè)定。采用與實(shí)施例6相同的方法進(jìn)行測(cè)定。其結(jié)果表示于表18中。用酶SPEZYME處理后的發(fā)芽葫蘆巴粉末的ci-淀粉酶抑制活性效果也得到增強(qiáng)。[表18]<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)施例18使用酶制劑SPEZYMECP的提取物的a-淀粉酶抑制效果的測(cè)定方法提取物的制作方法和提取物的酶處理按照以下方法進(jìn)行。使用輥式粉碎機(jī)將葫蘆巴種子(印度產(chǎn))粉碎，使用索格利特抽提器，將穿過60網(wǎng)目左右的粉末400g用1500ml二乙醚在85t:進(jìn)行3小時(shí)脫脂處理后，將粉末風(fēng)干。用500ml30%甲醇對(duì)脫脂粉末50g提取2小時(shí)，將得到的甲醇組分濃縮，得到黃褐色固體7.Og。之后，將該固體溶解于36mM的4-嗎啉代乙磺酸(以下記為MES)水溶液中，將得到的液體作為提取物。濃度以單位量的提取物中含有的黃褐色固體重量表示。在濃度為O.25g/ml的提取物200ul中混合SPEZYMECP(Genencor協(xié)和)35ul、36mM的MES4765ul，將混合物在55t:保持2小時(shí)，進(jìn)行酶反應(yīng)。反應(yīng)后，在IO(TC加熱10分鐘，使酶失活。將該失活后得到的酶反應(yīng)物作為酶處理提取物(此時(shí)為O.Olg/ml)。另一方面，用于對(duì)照，用MES稀釋濃度為0.25g/ml的提取物，調(diào)制成0.Olg/ml的產(chǎn)物，作為未處理提取物。提取物的a-淀粉酶抑制效果的測(cè)定方法按照以下方法進(jìn)行。準(zhǔn)備底物溶液，該底物溶液由45mM的4_嗎啉代乙磺酸、45mM的氯化鈉、312.5mM的硫氰酸鉀、1.5mM的乙酸鈣、0.2mM的2-氯-4-硝基苯基麥芽三糖苷(Oriental酵母)的組成構(gòu)成。另外，將豬胰臟a-淀粉酶(Sigma)(23U/mg)在36mM的MES溶液中溶解至0.25mg/ml的濃度，調(diào)制成酶液。將酶處理提取物與36mM的MES溶液混合，使得吸光度測(cè)定時(shí)提取物濃度為0.5mg/ml、l.Omg/ml、l.5mg/ml，在lOOul得到的溶液中添加酶液10ul，在37t:預(yù)孵育5分鐘。之后添加400ul底物溶液，在32t:反應(yīng)2分鐘后，使用分光光度計(jì)(島津制作所)測(cè)定405nm的吸光度。另外，作為對(duì)比，使用同濃度的未處理提取物代替酶處理提取物，進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)。a-淀粉酶的抑制率使用下式進(jìn)行計(jì)算。抑制率=(無提取物時(shí)的吸光度增加_添加提取物(未處理提取物或酶處理提取物)時(shí)的吸光度增加)/無提取物時(shí)的吸光度增加X100，吸光度增加二有酶時(shí)的吸光度-沒有酶時(shí)的吸光度表19和圖7表示提取物濃度與抑制率的關(guān)系。提取物濃度以最終的測(cè)定試樣中含有的來自葫蘆巴的黃褐色固體的重量表示。通過SPEZYME處理，提高了a-淀粉酶的抑制效果(各n=3)。[表19]抑制率％檢測(cè)液中的葫戸巴提取物濃度(mg/ml)未處理酶處理上升值0.537.943.65.7161.481.820.41.573.090.417.4實(shí)施例19使用分離P-葡萄糖苷酶制作的提取物的a-淀粉酶抑制效果測(cè)l定將用5mM磷酸緩沖液(pH7.0)平衡化后的離子交換樹脂DE52(OH-型)約16g填充到lOmmX200mm的柱子中，將SPEZYMECPlml(相當(dāng)于蛋白量72mg)上樣至柱子中，用5mM磷酸緩沖液pH7.0展開，以1部分0.5ml(2.5min)分離為110部分。收集部分1040，得到不具有纖維素酶活性而具有P-葡萄糖苷酶活性的組分。與實(shí)施例18同樣，在O.25g/ml的提取物40ul中混合分離得到的13_葡萄糖苷酶組分140iU、36mM的MES溶液820ul，按照與實(shí)施例18相同的操作進(jìn)行酶處理。提取物的a-淀粉酶抑制效果的測(cè)定方法按照以下方法進(jìn)行。準(zhǔn)備底物溶液，該底物溶液由45mM的4_嗎啉代乙磺酸、45mM的氯化鈉、312.5mM的硫氰酸鉀、4.5mM的乙酸鈣、2mM的2-氯-4-硝基苯基麥芽三糖苷(Oriental酵母)的組成構(gòu)成。另外，將豬胰臟a-淀粉酶(Sigma)(23U/mg)在36mM的MES溶液中溶解至0.25mg/19ml的濃度，調(diào)制成酶液。將酶處理提取物與36mM的MES溶液混合，使得吸光度測(cè)定時(shí)提取物濃度為0.5mg/ml、l.0mg/ml、l.5mg/ml，在lOOul得到的溶液中添加酶液10ul，在37"C預(yù)孵育5分鐘。之后添加400ul底物溶液，在37t:反應(yīng)5分鐘后，使用分光光度計(jì)(島津制作所)測(cè)定405nm的吸光度。另外，作為對(duì)照，使用同濃度的未處理提取物代替酶處理提取物，進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)。表20和圖8表示提取物濃度與抑制率的關(guān)系。通過從SPEZYMECP分離的P-葡萄糖苷酶活性組分的處理，抑制效果與用SPEZYMECP進(jìn)行處理時(shí)有同等程度的增強(qiáng)。[表20]<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實(shí)施例20側(cè)P-鶴M魏(円,旦賴二)附是耳又麵ci-體,纖果游與實(shí)施例18同樣在40ul0.25g/ml的提取物中混合O.lmg來自巴旦杏仁的P-葡萄糖苷酶(Oriental酵母)(37U/mg)、860ul36mM的MES溶液，將混合物在37。C保持4天，進(jìn)行酶反應(yīng)。反應(yīng)后在IO(TC加熱10分鐘，使酶失活。之后，與實(shí)施例18同樣進(jìn)行a-淀粉酶抑制效果測(cè)定。表21和圖9表示提取物濃度與抑制率的關(guān)系。通過13_葡萄糖苷酶活性組分的處理，抑制效果增強(qiáng)至用SPEZYMECP進(jìn)行處理時(shí)的同等程度以上。[表21]<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實(shí)施例21酶處理粉末的a-淀粉酶抑制效果測(cè)定葫蘆巴粉末的酶處理按照以下方法進(jìn)行。在20g葫蘆巴粉末中加入水115g并進(jìn)行混合，得到糊狀物。用鹽酸將該糊狀物的pH調(diào)節(jié)至5.0。添加1.9mlSPEZYMECP(Genencor協(xié)和)，在55。C預(yù)孵育6小時(shí)，進(jìn)行酶反應(yīng)。反應(yīng)后在IO(TC進(jìn)行10分鐘失活處理，將糊狀物冷卻后，在-8(TC凍結(jié)后在真空度為9Pa的氣氛中干燥64小時(shí)，以該條件進(jìn)行冷凍干燥，之后粉碎成粉末狀。由此得到SPEZYMECP處理過的葫蘆巴粉末。對(duì)于粉末的a-淀粉酶抑制效果測(cè)定，底物溶液除了乙酸鈣的濃度為4.5mM、2-氯-4-硝基苯基麥芽三糖苷的濃度為2mM以外，使用與實(shí)施例18相同的物質(zhì)?；旌?6rnM的MES溶液200ul和酶液20ul，添加上述SPEZYMECP處理過的葫蘆巴粉末10mg，輕輕攪拌混合。在37t:預(yù)孵育5分鐘后，添加底物溶液800ul，輕輕攪拌混合，進(jìn)行5分鐘反應(yīng)。反應(yīng)后煮沸10分鐘使酶反應(yīng)終止，以13000rpm離心分離10分鐘，得到上清液。上清液通過0.45um過濾器后，向HPLC(島津制作所生產(chǎn)，柱:PEGASILODS-24.6①X250mm(Senshu科學(xué))，移動(dòng)相甲醇和31.25mM磷酸緩沖液p朋.79以2:8混合得到的溶液，流速1.Oml/min)注入，測(cè)定405nm的吸光度。保持時(shí)間為13.2分鐘左右的峰為酶反應(yīng)的生成物，由該峰面積比計(jì)算抑制率(表22)。抑制率=(無粉末時(shí)的峰面積-添加粉末時(shí)的峰面積)/無粉末時(shí)的峰面積X100圖10、11中表示代表性的圖，圖12表示處理方法與抑制率之間的關(guān)系(各n=2)。[表22]<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>參考例實(shí)施例121中使用的葫蘆巴種子和葫蘆巴種子粉末的含水量均為10質(zhì)量％。本說明書中引用的全部刊物、專利和專利申請(qǐng)，作為參考直接引入本說明書。權(quán)利要求一種葫蘆巴種子加工物，其特征在于通過使β-葡萄糖苷酶作用于葫蘆巴種子或來自葫蘆巴種子的材料而得到。2.如權(quán)利要求1所述的葫蘆巴種子加工物，其特征在于所述P-葡萄糖苷酶來自微生物。3.如權(quán)利要求1或2所述的葫蘆巴種子加工物，其特征在于作為所述P-葡萄糖苷酶，使用含有P-葡萄糖苷酶的酶制劑。4.如權(quán)利要求3所述的葫蘆巴種子加工物，其特征在于所述酶制劑含有多糖類分解酶。5.如權(quán)利要求14中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物，其特征在于所述來自葫蘆巴種子的材料含有選自葫蘆巴種子的粉末、由葫蘆巴種子調(diào)制的糊狀物和葫蘆巴種子提取物中的至少一種。6.—種用于抑制a-淀粉酶的醫(yī)藥組合物，其特征在于含有權(quán)利要求15中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物作為有效成分。7.—種食品組合物，其特征在于含有權(quán)利要求15中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物。8.—種葫蘆巴種子加工物的制造方法，其特征在于，包括糊化步驟，在葫蘆巴種子的粉末中加水混合并進(jìn)行糊化，或者將葫蘆巴種子或其蒸煮物加水磨碎并進(jìn)行糊化；酶添加步驟，在通過糊化步驟得到的糊狀物、或者糊化步驟中使用的原料中添加并混合P-葡萄糖苷酶；禾口酶反應(yīng)步驟，在經(jīng)過糊化步驟和酶添加步驟得到的混合物中進(jìn)行酶反應(yīng)。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于進(jìn)一步包括干燥步驟。10.—種葫蘆巴種子加工物的制造方法，其特征在于，包括糊化步驟，在葫蘆巴種子的粉末中加入添加并混合有P-葡萄糖苷酶的水，混合并進(jìn)行糊化，或者將葫蘆巴種子或其蒸煮物加入添加并混合有P_葡萄糖苷酶的水進(jìn)行磨碎并糊化；和酶反應(yīng)步驟，在經(jīng)過糊化步驟得到的混合物中進(jìn)行酶反應(yīng)。11.如權(quán)利要求IO所述的方法，其特征在于進(jìn)一步包括干燥步驟。12.—種葫蘆巴種子加工物的制造方法，其特征在于，包括提取步驟，使用溶劑從葫蘆巴種子或其粉末中提取，得到提取物；酶添加步驟，在該提取物中添加并混合P-葡萄糖苷酶；禾口酶反應(yīng)步驟，在通過酶添加步驟得到的混合物中進(jìn)行酶反應(yīng)。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于進(jìn)一步包括干燥步驟。14.一種a-淀粉酶抑制劑，其特征在于含有權(quán)利要求15中任一項(xiàng)所述的葫蘆巴種子加工物作為有效成分。全文摘要本發(fā)明的目的在于增強(qiáng)葫蘆巴種子所具有的α-淀粉酶抑制作用。另外，本發(fā)明同時(shí)抑制葫蘆巴種子所具有的苦味。本發(fā)明涉及使β-葡萄糖苷酶作用于來自葫蘆巴種子的材料等而得到的葫蘆巴種子加工物及其制造方法。文檔編號(hào)A61P3/04GK101711162SQ200880019620公開日2010年5月19日申請(qǐng)日期2008年4月17日優(yōu)先權(quán)日2007年4月17日發(fā)明者中野雄喜,星野彰平,柘植信昭,正野仁慈申請(qǐng)人:好侍食品株式會(huì)社