專利名稱：：用于向肺臟遞送藥物的方法以及組合物的制作方法用于向肺臟遞送藥物的方法以及組合物相關申請本申請要求對2007年6月5日提交的U.S序列號60/942，026的優(yōu)先權，其全部內容通過引用結合在此。背景在肺部紊亂(包括慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性支氣管炎、以及肺氣腫)中存在著肺內外氣流的慢性阻塞。在這些紊亂表現(xiàn)出的阻塞經(jīng)常是永久性的并且隨時間而發(fā)展。加重是呼吸功能的急性惡化，導致發(fā)病率和死亡率增加。最近幾十年來，對治療慢性肺部病(如COPD)的研究集中于識別人類嗜中性細胞彈性蛋白酶(HNE)的抑制劑。HNE是一種能夠降解多種蛋白質(包括結構蛋白質纖連蛋白、膠原、以及彈性蛋白)的蛋白酶。在被異常表達時，HNE是體內最具破壞性的酶類之一。HNE與組織的破壞和炎癥有關并涉及多種肺部疾病，包括COPD、囊性纖維病、以及急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)連同身體的其他疾病。然而，HNE抑制劑的開發(fā)是困難的，并且盡管研究了數(shù)十年，目前市場上只有一種HNE治療法被批準僅在日本使用。被設計用于肺臟治療的HNE抑制劑以及其他藥物的開發(fā)集中于全身治療。這種方法的主要障礙(不論這種藥物是以口服、腸胃外的方式、或是通過吸入法進行遞送)是在肺臟中達到有意義的停留時間。因此，對于有效的肺臟治療仍存有一種未滿足的需求。概述本披露提供了用于向肺臟遞送藥物的方法和組合物?，F(xiàn)在應當理解的是，與治療肺病有關的一個關鍵問題是在肺臟中獲得足夠的活性藥物分子的停留時間方法具有困難。肺臟非常擅于清除外源物質，這樣使得在達到所希望的藥物效果之前活性藥物分子可能就從肺臟中被清除。肺臟中的II型肺細胞分泌了肺表面活性物質來減小肺泡內的表面張力，因此在呼氣過程中防止了肺泡塌陷。肺表面活性物質是一種脂類和蛋白質的復合物，它散布在肺泡表面以降低表面張力并且在肺臟中保持延長的時間。因此，可以通過將這種活性藥物分子共價地連接到一種表面活性脂類或蛋白質上來增加活性藥物分子在肺臟中的停留時間。對與一種表面活性脂類或蛋白質共價地連接的活性藥物分子進行給藥導致提供了在肺臟中增加的作用時間(導致基本上更低的劑量和更好的患者順應性)、活性藥物分子局限于肺臟(導致全身毒性降低)、以及顯著更高的局部肺濃度用于增強療效?！矫妫景l(fā)明提供了一種配制為用于吸入的藥物組合物，該藥物組合物包括對人類肺泡/氣體界面具有親和力的一種表面活化劑。這種表面活化劑包括對人類基本上沒有免疫原性的一種哺乳動物的肺表面活性多肽或其模擬物的至少一個部分。這種表面活化劑與一種肺部活性藥物共價地鍵合，該藥物與一種可到達肺部的/氣體界面的細胞外或細胞表面的靶進行結合。通過舉例，這種細胞外或細胞表面的靶可以是彈性蛋白酶、TNF受體、EGF受體、腎上腺素能受體、或者P2X嘌呤能受體。在某些實施方案中，將與一種肺部活性藥物(該藥物與一種細胞外或細胞表面的靶進行結合)共價地鍵合的表面活化劑給予一位患有肺病的患者，這些肺病包括但不限于結核、哮喘、以及肺5癌。例如，在巨噬細胞內負責針對結核(TB)的活化劑通過下調凋亡避免了破壞并影響了的細胞內增殖。攜帶TB的巨噬細胞將P2X嘌呤能受體過量表達(Placidoetal.，CellImmunol.244:10-8(2006))。P2X激動劑(如ATP)在這些巨噬細胞中會誘導凋亡并因此殺死寄生的TB(Pfeifferetal.，J.Leukoc.Biol.75:1173(2004))。ATP的苯甲?；苌锸怯辛Φ腜2X受體的細胞外激動劑，并且能夠被共價地連接到表面活化劑上并作為一種長時間的TB治療法通過吸入法得以遞送。132-腎上腺素能受體的激動劑是被很好確認的用于治療哮喘的支氣管擴張藥(Anderson,Clin.Rev.AllergyImmunol.31:119-30(2006))。然而，這種132-腎上腺素能受體表達廣泛，并且因此重復給藥可能會具有有害的全身性副作用。將一種P2-腎上腺素能受體激動劑與一種表面活性肽共價地連接實質上將這種活性劑隔離到肺上，因此避免或減小了潛在的全身性毒性。表皮生長因子受體(EGFR)已被證實是一種抗癌靶(Carney,ExpertRev.Mol.Diagn.7:309-19(2007))，具有的產(chǎn)品是如上市的治療乳癌的赫賽汀?；|金屬蛋白酶已顯示通過一種細胞表面脫落機制來釋放EGFR的內源性激動劑(Horiuchietal.，Mol.Biol.Cell18:176-188(2007))。抑制EGFR的激活是針對非小細胞肺癌的一種潛在的治療(Y.H.Lingetal.，MolecularPharmacology72:248-58(2007))。通過將匪P的一種或多種小分子抑制劑附連到肺表面活性肽上以便通過吸入而進行遞送，可以使EGFR失活。這些例子(包括肺氣腫、結核、哮喘、以及非小細胞肺癌)證實了將治療性分子與以吸入遞送而優(yōu)先停留在肺臟中的活化劑共價地連接的普遍性。在另一個實施方案中，將這種表面活化劑與一種肺部活性藥物以及進入這些肺細胞的一種細胞膜可滲透性運輸分子共價地鍵合。在細胞內發(fā)揮作用的活化劑包括但不限于類視黃醇類、存活蛋白抑制劑類、以及半胱天冬蛋白酶啟動子類(caspasepromoters)。在另一個實施方案中，這種表面活化劑包括一種人類肺表面活性物質或一種非人類的哺乳動物的肺表面活性物質或它一個片段(fraction)。示例性的非人類的哺乳動物的肺表面活性物質包括牛、豬、或綿羊的肺表面活性物質、或它們的一個片段。這種活化劑可以包括或衍生自從人類或非人類的哺乳動物的肺臟中收集到的一種哺乳動物的肺表面活性物質。在另一個實施方案中，這種表面活化劑包括一種哺乳動物的肺表面活性多肽、它的一種等位基因變異體、或它的一種合成模擬物的至少一個部分。這種活化劑可以包括一種天然的表面活性多肽，如SP-A、SP-B、SP-C、SP-D，它們的多個部分，或它們的混合物。這種活化劑可以包括一種SP-A、SP-B、SP-C、SP-D、或它們的多個部分的混合物。示例性的肽包括一種天然的表面活性多肽的至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、或50個氨基酸的區(qū)段。這種表面活化劑可以包括SP-B的至少一個部分。示例性的SP-B多肽包括SP-B的至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、或50個氨基酸的區(qū)段。SP-B肽可以是一種氨基端肽或一種羧基端肽。一種示例性的SP-B肽可以是一種25個氨基酸的氨基端肽。在另一個實施方案中，這種表面活化劑包括一種以合成方式所產(chǎn)生的肽。模擬肽(p印tidomimetic)可以包括一種哺乳動物的肺表面活性多肽的至少一種缺失突變體或氨基酸置換突變體。模擬肽可以包括一種人類肺表面活性多肽的至少一種缺失突變體或氨基酸置換突變體。在另一個實施方案中，這種表面活化劑可以包括一種以重組方式所產(chǎn)生的表面活6性多肽。在一種原核或真核的表達系統(tǒng)中通過表達對SP-A、SP-B、SP-C、SP-D、或它們的一個部分進行編碼的DNA，可以產(chǎn)生一種重組的哺乳動物的肺表面活性多肽，如SP-A、SP-B、SP-C、SP-D、或它們的一個部分。重組的表面活性多肽可以與哺乳動物的肺表面活性多肽相同或不同。重組的多肽可以包括一種哺乳動物的(優(yōu)選是人的)肺表面活性多肽的至少一種缺失突變體或氨基酸置換突變體。在另一個實施方案中，這種表面活化劑包括一種表面活性多肽和一種脂類。這種表面活化劑被共價地鍵合到一種肺部活性藥物上?？梢詫⑦@種肺部活性藥物與一種表面活性蛋白或脂類共價地連接?？梢詫⑦@種肺部活性藥物與一種表面活性多肽的氨基端或羧基端的氨基酸或一個內部的氨基酸共價地鍵合。在某些實施方案中，將多于一種的肺部活性藥物與一種表面活化劑相結合。在其他的實施方案中，將一種單獨的肺部活性藥物與一種表面活化劑相結合，并且將該肺部活性藥物與結合到一種表面活化劑上的至少一種其他的肺部活性藥物相混合。在一個實施方案中，這種肺部活性藥物分子用一種氨基酸或模擬的連接物(linker)(如甘氨酸連接物)得到擴展，以便創(chuàng)造出一種可在自動的肽合成中使用的非天然的氨基酸。然后，這種經(jīng)擴展的分子(即藥物加上這種氨基酸連接物)可以通過一個氨基或羥基的基團被附連至這種表面活化劑上。這種肺部活性藥物與一種可到達肺部的/氣體界面的細胞外或細胞表面結合的靶進行結合。這種肺部活性藥物可以是一種彈性蛋白酶抑制劑、皮質類固醇、支氣管擴張藥、抗生素、或者化學治療劑。在某些實施方案中，多于一種的肺部活性藥物可以與一種表面活化劑共價地鍵合并且進行聯(lián)合給藥。當多于一種的肺部活性藥物與一種表面活化劑共價地鍵合時，該藥物可以是相同的藥物、相同藥物類別的一員、或者一個不同的藥物類別的一員。這種藥物組合物通過一個吸入裝置被遞送至一位人類患者的肺臟。示例性吸入裝置包括劑量固定的吸入器類、定量吸入器類(metereddoseinhalers)、以及噴霧器類。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療患有肺病或者處于肺病風險的受試者的方法。這種方法包括給予一種結合物，該結合物包括與一種表面活化劑共價地鍵合的一種肺部活性藥物，該表面活化劑的特征為對人類肺泡/氣體界面的一種親和力，其中該表面活化劑包括對人類基本上無免疫原性的一種哺乳動物的肺表面活性多肽或它的一種模擬物的至少一個部分。這種結合物是通過吸入法以在肺中有效誘導一種藥物效應的量給予這位受試者的。這種給藥法方法將這種肺部活性藥物靶向至需要該藥物的受試者的肺臟。與吸入給予一種未結合的藥物相比，這種給藥方法降低了藥物的系統(tǒng)性生物利用度。與吸入給予一種未結合的藥物相比，這種給藥方法增加了藥物在肺臟中的停留時間。在一個實施方案中，與給予一種未結合的藥物相比，給予一種肺部活性藥物-表面活性劑結合物降低了給藥頻率。可以重復該給藥步驟每日一次、隔日一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、或者每周一次。這種給藥步驟可使用一個吸入器、一種氣溶膠、具有或沒有推進劑的微粒、計量的劑量、或一個噴霧器來進行。在某些實施方案中，需要治療的受試者正患有肺部炎癥或疾病或者正處于患有肺病的風險之中。需要治療的受試者可能患有肺氣腫、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病(C0P0)、哮喘、呼吸性窘迫紊亂(respiratorydistressdisorder)(RDS)、肺炎、結核或者其他的細菌性感染、囊性纖維病、和/或肺癌。附圖簡要說明圖1A示出了編碼人表面活性蛋白A的核酸序列(SEQIDNO:1)。圖IB示出了人表面活性蛋白A的氨基酸序列(SEQIDNO:2)。圖2A示出了編碼人表面活性蛋白B的核酸序列(SEQIDNO:3)。圖2B示出了人表面活性蛋白B的氨基酸序列(SEQIDNO:4)。圖2C示出了成熟的人表面活性蛋白B的氨基酸序列(SEQIDNO:5)。圖3A示出了編碼人表面活性蛋白C的核酸序列(SEQIDNO:6)。圖3B示出了人表面活性蛋白C的氨基酸序列(SEQIDNO:7)。圖3C示出了成熟的人表面活性蛋白C的氨基酸序列(SEQIDNO:8)。圖4A示出了編碼人表面活性蛋白D的核酸序列(SEQIDNO:9)。圖4B示出了人表面活性蛋白D的氨基酸序列(SEQIDNO:IO)。圖4C示出了成熟的人表面活性蛋白D的氨基酸序列(SEQIDNO:11)。圖5A示出了編碼牛表面活性蛋白A的核酸序列(SEQIDNO:12)。圖5B示出了牛表面活性蛋白A的氨基酸序列(SEQIDNO:13)。圖6A示出了編碼牛表面活性蛋白B的核酸序列(SEQIDNO:14)。圖6B示出了牛表面活性蛋白B的氨基酸序列(SEQIDNO:15)。圖7A示出了編碼牛表面活性蛋白C的核酸序列(SEQIDNO:16)。圖7B示出了牛表面活性蛋白C的氨基酸序列(SEQIDNO:17)。圖8A示出了編碼牛表面活性蛋白D的核酸序列(SEQIDNO:18)。圖8B示出了牛表面活性蛋白D的氨基酸序列(SEQIDNO:19)。圖9A示出了編碼豬表面活性蛋白A的核酸序列(SEQIDNO:20)。圖9B示出了豬表面活性蛋白A的氨基酸序列(SEQIDNO:21)。圖示出了編碼一個部分的豬表面活性蛋白B的核酸序列(SEQIDNO:22)。圖10B示出了豬表面活性蛋白B的一個部分氨基酸序列(SEQIDNO:23)。圖11A示出了編碼豬表面活性蛋白C的核酸序列(SEQIDNO:24)。圖11B示出了豬表面活性蛋白C的氨基酸序列(SEQIDNO:25)。圖12A示出了編碼豬表面活性蛋白D的核酸序列(SEQIDNO:26)。圖12B示出了豬表面活性蛋白D的氨基酸序列(SEQIDNO:27)。圖13A示出了編碼綿羊表面活性蛋白A的核酸序列(SEQIDNO:28)。圖13B示出了綿羊表面活性蛋白A的氨基酸序列(SEQIDNO:29)。圖14A示出了編碼綿羊表面活性蛋白B的核酸序列(SEQIDNO:30)。圖14B示出了綿羊表面活性蛋白B的氨基酸序列(SEQIDNO:31)。圖15A示出了編碼綿羊表面活性蛋白C的核酸序列(SEQIDNO:32)。圖15B示出了綿羊表面活性蛋白C的氨基酸序列(SEQIDNO:33)。圖16A示出了編碼一個部分的綿羊表面活性蛋白D的核酸序列(SEQIDNO:34)。圖16B示出了綿羊表面活性蛋白D的一個部分氨基酸序列(SEQIDNO:35)。圖17是描繪示例性的人類嗜中性細胞彈性蛋白酶(HNE)抑制劑的表格。在該表格中列出的參考號對應于在PhilipD.EdwardsandPeterR.Bernsteinin"SyntheticInhibitorsofElastase，"MedicinalResearchReviews,Vol.14，No.2，127-194(1994)中所提到的化合物識別號。圖18是描繪一種代表性的肺氣腫抑制劑的化學合成的示意圖。所示出的肺氣腫抑制劑包含一種甘氨酸連接物。這種甘氨酸連接物(畫圈的)將該化合物轉化為一種非天然的氨基酸，在一個標準的肽合成反應中這種非天然的氨基酸可用于共價偶聯(lián)至SP-B的N端1至25個氨基酸上。圖19是描繪了作為HNE抑制劑而使用的示例性的靶的表格。附連至人表面活性B肽的最初25個殘基的N端的靶2形成了靶C。類似地，附連至人表面活性B肽的最初25個殘基的N端的靶3形成了靶B。詳細說明表面藩舶這種表面活化劑包括對人類基本上沒有免疫原性的一種哺乳動物的肺表面活性多肽的至少一個部分。這種多肽或其部分可以是一種哺乳動物的肺表面活性物質部分(moiety)或它的一種合成的模擬物。示例性的表面活性多肽可以是由動物衍生的、重組的、合成的、類似物、或者肽模擬物。天然的肺表面活性蛋白包括單獨或與脂類相組合的SP-A、SP-B、SP-C、SP-D、或它們的多個部分(美國專利號5，302，581)。在一些實施方案中，這種表面活化劑包括全長的表面活性多肽。在其他實施方案中，這種表面活化劑包括一種表面活性多肽的一個部分。例如，人SP-B是一種79個氨基酸殘基的多肽，然而，SP-B的N端25個氨基酸殘基具有可與整個肽進行比較的治療效果(KurutzandLee，Biochem.，41，9627-36(2002))。天然的肺表面活性蛋白的示例性的肽的長度可以是至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、或50個氨基酸。人SP-B的示例性肽示于表1中。在一個實施方案中，這種表面活化劑包括通過尸檢時對人類尸體進行肺灌洗或通過對征得同意的成年人進行肺灌洗而獲得的人肺臟表面活性物質。在某些實施方案中，這種表面活化劑包括一種非人類的哺乳動物的肺表面活性物質或它的一個片段。示例性的非人類的肺表面活性物質包括牛、豬、或綿羊的肺表面活性物質或它的一個片段。這種非人類的表面活性物質可以使用本領域熟知的技術從一種非人類的哺乳動物的肺臟中進行收集。例如，豬表面活性物質可以從新生仔豬和/或成年豬中用鹽水收集肺臟的支氣管肺泡灌洗(ML)而獲得，如在Bernhardetal.，Am.J.Respir.CellMol.Biol.17:41-50(1997)中所說明，該文獻通過引用結合在此。將所收集的BAL液體離心以除去細胞，然后將不含細胞的BAL液體進一步離心以產(chǎn)生一種粗制的表面活性物質小粒。綿羊表面活性物質可以從成年綿羊的全肺灌洗中獲得，如由Brackenburyetal.，Am.J.RespirCir.CareMed.163:1135-1142(2001)所說明，該文獻通過引用結合在此。將所收集的肺泡灌洗液離心以除去細胞碎片，隨后通過進一步離心獲得一種與肺表面活性物質聚集小粒相對應的小粒。牛表面活性物質也可以從成年牛的全肺灌洗中獲得，如由Panda等人(JColloidlnterfaceSci.，311:551-5(2007))所說明，該文獻通過引用結合在此。還可以使用Alveofact，它是一種天然牛表面活性物質提取物，包含磷脂類、中性脂類、SP-B和SP-C多肽。還可以使用從這些人類肺表面活性物質中衍生的或與其具有相似的特性的蛋白質和多肽。例如，可以使用微分有機萃取、柱色譜法、和/或制備性SDS-PAGE將SP-B從牛9表面活性物質中分離出來，如由Beersetal.，Am.J.PhysiolLungCellMol.Physiol.262:L773-L778(1992)所說明，該文獻通過引用結合在此。這些哺乳動物的肺表面活性多肽或其部分還可以通過重組的方式進行生產(chǎn)。通過使用不同的已知技術在一種適宜的原核或真核的表達系統(tǒng)中表達對SP-A、SP-B、SP-C、SP-D、或它們的一個部分進行編碼的DNA序列，重組的SP-A、SP-B、SP_C、SP-D、或它們的一個部分是可以獲得的。重組載體(很容易將它們調適為包括一個分離的核酸，該核酸對一種表面活性多肽或它的一個部分進行編碼)、包含這些重組載體的宿主細胞、以及制造此類載體和宿主細胞的方法連同通過重組技術將它們用于生產(chǎn)這些所編碼的多肽的方法是熟知的?？梢栽谝粋€表達載體中提供對一種表面活性多肽或它的一個部分進行編碼的核酸，該表達載體包括對一種表面活性多肽進行編碼的核苷酸序列，該核苷酸序列與至少一種調節(jié)序列可操作地連接。應當理解的是，這種表達載體的設計可取決于諸如待轉化的宿主細胞的選擇和/或希望被表達的蛋白質的類型的因素。應當考慮載體的拷貝數(shù)、控制該拷貝數(shù)的能力、以及由該載體進行編碼的任何其他蛋白質(如抗生素標記物)的表達。可以使用這些主題核酸來引起在培養(yǎng)系中繁殖的細胞內一種激酶或磷酸酶多肽的表達和過量表達(例如)來產(chǎn)生蛋白質或者多肽，包括融合蛋白或融合多肽?？梢杂靡环N重組基因轉染宿主細胞以便對一種表面活性多肽或其部分進行表達。這種宿主細胞可以是任何一種原核或真核的細胞。例如，多肽可表達于細菌的細胞中，如大腸桿菌、昆蟲細胞(桿狀病毒)、酵母、或哺乳動物細胞。在這些例子中，當這種宿主細胞是人的細胞時它可在或不在一位活著的受試者中。其他適宜的宿主細胞對于本領域的普通技術人員而言是已知的。額外地，這種宿主細胞可以補充有在該宿主中并非典型地發(fā)現(xiàn)的tRNA分子以便將這種多肽的表達優(yōu)化。適宜于使這種多肽的表達最大化的其他方法對于本領域的技術人員而言將是已知的。生產(chǎn)多肽的方法在本領域內是熟知的。例如，可以在適當條件下培養(yǎng)用編碼了一種表面活性多肽或其部分的表達載體進行轉染的宿主細胞以允許該多肽的表達發(fā)生。這種多肽可以從包含該多肽的細胞與培養(yǎng)基的混合物中分泌并分離出來?？商娲兀@種多肽可以通過細胞質的方式得以保留。然后，將細胞收集，溶解，并且將這種蛋白質從細胞溶解產(chǎn)物中分離出來。細胞培養(yǎng)物包括宿主細胞、培養(yǎng)基、以及其他的副產(chǎn)物。對于細胞培養(yǎng)而言適宜的培養(yǎng)基在本領域內是熟知的。使用本領域已知的用于純化蛋白的技術可以將這種多肽從細胞培養(yǎng)基、宿主細胞、或二者中分離出來，這些用于純化蛋白的技術包括硫酸銨或乙醇沉淀法、酸抽提、陰離子或陽離子交換層析法、凝膠過濾層析法、磷酸纖維素層析法、疏水作用層析法、親和層析法、羥基磷灰石層析法、凝集素層析法、超濾法、電泳、用對本發(fā)明的多肽的特定表位具有特異性的抗體進行的免疫親和純化，并且采用高效液相層析法("HPLC")用于純化。因此，可以使用編碼了一種表面活性多肽的所有或一個選定的部分的核苷酸序列通過微生物的或真核的細胞方法來生產(chǎn)這種蛋白質的一個重組體形式。標準的步驟是將該序列連接到一個多核苷酸構建體(如一個表達載體)上，并轉化或轉染至宿主(無論真核(酵母、禽、昆蟲、或者哺乳動物)的或原核(細菌細胞)的宿主)中?？梢圆捎妙愃频牟襟E或其變更通過微生物手段或組織培養(yǎng)技術來制備本發(fā)明的重組多肽。用于產(chǎn)生重組蛋白的表達載體包括質粒和其他載體。例如，用于表達本發(fā)明的一種多肽的適宜的載體包括以下類型的質粒用于在真核細胞(如大腸桿菌)中表達的由PBR322衍生的質粒、由pEMBL衍生的質粒、由pEX衍生的質粒、由pBTac衍生的質粒、以及由pUC衍生的質粒。在某些實施方案中，哺乳動物表達載體包含促進該載體在細菌中繁殖的原核序列，以及在真核細胞中表達的一種或多種真核轉錄單位。由pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo、以及pHyg衍生的載體是適宜轉染真核細胞的哺乳動物表達載體的例子。用來自細菌質粒(如pBR322)的序列對這些載體中的一些進行修飾以促進在原核和真核的細胞中的復制和抗藥性選擇?？商娲?，可以將病毒(如牛乳頭瘤病毒(BPV-I)或愛潑斯坦-巴爾病毒(pHEBo、由pREP衍生、以及p205))的衍生物用于在真核細胞中蛋白的瞬時表達。在這些質粒的制備以及宿主有機體的轉染中所采用的不同的方法在本領域內是已知的。對于原核和真核細胞的其他適宜的表達系統(tǒng)連同總體的重組步驟，參見由Sambrook、Fritsch、以及Maniatis編著的分子克隆實驗指南第二版(冷泉港實驗室，1989)的第16章和17章。在某些情況中，通過使用一種桿狀病毒表達系統(tǒng)來表達重組蛋白可能是可取的。此類桿狀病毒表達系統(tǒng)的例子包括由pVL衍生的載體(如pVL1392、pVL1393、以及pVL941)、由pAcUW衍生的載體(如pAc則、以及由pBlueBac衍生的載體(如包含[P]-半乳糖苷酶([beta]-gal)的pBlueBacIII)。在另一個實施方案中，蛋白質的產(chǎn)生可以使用體外翻譯系統(tǒng)來實現(xiàn)?？傮w而言，體外翻譯系統(tǒng)是一種無細胞的提取物的翻譯系統(tǒng)，該提取物包含將一個RNA分子翻譯成一個蛋白質所必需的至少最小量的元件。體外翻譯系統(tǒng)典型地包括至少核糖體、tRNA、起始物甲硫氨酰基-tRNAMet、參與翻譯的蛋白質或復合物，例如elF2、elF3、帽結合(CB)復合物(包括帽結合蛋白(CBP)和真核起始因子4F(elF4F))。多種體外翻譯系統(tǒng)在本領域內是熟知的并且包括可商購的試劑盒。體外翻譯系統(tǒng)的例子包括真核的裂解物，如兔的網(wǎng)織紅細胞裂解物、兔的卵母細胞裂解物、人的細胞裂解物、昆蟲的細胞裂解物、以及麥胚抽提物。裂解物可以從制造商處通過商購而獲得，這些制造商如PromegaCorp.，Madison，Wis.;Stratagene，LaJolla，Calif.;Amersham，ArlingtonHeights,IU.;以及GIBC0/BRL，GrandIsland,N.Y。體外翻譯系統(tǒng)典型地包括大分子(如酶)；翻譯、起始和延伸的因子；化學試劑；以及核糖體。此外，可以使用一種體外轉錄系統(tǒng)。此類系統(tǒng)典型地包括至少一種RNA聚合酶全酶、核糖核苷酸、以及任何必需的轉錄起始、延伸和終止的因子?？稍谝诲伔ǚ磻?one-potreaction)中將體外轉錄和翻譯進行結合以便從一種或多種經(jīng)分離的DNA中生產(chǎn)蛋白質。當多肽的一個羧基端區(qū)段的表達是所希望的時(即，一個平截突變體)，可能有必要將一個起始密碼子(ATG)加至包含有待表達的所希望的序列的寡核苷酸片段中。在本領域內熟知的是，在N端位置的一個甲硫氨酸可通過使用甲硫氨酸氨基肽酶(MAP)這種酶進行酶切。MAP已經(jīng)從大腸桿菌(Ben-Bassatetal.，(1987)JBacteriol.169:751-757)和鼠傷寒沙門菌中克隆出來，并且其體外活性已經(jīng)展示在重組的蛋白質上(Milleretal.，(1987)PNASUSA54:2718-1722)。所以，如果希望的話，去除N端的甲硫氨酸可以在體內通過在產(chǎn)生MAP的宿主(例如，大腸桿菌或CM89或釀酒酵母(S.cerevisiae))中對此類重組多肽進行表達，或者在體外通過使用經(jīng)純化的MAP(例如，Miller等人的步驟)來實現(xiàn)。本發(fā)明的多肽還可以經(jīng)受不同的變化，如插入、缺失、以及置換(保守的或非保守的)，其中此類變化提供了在多肽的使用中的某些優(yōu)勢。保守性置換是以下置換，其中一個氨基酸殘基被另一個生物學上相似的殘基替換。保守性置換的例子包括將一個疏水性殘基(如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸、或者甲硫氨酸)置換成另一個，或者將一個極性殘基置換成另一個，如在精氨酸與賴氨酸之間、谷氨酸與門冬氨酸之間、或者在谷氨酰胺與天冬酰胺之間，以及類似情況。術語"保守性置換"還包括將一種經(jīng)置換的氨基酸代替一種未經(jīng)置換的母氨基酸的使用，條件是這種多肽也展示出必要的結合活性。與全長成熟的多肽相比，本發(fā)明的多肽還可以被截短。多肽可以在氨基端、羧基端、或者在這兩端被截短。多肽可以被截短至少一個氨基酸，或至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、或70個氨基酸。哺乳動物的肺表面活性多肽或它的一個部分可以通過多肽領域內的普通技術人員所已知的技術從氨基酸中進行合成。多種可供使用的技術的概述可以在以下文獻中發(fā)現(xiàn)針對固相肽合成的J.M.StewardandJ.D.Yo皿g，〃SolidPhaseP印tideSynthesis"，W.H.FreemanCo.，SanFrancisco,1969，以及J.Meienhofer的〃HormonalProteinsandP印tides〃，Vol.2，p.46，AcademicPress(NewYork)，1983，以及針對經(jīng)典的溶液合成的E.SchroderandK.Kubke，〃TheP印tides〃，Vol.1，AcademicPress(NewYork)，1965?？傮w而言，這些方法包括將一種或多種氨基酸殘基或適當?shù)厥鼙Ｗo的氨基酸殘基順序地加到一個增長的肽鏈上。通常，第一個氨基酸殘基的氨基或羧基基團由一個適宜的、可選擇性移去的保護性基團進行保護。對包含一個反應性側基(例如賴氨酸)的氨基酸使用了一個不同的、可選擇性移去的保護性基團。使用固相合成作為一個例子，將這種受保護的或衍生的氨基酸通過其未受保護的羧基或氨基基團附連至一個惰性的固相支撐體上。然后，將這個氨基或羧基基團的保護性基團選擇性地移去，并且將在該序列中使該互補性(氨基或者羧基)基團受到適當保護的下一個氨基酸與已附連至這種固相支撐體上的殘基進行混合并在適宜形成酰胺鍵的條件下進行反應。然后，將這個氨基或羧基基團的保護性基團從這個新加入的氨基酸殘基上移去，并接著加入下一個氨基酸(受到適當保護)，并如此繼續(xù)。在所有所希望的氨基酸被連接在適當?shù)男蛄兄兄?，將任何一種剩余的端基和側基的保護性基團(以及任何一種固相支撐體)順序地或同時地移去，以便提供最終的多肽。然后，這種多肽通過溶解在低級脂肪醇中而進行洗滌并干燥?？赏ㄟ^已知的技術對已干燥的表面活性多肽進行進一步純化，如果希望的話。在某些實施方案中，可以使用常用的方法，如a_氨基基團的t-BOC或f-MOC保護。這兩種方法均涉及分步合成，從而從該肽的C端開始在每個步驟中加入一個單一氨基酸(參見，Coliganetal.，CurrentProtocolsinImmunology,WileyInterscience，1991，Unit9)。本發(fā)明的肽可以(例如)通過在Merrifield，J.Am.Chem.Soc.85:2149，1962，以及StewartandYoung，1969，SolidPhaseP印tidesSynthesis,pp.27—62中所說明的熟知的固相肽合成方法，使用一種含有O.1至l.OmMol胺/g聚合物的共聚(苯乙烯-二乙烯基苯)進行合成。當化學合成完成時，可以通過在(TC下用液態(tài)的HF-10^茴香醚處理大約1/4至1小時將這些肽脫保護并且從該聚合物中切割出來。在試劑蒸發(fā)之后，用1%醋酸溶液將這些肽從該聚合物中提取出來，然后將醋酸溶液凍干以產(chǎn)生粗制材料。通常，這可通過諸如在S印hadexG-15上使用5%醋酸作為溶劑進行凝膠過濾的技術來進行純化。對柱子的適當餾分進行冷凍干燥將產(chǎn)生均勻的肽或肽衍生物，然后它可通過以下標準的技術進行表征，如氨基酸分析、薄層色譜分析法、高效液相色譜法、紫外線吸收分光法、摩爾旋光、溶解度，并且通過固相埃德曼降解進行定量。在一個實施方案中，重組的和/或合成的SP-B肽包含SEQIDNO:5的氨基酸2、4、6、以及9。SEQIDNO:5的脯氨酸2、4、以及6和色氨酸9可以組成針對蛋白質功能所必需的結構基序。在一些實施方案中，SP-B肽可以在任何氨基酸殘基處被取代，除了色氨酸9氨基酸(相對于SEQIDNO:5)。肺表面活性多肽的模擬物通常是一種多肽，將該多肽進行工程化以便模擬人類表面活性蛋白的本質性屬性。一個示例性模擬的肽模擬物是SP-B。SP-B模擬物的一個實例是KL4，一種21個氨基酸殘基的多肽(包括序列KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK(SEQIDNO:94))。這種SP-B模擬蛋白也稱為Uicinactant(Surfaxin,DiscoveryLaboratories)。表面藩麟在某些實施方案中，在本發(fā)明中使用的一種表面活化劑包括與體內天然表面活性脂類有關的一種表面活性蛋白、它的一個部分、或它的一種混合物。在其他的實施方案中，在本發(fā)明中使用的一種表面活化劑包括一種脂類或一種脂類_蛋白復合物。天然的哺乳動物的肺表面活性物質是一種磷脂、中性磷脂、以及蛋白質的復合物。在此處披露的本發(fā)明中使用的表面活化劑可以包括一種或多種脂類。在某些實施方案中，這種表面活化劑可以包括(例如)從少到約O.05至100%重量百分比的脂類，只要得到的組合物具有表面活性物質活性。提及重量百分比是指在一種按重量計的組合物中一種按重量計的化合物的百分比。因此，一種具有50重量百分比的脂類的組合物(例如)每100克總的組合物包含50克脂類。一種表面活化劑可以包含0.1至50重量百分比的脂類，盡管可以使用更高濃度的脂類。所以，既包含磷脂又包含一種表面活性多肽或其部分的表面活化劑可以包含O.1、1、10、50、80、至幾乎100重量百分比的脂類以及大約50、20、10、至小于1重量百分比的表面活性多肽?？商娲兀砻婊罨瘎┛梢园喾幢壤闹惻c表面活性多肽。在此使用的術語"脂類"是指一種天然發(fā)生的、合成的、或半合成(S卩，改性的天然品)的化合物，該化合物通常是兩親的。這種脂類典型地包括一個親水成分和一個疏水成分。示例性的脂類包括但不限于磷脂類、脂肪酸類、脂肪醇類、中性脂肪類、磷脂類、油類、糖脂類、脂肪醇類、蠟類、萜類、以及類固醇類。短語半合成的(或改性的天然品)表示一種通過某種方式已進行化學改性的化合物。磷脂類的例子包括自然的和/或合成的磷脂類?？梢允褂玫牧字ǖ幌抻诹字Ｄ憠A類(飽和的以及不飽和的)、磷脂酰甘油類(phospatidylglycerols)、磷脂酰乙醇胺類、磷脂酰絲氨酸類、磷脂酸類、磷脂酰肌醇類、鞘脂類、二?；视王ヮ悺⑿牧字?、神經(jīng)酰胺類、腦苷脂類、以及類似物。示例性的磷脂類包括但不限于二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿(DLPC)(C12:0)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)(C14:0)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二植烷酰磷脂酰膽堿(diphytanoylphosphatidylcholine)、十九酰磷脂酰膽堿、花生?；字Ｄ憠A、二油酰磷脂酰膽堿(D0PC)(C18:l)、二棕櫚油酰磷脂酰膽堿(C16:l)、亞油酰磷脂酰膽堿(C18:2)、肉豆蔻酰棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、硬脂酰(steroyl)肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(SMPC)、硬脂酰棕櫚酰磷脂酰膽堿(SPPC)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(P0PC)、棕櫚酰棕櫚油?；?palmitcx)leoyl)磷脂酰膽堿(PPoPC)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺(P0PE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(D0PE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二油酰磷脂酰甘油13(DOPG)、棕櫚酰油酰磷脂酰甘油(POPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二肉豆蔻酰磷酯酰絲氨酸(DMPS)、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸(DSPS)、棕櫚酰油酰磷酯酰絲氨酸(POPS)、大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰肌醇、雙磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、以及蛋磷脂酰膽堿(EPC)。脂肪酸類和脂肪醇類的例子包括但不限于甾醇、棕櫚酸、十六醇、月桂酸、肉豆寇酸、硬脂酸、植烷酸、二棕櫚酸(dipamliticacid)、以及類似物。示例性的脂肪酸包括棕櫚酸。示例性的脂肪酸酯類包括但不限于棕櫚酸甲酯、棕櫚酸乙酯、棕櫚酸異丙酯、膽甾醇棕櫚酸酯、棕櫚酸棕櫚酯(palmitylpalmitate)、棕櫚酸鈉、棕櫚酸鉀、棕櫚精、以及類似物。表面活性多肽和表面活性脂類通過流體靜力的相互作用進行相互作用。帶電荷的氨基酸與這些脂類的極性頭部基團(headgroup)相互作用，并且疏水性氨基酸與磷脂?；膫孺溝嗷プ饔谩＠?，SP-B和SP-C是疏水性蛋白質。SP-B和SP-C均優(yōu)先地結合陰離子的脂類(如磷脂酰甘油(PG))而不結合DPPC。SP-A和SP-D是親水性蛋白質并且與廣泛的兩親性脂類相互作用，這些兩親性脂類包括甘油磷脂類、鞘磷脂類、糖鞘脂類、類脂A、以及脂聚糖類。SP-A結合DPPC。通過舉例，對于SP-B模擬物、KL4、以及天然表面活性劑中的脂類或在表面活化劑中所包括的脂類觀察到了流體靜力的相互作用。例如，KL4肽中的賴氨酸殘基與DPPC的帶電荷的頭部基團相互作用，并且疏水性的亮氨酸殘基與磷脂酰甘油的磷脂?；鶄孺溝嗷プ饔?。在某些實施方案中，如在此披露的一種藥物組合物包括一種表面活化劑(該表面活化劑包括一種哺乳動物的肺表面活性多肽或其模擬物的一個部分)，并且不額外包括一種脂類或脂類的混合物。通過吸入法進行給藥的藥物組合物包括表面活化劑，這些表面活化劑僅包括一種哺乳動物的肺表面活性多肽或其模擬物的一個部分，這種藥物組合物可以通過流體靜力學的相互作用與肺臟中的天然表面活性劑進行相互作用。例如，通過結合陰離子的磷脂類(如磷脂酰甘油)，重組的SP-B可以與肺臟中的天然表面活性劑相互作用。在其他的實施方案中，如在此披露的一種藥物組合物包括一種表面活化劑，該表面活化劑包括一種哺乳動物的肺表面活性多肽或其模擬物的一個部分、以及至少一種脂類。為了促進包括一種多肽或其模擬物以及至少一種脂類的藥物組合物吸收至肺臟中的天然表面活性劑中，可以使用模擬在天然表面活性劑中發(fā)現(xiàn)的那些磷脂單層的磷脂(phopholipid)單層。示例性的脂類混合物包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿/棕櫚酰油酰磷脂酰甘油，例如比例為7:3的重量/重量?？梢詫⒉溉閯游锏姆伪砻婊钚远嚯牟逯猎摿字?phosphoplipid)單層中，并且在吸入之后將這種蛋白質/脂類的混合物吸收至在肺臟中的肺泡/氣體界面處的天然表面活性劑中。肺部活性藥物肺部活性藥物可包括但不限于彈性蛋白酶抑制劑類、皮質類固醇類、支氣管擴張藥類、抗生素類、以及化學治療的酸類。示例性的彈性蛋白酶抑制劑類包括在圖17中示出的化合物。其他示例性的彈性蛋白酶抑制齊抱括由PhilipD.EdwardsandPeterR.Bernsteinin"SyntheticInhibitorsofElastase，"MedicinalResearchReviews,Vol.14，No.2，127—194(1994)所說明的4t合物，該文獻通過引用結合在此。可以將兩種或多種彈性蛋白酶抑制劑與本發(fā)明的一種表面活化劑進行連接，并進行聯(lián)合給藥?？商娲兀梢詫⒁环N彈性蛋白酶抑制劑與一種表面活化劑進行連接，并且將該彈性蛋白酶抑制劑與連接至一種表面活化劑上的第二種彈性蛋白酶抑制劑進行聯(lián)合給藥?？梢员贿f送到肺臟的示例性的皮質類固醇類包括但不限于阿氯米松、醛固酮、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、環(huán)索奈德、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龍、氯潑尼醇、可的松、可的伐唑、地夫可特、脫氧皮質酮、地奈德、去羥米松、去氧皮質酮、地塞米松、二氟拉松、二氟可龍、二氟潑尼酯、氟氯奈德(fluclOTolone)、氟氫可的松、氟氫縮松、氟米松、氟尼縮松、氟輕松、醋酸氟輕松、氟可丁、氟可龍、氟米龍、氟培龍、氟潑尼定、氟替卡松、福莫可他、哈西奈德、鹵米松、氫化可的松(hydrocortisone)/考的索(Cortisol)、醋丙氫可的松、氫化可的松丁丙酸酯、氫化可的松丁酸酯、氯替潑諾、甲羥松、甲潑尼松、甲潑尼龍、醋丙甲潑尼龍、糠酸莫米松、帕拉米松、潑尼卡酯、潑尼松、潑尼松龍、潑尼立定、利美索龍、替可的松、曲安西龍、以及烏倍他索?？梢詫煞N或多種皮質類固醇與本發(fā)明的一種表面活化劑進行連接，并進行聯(lián)合給藥?？商娲?，可以將一種皮質類固醇與一種表面活化劑進行連接，并且將該皮質類固醇與連接至一種表面活化劑上的第二種皮質類固醇進行聯(lián)合給藥。肺部活性藥物還可包括支氣管擴張藥類，如短效的P2-腎上腺素能受體激動劑、長效的P2-腎上腺素能受體激動齊U、短效的抗膽堿能藥、以及長效的抗膽堿能藥。非限制性的短效的"-腎上腺素能受體激動劑類包括柳丁胺醇(salbutamol)或沙丁胺醇(albuterol)、特布他林、非諾特羅、氫溴酸非諾特羅、利米特羅、瑞普特羅、吡布特羅、異丙腎上腺素、奧西那林、比托特羅、以及溴沙特羅。非限制性的長效的132-腎上腺素能受體激動劑類包括沙美特羅、沙美特羅昔萘酸酯、福莫特羅、富馬酸福莫特羅、克侖特羅、以及丙卡特羅。非限制性的短效的抗膽堿能藥類包括異丙托銨、異丙托溴銨、氧托銨(oxitropium)及其鹽。非限制性的長效的抗膽堿能藥包括噻托銨(tiotropium)以及噻托溴銨一水合物。其他的支氣管擴張藥類可以包括但不限于氨茶堿(aminophyliline)、奧西那林(iorciprenaline)、膽茶堿、硫酸特布他林、以及茶堿?？梢詫煞N或多種支氣管擴張藥與本發(fā)明的一種表面活化劑進行連接，并進行聯(lián)合給藥?？商娲?，可以將一種支氣管擴張藥與一種表面活化劑進行連接，并將該支氣管擴張藥與連接至一種表面活化劑上的第二種支氣管擴張藥進行聯(lián)合給藥?？蛇f送到肺臟的示例性的抗生素類包括但不限于青霉素類、青霉素類和e-內酰胺酶抑制劑類、頭孢菌素類(1、n、ni、以及IV代)、大環(huán)內酯類和林可酰胺類(lincosamines)、喹諾酮類和氟喹諾酮類、碳青霉烯類(carb印ems)、單環(huán)內酰胺類(monbactams)、氨基糖苷類、糖肽類、四環(huán)素類(tetracylines)、磺胺類、利福平、噁唑烷酮類、鏈陽性菌素類、氨苯磺胺類(sulfanomides)、以及其他抗生素?？梢詫煞N或多種抗生素與本發(fā)明的一種表面活化劑進行連接，并進行聯(lián)合給藥。可替代地，可以將一種抗生素與一種表面活化劑進行連接，并將該抗生素與連接至一種表面活化劑上的第二種抗生素進行聯(lián)合給藥。示例性的青霉素類包括但不限于阿莫西林、氨芐西林、巴氨西林、羧芐西林、卡茚西林、美洛西林(mezlocilin)、哌拉西林、以及替卡西林(ticarcilin)。示例性的青霉素類和13-內酰胺酶抑制劑類包括但不限于阿莫西林-克拉維酸、氨芐西林-舒巴坦、青霉素、氯唑西林(cloxacilin)、雙氯西林(dicloxacilin)、苯氧甲基15青霉素、羧芐西林、甲氧西林、苯唑西林(oxacilin)、青霉素G(芐星青霉素G、鉀、普魯卡因)、青霉素V(penicilinV)、丙匹西林、依匹西林、環(huán)青霉素、哌拉西林(piperacilin)加上三唑巴坦、替卡西林(ticarcilllin)加克拉維酸、以及萘夫西林(naficillin)。示例性的頭孢菌素類(I代)包括但不限于頭孢羥氨芐、頭孢唑林、頭孢氨芐、頭孢噻吩、頭孢匹林、以及頭孢拉定。頭孢菌素類(II代)包括但不限于頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢尼西(cefoicid)、頭孢雷特、頭孢西丁、頭孢丙烯、頭孢美唑(ceftmetazole)、頭孢呋辛、頭孢呋辛醋氧乙酯(cefuoximeaxetil)、以及氯碳頭孢。頭孢菌素類(III代)包括但不限于頭孢地尼、頭孢布烯、頭孢托侖、頭孢他美(cefatamet)、頭孢哌酮、頭孢克肟、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢布烯、頭孢唑肟、以及頭孢曲松。頭孢菌素類(IV代)包括但不限于頭孢吡月虧。示例性的大環(huán)內酯類(marcolides)和林可酰胺包括但不限于阿奇毒素、克拉霉素、克林霉素、地紅霉素、紅霉素、林可霉素、泰利霉素(telithromycine)、以及醋竹桃霉素。單環(huán)內酰胺類包括但不限于包括氨曲南。碳青霉烯類包括但不限于多利培南、亞胺培南_西司他丁、以及美羅培南。氨基糖苷類包括但不限于阿米卡星、硫酸阿米卡星、慶大霉素、硫酸慶大霉素(genatmicinsulfate)、卡那霉素、奈替米星(metilmicin)、新霉素、奈替米星、鏈霉素、妥布霉素、以及巴龍霉素(paromycin)。糖肽類包括但不限于達巴萬星、奧利萬星、替拉凡星、替考拉寧、以及萬古霉素。四環(huán)素類包括但不限于地美環(huán)素(demclocylline)、多西環(huán)素、美他環(huán)素(methacyline)、米諾環(huán)素(minocyline)、土霉素、四環(huán)素(tetracyline)、以及金霉素(chloretracycline)。噁唑烷酮類(oxazolidonones)包括但不限于利奈唑胺。鏈陽性霉素類包括但不限于奎奴普丁(quinoprisitin)加上達福普汀?；前奉惏ǖ幌抻诨前访茁 ⒒前粪奏ゃy、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、柳氮磺吡啶(sulfasalzine)、磺胺、磺胺異噁唑、甲氧節(jié)啶_磺胺甲噁唑、以及磺胺甲二唑。其他的抗生素包括但不限于桿菌肽、氯霉素(chloramphenical)、多粘菌素E甲磺酸(colistemetate)、磷霉素、異煙肼、烏洛托品、甲硝唑(Metronidazol)、莫匹羅星、呋喃妥因、呋喃西林、新生霉素、多粘菌素B、大觀霉素、甲氧芐啶、多粘菌素E、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、吡嗪酰胺、對氨基水楊酸、琥乙紅霉素加上磺胺異噁唑、以及替加環(huán)素?？梢员贿f送到肺臟的化學治療藥物包括但不限于烷化劑、抗雌激素藥、阿柔比星、放線菌素D、阿地白介素、阿來組單抗、阿利維A酸、別嘌醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、門冬酰胺酶、貝沙羅汀、比生群、博來霉素、白消安、BCNU(卡莫司汀)、卡普睪酮、卡培他濱、卡鉑、塞來考昔、苯丁酸氮芥、順鉑、克拉屈濱、環(huán)磷酰胺、環(huán)氧合酶-2抑制劑、阿糖胞苷、CCNU(洛莫司汀)、達卡巴嗪、柔紅霉素(daunorubine)、道諾霉素、地尼白介素_毒素連接物、右雷佐生、地吖醌、多西他賽、阿霉素、表柔比星、阿法依伯汀、依索比星、雌莫司汀、依托泊苷(VP-16)、依西美坦、非格司亭、氮尿苷、氟達拉濱、5-氟尿嘧啶、氟維司群、半乳糖醇、吉西他濱、吉姆單抗、醋酸戈舍瑞林、羥基脲、替伊莫單抗、伊達比星、異環(huán)磷酰胺、甲磺酸伊馬替尼、干擾素a、干擾素Y、伊立替康(iriniotecan)、異丙鉑(iroplatin)、來曲唑、亞葉酸、左旋咪唑、氯尼達明、醋酸甲地孕酮(megrestrolacetate)、美法侖、巰嘌呤、美司鈉、甲氨蝶呤、甲氧沙林、絲裂霉素c、米托坦、米托蒽醌、米托胍腙、苯丙酸南諾龍、諾莫單抗、氮芥、奧普瑞白介素、奧沙利鉑、紫杉醇、帕米膦酸鹽、培加酶、培門冬酶、培非司亭、噴司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、卟吩姆鈉、丙卡巴肼、黃體酮、潑尼莫司汀、PCNU、米帕林、拉布立酶、利妥昔單抗、沙格司亭、鏈佐星、滑石、他莫西芬、替莫唑胺、替尼泊苷(VM-26)、睪內酯、硫鳥嘌呤、噻替派、托泊替康、托瑞米芬、托西莫單抗、曲妥珠單抗、維甲酸(tertinoin)、烏拉莫司汀、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞賓、以及唑來膦酸鹽?？梢詫煞N或多種化學治療劑與本發(fā)明的一種表面活化劑進行連接，并進行聯(lián)合給藥?？商娲兀梢詫⒁环N化學治療劑與一種表面活化劑進行連接，并將該化學治療劑與連接至一種表面活化劑上的第二種化學治療劑進行聯(lián)合給藥。示例性的聯(lián)合治療包括紫杉醇和卡鉑、順鉑和酒石酸長春瑞濱(vinorelblinetartrate)、順鉑和依托泊苷、以及卡鉑和依托泊苷。共價連接可以使用許多策略將一種肺部活性藥物與在本發(fā)明中所使用的一種表面活化劑共價地連接?？傮w而言，可以使用一個鍵或一個連接物將這種肺部活性藥物共價地附連至這種表面活化劑上，該鍵或連接物保護了藥物的天然位點并保留了這種表面活化劑在肺臟/空氣界面上的相當長的停留時間?？梢詫⒅辽僖粋€額外的殘基加在此處披露的一種表面活性多肽的氨基端或羧基端或者一個內部的氨基酸殘基上以產(chǎn)生一個用于將藥物分子與該表面活化劑共價地結合的連接物。在一個示例性的實施方案中，SP-B通過至少一個氨基酸得到延長以便通過自動的肽合成來創(chuàng)造出一個非天然的氨基酸?？梢酝ㄟ^一個氨基或羥基基團將一種藥物與氨基酸(例如甘氨酸殘基)進行結合。代表性的共價連接可包括一個酉旨、一個酰胺、或脲。(March,AdvancedOrganicChemistry，4thEd.，JohnWiley&Sons，1992.)氨基酸殘基連接物通常是至少一個殘基，并且在長度上可以是40或更多個殘基，更常見的是1至10個殘基，并且最常見的是1至5個氨基酸殘基。這種連接物通常是一種小的中性的極性或非極性的氨基酸。用于連接的典型氨基酸殘基是甘氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、谷氨酸、以及門冬氨酸、或者類似物。在其他的實施方案中，這種連接物可以是一種并非自然發(fā)生的氨基酸的異雙功能的連接物。給藥方法本發(fā)明的組合物通過吸入法被遞送至肺臟?？梢允褂梦胙b置如吸入器(包括干粉吸入器和定量吸入器)和噴霧器(也稱作霧化器)以便將這些所披露的組合物遞送至肺臟。示例性的干粉吸入器可以從InhaleTher即euticSystems獲得，如在美國專利號5，458，135;5，740，794;5，785，049中所說明，它們均通過引用結合在此。干粉吸入器還可以從3M獲得，如在美國專利6，029，661中所說明，它通過引用結合在此。在此披露的組合物還可以使用一種定量吸入器(MDI)進行給藥，該定量吸入器包含處于一種藥學上惰性的液體推進劑(例如，一種氯氟碳(CFC)或氟烷)中的藥物的溶液或懸浮液，如在美國專利號5，320，094和美國專利號5，672，581中所說明，它們均通過引用結合在此。定量吸入器被設計為每次驅動或"噴出"遞送固定單位劑量的藥物，例如每次噴出在10到5000微克藥物的范圍內。示例性的定量吸入器可以從3M獲得，如在美國專利號5，224，183;5，290，534;5，511，540;6，454，140;以及6，615，826中所說明，它們均通過引用結合在此。定量吸入器還可以是不含CFC的。用吸入器來使用的藥物組合物可以是處于霧化的固體微?；蛞后w的小液滴或懸浮液的形式?？商娲兀梢詫⒃诖苏f明的這些組合物溶解或懸浮在一種溶劑(例如，水或鹽水)中，并且通過噴霧法進行給藥。用于遞送霧化溶液的示例性的噴霧器包括theAERxTM(Aradigm)、theUltravent(Mallinkrodt)、thePariLCPlusTM或thePariLCStarTM(PariGmbH，Germany)、theDeVilbissPulmo_Aide、以及theAcornII(MarquestMedicalProducts)。藥物配制品在此披露的藥物組合物可以被配制成處于一種適合于吸入至呼吸道和肺臟中的載體中的溶液和/或顆粒的懸浮液。此類載體對于熟悉用于將精細液滴遞送至呼吸道的吸入劑以及用于將可吸入的精細的顆粒(數(shù)量級為例如從0.5至l微米，并且優(yōu)選地從大約0.5至大約0.7微米，包括粉末、霧或氣溶膠)遞送至呼吸道的吹入劑(如在Remington'sPharmaceuticalSciences,16thedition,1980，Ed.ByArthurOsol中所說明，其通過引用結合在此)的普通技術人員而言也是熟知的。在一個實施方案中，用于吸入給藥的藥物組合物可以作為粉末進行給藥。這種粉狀藥物或者組合物通常位于一個容器內，如一個硬膠囊或一個泡罩包裝、或一種多劑量的設計。這種膠囊或泡罩在一個吸入器裝置中被撕破或開孔，由此使得粉末能被吸入?？傮w而言，用于吸入的藥物的平均粒徑是在1至10微米之間，其中粒徑范圍在2至5微米之間是特別適宜于穿透肺臟的外周氣道的。這種粒徑范圍通常通過微粉化或噴霧干燥來實現(xiàn)。粉狀藥物組合物通常作為一種組合物進行給藥，該組合物包括這種藥物與一種惰性載體的共混物或混合物。通常，這種惰性載體具有的平均粒徑基本上大于該藥物的平均粒徑。除了其他優(yōu)點之外，這還提供了該組合物的流動特性和分配準確度方面的改進。用于所生產(chǎn)的藥物的通常說明的載體材料包括碳酸鈣和糖，例如蔗糖、甘露醇或右旋糖，或者更特別地是乳糖，它們是藥學上可接受的并且不引起毒性的問題，這是因為在給藥過程中所吸取的任何殘基在攝入時具有良好的耐受性或者可能容易通過溶解(disillusion)(例如，在糖的情況中)或黏液纖毛清除而從肺臟中清除。在膠囊或泡罩中的組合物時常是約25mg。這個重量大概表示了可舒服地被吸入而沒有不適當?shù)母弊饔?如咳嗽)的粉末的最大量，并且還對應于通常通過灌裝機配藥的最在某些實施方案中，為粉末的吸入所配制組合物包括一種載體，該載體以大約95.0至99.99%的濃度而存在。更特別地，按重量計是從97.0至99.9%，尤其是從98.0至99.8%。通過應用或改編已知的方法，用于制備此類粉末的方法也構成了本發(fā)明的特征。在其他的實施方案中，可以使用本領域內熟知的方法將這種藥物組合物配制為一種氣溶膠配制品。一種廣泛使用的用于分配這種氣溶膠配制品的方法涉及在一種液化的推進劑氣體中制造作為精細分割的粉末的藥物的懸浮液配制品?？商娲?，可以制備一種溶液配制品，其中將這種藥物溶解于一個推進劑系統(tǒng)中，該系統(tǒng)可能包含了輔助藥物的溶出作用的增溶劑和共溶劑。通常，升壓定量吸入器(PMDI)用于將此類配制品分配給患者。推進劑可以包括氯氟碳(CFC)、氟烷(fluorocarban)(FC)、或者氫氟烷(hydrofluroalkane)(HFA)推進劑。治療的方法本披露還提供了用于治療患有肺部炎癥或肺病的受試者的方法。在另一個實施方案中，本披露提供了治療處于患有肺臟紊亂的風險之中的受試者的一種方法。這種方法包括給予該受試者一種結合物，該結合物包括與一種表面活化劑共價地鍵合的一種肺部活性藥物，該表面活化劑對人類肺泡/氣體界面具有一種親和力，并且這種表面活化劑包括對人類基本上無免疫原性的一種哺乳動物的肺表面活性多肽或它的一種模擬物的至少一個部分。這種結合物是通過吸入法以在肺中有效誘導一種藥物效應的量給予這位受試者的。這位受試者可以是人、猴子、黑猩猩、馬、狗、貓、牛、綿羊、豬、大鼠、或小鼠。在示例性實施方案中，這位受試者是人。需要治療的受試者正患有肺部炎癥或正患有肺病或具有患肺病的風險?？梢杂迷诖苏f明的藥物組合物進行治療的示例性肺病包括但不限于肺氣腫、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸性窘迫紊亂(RDS)、肺炎、結核或者其他的細菌性感染、囊性纖維病、和/或肺癌。鵬與給予一種未結合的藥物相比，給予與一種表面活化劑相結合的肺部活性藥物降低了給藥頻率。在某些實施方案中，可以重復該給藥步驟每日一次、隔日一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、或者每周一次。例證通過以下實例進一步說明本發(fā)明。提供這些實例僅是出于說明的目的，并且不得以任何方式解釋為限制本發(fā)明的范圍或內容。實例1:人類嗜中性細胞彈性蛋白酶抑制劑與一種SP-B肽的結合可以將一組有力的小分子人類嗜中性細胞彈性蛋白酶(HNE)抑制劑與一種SP-B肽結合，該SP-B肽包括SP-B的氨基端25個氨基酸(FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKG)(SEQIDNO:88)。在水分子去除之后，這種SP-B肽(包括氨基端25個氨基酸)的總分子量是2926.97。使用類似于在圖18中所描繪的連接的一種甘氨酸連接物將這種HNE抑制劑與SP-B的N端25個部分(25-mer)相結合。實例2:革巴B的合成用于該反應的所有溶劑是LR級的溶劑。室溫(RT)表明在27至32。C范圍內的溫度。所有的反應均通過TLC進行監(jiān)測，除非有所指明。使用旋轉蒸發(fā)器在減壓條件下將溶液蒸發(fā)。在Varian400MHz上進行NMR。使用100-200目的硅膠完成柱色譜法，除非有所指明。階段l的合成方案l將處于干的四氫呋喃(85mL)中的Cbz-Val-Pro-0H(5g，14mmo1)的溶液在氮氣下冷卻到-20。C。將N-甲基嗎啉(1.74mL，15mmo1)之后跟隨氯甲酸異丁酯(2mL，15mmo1)加19入到反應混合物中。將該反應混合物在_201:攪拌15分鐘，并接著將其冷卻至_40°C。將處于四氫呋喃(25mL)中的L-Valinol(1.62g，15mmo1)的溶液逐滴加至該反應混合物中。允許該反應混合物升溫至室溫過夜。將該反應混合物過濾，并且將濾液用乙酸乙酯(60mL)進行稀釋。用1NHCl(60mL)、NaHC03(30mL)、以及鹽水(30mL)順序地對組合的有機層進行洗滌。將有機層在硫酸鈉上進行干燥、過濾、并且濃縮以給出所希望的產(chǎn)物(5.7g)。HPLCRt:5.76;LCMS(M+1):434;產(chǎn)量92.5%。階段2的合成方案2將處于干的二氯甲烷(llOmL)中的草酰氯(2.45mL，28mmo1)的溶液冷卻至-6(TC，并且在lh的時間內逐滴加入處于二氯甲烷(35mL)中的DMS0(4.09mL，57.7mmo1)的溶液，將反應混合物的溫度保持在_45°C。允許該反應混合物升溫至-30°C，并且在lh的時間內逐滴加入處于二氯甲烷(35mL)中的階段-1(6.lg，14mmo1)的溶液。在_25°〇將反應混合物攪拌lh。將反應混合物冷卻至_401:，并且在lh的時間內逐滴加入二異丙基乙胺(10mL，57.7mmo1)。將該反應升溫至室溫，并接著用INHC1(60mL)和鹽水(60mL)進行洗滌。將有機層在硫酸鈉上進行干燥、過濾，并且在減壓條件下將濾液濃縮以給出所希望的產(chǎn)物(5.7g)。HPLCRt:6.81;LCMS(M+1):432;產(chǎn)量94%。階段3的合成方案3將處于干的四氫呋喃(lOOmL)中的鋅(2.5g，39mmo1)和階段-2(5.64g，13mmo1)的懸浮液在氮氣氛圍下加熱至6(TC。加入二氟溴乙酸乙酯(7.93g，39mmo1)并且將反應加熱至6(TC持續(xù)lh。將該反應混合物冷卻至室溫，在減壓條件下將四氫呋喃去除，并且加入乙酸乙酯(100mL)。反應混合物用1MKHS04(50mL)和鹽水(50mL)進行洗滌并且在硫酸鈉上進行干燥。將有機層過濾并且在減壓條件下將其濃縮以給出粗產(chǎn)物，然后將該粗產(chǎn)物通過制備型HPLC進行純化以給出所希望的產(chǎn)物(2.9g)。HPLCRt:7.44;LCMS(M+1):556;產(chǎn)量:40%。階段4的合成20<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>方案4將處于乙醇(40mL)中的階段_3(1.8g，3.2mmo1)以及節(jié)胺(1.06mL，9.7,1)的溶液在回流時攪拌4h。將該反應混合物冷卻至室溫并且在氮氣氛圍下再攪拌48h。在減壓條件下將溶劑去除。將殘余物溶解于乙酸乙酯(50mL)中，并且用INHCl(20mL)和鹽水(20mL)對該溶液進行洗滌。將有機層在硫酸鈉上進行干燥、過濾，并且在減壓條件下將溶劑去除以給出所希望的產(chǎn)物(1.7g)。HPLCRt:7.56;LCMS(M+1):616;產(chǎn)量88%。階段-5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>方案5將處于乙酸乙酯(50mL)中的階段-4(1.85g，3mmo1)以及20%氫氧化鈀(lg)的混合物在200psi放置于一個高壓容器中20h。將反應混合物通過c鹽進行過濾，并且在真空下將濾液濃縮以給出所希望的產(chǎn)物連同一些起始材料，這些起始材料如此進行使用，用于進一步反應沒有任何純化(1.lg)階段-6<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>方案6在0°C將三乙胺(0.25mL，1.8mmo1)加至處于干的二氯甲烷(50mL)中的階段-5(lg，2.lmmol)的溶液中。然后，逐滴加入處于二氯甲烷(20mL)中的乙二酸單乙酯單酰氯(0.2mL，1.87mmol)的溶液。允許反應混合物升溫至室溫，并再攪拌2h。用水(25mL)將反應混合物驟冷。將有機層分離，在硫酸鈉上進行干燥，并且在減壓條件下蒸發(fā)以給出所希望的產(chǎn)物，然后將該產(chǎn)物通過制備型HPLC進行純化。HPLCRt:6.72;LCMS(M+1):583;產(chǎn)量0.5g(42%)。階段_7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>方案7將三氟乙酸(0.92mL，12.02mmol)加至處于干的二氯甲烷(25mL)中的階段-6(1.75g，3mmo1)以及戴斯_馬丁氧化劑(5.lg，12.02mmol)的經(jīng)攪拌的溶液中。在室溫下在氮氣氛圍下將該混合物攪拌4h。加入乙酸乙酯(lOOmL)，并且用飽和的硫代硫酸鈉(60mL)、飽和的NaHC03(60mL)、以及鹽水(60mL)對該混合物進行洗滌。將有機層在硫酸鈉上進行干燥、過濾并且在減壓條件下蒸發(fā)以給出所希望的產(chǎn)物，將該產(chǎn)物如此使用，用于另外的步驟。HPLCRt:7.32;LCMS(M+1):581;產(chǎn)量1.7g(97%)。階段-8方案8用1NNaOH(O.18g，4.5mmo1)對處于甲醇水1:1(20mL)中的階段_7(2.2g，3.7mmo1)的溶液進行處理，并且在室溫下攪拌4h。將反應混合物濃縮以除去甲醇，用1NHC1進行酸化，并且用乙酸乙酯(60mL)進行萃取。將有機層在硫酸鈉上進行干燥，并且在減壓條件下蒸發(fā)以給出所希望的產(chǎn)物，然后該產(chǎn)物通過制備型HPLC進行純化。HPLCRt:6.47-6.61;LCMS(M+1):553;產(chǎn)量500mg(在制備后24%)。階段-9方案9用處于DMF(15mL)中的20%哌啶對王樹脂(2.5g，0.5eq)進行處理，并且將其攪拌約1小時。然后，用DMF(2次，15mL)、DCM(3次，15mL)對其進行洗滌，并且在真空下進行干燥。在樹脂上進行Kaiser測驗以確保完全去除F-moc基團。然后，將其用于與階段_8產(chǎn)物進行偶合。將處于DMF(5mL)中的以上的酸(97mg，0.176mmo1)的溶液加至處于DMF中的樹脂的溶液中，之后加入PyBoP(91mg，0.176,1)禾PN-甲基嗎啉(0.24mL，0.22,1)。允許反應混合物在振動器上振動大約3h。將溶液輕輕潷出，再次加入一批新鮮的以上試劑并且將其進一步振動3h。將這個過程重復大約4次。將溶液輕輕潷出，并且用DMF(3次，15mL)、DCM(3次，15mL)對樹脂進行洗滌，并且在真空下進行干燥。在樹脂上進行Kaiser測驗以確保偶合已發(fā)生。階段-10方案10<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>用于制作裂解溶液的步驟。TFA(81X)、苯酚(5%)、苯甲硫醚(5%)、1，2_乙二硫醇(2.5%)、水(3%)、二甲基硫化物(2%)、碘化銨(1.5%)。將該裂解溶液加至該樹脂中，并允許其在振動器上振動大約3h。將樹脂通過棉花進行過濾并且用TFA進行洗滌。然后，在真空下將濾液濃縮并且用冷乙醚進行研磨以給出一種白色固體，然后將該白色固體通過制備型HPLC進行純化以給出所希望的產(chǎn)物。LCMS(M/3):1155;產(chǎn)量46mg(1.84%)。實例3:革巴C的合成階段-6方案ll在室溫下將丙二酸單乙酯(0.7mL，6mmo1)之后跟隨HOBT(l.63g，12mmo1)、EDCI(1.27g，6.6mmol)、以及N-甲基嗎啉(1.6mL，15mmo1)加至出于干的THF(50mL)中的階段-5(3.2g，6.6mmo1)的溶液中。然后，允許將反應混合物在室溫下攪拌4h。然后，用水將反應混合物驟冷并在減壓條件下將其蒸發(fā)以去除THF。然后用乙酸乙酯(lOOmL)萃取水層。將有機層在硫酸鈉上進行干燥，并濃縮以給出粗產(chǎn)物，然后通過制備型HPLC對該粗產(chǎn)物進行純化(0.98g)。HPLCRt:6.44;LCMS(M+1):596;產(chǎn)量:在制備后25%。階段-7方案12將三氟乙酸(0.45mL，5.7mmo1)加至處于干的二氯甲烷(30mL)中的階段-6(0.86g，1.45mmo1)以及戴斯_馬丁氧化劑(2.46g，5.7mmo1)的經(jīng)攪拌的溶液中。在室溫下在氮氣氛圍下將該混合物攪拌4h。加入乙酸乙酯(50mL)并且用飽和的硫代硫酸鈉(20mL)、飽和的NaHC03(20mL)、以及鹽水(20mL)對該混合物進行洗滌。將有機層在硫酸鈉上進行干燥、過濾，并且在減壓條件下將溶劑去除以給出所希望的產(chǎn)物(0.74g)。HPLCRt:7.05;LCMS(M+1):595;產(chǎn)量86%。階段-8方案13用1NNaOH(O.060g，1.5mmo1)對處于甲醇水1:1(5mL:5mL)中的階段-7(0.75g，1.2mmo1)的溶液進行處理，并且將該溶液在室溫攪拌4h。將反應混合物濃縮以除去甲醇，用1NHC1進行酸化(直到pH2)并用乙酸乙酯(50mL)萃取。將有機層在硫酸鈉上進行干燥，并且在減壓條件下濃縮以給出所希望的產(chǎn)物，然后通過制備型HPLC對該產(chǎn)物進行純化(0.4g)。HPLCRt:6.01-6.51;LCMS(M+1):567;產(chǎn)量在制備后56%。階段-9方案14用處于DMF(20mL)中的20%哌啶對王樹脂(2g，0.08mmo1)進行處理，并且將其攪拌約1小時。然后，用DMF(2次)、DCM(3次)對其進行洗滌，并接著在減壓條件下進行干燥。在樹脂上進行Kaiser測驗以確保完全去除F-moc基團。然后將其用于與階段_8偶聯(lián)。將處于DMF(3mL)中的以上的酸(0.lg，O.16,1)的溶液加至處于DMF(5mL)中的樹脂(2g，0.08,1)的溶液中，之后跟隨加入PyBoP(O.83g，0.16,1)和N-甲基嗎啉(0.2mL，0.2mmo1)。使反應混合物在振動器上振動大約3h。將溶液輕輕倒出，再次加入許多新鮮的以上試劑并且另外使其振動3h。將這個過程重復大約4次。將溶液輕輕潷出，并且用DMF(3次)、DCM(3次)對樹脂進行洗滌，并且在減壓條件下進行干燥。在樹脂上進行Kaiser測驗以確保偶合已發(fā)生。階段-10方案15用于制作裂解溶液的步驟。TFA(81%)、苯酚(5%)、苯甲硫醚(5%)、1，2_乙二硫醇(2.5%)、水(3%)、二甲基硫化物(2%)、碘化銨(1.5%)。裂解溶液(25mL)加至樹脂中，并允許其在振動器上振動大約3h。將樹脂通過棉花進行過濾并且用TFA進行洗滌。然后，在減壓條件下將濾液濃縮，并且用冷乙醚進行研磨以給出一種白色固體，然后通過制備型HPLC將其純化以給出所希望的產(chǎn)物(0.080g)。LCMS(M/3):1160;產(chǎn)量2.4%。實例4:在HNE暴露之后肺臟的支氣管肺泡灌洗在這項研究中使用了總計14只動物。經(jīng)麻醉的小鼠接受了0.lml的通過一根鈍端導管遞送到氣管開口的溶液，并且允許這些動物將該溶液吸進其肺臟中。所有的動物被暴露于該處理持續(xù)2小時，并且使它們再次麻醉。如以下所說明進行肺臟的支氣管肺泡灌洗。給予HNE(肺氣腫的致病因子)的四只動物具有按重量計0.053克的平均肺臟血細胞水平。當給予HNE時，靶2(在二十世紀九十年代早期由Zeneca研制的一種有力的HNE抑制劑)使肺臟中的平均血液水平降低了34%，達到0.035克。當給予HNE時，耙C(與人表面活性B肽的最初25個殘基的N端共價地附連的Zeneca分子)使肺臟中的平均血液水平降低了87%，達到0.007克。使用一組動物來確定針對該項研究的最佳的HNE濃度。暴露于50微克HNE的一份最初的樣本在暴露情況下沒有存活。將HNE的量值降低到40微克以保持最大限度的有害但可存活的效果。暴露于40微克的HNE的動物能夠存活足夠長的時間來進行完整的研究。將在完整的研究中剩余的所有動物暴露于40微克的HNE中。以相對于HNE70倍摩爾過量給予耙2(Zeneca分子)。在動力學研究中，耙2具有2nM親和力。在動力學研究中，如與靶2相比，靶C(與人表面活性肽B的最初25個殘基共價地附連的Zeneca分子)失去大概兩個數(shù)量級的效能的強度，并且由此靶C具有對于HNE大概200nM的親和力。因此，在這些研究中，耙C是以相對于HNE的100倍摩爾的過量給予這些動物的。通過以下步驟進行支氣管肺泡灌洗(BAL):1)使動物麻醉；2)對這些動物進行氣管切開術，并切開胸部，并將肋骨展開以便能夠進行完全的肺擴張；3)通過氣管切開術的導管將lml的PBS緩沖溶液施加壓力至肺臟中；4)將該溶液從肺臟中吸取出來；5)對回收的溶液進行離心以便從液體部分中分離紅細胞部分；以及6)對紅細胞部分進行稱重。表2:肺臟血細胞水平的測量<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>通過引用進行結合出于所有的目的，在此所提到的專利文件和科學論文中的每一篇的完整披露內容均通過引用結合在此。等效物可以用其他的具體形式實施本發(fā)明而不背離其精神或本質特征。因此，上述的實施方案必須被認為在所有方面是用作說明的而不是對在此所說明的本發(fā)明進行限制。因此，本發(fā)明的范圍是由所附的權利要求書而不是通過上述的說明來指明的，并且在該權利要求書的等效性的含義和范圍之內的所有變化均旨在被包括在其中。表1:示例性的人的SP-B肽(C端平截)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>人的SP-B肽SEQIDNOFPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVAGGICQCLSEQIDNO:64FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVAGGICQCSEQIDNO:65人的SP-B肽SEQIDNOFPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVAGGICQSEQIDNO:66FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVAGGICSEQIDNO:67FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVAGGISEQIDNO:68FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVAGGSEQIDNO:69FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVAGSEQIDNO:70FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVASEQIDNO:71FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLVSEQIDNO:72FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPLSEQIDNO:73FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVPSEQIDNO:74FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKGALAVAVAQVCRVVSEQIDNO:7528<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>權利要求一種配制為用于吸入的藥物組合物，該組合物包括一種表面活化劑，其特征為對人類肺泡/氣體界面的親和力，所述表面活化劑包括對人類基本上無免疫原性的一種哺乳動物的肺表面活性多肽或者它的一種模擬物的至少一個部分；以及，在所述活化劑共價地鍵合了，一種肺部活性藥物，該藥物與一種可到達肺部的/氣體界面的細胞外或細胞表面結合的靶相結合。2.如權利要求1所述的組合物，其中該活化劑包括一種肺表面活性物質、一種非人類哺乳動物的肺表面活性物質如一種豬或牛的肺表面活性物質、包括一種哺乳動物的肺表面活性多肽的一種缺失突變體或氨基酸置換突變體的一種模擬肽、或者它們的一個片段。3.如權利要求1所述的組合物，其中該活化劑包括一種哺乳動物的肺表面活性物質部分的多肽組分的一個合成的或者以重組方式產(chǎn)生的部分。4.如權利要求3所述的組合物，其中該活化劑包括SP-A、SP-B、SP-C、SP-D、或它們的一個混合物中的至少一個部分。5.如權利要求3所述的組合物，其中該活化劑包括SP-B的至少一個部分，如來自SP-B的N端的25個氨基酸的區(qū)段。6.如權利要求1所述的組合物進一步包括一種脂類。7.如權利要求1所述的組合物，其中所述活化劑包括或者是衍生自從哺乳動物的肺臟中收集的一種哺乳動物的肺表面活性物質。8.如以上權利要求中的任一項所述的組合物，其中該肺部活性藥物是選自下組，其構成為一種彈性蛋白酶抑制劑、一種皮質類固醇、一種支氣管擴張藥、一種抗生素、以及一種化學治療劑。9.如權利要求8所述的組合物，其中該肺部活性藥物是一種選自下組的皮質類固醇，該組的構成為倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氫化可的松、甲潑尼龍、潑尼松龍、潑尼松、以及曲安西龍。10.如權利要求1至8中的任一項所述的組合物，其中該肺部活性藥物是一種選自下組的支氣管擴張藥，該組的構成為柳丁胺醇、沙丁胺醇、特布他林、非諾特羅、氫溴酸非諾特羅、利米特羅、瑞普特羅、吡布特羅、異丙腎上腺素、奧西那林、比托特羅、溴沙特羅、沙美特羅、沙美特羅昔萘酸酯、福莫特羅、富馬酸福莫特羅、克侖特羅、丙卡特羅、異丙托銨、異丙托溴銨、噻托銨、噻托溴銨一水合物、氨茶堿、奧西那林、膽茶堿、硫酸特布他林、以及茶堿。11.如權利要求1至8中的任一項所述的組合物，其中該肺部活性藥物是選自下組的一種抗生素，該組的構成為阿莫西林、氨芐西林、巴氨西林、羧芐西林、卡茚西林、美洛西林、哌拉西林、替卡西林、阿莫西林-克拉維酸、氨節(jié)西林-舒巴坦、青霉素、氯唑西林、雙氯西林、苯氧甲基青霉素、羧芐西林、甲氧西林、苯唑西林、青霉素G(芐星青霉素G、鉀、普魯卡因)、青霉素v、丙匹西林、依匹西林、環(huán)青霉素、哌拉西林加上三唑巴坦、替卡西林加上克拉維酸、萘夫西林、頭孢羥氨芐、頭孢唑林、頭孢氨芐、頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢尼西、頭孢雷特、頭孢西丁、頭孢丙烯、頭孢美唑、頭孢呋辛、頭孢呋辛酯、氯碳頭孢、頭孢地尼、頭孢布烯、頭孢托侖、頭孢他美、頭孢哌酮、頭孢克肟、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢布烯、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、阿奇毒素、克拉霉素、克林霉素、地紅霉素、紅霉素、林可霉素、泰利霉素、醋竹桃霉素、氨曲南、多利培南、亞胺培南_西司他丁、美羅培南、阿米卡星、硫酸阿米卡星、慶大霉素、硫酸慶大霉素、卡那霉素、奈替米星、新霉素、奈替米星、鏈霉素、妥布霉素、巴龍霉素、達巴萬星、奧利萬星、替拉凡星、替考拉寧、萬古霉素、地美環(huán)素、多西環(huán)素、美他環(huán)素、米諾環(huán)素、土霉素、四環(huán)素、金霉素、利奈唑胺、奎奴普丁加達福普汀、磺胺米隆、磺胺嘧啶銀、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、柳氮磺吡啶、磺胺、磺胺異噁唑、甲氧芐啶-磺胺甲噁唑、磺胺甲二唑、桿菌肽、氯霉素、多粘菌素E甲磺酸、磷霉素、異煙肼、烏洛托品、紅霉素、甲硝唑、莫匹羅星、呋喃妥因、呋喃西林、新生霉素、多粘菌素B、大觀霉素、甲氧芐啶、多粘菌素E、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、吡嗪酰胺、對氨基水楊酸、琥乙紅霉素加磺胺異噁唑、以及替加環(huán)素。12.如權利要求1至8中的任一項所述的組合物，其中該肺部活性藥物是選自下組的一種化學治療劑，該組的構成為烷化劑、抗雌激素藥、阿柔比星、放線菌素D、阿地白介素、阿來組單抗、阿利維A酸、別嘌醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、門冬酰胺酶、貝沙羅汀、比生群、博來霉素、白消安、BCNU(卡莫司汀)、卡普睪酮、卡培他濱、卡鉑、塞來考昔、苯丁酸氮芥、順鉑、克拉屈濱、環(huán)磷酰胺、環(huán)氧合酶-2抑制劑、阿糖胞苷、CCNU(洛莫司汀)、達卡巴嗪、柔紅霉素、道諾霉素、地尼白介素-毒素連接物、右雷佐生、地吖醌、多西他賽、阿霉素、表柔比星、阿法依伯汀、依索比星、雌莫司汀、依托泊苷(VP-16)、依西美坦、非格司亭、氮尿苷、氟達拉濱、5-氟尿嘧啶、氟維司群、半乳糖醇、吉西他濱、吉姆單抗、醋酸戈舍瑞林、羥基脲、替伊莫單抗、伊達比星、異環(huán)磷酰胺、甲磺酸伊馬替尼、干擾素a、干擾素Y、伊立替康、異丙鉑、來曲唑、亞葉酸、左旋咪唑、氯尼達明、醋酸甲地孕酮、美法侖、巰嘌呤、美司鈉、甲氨蝶呤、甲氧沙林、絲裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、米托胍腙、苯丙酸南諾龍、諾莫單抗、氮芥、奧普瑞白介素、奧沙利鉑、紫杉醇、帕米膦酸鹽、培加酶、培門冬酶、培非司亭、噴司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、嚇吩姆鈉、丙卡巴肼、黃體酮、潑尼莫司汀、PCNU、米帕林、拉布立酶、利妥昔單抗、沙格司亭、鏈佐星、滑石、他莫西芬、替莫唑胺、替尼泊苷(VM-26)、睪內酯、硫鳥嘌呤、噻替派、托泊替康、托瑞米芬、托西莫單抗、曲妥珠單抗、維甲酸、烏拉莫司汀、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞賓、以及唑來膦酸鹽。13.如以上權利要求中的任一項所述的組合物，該組合物被安置在一個吸入裝置中供一位人類患者使用。14.治療患有一種肺病或者處在一種肺病的風險中的人的一種方法，該方法包括提供一種結合物，該結合物包括一種用于肺臟治療的藥物，該藥物與一種表面活化劑共價地鍵合，該表面活化劑的特征為對人類肺泡/氣體界面的一種親和力，其中該表面活化劑包括對人類基本上無免疫原性的一種哺乳動物的肺表面活性多肽或者它的一種模擬物的至少一個部分；并且將該結合物以在肺中有效誘導一種藥物效應的量通過吸入法以給予這個人。15.如權利要求14所述的方法，其中與未結合的藥物的吸入給藥相比所述給藥降低了該藥物的系統(tǒng)性生物利用度。16.如權利要求14所述的方法，其中與未結合的藥物的吸入給藥相比所述給藥增加了該藥物在肺中的停留時間。17.如權利要求14所述的方法，其中重復該給藥步驟每日一次，隔日一次、每三天一次、每五天一次、或每周一次。18.如權利要求14所述的方法,其中該給藥步驟是使用一種吸入裝置來實施的。19.如權利要求14所述的方法，其中所提供的結合物包括如權利要求1至13中的任一項所述的組合物。20.如權利要求1至12中的任一項所述的一種組合物用于制備一種治療人類肺臟的一種疾病或病況的藥物的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一種配置為用于吸入的藥物組合物，該組合物包括一種表面活化劑與一種肺部活性藥物的一種結合物。該表面活化劑具有對人類肺泡/氣體界面的親和力并且包括一種哺乳動物的肺表面活性物或它的一種模擬物的至少一個部分。本發(fā)明還提供了治療患有一種肺病或處于患有一種肺病的風險中的受試者的一種方法，該方法包括以在肺中有效誘導一種藥物效應的量將一種結合物通過吸入法給予該受試者，該結合物包括一種用于肺臟治療的藥物以及一種表面活化劑。文檔編號A61K31/00GK101754747SQ200880025087公開日2010年6月23日申請日期2008年6月4日優(yōu)先權日2007年6月5日發(fā)明者F·古阿涅利申請人:Paka肺部醫(yī)藥公司