專利名稱：用于治療免疫性和炎性疾病和病癥的組合物和方法
用于治療免疫性和炎性疾病和病癥的組合物和方法本申請(qǐng)要求2007年9月6日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)60/970，416的優(yōu)先權(quán)益，
其全部?jī)?nèi)容在此引為參考。
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明公開了用于治療免疫性和炎性疾病和病癥的方法和組合物。具體的方法和組合物包括使用抑制SlP裂解酶活性的藥劑以及至少一種附加的免疫抑制性和/或抗炎藥。
2.
背景技術(shù)：
鞘氨醇-1-磷酸(SlP)是對(duì)多種器官系統(tǒng)具有有力效應(yīng)的生物活性分子。Saba， J.D.和Hla, T. Circ. Res. 94 724~734(2004)。盡管某些人相信化合物是細(xì)胞內(nèi)第二信 使，但對(duì)其作用方式仍有爭(zhēng)論。同上。事實(shí)上，即使是它的代謝，也了解得很少。Hla，T.， Science 309 1682-3 (2005) 0目前，研究人員相信，SlP由鞘氨醇的磷酸化形成，通過去磷 酸化或裂解被降解。它裂解成磷酸乙醇胺和長(zhǎng)鏈醛的反應(yīng)，據(jù)報(bào)道由SlP裂解酶催化。同 上；Pyne&Pyne，Biochem Τ. 349 385-402(2000)。鞘氨醇-1-磷酸裂解酶是維生素B6依賴性酶，位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜中。Van Veldhoven 和 Mannaerts, T. Biol. Chem. 266 12502-12507(1991) ；Van Veldhoven 禾口 Mannaerts, Adv. Lipid. Res. 26 :69 (1993)。人類SlP裂解酶的多核苷酸和氨基酸序列及其基因產(chǎn)物，描述在 PCT 專利申請(qǐng) No. WO 99/16888 中。最近，Schwab和同事推斷，焦糖色I(xiàn)II的成分2-乙?；?4-四羥基丁基 咪唑(THI)，在給藥至小鼠時(shí)抑制了 SlP裂解酶活性。Schwab，S.等，Science 309 1735-1739(2005)。盡管其他人推測(cè)THI通過不同的機(jī)理發(fā)揮其效應(yīng)(參見例如Pyne， S. G. , ACGC Chem. Res. Co讓.11 108-112 (2000))，但顯然將這種化合物給藥于大鼠和小鼠， 誘導(dǎo)了淋巴細(xì)胞減少癥，并導(dǎo)致成熟的T細(xì)胞在胸腺中的積聚。參見例如Schwab，同上； Pyne, S. G. , ACGC Chem. Res. Comm. 11 108-112 (2000) ；Gugsyan, R.等，ImmunoloRy93 (3) 398-404(1998) ；Halweg, K. M.和 Biichi, G. , T. Org. Chem. 50 1134-1136 (1985) ；Kroeplien 和Rosdorfer的美國專利4，567，194。到目前為止，仍然沒有已知的關(guān)于THI在小鼠和大 鼠之外的動(dòng)物中具有免疫效應(yīng)的報(bào)道。盡管美國專利4，567，194認(rèn)為THI以及一些相關(guān) 化合物可以用作免疫抑制藥物，但在人類中進(jìn)行的化合物研究沒有發(fā)現(xiàn)免疫效應(yīng)。參見 Thuvander, A.禾口 Oskarsson, A. , Fd. Chem. Toxic. 32 (1) :7_13(1994) ；Houben, G. F.等， Fd. Chem. Toxic. 30(9) :749_757 (1992)。
3.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明部分地涉及治療、處置或預(yù)防免疫性或炎性疾病或病癥的方法，包括在需 要的患者中抑制SlP裂解酶活性，并對(duì)患者給予免疫抑制劑和/或抗炎藥。SlP裂解酶活性的抑制可以通過對(duì)患者給予式I的化合物或其可藥用的鹽來實(shí)現(xiàn) 其中的取代基在本文中定。本發(fā)明還包括了含有式I的化合物和一種或多種附加活性劑的藥物組合物。
4.


參考隨附的圖，將可以理解本發(fā)明的某些特點(diǎn)。圖1顯示了甲氨蝶呤(“MTX”)、S1P裂解酶抑制劑(“化合物”)以及二者的組 合在小鼠中對(duì)膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的效應(yīng)。這些效應(yīng)與未處理的小鼠以及給藥介質(zhì)對(duì)照 (“VC”)的小鼠進(jìn)行了比較。圖2顯示了移植模型中單獨(dú)給藥化合物和與環(huán)孢菌素A(“CsA”)組合給藥的化合 物的影響。圖2A顯示了介質(zhì)、單獨(dú)的CsA、單獨(dú)的化合物和二者的組合，對(duì)移植物被排斥時(shí) 的天數(shù)的影響。圖2B顯示了介質(zhì)、單獨(dú)的CsA、單獨(dú)的化合物和二者的組合，對(duì)于移植物存 活超過10天的小鼠的數(shù)量的影響。5.發(fā)明詳述本發(fā)明部分源自于與據(jù)信在體內(nèi)抑制S1P裂解酶的化合物有關(guān)的發(fā)現(xiàn)。5. 1.定義除非另外指明，否則術(shù)語“烯基”是指具有2到20個(gè)(例如2到10個(gè)或2到6個(gè)) 碳原子，并包含至少一個(gè)碳_碳雙鍵的直鏈、支鏈和/或環(huán)狀烴類。代表性的烯基包括乙烯 基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲 基-2-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚 烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯 基、2-癸烯基和3-癸烯基。除非另外指明，否則術(shù)語“烷基”是指具有1到20個(gè)(例如1到10個(gè)或1到4個(gè)) 碳原子的直鏈、支鏈和/或環(huán)狀(“環(huán)烷基”)烴類。具有1到4個(gè)碳的烷基被稱為“低級(jí)烷 基”。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己 基、異己基、庚基、4，4_ 二甲基戊基、辛基、2，2，4_三甲基戊基、壬基、癸基、i^一烷基和十二 烷基。環(huán)烷基可以是單環(huán)或多環(huán)，例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和金剛烷基。烷 基的其他例子具有直鏈、支鏈和/或環(huán)狀部分(例如1-乙基-4-甲基-環(huán)己基)。術(shù)語“烷 基”包括飽和的烴類以及烯基和炔基。除非另外指明，否則術(shù)語“烷基芳基”或“烷基-芳基”是指與芳基相連的烷基。除非另外指明，否則術(shù)語“烷基雜芳基”或“烷基-雜芳基”是指與雜芳基相連的焼基。
除非另外指明，否則術(shù)語“烷基雜環(huán)”或“烷基-雜環(huán)”是指與雜環(huán)基團(tuán)相連的烷基。除非另外指明，否則術(shù)語“炔基”是指具有2到20個(gè)(例如2到20個(gè)或2到6個(gè)) 碳原子，并包含至少一個(gè)碳_碳三鍵的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴類。代表性的炔基包括乙炔基、 丙炔基、1- 丁炔基、2- 丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1- 丁炔基、4-戊炔基、1-己 炔基、2-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、2-辛炔基、7-辛炔 基、1"壬炔基、2-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、2-癸炔基和9-癸炔基。除非另外指明，否則術(shù)語“烷氧基”是指-0-烷基團(tuán)。烷氧基的例子包括但不限于
-och3、-och2ch3、-o (ch2) 2ch3、-o (ch2) 3ch3、-o (ch2) 4ch3 和-o (ch2) 5ch3。除非另外指明，否則術(shù)語“芳基”是指由碳原子和氫原子構(gòu)成的芳香環(huán)或芳香的或 部分芳香的環(huán)系統(tǒng)。芳基部分可以包含連接或稠合在一起的多個(gè)環(huán)。芳基的例子包括但不 限于蒽基、奧基、聯(lián)苯基、芴基、茚滿、茚基、萘基、菲基、苯基、1，2，3，4_四氫-萘和甲苯基。除非另外指明，否則術(shù)語“芳基烷基”或“芳基_烷基”是指與烷基相連的芳基。除非另外指明，否則術(shù)語“循環(huán)淋巴細(xì)胞減少劑”是指CLRF大于大約20%的化合 物。除非另外指明，否則術(shù)語“循環(huán)淋巴細(xì)胞減少系數(shù)”或“CLRF”是指在小鼠中，由口 服單劑100mg/kg化合物引起的通過在下面的實(shí)施例中描述的方法測(cè)定到的循環(huán)淋巴細(xì)胞 數(shù)量的減少。除非另外指明，否則術(shù)語“鹵素”和“鹵”包括氟、氯、溴和碘。除非另外指明，否則術(shù)語“雜烷基”是指烷基(例如直鏈、支鏈或環(huán)狀的)，其中它 的至少一個(gè)碳原子已經(jīng)被雜原子(例如N、0或S)置換。除非另外指明，否則術(shù)語“雜芳基”是指芳基，其中它的至少一個(gè)碳原子已經(jīng)被雜 原子(例如N、0或S取代)置換。例子包括但不限于吖啶基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯 并異噻唑基、苯并異惡唑基、苯并喹唑啉基、苯并噻唑基、苯并惡唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚 基、異噻唑基、異惡唑基、惡二唑基、惡唑基、酞嗪基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶 基(pyrimidinyl)、嘧啶基(pyrimidyl)、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、噻唑基和三嗪 基。除非另外指明，否則術(shù)語“雜芳基烷基”或“雜芳基_烷基”是指與烷基相連的雜方基。除非另外指明，否則術(shù)語“雜環(huán)”是指由碳、氫和至少一個(gè)雜原子(例如N、0或S) 組成的芳香的、部分芳香的或非芳香的單環(huán)或多環(huán)或環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)可以包含多個(gè)(即兩個(gè) 或以上)稠合或連接在一起的環(huán)。例子包括但不限于苯并[1，3] 二氧雜環(huán)戊烯基、2，3-二 氫-苯并[1，4] 二氧雜芑基、噌啉基、呋喃基、乙內(nèi)酰脲基、嗎啉基、氧雜環(huán)丁基、氧雜環(huán)丙 基、哌嗪基、哌唳基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、四氫吡唳基、四氫嘧 啶基、四氫噻吩基、四氫噻喃基和戊內(nèi)酰胺基。除非另外指明，否則術(shù)語“雜環(huán)基烷基”或“雜環(huán)基_烷基”是指與烷基相連的雜 環(huán)。除非另外指明，否則術(shù)語“雜環(huán)烷基”是指非芳香族雜環(huán)。除非另外指明，否則術(shù)語“雜環(huán)烷基烷基”或“雜環(huán)烷基_烷基”是指與烷基相連的雜環(huán)烷基。除非另外指明，否則術(shù)語“處置(manage) ”、“處置(managing) ”和“處置 (“management)”包括在已經(jīng)患有特定疾病或病癥的患者中預(yù)防特定疾病或病癥的復(fù)發(fā)，和 /或延長(zhǎng)已經(jīng)患有疾病或病癥的患者保持病情緩解的時(shí)間。術(shù)語包括了調(diào)整疾病或病癥的 閾值、發(fā)展和/或持續(xù)時(shí)間，或改變患者對(duì)疾病或病癥響應(yīng)的方式。除非另外指明，否則術(shù)語“可藥用的鹽”是指從可藥用的無毒的酸或堿制備的鹽， 所述可藥用的無毒的酸或堿包括無機(jī)的酸和堿以及有機(jī)的酸和堿。合適的可藥用堿加成 鹽包括但不限于由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅制得的金屬鹽，或由賴氨酸、N，N’ _ 二芐基乙二 胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因制得的有機(jī) 鹽。合適的無毒的酸包括但不限于無機(jī)酸和有機(jī)酸，例如乙酸、海藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺 酸、苯甲酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡 醛酸、谷氨酸、羥基乙酸、氫溴酸、鹽酸、羥基乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、 粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、丁二酸、對(duì)氨基苯磺酸、硫 酸、酒石酸和對(duì)甲苯磺酸。具體的無毒的酸包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，具 體的鹽的實(shí)例包括鹽酸鹽和甲磺酸鹽。其它是本領(lǐng)域中公知的。參見，例如Remington’ s Pharmaceutical Sciences, 18thed. (Mack Publishing,Easton PA : 1990)禾口Remington :The Science andPractice of Pharmacy, 19thed. (Mack Publishing, Easton PA:1995)。除非另外指明，否則術(shù)語“防止(prevent) ”、“防止(preventing) ”和“防止 (prevention)”是指在患者開始患有特定疾病或病癥之前發(fā)生的作用，該作用抑制或減輕 疾病或病癥的嚴(yán)重性。換句話說，該術(shù)語包含了預(yù)防。除非另外指明，否則化合物的“預(yù)防有效的量”是足以預(yù)防疾病或病癥、或與疾病 或病癥相關(guān)的一種或多種癥狀，或預(yù)防其復(fù)發(fā)的量?；衔锏念A(yù)防有效的量是指治療劑的 量，當(dāng)單獨(dú)或與其他藥劑組合使用時(shí)，在疾病預(yù)防方面提供了預(yù)防性益處。術(shù)語“預(yù)防有效 的量”可以包括改進(jìn)總體預(yù)防或改進(jìn)另一種預(yù)防性藥劑的預(yù)防效能的量。除非另外指明，否則術(shù)語“S1P水平增強(qiáng)劑”是指具有至少大約10倍的SLEF的化 合物。除非另外指明，否則術(shù)語“S1P水平增強(qiáng)系數(shù)”或“SLEF”是指由口服單劑100mg/ kg化合物引起的，通過在下面的實(shí)施例中描述的方法測(cè)定的小鼠脾臟中S1P的增加。除非另外指明，術(shù)語“立體異構(gòu)混合物”包括外消旋混合物以及立體異構(gòu)富集的混 合物(例如，R/S = 30/70、35/65、40/60、45/55、55/45、60/40、65/35 和 70/30)。除非另有說明，術(shù)語“立體異構(gòu)純”是指包括化合物的一種立體異構(gòu)體并且基本上 不含該化合物的其它立體異構(gòu)體的組合物。例如，具有一個(gè)立構(gòu)中心的化合物的立體異構(gòu) 純組合物實(shí)質(zhì)上不含該化合物的相對(duì)的立體異構(gòu)體。具有兩個(gè)立構(gòu)中心的化合物的立體異 構(gòu)純組合物實(shí)質(zhì)上不含該化合物的其它的非對(duì)映體。典型的立體異構(gòu)純化合物包括大于約 80重量％的化合物的一種立體異構(gòu)體和小于約20重量％的該化合物的其它立體異構(gòu)體， 大于約90重量％的化合物的一種立體異構(gòu)體和小于約10重量％的該化合物的其它立體異 構(gòu)體，大于約95重量％的化合物的一種立體異構(gòu)體和小于約5重量％的該化合物的其它立 體異構(gòu)體，大于約97重量％的化合物的一種立體異構(gòu)體和小于約3重量％的該化合物的其 它立體異構(gòu)體，大于約99重量％的化合物的一種立體異構(gòu)體和小于約1重量％的該化合物的其它立體異構(gòu)體。除非另有說明，術(shù)語“被取代的”當(dāng)用于描述化學(xué)結(jié)構(gòu)或部分時(shí)，是指該結(jié)構(gòu)或部 分的衍生物，其中其一個(gè)或多個(gè)氫原子被諸如但不限于以下的化學(xué)部分或官能團(tuán)所取代 醇，醛，烷氧基，烷?；趸?，烷氧基羰基，烯基，烷基(例如，甲基，乙基，丙基，叔丁基)，炔 基，烷基羰基氧基(-OC(O)烷基)，酰胺(-C(O)NH-烷基-或-烷基NHC(O)烷基)，脒基 (-C(NH)NH-烷基或-C(NR)NH2)，胺(伯、仲和叔胺，諸如烷基氨基，芳基氨基，芳基烷基氨 基)，芳酰基，芳基，芳基氧基，偶氮基，氨基甲?；?-NHC (0) 0-烷基-或-0C (0) NH-烷基)， 甲氨酰(例如，C0NH2，以及C0NH-烷基，C0NH-芳基和C0NH-芳基烷基)，羰基，羧基，羧酸，羧 酸酐，羧酸酰氯，氰基，酯，環(huán)氧化物，醚(例如，甲氧基，乙氧基)，胍基，鹵基，鹵代烷基(例 如，_CC13，-CF3，-C(CF3)3)，雜烷基，半縮醛，亞胺(伯和仲)，異氰酸酯，異硫氰酸酯，酮，腈， 硝基，氧代，磷酸二酯，硫化物，磺酰胺基(例如，S02NH2)，砜，磺?；?包括烷基磺酰基，芳基 磺酰基和芳基烷基磺?；?，亞砜，硫醇(例如，巰基，硫醚)和脲(-NHC0NH-烷基-)。除非另外指明，否則化合物的“治療有效量”是指在疾病或病癥的治療和處置中足 以提供治療益處，或延遲與疾病或病癥相關(guān)的一種或多種癥狀或使其最小化的量?；衔?的治療有效量是指治療劑的量，在單獨(dú)或與其他治療劑組合使用時(shí)，在疾病或病癥的治療 或處置中提供了治療益處。術(shù)語“治療有效量”可以包括改進(jìn)總體治療、減輕或避免疾病或 病癥的癥狀或病因、或增強(qiáng)另一種治療劑的治療效能的量。除非另外指明，否則術(shù)語“治療(treat) ”、“治療(treating)，，和“治療 (treatment)”包括當(dāng)患者患有特定疾病或病癥時(shí)發(fā)生的作用，該作用減輕疾病或病癥的嚴(yán) 重性，或延遲或減緩疾病或病癥的進(jìn)展。除非另外指明，否則術(shù)語“包括”意思是“包括但不限于”。類似地，術(shù)語“諸如”意 思是“諸如但不限于”。除非另外指明，否則在一系列名詞前面緊接著的一個(gè)或多個(gè)形容詞被認(rèn)為是修飾 每個(gè)名詞。例如，措辭“任選地被取代的烷基、芳基或雜芳基”具有與“任選地被取代的烷 基、任選地被取代的芳基或任選地被取代的雜芳基”相同的含義。除非另外指明，否則化合物或化合物類別的結(jié)構(gòu)或名稱，包含了該化合物或化合 物類別的所有形式，以及所有含有該化合物或化合物類別的組合物。應(yīng)該指出，形成更大化合物的一部分的化學(xué)部分在本文中可以用其作為單個(gè)分子 的名稱或通常用于其游離基的名稱來描述。例如，術(shù)語“吡啶”和“吡啶基”在用于描述連接 于其它化學(xué)部分的基團(tuán)時(shí)具有相同的含義。因此，兩個(gè)短語“X0H，其中X為吡啶基”和“X0H， 其中X為吡啶”具有相同的含義，并且包括化合物吡啶-2-酚、吡啶-3-酚和吡啶-4-酚。還應(yīng)該指出，如果一個(gè)結(jié)構(gòu)或一個(gè)結(jié)構(gòu)的一部分的立體化學(xué)沒有用例如粗體或虛 線表示，則該結(jié)構(gòu)或該結(jié)構(gòu)部分被解釋為包括其所有的立體異構(gòu)體。此外，圖中表示的具有 不飽和化合價(jià)的任何原子都被假定為連接于足夠的氫原子，以滿足其化合價(jià)。另外，用與一 個(gè)虛線平行的一個(gè)實(shí)線表示的化學(xué)鍵包括單鍵和雙鍵(例如，芳香族的)，前提是如果化合 價(jià)允許的話。5. 2.化合物本發(fā)明涉及使用在體內(nèi)降低S1P裂解酶活性的化合物的方法，和包含所述化合物 和至少一種影響免疫或炎性應(yīng)答的附加藥劑的組合物。
5. 2. 1. SIP裂解酶抑制劑本發(fā)明考慮到了使用在2007年1月25日提交的美國專利申請(qǐng)No. 11/698，253中 公開的S1P裂解酶抑制劑。具體的化合物是式I的化合物或其可藥用的鹽 其中X是0或NR3 是0R1A、NH0H、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳 基烷基，雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R2是OR2A、C(O)OR2A、氫、鹵素、腈、或任選被 取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R3是OR3A、 N(R3A)2、NHC(O)R3A、NHSO2R3A或氫；R4是OR4A、OC(O)R4A、氫、鹵素或任選被取代的烷基、芳基、 烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；&是則1^)2、氫、羥基或任選 被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；并且r1a、 R2A、R3A、R4A和R5A各自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、 雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。式I的具體化合物是其中X是0氓是1到4個(gè)碳的烷基、苯基、芐基或苯乙基；R2 是氫；r4和r5之一是羥基；r4和r5中的另一個(gè)不是1到6個(gè)碳的烷基，1到6個(gè)碳的羥基烷 基，1到6個(gè)碳的具有高達(dá)每個(gè)碳一個(gè)羥基的多羥基烷基，1到6個(gè)碳的具有高達(dá)每個(gè)碳一
個(gè)乙?；亩嘁阴；榛?，苯基，芐基或苯乙基。在具體實(shí)施方案中，化合物不是2-乙?；?4-四羥基丁基咪唑、1-(4-(1，1,2,2, 4-五羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙酮、1-(2_乙酰基-1H-咪唑-4-基)丁烷_1，1，2， 2-四基四乙酸酯，或1-(2_乙?；?1H-咪唑-4-基)丁烷-1，1，2，2，4-五基五乙酸酯。具體的實(shí)施例包含式II的化合物或其可藥用的鹽 其中X是0或NR3 是0R1A、NHOH、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳 基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R2是OR2A、C(O)OR2A、氫、鹵素、腈或任選被 取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R3是OR3A、 n(R3A)2、NHC(O)R3A、nhso2R3A 或氫；R6 是 OR6A、OC(O)R6A、N(RJ2、NHC(O)R6B、氫或鹵素;R7 是0R7A、0C (0) R7A、N(R7B) 2、NHC (0) R7B、氫或鹵素;R8 是 0R8A、OC (0) R8A、N(R8B) 2、NHC (0) R8B、氫或鹵 素；R9 是 CH20R9A、CH20C(0)R9A、N(R9B)2、NHC(0)R9B、氫或鹵素;R1A、R2A、R3A、R6A、R7A、R8A 和 R9A 各 自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或 雜環(huán)基烷基；并且R6B、R7B、R8B和R9B各自獨(dú)立地是氫或任選被一個(gè)或多個(gè)羥基或鹵素基團(tuán)取 代的烷基；式II的具體化合物是1)如果X是0，隊(duì)是1到4個(gè)碳的烷基、苯基、芐基或苯乙 基，R2是氫，R6、R7、R8和R9中的至少兩個(gè)不是羥基或乙酸酯；2)如果X是0，隊(duì)是甲基，R2 是氫，R6和R7都是羥基，R8和R9中的一個(gè)是氫，另一個(gè)不是NHC (0) R9B ；3)如果X是0，隊(duì)是 0R1A，R1a是氫或低級(jí)烷基，R2是氫，R6、R7、R8和R9中的至少一個(gè)、但不是所有是羥基或乙酸。本發(fā)明的具體化合物是式II (a):
11(a) 。其他的化合物是式III
H0 其中Z是任選被取代的烷基氓是0R1A、NH0H、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基 芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R2是OR2A、C(O)OR2A、氫、鹵素、腈或 任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；r3是 0R3A、N(R3A) 2、NHC (0) R3A、NHS02R3A或氫；R1A、R2A和R3A各自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、 芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。具體的化合物由下式表 示 本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括式IV的化合物及其可藥用的鹽 其中=R1是01 吣ΝΗ0Η、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷 基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R3是0R3A、N(R3a)2> NHC(O)R3A> NHSO2R3a或氫；R6是0R6A、 OC (0) R6A、N (R6b) 2、NHC (0) R6b、氫或鹵素；R7 是 OR7a、OC (0) R7A,N (R7b) 2、NHC (0) R7b、氫或鹵素;R8 是 0R8A、OC(O)R8a, N(R8b)2, NHC (0) R8b、氫或鹵素；R9 是 CH20R9A、CH2OC(O)R9a, N(R9b)2, NHC(O) R9b、氫或鹵素；R1A、R3A、R6A、R7A、R8A和R9a各自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳 基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。具體的化合物是式IV (a) 其他的由下式表示 對(duì)于含有下面描述的基團(tuán)的每種上面顯示的式來說，本發(fā)明的某些實(shí)施方案是這 樣的在某些實(shí)施方案中，X是0。在其他實(shí)施方案中，X是NR3。在某些實(shí)施方案中，R1是氫。在其他實(shí)施方案中，R1是任選被取代的低級(jí)烷基。在 其他實(shí)施方案中，禮是顯0!1。在其他實(shí)施方案中，禮是01^，Ria是例如氫或任選被取代的 低級(jí)烷基。在某些實(shí)施方案中，R2是氫。在其他實(shí)施方案中，R2不是氫。在其他實(shí)施方案中， R2是腈。在其他實(shí)施方案中，R2是任選被取代的低級(jí)烷基。在其他實(shí)施方案中，R2是01^。 在其他實(shí)施方案中，R2是C (0) OR2ao在某些實(shí)施方案中，R2a是氫或任選被取代的低級(jí)烷基。在某些實(shí)施方案中，R3是01^。在其他實(shí)施方案中，R3是N(R3A)2或NHC(0)R3A。在 其他實(shí)施方案中，R3是NHS02R3A。在某些實(shí)施方案中，R3a是氫或任選被取代的低級(jí)烷基。在 其他實(shí)施方案中，R3a是任選被取代的芳基或雜環(huán)。在某些實(shí)施方案中，R4是OR4a。在其他實(shí)施方案中，R4是鹵素。在某些實(shí)施方案中，&是則1^)2。在其他實(shí)施方案中，R5是氫。在其他實(shí)施方案 中，R5是羥基。在其他實(shí)施方案中，R5是雜烷基(例如烷氧基)。在其他實(shí)施方案中，R5是 任選被取代的烷基。在其他實(shí)施方案中，R5是任選被取代的芳基。在某些實(shí)施方案中，R6、R7、RjnR9中的一個(gè)或多個(gè)是羥基或鹵素。在某些實(shí)施方 案中，R6, R7, R8和R9都是羥基或乙酸。在某些實(shí)施方案中，Z是任選被一個(gè)或多個(gè)羥基、乙酸酯或鹵素基團(tuán)取代的烷基。本發(fā)明的化合物(即本文公開的化合物)可以含有一個(gè)或多個(gè)立體中心，可以 作為對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物或非對(duì)映異構(gòu)體的混合物存在。本發(fā)明包含了這些化合 物的立體異構(gòu)純形式，以及這些形式的混合物。立體異構(gòu)體可以不對(duì)稱合成，或使用標(biāo)準(zhǔn) 技術(shù)例如手性柱或手性拆分試劑進(jìn)行拆分。參見例如Jacques，J.等，《對(duì)映異構(gòu)體、消旋 體禾口拆分》(Enantiomers, Racemates and Resolutions (ffileylnterscience, New York, 1981)) ；ffilen, S. H.等，Tetrahedron 33 2725(1977) ；Eliel, Ε. L.，《碳化合物的立體化 學(xué)》(Stereochemistry of CarbonCompounds (McGraw Hill, NY, 1962))；以及 Wilen，S. H.， 《拆分試劑禾口光學(xué)拆分表》(Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, p. 268 (E. L. Eliel Univ. of Notre Dame Press, Notre Dgime， IN，1972))。本發(fā)明還包含了本文公開的化合物的立體異構(gòu)體混合物。它還包含了本文公開的 化合物的構(gòu)型異構(gòu)體，以混合物或純的或基本上純的形式存在，例如順式(Z)和反式(E)烯 烴異構(gòu)體，和順式和反式肟異構(gòu)體。某些化合物是循環(huán)淋巴細(xì)胞減少劑。具體的化合物，當(dāng)使用實(shí)施例中描述的方法測(cè)定時(shí)，抑制循環(huán)系統(tǒng)淋巴細(xì)胞的量超過大約20、50、75、100、150或200%。某些化合物在體內(nèi)直接或間接抑制SlP裂解酶，是SlP水平增強(qiáng)劑。具體的化合 物，當(dāng)使用下面實(shí)施例中描述的方法測(cè)定時(shí)，增加SlP的量超過大約10、15、20、25或30倍。 式I的化合物可以通過本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法(例如通過對(duì)Pyne，S. G.， ACGC Chem. Res. Comm. 11 108-112 (2000) ；Halweg, K. Μ.禾口 Biichi，G.，Τ. Org. Chem. 50 1134-1136(1985)中描述的方法進(jìn)行改變和添加)，和通過本文描述的方法來制備。 5. 2.2免疫抑制劑和抗炎藥適合用于本發(fā)明的方法和組合物的免疫抑制劑包括本技術(shù)領(lǐng)域已知的免疫抑制 齊U。例子包括氨基喋呤、硫唑嘌呤、環(huán)孢菌素A、D-青霉胺、金鹽、羥氯奎、來氟米特、甲氨蝶 呤、米諾環(huán)素、雷帕霉素、柳氮磺吡啶、他克莫司(Π(506)，及其可藥用的鹽。具體的免疫抑制 劑是甲氨蝶呤。其他的例子包括抗TNF抗體，例如阿達(dá)木單抗(adal imumab)，培塞株單抗 (certolizumab pegol)，依那西普(etanercept)禾口英夫利西單抗(infliximab)。其他包括 白介素-1阻斷劑，例如阿那白滯素(anakinra)。其他包括抗B細(xì)胞(CD20)抗體，例如利妥 昔單抗(rituximab)。其他包括T細(xì)胞活化阻斷劑，例如阿巴西普(abatac印t)。其他的例子包括次黃嘌呤核苷單磷酸脫氫酶抑制劑，例如霉酚酸酯(CellCept ) 和霉酚酸(Myfortic )。適合用于本發(fā)明的方法和組合物的抗炎藥包括本技術(shù)領(lǐng)域已知的抗炎藥。例子包 括糖皮質(zhì)激素和NSAID。糖皮質(zhì)激素的例子包括醛留酮、倍氯米松、倍他米松、可的松、去氧皮質(zhì)酮、地塞米 松、氟氫可的松、氫化可的松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、潑尼松、曲安西龍，及其可藥用的
Τττ . οNSAID的例子包括水楊酸類(例如阿司匹林，amoxiprin,貝諾酯，三水楊酸膽堿 鎂，二氟尼柳，faislamine,水楊酸甲酯，水楊酸鎂，雙水楊酸酯，及其可藥用的鹽)，芳基烷 酸類(例如，雙氯芬酸，醋氯芬酸，阿西美辛，溴芬酸，依托度酸，吲哚美辛，萘丁美酮，舒林 酸，托美丁，及其可藥用的鹽)，芳基丙酸類(例如，布洛芬，卡洛芬，芬布芬，非諾洛芬，氟比 洛芬，酮洛芬，酮咯酸，洛索洛芬，萘普生，奧沙普秦，噻洛芬酸，舒洛芬，及其可藥用的鹽)， 芳基鄰氨基苯甲酸類(例如，甲氯芬那酸，甲芬那酸，及其可藥用的鹽)，吡唑烷衍生物(例 如，阿扎丙宗，安乃近，羥布宗，保泰松，苯磺保泰松，及其可藥用的鹽)，昔康類(例如，氯諾 昔康，美洛昔康，吡羅昔康，替諾昔康，及其可藥用的鹽)，C0X-2抑制劑(例如，塞來昔布， 依托昔布，魯米昔布，帕瑞昔布，羅非昔布，伐地昔布，及其可藥用的鹽)，和磺酰苯胺類(例 如，尼美舒利，及其可藥用的鹽)。5. 3.使用方法本發(fā)明包括在患者(例如人類)中治療、處置或預(yù)防免疫性或炎性疾病或病癥的 方法，包括對(duì)患者給予通過不同機(jī)制起作用的免疫抑制劑和/或抗炎藥。本發(fā)明還包括減少治療、處置或預(yù)防免疫性或炎性疾病或病癥所需的免疫抑制劑 和/或抗炎藥的劑量的方法，包括對(duì)患者附加給予抑制SlP裂解酶活性的化合物。該方法 使得人們可以降低與許多免疫抑制和抗炎藥有關(guān)的毒性，同時(shí)維持它們的效能。免疫性和炎性疾病和病癥的例子包括阿狄森氏病，抗磷脂綜合征，哮喘，特應(yīng)性皮炎，自身免疫性萎縮性胃炎，胃酸缺乏自身免疫，貝赫切特病，乳糜瀉，慢性特發(fā)性蕁麻 疹，慢性嬰兒神經(jīng)皮膚關(guān)節(jié)(CINCA)綜合征(亦稱新生兒多系統(tǒng)炎性病(NOMID))，慢性阻 塞性肺病(COPD)，克隆病，庫欣綜合征，皮膚肌炎，古德帕斯徹綜合征，移植物抗宿主病，格 雷夫斯病，橋本甲狀腺炎，特發(fā)性腎上腺萎縮，特發(fā)性血小板減少癥，蘭-伊綜合征，紅斑狼 瘡，多發(fā)性硬化，類天皰瘡，尋常天皰瘡，惡性貧血，花粉癥，結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎，原發(fā)性膽汁性 肝硬化，原發(fā)性硬化性膽管炎，銀屑病，雷諾病，瑞特氏綜合征，復(fù)發(fā)性多軟骨炎，類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎，鼻炎，施密特綜合征，膿毒病，舍格倫綜合征，交感性眼炎，高安動(dòng)脈炎，巨細(xì)胞性動(dòng) 脈炎，甲狀腺毒癥，移植排斥(例如，組織移植，骨髓移植)，潰瘍性結(jié)腸炎，葡萄膜炎，血管 炎和韋格納肉芽腫病。化合物的量、給藥途徑和用藥時(shí)間表將取決于多種因素，例如待治療、預(yù)防或處置 的具體指征，以及患者的年齡、性別和狀況。這些因素所發(fā)揮的作用在本技術(shù)領(lǐng)域中是眾所 周知的，可以通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。在具體實(shí)施方案中，式I的化合物給藥于人類患者的量 為大約 0. 5、1、2. 5 或 5mpk。5. 4.藥物制劑 本發(fā)明涵蓋的藥物組合物含有至少兩種活性藥物成分。某些藥物組合物是適于經(jīng) 口、經(jīng)粘膜(例如，鼻，舌下，陰道，頰或直腸)，非腸道(例如，皮下，靜脈內(nèi)，快速推注，肌肉 內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi))或透皮給藥至患者的單一單位劑量形式。劑量形式的例子包括但不限于片 劑 ’囊片；膠囊，諸如軟彈性明膠膠囊；扁囊劑；錠劑；菱形劑；分散體；栓劑；膏劑；泥敷劑 (泥罨劑)；糊劑；粉劑；敷料；霜?jiǎng)?’膏藥 ’溶液；貼劑；氣霧劑(例如，經(jīng)鼻噴霧劑或吸入 齊U)；凝膠劑；適于經(jīng)口或粘膜給藥至患者的液體劑型，包括懸浮液(例如，水性或非水性的 液體懸浮液，水包油型乳液，或油包水型液體乳液)，溶液和酏劑；適于非腸道給藥至患者 的液體劑型；和無菌固體(例如，晶體或無定形固體)，其可被復(fù)溶以提供適于非腸道給藥 至患者的液體劑型。所述制劑應(yīng)適合給藥方式。例如，口服給藥要求使用腸溶衣來保護(hù)本發(fā)明的化合 物免于在胃腸道內(nèi)的降解。類似地，制劑可含有促進(jìn)活性成分遞送到達(dá)作用部位的成分。例 如，化合物可在脂質(zhì)體制劑中被給藥以便保護(hù)它們免受降解酶的破壞，促進(jìn)在循環(huán)系統(tǒng)中 的轉(zhuǎn)運(yùn)，和實(shí)現(xiàn)它們的跨細(xì)胞膜到達(dá)細(xì)胞內(nèi)位點(diǎn)的遞送。劑量形式的組成、形狀和類型一般地隨著使用的不同而異。例如，在疾病的快速治 療中所用的劑量形式與在相同疾病的長(zhǎng)期治療中使用的劑量形式相比，前者可包含更大量 的一種或多種活性成分。類似地，非腸道劑量形式與用于治療相同疾病的口服劑量形式相 比，前者包含更少量的一種或多種活性成分。這些以及其他的方式，其中本發(fā)明所包含的具 體的劑量形式可以互相變化，這對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員來說是顯而易見的。參見例如 〈〈Remington，s藥物學(xué)〉〉(第 18版)(Remington，s Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing, Easton PA:1990))。5.4. 1 口服劑量形式本發(fā)明的適于口服給藥的藥物組合物可作為離散的劑量形式存在，諸如但不限 于片劑(例如，咀嚼片)，囊片，膠囊和液體(例如，調(diào)味糖漿劑)。這些劑量形式含有 預(yù)定量的活性成分，并且可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的制藥方法來制備。一般地，參見 Remington' sPharmaceutical Sciences，18th ed. ,Mack Publishing，Easton PA(1990)o
典型的口服劑型通過將活性成分與至少一種賦形劑按照常規(guī)的配藥技術(shù)合并成 均勻混合物而制備。賦形劑可以根據(jù)給藥所需的制劑形式，采取多種多樣的形式。
因?yàn)槠瑒┖湍z囊容易給藥，它們代表了最有利的口服單劑量單位形式。如果需要， 片劑可通過標(biāo)準(zhǔn)的水性或非水性技術(shù)進(jìn)行包衣。這樣的劑量形式可通過常規(guī)的制藥方法制 得。通常，通過將活性成分與液體載體、細(xì)分散的固體載體或二者均勻地和密切地混合，并 且如有必要然后使產(chǎn)品成型為所需形式來制備藥物組合物和劑型。崩解劑可被并入到固體 劑型中以促進(jìn)快速溶出。潤滑劑可被并入以便于劑量形式(例如，片劑)的制備。5. 4. 2非腸道劑量形式非腸道劑量形式可通過各種途徑，包括皮下、靜脈內(nèi)(包括快速推注)、肌肉內(nèi)和 動(dòng)脈內(nèi)途徑，被施用到患者。因?yàn)榉悄c道劑型的給藥通常繞開患者對(duì)污染物的天然防御，因 此，非腸道劑型特別是無菌的或者能夠在對(duì)患者給藥前經(jīng)過滅菌的。非腸道劑型的例子包 括準(zhǔn)備用于注射的溶液，準(zhǔn)備被溶解或懸浮在藥學(xué)可接受的注射用介質(zhì)中的干燥產(chǎn)品，準(zhǔn) 備用于注射的懸浮液，以及乳液?？捎糜谔峁┍景l(fā)明的非腸道劑型的合適的介質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。例子包 括注射用水USP ；水性介質(zhì)諸如氯化鈉注射液，林格注射液，葡萄糖注射液，葡萄糖和氯化 鈉注射液，和乳酸化林格注射液；與水可混溶的介質(zhì)諸如乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非 水介質(zhì)諸如玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸芐基酯。5. 4. 3透皮、局部和粘膜劑量形式透皮、局部和粘膜劑量形式包括但不限于眼用溶液、噴劑、氣霧劑、霜?jiǎng)?、洗液?膏劑、凝膠、溶液、乳液、懸浮液液，或本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員已知的其他形式。參見例如 〈〈Remington，s 藥物學(xué)〉〉(第 18 版)(Remington，s Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990))；以及《藥物劑量形式導(dǎo)論》(第四版)(Introductionto Pharmaceutical Dosage Forms,4th ed. (Lea&Febiger, Philadelphia 1985))。透皮劑量 形式包括“儲(chǔ)庫類型”或“基質(zhì)類型”的貼片，其可以施加到皮膚上并佩戴特定的時(shí)段，以允 許所需量的活性成分穿透?？捎糜谔峁┩钙ぁ⒕植亢驼衬┝啃问降倪m合的賦形劑(例如載體和稀釋劑)和 其他物質(zhì)，對(duì)于制藥技術(shù)領(lǐng)域中的專業(yè)人員來說是熟知的，依賴于給定的藥物組合物或劑 量形式將要施加的具體組織的不同而異。依賴于待治療的具體組織，在用本發(fā)明的活性成分治療之前、同時(shí)或之后，可以使 用附加的成分。例如，滲透增強(qiáng)劑可用于幫助遞送活性成分到組織。藥物組合物或劑量形式、或藥物組合物或劑量形式將要施加到的組織的pH，也可 以被調(diào)整，以改進(jìn)一種或多種活性成分的遞送。同樣地，溶劑載體的極性、其離子強(qiáng)度或張 力可以被調(diào)整，以改進(jìn)遞送?；衔锢缬仓狨ヒ部杀惶砑拥剿幬锝M合物或劑量形式中， 以有利地改變一種或多種活性成分的親水性或親脂性，以便改進(jìn)遞送。就此而言，硬脂酸酯 可以用作劑型的液體介質(zhì)，用作乳化劑或表面活性劑，以及用作遞送增強(qiáng)劑或滲透增強(qiáng)劑。 可以使用不同形式的活性劑，來進(jìn)一步調(diào)整獲得的組合物的性質(zhì)。
6.實(shí)施例從下面的實(shí)施例可以理解本發(fā)明的特點(diǎn)，這些實(shí)施例不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。6. 1. (Ε/Ζ)土(4- ((1R, 2S, 3R) ~1, 2, 3,4~ 四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)-乙酮肟 的合成 將1-[4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基-丁基)_1Η_ 咪唑 _2_ 基]-乙酮(THI, 按照 Halweg，K. Μ.和 Biichi，G.，Τ. Org. Chem. 50 1134-1136 (1985)進(jìn)行制備)(350mg， 1. 52mmol)懸浮在水(IOml)中。加入鹽酸羥胺(126. 8mg, 1. 82mmol, 1. 2eq.)和乙酸鈉 (247. 3mg, 3. 04mmol,2eq.)，將懸浮液在50°C攪拌。在大約4小時(shí)后，反應(yīng)混合物變清。繼 續(xù)在50°C攪拌16小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始原料的消失。將反應(yīng)混合物冷 卻到室溫，并通過細(xì)孔濾器。該溶液直接用于通過使用制備性HPLC來純化產(chǎn)物=Atlantis HILIC硅膠柱30x100mm ；在6分鐘內(nèi)，2%-21%水，在乙腈中；45ml/min ；在254nm檢測(cè)。收 集產(chǎn)物級(jí)份，在減壓下蒸發(fā)乙腈。將水性溶液冷凍干燥，獲得了作為白色固體的產(chǎn)物，為反 式順式異構(gòu)體=大約3 1的混合物284mg(77% )。LCMS =Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 5 分鐘內(nèi) 0-17 % MeOH(0. 1 % TFA)，在 水(0. 1 % TFA)中；流速=3ml/min ；220nm檢測(cè)；保留時(shí)間0. 56min (順式異構(gòu)體， 246. 0(M+1))和 0. 69min (反式異構(gòu)體 246. 0(M+1))。1H NMR(D20 禾口 DCl) δ 2. 15 禾口 2. 22 (單 峰，3Η)，3. 5-3. 72 (m, 4H)，4. 76 (br, OH 質(zhì)子 H2O)，4. 95 和 4. 97 (單峰，1H)，7. 17 和 7. 25 (單 峰，1H). 13C NMR(D2O 和 DCl) δ 10. 80，16. 76,63. 06,64. 59,64. 75,70. 86,72. 75,72. 85， 117. 22，117. 64，135. 32，138. 39，141. 35，144. 12。6. 2. (E)土(4- ((1R, 2S, 3R) ~1, 2, 3,4~ 四羥基丁基)-IH-咪唑 基)-乙酮肟的 合成 向裝有THI (21. 20mmol,4. 88g)的燒瓶加入水(25ml)和 IN HCl 水溶液(21. 2ml， 21.2mm0l)。在所有固體溶解后，加入三芐基羥胺(25. 44mmol，7. OOg)在二惡烷(55ml)中 的溶液，反應(yīng)在50°C維持4小時(shí)。完成時(shí)，將反應(yīng)冷卻到室溫，通過加入IN NaOH水溶液將 溶液調(diào)整到PH= 7。然后將中和的溶液濃縮成塑性物質(zhì)，將它在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)行 純化[10% MeOH/1 % NH4OH(5重量％的水溶液)，在DCM中]，以提供作為透明塑性物的三 芐基醚。將塑性物質(zhì)用己烷處理并濃縮，提供了白色泡沫，可以在真空下干燥成鱗片狀固體(10. 00g，產(chǎn)率 97% )。向三芐基肟-醚(4. 8g, IOmmol)在二惡烷(90ml)中的劇烈攪拌的室溫溶液，加入 HCl在二惡烷中的溶液(4M，60ml)。幾分鐘后，觀察到了白色沉淀物，攪拌繼續(xù)進(jìn)行總共30 分鐘，然后在燒結(jié)玻璃濾器上過濾，用二惡烷和乙醚洗滌濾餅。將濾餅重新溶解在水(200m) 中，超聲5分鐘，然后冷卻到0°C，用硅藻土(5g)處理，在燒結(jié)玻璃濾器上過濾。將水溶液 濃縮至干，然后從甲醇(30ml)/乙醚(60ml)進(jìn)行分離，提供了作為分析純白色粉末的E-肟 (3. 8g，產(chǎn)率 80% )。6. 3. (E/Z)土(4- ((1R, 2S, 3R) -1, 2, 3,4-四羥基丁基)-IH-咪唑 基)乙酮 0-甲基肟的合成 標(biāo)題化合物按照上面實(shí)施例6. 1中的描述，通過使用鹽酸甲氧基胺代替鹽酸羥胺 進(jìn)行制備，產(chǎn)率74%。產(chǎn)物是白色蓬松固體。LCMS =Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 5 分鐘內(nèi) 0-17 % MeOH(0. 1 % TFA)，在 水(0. 1 % TFA)中；流速=3ml/min ；220nm檢測(cè)；保留時(shí)間1. 59分鐘(順式異構(gòu)體， 260. 1(M+D)和 1. 73min(反式異構(gòu)體，260. 1(M+1)) O1H NMR(D2O) δ 2. 18 和 2. 22(單峰，3Η)，
3.54-3. 60 (m, 1H)，3. 66-3. 79 (m, 3H)，3. 94 和 3. 95 (單峰，3H)，4. 76 (br, OH 質(zhì)子和 H2O)，
4.93 和 4. 97 (單峰，1H), 7. 17 和 7. 25 (單峰，1H)。13CWR (D2O) δ 11. 55，17. 56，62. 32，62. 38， 62. 99,63. 07,67. 09,71. 54,73. 86，119. 09，138. 64，139. 79，142. 95，144. 98，148. 97。6. 4. 1-(5~ 甲基-4-((lR,2S,3R)-l,2,3,4-四羥基丁基)_1Η_ 咪唑 基)乙酮 的合成 向4-甲基咪唑(3. OOg, 36. 54mmol)在甲苯(200ml)中的室溫溶液相繼加入三乙 胺(5. 6ml, 40. 20mmol)和 N，N- 二甲基氨基氨磺酰氯(3. 9ml, 36. 54mmol)。將容器在 5°C 冰箱保存48小時(shí)，然后將固體從反應(yīng)中濾出，將液體濃縮，以獲得4-甲基咪唑-1-二甲基 氨基磺酰胺的2. 5 1的區(qū)域異構(gòu)體混合物。將粗產(chǎn)品在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)行純化 (80-100%乙酸乙酯己烷洗脫液)，獲得了異構(gòu)體的5. 5 1的混合物(4.31g，產(chǎn)率62%) M+1 = 190. 1。向4-甲基咪唑-1-二甲基氨基磺酰胺(1. 99g，10. 54mmol)在四氫呋喃(70ml)中的_78°C溶液，緩慢加入n-BuLi在己烷中的溶液(2. 5M，11. 60ml)。在40分鐘后，向冷卻的 溶液中逐滴加入N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1. 30g, 12. 65mmol)。使反應(yīng)回溫至室溫并維 持2小時(shí)。完成時(shí)，通過加入飽和的NH4Cl水溶液(20ml)使反應(yīng)淬滅，然后用水(20ml)稀 釋。分層，將有機(jī)層用乙酸乙酯(2x30ml)洗滌。將合并的有機(jī)相用鹽水(20ml)洗滌，然后 在MgSO4I干燥并濃縮。將粗產(chǎn)品在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)行純化(60-80%乙酸乙酯己 烷洗脫液)，提供了作為油狀物的4-甲基-2-乙?；溥?1- 二甲基氨基磺酰胺(1. 85g， 產(chǎn)率 76% ) :M+1 = 232. 1。向咪唑4-甲基-2-乙?；溥?1-二甲基氨基磺酰胺(1.65g，7. 14mmol)在二氯 甲烷(45ml)中的溶液相繼加入三乙胺(1. OOml, 14. 28mmol)和三異丙基甲硅烷基三氟甲磺 酸酯(2. 12ml, 7. 86mmol)。將反應(yīng)在室溫維持20小時(shí)，然后通過加入飽和NaHCO3水溶液 (20ml)進(jìn)行淬滅。將混合物用水(20ml)稀 釋，分層。將水層用二氯甲烷(2x20ml)洗滌，將 合并的有機(jī)相用鹽水溶液(20ml)洗滌，然后在MgSO4I干燥和濃縮。得到的油狀物在硅膠 上通過急驟色譜進(jìn)行純化(1-2%甲醇二氯甲烷洗脫液)，提供了作為橙色油狀物的4-甲 基-2-(1-(三異丙基甲硅烷基氧基)乙烯基)-1_ 二甲基氨基磺酰胺(2.26g，產(chǎn)率83%) M+1 = 388. 2。向4-甲基-2-(1-(三異丙基甲硅烷基氧基)乙烯基)-1_ 二甲基氨基磺酰胺 (2. 26g,5. 84mmol)在四氫呋喃(40ml)中的-78 °C溶液，緩慢加入n_BuLi的己烷溶液 (2. 5M，3. 27ml)。30 分鐘后，將(_) _2，3_0_ 異丙叉-D-赤酮酸內(nèi)酯(1. 66g，10. 51mmol)在 四氫呋喃(IOml)中的溶液緩慢加入到_78°C溶液中。將反應(yīng)在_78°C維持2小時(shí)，然后使其 回溫至0°C，然后通過加入飽和的NH4Cl水溶液(20ml)使反應(yīng)淬滅。將混合物用水(IOml) 稀釋，分層。將有機(jī)相用乙酸乙酯(2x20ml)洗滌，將合并的有機(jī)相用鹽水(20ml)洗滌，然 后在MgSO4I干燥和濃縮。將粗產(chǎn)品在硅膠上純化(30-50%乙酸乙酯己烷洗脫液)，提 供了 2.69g(產(chǎn)率85% )作為白色泡沫的5-((3aR，6aR)-4-羥基-2，2-二甲基四氫呋喃并 [3，4-d][l，3] 二氧戊烯-4-基)-N，N，4-三甲基-2-(1-(三異丙基甲硅烷基氧基)乙烯 基)-IH-咪唑-1-磺酰胺:M+1 = 546. 4。向5-((3池，6池)-4-羥基_2，2-二甲基四氫呋喃并[3，4_d][l，3] 二氧戊 烯-4-基)-N，N，4-三甲基-2-(1-(三異丙基甲硅烷基氧基)乙烯基)-IH-咪唑-1-磺 酰胺(2. 09g,3. 83mmol)在乙醇(70ml)中的0°C溶液，分幾部分加入顆粒狀NaBH4(1. 4g， 38.32mmol)。2小時(shí)后，將反應(yīng)回溫至室溫，放置30分鐘，然后濃縮。將殘余物重新溶解在 水(40ml)和乙酸乙酯(40ml)中。將兩相混合物劇烈攪拌10分鐘，然后分層。將水層用 乙酸乙酯(2x40ml)洗滌，將合并的有機(jī)相用鹽水(30ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥并濃 縮。將粗的泡沫狀物在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)行純化(5%甲醇二氯甲烷洗脫液)，提供 T 5-((R)-羥基((45，5幻-5-(羥基甲基)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)甲基)_N， N，4-三甲基-2-(1-(三異丙基甲硅烷基氧基)乙烯基)-IH-咪唑-1-磺酰胺(1.88g，產(chǎn)率 90% )，作為在芐基位置處不可分離的非對(duì)映異構(gòu)體的3 1的混合物M+1 = 547. 4。將氟化銫(315mg,2.08mmol)加入到 5_((R)_ 羥基((4S，5R)_5_(羥基甲基)_2， 2- 二甲基-1，3- 二氧戊環(huán)-4-基)甲基)-N，N, 4-三甲基-2- (1-(三異丙基甲硅烷基氧基) 乙烯基)-IH-咪唑-1-磺酰胺(567mg，L(Mmmol)在乙醇(IOml)中的溶液中，回溫至65°C。 1小時(shí)后，將反應(yīng)冷卻到室溫，用飽和的NH4Cl水溶液(Iml)處理，然后濃縮。將粗產(chǎn)品在硅膠上通過急驟色譜進(jìn)行純化(5%甲醇二氯甲烷洗脫液)，以提供作為白色泡沫狀物的 2-乙酰基-5- ((R)-羥基((4S，5R) -5-(羥基甲基)-2，2- 二甲基-1，3- 二氧戊環(huán)_4_基) 甲基)-N，N，4三甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(380mg，產(chǎn)率94% ) :M+1 = 392. 1。將2-乙?；?5-((R)_ 羥基((4S，5R)-5-(羥基甲基)-2，2_ 二甲基-1，3-二氧 戊環(huán)-4-基)甲基)_N，N，4-三甲基-1H-咪唑-1-磺酰胺(380mg，0. 97mmol)溶解在丙酮 (6ml)中，相繼用水(6ml)和濃HC1水溶液(3ml)處理。將容器回溫至40°C歷時(shí)45分鐘， 然后冷卻到室溫并濃縮。將粗物質(zhì)通過反相制備色譜進(jìn)行純化，使用150mmX30mm Zorbax C-6柱，使用未緩 沖的溶劑，通過下述方法進(jìn)行乙腈水等濃度運(yùn)行5分鐘(Tk = 1. 52 分鐘)。冷凍干燥后，獲得了作為二甲基氨基氨基磺酸鹽無定形固體的標(biāo)題產(chǎn)物M+1 = 245. 1 ；1H NMR (400MHz, CDC13)主要 S 5. 04 (d，1H)，3. 62 (comp. m，2H)，3. 42 (comp. m，2H)， 2. 62 (s,6H)，2. 43 (s, 3H)，2. 21 (s，3H)；次要 8 5. 01 (d, 1H)，3. 79 (comp. m, 2H)，3. 55 (comp. m, 2H)，2. 62 (s,6H)，2. 43 (s, 3H)，2. 21 (s，3H)。6. 5. (1R, 2S, 3R) ~l-(2-(l~ 亞肼基乙基)-1H~ 咪唑 土基)丁烷-1, 2, 3,4-四醇 的合成 將1-[4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基-丁基)_1H_ 咪唑 _2_ 基]-乙酮(THI， 按照 Halweg，K.M.和 Biichi，G.，T. Org. Chem. 50 1134-1136 (1985)進(jìn)行制備)(148mg， 0. 64mmol)懸浮在甲醇(3ml)和水(lml)中。加入水合胼(35mg,0. 7mmol, 1. 2eq.)和乙酸 (一滴)，將懸浮液在50°C攪拌6小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料的消失。將 反應(yīng)混合物冷卻到室溫，用四氫呋喃稀釋。收集獲得的白色沉淀物，用四氫呋喃洗滌，獲得 了作為白色固體的產(chǎn)物，E Z異構(gòu)體大約3 1的混合物90mg(58% )。LCMS Zorbax C-8 柱，4. 6x150mm ；在 6 分鐘內(nèi) 10-90% 在水中(10mM 乙酸銨)；流 速=2ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間0. 576min (順式異構(gòu)體，245. 0 (M+1))和 1.08min (反 式異構(gòu)體，245. 0(M+1))。NMR(DMS0-d6) S 2. 5 (單峰，3H 在 DMS0 下)，3. 4-3. 7 (m，4H)， 4. 3 (m, 2H)，4. 6 (m, 2H)，4. 8 (m, 1H)，4. 9 和 5. 0 (雙峰，1H)，7. 04 和 7. 21 (單峰，1H)。6. 6. N' -(l-(4-((lR,2S,3R)-l,2,3,4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙叉) 乙酰肼的合成 將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H-咪唑 _2_ 基]-乙酮(160mg， 0. 70mmol)懸浮在甲醇(3ml)和水(lml)中。加入乙酸胼(56mg，0. 75mmol, 1. 2eq.)和鹽酸 (一滴，12M)，然后將懸浮液在50°C攪拌48小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料的 消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，用四氫呋喃稀釋。收集獲得的白色沉淀物，用四氫呋喃洗 滌，獲得了作為白色固體的產(chǎn)物，E Z異構(gòu)體大約3 1的混合物129mg(65%)。LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 2-20%在水中(10mM 乙酸銨)；流 速=3. 5ml/min ；220nm檢測(cè)；保留時(shí)間0. 53min(287. 1 (M+1))。咕匪R(DMS0_d6) S 2. 2 (單 峰，3H)，2. 5 (單峰，3H 在 DMS0 下)，3. 4-3. 7 (m, 4H)，4. 3 (br, 2H)，4. 6-5. 0 (br, 4H)，7. 0 (br, 1H)，10. 30 和 10. 37 (單峰，1H)。6. 7. (E)-4-甲基-N ‘ -(1~(4~((1R, 2S, 3R)~1, 2, 3,4~ 四羥基丁基)_1H_ 咪 唑-2-基)乙叉)苯磺酰肼的合成將1-[4-((1札25，31 )-1，2，3，4-四羥基-丁基)-111-咪唑-2-基]-乙酮(153mg， 0. 67mmol)懸浮在甲醇(3ml)和水(lml)中。加入對(duì)甲苯磺酰胼(140mg，0. 75mmol, 1. 2eq.) 和鹽酸(一滴，12抝，將懸浮液在50°C攪拌24小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料 的消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，干燥裝載在硅膠上。在硅膠上的急驟色譜(10g Si02， 4 1的乙酸乙酯甲醇)產(chǎn)生了作為白色固體的產(chǎn)物，E Z異構(gòu)體大約85 15的混合 物:142mg(53% )。LCMS :Sunfire C-18 柱，4.6x50mm;在 2. 5 分鐘內(nèi) 10-90 % 在水中(10mM 乙酸銨)；流速=3. 5ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間() 50min (399. 2 (M+1))和 0. 66min(399. 3(M+1))。NMR (甲醇 _d4) S 2. 2 (單峰，3H)，2. 41 和 2. 45 (單峰，3H)， 3. 6-3. 85 (m, 4H)，4. 99 和 5. 05 (單峰，1H)，7. 09 (br s，1H)，7. 39 (d, 2H, j = 8Hz)，7. 77 和 7. 87(d，2H，j = 8Hz)。6. 8. N' -(l-(4-((lR,2S,3R)-l,2,3,4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙叉)
苯甲酰肼的合成
將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H-咪唑 _2_ 基]-乙酮(150mg， 0. 65mmol)懸浮在甲醇(3ml)和水(lml)中。加入苯甲酸胼(102mg,0. 75mmol, 1. 2eq.)和 鹽酸(一滴，12N)，將懸浮液在50°C攪拌18小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料的 消失。將均勻的反應(yīng)混合物冷卻到室溫，真空濃縮。C-18反相SPE(10g AlltechHi-load C18，從水到20%甲醇/水的梯度)，產(chǎn)生了作為無色固體的產(chǎn)物，E Z異構(gòu)體大約1 1 的混合物:193mg(85% )0LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 10-90 % 在水中(10mM 乙酸 銨)；流速=3. 5ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間0. 49min (349. 2 (M+l))。NMR(甲醇 _d4) S 2. 2(單峰，3H)，2. 42 和 2. 45 (單峰，3H)，3. 6-3. 85 (m, 4H), 5. 11 和 5. 14(單峰，1H)， 7. 30 (br s，1H)，7. 40-7. 7 (m, 4H)，7. 80 和 7. 95 (m, 2H), 8. 1 (br s, 1H)。6. 9. (E) -2- (1- (4- ((1R, 2S, 3R) -1, 2, 3,4-四羥基丁基)-1H~ 咪唑-2-基)乙叉) 肼甲酸乙酯的合成將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H-咪唑 _2_ 基]-乙酮(150mg， 0. 65mmol)懸浮在甲醇(3ml)和水(lml)中。加入胼基甲酸乙酯(78mg,0. 75mmol, 1. 2eq.) 和鹽酸(一滴，12N)，將懸浮液在50°C攪拌18小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料 的消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，真空濃縮，并用丙酮稀釋。收集獲得的白色沉淀物，用 丙酮洗滌，產(chǎn)生了作為白色固體的含有一種明顯異構(gòu)體的產(chǎn)物96mg(47% )。LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 2-20%在水中(10mM 乙酸銨)； 流速=3. 5ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間0. 25min(317. 35(M+1))。NMR(甲醇 _d4) 8 1. 36 (t, 3H, j = 8Hz)，2. 28 (s, 3H)，2. 42 和 2. 45 (單峰，3H)，3. 60-3. 85 (m, 4H)，4. 34 (dd, 2H, j = 8Hz)，5. 08 (s, 1H)，7. 27 (s, 1H)。 6. 10. (E)-N' -(l-(4-((lR,2S,3R)-l,2,3,4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙 叉)煙酰肼的合成 將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H_ 咪唑 _2_ 基]-乙酮(215mg， 0. 93mmol)懸浮在甲醇(3ml)和水(lml)中。加入煙酸胼(137mg，1. Ommol，1. leq.)和鹽 酸(一滴，12抝，將懸浮液在50°C攪拌18小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料的消 失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，在真空中部分濃縮。收集獲得的白色沉淀物，用水洗滌，產(chǎn) 生了作為白色固體的含有一種明顯異構(gòu)體的產(chǎn)物311mg(95% )。LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 10-90 % 在水中(10mM 乙酸 銨)；流速=3. 5ml/min ;220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間 0. 22min(350. 27(M+1))。NMR(DMS0_d6) 8 2. 37 (s，3H)，3. 60-3. 85(m，4H)，4. 40(m，2H)，4. 71 (m, 1H)，5. 01 (m，2H)，5. 16 (m, 1H)， 7. 25 (br, 1H)，7. 64 (br, 1H) 8. 35 (br, 1H) 8. 80 (br, 1H) 9. 14 (br, 1H)。6. 11. 3-氯-N' ~(l-(4-((llR,2S,3R)-l,2,3,4-四羥基丁基)_1H_ 咪唑-2-基) 乙叉)苯甲酰肼的合成 將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H-咪唑 _2_ 基]-乙酮(194mg， 0. 84mmol)懸浮在乙醇(4ml)和水(lml)中。加入3-氯苯甲酸胼(170mg，1. Ommol，1. 2eq.) 和鹽酸(一滴，12M)，將懸浮液在50°C攪拌48小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料 的消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，在真空中部分濃縮。收集獲得的白色沉淀物，用乙醇洗 滌，產(chǎn)生了作為白色固體的E Z大約3 1的產(chǎn)物108mg(33% )。LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 10-90%在水中(10mM 乙酸銨)； 流速=3. 5ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間0. 63min (383. 23 (M+l))。NMR (甲醇 _d4) 8 2. 44 (s, 3H)，3. 60-3. 90 (m, 4H)，5. 12 (s, 1H)，7. 29 (s, 1H)，7. 65 (m, 2H)，8. 04 (m, 2H)。6. 12. (E) -4-氟-N ‘ - (1~ (4~ ((1R, 2S, 3R) ~1, 2, 3,4~ 四羥基丁基)_1H_ 咪唑-2-基)乙叉)苯甲酰肼的合成
將1-[4-((1札25，31 )-1，2，3，4-四羥基-丁基)-111-咪唑-2-基]-乙酮(172mg， 0. 74mmol)懸浮在乙醇(4ml)和水(lml)中。加入4-氟苯甲酸胼(131mg，0. 85mmol, 1. leq.) 和鹽酸(一滴，12抝，將懸浮液在55°C攪拌48小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料 的消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，在真空中部分濃縮。收集獲得的白色沉淀物，用乙醇洗 滌，產(chǎn)生了作為白色固體的一種明顯異構(gòu)體的產(chǎn)物97mg(35% )。LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 10-90%在水中(10mM 乙酸銨)； 流速=3. 5ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間() 55min(367. 24(M+1))。NMR(甲醇 _d4，一滴 DC1) 8 2. 55 (s, 3H)，3. 60-3. 90 (m, 4H)，5. 22 (s, 1H)，7. 30 (m, 2H)，7. 54 (s, 1H)，8. 08 (m, 2H)。6. 13. (E) -6-氨基-N ' - (1~ (4~ ((1R, 2S, 3R) ~1, 2, 3, 4~ 四羥基丁基)_1H_ 咪 唑-2-基)乙叉)煙酰肼的合成將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H-咪唑 _2_ 基]-乙酮(115mg， 0. 50mmol)懸浮在乙醇(4ml)和水(lml)中。加入被取代的胼(91mg,0. 6mmol, 1. 2eq.)和 鹽酸(一滴，12N)，將懸浮液在55°C攪拌48小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料的 消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，在真空中部分濃縮。收集獲得的白色沉淀物，用乙醇洗滌， 產(chǎn)生了作為白色固體的一種明顯異構(gòu)體的產(chǎn)物136mg(75% )。LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 10-90%在水中(10mM 乙酸銨)； 流速=3. 5ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間0. 15min(365. 32(M+1))。NMR(甲醇 _d4，一滴 DC1) 8 2. 58 (s, 3H)，3. 60-3. 90 (m, 4H)，5. 22 (s, 1H)，7. 17 (m, 1H)，7. 54 (m, 1H)，8. 44 (m, 1H)， 8. 68 (m, 1H)。6. 14. (E)-N' -(l-(4-((lR,2S,3R)-l,2,3,4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙 叉)異煙酰肼的合成 將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H-咪唑 _2_ 基]-乙酮(315mg， 1. 36mmol)和聯(lián)苯基-3-甲酰胼(360mg, 1. 81mmol)懸浮在DMS0(2ml)中，加入濃鹽酸(兩 滴)，將懸浮液在40°C攪拌5小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料的消失。將反應(yīng) 混合物冷卻到室溫，用甲醇稀釋，通過反相HPLC純化(10mM NH40Ac/乙腈)。分別收集所需 物質(zhì)的兩個(gè)級(jí)份(E和Z異構(gòu)體)并冷凍干燥。級(jí)份一為白色固體，95mg(16%)。級(jí)份二為 白色固體，82mg(14% )。級(jí)份一分析型HPLC Zorbax C_8 柱，4. 6x150mm ；溶劑 A = 10mM 乙酸銨，溶劑 B =MeCN ；0分鐘時(shí)5% B，1分鐘時(shí)5%，3分鐘時(shí)90% B，4分鐘時(shí)停止；流速=3ml/min ； 220nm檢測(cè)；保留時(shí)間2. 9min(注意含有 5 %的另一種異構(gòu)體)。M+H = 425. 28。
NMR(DMS0-d6,力口 2 滴 D20) S 2. 3 (單峰，3H)，3. 3-3. 7 (m, 4H)，4. 9 (m, 1H)，7. 19 (s, 1H)， 7. 37 (m, 1H) 7. 47 (m, 2H)，7. 67 (m, 3H)，7. 85-7. 92 (m, 2H)和 8. 15 (s，1H)。同樣樣品的 HSQC
30 將1-[4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基-丁基)-1H-咪唑 _2_ 基]-乙酮(168mg， 0. 73mmol)懸浮在乙醇(4ml)和水(lml)中。加入異煙酰胼(llOmg，0. 80mmol，1. leq.)和 鹽酸(一滴，12N)，將懸浮液在55°C攪拌24小時(shí)。LCMS分析表明產(chǎn)物的形成和起始材料的 消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，在真空中部分濃縮。收集獲得的白色沉淀物，用乙醇洗滌， 產(chǎn)生了作為白色固體的一種明顯異構(gòu)體的產(chǎn)物136mg(75% )。LCMS :Sunfire C-18 柱，4. 6x50mm ；在 2. 5 分鐘內(nèi) 10-90%在水中(10mM 乙酸銨)； 流速=3. 5ml/min ；220nm 檢測(cè)；保留時(shí)間0. 15min(365. 32(M+1))。NMR(甲醇 _d4，一 滴 DC1) 8 2. 63 (s, 3H)，3. 60-3. 90 (m, 4H)，5. 12 (s, 1H)，7. 58 (s, 1H)，8. 63 (d, 2H, j = 8Hz)， 9. 14(d，2H，j = 8Hz)。6. 15. (E)-N' -(l-(4-((lR,2S,3R)-l,2,3,4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙 叉)聯(lián)苯基-3-甲酰肼的合成
校正了 2. 3處(CH3)的質(zhì)子信號(hào)與20ppm處的碳信號(hào)。級(jí)份二分析型 HPLC Zorbax C_8 柱，4. 6x150mm ；溶劑 A = 10mM 乙酸銨；溶劑 B =MeCN ；0分鐘時(shí)5% B，1分鐘時(shí)5%，3分鐘時(shí)90% B，4分鐘時(shí)停止；流速=3ml/min ； 220nm檢測(cè)；保留時(shí)間2. 963min(注意含有 6%另一種異構(gòu)體)。M+H = 425. 28。 NMR(DMS0-d6 加 2 滴 D20) 8 2. 4(單峰，3H)，3. 4-3. 6 (m, 4H)，4. 77 和 4. 86 (寬的單峰，合并= 1H)，6. 9 和 7. 1 (寬的單峰，合并=1H)，7. 40 (m, 1H) 7. 50 (m, 2H)，7. 61 (m, 1H)，7. 73 (m, 2H)， 7. 87 (m, 2H)和8. 10(s，lH)。同樣樣品的HSQC校正了 2. 4處(CH3)的質(zhì)子信號(hào)與13ppm處 的碳信號(hào)。6. 16. N-羥基-4- ((1R, 2S, 3R) , 2, 3,4_ 四羥基丁基)-1H-咪唑-2-甲酰胺的合 成 將1-[4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基-丁基)_1H_ 咪唑 _2_ 基]-乙酮(18g， 78. 3mmol)懸浮在二氯乙烷(160ml)和2，2-二甲氧基丙烷(160ml)中。加入4-甲苯磺酸 (3g)，將混合物在70°C攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)用二氯甲烷稀釋，用水、5%碳酸氫鹽、鹽水洗 滌，然后干燥上樣到Si02。通過急驟色譜(己烷/乙酸乙酯)純化獲得了作為無色油狀物的 l-(4-((4S,4' R，5R)-2，2，2' ,2'-四甲基-4，4'-雙(1，3-二氧戊環(huán))-5-基)-1H-咪 唑-2-基)乙酮(18. 8g，60. 6mmol,77% ；M+H 計(jì)算值311. 4，觀察值311. 3)。將上面獲得的產(chǎn)物(20g，64.5mmol)溶解在 DMF 中。力口入 K2C03(12. 5g，90. 3mmol), 然后加入溴芐(10. 7ml, 90. 3mmol)。將反應(yīng)在50°C加熱18小時(shí)。LC/MS分析表明仍殘留起 始材料。加入另一部分溴芐(5ml，42mmol)，將溫度升高到60°C。3小時(shí)后，用冷水將反應(yīng) 淬滅，用乙酸乙酯提取。將有機(jī)提取物用水、然后用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥，裝載于硅膠 上。急驟色譜(20到40%乙酸乙酯在己烷中)產(chǎn)生了 1-(1_芐基-4-((4S，4' R，5R)-2， 2,2’ ,2'-四甲基-4，4'-雙(1，3_ 二氧戊環(huán))-5_ 基)-lH-咪唑-2-基)乙酮(16. lg， 62% )。將獲得的中間體(13g，32. 5mmol)溶解在二惡烷(120ml)中，用溶解在商業(yè)化漂白 劑(200ml,6% NaOCl)中的Na0H(13. 2g)處理。在劇烈攪拌2小時(shí)后，用乙酸乙酯提取反 應(yīng)。將有機(jī)提取物用鹽水洗滌，然后在硅藻土上干燥。過濾和蒸發(fā)獲得了固體，在真空中進(jìn) 一步干燥，產(chǎn)生了 1-苯基-4_((4S，4' R，5R)-2，2，2' ,2'-四甲基-4，4'-雙(1，3_ 二 氧戊環(huán))-5-基)-1H-咪唑-2-甲酸(13g，定量產(chǎn)率；M+H計(jì)算值403. 2，觀測(cè)值403. 2)。將上面獲得的產(chǎn)物(600mg，1.49mmol)、0-三芐基羥胺(820mg，2. 98mmol)、 EDAC(430mg,2. 24mmol)和 HOBt (305mg，2. 24mmol)與 DMF (8ml)和三乙胺(622 yl， 4. 47mmol)混合。將反應(yīng)在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，濃縮，然后使用DCM/MeOH裝載在硅膠上。急驟色譜(MeOH/DCM)產(chǎn)生了 1-芐基-4-((4S，4' R，5R)_2，2，2' ,2'-四甲基-4，4'-雙(1， 3- 二氧戊環(huán))-5-基)-N-(三苯甲基氧基)-1H-咪唑-2-甲酰胺(480mg，0. 73mmol,49%， M+H計(jì)算值660. 3，觀測(cè)值660. 4)。將上面獲得的產(chǎn)物(480mg，0. 73mmol)溶解在乙醇(50ml)中。力卩入 Pd(0H)2(500mg，20%在碳上，濕的)，將反應(yīng)在吐(65口&)下攪拌18小時(shí)，并過濾。真空 移除乙醇。將殘留物溶解在DCM中，通過急驟色譜(MeOH/DCM)進(jìn)行純化，產(chǎn)生了 N-羥 基-4-((4S，4' R，5R)-2，2，2' ,2'-四甲基-4，4'-雙(1，3-二氧戊環(huán))-5-基)-1H-咪 唑-2-甲酰胺(150mg，0. 46mmol，63%，M+H 計(jì)算值328. 1，觀測(cè)值328. 3)。將上面獲得的產(chǎn)物(150mg，0. 46mmol)溶解在丙酮(8ml)和水(8ml)中。使用干冰 /丙酮浴將反應(yīng)冷卻到內(nèi)部溫度-15°C。加入濃鹽酸(3ml)，其添加速度使得內(nèi)部溫度保持 低于-10°C。移除冷浴，將反應(yīng)在環(huán)境溫度下攪拌3小時(shí)，在4°C攪拌18小時(shí)，然后再在環(huán) 境溫度下攪拌7小時(shí)。在真空中除去丙酮和一些水后，形成了沉淀物。加入二惡烷(20ml)， 然后加入THF(lOml)。通過過濾分離固體，用THF/二惡烷洗滌，在真空中干燥，產(chǎn)生了作為 鹽酸鹽的^羥基-4-((1札25，310-1，2，3，4-四羥基丁基)-1H-咪唑-2-甲酰胺(98mg， 0. 40mmol,87% )。質(zhì)譜:M+H計(jì)算值248. 1，觀測(cè)值248. 2。分析型 HPLC :LunaPheny_Hexyl，5um， 4. 6x50mm，等比例10mM乙酸銨，含乙腈，流速=3ml/min，220nm檢測(cè)，保留時(shí)間= 0. 2451111110^ 匪R(DMS0-d6) 8 3. 37-3. 64(m，4H)，4. 96 (寬的單峰，1H) ,7. 47 (s, 1H)，11. 9 (寬 的單峰，1H)。6. 17.測(cè)量在小鼠中對(duì)淋巴細(xì)胞的效應(yīng)化合物通過口部管飼法或在飲用水中進(jìn)行給藥。對(duì)于口服給藥實(shí)驗(yàn)來說，將化合 物從結(jié)晶以10mg/ml的濃度重新懸浮在介質(zhì)(例如水)中。小鼠(129/B6株系的F1雜交 體)被管飼單劑100mg/kg的化合物(對(duì)于每種化合物來說，相當(dāng)于lOOmpk游離堿)或只 含介質(zhì)的對(duì)照，然后放回籠子。給藥后18小時(shí)，將小鼠用異氟烷麻醉，收集組織用于下面描 述的分析。對(duì)于飲用水研究來說，將化合物以50mg/L的濃度溶解在含有10g/L葡萄糖的酸 化水(pH = 2.8)中。允許小鼠自由攝取含有化合物的水(或作為對(duì)照的葡萄糖溶液)歷 時(shí)72小時(shí)。在72小時(shí)結(jié)束時(shí)，收集組織用于分析。CBC測(cè)量如下獲得。將小鼠用異氟烷麻醉，從眼球后血管叢收集血液到EDTA 血液收集管(Capiject-MQK，Terumo Medical Corp.，Elkton, MD)中。使用 Cell-Dyn 3500(Abbott Diagnostics, Abbott Park, IL)或 HemaVet 850(Drew Scientific, Inc., Oxford, CT)儀器進(jìn)行自動(dòng)CBC分析。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)測(cè)量如下獲得。將25iU全血通過低滲休克進(jìn)行裂解，在2ml FACS 洗滌緩沖液(FWB :PBS/0. 1 % BSA/0. 1% NaN3/2mM EDTA)中洗滌一次，在 4°C下、在暗 處，用在50 yl FWB中稀釋的熒光染料結(jié)合型抗體的組合染色30分鐘。染色后，將細(xì)胞用 2ml FWB洗滌一次，重新懸浮在300 u 1 FWB中用于捕獲。按照標(biāo)準(zhǔn)步驟非無菌移除脾臟和胸腺。通過迫使所述組織通過70 y m細(xì)胞濾器 (Falcon, Becton Dickinson Labware，Bedford，MA)，將器官分散成單細(xì)胞懸浮液。對(duì)于 FACS分析來說，將RBC通過低滲裂解進(jìn)行裂解，洗滌，將1 X 106個(gè)細(xì)胞與10 yl抗⑶16/ CD32 抗體(FcBlock , BD-PharMingen, San Diego, CA)(在 FWC 中 1/10 稀釋)在 4°C溫育 15分鐘。將在50-100 ill FWB中稀釋的熒光染料結(jié)合型抗體的組合直接加入到Fc Block中的 細(xì)胞中，將細(xì)胞在4°C下、在暗處染色30分鐘。染色后，將細(xì)胞用1ml FWB洗滌1次，重新懸 浮在300iU FWB中用于捕獲。除非特別指明，否則所有抗體從BD-PharMinger^SanDiego， CA購買。樣品使用FACSCalibur流式細(xì)胞儀和CellQuest Pro軟件(Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA)進(jìn)行分析。用于胸腺的抗體混合物是TCRb APC Cy7 ；CD4APC ；CD8PerCP ；CD69FITC 和 CD62L Pel。用于脾臟和血液的抗體混合物是:B220PerCP ；TCRb APC ；CD4APC Cy7 ；CD8PE Cy7 ； CD69FITC和 CD62LPE。 6. 18.測(cè)量在小鼠中對(duì)S1P水平的影響小鼠(129/B6株系的F1雜交體)脾臟中S1P的水平，使用修改過的在Murata， N.等,Anal.Biochem. 282 115-120 (2000)中描述的放射受體結(jié)合分析方法進(jìn)行測(cè)量。該方 法利用了過表達(dá)Edg-1 ( 一種S1P受體亞型)的HEK293F細(xì)胞，基于標(biāo)記的S1P與給定樣品 中未標(biāo)記的S1P的競(jìng)爭(zhēng)。將HEK293F細(xì)胞用pEFneo SIP受體(Edg-1)表達(dá)載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染，篩選G418抗性 細(xì)胞克隆。將表達(dá)Edg-1的HEK293F細(xì)胞，在12孔多孔板上，在含有5% (v/v)FBS的DMEM 中，在潮濕空氣C02(19 1)氣氛中進(jìn)行培養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)，將培養(yǎng)基更換成新鮮的含 有 0. 1 % (w/v) BSA 的 DMEM (不含血清)。在給藥供試化合物18小時(shí)后，將小鼠處死，取出它們的脾臟并冷凍。使用已知的 方法從冷凍組織獲得S1P。參見例如Yatomi，Y.等，F(xiàn)EBSLett. 404 173-174 (1997)。具體 來說，將10個(gè)小鼠脾臟在1ml冰冷的、含有ImM EGTAUmM DTT和Roche完全蛋白酶抑制 劑的50mM磷酸緩沖液(pH7.5)中，在冰上勻漿三次，時(shí)間間隔為1分鐘。將獲得的物質(zhì)在 2500rpm和4°C離心10分鐘，以移除細(xì)胞碎片。然后將上清液在45000rpm和4°C下，在70Ti 轉(zhuǎn)頭中超速離心1小時(shí)，以獲取膜結(jié)合蛋白。將上清液丟棄，將沉淀重新懸浮在最小體積 ( 1ml)的冰冷的、含有ImM EGTAUmM DTT和33%甘油以及Roche完全蛋白酶抑制劑的 50mM磷酸緩沖液(pH7.5)中。使用Bradford分析方法測(cè)量總蛋白濃度。將S1P在氯仿/KCl/NH40H(pH 12)中提取，保留上層水相。然后在氯仿/甲醇 /HCl(pH< 1)中提取，保留下層有機(jī)相，并蒸發(fā)以提供S1P，將它儲(chǔ)存在冰箱中直到使用。 臨到分析之前，通過超聲將干燥的樣品溶解在含有20mM Tris-HCl (pH7. 5) UOOmM NaCl、 15mMNaF和0. 4% (w/v)BSA的結(jié)合緩沖液中。樣品的SIP含量通過放射受體結(jié)合分析方法，根據(jù)[33P]S1P與樣品中的S1P在 表達(dá)Edg-1的細(xì)胞上的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，來進(jìn)行測(cè)量。將鋪滿的12孔多孔板中的表達(dá)Edg-1 的HEK293F細(xì)胞，用冰冷的結(jié)合緩沖液洗滌兩次，然后與含有l(wèi)nM[33P]S1P(大約每孔 18, OOdpm)和增加劑量的真實(shí)SIP或供試樣品的同樣的緩沖液，在終體積0. 4ml中溫育。 將板在冰上保持30分鐘，將細(xì)胞用同樣的冰冷的結(jié)合緩沖液洗滌兩次，以除去未結(jié)合的配 體。將細(xì)胞用含有0. 1% SDS、0. 4% NaOH和2% Na2C03的溶液增溶，通過液體閃爍計(jì)數(shù)器 對(duì)放射活性進(jìn)行計(jì)數(shù)。供試孔中的S1P含量通過從標(biāo)準(zhǔn)位移曲線外推來進(jìn)行估算。初始供 試樣品中的S1P的含量通過用從標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得的值乘以S1P提取回收效率和稀釋倍數(shù)來計(jì) 笪弁。6. 19.大鼠的由佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎樽型
在使用Lewis大鼠的由佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(AA)模型中，評(píng)估了 S1P裂解酶抑制劑 (“化合物”)與甲氨蝶呤(“MTX”)的組合的效應(yīng)。由佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎(RA)，一種由自體免疫過程和炎性過程引起的關(guān)節(jié)疾病的被廣泛使用的大鼠模型。在大 多數(shù)發(fā)表的研究中，單獨(dú)的MTX治療，當(dāng)在治療背景、即在已建立的疾病狀態(tài)中使用時(shí)，在 該模型中是無效的。為了引發(fā)關(guān)節(jié)炎，將大鼠在尾根處皮內(nèi)注射在60iU不完全Freund’ s佐劑中的 600 iig結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)。通過臨床計(jì)分和使用發(fā)炎容積測(cè) MiX (Plethysmometer) (7140 M，UgoBasile North America, Schwenksville, PA, USA) IlJ 量爪的體積，監(jiān)測(cè)動(dòng)物的關(guān)節(jié)炎征兆。將兩只后爪的值取平均數(shù)，通過從后來測(cè)量的值中減 去第一次測(cè)量的基線值，計(jì)算出腫脹的程度。疾病嚴(yán)重性分值被用于評(píng)估炎癥的嚴(yán)重性， 使用了廣泛使用的0到4的目測(cè)計(jì)分方法，其中0 =正常，沒有明顯的紅斑和腫脹；1 =紅 斑和輕度腫脹，局限于足中段或踝關(guān)節(jié)或單個(gè)腳趾；2 =紅斑和輕度腫脹，擴(kuò)展到踝部和足 中段，或超過一個(gè)腳趾腫脹；3 =紅斑和中度腫脹，從踝部擴(kuò)展到跖關(guān)節(jié)；以及4 =紅斑和 嚴(yán)重腫脹，包括踝、足和腳趾。對(duì)于每只動(dòng)物，為兩只后爪記錄每個(gè)分值，作為臨床分值的 總和。對(duì)大鼠每天一次口服給藥化合物(30mg/kg)、MTX(0. 2mg/kg)、化合物的組合或介質(zhì) (0. lxPBSpH 7. 2)。每個(gè)處理組使用10只大鼠?；衔镌?0%的動(dòng)物表現(xiàn)出疾病癥狀后給 藥，這在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)應(yīng)于觀察到半數(shù)的最大平均爪腫脹和臨床分值時(shí)的天數(shù)。如圖1中所示，用化合物和MTX的組合治療，明顯比單獨(dú)使用化合物或MTX的治療 更有效。6. 20.移植模型在移植模型中評(píng)估了 S1P裂解酶抑制劑(“化合物”)與環(huán)孢菌素A( “CyA”)的 組合的效應(yīng)，在移植模型中，來自Balb/C小鼠的尾部皮膚被移植到C57Bl/6xl29Fl受體的背上。移植物和移植床，通過使用#10解剖刀片分別從麻醉的供體和受體的腹側(cè)尾部和 背部移除大約1cm2的全厚度皮膚來獲得。將來自性別匹配的供體小鼠的移出物放置在受 體的準(zhǔn)備好的移植床上，將移植床用雙倍厚度的凡士林紗布覆蓋，然后用石膏繃帶覆蓋。在 第8天移除繃帶后，每日通過目測(cè)檢查監(jiān)測(cè)移植物，當(dāng)超過90%壞死時(shí)，認(rèn)為被排斥了。試 驗(yàn)了單獨(dú)的化合物或與環(huán)孢菌素的組合。將每種化合物(單獨(dú)地)和組合溶解在無菌的 95 5的水乙醇混合物(載體)中。在移植前3天開始每日口服給藥一次，在整個(gè)實(shí)驗(yàn) 過程中繼續(xù)每日給藥一次。如圖2A中所示，單獨(dú)給藥環(huán)孢菌素在5mg/kg劑量下不能延遲移植物排斥，但是 與100mg/kg化合物共同給藥，導(dǎo)致了移植物排斥時(shí)間的明顯增加(從10. 5士0.5天到 13士0. 5天)。圖2B顯示了共同給藥對(duì)移植物存活超過10天的小鼠的數(shù)量的影響。上面提到的所有的參考文獻(xiàn)(例如專利和專利申請(qǐng))在此以其全文引為參考。
權(quán)利要求
治療、處置或預(yù)防免疫性或炎性疾病或病癥的方法，包括對(duì)需要的患者給予第一活性劑和第二活性劑，其中第一活性劑抑制S1P裂解酶活性，以及第二活性劑是免疫抑制劑或抗炎藥。
2.權(quán)利要求1的方法，其中第一活性劑是式I的化合物或其可藥用的鹽R4其中 Ri是0R1A、NH0H、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，雜烷基、雜環(huán)、烷基 雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；&是01^、((0)01^、氫、鹵素、腈、或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷 基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R3 是 0R3A、N (R3A) 2、NHC (0) R3A、NHS02R3A 或氫；禮是01^、0C(0)R4A、氫、鹵素或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、 雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；&是則1^)2、氫、羥基或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、 烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；并且R1A、R2A、R3A、R4A和R5A各自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、 雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。
3.權(quán)利要求2的方法，其中式I的化合物是如果X是0；禮是1到4個(gè)碳的烷基、苯 基、芐基或苯乙基；R2是氫；R4和R5中的一個(gè)是羥基；R4和R5中的另一個(gè)不是1到6個(gè)碳的 烷基，1到6個(gè)碳的羥基烷基，1到6個(gè)碳的具有高達(dá)每個(gè)碳一個(gè)羥基的多羥基烷基，1到6 個(gè)碳的具有高達(dá)每個(gè)碳一個(gè)乙?；亩嘁阴；榛交?，芐基或苯乙基。
4.權(quán)利要求2的方法，其中式I的化合物是 其中Z是任選被取代的烷基；R是氫或任選被取代的烷基或芳基；R2是氫或任選被取代的低級(jí)烷基；R3 是 0R3A、NHC (O) R3A、NHSO2R3a 或氫；并且R3a獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、烷基雜 環(huán)或雜環(huán)基烷基。
5.權(quán)利要求4的方法，其中Z是任選被一個(gè)或多個(gè)羥基或乙酸酯部分取代的烷基。
6.權(quán)利要求4的方法，其中R1是任選被取代的低級(jí)烷基。
7.權(quán)利要求4的方法，其中R2是氫。
8.權(quán)利要求4的方法，其中R3是OR3AO
9.權(quán)利要求4的方法，其中R3是NHC(0) R3a。
10.權(quán)利要求4的方法，其中R3是NHS02R3A。
11.權(quán)利要求8-10任何一項(xiàng)的方法，其中R3a是氫或任選被取代的低級(jí)烷基。
12.權(quán)利要求4的方法，其中式I的化合物由下式表示 其中R6 是 OR6a 或 OC (O)R6a;R7 是 OR7a 或 OC (O)R7a;R8 是 OR8a 或 OC (O)R8a;R9 是氫、CH2OR9a 或 CH2OC (0) R9a ；并且R6b> R7b> R8b和R9b各自獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基。
13.權(quán)利要求12的方法，其中式I的化合物由下式表示 。
14.權(quán)利要求12的方法，其中式I的化合物由下式表示
15.權(quán)利要求14的方法，其中式I的化合物由下式表示
16.權(quán)利要求15的方法，其中禮是任選被取代的低級(jí)烷基。
17.權(quán)利要求15的方法，其中R3是0R3A。
18.權(quán)利要求15的方法，其中R3是N(R3A) 2或NHC (0) R3A。
19. 權(quán)利要求15的方法，其中R3是NHS02R3A。
20.權(quán)利要求17-19任何一項(xiàng)的方法，其中R3A是氫或任選被取代的低級(jí)烷基。
21.權(quán)利要求4的方法，其中式I的化合物由下式表示 其中R是低級(jí)烷基；R3 是氫、0R3A、NHC (0) R3A 或 NHS02R3A ；R9是氫或CH20H ；并且R3A獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基。
22.權(quán)利要求21的方法，其中式I的化合物由下式表示
23.權(quán)利要求22的方法，其中R3是0R3A。
24.權(quán)利要求23的方法，其中R3a是氫。
25.權(quán)利要求4的方法，其中式I的化合物是1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)-乙酮肟； (E)-1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)-乙酮肟； (Z)-1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)-乙酮肟； 1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)乙酮 O-甲基肟； (E)-1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)乙酮 O-甲基肟； (Z)-1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)乙酮 O-甲基肟；1-(5-甲基-4-((1札25，310-1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)乙酮； (1札25，31 )-1-(2-(1-亞胼基乙基)-1!1-咪唑-4-基)丁烷 _1，2，3，4_ 四醇；N' -(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙叉)乙酰胼； 4-甲基-N' -(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙叉) 苯磺酰胼；(E)-4-甲基-N' -(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙 叉)苯磺酰胼；(Z)-4-甲基-N' -(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙 叉)苯磺酰胼；N' -(1-(4-((1札25，310-1，2，3，4-四羥基丁基)-1!1-咪唑-2-基)乙叉)苯甲酰胼；2-(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑-2-基)乙叉)胼甲酸乙酯； (E) -2- (1- (4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑 _2_ 基)乙叉)胼甲酸乙酯；(Z) -2- (1- (4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基丁基)-IH-咪唑 _2_ 基)乙叉)胼甲酸乙酯；N' -(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙叉)煙酰胼； (E)-N' -(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙叉)煙酰胼；(Z)-N' -(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙叉)煙酰胼；3-氯-N'-(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙叉)苯 甲酰胼；4-氟-N'-(l-(4-((lR，2S，3R)-l，2，3，4-四羥基丁基)-1Η-咪唑-2-基)乙叉)苯甲酰胼；(E)-4-氟-N' -(1-(4-((1札25，310-1，2，3，4-四羥基丁基)-111-咪唑-2-基)乙叉) 苯甲酰胼；(Z)-4-氟-N' -(1-(4-((1札25，310-1，2，3，4-四羥基丁基)-111-咪唑-2-基)乙叉) 苯甲酰胼；6-氨基-N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙叉) 煙酰胼；(E)-6-氨基-N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙 叉)煙酰胼；(Z)-6-氨基-N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙 叉)煙酰胼；N' -(1-(4-((1札25，310-1，2，3，4-四羥基丁基)-111-咪唑-2-基)乙叉)異煙酰胼；(E)-N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙叉)異煙 酰胼；(Z)-N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙叉)異煙 酰胼；N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙叉)聯(lián)苯 基-3-甲酰胼；(E)-N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙叉)聯(lián)苯 基-3-甲酰胼；(Z)-N' -(1-(4_((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羥基丁基)-lH-咪唑-2-基)乙叉)聯(lián)苯 基-3-甲酰胼；或N-羥基-4- ((1R，2S，3R) -1，2，3，4-四羥基丁基)-1H-咪唑-2-甲酰胺。
26.權(quán)利要求1的方法，其中第二活性劑是免疫抑制劑。
27.權(quán)利要求26的方法，其中免疫抑制劑是氨基喋呤、硫唑嘌呤、環(huán)孢菌素A、D-青霉 胺、金、羥氯奎、來氟米特、甲氨蝶呤、米諾環(huán)素、柳氮磺吡啶，或其可藥用的鹽。
28.權(quán)利要求27的方法，其中免疫抑制劑是甲氨蝶呤。
29.權(quán)利要求27的方法，其中免疫抑制劑是環(huán)孢菌素A。
30.權(quán)利要求26的方法，其中免疫抑制劑是抗TNF抗體(例如，阿達(dá)木單抗，培塞株單 抗，依那西普，英夫利西單抗)。
31.權(quán)利要求26的方法，其中免疫抑制劑是白介素-1阻斷劑(例如阿那白滯素)。
32.權(quán)利要求26的方法，其中免疫抑制劑是抗B細(xì)胞(CD20)抗體(例如利妥昔單抗)。
33.權(quán)利要求26的方法，其中免疫抑制劑是T細(xì)胞活化阻斷劑(例如阿巴西普)。
34.權(quán)利要求1的方法，其中第二活性劑是抗炎藥。
35.權(quán)利要求34的方法，其中抗炎藥是糖皮質(zhì)激素或NSAID。
36.權(quán)利要求35的方法，其中糖皮質(zhì)激素是醛留酮、倍氯米松、倍他米松、可的松、去氧 皮質(zhì)酮、地塞米松、氟氫可的松、氫化可的松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、潑尼松、曲安西龍， 或其可藥用的鹽。
37.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是水楊酸類(例如，阿司匹林、amoxiprin、貝諾酯、三水楊酸膽堿鎂、二氟尼柳、faislamine、水楊酸甲酯、水楊酸鎂、雙水楊酸酯，及其可藥用 的鹽)。
38.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是芳基烷酸類(例如，雙氯芬酸、醋氯芬酸、阿西美 辛、溴芬酸、依托度酸、吲哚美辛、萘丁美酮、舒林酸、托美丁，及其可藥用的鹽)。
39.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是芳基丙酸類(例如，布洛芬、卡洛芬、芬布芬、非 諾洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、酮咯酸、洛索洛芬、萘普生、奧沙普秦、噻洛芬酸、舒洛芬，及其可 藥用的鹽)。
40.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是芳基鄰氨基苯甲酸類(例如，甲氯芬那酸、甲芬 那酸，及其可藥用的鹽)。
41.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是吡唑烷衍生物(例如，阿扎丙宗、安乃近、羥布 宗、保泰松、苯磺保泰松，及其可藥用的鹽)。
42.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是昔康類(例如，氯諾昔康、美洛昔康、吡羅昔康、 替諾昔康，及其可藥用的鹽)。
43.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是COX-2抑制劑(例如，塞來昔布、依托昔布、魯米 昔布、帕瑞昔布、羅非昔布、伐地昔布，及其可藥用的鹽)。
44.權(quán)利要求35的方法，其中NSAID是磺酰苯胺類(例如，尼美舒利，及其可藥用的^Tt. ) ο
45.權(quán)利要求1的方法，其中免疫性或炎性疾病或病癥是阿狄森氏病，抗磷脂綜合 征，哮喘，特應(yīng)性皮炎，自身免疫性萎縮性胃炎，胃酸缺乏自身免疫，貝赫切特病，乳糜瀉， 慢性特發(fā)性蕁麻疹，慢性嬰兒神經(jīng)皮膚關(guān)節(jié)(CINCA)綜合征(亦稱新生兒多系統(tǒng)炎性病 (NOMID))，慢性阻塞性肺病(COPD)，克隆病，庫欣綜合征，皮膚肌炎，古德帕斯徹綜合征， 移植物抗宿主病，格雷夫斯病，橋本甲狀腺炎，特發(fā)性腎上腺萎縮，特發(fā)性血小板減少癥， 蘭_伊綜合征，紅斑狼瘡，多發(fā)性硬化，類天皰瘡，尋常天皰瘡，惡性貧血，花粉癥，結(jié)節(jié)性多 動(dòng)脈炎，原發(fā)性膽汁性肝硬化，原發(fā)性硬化性膽管炎，銀屑病，雷諾病，瑞特氏綜合征，復(fù)發(fā) 性多軟骨炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，鼻炎，施密特綜合征，膿毒病，舍格倫綜合征，交感性眼炎，高 安動(dòng)脈炎，巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎，甲狀腺毒癥，移植排斥(例如，組織移植，骨髓移植)，潰瘍性結(jié) 腸炎，葡萄膜炎，血管炎和韋格納肉芽腫病。
46.用于減少治療、處置或預(yù)防免疫性或炎性疾病或病癥所需的免疫抑制劑和/或抗 炎藥的劑量的方法，包括對(duì)患者附加給予抑制SlP裂解酶活性的化合物。
47.權(quán)利要求46的方法，其中抑制SlP裂解酶活性的化合物是式I的化合物或其可藥 用的鹽 其中X是O或NR3 ；R1是ORia、ΝΗ0Η、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，雜烷基、雜環(huán)、烷基 雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；&是01^、((0)01^、氫、鹵素、腈、或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷 基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R3 是 OR3a、N (R3a) 2 > NHC (0) R3a、NHSO2R3a 或氫；禮是01^、OC(O)R4a、氫、鹵素或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、 雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R5是N(R5a)2、氫、羥基或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、 烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；并且R1A、R2A、R3A、R4A和R5a各自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、 雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。
48.藥物組合物，含有免疫抑制劑和式I的化合物或其可藥用的鹽 其中X是0或NR3 ；R1是ORia、ΝΗ0Η、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，雜烷基、雜環(huán)、烷基 雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；&是01^、((0)01^、氫、鹵素、腈、或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷 基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R3 是 OR3a、N (R3a) 2 > NHC (0) R3a、NHSO2R3a 或氫；禮是01^、OC(O)R4a、氫、鹵素或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、 雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R5是N(R5a)2、氫、羥基或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、 烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；并且R1A、R2A、R3A、R4A和R5a各自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、 雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。
49.藥物組合物，含有抗炎藥和式I的化合物或其可藥用的鹽 其中X是O或NR3 ；R1是ORia、ΝΗ0Η、氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基，雜烷基、雜環(huán)、烷基 雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；&是01^、((0)01^、氫、鹵素、腈、或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷 基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R3 是 OR3a、N (R3a) 2 > NHC (0) R3a、NHSO2R3a 或氫；禮是01^、OC(O)R4a、氫、鹵素或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、 雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；R5是N(R5a)2、氫、羥基或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、雜烷基、雜環(huán)、 烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基；并且R1A、R2A、R3A、R4A和R5a各自獨(dú)立地是氫或任選被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、 雜烷基、雜環(huán)、烷基雜環(huán)或雜環(huán)基烷基。
全文摘要
本發(fā)明公開了用于治療免疫性和炎性疾病和病癥的方法和組合物。具體的方法和組合物包括使用能夠抑制S1P裂解酶活性的藥劑以及至少一種附加的免疫抑制性和/或抗炎藥。
文檔編號(hào)A61K31/417GK101878030SQ200880106020
公開日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2008年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月6日
發(fā)明者塔馬什·奧拉韋茨 申請(qǐng)人:萊西肯醫(yī)藥有限公司