專利名稱：芳基茚并嘧啶及其作為腺苷A2a受體拮抗劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型芳基茚并嘧啶及其治療和預(yù)防用途?？芍委熀?或預(yù)防的障礙包 括通過拮抗腺苷A2a受體來改善的神經(jīng)變性障礙和運動障礙。
背景技術(shù)：
腺苷A2a受體腺苷是一種由機體所有代謝活性細(xì)胞產(chǎn)生的嘌呤核苷酸。腺苷通 過四種細(xì)胞表面受體亞型(Al、A2a、A2b和A3)發(fā)揮其作用，這些亞型屬于G蛋白偶聯(lián)受體 超家族(Stiles, G. L. Journal of BiologicalChemistry，1992，267，6451)。Al 和 AS 偶聯(lián) 成抑制型G蛋白，而A2a和A2b偶聯(lián)成激動型G蛋白。A2a受體主要存在于腦中，在神經(jīng)元 和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞兩者中均有發(fā)現(xiàn)(在紋狀體和伏隔核中水平最高，在嗅結(jié)節(jié)、下丘腦和海 馬等區(qū)域中水平中等至高水平)(Rosin, D. L. ；Robeva, Α. ；ffoodard, R. L. ；Guyenet, P. G.； Linden, J.Journal of ComparativeNeurology，1998，401，163)。在外周組織中，A2a受體見于血小板、嗜中性粒細(xì)胞、血管平滑肌和內(nèi)皮中 (Gessi, S. ；Varani, K. ；Merighi, S. ；Ongini, E. ；Bores, P. A. British Journal of Pharmacology，2000，129，2)。紋狀體是調(diào)節(jié)運動活動(特別是通過其起源于黑質(zhì)的多巴 胺能神經(jīng)元發(fā)出的神經(jīng)支配)的主要腦部區(qū)域。紋狀體是帕金森氏病(PD)患者中多巴 胺能神經(jīng)元變性的主要靶標(biāo)。在紋狀體中，A2a受體與多巴胺D2受體共區(qū)域化，提示這是 腦中腺苷整合和多巴胺信號傳導(dǎo)的主要部位(Fink, J. S. ；Weaver, D. Ri ；Rivkees, S. Α.； Peterfreund,R. Α. ；Pollack,Α. Ε. ；Adler,Ε. Μ. ；Reppert,S. Μ. Brain Research Molecular Brain Research,1992，14，186)。神經(jīng)化學(xué)研究已表明，A2a受體的活化可降低D2激動劑對其受體的結(jié)合親和性。 在大鼠紋狀體膜制備物(Ferre, S. ；con Euler, G. Johansson, B. ；Fredholm, B. B. ；Fuxe, K.Proceedings of the National Academyof Sciences I of the United States of America，1991，88，7238)以及在用A2aR和D2R cDNA轉(zhuǎn)染后的成纖維細(xì)胞系(Salim, H.； Ferre, S. ；Dalai, A. ；Peterfreund, R. A. ；Fuxe, K. ；Vincent, J. D. ；Lledo, P. Μ. Journal of Neurochemistry, 2000, 74，432)中已證明了這種D2R和A2aR的受體-受體相互作用。在體 內(nèi)，用A2a拮抗劑藥理上阻斷A2a受體可在包括小鼠、大鼠和猴的多種物種中導(dǎo)致多巴胺能 神經(jīng)毒素MPTP(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶)誘導(dǎo)的PC中產(chǎn)生有益作用(Ikeda， K. ；Kurokawa, Μ. ；Aoyana, S. ；Kuwana, Y.Journal of Neurochemistry,2002,80, 262)。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，A2a功能被基因阻斷的A2a敲除小鼠在其暴露于神經(jīng)毒素MPTP 時對運動損傷和神經(jīng)化學(xué)變化敏感性較低(Chen, J. F. ；Xu, K. ；I Petzer, J. P. ；Steal,R. ；Xu, Y. H. ；Beilstein，Μ. ；Sonsalla，P. K. ；Castagnoli，K. ；Castagnoli，N.，Jr.； SchwarsschiId, Μ. Α.Journal of Neuroscience, 2001,121, RCl 43)。在人中，已發(fā)現(xiàn)腺苷受體拮抗劑茶堿在PD患者中產(chǎn)生有益作用(Mally，J.； Stone, Τ. W. Journal of the Neurological Sciences，1995，132，129)。與此相一致，最 近的流行病學(xué)研究表明，高咖啡因消耗使人不太可能患PD(Ascheric), Α. ；Zhang, S. Μ.； Hernan, Μ. Α. ；Kawachi, I. ；Colditz, G. Α. ；Speizer, F. Ε. ；Willett, W. C. Annals of Neurology，2001，50，56)。概括地說，腺苷A2a受體阻滯劑可提供一類新的抗震顫麻痹 藥劑(Impagnatiello, F. ；Bastia, E. ；Ongini, E. ；Monopoli, A. Emerging Therapeutic Targets,2000,4,635)。A2a受體拮抗劑是用于治療成癮的特別有用的療法。濫用(阿片制劑、可卡 因、乙醇等)的主要用藥可直接或間接調(diào)節(jié)神經(jīng)元(特別是伏隔核中存在的那些)中 的多巴胺信號傳導(dǎo)，伏隔核中含有高水平的A2a腺苷受體。已經(jīng)顯示腺苷信號傳導(dǎo)途 徑可增強依賴性，并且還顯示施用A2a受體拮抗劑可減少對成癮性物質(zhì)的嗜欲(Ivan Diamond 禾口 Lina Yao 的 “The CriticalRole of Adenosine A2a Receptors and Gi β Y Subunits in Alcoholismand Addiction :From Cell Biology to Behavior，，(The Cell Biologyof Addiction，2006，第 291-316 頁)禾口 St印hen P. Hack and MacdonaldJ. Christie 的"Adaptations in Adenosine Signaling in DrugDependence Therapeutic Implications”，Critical Review inNeurobiology，第 15 卷，235-274 (2003))。還可參見 Alcoholism :Clinical and Experimental Research(2007)，31(8)，1302-1307。A2a受體拮抗劑可用于治療注意力缺陷多動障礙(ADHD)，因為咖啡因(一種非選 擇性腺苷拮抗劑)可用于治療ADHD，并且多巴胺和腺苷神經(jīng)元之間存在許多相互作用。 Clinical Genetics (2000)，58 (1)，31-40 以及其中的參考文獻(xiàn)。A2a受體拮抗劑是用于治療抑郁癥的特別有用的療法。A2a拮抗劑已知可在多種抑 郁癥模型(包括強迫游泳試驗和大鼠懸尾實驗)中誘導(dǎo)活躍性。該陽性響應(yīng)由多巴胺能性 傳遞所介導(dǎo)并且由逃生引導(dǎo)的行為引起而不是由運動刺激效果引起。Neurology(2003)， 61(增刊 6)S82-S87。A2a受體拮抗劑是用于治療焦慮癥的特別有用的療法。A2a拮抗劑已顯示可抑制體 內(nèi)情緒 / 焦慮反應(yīng)。Neurobiology of Disease (2007)，28 (2) 197-205。

發(fā)明內(nèi)容
化合物A是有效的腺苷A2a受體的小分子拮抗劑。
Ον^Ο^/λΓ
I Ν=(
ANH具體實施例方式本發(fā)明提供了化合物A<formula>formula see original document page 5</formula>和它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體及可藥用鹽。本發(fā)明還提供了治療患有通過拮抗腺苷A2a受體來改善的病癥的受試者的方法， 該方法包括給該受試者施用治療有效劑量的本發(fā)明的藥物組合物。本發(fā)明還提供了預(yù)防受試者中通過拮抗腺苷A2a受體來改善的障礙的方法，包括 在預(yù)計會引起通過拮抗該受試者中的腺苷A2a受體來改善的障礙的事件之前或之后，給該 受試者施用預(yù)防有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物。本發(fā)明的化合物可作為游離堿分離和使用。它們也可作為可藥用鹽分離和使用。這樣的鹽的例子包括氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、鹽酸鹽、高氯酸鹽、硫酸鹽、馬來酸鹽、 富馬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、己二酸鹽、苯甲酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、羥乙 磺酸鹽、苯磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽(palmoic)，2-萘磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、環(huán)己烷基氨 磺酸鹽和葡糖二酸鹽。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明化合物和可藥用載體的藥物組合物。可藥用載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，包括但不限于約0. 01至約0. 1M，優(yōu)選 0. 05M的磷酸鹽緩沖液或0. 8%的鹽水。這樣的可藥用載體可以是水性的或非水性的溶液、 懸浮液或乳液。非水溶劑的例子為丙二醇、聚乙二醇、諸如橄欖油之類的植物油和諸如油酸 乙酯之類的注射用有機酯。水性載體包括水、乙醇、醇/水溶液、甘油、包括鹽水和緩沖介質(zhì) 的乳液或懸浮液?？诜d體可以是酏劑、糖漿劑、膠囊劑、片劑等。典型的固體載體是惰性 物質(zhì)，如乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、甘露醇等。胃腸外用載體包 括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸鹽林格氏溶液和不揮發(fā)油。靜脈內(nèi)用 載體包括流體和營養(yǎng)補充物、電解質(zhì)補充物，例如基于林格氏葡萄糖的那些等等。還可存在防腐劑和其它添加劑，例如抗菌劑、抗氧化劑、螫合劑、惰性氣體等?？梢?采用本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)，根據(jù)需要將所有載體與崩解劑、稀釋劑、制粒劑、潤滑劑、粘合 劑等混合。本發(fā)明還提供了治療患有通過拮抗腺苷A2a受體來改善的病癥的受試者的方法， 該方法包括給該受試者施用治療有效劑量的本發(fā)明的藥物組合物。在一個實施例中，所述障礙為神經(jīng)變性障礙或運動障礙?？捎帽景l(fā)明藥物組合物 治療的障礙的例子包括但不限于帕金森氏病、亨廷頓舞蹈病、多系統(tǒng)萎縮、皮質(zhì)基底節(jié)變 性、阿耳茨海默氏病和老年性癡呆。在一個優(yōu)選實施例中，所述障礙是帕金森氏病。如本文所用，術(shù)語“受試者”包括但不限于患有通過拮抗腺苷A2a受體來改善的障 礙的任何動物或經(jīng)人工修飾的動物。在一個優(yōu)選的實施例中，受試者是人。
可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法中的任意一種來實現(xiàn)或?qū)嵤┍景l(fā)明藥物 組合物的施用。本發(fā)明的化合物可例如經(jīng)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、口服或皮下施用。在一個優(yōu)選實施 例中，本發(fā)明的藥物組合物通過口服施用。另外，施用可包括在一段合適的時間周期內(nèi)將多 次劑量給予受試者。這樣的給藥方案可根據(jù)常規(guī)方法來確定。如本文所用，藥物組合物的“治療有效劑量”是足以停止、逆轉(zhuǎn)或減緩障礙進程的 量。藥物組合物的“預(yù)防有效劑量”是足以預(yù)防疾病，即消除、改善和/或延緩疾病發(fā)作的 量。用于確定本發(fā)明藥物組合物的治療和預(yù)防有效劑量的方法是本領(lǐng)域已知的。例如可根 據(jù)動物實驗的結(jié)果用數(shù)學(xué)方法來確定給人施用藥物組合物的有效劑量。在一個實施例中，治療和/或預(yù)防有效劑量是足以遞送約0. OOlmg/kg體重至約 200mg/kg體重的本發(fā)明藥物組合物的劑量。在另一個實施例中，治療和/或預(yù)防有效劑量 是足以遞送約0. 05mg/kg體重至約50mg/kg體重的劑量。更具體地講，在一個實施例中，口 服劑量在每日約0.05mg/kg至約100mg/kg的范圍內(nèi)。在另一個實施例中，口服劑量在每 日約0. 05mg/kg至約50mg/kg的范圍內(nèi)，并且在另一個實施例中，在每日約0. 05mg/kg至約 20mg/kg的范圍內(nèi)。在又一個實施例中，輸注劑量的范圍為在約數(shù)分鐘至約數(shù)日的周期 內(nèi)約 1. Oug/kg/min至約lOmg/kg/min的與可藥用載體混合的抑制劑。在另一個實施例中，對于 局部給藥而言，本發(fā)明的化合物可與藥用載體以約0. 001至約0. 1的藥物/載體比混合。本發(fā)明還提供了在哺乳動物中治療成癮的方法，包括施用治療有效劑量的式A化 合物。本發(fā)明還提供了在哺乳動物中治療ADHD的方法，包括施用治療有效劑量的式A化 合物。本發(fā)明還提供了在哺乳動物中治療抑郁癥的方法，包括施用治療有效劑量的式A 化合物。本發(fā)明還提供了在哺乳動物中治療焦慮癥的方法，包括施用治療有效劑量的式A 化合物。^M 化合物A可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。下面的反應(yīng)方案僅意在給出本 發(fā)明的實例并且絕不意在限制本發(fā)明。方案1<formula>formula see original document page 7</formula>化合物a可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。下面的反應(yīng)方案僅意在給出本 發(fā)明的實例并且絕不意在限制本發(fā)明。方案1示出了可得到化合物a的合成路線。從氨基嘧啶i開始并按照箭頭指示的 路線，可在存在二甲基氨基吡啶(DMAP)的情況下在四氫呋喃(THF)中用二叔丁基二碳酸酯 ((Boc)2O)來實現(xiàn)氨基(NH2)的保護。在苯中使用1，3_二溴-5，5-二甲基乙內(nèi)酰脲(DBDMH) 和過氧化苯甲酰(BP)在回流下，所得的二 Boc保護的II可發(fā)生自由基引發(fā)的芐基溴化而 得到相應(yīng)的芐基溴III。然后在乙腈(CH3CN)中使用4-甲基嗎啉N-氧化物(NMO)和4入分 子篩(ms)，芐基溴III可被氧化成相應(yīng)的醛IV。在55°C下在丙酮/水混合物中使用高錳酸 鉀(KMnO4),所得的醛IV可進一步氧化成相應(yīng)的羧酸V。然后在40°C下在THF中使用1-甲 基哌嗪、O- (7-氮雜苯并三唑-1-基)-N, N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)和二異丙 基乙胺(DIPEA)，羧酸V可轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰胺VI。最后，酰胺VI可用三氟乙酸(TFA)去保 護而得到化合物a。實例a 步驟a(II)將純二甲基氨基吡啶(850mg，7. Ommo 1)加至 I (20. Og, 69. 7mmol)禾口 (Boc)2O (38. Og, 174. 2mmol)的THF溶液(300mL)中。2小時后，用乙酸乙酯(EtOAc)稀釋該 混合物，然后用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮。將所得的固體懸浮于EtOAc (250mL) 中并過濾。用EtOAc (2 X IOOmL)洗滌該固體，然后真空干燥而得到25. 6g II。實例a 步驟b
(III)通過升溫將II (25. 6g，52. 6mmol)完全溶解于苯(200mL)中，然后連續(xù)加入 二溴二甲基乙內(nèi)酰脲(8. 3g，28.9mmol)和過氧化苯甲酰(1. 0g，4. 2mmol)。將該混合物加 熱至回流16小時。然后使溶液冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，然后用飽和的含水NaHCO3、水和 鹽水洗滌。對溶液進行干燥(Na2SO4)、濃縮并通過柱層析(5-20% EtOAc/庚烷)進行純化。 第一次層析得到6g含有約10% II的III，第二次層析得到另外12g含有10% II的III。實例A 步驟c(IV)將固體 N-甲基嗎啉 N-氧化物(2. 5g, 21. 2mmol)加入 III (6. Og, 10. 6mmol) 和4人ms(10. 5g)的CH3CN(300mL)溶液中。室溫下18小時后，過濾該混合物并用EtOAc對 濾液進行稀釋、用水和鹽水洗滌、干燥(Na2SO4)，并進行層析而得到3. 6g的IV。實例A 步驟d(V)將固體 KMnO4 加入 IV(3. 6g，7. 2mmol)的丙酮 / 水溶液(100mL/25mL)中，并 將所得的混合物加熱至55°C。14小時后，將混合物冷卻至室溫并過濾。將濾液用EtOAc稀 釋并用水和鹽水洗滌、干燥(Na2SO4)、濃縮并通過柱層析純化而得到2. Ig的V。實例A 步驟e(VI)將純哌嗪(0. 4mL，3. 6mmol)加入酸 V(l. 7g，3. 3mmol)、二 異丙基乙胺 (1.7mL,9. 9mmol)和HATU (1. 3g，3. 3mmol)的THF溶液(60mL)中。將所得的混合物加熱至 40°C。18小時后，將該混合物濃縮并通過柱層析進行純化而得到1.8g酰胺VI。實例A 步驟f2-氨基-8-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-4-苯基-茚并[l，2_d]嘧啶_5_酮
<formula>formula see original document page 8</formula>(A)然后將酰胺VI在25mL CH2C12/TFA(4 1)中攪拌。3小時后，濃縮混合物，用 飽和的含水NaHCO3中和并過濾而得到Ig粗的A。通過柱層析純化固體而得到893mg的該游 離堿，將其溶解于THF中并加入IOmL乙醚中的IN HCl，濃縮，并真空干燥而得到(A)的二鹽 酸鹽。1H NMR (400MHz，氯仿 _d) δ ppm 2. 34(s，3H)，2· 39 (br. s.，2Η)，2· 52 (d, J = 2. 20Hz, 2H)，3. 46 (br. s.，2H)，3. 84 (br. s.，2H)，5. 86 (br. s.，2H)，7. 46-7. 64 (m, 4H)，7. 78 (d, J = 7. 58Hz, 1H)，7· 85 (s, 1H)，8· 07 (dd, J = 7. 83，1. 71Hz，2H) ；MS m/e 400 (M+H)。牛物學(xué)測涼及活t牛腺苷A2a剩本的配體結(jié)合測涼使用含有人A2a腺苷受體(PerkinElmer，RB_HA2a)的HEK293細(xì)胞的質(zhì)膜和放射 性配體[3H]CGS21680 (PerkinElmer，NET1021)，進行腺苷A2a受體的配體結(jié)合測定。在總 體積為200yL的96-孔聚丙烯板中，通過順序加入20pLl 20稀釋膜、含有[3H]CGS21680 的測定緩沖液(50mM Tris HCI, pH7. 4, IOmM MgC 12, ImM EDTA)、50 μ L用試驗緩沖液稀釋 的化合物(4χ)或溶媒對照來建立測定。通過SOmM的NECA測定非特異性結(jié)合。在室溫下 進行反應(yīng)2小時，然后通過預(yù)先在含有0. 3%聚乙烯亞胺的50mM Tris HCl (pH7. 4)中浸泡過的96孔GF/C濾板進行過濾。然后用冷的50mM Tris HCl (pH7. 4)將板洗滌5次、干燥并 在底部密封。每孔加301^的微閃爍液(1^(^08(^11^11站1011 fluid)并密封頂部。針對 [3H]，用 PackardTopcount 對所述板進行計數(shù)。用 Microsoft Excel 和 GraphPad Prism 程 序?qū)?shù)據(jù)進行分析(Varani, K. ；Gessi, S. ；Dalpiaz, A. ；Borea, P. A. British Journal of Pharmacology, 1996，117，1693)。腺苷A2a受體功能測定將過量表達(dá)人腺苷A2a受體且含 有cAMP-誘導(dǎo)型β -半乳糖苷酶報道基因的CHO-Kl細(xì)胞以40-50Κ/孔接種至96-孔組織培 養(yǎng)板中，并培養(yǎng)兩天。在測定當(dāng)天，用200pL測定培養(yǎng)基(F-12營養(yǎng)混合物/0. 1%BSA)洗 滌細(xì)胞一次。對于激動劑測定，隨后加入腺苷A2a受體激動劑NECA，并在37°C、5% C02下將 細(xì)胞溫育5小時，然后終止反應(yīng)。就拮抗劑測定而言，將細(xì)胞在室溫下與拮抗劑一起溫育5 分鐘，然后添加50nM NECA。然后將細(xì)胞在37°C、5% C02下溫育5小時，之后通過用PBS洗 滌細(xì)胞兩次來終止實驗。將50 μ L IX溶胞緩沖液(Promega ，5X儲液，在使用前需要將其稀 釋至Ix)加至每孔，并將板在_20°C下冷凍。對于β-半乳醣苷酶的酶比色測定，將板在室溫 下解凍，并將50 μ L 2Χ測定緩沖液(Promega)加至每孔中。讓其在37°C下顯色1小時或直 到出現(xiàn)適當(dāng)?shù)男盘枮橹?。然后?50AL的IM碳酸鈉停止反應(yīng)。在Vmax Machine (Molecular Devices)上于405nm對板進行計數(shù)。用Microsoft Excel和GraphPad Prism程序?qū)?shù)據(jù)進 行分析。(Chen，W. B. ；Shields, Τ. S. ；Cone，R. D. Analytical Biochemistry, 1995, 226, 349 ； Stiles,G. Journal of Biological Chemistry, 1992,267,6451)；氟哌啶醇誘導(dǎo)的C57bl/6 小鼠僵住癥研究在嚙齒動物房中，每籠裝兩只雄性成年C57bl/6小鼠(9-12周齡，來自 ACE)。使室溫保持在64-79度，且濕度在30-70%，并按12小時照明/12小時黑暗周期進行 室內(nèi)照明。在所述研究的那天，將小鼠轉(zhuǎn)移至研究室。以丨^！^/！^口；??！^/！^，給小鼠皮下 注射氟哌啶醇(Sigma H1512，用0. 3%酒石酸配制成1. Omg/ml，然后用鹽水稀釋至0. 2mg/ ml)或溶媒。然后將小鼠置于其所住籠中，可獲得水和食物。30分鐘后，將溶媒(鹽水中的 0. 3%的吐溫80)或化合物以10mg/kg，10ml/kg (化合物，lmg/ml，用鹽水中的0. 3%的吐溫 80配制，用超聲處理而獲得均一懸浮液)經(jīng)口對所述小鼠進行給藥。然后，將小鼠置于其所 住籠中，可獲得水和食物。在口服給藥后1小時，進行所述僵住癥試驗。對于該試驗，使用 一種豎直的金屬線柵(1. Ocm的方格)。將小鼠置于所述柵格上并且給幾秒鐘以安定下來，記錄它們的不動時間，直到所 述小鼠移動它們的后爪為止。輕輕地將小鼠從所述柵格移出并放回所述柵格上，再次對它 們不動的時間計時。重復(fù)所述測定三次。將三次測量結(jié)果的平均值用于數(shù)據(jù)分析。A2a測定數(shù)據(jù)化合物 基于A2a細(xì)胞的功能Ki 基于A1細(xì)胞的功能Ki
A8. 2nM58. 4nMAMES測定條件本研究的目的是體外評估在存在和不存在微粒體活化系統(tǒng)的情況下處理時，本發(fā) 明化合物在細(xì)菌中誘導(dǎo)逆向點突變(reverse-point mutation)的能力。使用鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)菌株 TA98、TA100、TA1535、 TA1537和大腸桿菌(Escherichia coli)菌株WP2UvrA,在細(xì)菌/微粒體活化平板摻入測定 法中對化合物進行檢測。該實驗包括在不存在通過AlTOClO] 1254-誘導(dǎo)的大鼠肝臟微粒 體制劑(S9mix)實現(xiàn)代謝活化的情況下(使用緩沖液)和在存在Aroclor i254-誘導(dǎo)的大鼠肝臟微粒體制劑(S9mix)實現(xiàn)代謝活化的情況下進行的測試。將化合物在兩種代謝條 件下在所有菌株中以每個平板5、10、25、50、100、250、500、1000、2500和5000 μ g的劑量進
行檢測。通過表型反轉(zhuǎn)為氨基酸原養(yǎng)型來檢測突變(對鼠傷寒沙門氏菌或大腸桿菌分別是 組氨酸或色氨酸)。如果其誘導(dǎo)回復(fù)突變體頻率劑量依賴性增加為合適的同期溶媒對照中 所觀察到的增加值的至少2倍(對TA1535和TA1537為3倍)，則檢測品將被認(rèn)為是陽性的 (有誘變)。此外，該響應(yīng)應(yīng)該是可重復(fù)的。通過劑量依賴性的菌落計數(shù)降低和/或菌苔減 少/不存在來檢測毒性。將用溶媒處理過的平板作為用于突變和毒性兩者的比較的標(biāo)準(zhǔn)。 陽性對照板用于確保該檢測體系的功能性。對所有菌株在不存在和存在S9mix的情況下均獲得了可接受的陰性對照和陽性 指示物結(jié)果。這確保該檢測體系有用并且靈敏。AMES測定結(jié)果針對本發(fā)明的三種化合物，下面的結(jié)果可證明所需的AMES-陰性性質(zhì)。不是所 有該測定中檢測的化合物發(fā)現(xiàn)為AMES-陰性。為了進行比較，顯示了兩種具有不期望的 AMES-陽性性質(zhì)的相似分子。對于該測定，AMES-陰性被認(rèn)為是所期望的特性。
AMES陰性AMES陽性
OvO^ 、。^>
ON=(NH2
ANH2
N=^ NH2雖然上述說明書以提供實例用于說明目的的方式教授了本發(fā)明的原理，但應(yīng)當(dāng)理 解，本發(fā)明的實踐涵蓋了在如下權(quán)利要求書和它們的等同物范圍內(nèi)的所有常見變型形式、 改變形式和/或修改形式。藉此將上面說明書中公開的所有出版物全文以引用的方式并入本文。
權(quán)利要求
化合物及其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽，其為FPA00001113533000011.tif
2.藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物和可藥用載體。
3.治療患有通過拮抗受試者體內(nèi)合適細(xì)胞中的腺苷A2a受體來改善的障礙的受試者 的方法，其包括給所述受試者施用治療有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物。
4.預(yù)防通過拮抗受試者體內(nèi)合適細(xì)胞中的腺苷A2a受體來改善的障礙的方法，包括在 預(yù)計會引起通過拮抗所述受試者體內(nèi)合適細(xì)胞中的腺苷A2a受體來改善的障礙的事件之 前或之后，給所述受試者施用預(yù)防有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，包括給所述受試者施用治療或預(yù)防有效劑量的根據(jù)權(quán) 利要求2所述的藥物組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，包括給所述受試者施用治療或預(yù)防有效劑量的根據(jù)權(quán) 利要求2所述的藥物組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述障礙為神經(jīng)變性障礙或運動障礙。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述障礙選自帕金森氏病、亨延頓氏舞蹈病、多系 統(tǒng)萎縮癥、皮質(zhì)基底節(jié)變性、阿耳茨海默氏病和老年性癡呆。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述障礙為神經(jīng)變性障礙或運動障礙。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述障礙選自帕金森氏病、亨延頓氏舞蹈病、多 系統(tǒng)萎縮癥、皮質(zhì)基底節(jié)變性、阿耳茨海默氏病和老年性癡呆。
11.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述障礙為帕金森氏病。
12.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述障礙為成癮。
13.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述障礙為ADHD。
14.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述障礙為抑郁癥。
15.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述障礙為焦慮癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型芳基茚并嘧啶A及其用作腺苷A2a受體拮抗劑的治療和預(yù)防用途。可治療的和/或預(yù)防的障礙包括帕金森氏病。
文檔編號A61P25/24GK101835759SQ200880112882
公開日2010年9月15日 申請日期2008年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月24日
發(fā)明者B·C·舒克, P·F·杰克遜 申請人:詹森藥業(yè)有限公司