疫苗納米技術的制作方法

文檔序號：1145896閱讀：677來源：國知局

專利名稱：疫苗納米技術的制作方法
疫苗納米技術相關申請本申請根據35U.S.C. §119要求申請日為2007年10月12日的美國臨時申請系列號60/979，596的優(yōu)先權。其完整內容通過引用并入本文。政府支持美國政府提供了本發(fā)明的研究所使用的資金支持。特別地，National Institutesof Health (合同號 AI069259、AI072252、CAl 19349 和 HL56949)和 National Institutesof Health/National Institute of Biomedical Imaging and Bi0Engineering(合同號EB003647)支持了本發(fā)明的研究。美國政府具有本發(fā)明的一些權利。
背景技術：
現(xiàn)在很多的針對微生物病原體的疫苗包含病原微生物的活的減毒的或非劇毒的菌株。很多疫苗包含殺死的或相反的滅活的微生物。其它的疫苗利用病原體裂解物的純化的成分，例如表面碳水化合物或重組的源自病原體的蛋白。利用活的減毒的或滅活的病原體的疫苗通常產生有力的免疫應答，但是它們的應用具有局限性。例如，活的疫苗菌株有時候會引起傳染性病狀，特別是當施用于免疫妥協(xié)的受體時。此外，很多病原體，特別是病毒，在它們的基因組中進行持續(xù)迅速的變異，這允許它們逃脫針對抗原性不同疫苗菌株的免疫應答。鑒于發(fā)展疫苗的困難，很多疫苗供應嚴重短缺。例如，2007年10月美國發(fā)生了流感、水痘和甲肝疫苗的短缺。在一些情況下，疫苗短缺的發(fā)生是由于沒有足夠的生產商將其設備投入到疫苗生產以維持需求。在一些情況下，疫苗短缺是由于疫苗效力低造成的，這意味著必須向每個個體施以很大數量的疫苗產品以達到預防性效果。例如，一些疫苗不能作為完整生物體施用(即使是減毒的或殺死的)，因為它們引起傳染性病狀。相反，這樣的疫苗通常包含純化的病原體成分，其通常導致效力小得多的免疫應答。因此，業(yè)界存在生產高免疫性有效疫苗的系統(tǒng)和方法的需求。也存在對于能夠有利地誘導持續(xù)時間長的免疫應答的改善的疫苗組合物的需求。為了治療和預防傳染性疾病，存在對于高免疫原性但不引起疾病的改善的疫苗組合物的需求。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了用于調節(jié)免疫系統(tǒng)的合成的納米載體。合成的納米載體包含一種或多種免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑和靶試劑(本文也稱為“靶半體”)。免疫調節(jié)試劑誘導B 和/或T細胞中的免疫應答。免疫刺激試劑幫助刺激免疫系統(tǒng)(以一種最終能夠加強、抑制、引導或重引導免疫應答的方式)。因此，免疫刺激試劑包括免疫抑制劑和誘導調節(jié)性T 細胞的試劑。在一些具體實施方式
中，這樣的試劑能夠促進耐受的獲得。靶試劑識別與特定的器官、組織、細胞和/或亞細胞位點相聯(lián)的一個或多個靶標。納米載體在預防和/或治療那些易于通過免疫系統(tǒng)調節(jié)而治療的疾病、失調或癥狀的藥學制備物和試劑盒中是有用的。這樣的癥狀包括那些通過特異性或非特異性加強免疫應答、特異性或非特異性抑制免疫應答或特異性或非特異性引導/重引導免疫應答而調節(jié)的疾病、失調或癥狀。如本領域技術人員所認識到的，免疫系統(tǒng)調節(jié)，在其它事件中，在眾多與醫(yī)療治療相關的事件中是有用的，例如，如，用于預防和/或治療傳染性疾病、癌癥、過敏癥、哮喘(包括過敏性哮喘)、自身免疫疾病(包括類風濕性關節(jié)炎)、用于免疫抑制(與移植物聯(lián)合)以改善移植排斥、抵抗令人上癮的物質的免疫和抵抗生物危害物和其它毒性物質的免疫。免疫系統(tǒng)調節(jié)作為工業(yè)和學術研究中的工具也是有用的，例如，如，免疫動物以生產抗體。本發(fā)明的納米載體可用于所有這些目的。本發(fā)明的一個方面是提供疫苗。根據本發(fā)明所述的疫苗通常含有抗原。在一個具體實施方式中，抗原通過共價或非共價方式與納米載體有真正的“結合”。非共價鍵包括，例如，離子鍵、疏水鍵、物理截留等，以下進行更詳細的描述。這樣的自身攜帶抗原的納米載體包含于以下所指稱的疫苗納米載體的范疇內。在另一個具體實施方式
中，納米載體具有與之結合的免疫刺激制劑，以用于增強、抑制、引導或重引導免疫應答，優(yōu)選為對抗原的免疫應答。在這種情況下，抗原可以與結合試劑的納米載體(載體上結合了免疫刺激試劑)制備物混合以形成疫苗。當然抗原也可以與納米載體結合，包括下面所討論的，結合至結合了免疫刺激試劑的相同載體。在一些具體實施方式
中，考慮到抗原為被動輸送(例如，個體暴露于環(huán)境中的變應原)。在這種情況下，攜帶結合的免疫刺激試劑的納米載體可以在沒有抗原的情況下施用，抗原通過環(huán)境輸送。例如，免疫刺激試劑可以是將免疫系統(tǒng)從Th2應答重引導為Thl應答的試劑。因此，在一些具體實施方式
中，所施用的試劑/納米載體和經環(huán)境輸送的抗原組合起來作用將免疫應答從Th2應答(其一般為與IgE的產生相聯(lián)，且由細胞因子IL-4所驅動)重引導為朝向Thl為主導的應答(其與IgG的產生相聯(lián)，且由IL-12和干擾素-Y驅動)。因此，在一些具體實施方式
中，所施用的試劑/納米載體和經環(huán)境輸送的抗原降低IgE 抗體的存在，從而治療過敏癥。甚至還可能在不存在預期的暴露于環(huán)境中抗原的情況下作為單一治療而施用與納米載體結合的免疫刺激試劑，以將免疫應答重引導為朝向Thl或者影響免疫系統(tǒng)的方面，這可以通過不依賴施用抗原的方式而操作，例如嗜曙紅細胞灌注。在很多情況下本發(fā)明的制備物將包括一個或多個納米載體。在一些具體實施方式
中，制備物包括與免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑和靶試劑中的一個或多個(但不是所有的) 結合的納米載體。在一些具體實施方式
中，制備物是納米載體的混合物，其具有攜帶免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑和靶試劑中的一個或多個(但不是所有的)的亞群體。在一些具體實施方式中，制備物是不同的納米載體的混合物，每個納米載體攜帶免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑和靶試劑中的一個或多個(但不是所有的)。制備物同樣可以是納米載體中的一個，其中每個納米載體攜帶與之結合的免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑和靶試劑全部三者。在這種情況下，納米載體自身(除了它們輸送的試劑之外)可以是相同的或不同的。重要的是發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的納米載體對于刺激免疫系統(tǒng)是強有力的。重要的是發(fā) 現(xiàn)納米載體可以被制成模擬改善當暴露于自然界中的抗原時或在疫苗技術之前免疫系統(tǒng) 所“看到”的情況(從免疫學觀點來看)。在這個方面，令人始料未及地發(fā)現(xiàn)，如果與納米載體共價結合的話佐劑的活性會顯著增強。同樣令人始料未及地發(fā)現(xiàn)，納米載體甚至能夠在沒有靶試劑的情況下幫助將免疫調節(jié)試劑或免疫刺激試劑靶向合適的免疫細胞。
本文描述的系統(tǒng)允許以產生改善的免疫調節(jié)的方式操作那些影響免疫系統(tǒng)的參數。本發(fā)明的一個重要方面是納米載體的尺寸、試劑密度、靶向程度和位置、降解和試劑釋放等可以控制。本發(fā)明的眾多方面實現(xiàn)一個或多個這些優(yōu)點，以下更詳細地描述。特別地，以下描述了免疫調節(jié)制備物，這樣的制備物的合成納米載體，特異性和優(yōu)選的納米載體，特異性和優(yōu)選的免疫調節(jié)、免疫刺激和靶試劑，本發(fā)明的納米載體的成分部分和構建模塊，以及生產這樣的納米載體的方法，包括涉及自組裝納米載體的優(yōu)選方法。此外，描述了用于產生與弱抗原和不被T細胞識別的抗原(例如碳水化合物和小分子抗原)相關的有力的免疫調節(jié)的制備物和系統(tǒng)。在一些方面，提供了包含納米載體(例如，一種靶向特異性器官、組織、細胞或亞細胞位點的納米載體)的組合物。在一些具體實施方式
中，納米載體靶向一個或多個次級淋巴組織或器官。在一些具體實施方式
中，次級淋巴組織或器官是淋巴結、脾、派亞氏淋巴叢、闌尾或扁桃體。納米載體骨架(和本文所提供的試劑所結合或包埋的納米載體)可以由聚合物和 /或非聚合物分子組成。因此，納米載體骨架可以是基于蛋白的、基于核酸的或基于碳水化合物的。在一些具體實施方式
中，骨架是大分子。在一些具體實施方式
中，骨架由氨基酸或核酸組成。在一些具體實施方式
中，骨架由分子的交聯(lián)的鏈組成，如核酸。在一些具體實施方式中，骨架由RNAi交聯(lián)的鏈組成。在一些具體實施方式
中，骨架為基于聚氨基的。納米載體可以是(但不限于)一個或眾多基于脂的納米顆粒、聚合納米顆粒、金屬納米顆粒、基于表面活性劑的乳液、樹枝狀化合物和/或使用納米材料的組合發(fā)展出來的納米顆粒例如脂-聚合物納米顆粒。在一些具體實施方式
中，納米載體由一個或多個聚合物組成。在一些具體實施方式中，一個或多個聚合物是溶于水的非吸附性聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是聚乙二醇(PEG)或聚氧乙烯(PEO)。在一些具體實施方式
中，聚合物是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實施方式
中，一個或多個聚合物是生物可降解聚合物。在一些具體實施方式中，一個或多個聚合物是生物可兼容聚合物(其為可溶于水的非吸附性聚合物和生物可降解聚合物的偶聯(lián)體)。在一些具體實施方式
中，生物可降解聚合物是聚乳酸(PLA)、聚(羥基乙酸)(PGA)或聚(乳酸/羥基乙酸)(PLGA)。在一些具體實施方式
中，納米載體由PEG-PLGA聚合物組成。在一些具體實施方式
中，納米載體通過自組裝形成。自組裝是指使用那些能夠自身適應以可以預見的方式可以預見地且可以重復地形成納米載體的成分形成納米載體的過程。在一些具體實施方式
中，通過使用兩性生物材料(其自身彼此設定為形成尺寸、成分和成分位置可預見的納米載體)形成納米載體。根據本發(fā)明，兩性生物材料上可以結合免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑和/或靶試劑，從而當納米載體自組裝時，在納米載體上/在納米載體內存在可以重復的試劑的定位和密度式樣。在一些具體實施方式中，納米載體是微米顆粒、納米顆?；蚱た擅最w粒。在一些具體實施方式中，微米顆粒、納米顆粒或皮可米顆粒是自組裝的。在一些具體實施方式
中，納米載體具有正ζ電位。在一些具體實施方式
中，納米載體在中性PH帶有凈正電荷。在一些具體實施方式
中，納米載體在其表面包含一個或多個胺半體。在一些具體實施方式
中，胺半體是伯、仲、叔或季胺。在一些具體實施方式
中，胺半體是脂肪族胺。在一些具體實施方式
中，納米載體包含含有胺的聚合物。在一些具體實施方式
中，納米載體包含含有胺的脂。在一些具體實施方式
中，納米載體包含在中性PH帶有正電荷的蛋白或肽。在一些具體實施方式
中，納米載體是乳膠顆粒。在一些具體實施方式
中，在其表面具有一個或多個胺半體的納米載體在中性PH帶有凈正電荷。在一些具體實施方式中，本文提供的組合物的納米載體具有500nm以下的平均幾何直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有50nm以上但500nm以下的平均幾何直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體群體的平均幾何直徑為約60nm、75nm、100nm、125nm、 150nm、175nm、200nm、225nm、250nm、275nm、300nm、325nm、350nm、375nm、400nm、425nm、450nm 或475nm。在一些具體實施方式
中，平均幾何直徑為100_400nm、100_300nm、100_250nm 或100-200nm。在一些具體實施方式
中，平均幾何直徑為60-400nm、60-350nm、60-300nm、 60-250nm或60-200nm。在一些具體實施方式
中，平均幾何直徑為75_250nm。在一些具體實施方式中，納米載體的群體中30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或更多的納米載體具有500nM以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中10%、20%、30%、40%、 50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有50nm以上但500nm以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多的納米載體具有約 60nm、75nm、lOOnm、125nm、150nm、175nm、200nm、225nm、250nm、 275nm、300nm、325nm、350nm、375nm、400nm、425nm、450nm 或 475nm 的直徑。在一些具體實施方式中，納米載體的群體中10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有100-400nm、100-300nm、100-250nm或100-200nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有 60-400nm、60-350nm、60-300nm、60-250nm 或 60_200nm 的直徑。在一些前述的具體實施方式中，納米載體為納米顆粒。本文提供的納米載體可用于調節(jié)免疫應答(例如增強、抑制、引導或重引導)，并包含免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑和靶試劑中的至少一個。在一些具體實施方式
中，納米載體包含B細胞抗原、T細胞抗原、免疫刺激試劑和靶試劑中的至少一個。在一些具體實施方式中，納米載體包含B細胞抗原、T細胞抗原、免疫刺激試劑和靶試劑中的至少兩個。在一些具體實施方式
中，納米載體包含B細胞抗原、T細胞抗原、免疫刺激試劑和靶試劑中的至少三個。在一些具體實施方式
中，納米載體包含B細胞抗原、T細胞抗原、免疫刺激試劑和靶試劑的全部四者。在一些具體實施方式
中，納米載體包含B細胞抗原。B細胞抗原可以在納米載體的表面，包埋于納米載體內或二者皆有。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原以激活B細胞受體的密度位于納米載體的表面。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原與納米載體結合。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原與納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原與納米載體非共價結合。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶半體。在一些具體實施方式中，B細胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是小分子。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是令人上癮的物質。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是毒素。在一些具體實施方式
中，包含于納米載體中的毒素是完整分子或其部分。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原不是T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是碳水化合物。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。變應原是指能夠在易感個體中誘導過敏性反應的物質(抗原)。變應原的名單是巨大的，包括花粉、昆蟲毒素、動物皮屑、真菌孢子和藥物(例如盤尼西林)。變應原還包括食物變應原。
在一些具體實施方式
中，納米載體包含T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原在納米載體的表面，包埋于納米載體內或二者皆有。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原與納米載體結合。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原與納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原與納米載體非共價結合。在一些具體實施方式
中，抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。在一些具體實施方式
中， T細胞抗原是“普遍的”T細胞抗原(即可以與不相關B細胞抗原使用的T細胞抗原，包括碳水化合物，以刺激T細胞輔助)。在一些具體實施方式
中，納米載體還包括靶半體。在一些具體實施方式
中，納米載體同時包含B細胞抗原和T細胞抗原。在一些具體實施方式中，B細胞抗原和T細胞抗原是不同的抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原和T細胞抗原是相同的抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原位于納米載體表面(例如共價或非共價結合)或同時位于納米載體表面(例如共價或非共價結合)和包埋于納米載體內(例如共價或非共價結合)，而T細胞抗原位于納米載體表面(例如共價或非共價結合)，包埋于納米載體內(例如共價或非共價結合)，或同時位于納米載體表面(例如共價或非共價結合)和包埋于納米載體內(例如共價或非共價結合)。在一些具體實施方式
中，當納米載體同時包含B細胞抗原和T細胞抗原時，納米載體還包含免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑位于納米載體表面和/或包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑與納米載體結合。在一些具體實施方式中，免疫刺激試劑與納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑與納米載體非共價結合。在一些具體實施方式
中，當納米載體同時包含B細胞抗原和T細胞抗原時，納米載體還包含靶試劑。在一些具體實施方式
中，靶試劑位于納米載體表面。在一些具體實施方式中，靶試劑與納米載體結合。在一些具體實施方式
中，靶試劑與納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，靶試劑與納米載體非共價結合。在一些具體實施方式
中，當納米載體同時包含B細胞抗原和T細胞抗原時，納米載體還包含免疫刺激試劑和靶試劑。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑位于納米載體表面(例如共價或非共價結合)和/或包埋于納米載體內(例如共價或非共價結合)，而靶試劑位于納米載體表面(例如共價或非共價結合)。在一些具體實施方式
中，納米載體包含免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑位于納米載體表面。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑既位于納米載體表面又包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，位于納米載體表面的免疫刺激試劑與包埋于納米載體內的免疫刺激試劑是不同的。在一些具體實施方式
中，位于納米載體表面的與包埋于納米載體內的免疫刺激試劑是相同的。在一些具體實施方式
中，納米載體包含一種以上的免疫刺激試劑，其中免疫刺激試劑是不同的。在一些具體實施方式
中，納米載體包含免疫刺激試劑和抗原。在一些具體實施方式中，抗原是B細胞抗原或T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑是免疫抑制試劑(抑制免疫應答)。在一些具體實施方式
中，免疫抑制試劑是環(huán)孢霉素、類固醇、氨甲蝶呤或任何干擾T細胞激活的試劑。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑誘導調節(jié)性T 細胞(例如TGF-β、雷帕霉素或維甲酸)。在一些具體實施方式
中，誘導調節(jié)性T細胞的免疫抑制劑或試劑促進對抗原耐受的獲得。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶試劑。在一些具體實施方式
中，納米載體可用于抑制個體中的免疫系統(tǒng)和/或促進耐受。在一些具體實施方式
中，納米載體包含免疫刺激試劑，納米載體還包含B細胞抗原和/或T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是小分子。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是碳水化合物。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是令人上癮的物質。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是毒素。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原是普遍的T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶試劑。在一些具體實施方式
中，納米載體可用于在個體中誘導或增強對弱免疫原性的抗原(例如小分子或碳水化合物)的免疫應答。在一些具體實施方式
中，納米載體可用于在個體中誘導或增強對令人上癮的物質的免疫應答。在一些具體實施方式
中，納米載體可用于在個體中誘導或增強對毒素的免疫應答。在一些具體實施方式
中，納米載體可用于治療上癮的個體或易于上癮的個體。在一些具體實施方式
中，納米載體可用于治療已經暴露于或即將暴露于毒素的個體。在一些具體實施方式
中，納米載體可用于治療和/或預防傳染性疾病、癌癥、過敏癥、哮喘(包括過敏性哮喘)或自身免疫疾病(包括類風濕性關節(jié)炎)。在其它具體具體實施方式
中，納米載體可用于免疫抑制(與移植物聯(lián)合)以改善移植排斥。在一些具體實施方式
中，納米載體包含靶半體。在一些具體實施方式
中，靶半體位于納米載體表面。在一些具體實施方式
中，靶半體與納米載體結合。在一些具體實施方式
中，靶半體與納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，靶半體與納米載體非共價結合。在一些方面，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含(a)聚合物與抗原的偶聯(lián)體，(b)聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體，和/或(c)聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，納米載體包含聚合物與抗原的偶聯(lián)體，和聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，納米載體包含聚合物與抗原的偶聯(lián)體，和聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，納米載體包含聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體，和聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，納米載體包含聚合物與抗原的偶聯(lián)體、聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體，和聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián) 體是共價偶聯(lián)體或非共價偶聯(lián)體或其任意組合。在一些具體實施方式
中，抗原是B細胞抗原。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含聚合物與T細胞抗原的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式中，這樣的偶聯(lián)體是共價的或非共價的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，抗原是T 細胞抗原。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含聚合物與B細胞抗原的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，這樣的偶聯(lián)體是共價的或非共價的偶聯(lián)體。
在一些方面，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含符合下列公式 X-L1-Y-L2-Z的分子，其中X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半體、免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑或藥學試劑，Ll和L2是鍵或連接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同時不存在。在一些具體實施方式
中，納米載體包含抗原、免疫刺激試劑或二者皆有。在一些具體實施方式
中，藥學試劑是抗原。在一些具體實施方式
中，抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。Z可以是本文描述的任何抗原。在一些具體實施方式
中，Z是靶半體。在一些具體實施方式
中，Z是與細胞表面表達的受體結合的靶半體。在一些具體實施方式
中，Z是與可溶性受體結合的靶半體。在一些具體實施方式
中，可溶性受體是補體蛋白或預先存在的抗體。在一些具體實施方式
中，靶半體用于將納米載體輸送至抗原呈遞細胞、T細胞或B細胞。在一些具體實施方式
中，抗原呈遞細胞是樹突狀細胞(DC)、濾泡樹突狀細胞(FDC)或巨噬細胞。在一些具體實施方式中，巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞(SCS-Mph)。在一些具體實施方式
中，Y是PEG或ΡΕ0。在一些具體實施方式
中，Y是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實施方式
中，X是 PLGA、PLA或PGA。在一些具體實施方式
中，Z不存在。在一些方面，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，組合物還包含抗原和/或靶半體。在一些具體實施方式
中，抗原、靶半體和免疫刺激試劑中至少有一個與可溶于水的非吸附性聚合物偶聯(lián)。在一些具體實施方式中，抗原、靶半體和免疫刺激試劑中至少有一個與生物可降解聚合物偶聯(lián)。在一些具體實施方式中，抗原、靶半體和免疫刺激試劑中至少有一個與生物可兼容聚合物偶聯(lián)。在一些具體實施方式中，生物可兼容聚合物為可溶于水的非吸附性聚合物偶聯(lián)至生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，抗原是B細胞抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原不是T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含T細胞抗原。在一些具體實施方式中，抗原是T細胞抗原。在一些方面，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含小分子、免疫刺激試劑和T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，小分子在納米載體的表面，或同時在納米載體的表面和包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，小分子是令人上癮的物質。在一些具體實施方式
中，令人上癮的物質是尼古丁。在一些具體實施方式
中，小分子是毒素。在一些具體實施方式
中，毒素來自于化學武器、生物戰(zhàn)的試劑或有害的環(huán)境中的試劑。在一些具體實施方式中，小分子偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑在納米載體的表面，或同時在納米載體的表面和包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物或生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶半體。在一些具體實施方式中，靶半體偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，可溶于水的非吸附性聚合物是PEG或PEO。在一些具體實施方式
中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實施方式
中，生物可降解聚合物是PLGA、PLA或PGA。在一些具體實施方式中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。
在一些具體實施方式
中，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含尼古丁、免疫刺激試劑、T細胞抗原和靶半體。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑是TLR 7/8 激動劑。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑是R848(也稱為CL097)或咪喹莫特。在一些具體實施方式
中，尼古丁在納米載體的表面，或同時在納米載體的表面和包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，尼古丁偶聯(lián)至聚合物，優(yōu)選為共價偶聯(lián)。在一些具體實施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，尼古丁偶聯(lián)至生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑在納米載體的表面，包埋于納米載體內，或同時在納米載體的表面和包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑偶聯(lián)至生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，靶半體偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，靶半體偶聯(lián) 至生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，可溶于水的非吸附性聚合物是PEG或ΡΕ0。在一些具體實施方式
中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實施方式
中，生物可降解聚合物是PLGA、PLA或PGA。在一些具體實施方式
中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。在本文提供的任何納米載體的一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑包埋于納米載體內。在這些具體實施方式
中的一些，免疫刺激試劑是R848、TLR9激動劑(例如CpG/含有 CpG的核酸)。在一些具體實施方式
中，這樣的納米載體可用于激活⑶4T細胞和/或⑶8T 細胞。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑(例如R848或TLR9激動劑)是非偶聯(lián)的。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑(例如R848或TLR9激動劑)偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)是共價的。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)是非共價的。在一些具體實施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是PEG-PLA或PLA。在任何這些具體實施方式
中，納米載體還可以包含T細胞抗原。在一些方面，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體包含弱免疫原性抗原、免疫刺激試劑和T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原在納米載體的表面，或同時在納米載體的表面和包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是小分子或碳水化合物。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是令人上癮的物質。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是毒素。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原共價偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑在納米載體的表面，或同時在納米載體的表面和包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑共價偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具體實施方式中，納米載體還包含靶半體。在一些具體實施方式
中，靶半體共價偶聯(lián)至聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些方面，提供了包含納米載體的組合物，所述納米載體靶向特異性細胞、組織或器官并調節(jié)免疫應答，所述納米載體包含以激活B細胞的密度位于其表面的B細胞抗原，以及免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶半體。在一些具體實施方式中，組合物是藥物組合物并還包含藥學上可接受的載體。在一些具體實施方式
中，藥物組合物是疫苗組合物。在一些方面，提供了包含抗原呈遞細胞-靶半體和納米載體的組合物例如藥物組合物。在一些具體實施方式
中，抗原呈遞細胞-靶半體和納米載體是偶聯(lián)的。在一些具體實施方式中，偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)體是非共價偶聯(lián)體。
在一些方面，提供了包含免疫刺激試劑和納米載體的組合物例如藥物組合物。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑和納米載體是偶聯(lián)的。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)體是非共價偶聯(lián)體。在一些方面，提供了包含符合公式X-L1-Y-L2-Z的分子的組合物，其中X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半體、免疫調節(jié)試劑、免疫刺激試劑或藥學試劑，Ll和L2是鍵或連接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同時不存在。在一些方面，提供了包含符合公式T-L1-X-L2-Y-L3-Z的分子的組合物，其中T是 T細胞抗原，X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半體、免疫刺激試劑或藥學試劑，Li、L2和L3是鍵或連接分子，其中T、Y和Z中任意一個或任意兩個可以不存在，但T、Y和Z不能三者同時不存在。在一些具體實施方式
中，藥學試劑是抗原。在一些具體實施方式
中，抗原是B細胞抗原或T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，Z是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、半抗原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。在一些具體實施方式
中，Z是任一種本文描述的B細胞抗原。在一些具體實施方式
中，Z是任一種本文提供的T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，Z是與細胞表面表達的受體結合的靶半體。在一些具體實施方式中，Z是與可溶性受體結合的靶半體。在一些具體實施方式
中，可溶性受體是補體或預先存在的抗體。在一些具體實施方式
中，靶半體用于靶向抗原呈遞細胞、τ細胞或B細胞。在一些具體實施方式
中，Y是PEG或ΡΕ0。在一些具體實施方式
中，Y是聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。在一些具體實施方式
中，X是PLGA、PGA或PLA。在一些具體實施方式
中，Z不存在。在一些具體實施方式
中，Y不存在。在一些方面，提供了包含免疫刺激試劑和聚合物的偶聯(lián)體的藥物組合物。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)體是非共價偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，生物可兼容聚合物是生物可降解聚合物或可溶于水的非吸附性聚合物。在一些具體實施方式中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián) 體。在一些具體實施方式
中，聚合物是合成的。在一些具體實施方式
中，藥物組合物包含一個或多個納米載體，其中偶聯(lián)體是一個或多個納米載體的成分。在一些具體實施方式
中，組合物還包含抗原。在一些具體實施方式
中，藥物組合物不包含抗原。在一些具體實施方式
中，組合物還包含靶試劑。在一些方面，提供了包含免疫刺激試劑和聚合物的偶聯(lián)體的疫苗組合物。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，偶聯(lián)體是非共價偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚乙二醇。在一些具體實施方式
中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具體實施方式
中，生物可兼容聚合物是生物可降解聚合物或可溶于水的非吸附性聚合物。在一些具體實施方式
中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。在一些具體實施方式
中，聚合物是合成的。在一些具體實施方式
中，藥物組合物包含一個或多個納米載體，其中偶聯(lián)體是一個或多個納米載體的成分。在一些具體實施方式
中，組合物還包含抗原。在一些具體實施方式
中，藥物組合物不包含抗原。在一些具體實施方式
中，組合物還包含靶試劑。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是蛋白或肽。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是非蛋白抗原(即不是蛋白或肽)。在一些具體實施方式
中，蛋白或肽來自傳染性試齊U。在一些具體實施方式
中，傳染性試劑是細菌、真菌、病毒、原生動物或寄生蟲。在一些具體實施方式中，病毒是痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒、人類乳頭瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、委內端拉馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是小分子。在一些具體實施方式
中，小分子是被濫用的物質、令人上癮的物質或毒素。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是令人上癮的物質。在一些具體實施方式
中，令人上癮的物質是尼古丁、麻醉藥、迷幻劑、刺激物、咳嗽抑制劑、鎮(zhèn)定劑或止痛藥。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是鴉片或苯化重氮。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是毒素。在一些具體實施方式
中，毒素來自化學武器。在一些具體實施方式
中，來自化學武器的毒素是肉毒桿菌毒素或磷雜環(huán)戊二烯 (phosphene) 0來自化學武器的毒素還包括但不限于0_烷基(<C10，包括環(huán)烷基)烷基 (Me、Et、n-Pr或i_Pr)-磷酸氟化物(例如，沙林甲基氟膦酸0-異丙酯，梭曼甲基氟磷酸0-叔己酯)，0-烷基(< ClO，包括環(huán)烷基)N，N-二烷基⑶一^^寸！“或丨- !·)磷胺氰化物(例如，塔崩N，N-二甲氨基氰基磷酸0-乙酯)，0-烷基氓或<(10，包括環(huán)烷基) S-2- 二烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)-氨基乙基烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)硫代磷酸鹽及相應的烷基化或質子化鹽(例如，VX 0-乙基S-2- 二異丙基氨基乙基甲基硫代磷酸鹽)，硫芥子氣2-氯乙基氯甲基硫醚，芥子氣雙(2-氯乙基)硫醚、雙(2-氯乙基硫)甲烷，倍半芥子氣1，2-雙(2-氯乙基硫)乙烷、1，3-雙(2-氯乙基硫)-η-丙烷、1，4-雙(2-氯乙基硫)-η-丁烷、1，5-雙(2-氯乙基硫)-η-戊烷、雙(2-氯乙基硫甲基)乙醚，O-芥子雙 (2-氯乙基硫乙基)乙醚，路易斯毒氣(Lewisite)路易斯毒氣1 :2_氯乙烯二氯胂，路易斯毒氣2:雙(2-氯乙烯)氯胂，路易斯毒氣3:三(2-氯乙烯)腫，氮芥HN1 雙(2-氯乙基)乙胺，HN2:雙(2-氯乙基)甲胺，HN3:三(2-氯乙基)胺，蛤蛘毒素，蓖麻毒素，阿米噸 (Amiton) :0，O-二乙基S-(2-( 二乙基氨基)乙基)硫代磷酸酯及相應的烷基化或質子化的鹽，PFIB 1，1，3，3，3-五氟-2-(三氟甲基)-1-丙烯，二苯羥乙酸_3_喹嚀環(huán)酯(BZ)，光氣碳酰氯，氯化氰，氰化氫和三氯硝基甲三氯硝基甲烷。在一些具體實施方式
中，納米載體中包含的毒素是上述任何一項的完整分子或其一部分。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是生物危害性或有害的環(huán)境中的試劑。在一些具體實施方式
中，有害的環(huán)境中的試劑是砷、鉛、汞、氯乙烯、多氯聯(lián)苯、苯、多環(huán)芳香烴、鎘、苯并(a)芘、苯并(b)熒蒽、氯仿、二氯-二苯基-三氯乙烯(DDT)，P，P’ _、阿羅克洛 1254(aroclor 1254)，阿羅克洛 1260 (aroclor 1260)、二苯并(a, h)蒽、三氯乙烯、狄氏劑 (dieldrin)、六價鉻或ρ, ρ，- 二氯二苯基二氯乙烯(DDE, P，P，)。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是碳水化合物。在一些具體實施方式
中，碳水化合物來自傳染性試劑。在一些具體實施方式
中，傳染性試劑是細菌、真菌、病毒、原生動物或寄生蟲。在一些具體實施方式
中，細菌是假單胞菌屬(Pseudomonas)、月市炎球菌屬(Pneumococcus)、大腸桿菌(E. coli)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、鏈球菌屬(Str印tococcus)、密螺旋體(Tr印onema)、包柔氏螺旋體(Borrelia)、衣原體(Chlamydia)、嗜血桿菌屬(Haemophilus)、梭菌屬(Clostridium)、沙門氏菌屬(Salmonella)、軍團桿菌屬(Legionella)、弧菌(Vibrio)或腸球菌(Enterococci bacterium)或分支桿菌(Mycobacterium)屬。在一些具體實施方式
中，病毒是痘病毒(pox virus)、小痘病毒(smallpox virus)、埃博拉病毒(ebola virus)、馬爾堡病毒(marburg virus)、登革熱病毒(dengue fever virus)、流感病毒(influenza virus)、畐Ij流感病毒 (parainfluenza virus)、呼吸(respiratory syncytial virus) (rubeola virus)、人類免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus)、人類乳頭瘤病毒 (human papillomavirus) >7jC|ll - W'^M^'MM (varicella-zoster virus)
毒(herpes simplex virus)、細胞巨化病毒(cytomegalovirus)、EB 病毒(Epstein-Barr virus)、JC 病毒(JC virus)、棒狀病毒(rhabdovirus)、輪狀病毒(rotavirus)、鼻病毒(rhinovirus)、腺病毒(adenovirus)、乳頭瘤病毒(papillomavirus)、細小病毒 (parvovirus)、小核糖核酸病毒(picornavirus)、脊髓灰質炎病毒(poliovirus)、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒(reovirus)、風疹病毒(rubella virus)、夕卜衣病毒(togavirus)、粘病毒(orthomyxovirus)、逆轉錄病毒(retrovirus)、嗜肝DNA 病毒(h印adnavirus)、柯薩奇病毒(coxsackievirus)、委內端拉馬腦脊髓炎病毒(equine encephalitis virus)、日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus)、黃熱病毒(yellow fever virus)、裂谷熱病毒(Rift Valley fever virus)、甲月干病毒(hepatitis A virus) > 乙月干病毒(hepatitisB virus)、丙月干病毒(hepatitis C virus)、丁月干病毒(hepatitis D virus) 或戊月干病毒(hepatitis E virus)。
在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是自身抗原。在一些具體實施方式
中，自身抗原是蛋白或肽、脂蛋白、脂、碳水化合物或核酸。在一些具體實施方式
中，自身抗原是酶、結構蛋白、分泌的蛋白、細胞表面受體或細胞因子。在一些具體實施方式
中，細胞因子是TNF、 IL-1或IL-6。在一些具體實施方式
中，自身抗原是膽固醇酯轉移蛋白(CETP)、與Alzheimer 病相關的A0蛋白、處理A0蛋白的病理形式的蛋白水解酶、與動脈硬化癥相關的LDL或 HIV-1的共同受體。在一些具體實施方式
中，處理A0蛋白的病理形式的蛋白水解酶是 3 -分泌酶。在一些具體實施方式
中，與動脈硬化癥相關的LDL是氧化的或最小化修飾的。在一些具體實施方式
中，HIV-1的共同受體是CCR5。在一些具體實施方式
中，自身抗原是自身免疫疾病抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原或代謝性疾病酶或酶產物。在一些具體實施方式
中，抗原是癌癥抗原。在一些具體實施方式
中，癌癥抗原是 Melan-A/MART-1，二肽基肽酶IV(DPPIV)，腺苷脫氨酶結合蛋白(ADAbp)，親環(huán)蛋白b，結腸直腸相關抗原(CRC)—C017-1A/GA733，癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2， etv6,aml 1，前列腺特異性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA_2和PSA-3，前列腺特異性膜抗原(PSMA)，T-細胞受體/CD3-4鏈，腫瘤抗原的MAGE家族(例如，MAGE-A1、MAGE_A2、 MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、 MAGE-A12、MAGE-Xp2 (MAGE-B2)、MAGE_Xp3 (MAGE-B3)、MAGE_Xp4 (MAGE-B4)、MAGE-C1、 MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)，腫瘤抗原的 GAGE 家族(例如，GAGE-1、GAGE-2、 GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)，BAGE,RAGE,LAGE-1，NAG，GnT-V, MUM-1，CDK4，酪氨酸酶，p53，MUC 家族，HER2/neu，p21ras，RCAS1，a -胎蛋白，E_ 鈣粘附蛋白，a-鈣緊張素(catenin), 3 -鈣緊張素和 Y -鈣緊張素，pl20ctn，gplOO^1117, PRAME, NY-ES0-1，大腦糖原磷酸酶，SSX-1，SSX-2 (H0M-MEL-40)，SSX-1，SSX-4，SSX-5，SCP-1，CT-7， cdc27，腺瘤樣的結腸息肉病蛋白(APC)，胞襯蛋白(偽(11^11)，？認，連接蛋白37，18-獨特型， pl5，gp75，GM2和GD2神經節(jié)苷脂，病毒產品例如人乳頭瘤病毒蛋白，腫瘤抗原的Smad家族， lmp-1，EBV 編碼的核抗原 BNA)-1，或 c-erbB-2。在一些具體實施方式
中，傳染性疾病抗原是病毒抗原。在一些具體實施方式
中，病毒抗原是來自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒、人類乳頭瘤病毒、水痘_帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、委內端拉馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是弱免疫原性抗原。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是非蛋白抗原。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是碳水化合物或小分子。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是被濫用的物質、令人上癮的物質或毒素。在一些具體實施方式
中，毒素來自化學武器。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是有害的環(huán)境中的試劑。在一些具體實施方式
中，弱免疫原性抗原是自身抗原。
一般地，T細胞抗原是蛋白或肽。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、接觸致敏劑、半抗原或代謝性疾病酶或酶產物。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原來自傳染性試劑。在一些具體實施方式
中，傳染性試劑是細菌、真菌、病毒、原生動物或寄生蟲。在一些具體實施方式
中，傳染性疾病抗原是病毒抗原。在一些具體實施方式
中，病毒抗原是來自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒、人類乳頭瘤病毒、水痘一帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、委內端拉馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原是普遍T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，普遍T細胞抗原是源自破傷風類毒素、EB病毒或流感病毒的一個或多個肽。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑是白細胞介素、干擾素、細胞因子等。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑是Toll樣受體(TLR)激動劑、細胞因子受體激動劑、CD40 激動劑、Fc受體激動劑、含有CpG的免疫刺激核酸、補體受體激動劑或佐劑。在一些具體實施方式中，TLR 激動劑是 TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9 或TLR-10激動劑。在一些具體實施方式
中，F(xiàn)c受體激動劑是Fc-Y受體激動劑。在一些具體實施方式
中，補體受體激動劑與CD21或CD35結合。在一些具體實施方式
中，補體受體激動劑誘導納米載體的內源性補體調理。在一些具體實施方式
中，細胞因子受體激動劑是細胞因子。在一些具體實施方式
中，細胞因子受體激動劑是小分子、抗體、融合蛋白或適配子(aptamer)。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑是佐劑。在一些具體實施方式
中，佐劑誘導細胞因子的生物合成。在一些具體實施方式
中，佐劑是明礬、MF59、R848、霍亂毒素、鯊烯、磷酸鹽佐劑或四氯十氧化物。在一些具體實施方式
中，佐劑是單磷酸類脂A(MPL， SmithKline Beecham)；皂角苷包括 QS21 (SmithKline Beecham)；免疫刺激寡核苷酸(例如，Kreig等人，Nature 374 :546_9，1995首先描述的CpG免疫刺激寡核苷酸)；不完全弗氏佐劑；完全弗氏佐劑；montanide ；維生素E和各種由生物可降解油(例如鯊烯和/或生育酚、Quil A、RibiDetox、CRL-1005 或 L-121)制備的油包水乳劑。在特異的具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是天然或合成的Toll樣受體(TLR) 的激動劑。在特異的具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是tol 1樣受體(TLR) -7 (例如CpG，其誘導I型干擾素的產生)的配體；DC表面分子CD40的激動劑；促進DC成熟的試劑；TLR-4 激動劑；細胞因子；從壞死細胞中釋放的促炎性刺激劑(例如尿酸鹽晶體)；激活的補體級聯(lián)成分(例如⑶21、⑶35等)；等等。在一些具體實施方式
中，靶半體結合至細胞表面表達的受體。在一些具體實施方式中，靶半體結合至可溶性受體。在一些具體實施方式
中，可溶性受體是補體蛋白或預先存在的抗體。在一些具體實施方式
中，靶半體用于將納米載體輸送至抗原呈遞細胞、T細胞或 B細胞。在一些具體實施方式
中，抗原呈遞細胞是巨噬細胞。在一些具體實施方式
中，巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞。在一些具體實施方式
中，抗原呈遞細胞是樹突狀細胞。在一些具體實施方式
中，抗原呈遞細胞是濾泡樹突狀細胞。在一些具體實施方式
中，靶半體是與⑶lib、⑶169、甘露糖受體、DEC-205、⑶11c、 ⑶21/⑶35、CX3CR1或Fc受體結合的分子。在一些具體實施方式
中，靶半體是與⑶169、 CX3CR1或Fc受體結合的分子。在一些具體實施方式
中，與⑶169結合的分子是抗-⑶169 抗體。在一些具體實施方式
中，與CX3CR1結合的分子是CX3CL1 (fractalkine)。在一些具體實施方式中，靶半體包含免疫球蛋白的Fc部分。在一些具體實施方式
中，靶半體包含IgG 的Fc部分。在一些具體實施方式
中，免疫球蛋白的Fc部分是人類免疫球蛋白的Fc部分。在一些具體實施方式
中，IgG的Fc部分是人類IgG的Fc部分。在一些具體實施方式
中，靶半體是可溶性受體，CRFc。在一些具體實施方式
中，CRFc可用于靶向被膜下竇中的巨噬細胞但不靶向髓質的巨噬細胞。在一些具體實施方式
中，靶半體是一個或多個胺半體。在一些方面，本文提供的組合物是免疫原性的。在一些方面，提供了一種方法，包括向個體施用有效量的本文提供的任意組合物以調節(jié)免疫應答。在一些具體實施方式
中，組合物為有效誘導或增強免疫應答的量。在一些具體實施方式
中，組合物為有效抑制免疫應答的量。在一些具體實施方式
中，組合物為引導或重引導免疫應答的量。在一些具體實施方式
中，方法用于預防和/或治療本文鑒別的癥狀。在一些具體實施方式
中，當方法用于誘導或增強免疫應答時，個體患有或者易于患上癌癥、傳染性疾病、非自身免疫代謝或退行性疾病、變態(tài)反應性疾病、過敏性疾病或上癮癥。在一些具體實施方式
中，個體已經暴露于或可能暴露于毒素。在一些具體實施方式
中，個體已經暴露于或可能暴露于來自化學武器的毒素。在一些具體實施方式
中，個體已經暴露于或可能暴露于來自有害的環(huán)境物質的毒素。在一些具體實施方式
中，納米載體包含B 細胞抗原、免疫刺激試劑和T細胞抗原，例如普遍T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶半體。在一些具體實施方式
中，當方法用于治療或預防上癮癥(或用于治療已經暴露于或可能暴露于毒素的個體)時，納米載體還包含令人上癮的物質或毒素、佐劑和T細胞。在一些具體實施方式
中，方法在攻擊性試劑到達其效應位點(例如大腦時)產生結合并中和攻擊性試劑的高效價抗體。在一些具體實施方式
中，令人上癮的物質或毒素以高密度存在于納米載體表面。在一些具體實施方式
中，傳染性疾病是慢性病毒感染。在一些具體實施方式
中，慢性病毒感染是HIV、HPV、HBV或HCV感染。在一些具體實施方式
中，傳染性疾病是細菌感染或由細菌感染引起。在一些具體實施方式
中，個體患有或易于患上假單胞菌感染、肺炎球菌感染、肺結核、瘧疾、利什曼病、幽門螺旋桿菌、葡萄狀球菌感染或沙門氏菌感染。在一些具體實施方式中，傳染性疾病是真菌感染或由真菌感染引起。在一些具體實施方式
中，傳染性疾病是寄生蟲感染或由寄生蟲感染引起。在一些具體實施方式
中，傳染性疾病是原生動物感染或由原生動物感染引起。在一些具體實施方式
中，個體患有或易于患上流感。在一些具體實施方式
中，當方法用于抑制或重引導免疫應答時，個體患有或易于患上過敏性疾病或自身免疫疾病。在一些具體實施方式
中，個體具有食物過敏癥。在一些具體實施方式
中，個體對奶或其它奶成分(例如乳糖)、雞蛋、花生、樹木果仁(胡桃仁、腰果仁等)、魚類、貝殼、大豆或小麥過敏。在一些具體實施方式
中，方法用于使個體對抗原例如
33變應原產生耐受。在一些具體實施方式
中，自身免疫疾病是狼瘡、多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、I型糖尿病、炎癥性腸病、甲狀腺炎或腹腔疾病。在一些具體實施方式
中，個體已經接受或即將接受移植，方法可用于防止或改善移植排斥。在一些具體實施方式
中，納米載體包含抗原和免疫抑制劑或誘導調節(jié)性T細胞的試劑。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶半體。一般地，當方法用于抑制免疫應答時，抗原以不含佐劑的方式提供。在一些用于治療過敏癥的具體實施方式
中，納米載體包括變應原和免疫刺激試劑 (例如佐劑，如TLR激動劑)。在一些具體實施方式
中，組合物以調節(jié)免疫應答(例如從Th2到Thl免疫應答) 的有效量施用。在一些具體實施方式
中，個體患有或即將患上過敏性疾病。在一些具體實施方式中，納米載體包含抗原例如變應原，和免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，納米載體還包含靶半體。在一些方面，提供了用于將免疫調節(jié)試劑輸送到免疫系統(tǒng)細胞的疫苗納米載體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一個能夠誘導B細胞和/或T細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑。在確定的具體實施方式
中，存在于納米載體表面的免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，和包埋于納米載體內的免疫調節(jié)試劑被處理并被呈遞至T細胞。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體包含至少一個用于將疫苗納米載體選擇性地輸送至特異性抗原呈遞細胞(APC)的靶半體。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包含分離的和/或重組蛋白或肽、碳水化合物、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、滅活的生物和病毒、死的生物和病毒、遺傳改變的生物或病毒，和細胞提取物。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包含核酸、碳水化合物、脂和/或小分子。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是引發(fā)免疫應答的試劑。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是抗原。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑用于疫苗。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是任何源自病原體的蛋白和/或其它抗原。病原體可以是病毒、細菌、真菌、原生動物、寄生蟲等。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以為完整的被殺死的生物、肽、蛋白、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、碳水化合物或其組合的形式。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的所有的免疫調節(jié)試劑彼此相同。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的所有的免疫調節(jié)試劑是不同的。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體精確地包含一類獨特類型的(即一種)免疫調節(jié)試劑。例如，當免疫調節(jié)試劑是抗原時，疫苗納米載體中的所有的抗原都是相同的。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體精確地包含兩類不同類型的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩類以上不同類型的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含單一類型的刺激B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含單一類型的刺激T細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫調節(jié)試劑，其中第一種類型免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，和第二種類型免疫調節(jié)試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式
中，所有上述試劑可以同時刺激B細胞和T細胞，但不是必須這樣。在確定具體實施方式
中，上述免疫調節(jié)試劑分別只刺激B細胞或T細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型的免疫調節(jié)試劑，其中一種或多種類型免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，和一種或多種類型免疫調節(jié)試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含脂膜(例如脂雙層、脂單層等)。至少一個免疫刺激試劑可以與脂膜結合。在一些具體實施方式
中，至少一個免疫刺激試劑嵌入脂膜內，嵌入脂雙層的腔內，與脂膜的內表面結合，和/或包埋于疫苗納米載體的脂膜內。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含聚合物(例如聚合物核心)。免疫調節(jié)試劑可以與聚合物結合，和在一些具體實施方式
中，至少一種類型的免疫調節(jié)試劑與聚合物結合。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑嵌入聚合物內，與聚合物的內表面結合，和/或包埋于疫苗納米載體的聚合物內，和，在一些具體實施方式
中，至少一種類型的免疫調節(jié)試劑嵌入聚合物內，與聚合物的內表面結合，和/或包埋于疫苗納米載體的聚合物內。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含90%重量以下的、75%重量以下的、50%重量以下的、40%重量以下的、30%重量以下的、20%重量以下的、15%重量以下的、10%重量以下的、5%重量以下的、重量以下的、或者0.5%重量以下的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體與至少一個靶半體結合。在一些具體實施方式中，靶半體可以是核酸、多肽、肽、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、碳水化合物、脂、小分子等。例如，靶半體可以是結合至細胞類型特異性標記物的核酸靶半體(例如適配子Spiegelmer 等)。在一些具體實施方式
中，靶半體可以是針對細胞表面蛋白的天然產生的或合成的配體，例如DEC-205、⑶169、⑶lib等。靶半體的例子還包括本文其它地方提供的那些，例如上文描述的那些。根據本發(fā)明，靶半體識別一個或多個與特定的器官、組織、細胞和/或亞細胞位點相關的“靶”或“標記物”。在一些具體實施方式
中，靶可以是與一個或一些細胞類型、與一個或一些疾病，和/或與一個或一些發(fā)育階段唯一相關或主要相關的標記物。所靶向的細胞的例子包括抗原呈遞細胞(APC)，例如樹突狀細胞、濾泡樹突狀細胞和巨噬細胞。巨噬細胞的一個例子是被膜下竇巨噬細胞。所靶向的其它的細胞包括T細胞和B細胞。在一些具體實施方式中，靶可以包含蛋白、碳水化合物、脂和/或核酸。在一些具體實施方式
中，靶是腫瘤標記物。在一些具體實施方式
中，靶是APC標記物。在一些具體實施方式
中，靶是T細胞標記物。在一些具體實施方式
中，靶半體靶向次級淋巴組織或器官。次級淋巴組織或器官包括淋巴結、脾、派亞氏淋巴叢、闌尾或扁桃體。在一些具體實施方式
中，靶是樹突狀細胞標記物。在一些具體實施方式
中，DC標記物包括 DC-205、CDllc、II 類 MHC、CD80、CD86、DC-SIGN、CDllb、BDCA-1、BDCA-2、BDCA-4、 Siglec-H、CX3CR1和/或Langerin。這樣的標記物的例子在本文其它地方提供。在一些具體實施方式
中，靶是被膜下竇巨噬細胞標記物。在一些具體實施方式
中， SCS-Mph標記物包括CD169 (即唾液酸粘附素)、CDllb (即 CDllb/CD18、Mac_l、CR3 或 a M3 2 整合素)、Fc受體，和/或甘露糖受體(即多價血凝素)，這些蛋白皆為主要在SCS-Mph上表達。這樣的標記物的例子在本文其它地方提供。在一些具體實施方式
中，靶是B細胞標記物。在一些具體實施方式
中，B細胞標記物可以包括補體受體、CR1 (即⑶35)或CR2(即⑶21)，這些蛋白是B細胞上表達的。在一些具體實施方式
中，可以通過B細胞標記物例如⑶19、⑶20和/或⑶22實現(xiàn)靶向B細胞。在一些具體實施方式
中，可以通過B細胞標記物例如ra40、ra52、ra80、CXCR5、VLA-4、II類MHC、表面IgM或IgD、APRL和/或BAFF-R實現(xiàn)靶向B細胞。這樣的標記物的例子在本文其它地方提供。在一些具體實施方式
中，靶是FDC標記物。在一些具體實施方式
中，F(xiàn)DC標記物包括補體受體、CR1(即CD35)或CR2(即CD21)，這些蛋白是FDC上表達的。這樣的標記物的例子在本文其它地方提供。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含單一類型的靶半體，其引導疫苗納米載體輸送至單一的細胞類型(例如僅輸送至SCS-Mph)。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含單一類型的靶半體，其引導疫苗納米載體輸送至多種細胞類型(例如既輸送至 SCS-Mph又輸送至FDC，或既輸送至SCS-Mph又輸送至DC)。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型靶半體，其中第一種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至一種細胞類型，和第二種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至第二種細胞類型。例如，在一些具體實施方式中，第一種類型靶半體弓I導輸送至SCS-Mph，和第二種類型靶半體弓|導輸送至DC。作為另一個例子，第一種類型靶半體引導輸送至SCS-Mph，和第二種靶半體引導輸送至FDC。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含50%重量以下的、40%重量以下的、30%重量以下的、20%重量以下的、15%重量以下的、10%重量以下的、5%重量以下的、重量以下的或0.5%重量以下的靶半體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體可以轉運一種或多種類型的能夠幫助刺激免疫應答的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑通過激活APC以增強其免疫刺激能力而增大免疫應答。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑通過擴大針對特異性抗原的淋巴細胞應答而增大免疫應答。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑通過誘導局部調節(jié)子的釋放(例如從多種細胞類型中釋放細胞因子)而增大免疫應答。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含同時刺激B細胞和T細胞的單一類型的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫刺激試劑，其中第一種類型免疫刺激試劑刺激B細胞，和第二種類型免疫刺激試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體包含兩種以上類型的免疫刺激試劑，其中一種或多種免疫刺激試劑刺激B細胞，和一種或多種類型免疫刺激試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式
中，可以使用多種檢驗來確定在B細胞或一組B細胞，或T細胞或一組T細胞中的免疫應答是否被調節(jié)。在一些具體實施方式
中，檢驗評價細胞或一組細胞是否被“激活”。在一些具體實施方式
中，可以使用多種檢驗來確定在T細胞或一組T細胞中的免疫應答是否被刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過測定抗原誘導的T細胞產生的細胞因子情況而確定T細胞中免疫應答的刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過測定抗原誘導的T細胞的增殖情況而確定T細胞中免疫應答的刺激。在一些具體實施方式
中，如果T 細胞激活的細胞標記物相對于未刺激的細胞在不同水平表達(例如更高或更低的水平)則確定T細胞中有免疫應答。在一些具體實施方式
中，可以使用多種檢驗來確定在B細胞或一組B細胞中的免疫應答是否被刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過以下測定抗體效價、抗體親和性、中和檢驗中的抗體表現(xiàn)、類別轉換重組、抗原特異性抗體的親和成熟、記憶B細胞的發(fā)育、長生血漿細胞(其能夠長時間地產生大量的高親和性抗體)的發(fā)育、生發(fā)中心的反應和/或中和檢驗中的抗體表現(xiàn)而確定B細胞中免疫應答的刺激。疫苗納米載體是包含例如至少一個能夠刺激B細胞和/或T細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑的物質?？梢愿鶕景l(fā)明使用任何疫苗納米載體。在一些具體實施方式
中，納米載體具有最大不超過100微米(ym)的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為300nm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為250nm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為200nm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為150nm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為lOOnm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為25nm至200nm的尺寸范圍。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為20nm至lOOnm的尺寸范圍。根據本發(fā)明可以使用多種不同的納米載體。在一些具體實施方式
中，納米載體為球或橢圓球。在一些具體實施方式
中，納米載體為平的或板狀的。在一些具體實施方式
中，納米載體為立方體或立方形。在一些具體實施方式
中，納米載體為橢圓或橢圓形。在一些具體實施方式中，納米載體為圓柱體、圓錐體或棱錐。納米載體可以是實心的或凹的且可以包含一個或多個層。在一些具體實施方式
中，每個層相對于其它層具有獨特的成分和獨特的特性。僅舉一例，納米載體可以具有核心/殼結構，其中核心是一個層(例如聚合物核心) 而殼是第二個層(例如脂雙層或單層)。納米載體可以包含多個不同的層。在一些具體實施方式中，一個層可以是實質上交聯(lián)的，第二個層不是實質上交聯(lián)的，等等。在一些具體實施方式中，一個層、一些層或所有不同的層可以包含一個或多個免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或其組合。在一些具體實施方式
中，一個層包含免疫調節(jié)試劑、靶半體和/ 或免疫刺激試劑，第二個層不包含免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑，等等。在一些具體實施方式
中，每一個單個的層包含不同的免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/ 或其組合。在一些具體實施方式
中，納米載體可以可選地包含一個或多個脂。在一些具體實施方式中，納米載體是脂質體。在一些具體實施方式
中，納米載體包含脂雙層。在一些具體實施方式中，納米載體包含脂單層。在一些具體實施方式
中，納米載體是膠團(micelle)。在一些具體實施方式
中，納米載體包含由脂層(例如脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的聚合物基質核心。在一些具體實施方式
中，納米載體包含由脂層(例如脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的非聚合物核心(例如金屬顆粒、量子點、陶顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等)。在一些具體實施方式
中，納米載體包含一個或多個聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物基質可由包被層(例如脂質體、脂單層、膠團等)環(huán)繞。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與聚合物基質結合。在這樣的具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑有效包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，共價結合由連接子介導。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑與納米載體非共價結合。例如，在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑包埋于聚合物基質、脂膜等內，或由聚合物基質、脂膜等環(huán)繞，和/或分布在聚合物基質、脂膜等中。作為選擇，抑或是另外，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以通過疏水相互作用、電荷相互作用、范德華力等與聚合物基質、脂膜等結合。眾多的聚合物和從其中形成聚合物基質的方法在藥物輸送領域是已知的。一般地，聚合物基質包含一個或多個聚合物。根據本發(fā)明可以使用任何聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包含兩個或多個單體的共聚物。在序列方面，共聚物可以是無規(guī)，嵌段或包含無規(guī)和嵌段序列的組合。根據本發(fā)明的聚合物可以是有機聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物是樹狀聚合物或聚合物的混合體。聚合物的例子包括聚乙烯，聚碳酸酯(如聚(1，3_二惡烷-2酮))，聚酐(如聚(癸二酸酐))，聚羥基酸(如聚(0-羥基烷酸酯))，聚丙基丁烯二酸酯，聚己內酯，聚酰胺(如聚己內酰胺)，聚縮醛，聚醚，聚酯(如聚乳酸，聚甘醇酸)，聚(原酸酯)，聚腈基丙烯酸酯，聚乙烯醇，聚氨酯，聚磷腈，聚丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸酯，聚脲，聚苯乙烯和聚胺。在一些具體實施方式
中，納米載體包含包埋于反膠團內的免疫調節(jié)試劑。僅舉一例，脂質體納米載體可以包含包埋于脂質體膜內的疏水性免疫調節(jié)試劑，和在脂質體納米載體內部發(fā)現(xiàn)的與反膠團包埋的親水性免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，納米載體不包含聚合物成分。在一些具體實施方式
中，納米載體包含金屬顆粒、量子點、陶顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑與這樣的非聚合物納米載體的表面結合。在一些具體實施方式中，非聚合物納米載體是非聚合物成分的聚集體，例如金屬原子(例如金原子) 的聚集體。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑與非聚合物成分的聚集體的表面結合，包埋于非聚合物成分的聚集體內，由非聚合物成分的聚集體環(huán) 繞，和/或分布在非聚合物成分的聚集體中。在一些具體實施方式
中，納米載體可以可選地包含一個或多個兩性物質(即同時具有親水性和疏水性的物質)。在一些具體實施方式
中，兩性物質可以促進具有增加的穩(wěn)定性、改善的一致性或增加的粘性的納米載體的產生。在一些具體實施方式
中，納米載體包含一個或多個與納米載體的外表面結合和/ 或包埋于納米載體內的納米顆粒?？梢允褂帽绢I域任何已知的方法制備納米載體。例如，顆粒納米載體制劑可以通過以下方法制成例如納米沉淀，使用液體通道的流動聚焦，噴霧干燥，單一和雙乳劑溶劑揮發(fā)，溶劑提取，相分離，碾磨，微乳程序，微細加工，納米級加工，犧牲層，單一和復合凝聚，以及其它本領域普通技術人員熟知的方法。作為選擇，抑或是另外，可以使用用于單分散半導體、導電性的、磁性的、有機的和其它納米顆粒的水性和有機溶劑綜合體。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑不與納米載體共價結合。例如，納米載體可以包含聚合物基質，和免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑等與本發(fā)明的納米載體的聚合物基質的表面結合，包埋于本發(fā)明的納米載體的聚合物基質內，和/或分布在本發(fā)明的納米載體的聚合物基質中。免疫調節(jié)試劑可以通過擴散、納米載體的降解和/或其組合而被釋放。在一些具體實施方式
中，納米載體的聚合物通過骨架侵蝕而降解。在一些具體實施方式
中，納米載體的聚合物通過表面侵蝕而降解。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑與顆粒共價結合。在一些具體實施方式
中，共價結合通過一個或多個連接子介導。根據本發(fā)明可以使用任何合適的連接子。在一些具體實施方式
中，連接子是可切割的連接子(例如酯鍵、酰胺鍵、二硫鍵等)。在一些具體實施方式
中，納米載體通過自組裝制備。作為例子，將脂與親脂性免疫調節(jié)試劑混合，然后在固體表面制成薄膜。將親水性免疫調節(jié)試劑溶于水性溶液，然后加入脂膜中在振蕩中將脂水解。將具有親脂性免疫調節(jié)試劑的脂質體整合入雙層壁中，和脂質體腔內的親水性免疫調節(jié)試劑自發(fā)組裝。在一些具體實施方式
中，將預制的聚合物納米顆粒在輕微振蕩下與小脂質體混合以誘導脂質體融合至聚合物納米顆粒表面。作為另一個例子，首先將待包埋的親水性免疫調節(jié)試劑通過在揮發(fā)性的可與水混溶的有機溶劑中與天然來源的且非毒性的兩性物質混合而整合入反膠團。在一些具體實施方式中，在形成反膠團之后加入生物可降解聚合物。將得到的生物可降解聚合物_反膠團混合物與不可溶于聚合物的親水性非溶劑結合，通過溶劑快速擴散至非溶劑中以及有機溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。在一些具體實施方式
中，脂單層穩(wěn)定的聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，首先將親水性免疫調節(jié)分子與脂肪的極性端基團進行化學地偶聯(lián)。在含有一種或多種可與水混溶的溶劑的水性溶液中將偶聯(lián)物與一定比例的未偶聯(lián)脂肪分子混合。在可與水混溶的或部分與水混溶的有機溶劑中將生物可降解聚合物材料與待包埋的疏水性免疫調節(jié)試劑混合。將得到的聚合物溶液加入偶聯(lián)的和未偶聯(lián)的脂肪的水性溶液中，通過有機溶劑快速擴散至水中以及有機溶劑的揮發(fā)而產生納米顆粒。本文描述的組合物和方法可用于預防和/或治療任何傳染性疾病、失調和/或病癥。其它的疾病、失調和/或病癥的例子中本文其它地方提供。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的疫苗納米載體可用于疾病、失調和/或病癥的一個或多個征狀或特征的治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體可用于微生物感染(例如細菌感染、真菌感染、病毒感染、寄生蟲感染等)的一個或多個征狀或特征的治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率。在一些具體實施方式
中，微生物感染的預防和/或治療包括向有需要的個體施用治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體，以足夠達到所需要效果的量和時間。在本發(fā)明的一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體的 “治療上有效量”是指對本文提供的疾病、失調和/或病癥的一個或多個征狀或特征能有效地治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率的量。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的預防和/或治療規(guī)程包括向個體施用治療上有效量的一個或多個本發(fā)明的疫苗納米載體，從而調節(jié)免疫應答(例如同時刺激T細胞和/ 或B細胞)。本發(fā)明提供了新型的組合物，其包含治療上有效量的一個或多個疫苗納米載體和一個或多個藥學上可接受的賦形劑。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明提供了包含本文所描述的本發(fā)明的疫苗納米載體的藥物組合物。組合物可以包含一種以上類型的納米載體，每種類型具有不同的成分(例如免疫調節(jié)試劑、靶試劑、免疫刺激試劑、賦形劑等)。根據一些具體實施方式
，提供了向有需要的個體(例如人)施用包含本發(fā)明組合物的藥物組合物的方法。
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在一些具體實施方式
中，在診斷疾病、失調和/或病癥之前、與之同時和/或診斷之后將治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體組合物輸送至病人和/或動物。在一些具體實施方式中，在疾病、失調和/或病癥的征狀發(fā)作之前、與之同時和/或發(fā)作之后將治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體組合物輸送至病人和/或動物。在一些具體實施方式
中，在暴露于傳染性試劑之前將治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體組合物輸送至病人和/ 或動物。在一些具體實施方式
中，在暴露于傳染性試劑之后將治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體組合物輸送至病人和/或動物。在一些具體實施方式
中，在暴露于令人上癮的物質或毒素之前將治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體組合物輸送至病人和/或動物。在一些具體實施方式
中，在暴露于令人上癮的物質或毒素之后將治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體組合物輸送至病人和/或動物。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的藥物組合物通過多種途徑施用，包括口服、靜脈內、肌肉內、動脈內、髓內、囊內、皮下、心室內、經皮、真皮內、直腸、陰道內、腹膜內、局部 (通過粉末、膏、藥膏和/或滴液)、經皮、粘膜、鼻、口腔、腸、舌下；通過氣管內灌注、支氣管灌注和/或吸入；和/或作為口噴霧劑、鼻噴霧劑和/或氣霧劑。在一些具體實施方式
中，組合物經口服施用。在一些具體實施方式
中，組合物通過非腸道施用。在一些具體實施方式中，組合物通過肌肉內注射施用。在一些具體實施方式
中，延緩疾病、失調和/或病癥(例如特定的微生物感染)發(fā) 作和/或進展的疫苗納米載體可以通過與一個或多個治療疾病、失調和/或病癥的癥狀的另外的治療性試劑組合施用。例如，疫苗納米載體可以與抗癌試劑、抗感染試劑、抗生素或抗病毒試劑組合使用。本發(fā)明提供了多種包含一個或多個本發(fā)明的納米載體的試劑盒。例如，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的納米載體和使用說明書的試劑盒。試劑盒可以包含多個不同的納米載體。試劑盒可以包含在任何組合中的任何一些另外的成分或反應試劑。根據本發(fā)明的一些具體實施方式
，試劑盒可以包括，例如(i)包含至少一個免疫調節(jié)試劑(其中至少一個免疫調節(jié)試劑能夠同時刺激T細胞和/或B細胞應答)，至少一個靶半體，和/或至少一個免疫刺激試劑的納米載體；(ii)向有需要的個體施用納米載體的說明書。在一些具體實施方式
中，試劑盒可以包括，例如(i)至少一個免疫調節(jié)試劑，其中至少一個免疫調節(jié)試劑能夠同時刺激T細胞和B細胞應答；(ii)至少一個靶半體；(iii)至少一個免疫刺激試劑；(iv)聚合物基質前體；(v)脂和兩性物質；(vi)從單獨成份(i)-(v)制備本發(fā)明的疫苗納米載體的說明書。在一些具體實施方式
中，試劑盒包含本發(fā)明的納米載體和進行混合的說明書。在一些具體實施方式
中，這樣的試劑盒還包含免疫刺激試劑和/或抗原。這樣的試劑盒的納米載體可以包含免疫調節(jié)試劑(例如T細胞抗原，如普遍T細胞抗原)和/或靶半體。T細胞抗原和/或靶半體可以在納米載體的表面。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑和抗原是相同的。在一些具體實施方式
中，它們是不同的。在上文描述的任何具體實施方式
中，除非上下文清晰表明，否則單詞偶聯(lián)的意思是共價或非共價偶聯(lián)。在上文描述的任何具體實施方式
中，單詞包埋的意思是通過混合、通過環(huán)繞核心的殼、通過共價結合納米載體表面的內部等方式物理地陷在其內。本申請引用各種授權的專利、公開的專利申請、期刊論文和其他出版物，通過引用全部并入本文。定義被濫用的物質如本文所用的術語“被濫用的物質”是指由個體(例如人)為了該物質所指明的目的之外的目的而攝入或以醫(yī)生所指導的方式或劑量之外的方式或劑量而攝入的任何物質。在一些具體實施方式
中，被濫用的物質是藥物，例如非法藥物。在一些具體實施方式中，被濫用的物質是非處方藥藥。在一些具體實施方式
中，被濫用的物質是處方藥。在一些具體實施方式
中，被濫用的物質是令人上癮的物質。在一些具體實施方式
中，被濫用的物質具有改變情緒的效應，因此包括吸入劑和溶劑。在一些具體實施方式
中，被濫用的物質是不具有改變情緒效應或興奮特性的物質，因此包括合成代謝類固醇。被濫用的物質包括但不限于，大麻成分(例如，以印度大麻提煉的麻藥(hashish)、大麻(marijuana))，鎮(zhèn)靜劑(例如，巴比妥酸鹽、苯二氮卓、氟硝西泮(Rohypn0l)、GHB、安眠酮(quaaludes))，意識狀態(tài)分離麻醉藥(dissociative anesthetic)(例如，克他命、PCP)，迷幻劑(例如，LSD、酶斯卡靈、墨西哥蕈類提煉出的迷幻藥(psilocybin))，鴉片和嗎啡衍生物(例如，可待因、芬太奴、海洛因、嗎啡、鴉片)，刺激劑(安非他明、可卡因、狂喜迷幻藥(Ecstacy) (MDMA)、甲基苯丙胺、哌醋甲酯(利他林)、尼古丁)，合成代謝類固醇和吸入劑。在一些具體實施方式
中，用于在納米載體中吸入的被濫用的物質是完整分子或其一部分。令人上癮的物質如本文所用的術語“令人上癮的物質”是引起迷念、強迫或物理依賴性或心理依賴性的物質。在一些具體實施方式
中，令人上癮的物質是非法藥物。在其它具體實施方式
中，令人上癮的物質是非處方藥。在另外的具體實施方式
中，令人上癮的物質是處方藥。令人上癮的物質包括但不限于，可卡因、海洛因、大麻、甲基苯丙胺和尼古丁。在一些具體實施方式
中，用于在納米載體中吸入的被濫用的物質是完整分子或其一部分。氨基酸如本文所用的術語“氨基酸”在其最廣泛意義上是指能夠被引入多肽鏈的任何化合物和/或物質。在一些具體實施方式
中，氨基酸具有基本結構H2N-C(H) (R)-COOH。在一些具體實施方式
中，氨基酸是天然產生的氨基酸。在一些具體實施方式
中，氨基酸是合成氨基酸；在一些具體實施方式
中，氨基酸是D-氨基酸；在一些具體實施方式
中，氨基酸是 L-氨基酸?！皹藴拾被帷被颉疤烊话被帷笔侵柑烊划a生的肽中的20種常見的標準L-氨基酸中的任何一種?！胺菢藴拾被帷笔侵赋藰藴拾被嶂獾娜魏伟被幔徽撈涫呛?成制備的還是從天然來源獲得的。如本文所用的“非天然氨基酸”包括化學產生的或修飾的氨基酸，包括但不限于鹽，氨基酸衍生物(例如酰胺)和/或取代物。氨基酸(包括肽的羧基-和/或氨基_末端氨基酸)可以通過能夠改變肽的循環(huán)半衰期而對其活性無副影響的甲基化、酰胺化、乙?；?或以其它化學基團的取代而被修飾。氨基酸可以參與二硫鍵。術語“氨基酸”與“氨基酸殘基”不加區(qū)分地使用，可以指代游離氨基酸和/或肽的氨基酸殘基。在該術語所在的上下文中可以清晰地顯示其是指游離氨基酸還是指肽的殘基。動物如本文所用的術語“動物”是指動物界的任何成員。在一些具體實施方式
中，“動物”是指任何發(fā)育階段的人。在一些具體實施方式
中，“動物”是指任何發(fā)育階段的非人動物。在一些具體實施方式
中，非人動物是指哺乳動物(例如嚙齒類、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、貓、綿羊、牛、靈長類和/或豬)。在一些具體實施方式
中，動物包括但不限于哺乳動物、鳥、爬蟲動物、兩棲動物、魚和/或軟體動物。在一些具體實施方式
中，動物可以是轉基因動物、遺傳工程化動物和/或克隆體。
抗體如本文所用的術語“抗體”是指任何免疫球蛋白，不論是天然的或完全或部分合成產生的。其所有的保持特異性結合能力的衍生物也包括在該術語中。該術語還涵蓋了任何具有與免疫球蛋白結合結構域同源或大量同源的結合結構域的蛋白。這樣的蛋白可以來自天然來源，或部分或全部合成產生。抗體可以是單克隆或多克隆的。抗體可以是任何免疫球蛋白類別的成員，包括任何人類的類別IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。如本文所用的術語“抗體片段”或“抗體的特征性部分”不加區(qū)分地使用，其是指抗體的任何小于其全長的衍生物?？贵w片段能夠保持全長抗體的特異性結合能力的至少顯著性的部分。這樣的抗體片段的例子包括但不限于Fab、Fab，、F (ab，)2、scFv、Fv、dsFv 二體和Fd片段?？贵w片段還包括Fc片段?？贵w片段可以是通過任何方式產生的。例如，抗體片段可以通過完整抗體的片段化經酶式作用或化學產生和/或其可以通過從編碼部分抗體序列的基因經重組產生。作為選擇，抑或是另外，抗體片段可以全部或部分合成產生?？贵w片段可選地可以包含單鏈抗體片段。作為選擇，抑或是另外，抗體片段可以包含多條連接在一起(例如通過二硫連接) 的鏈。抗體片段可選地可以包含多分子復合體。功能性抗體片段通常包含至少約50個氨基酸，更通常將包含至少約200個氨基酸。大約除非另有指明或從上下文可以斷定，否則在指稱數字時如本文所用的術語 “大約”或“約”一般是包括落在該數字的每一方向(大于或小于)5%、10%、15%或20%范圍內的數字(除非當這樣的數字將低于可能數值的0%或超過可能數值的100% )。與……結合如本文所用的術語“與……結合”是指兩個或兩個以上物質通過直接或間接的共價或非共價相互作用而連接的狀態(tài)。在一些具體實施方式
中，結合是共價的。在一些具體實施方式
中，共價結合由連接半體介導。在一些具體實施方式
中，結合是非共價的(例如電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用等)。例如，在一些具體實施方式
中，物質(例如免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑、納米顆粒等)可以與疫苗納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，物質(例如免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑、納米顆粒等)可以與疫苗納米載體非共價結合。例如，物質可以與本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合物基質等的表面結合，包埋于本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合物基質等之內，由本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合物基質等環(huán)繞，和/或分布在本發(fā)明的疫苗納米載體的脂雙層、脂單層、聚合物基質等之中。生物可兼容如本文所用的術語“生物可兼容”是指對細胞無毒性的物質。在一些具體實施方式
中，如果在體內向細胞加入一種物質而不在體內誘導炎性和/或其它副作用的話，則認為該物質是“生物可兼容”的物質。在一些具體實施方式
中，如果在體外或在體內向細胞加入一種物質而引起低于或等于約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約 25 %、約20 %、約15 %、約10 %、約5 %、低于約5 %的細胞死亡的話，則認為該物質是“生物可兼容”的物質。生物可降解的如本文所用的術語“生物可降解的”是指在生理條件下降解的物質。在一些具體實施方式
中，生物可降解的物質是由細胞機制分解的物質。在一些具體實施方式中，生物可降解的物質是由化學過程分解的物質。B細胞抗原如本文所用的術語“B細胞抗原”是指任何由B細胞中的免疫應答識別并激發(fā)B細胞中的免疫應答的抗原。在一些具體實施方式
中，是B細胞抗原的抗原也是 T細胞抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原不同時是T細胞抗原。在一些具體實施方式中，當本文提供的納米載體同時包含B細胞抗原和T細胞抗原時，B細胞抗原和T細胞抗原不是相同的抗原，雖然在一些具體實施方式
中B細胞抗原和T細胞抗原每個均可以同時是B細胞抗原和T細胞抗原。在其它具體實施方式
中，納米載體的B細胞抗原和T細胞抗原是相同的。細胞類型如本文所用的術語“細胞類型”是指具有定義細胞類型的一組與眾不同的形態(tài)學、生物化學和/或功能特性的細胞形式。本領域技術人員將認識到可以在不同的特異性水平定義細胞類型。例如，T細胞和B細胞是不同的細胞類型，其可以彼此區(qū)分開來，但共同具有一些作為更廣的“淋巴細胞”(其均為淋巴細胞的成員)細胞類型的特性的特征。通常，不同類型的細胞可以基于多種基因(本領域稱為特性細胞類型(例如特性品系的細胞類型)的“標記物”)的差異性表達而彼此區(qū)分開來。在一些具體實施方式
中，不同類型的細胞可以基于其不同的功能而彼此區(qū)分開來。“細胞特異性標記物”是在這樣的基因產物或其修飾版本，其在一種或多種細胞類型上相對于全部其它或多數其它細胞類型來說有顯著較高水平的表達，并且其表達是該細胞類型的特性。很多細胞類型特異性標記物在本領域中是這樣識別的。有害的環(huán)境中的試劑如本文所用的術語“有害的環(huán)境中的試劑”是指環(huán)境中發(fā) 現(xiàn)的有害物質。這樣的物質通常被認為具有健康風險。有害的環(huán)境中的試劑包括被認為具有健康風險而實際上可能不具有風險的物質。有害的環(huán)境中的試劑包括但不限于是砷、鉛、汞、氯乙烯、多氯聯(lián)苯、苯、多環(huán)芳香烴、鎘、苯并(a)芘、苯并(b)熒蒽、氯仿、DDT，P，P’ _、阿羅克洛 1254 (aroclor 1254)、阿羅克洛 1260 (aroclor 1260)、二苯并(a, h)蒽、三氯乙烯、狄氏劑(dieldrin)、六價鉻和DDE，P，P’。在一些具體實施方式
中，包含于納米載體中的有害的環(huán)境中的試劑是完整分子或其一部分。體外如本文所用的術語“體外”是指在人工環(huán)境中發(fā)生的事件，例如在試管或反應管中，在細胞培養(yǎng)物中等，而不是在生物體(例如動物、植物和/或微生物)內。體內如本文所用的術語“體內”是指在生物體(例如動物、植物和/或微生物) 內發(fā)生的事件。免疫刺激試劑如本文所用的術語“免疫刺激試劑”是指調節(jié)針對抗原的免疫應答的試劑，但不是抗原或源自抗原。如本文所用的術語“調節(jié)“是指誘導、增強、抑制、引導或重引導免疫應答。這樣的試劑包括刺激(或增強)針對抗原的免疫應答的免疫刺激試劑，但是如上所述，其不是抗原或源自抗原。因此，免疫刺激試劑包括佐劑。在一些具體實施方式中，免疫刺激試劑在納米載體表面和/或包埋于納米載體內部。在一些具體實施方式
中，納米載體表面的免疫刺激試劑與包埋于納米載體內部的免疫刺激試劑不同。在一些具體實施方式中，納米載體包含一種以上類型的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，一種以上類型的免疫刺激試劑作用于不同的途徑。免疫刺激試劑的例子包括本文其它地方提供的那些。核酸如本文所用的術語“核酸”在其最廣泛的意義上是指被引入或能夠被引入寡核苷酸鏈的任何化合物和/或物質。在一些具體實施方式
中，核酸是指通過磷酸二酯鍵被引入或能夠被引入寡核苷酸鏈的化合物和/或物質。在一些具體實施方式
中，“核酸”是指單個核酸殘基(例如核苷酸和/或核苷)。在一些具體實施方式
中，“核酸”是指包含單個核酸殘基的寡核苷酸鏈。如本文所用的術語“寡核苷酸”和“多核苷酸”不加區(qū)分地使用。在一些具體實施方式
中，“核酸”包括RNA以及單鏈和/或雙鏈DNA和/或cDNA。此外，術語“核酸”、“DNA”、“RNA”和/或相似的術語包括核酸類似物，即具有磷酸二酯骨架之外的類似物。例如，所謂的“肽核酸”，(其在本領域是已知的，在骨架中具有肽鍵而不是磷酸二酯鍵)被認為包含在本發(fā)明的范圍內。術語“編碼氨基酸序列的核苷酸序列”包括彼此為簡并版本和/或編碼相同氨基酸序列的所有的核苷酸序列。編碼蛋白和/或RNA的核苷酸序列可以包括內含子。核酸可以從天然來源純化，使用重組表達系統(tǒng)產生，可選地進行純化、化學合成等。在合適的情況下(例如化學合成分子的情況)核酸可以包含核苷酸類似物例如具有化學修飾的堿基或糖、骨架修飾等的類似物。除非另有指明，否則核酸序列以5’至 3’的方向呈現(xiàn)。如本文所用的術語“核酸片斷”是指較長的核酸序列的一部分的核酸序列。在很多具體實施方式
中，核酸片段包含至少3、4、5、6、7、8、9、10或更多個殘基。在一些具體實施方式中，核酸是天然核苷或包含天然核苷(例如，腺苷、胸苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥苷和脫氧胞苷)；核苷類似物(例如，2-氨基腺苷、2-硫胸苷、肌苷、批咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、 C-5溴尿苷、C-5氟尿苷、C-5碘尿苷、C-5丙炔基-尿苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5甲基-胞苷、2-氨基腺苷、7-脫氮腺苷、7-脫氮鳥苷、8-加氧腺苷、8-加氧鳥苷、0(6)-甲基鳥苷和 2-硫胞苷)；化學修飾的堿基；生物修飾的堿基(例如，甲基化的堿基)；夾層堿基；修飾的糖(例如，2’-氟核糖、核糖、2’-脫氧核糖、阿拉伯糖和己糖)；和/或修飾的磷酸基團(例如硫代磷酸鹽和5’ -N-亞磷酰胺連接)。顆粒如本文所用的術語“顆?！笔侵溉魏尉哂?0微米(μπι)以下直徑的物質。通常，顆粒具有最長為IOOOnm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，顆粒具有300nm或以下的直徑。顆粒包括微米顆粒、納米顆粒和皮可米顆粒。在一些具體實施方式中，納米顆粒具有200nm或以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米顆粒具有IOOnm 或以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米顆粒具有50nm或以下的直徑。在一些具體實施方式中，納米顆粒具有30nm或以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米顆粒具有 20nm或以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米顆粒具有IOnm或以下的直徑。在一些具體實施方式
中，顆?？梢允蔷酆衔锘|。在一些具體實施方式
中，顆?？梢允欠蔷酆衔?顆粒(例如金屬顆粒、量子點、陶瓷、無機材料、骨等)。顆粒還可以是脂質體和/或膠團。如本文所用的術語“納米顆?！笔侵溉魏尉哂蠭OOOnm以下直徑的顆粒。在一些具體實施方式中，本文提供的組合物的納米載體具有500nm以下的平均幾何直徑。在一些具體實施方式中，納米載體具有50nm以上但500nm以下的平均幾何直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體群體的平均幾何直徑為約 60nm、75nm、lOOnm、125nm、150nm、175nm、200nm、225nm、 250nm、275nm、300nm、325nm、350nm、375nm、400nm、425nm、450nm 或 475nm。在一些具體實施方式中，平均幾何直徑為100-400nm、100-300nm、100-250nm或100-200nm。在一些具體實施方式中，平均幾何直徑為 60-400nm、60-350nm、60-300nm、60-250nm 或 60-200nm。在一些具體實施方式
中，平均幾何直徑為75-250nm。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有500nM以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有50nm以上但500nm以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有約 60nm、75nm、lOOnm、125nm、150nm、175nm、200nm、225nm、250nm、275nm、300nm、325nm、350nm、 375nm、400nm、425nm、450nm或475nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多的納米載體具有 100_400nm、 100-300nm、100-250nm或100_200nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體的群體中 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的納米載體具有 60_400nm、 60-350nm、60-300nm、60-250nm 或 60_200nm 的直徑。弱免疫原性的抗原如本文所用的術語“弱免疫原性的抗原”是指不激發(fā)任何免疫應答或不激發(fā)想要的足夠水平的免疫應答的抗原。如本文所用的“足夠”是指當在不含本文描述的納米載體的組合物中施用時(例如，在不存在納米載體時作為游離抗原與佐劑混合)，引發(fā)可檢測的或保護性免疫應答的能力。在一些具體實施方式
中，想要的免疫應答是治療或預防疾病或病癥。在一些具體實施方式
中，想要的免疫應答是減緩疾病或病癥的一種或多種征狀。弱免疫原性的抗原包括但不限于自身抗原、小分子和碳水化合物。自身抗原如本文所用的術語“自身抗原”是指動物體內的正常物質，當針對動物內的抗原的免疫應答被激發(fā)時，可以產生自身免疫性(例如，自身免疫疾病)。自身抗原可以是蛋白或肽、脂蛋白、脂、碳水化合物或核酸。核酸可以是DNA或RNA。自身抗原包括但不限于酶、結構蛋白、分泌的蛋白、細胞表面受體和細胞因子。在一些具體實施方式
中，自身抗原是細胞因子，和細胞因子是TNF、IL-1或IL-6。在一些具體實施方式
中，自身抗原是膽固醇酯轉移蛋白(CETP)、負責將膽固醇從高密度脂蛋白(HDL)轉移到低密度脂蛋白膽固醇 (LDL)的血清蛋白、與Alzheimer病相關的A β蛋白、處理A β蛋白的病理形式的蛋白水解酶、與動脈硬化癥相關的LDL或HIV-I的共同受體。在一些具體實施方式
中，處理A β蛋白的病理形式的蛋白水解酶是β-分泌酶。在一些具體實施方式
中，與動脈硬化癥相關的LDL 是氧化的或最小化修飾的。在一些具體實施方式
中，HIV-I的共同受體是CCR5。小分子一般地，“小分子”在本領域中被理解為具有約2000g/mol以下大小的有機分子。在一些具體實施方式
中，小分子為約1500g/mol以下或約lOOOg/mol以下。在一些具體實施方式
中，小分子為約800g/mol以下或約500g/mol以下。在一些具體實施方式
中，小分子是非聚合物和/或非寡聚物。在一些具體實施方式
中，小分子不是蛋白、肽或氨基酸。在一些具體實施方式
中，小分子不是核酸或核苷酸。在一些具體實施方式
中，小分子不是糖或多糖。特異性結合如本文所用的術語“特異性結合”是指第一個和第二個半體的非共價物理結合，其中第一個和第二個半體之間的結合為每種半體與發(fā)生的環(huán)境中存在的多數或所有其它半體間的結合的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍，或比之更強烈至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍。如果在所應用的條件下(例如在生理條件下，例如在細胞內或與細胞存活相一致)平衡解離常數Kd為10_3M或更低、10_4M 或更低、10_5M或更低、10_6M或更低、10_7M或更低、10_8M或更低、10_9M或更低、ΙΟ,Μ或更低、 10_"Μ或更低或ICT12M或更低，則兩個或兩個以上物質的結合可以認為是特異性的。在一些具體實施方式
中，特異性結合可以通過多個較弱的相互作用(例如，多個單獨的相互作用，例如每個單獨的相互作用的特征在于Kd為ICT3M以上)實現(xiàn)。在一些具體實施方式
中，特異性結合(其可被稱為“分子識別”)是兩個物質之間的可飽和的結合相互作用，其依賴于每個物質上的官能團的互補方向。特異性結合相互作用的例子包括適配子-適配子靶向相互作用、抗體-抗原相互作用、抗生物素-生物素相互作用、配體-受體相互作用、金屬-螯合劑相互作用、互補核酸之間的雜交等。個體如本文所用的術語“個體”或“病人”是指接受本發(fā)明的組合物的任何生物，例如，為了實驗、診斷和/或治療目的。典型的個體包括動物(例如哺乳動物，如小鼠、大鼠、兔、非人靈長類和人)和/或植物。
患有“患有”疾病、失調和/或病癥的個體已經被診斷、可能被診斷或表現(xiàn)出疾病、失調和/或病癥的一個或多個征狀。易于患上“易于患上”疾病、失調和/或病癥的個體尚未被診斷患有和/或可能未表現(xiàn)出疾病、失調和/或病癥。在一些具體實施方式
中，疾病、失調和/或病癥與微生物感染(例如細菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生蟲感染等)相關。在一些具體實施方式
中，易于患上微生物感染的個體可能暴露于微生物(例如通過攝取、吸入、身體接觸等)。在一些具體實施方式
中，易于患上微生物感染的個體可能暴露于被微生物感染的個體。在一些具體實施方式
中，易于患上微生物感染的個體是在微生物流行的地點的個體(例如旅行到微生物流行的地點的個體)。在一些具體實施方式
中，易于患上疾病、失調和/或病癥的個體將會患上疾病、失調和/或病癥。在一些具體實施方式
中，易于患上疾病、失調和/或病癥的個體將不會患上疾病、失調和/或病癥。在一些具體實施方式
中，個體患有或易于患上癌癥、傳染性疾病、非自身免疫疾病或退行性疾病或上癮癥。在一些具體實施方式
中，個體患有或易于患上細菌、真菌、原生動物、寄生蟲或病毒感染。這樣的傳染是本文提供的任何微生物引起的。在一些具體實施方式
中，個體患有或易于患上結核(tuberculosis)、瘧疾(malaria)、利什曼病(leishmaniasis)、幽門螺旋桿菌(H. pylori)、葡萄狀球菌 (Staphylococcus)感染或沙門氏菌(Salmonella)感染。在一些具體實施方式
中，個體患有或易于患上流感。在一些具體實施方式
中，個體患有或易于患上自身免疫疾病、過敏癥或哮喘。T細胞抗原如本文所用的術語“T細胞抗原”是指任何由T細胞中的免疫應答識別并激發(fā)T細胞中的免疫應答的抗原(例如由T細胞上的T細胞受體通過結合至主要組織相容性復合體分子(MHC)的抗原或其一部分的呈遞而被特異性識別的抗原)。在一些具體實施方式中，是T細胞抗原的抗原也是B細胞抗原。在其它具體實施方式
中，T細胞抗原不同時是B細胞抗原。T細胞抗原一般是蛋白或肽。T細胞抗原可以是刺激CD8+T細胞應答、刺激CD4+T細胞應答或同時刺激二者的抗原。因此，在一些具體實施方式
中，納米載體能夠有效地同時刺激兩種類型的應答。靶如本文所用的術語“靶”或“標記物”是指能夠特異性結合至特別的靶半體的任何物質。在一些具體實施方式
中，靶與一種或多種特別的組織類型特異性結合。在一些具體實施方式
中，靶與一種或多種特別的細胞類型特異性結合。例如，細胞類型特異性標記物通常比參考細胞群體中的細胞類型的表達高至少2倍。在一些具體實施方式
中，細胞類型特異性標記物的存在水平比參考群體中的平均表達高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。對細胞類型特異性標記物的檢測或測定使得可能將目標細胞類型從很多、多數或所有其它細胞類型中區(qū)分開。在一些具體實施方式
中，靶包含蛋白、碳水化合物、脂和/或核酸，如本文所述。靶向的如果一種物質特異性與靶結合，為了本文描述的目的認為該物質是“靶向的”。在一些具體實施方式
中，在嚴格條件下靶半體特異性與靶結合。如果靶半體特異性與靶結合，從而將完整納米載體輸送至特異性器官、組織、細胞和/或亞細胞位點，則認為包含靶半體的本發(fā)明的納米載體(例如疫苗納米載體)是“靶向的”。靶半體如本文所用的術語“靶半體”是指任何與細胞的成分結合的半體。在一些具體實施方式
中，靶半體與細胞的成分特異性結合。這樣的成分被稱為“靶”或“標記物”。靶半體可以是多肽、糖蛋白、核酸、小分子、碳水化合物、脂等。在一些具體實施方式
中，靶半體是抗體或其特征性部分。在一些具體實施方式
中，靶半體是受體或其特征性部分。在一些具體實施方式
中，靶半體是受體或其特征性部分。在一些具體實施方式
中，靶半體是配體或其特征性部分。在一些具體實施方式
中，靶半體是與細胞類型特異性標記物結合的核酸靶半體(例如適配子)。在一些具體實施方式
中，靶半體是小分子。在一些具體實施方式
中，靶半體在納米載體表面。在其它具體實施方式
中，靶半體包埋于納米載體內部。在其它具體實施方式
中，靶半體與納米載體結合。在一些具體實施方式
中，靶半體與納米載體共價結合。在其它具體實施方式
中，靶半體與納米載體非共價結合。在其它具體實施方式
中，靶半體結合細胞表面表達的受體。在一些具體實施方式
中，靶半體結合可溶性受體。在一些具體實施方式
中，可溶性受體是補體蛋白或預先存在的抗體。在其它具體實施方式
中，靶半體用于將納米載體輸送至抗原呈遞細胞、T細胞或B細胞。在一些具體實施方式
中，抗原呈遞細胞是巨噬細胞。在其它具體實施方式
中，巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞。在其它具體實施方式中，抗原呈遞細胞是樹突狀細胞。在一些具體實施方式
中，抗原呈遞細胞是濾泡樹突狀細胞。靶半體的特異性的非限制性例子包括與⑶lib、⑶169、甘露糖受體DEC-205、 ⑶11c、⑶21/⑶35、CX3CR1或Fc受體結合的分子。在一些具體實施方式
中，與上述任何一個結合的分子是抗體或其結合抗原的片段(例如抗-CD169抗體)。在一些具體實施方式
中，與Fc受體結合的分子是包含免疫球蛋白(例如IgG)的Fc部分的分子。在其它具體實施方式中，免疫球蛋白的Fc部分是人類Fc部分。在一些具體實施方式
中，與CX3CR1結合的分子是CX3CL1 (fractalkine)。與⑶169結合的靶半體包括抗-⑶169抗體和⑶169的配體，例如涎化的⑶227、⑶43、⑶206或這些配體的保持結合功能的部分，例如可溶性部分。治療上有效的量如本文所用的術語“治療上有效的量”意思是當向患有或易于患上疾病、失調和/或病癥的個體施用時，對于疾病、失調和/或病癥足以治療、減輕、改善、緩解、減輕其征狀、預防、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率的治療性、預防性和/或診斷性試劑(例如本發(fā)明的疫苗納米載體)的量。該術語還旨在指稱本文提供的調節(jié)個體的免疫應答的納米載體或其組合物的量。治療性試劑如本文所用的術語“治療性試劑”是指，當向個體施用時具有治療性、預防性和/或診斷性效應和/或引發(fā)想要的生物學和/或藥理學效應的任何試劑。治療如本文所用的術語“治療”是指特別的疾病、失調和/或病癥的一個或多個征狀或特征的部分或完全地減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和 /或降低其發(fā)生率。例如，“治療”微生物感染可以指的是抑制微生物的存活、生長和/或傳播?？梢詾榱私档桶l(fā)展與疾病、失調和/或病癥相關的病理的風險的目的而向未表現(xiàn)出疾病、失調和/或病癥的跡象的個體和/或只表現(xiàn)出疾病、失調和/或病癥的早期跡象的個體施加治療。在一些具體實施方式
中，治療包括向個體輸送本發(fā)明的疫苗納米載體。普遍T細胞抗原如本文所用的術語“普遍T細胞抗原”是指能夠促進T細胞幫助并增強針對完全不相關抗原的免疫應答的T細胞抗原。普遍T細胞抗原包括破傷風類毒素，以及源自破傷風類毒素、EB病毒或流感病毒的一個或多個肽。普遍T細胞抗原還包括流感病毒的成分，例如紅血球凝聚素、神經氨糖酸苷酶或核蛋白，或一個或多個源自其中的肽。疫苗納米載體如本文所用的術語“疫苗納米載體”是指包含至少一個免疫調節(jié)試劑或免疫刺激試劑的物質。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包括至少兩種類型免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是抗原，和疫苗納米載體包含2、3、4、5、6、 7、8、9、10或更多種抗原。不同的抗原可以是完全不同的抗原性分子或源自完全不同的抗原性分子，或者不同的抗原可以是來自相同的抗原性分子的不同的表位。在其它具體實施方式中，疫苗納米載體包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多種來自相同的抗原性分子的不同的表位。疫苗納米載體可以是任何形式的顆粒。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體能夠刺激T細胞和/或B細胞中的免疫應答。在其它具體實施方式
中，疫苗納米載體能夠增強、抑制、引導或重引導免疫應答。在一些具體實施方式
中，本領域的可利用的任何檢驗可用于確定T細胞和/或B細胞是否被刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過監(jiān)視抗原誘導的細胞因子的產生、抗原誘導的T細胞的增殖和/或抗原誘導的蛋白表達的變化來檢驗T細胞的刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過監(jiān)視抗體效價、抗體親和性、中和檢驗中抗體的表現(xiàn)、類別轉換重組、抗原特異性抗體的親和成熟、記憶B細胞的發(fā)育、長生血漿細胞(其能夠長時間地產生大量的高親和性抗體)的發(fā)育、生發(fā)中心的反應和/或中和檢驗中抗體的表現(xiàn)來檢驗B細胞的刺激。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體還包含至少一個能夠幫助將疫苗納米載體輸送至個體內的特定靶(例如器官、組織、細胞和/或亞細胞位點)的靶半體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體還包含至少一個能夠幫助刺激T細胞和/ 或B細胞中免疫應答的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體還包含至少一個允許可調的膜堅固性和可控的脂質體穩(wěn)定性的納米顆粒。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含脂、兩性化合物、聚合物、糖、聚合物基質和/或非聚合物顆粒?？扇苡谒姆俏叫跃酆衔锶绫疚乃玫男g語“可溶于水的非吸附性聚合物”是指在水中可溶并且賦予減少的生物垢特性的聚合物。在一些具體實施方式
中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚乙二醇、聚氧乙烯、聚烷撐二醇和聚亞烷基氧化物。

圖1 組合的疫苗靶向策略，以實現(xiàn)最佳的體液和細胞免疫應答。復合疫苗攜帶內源的T細胞抗原、佐劑(未顯示)和用于DC、FDC和SCS-Mph的靶半體，以及用于B細胞識別的表面抗原。在皮下或肌肉內注射之后，材料通過引流淋巴管到達淋巴結并在每個APC 積累(澄清一下只顯示了 APC特異性的靶半體，但是每個APC都獲得整個的復合物)。DC 將復合物內在化并消化，將I類和II類MHC中的抗原性的肽分別呈遞至CD8和CD4T細胞。激活的T細胞分化成調節(jié)細胞免疫應答的效應/記憶(T賺J細胞。Tfh細胞向B細胞(最初被SCS-Mph上的抗原刺激，在此過程中獲得并處理T細胞抗原以重刺激Tfh)提供幫助。 Tfh細胞提供的幫助允許發(fā)生GC反應，在GC反應中B細胞增殖并產生高親和性抗體。
圖2 =SCS-Mph與淋巴上攜帶的病毒顆粒結合并將其呈遞至濾泡B細胞。(A)小鼠胭淋巴結的皮層的免疫組化染色(以抗-CD169染色，并以小麥胚芽凝集素復染)。在足底注射紅色熒光的泡性口炎病毒(VSV)之后30分鐘收獲淋巴結。在引流淋巴結的被膜下竇中，紅色的病毒專有性地與CD169+巨噬細胞共區(qū)域化。(B)注射VSV之后30分鐘，在被膜下竇(SCSf)的基底下面的淋巴結巨噬細胞(Mph)和濾泡B細胞(Bi)的電子顯微鏡圖顯示 VSV位于表面，位于Mph的吞噬溶酶體內和Mph和B細胞的交界處(箭頭)。(C)向未經處理的小鼠(B6)足底注射VSV導致病毒特異性B細胞上表面表達的IgM的迅速下調，這是B 細胞激活的標志。通過足底注射膦酸鹽脂質體(CLL)除去SCS-Mph之后，B細胞激活被消除，這表明SCS-Mph對于將微?？乖蔬f至B細胞是必需的。圖3 示例性的脂質體納米載體，其中親脂性免疫調節(jié)試劑整合在膜中，和親水性免疫調節(jié)試劑包埋于脂質體內。圖4 示例性的納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體納米載體，其中親脂性免疫調節(jié)試劑整合在膜中，和親水性免疫調節(jié)試劑包埋于脂質體內。圖5 示例性的脂質體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調節(jié)試劑整合在膜中，和疏水性免疫調節(jié)試劑包埋于聚合物納米顆粒內。圖6 示例性的納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調節(jié) 試劑整合在膜中，和疏水性免疫調節(jié)試劑包埋于聚合物納米顆粒內。圖7 示例性的包含反膠團的脂質體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調節(jié)試劑整合在膜中，和親水性免疫調節(jié)試劑包埋于反膠團內。圖8 示例性的納米顆粒穩(wěn)定化的包含反膠團的脂質體-聚合物納米載體，其中親脂性免疫調節(jié)試劑整合在膜中，和親水性免疫調節(jié)試劑包埋于脂質體內。圖9 示例性的脂穩(wěn)定化的聚合物納米載體，其中親水性免疫調節(jié)試劑與脂單層偶聯(lián)，和疏水性免疫調節(jié)試劑包埋于聚合物核心內。圖10 示例性的脂穩(wěn)定化的包含反膠團的聚合物納米載體，其中親水性免疫調節(jié) 試劑與脂單層偶聯(lián)，和親水性免疫調節(jié)試劑包埋于聚合物核心內。圖11 淋巴攜帶的VSV被SCS巨噬細胞捕獲。㈧胭淋巴結中的VSV的MP-IVM顯微圖像(數字足底注射之后的分鐘數；比例尺標記100μπι)。⑶注射之后三個小時，VSV 在C57BL/6 — Act (EGFP)受體中聚集(比例尺標記50 μ m). (C)注射之后5分鐘淋巴結中的VSV的電子顯微鏡圖像。左側顯示中心顯微鏡圖像的簡圖，右側顯示更高的放大倍數。箭頭指明VSV顆粒(比例尺標記2μπι)。(D)VSV-引流淋巴結的共焦顯微鏡圖像(30分鐘)。比例尺標記100 μ m(左側)；15 μ m(右側)。(E)注射入野生型、C3缺陷型或經CLL 除去的小鼠后2個小時胭淋巴結中的VSV效價。_ φ < 0. 001 (雙側ANOVA，Bonferroni，s post-test)。(F)DH-LMP2a小鼠中VSV的捕獲。* :p < 0. 05(非配對t檢驗)。(G)未處理小鼠和CLL處理小鼠中足底注射之后的VSV效價(兩個相似實驗中的一個；η = 3)。ProxLN 腹股溝、主動脈周圍的淋巴結；BrachLN:臂淋巴結。(H)TD插管之后淋巴、脾和血液中的病毒效價；* =P < 0. 05 (非配對t檢驗)。E-H中的水平線代表平均值。圖12 外周淋巴結中⑶169+巨噬細胞的鑒定。(A-C)從原態(tài)C57BL/6小鼠匯聚的單核細胞的品系標記物表達的分析。(A)在對⑶169+群體設門之后(中間圖板)，分析細胞中兩個與巨噬細胞結合的表面標記物(I-Ab(II類MHC)和CDllb)的表達情況(下端圖板)。在上端圖板顯示了以抗-⑶169同種型對照的染色。(B)進一步分析⑶169+I-Ab+⑶Ilb+細胞中CD68、F4/80、CDllc和Gr-I的表達情況。設門以鑒別標記物+的細胞(除了 CDllc染色之外)，其中標記物被放置用于鑒別常規(guī)的CDllchigh樹突狀細胞(覆蓋)。數字表示在直方圖門下面的CD169+I-Ab+CDllb+細胞的百分率。數據是3_5個具有相似結果的實驗的代表。(C)圖板B中數據的定量分析，誤差條代表SEM。(D-G)來自原態(tài)C57BL/6小鼠的胭淋巴結的共焦顯微鏡圖像顯示在⑶169+細胞上共表達所選的標記物(箭頭)。比例尺標記左欄為125 μ m和所有其它欄為20 μ m。圖13 :CLL處理之后胭淋巴結的形態(tài)學變化。(A)未處理對照小鼠(-CLL，左欄)和 6-10天之前接受CLL足底注射的動物的胭淋巴結(上面三行)和脾(下面一行)的共焦顯微鏡圖像。CLL處理除去了淋巴結中的⑶169+巨噬細胞(上面一行)，但是不除去脾中的； Lyve-Γ髓質淋巴內皮細胞(第二行)和皮層的⑶Ilchigh樹突狀細胞(第三行)不受影響。 (B)經過和不經過CLL處理的胭淋巴結中的細胞亞群頻率，數據來自η = 3小鼠，以平均值士SEM 表示；*:ρ< 0.05，** :ρ< 0.01 ；非配對 student，s t 檢驗。(C)足底注射 50 μ 1 CLL 后6-1 0天，胭淋巴結中不同的I-Ab+CDllb+白細胞亞群的頻率。每個符號代表從一只小鼠匯聚的胭淋巴結。對I-Ab+CDllb+細胞設門之后通過流式細胞術檢測胭淋巴結中總的單核細胞中細胞亞群的頻率，如圖12A所示。(D)未處理(-CLL)或足底注射CLL (+CLL) 7天后，月國淋巴結的免疫組化分析。比例尺標記300mm。(E) CLL處理7天后和足底注射20 μ gVSV_IND 之后5分鐘，代表性的胭淋巴結中的SCS的超結構。注意完全不存在SCS巨噬細胞和病毒顆粒。比例尺標記2μπι。圖14 胭淋巴結中熒光病毒和乳膠納米顆粒的保留。(A)足底注射Alexa-568 標記的腺病毒(AdV)30分鐘之后胭淋巴結的共焦顯微鏡圖像。以FITC-α-⑶169和 Alexa-647-α -B220將冷凍的部分染色以鑒別B細胞。比例尺標記:100 μ m(左側圖板) 和15μπι(右側圖板)。(B)SCS巨噬細胞捕獲的AdV顆粒的透射電鏡圖像。上端圖板顯示低倍總攬(中間圖板)的帶注釋的示意圖。中間圖板中的帶框區(qū)域在下端圖板中被放大，箭頭代表電子密集的球狀AdV顆粒。比例尺標記2μπι(上端和中間圖板)和Ιμπι(下端圖板)。(C-D)來自經足底注射20 μ gAlexa-568標記的UV滅活的AdV(C)或VV(D) 30分鐘之后的C57BL/6小鼠胭淋巴結的共焦顯微鏡圖像。熒光病毒聚集在B濾泡上面的皮層 SCS中(通過FITC- α -Β220染色鑒定)，也聚集在髓質中；而病毒不僅被⑶169+巨噬細胞結合，還被LYVE-Γ淋巴內皮細胞結合。比例尺標記代表125 μ m(左側圖板)和25 μ m(右側圖板)。(E)后足底注射Alexa-568標記的VSV和大約IO11個Crimson熒光團(Crimson Fluospheres)(直徑200nm) 30分鐘之后的胭淋巴結的共焦顯微鏡圖像。以FITC- α -CD169 將冷凍的淋巴結部分進行復染。注意與VSV不同，乳膠珠中引流淋巴結上保留性較差。比例尺標記125μπι。圖15 足底注射CLL對引流淋巴結中VSV分布的影響。共焦顯微鏡圖像顯示無 CLL處理(A)或CLL處理7天后(B)，熒光VSV顆粒定位于胭淋巴結。通過FITC- α -Β220 染色鑒別B濾泡。在髓質(加框區(qū)域)中，VSV被LYVE-Γ細胞結合，這不受CLL處理的影響。比例尺標記125 μ m (左欄)禾口 25 μ m (右欄)。圖16 =SCS巨噬細胞將源自淋巴的AdV呈遞至濾泡B淋巴細胞。㈧胭淋巴結中B 濾泡上面的SCS中的⑶169+巨噬細胞的共焦顯微鏡圖像。以小麥胚芽凝集素(WGA)將冷凍的部分進行復染以鑒別細胞外基質和以α-Β220進行復染以檢測B細胞。注意一些B細胞位于SCS中和一個B細胞似乎在濾泡和SCS之間遷移(箭頭)。比例尺標記25 μ m。足底注射AdV后30分鐘，胭淋巴結中的SCS巨噬細胞和周圍細胞的電子顯微鏡圖像(B)和示意圖(C)。比例尺標記2μπι。(C)中的框表示在圖板(D)和(E)中以更高的倍數顯示的區(qū) 域。這些圖板顯示了 SCS巨噬細胞和B細胞界面處(箭頭)的AdV顆粒的兩個例子。星號代表其它的與巨噬細胞結合的AdV顆粒。比例尺標記500nm。圖17 由巨噬細胞介導的淋巴攜帶的VSV跨越SCS基底的轉移改變了病毒特異性 B細胞的行為。㈧電子顯微鏡圖像和示意圖(中間)，其顯示VSV注射后30分鐘，巨噬細胞刺穿胭淋巴結的SCS的基底。比例尺標記10μπι(左)和2μπι(右)。箭含有經消化的病毒的液泡。箭頭巨噬細胞和B細胞相接觸的區(qū)域中的病毒體。(B)胭淋巴結中的多克隆和VI10ΥΕΝ B細胞的MP-IVM0比例尺標記50 μ m。(C)VSV注射之后VI10YENB細胞/ 對照B細胞的區(qū)域比例。結果來自3個圖像/組。(D、E)定位于胭淋巴結中的VI10YEN B 細胞(相對于 SCS)。** :p < 0. 01 (單側 ANOVA 用 Bonferroni，s post-test)。圖18 :VSV血清型和VSV-IND特異性VIIOYEN B細胞的鑒定。(A)純化的VSV裂解液的SDS-PAGE凝膠(12% )。頂端VSV_IND和VSV-NJ。N和P蛋白在VSV-NJ中共同遷移，大約的分子量顯示于括號中。(B)Alexa-488標記的VSV_IND(中間一行)或VSV-NJ(下面一行)與來自C57BL/6小鼠(左欄)或VI10YEN小鼠(右欄)的B細胞的結合。上面一行顯示以針對 VI10YEN BCR(Dangand Rock, 1991, J. Immunol.，146 3273)的抗-個體基因型抗體35. 61進行的對照染色。(C)經CD43neg純化的、Fluo-LOJO標記的來自VI10YEN小鼠 (上面一行)或C57BL/6小鼠(下面一行)的B細胞中的細胞內鈣流動。隨時間進程連續(xù) 收集事件，星號代表加入抗體或病毒的時間點。以1000/B細胞使用病毒顆粒，以10μ g/106B 細胞使用抗-IgM-(Fab) 2。(D)足底注射 10 μ g UV-VSV 或 UV-VSV-AlexaFluor-488-IND 免疫后4天和10天，C57BL/6小鼠血清中的總Ig和IgG的中和檢驗。(E)暴露于來自VSV貯液的上清液的VI10YEN B細胞中的鈣流。上清液通過透過蔗糖墊進行超離心產生，引起病毒效價下降大約10，000倍，以不稀釋(右上)或1 100稀釋(右下)用于B細胞中。作為對照，將VSV貯液稀釋至相等的病毒效價(Μ0Ι ；左側圖板)。結果證明存在抗原性的VSV-G，其不與我們的病毒制備物中的病毒顆粒結合。圖19 =VSV誘導VI10YEN B細胞粘附至ICAM-I和VCAM-1。(A、B)純化的原態(tài)和 VSV-IND激活的VI10YEN B細胞(暴露30分鐘)粘附至以所標明濃度的重組ICAM-I-Fc (A) 或VCAM-I-Fc(B)包被的塑料板。顯示了兩個三次重復實驗的匯集數據。水平線代表平均數。(C、D)C57BL/6小鼠的胭淋巴結中ICAM-I和VCAM-I表達的共焦顯微鏡圖像。比例尺標記50 μ m。(E)純化的原態(tài)野生型和VI10YEN B細胞粘附至以所標明的pfu-等價濃度的UV滅活的VSV-IND包被的塑料皿。數據以三次重復的平均值士SEM表示。圖20 =SCS巨噬細胞對于淋巴結中VSV特異性B細胞的早期激活是必需的。(A) 共焦顯微鏡圖像顯示MHC-II與VSV-IND共定位于(注射后30分鐘)SCS中的VI10YEN χ MHCII (EGFP)B細胞，而不是深層濾泡(星號)。比例尺標記25μπι。(B)與VSV結合的和與 VSV分離的VI10YEN χ MHCII (EGFP) B細胞與SCS的距離。水平線中位數。足底注射VSV-IND 后，VIIOYEN(C)和多克隆B細胞(D)上的BCR表達的動力學。(E)注射VSV-IND(20 μ g) 后，經CLL處理的或未處理的胭淋巴結中的VI10YEN細胞上的BCR的表達。平均熒光強度按照無病毒值(虛線)進行校正。平均值士 SEM (3-5只小鼠)。注射VSV-IND (0.4 μ g) 6 小時后，對照(F)和CLL處理的(G)胭淋巴結中的VI10YEN B細胞的共焦顯微鏡圖像。比例尺標記125 μ m。(H)注射VSV-IND(標示劑量)6小時后，T/B邊界和濾泡中的VI10YEN B細胞的頻率。平均值士SEM ；η = 3-4個濾泡/2只小鼠；* :ρ < 0. 05 ；** :ρ < 0. 01 ；*** :ρ < 0. 001(t 檢驗)。圖21 病毒注射后引流淋巴結中VI10YEN B細胞的移動性。VSV足底注射后約5_35 分鐘，深層濾泡和SCS/表面濾泡中野生型(三角)和VI10YEN B細胞(圓圈)的3D瞬時速率的中位數。水平線代表平均值；* :ρ < 0. 05 ；** φ < 0. 01 ；(單側ANOVA，Bonferroni，s post-test)。注意特異性B細胞在整個濾泡中減慢下來，可能是我們的制備物中游離VSV-G 的影響(見圖18)。CLL處理和未處理的popLN中的對照實驗顯示了相似的B細胞移動性參數。圖22 注射VSV-IND之后，病毒引流和非引流的淋巴結中的VI10YEN B細胞上標記物誘導的激活的時間過程。以CMTMR熒光標記VI10YEN B細胞，并將其轉移至原態(tài)小鼠，18小時后接受20 μ g UV滅活的VSV-IND注射(時間0小時)。在所示的時間間隔之后收獲引流胭淋巴結(PopLN)和末梢臂淋巴結(brachLN)以產生單細胞懸浮液。對(A) B220+CMTMR+VI10YEN細胞或(B)B220+CMTMIT內源性對照B細胞設門之后，通過流式細胞術檢測B細胞上⑶69和⑶86的表達。圖23 接受過繼性轉移CMTMR標記的VI10YEN B細胞和CMAC標記的多克隆B細胞的混合物的小鼠(右欄)的胭淋巴結的共焦(左側和中間一欄)和MP-IVM顯微鏡圖像(右欄)。接下來的一天，在足底注射20 μ g UV滅活的VSV-IND，通過外科手術制備用于MP-IVM 分析冷凍的部分的引流胭淋巴結或收獲用于共焦分析冷凍的部分的引流胭淋巴結(在所示的時間點)。MP-IVM圖像顯示早在病毒注射之后30分鐘，VSV特異性的B細胞(而不是多克隆B細胞)即與SCS中的VSV接觸。在注射后6個小時，VI10YEN B細胞遷移至T/ B邊界。比例尺標記左欄為150 μ m和其它欄為25 μ m。圖24 使用來自人類IgG的Fc片段在體內靶向SCS_Mph。(A)左欄的FACS圖記錄了熒光PEG-PLGA納米顆粒(直徑 IOOnm)與淋巴結巨噬細胞的結合。(B) Fc-納米顆粒 (NP)靶向SCS-Mph和濾泡樹突狀細胞。圖25 在淋巴結被膜下竇(SCS)上的巨噬細胞中而非髓質中的巨噬細胞中鑒別出化學因子受體CX3CRl(fractalkine受體)。右側顯微鏡圖像是來自雙敲入小鼠的淋巴結的 3D影像，其中綠色熒光蛋白(GFP)在CX3CR1位點表達，而紅色熒光蛋白(RFP)報告另一種化學因子受體CCR2的表達。通過顯著的綠色熒光可以容易地鑒別SCS-Mph，而髓質巨噬細胞主要表達RFP。圖26 =SCS-Mph表達化學因子受體CX3CR1。圖像顯示了來自敲入小鼠(其經過遺傳工程化以在CX3CR1位點表達GFP)的淋巴結的單細胞懸浮液的FACS圖。通過可溶性受體 CRFc(其與SCS中的巨噬細胞而不與髓質中的巨噬細胞結合)染色而鑒別SCS-Mph。CRFc 陰性的表達CX3CR1的細胞(即GFP-high)是常規(guī)的表達該化學因子受體的樹突狀細胞。圖27:來自足底注射直徑為0.2μπι的乳膠珠(表面以胺(左側和中間圖板)或羧基半體(右側圖板)修飾)24小時后的小鼠胭淋巴結的冷凍部分的熒光顯微鏡圖像。兩套珠子均購自Invitrogen (Cat. no. F8763和F8805)。以抗-CD169將左側和右側的部分進行復染。將圖像調成這樣的方向髓質(以抗-CD169進行淺的彌漫染色)面向右邊，而被膜下竇(SCS)區(qū)域(以抗-CD169進行深度染色)面向左邊。注意紅色的胺修飾的顆粒主要定位于SCS，而藍色的羧基修飾的珠子主要保留在髓質中。圖28 (A)攜帶抗原的靶向納米顆粒是高度免疫原性的并誘導高抗體效價。⑶納米顆粒疫苗引發(fā)的誘導的免疫應答賦予針對致死劑量的VSV的有力的保護。圖29 通過免疫調節(jié)納米顆粒在體內激活T細胞。(A)NP對⑶4T細胞激活的影響。(B) NP對⑶8T細胞應答的影響(與CpG佐劑(一種TLR9激動劑)混合)。(C)共包埋的佐劑對CD8T細胞激活的影響。圖30 顯示了示例性的尼古丁偶聯(lián)策略。圖31 顯示了示例性的R848偶聯(lián)策略。
具體實施例方式疫苗疫苗接種通常本質上是被動或主動的。一般地，主動疫苗接種包括將個體的免疫系統(tǒng)暴露于一個或多個被識別為不必要、不想要和/或異源并且激發(fā)內源性免疫應答(引起抗原特異性原態(tài)淋巴細胞的激活，然后產生分泌抗體的B細胞或抗原特異性效應和記憶 T細胞或二者)的試劑。這種方式可以引起長期的保護性免疫力，其可通過重復暴露于相同的抗原性材料而不時地被增強。針對主動免疫接種的成功的免疫應答的長期性的前景使得該策略在多數臨床實踐中比被動免疫接種更可取，在被動免疫接種中，受體被注射預制的抗體或抗原特異性效應淋巴細胞，這產生迅速的特別的保護，但通常不會建立持久性免疫力。在人類中正在應用或已經應用了大量多種的疫苗制劑。人類中最常見的使用途徑是肌肉內(i.m.)注射，但是疫苗還可以通過口服、鼻內、皮下、吸入或靜脈內使用。在多數情況下，源自疫苗的抗原最初被呈遞到區(qū)域淋巴結的原態(tài)淋巴細胞。目前一些針對例如微生物病原體的疫苗由活的減毒的微生物或微生物的非毒性變體菌株或殺死的或滅活的生物體組成。其它疫苗利用或多或少的純化的病原體裂解物的成分，例如表面碳水化合物或重組的源自病原體的蛋白(其有時與其它分子特別是賦予輔助活性的蛋白融合)。用于肌肉內注射的疫苗通常與輔助性載體(最常用的是明礬，即硫酸鉀鋁)一起施用，輔助性載體被認為建立一個用于抗原性材料的延釋的倉庫，但也表現(xiàn)出免疫調節(jié)活性，例如通過不完全了解的機理而偏向Th2應答(Lindblad，2004，Immunol. Cell. Biol.， 82 497 ；和Jordan等人，2004，Science, 304 1808 ；二者皆通過引用并入本文)。使用活的減毒的或滅活的病原體的疫苗通常產生有力的免疫應答，但是它們的使用具有局限性。例如，活的疫苗菌株有時候會引起傳染性病狀，特別是當施用于免疫妥協(xié)的受體時。此外，很多病原體，特別是病毒，在它們的基因組中持續(xù)進行迅速的變異，這允許它們逃脫針對抗原性不同疫苗菌株的免疫應答。但是，多數或所有的病原體被認為具有一些不容易突變的抗原性決定簇，因為它們與必需的功能相關。針對這些保守性表位(而不是更可變的、非必需的表位)的抗體能夠提供抵抗高度突變的病毒的保護(Baba等人，2000， Nat. Med.，6 200 ；通過引用并入本文)?；诨畹幕驓⑺赖耐暾≡w的疫苗不一定促進對這些關鍵表位的識別，但是可能實質上“迷惑”免疫系統(tǒng)將其攻擊聚集在高度可變的決定簇。因此，本發(fā)明包括以下認識模擬病毒顆粒的高免疫原性顆粒性質但呈現(xiàn)出選擇性的必需的不可變表位的工程化疫苗納米載體能夠產生比完整微生物更加有力且“防逃脫的”的中和抗體和效應T細胞應答。仍然尚未完全了解疫苗刺激引流淋巴結中的抗體免疫應答(或不能這樣)的精確機理。B和T細胞最初被隔絕在不同的解剖區(qū)域，分別為位于表面的B濾泡和周圍的副皮質區(qū)和深的皮層。在抗原刺激后，濾泡中的抗原特異性B細胞和T細胞區(qū)域中的CD4T細胞被激活，然后朝著兩個隔間(compartment)之間更寬的區(qū)域遷移。吞噬了淋巴攜帶的抗原的 B細胞處理所獲得的材料并開始呈遞II類MHC表面分子中的抗原性肽，然后由激活的CD4T 細胞(Tfh細胞)識別?？乖R別允許Tfh細胞向B細胞提供幫助，這構成有力的生存信號并激發(fā)B濾泡內生發(fā)中心(GC)的形成。GC反應促進類別轉換重組、抗原特異性抗體的親和成熟，和記憶B細胞與長生血漿細胞(其能夠長時間地產生大量的高親和性抗體)的形成。因此，本發(fā)明包含以下認識疫苗納米載體可以具有允許抗原性材料被B和T細胞同時有效識別并誘導有力的GC反應的成分(圖1)。本發(fā)明描述了用來開發(fā)用于疫苗輸送的疫苗納米載體的系統(tǒng)，其能夠克服目前疫苗技術的上述這些局限性。本發(fā)明包含以下認識淋巴攜帶的病毒顆粒(其具有數十至數百納米的直徑并誘導有力的細胞和抗體應答)被捕獲并被保留在引流淋巴結的被膜下竇的巨噬細胞(即，被膜下竇巨噬細胞，簡寫為SCS-Mph)的表面。這些巨噬細胞參與完整的病毒顆粒至濾泡B細胞的有效的早期呈遞。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體模擬病毒顆粒并靶向SCS-Mph。如實施例1所示，在皮下注射包被了 Cy5的聚(乳酸羥基乙酸)(PLGA)納米顆粒(50nm-150nm)(其被單層脂和聚乙二醇表面穩(wěn)定化)之后，注射的納米顆粒容易地進入淋巴并結合在引流淋巴結的被膜下竇，與淋巴攜帶的病毒相似。攜帶刺激B細胞和/或T細胞的免疫調節(jié)試劑的相似納米載體在免疫接種個體中是特別有用的。因此，本發(fā)明包含以下認識攜帶免疫調節(jié)試劑的納米載體(例如大小為淋巴攜帶的病毒的納米載體)能夠在淋巴結中被識別，就像它們是病毒一樣，并且可以激發(fā)有力的免疫應答，例如，當顆粒包括由B細胞和/或T細胞識別的免疫調節(jié)試劑時。通過在表面攜帶免疫調節(jié)試劑和/或在內部裝載相似或不同的免疫調節(jié)試劑，納米載體能夠將這些免疫調節(jié)試劑同時輸送到免疫系統(tǒng)的不同細胞并刺激它們。在一些具體實施方式中，存在于納米載體表面的免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，包埋于納米載體內部的免疫調節(jié)試劑在淋巴組織內(和通過激活后的B細胞)被抗原呈遞細胞(APC)例如樹突狀細胞(DC)處理并呈遞給T細胞。在一些具體實施方式
中，通過以靶半體(例如，抗體或其片段、肽或多肽、Affibody 、Nanobody 、AdNectin 、Avimer 、適配子、Spiegelmer 、小分子、
月旨、碳水化合物等)修飾納米載體的表面，納米載體能夠選擇性地輸送免疫調節(jié)試劑至特異性抗原呈遞細胞，例如DC、SCS-Mph、FDC、T細胞、B細胞和/或其組合。納米載體可以是 (但不限于此)一個或多個脂納米顆粒、聚合物納米顆粒、金屬納米顆粒、基于表面活性劑的乳劑、樹枝狀聚合物和/或使用納米材料的組合(例如脂_聚合物納米顆粒)開發(fā)的納米顆粒。在標題為“疫苗納米載體”的部分中進一步詳細描述疫苗納米載體。T 細胞本發(fā)明提供了用于將例如免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞的疫苗納米載體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一個能被輸送至APC的免疫調節(jié)試劑，然后APC處理該免疫調節(jié)試劑并將其輸送至T細胞。專職APC可以非常有效地使抗原內在化(通過吞噬或內吞)，然后顯示抗原的片段，與APC膜上的II類主要組織相容性復合體(II類MHC)分子或I類MHC分子相結合。 ⑶4T細胞識別APC膜上的抗原-II類MHC分子復合體并與之相互作用，而⑶8T細胞識別抗原-I類MHC分子復合體并與之相互作用。然后APC產生另外的共刺激信號以及調節(jié)性細胞因子，從而引起T細胞的激活。免疫調節(jié)試劑本發(fā)明提供了包含一個或多個免疫調節(jié)試劑的疫苗納米載體。在一些具體實施方式中，包含一個或多個免疫調節(jié)試劑的本發(fā)明的納米載體被用作疫苗。在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑可以包含分離的和/或重組的蛋白或肽、碳水化合物、糖蛋白、糖脂、糖肽、蛋白聚糖、滅活的生物和病毒、死的生物和病毒、遺傳改變的生物或病毒，和細胞提取物。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包含核酸、碳水化合物、脂和/或小分子。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是激發(fā)免疫應答的試劑。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是編碼蛋白或肽的多核苷酸，當蛋白或肽被表達時，免疫應答被激發(fā)。在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑是抗原。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是蛋白或肽。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑用于疫苗。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是任何源自病原體的蛋白和/或其它抗原。病原體可以是病毒、細菌、真菌、原生動物、寄生蟲等。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包括細菌生物的抗原，例如包柔氏螺旋體屬(Borreliaspecies)、炭疽芽胞桿菌(Bacillus anthracis)、伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)、百日咳嗜血桿菌 (Bordetella pertussis)、彎曲！f 菌(Camphylobacter jejuni)、衣原體屬(Chlamydia species)、鸚鵡熱衣原體(Chlamydial psittaci)、生殖道沙眼衣原體(Chlamydial trachomatis)、梭菌屬(Clostridium species)、破傷風梭菌(Clostridiumtetani)、內毒桿菌(Clostridium botulinum)、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、白喉桿菌(Corynebacterium diphtheriae)、柯克斯體屬(Coxiella species)、腸球菌屬 (Enterococcus species)、埃立克體屬(Erlichia species)、大腸桿菌、土拉熱弗郎西 ViM (Francisella tularensis) > Bf ifilff ^M (Haemophilus species)、胃口filff 胃 (Haemophilus influenzae)、畐Ij流感嗜血桿菌(Haemophilus parainfluenzae)、乳酸菌屬 (Lactobacillus species)、軍團桿菌屬(Legionella species)、嗜月市軍團菌(Legionella pneumophila)、問號鉤端螺方寵體(Leptospirosis interrogans)、李斯特菌屬(Listeria species)、單核增生性李其jf特菌(Listeria monocytogenes)、分支桿菌屬(Mycobacterium species)、結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻風分枝桿菌(Mycobacterium leprae)、支原體屬(Mycoplasma species)、月市炎支原體(Mycoplasmapneumoniae)、奈瑟菌屬(Neisseria species)、腦膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitides)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、月市炎球菌屬(Pneumococcusspecies)、假單胞菌屬 (Pseudomonas species)、綠胺桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、沙門氏菌屬(Salmonella species)、傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella enterica)、立克次氏體屬(Rickettsia species)、落肌山熱立克次體(Rickettsia ricketsii)、地方性斑疹傷寒立克次氏體(Rickettsia typhi)、志賀氏桿菌屬(Shigella species)、葡萄狀球菌屬(Staphylococcus species)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鏈球菌屬(Streptococcus species)、月市炎鏈球菌(Streptococccus pnuemoniae)、月農鏈球菌(Streptococcus pyrogenes)、變禾中鏈球菌(Streptococcus mutans)、密螺方寵體屬 (Treponema species)、梅毒螺方寵體(Treponemapallidum)、弧菌屬(Vibrio species)、霍舌L 弧菌(Vibrio cholerae)、鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis)等。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包括病毒生物的抗原，例如痘病毒、小痘病毒(天花)、埃博拉病毒、嗜肝DNA病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹(麻疹病毒)、人類免疫缺陷病毒(HIV)、人類乳頭瘤病毒(HPV)、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒1和2、細胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、正粘病毒、乳頭瘤病毒、細小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質炎病毒、腮腺炎、狂犬病、呼吸道腸道病毒、風疹病毒、外衣病毒、逆轉錄病毒、柯薩奇病毒、委內端拉馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝、乙肝、丙肝、丁肝和戊肝病毒等。病毒生物包括dsDNA病毒、ssDNA病毒、dsRNA病毒、(+) ssRNA病毒(-) sRNA 病毒、ssRNA-RT 病毒和 dsDNA-RT 病毒。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包括真菌、原生動物和/或寄生蟲生物的抗原，例如曲霉屬(Aspergillus species)、假絲酵母屬(Candida species)、白色念珠菌(Candida albicans)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)、隱球酵母屬(Cryptococcus species)、新型隱球酵母(Cryptococcus neoformans)、溶組織內阿米巴(Entamoeba histolytica) > 莢膜組織胞菜菌(Histoplasma capsulatum) > 禾丨J什曼蟲屬(Leishmaniaspeceis)、星形諾卡氏菌(Nocardiaasteroides)、皰原蟲 (Plasmodiumfalciparum)、剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)、陰道毛滴蟲(Trichomonas vaginalis)、弓形體屬(Toxoplasma species)、布氏維蟲(Trypanosoma brucei)、曼森氏住血吸蟲(Schistosoma mansoni)等。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包括HCV的El和/或E2蛋白。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包括HIV的gpl20。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié) 試劑可以包括流感病毒的紅血球凝聚素和/或神經氨糖酸苷酶。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包括肺炎鏈球菌或家族1和/或家族2PspA的肺炎球菌多糖或5型和8 型莢膜多糖或識別金黃色葡萄球菌的吸附性基質分子的微生物細胞表面成分。在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑可以包括白色念珠菌的甘露聚糖或新型隱球酵母的隱球菌莢膜多糖。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包括瘧原蟲的PfEMPl或其它在瘧原蟲感染的紅血細胞上表達的源自寄生蟲的抗原或剛地弓形蟲的GRA7。本文描述的任何抗原均可以是完全殺死的生物、肽、蛋白、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、編碼蛋白或肽的核酸、碳水化合物、小分子或其組合的形式。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑源自這樣的微生物對于該微生物已經存在至少一種疫苗。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑源自這樣的微生物對于該微生物尚未開發(fā)疫苗。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一種類型免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的所有的免疫調節(jié)試劑彼此是相同的。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含許多不同的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含多個單獨的免疫調節(jié)試劑，它們均是相同的。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體精確地包含一種類型免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體精確地包含兩類不同類型的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上不同類型的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含3、4、5、6、7、8、9、10或更多種不同類型的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫調節(jié)試劑，二者源自同一個屬的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫調節(jié)試劑，二者源自同一個屬和種的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫調節(jié)試劑，二者源自同一個屬、種和株的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫調節(jié)試劑，二者源自同一個克隆的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其均源自同一個屬的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型免疫調節(jié) 試劑，其均源自同一個屬和種的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其均源自同一個屬、種和株的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其均源自同一個克隆的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種或兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其均源自同一個屬的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種或兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其均源自同一個屬和種的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種或兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其均源自同一個屬、種和株的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種或兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其源自同一個種的不同株的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種或兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其源自同一個屬的不同種的微生物。在其它具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種或兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，每個源自不同屬的微生物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含僅一種類型免疫調節(jié)試劑，其同時刺激B細胞和T細胞中的免疫應答。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫調節(jié)試劑，其中第一種免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，第二種類型免疫調節(jié)試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式
中，一種或兩種試劑可以刺激T細胞和B細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其中一種或多種類型免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，一種或多種類型免疫調節(jié)試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一種類型免疫調節(jié)試劑，其與疫苗納米載體的外表面結合。在一些具體實施方式
中，結合是共價的。在一些具體實施方式
中，共價結合由一個或多個連接子介導。在一些具體實施方式
中，結合是非共價的。在一些具體實施方式
中，非共價結合由電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵結合相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極_偶極相互作用和/或其組合所介導。對于免疫調節(jié)試劑如何與疫苗納米載體結合的更詳細的描述，請參見以下標題為“疫苗納米載體的產生”的部分。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包括脂膜(例如脂雙層、脂單層等)。至少一個免疫刺激試劑可以與脂膜結合。在一些具體實施方式
中，至少一個免疫刺激試劑嵌入脂膜內。一些具體實施方式
中，至少一個免疫刺激試劑嵌入脂雙層的腔內。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體包含至少一個與脂膜的內表面結合的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式中，至少一個免疫調節(jié)試劑包埋于疫苗納米載體的脂膜內。在一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫調節(jié)試劑可以位于疫苗納米載體的多個位點。例如，第一種類型免疫調節(jié)試劑可以嵌于脂膜內，第二種類型免疫調節(jié)試劑可以包埋于疫苗納米載體的脂膜內。再舉一個例子，第一種類型免疫調節(jié)試劑可以與脂膜的外表面結合，第二種類型免疫調節(jié)試劑可以與疫苗納米載體的脂膜的內表面結合。在一些具體實施方式
中，第一種類型免疫調節(jié)試劑可以嵌于疫苗納米載體的脂雙層的腔內，脂雙層中可以包埋聚合物基質，第二種類型免疫調節(jié)試劑可以分布在所述聚合物基質中。在一些具體實施方式
中，第一種類型免疫調節(jié)試劑和第二種類型免疫調節(jié)試劑可以位于疫苗納米載體的相同位點(例如它們可都與疫苗納米載體的外表面結合；它們可都包埋于疫苗納米載體內，等)。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含聚合物(例如聚合物核心)。至少一種類型免疫調節(jié)試劑可以與聚合物結合。在一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫調節(jié)試劑嵌入聚合物內。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一種類型與聚合物的內表面結合的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫調節(jié)試劑包埋于疫苗納米載體的聚合物內。在一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫調節(jié)試劑可以位于疫苗納米載體的多個位點。例如，第一種類型免疫調節(jié)試劑可以嵌于聚合物內，第二種類型免疫調節(jié)試劑可以包埋于環(huán)繞疫苗納米載體的聚合物核心的脂膜內。再舉一個例子，第一種類型免疫調節(jié)試劑可以與聚合物的外表面結合，第二種類型免疫調節(jié)試劑可以嵌于疫苗納米載體的聚合物內。本領域普通技術人員將認識到前述例子只是多個免疫調節(jié)試劑可以與疫苗納米載體的不同位點結合的很多不同方式的代表。多個免疫調節(jié)試劑可以位于疫苗納米載體的任意位點的組合。另外，前述例子還可適用于納米載體的其它試劑(例如免疫刺激試劑)。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是T細胞抗原，且T細胞抗原源自疫苗所要針對的相同病原體。在這種情況下，最初刺激少量的原態(tài)T細胞以產生病原體特異性效應和記憶T細胞。在一些具體實施方式
中，抗原可以取自不相關的來源，例如對其已經存在廣泛的免疫力的傳染性試劑(例如，破傷風類毒素或流感病毒的常見成分，例如紅血球凝聚素、神經氨糖酸苷酶或核蛋白)。在后一種情況下，疫苗利用記憶T細胞(其為針對以前的感染或疫苗接種而產生)的存在。記憶細胞一般針對抗原重刺激反應迅速并且有力，因此，可以提供對B細胞的幫助的優(yōu)越的來源。其它的T細胞抗原包括但不限于退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變應原、同種抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、接觸敏感劑、半抗原、異種抗原或代謝性疾病酶或酶產物。在一些具體實施方式
中，傳染性疾病抗原是病毒抗原，其包括但不限于源自本文描述的任何病毒的任何抗原。T細胞抗原的例子包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原以完整蛋白整合入納米載體。在一些具體實施方式中，T細胞抗原以修飾的蛋白整合入納米載體。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原以突變的蛋白整合入納米載體。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原以重疊肽的集合提供，其可以增強抗原整合入II類MHC復合體，從而進一步促進幫助性應答。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原以非重疊肽的集合提供，其可以增強抗原整合入II類MHC復合體，從而進一步促進幫助性應答。在一些具體實施方式
中，T細胞抗原以編碼抗原的核酸提供。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體(例如疫苗納米載體)包含90%重量以下的、75%重量以下的、50%重量以下的、40%重量以下的、30%重量以下的、20%重量以下的、15%重量以下的、10%重量以下的、5%重量以下的、重量以下的或0.5%重量以下的免疫調節(jié)試劑。靶半體在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體包含一個或多個靶半體。在本發(fā)明的一些具體實施方式
中，納米載體與一個或多個靶半體結合。靶半體可以是與器官、組織、細胞、細胞外基質和/或亞細胞位點結合的成分的任何半體。在一些具體實施方式
中，這樣的成分被稱為“靶”或“標記物”，以下進一步詳細討論。靶半體可以是核酸、多肽、糖蛋白、碳水化合物、脂、小分子等。例如，靶半體可以是結合至細胞類型特異性標記物的核酸靶半體(例如適配子Spiegelmer 等)。一般地，適配子是與特定靶(例如多肽)結合的寡核苷酸(例如，DNA、RNA或其類似物或衍生物)。在一些具體實施方式
中，靶半體可以是針對細胞表面受體(例如生長因子、激素、LDL、轉運蛋白等)的天然產生的或合成的配體。靶半體可以是抗體，該術語包括抗體片段、抗體的特征性部分、單鏈抗體等?？梢允褂煤铣傻慕Y合蛋白例如Affib0dieS 、Nan0b0diesTM、AdNeCtinsTM、 Avimers 等?？梢酝ㄟ^使用例如噬菌體顯示程序鑒定肽靶半體。已經使用這個廣泛使用的技術來鑒定多種不同的細胞類型的細胞特異性配體。根據本發(fā)明，靶半體識別與特定器官、組織、細胞和/或亞細胞位點結合的一個或多個“靶”或“標記物”。在一些具體實施方式
中，靶可以是與一種或一些細胞類型、與一種或一些疾病和/或與一種或一些發(fā)育時期獨特地相關或主要相關的標記物。細胞類型特異性標記物通常在該細胞類型中比在參考細胞群體(其可以由例如含有大約相同數量細胞(例如，大約相同數目的細胞、大約相同體積的細胞、大約相同質量的細胞等)的混合物組成) 中的表達水平高至少2倍。在一些具體實施方式
中，細胞類型特異性標記物的存在水平比參考群體中的平均表達高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍、至少1000倍、至少5000倍或至少 10，000倍。對細胞類型特異性標記物的檢測或測定使得可能將目標細胞類型從很多、多數或所有其它細胞類型中區(qū)分開。在一些具體實施方式
中，靶可以包含蛋白、碳水化合物、脂和/或核酸。在一些具體實施方式中，靶可以包含蛋白和/或其特征性部分，例如腫瘤標記物、整合素、細胞表面受體、跨膜蛋白、細胞間蛋白、離子通道、膜轉運蛋白、酶、抗體、嵌合蛋白、糖蛋白等。在一些具體實施方式
中，靶可以包含碳水化合物和/或其特征性部分，例如糖蛋白、糖(例如，單糖、二糖、多糖)、糖衣(即，多數真核細胞外表面上的富含碳水化合物的外周區(qū))等。在一些具體實施方式
中，靶可以包含脂和/或其特征性部分，例如油、脂肪酸、甘油酯、激素、類固醇(例如膽固醇、葉酸)、維生素(例如維生素E)、磷脂、鞘脂類、脂蛋白等。在一些具體實施方式中，靶可以包含核酸和/或其特征性部分，例如DNA核酸；RNA核酸；修飾的DNA核酸；修飾的RNA核酸；包括DNA、RNA、修飾的DNA、修飾的RNA的任意組合的核酸；等。在一些具體實施方式
中，靶半體可以是來自VSV的表面糖蛋白分子。VSV包含單一表面分子VSV-G，其為toll樣受體激動劑。VSV有效地靶向免疫系統(tǒng)的細胞，所以在一些具體實施方式中，疫苗納米載體可以包含VSV表面分子從而將疫苗納米載體靶向免疫系統(tǒng)的細胞。在一些具體實施方式
中，靶是腫瘤標記物。在一些具體實施方式
中，腫瘤標記物是在腫瘤細胞上但不在健康和/或正常細胞上表達的抗原。在一些具體實施方式
中，腫瘤標記物是在腫瘤細胞上比在健康和/或正常細胞上更普遍存在的抗原。示例性腫瘤標記物包括但不限于gplOO ；Melan-A ；酪氨基酸激酶；PSMA ；HER-2/neu ；MUC-1 ；拓撲異構酶Ila ； sialyl-Tn ；癌胚抗原；ErB_3_結合蛋白_1 ； a胎蛋白；和睪丸癌抗原MAGE_A1、MAGE A4和 NY-ES0-1。在一些具體實施方式
中，靶是APC標記物。在一些具體實施方式
中，APC靶是在APC 上表達但不在非APC上表達的抗原。在一些具體實施方式
中，APC靶是在APC上比在非APC 上更普遍存在的抗原。示例性APC標記物包括但不限于⑶11c、⑶lib、⑶14、⑶40、⑶45、 CD163、CD169(sialoadhesion)、DEC205(CD205)、II 類 MHC、DC-SIGN、CD21/CD35 和 Fc yRI、 PD-L2。在一些具體實施方式
中，APC標記物包括任何DC和/或巨噬細胞標記物，其例子在本文描述。在一些具體實施方式
中，靶是DC標記物。在一些具體實施方式
中，DC靶是在DC上表達但不在非DC上表達的抗原。在一些具體實施方式
中，DC靶是在DC上比在非DC上更普遍存在的抗原。示例性DC標記物在下面標題為“樹突狀細胞”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，靶是T細胞標記物。在一些具體實施方式
中，T細胞靶是在T細胞上表達但不在非T細胞上表達的抗原。在一些具體實施方式
中，T細胞靶是在T細胞上比在非T細胞上更普遍存在的抗原。示例性T細胞標記物在下面標題為“T細胞靶半體”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，靶優(yōu)先在特定細胞類型中表達。例如，APC、DC和/或T 細胞上的APC、DC和/或T細胞靶的表達相對于參考群體來說在APC、DC和/或T細胞中為至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍過表達。在一些具體實施方式
中，參考群體可以包含非APC、FDC 和/或T細胞。在一些具體實施方式
中，激活的APC、DC和/或T細胞上的APC、DC和/或T細胞靶的表達相對于參考群體來說在激活的APC、DC和/或T細胞中為至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000 倍過表達。在一些具體實施方式
中，參考群體可以包含非激活的APC、FDC和/或T細胞。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體(例如疫苗納米載體)包含50%重量以下的、40%重量以下的、30%重量以下的、20%重量以下的、15%重量以下的、10%重量以下的、5%重量以下的、重量以下的或0.5%重量以下的靶半體。在一些具體實施方式
中，靶半體與納米載體共價結合。在一些具體實施方式
中，共價結合由連接子介導。在一些具體實施方式
中，靶半體與納米載體不是共價結合。例如，靶半體可以與本發(fā)明的顆粒的聚合物基質的表面結合、包埋于其中、由其環(huán)繞和/或分布于其中。例如，在一些具體實施方式
中，靶半體可以包埋于納米載體的脂質體膜和/或聚合物
60基質內、由其環(huán)繞和/或分布于其中。作為選擇，抑或是另外，靶半體可以通過電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵結合相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合與納米載體結合。靶半體與疫苗納米載體的結合在以下標題為“疫苗納米載體的產生”的部分中有更詳細的描述。樹突狀細胞樹突狀細胞(DC)是一類髓細胞樣的白細胞；它們是在對T淋巴細胞的最有力的抗原呈遞細胞之中。靜止態(tài)DC以非成熟的耐受態(tài)存在于很多組織中，包括淋巴結，即它們呈遞中級至高水平的肽-MHC復合體(但其中幾乎沒有或沒有共刺激分子并且不分泌T細胞所需的用于分化成效應細胞的細胞因子)。接受非成熟DC呈遞的特異性抗原的T細胞開始增殖幾天，但是然后它們通過細胞凋亡而死亡或變得對進一步激活無反應。接著發(fā)生的抗原特異性T細胞應答的消除賦予宿主針對該抗原的選擇性耐受。與此相反，當DC獲得抗原而它們暴露于成熟刺激物時，細胞迅速上調MHC和共刺激分子并分泌幾種細胞因子?，F(xiàn)在成熟的DC是效應T細胞和免疫記憶的有力誘導者。DC的成熟可以由很多信號誘導，例如一些炎性細胞因子、DC表達的⑶40的連接、TLR的激動劑(例如細菌內毒素)、免疫復合體、激活的補體、壞死的細胞、凋亡的細胞、游離尿酸鹽、尿素鹽晶體和/或HMGB-I。DEC_205(即⑶205)是表面表達的多功能血凝素，其在DC和淋巴組織中的胸腺上皮細胞中選擇性表達。以皮下注射嵌合a-DEC-205單克隆抗體進行的體內實驗已經表明在小鼠和人類中，配體與DEC-205的結合誘導有效的內在化和后續(xù)的對內吞的材料的處理以在 MHC 分子中呈遞(Hawiger 等人，2001，J. Exp. Med. 194 769 ；Bonifaz 等人，2002， J. Exp. Med.，196 1627 ；和 Bozzacco 等人，2007，Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 104 1289 ；每篇均通過弓丨入并入本文)。在皮內或皮下注射后，嵌合抗體通過淋巴管轉運至引流淋巴結，在引流淋巴結嵌合抗體與常駐的DC特異性結合，因此提供將抗原靶向靜止態(tài)DC (而不引起它們的成熟)的方式。靶向的DC然后將誘導T細胞對所呈遞的抗原的耐受，而不是免疫力。但是，當以誘導DC成熟的免疫刺激試劑(例如α -⑶40或一種或多種DC上表達的TLR的配體；在以下標題為“免疫刺激試劑”的部分有更進詳細的討論)一起靶向DEC-205時，則疫苗作為有力的免疫刺激劑優(yōu)先促進細胞毒和Thl型的效應T細胞應答?？梢酝ㄟ^與DC-205、CDllc, II 類 MHC、CD80、CD86、DC-SIGN、CDllb、BDCA-U BDCA-2、BDCA-4、Siglec-H、CX3CR1 和 / 或 Langerin 結合的半體實現(xiàn)靴向 DC。在一些具體實施方式
中，可以通過與任何主要在DC上表達和/或存在的物質 (即DC標記物)(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)特異性結合的任何靶半體實現(xiàn) 靶向 DC。示例性 DC 標記物包括但不限于，CDla(R4, T6，HTA-1) ；CDlb(Rl) ；CDlc(M241， R7) ； CDld(R3) ； CDle(R2) ；CDl Ib ( α M 整合素鏈，CR3, Mol，C3niR, Mac-1) ；CDllc(aX 整合素，pl50，95，AXb2) ；CDwl 17 (乳糖基神經酰胺，LacCer) ；CD19(B4) ；CD33(gp67) ；CD 35 (CRl, C3b/C4 受體)；CD 36(GpIIIb, GPIV, PASIV) ；CD39 (ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-1)； CD40(Bp50) ；CD45(LCA, T200, B220, Ly5) ；CD45RA；CD45RB ；CD45RC ；CD45R0(UCHL-I)； CD49d (VLA-4 α，α 4 整合素)；CD49e (VLA-5 α，α 5 整合素)；CD58 (LFA-3) ；CD64 (Fe y RI)； CD72(Ly-19. 2, Ly-32. 2, Lyb-2) ；CD73(Ecto_5 ‘核苷酸酶)；CD74(Ii，不變鏈)； CD80(B7, B7-1, BBl) ；CD81(ΤΑΡΑ-Ι) ；CD83(HB15) ；CD85a(ILT5, LIR3, HL9) ；CD85d(ILT4,LIR2, MIR10) ；CD85j (ILT2, LIR1, MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HM18)；CD86(B7-2/B70)； CD88 (C5aB) ；CD97 (BL-KDD/F12) ；CD IOl (IGSF2, P126, V7) ；CDl16 (GM-CSFRα )； CD120a(TMFRI, p55) ；CD120b (TNFRII，p75，TNFR p80) ；CD123 (IL-3Rα ) ；CD139 ； CD148(HPTP- η , ρ260, DEP-1) ；CD 150 (SLAM, ΙΡΟ-3) ；CD 156b (TACE, ADAM 17，cSVP) ；CD 157 (Mo5, BST-1) ； CD 167a (DDR1, trkE, cak) ；CD168 (RHAMM，IHABP, HMMR) ；CD169(唾液酸粘合素，Siglec-1) ；CD170(Siglec-5) ；CD171 (L1CAM, NILE) ；CD172 (SIRP-1 α，MyD-1)； CD172b(SIRP3 ) ；CD180 (RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184 (CXCR4, NPY3R) ；CD193(CCR3)； CD196 (CCR6) ；CD197 (CCR7(wsCDwl97)) ；CDwl97 (CCR7, EBI1, BLR2) ；CD200 (0X2)； CD205(DEC-205) ；CD206(MMR) ；CD207 (Langerin) ；CD208(DC-LAMP) ；CD209(DC-SIGN)； CDw218a(IL18Ra ) ； CDw218b (IL8R β ) ； CD227(MUC1, PUM, PEM, EMA) ；CD230(朊病毒蛋白 (PrP)) ；CD252(0X40L，TNF(配體)超家族，成員 4) ；CD258 (LIGHT，TNF(配體)超家族，成員 14) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD271(NGFR, p75, TNFR 超家族，成員 16) ；CD273(B7DC, PDL2) ；CD274(B7H1, PDL1) ；CD275(B7H2, ICOSL) ；CD276(B7H3)； CD277 (BT3. 1，B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；CD283(TLR3, TOLL 樣受體 3) ；CD289(TLR9, TOLL 樣受體 9) ； CD295 (LEPR) ； CD298 (ATP1B3, Na K ATPase β 3 亞基)；CD300a (CMRF-35H)； CD300c(CMRF-35A) ；CD301(MGL1，CLECSF14) ；CD302 (DCLl) ；CD303(BDCA2) ；CD304 (BDCA4)； CD312(EMR2) ；CD317(BST2) ；CD319(CRACC, SLAMF7) ；CD320(8D6)；禾口 CD68(gpllO， Macrosialin) ；II類MHC ；BDCA-I ；Siglec-H ；其中括號中所列名稱代表別名。T細胞靶半體在一些具體實施方式
中，可以通過與任何主要在T細胞上表達和/或存在的物質(即T細胞標記物)(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)特異性結合的任何靶半體實現(xiàn)靶向T細胞。示例性T細胞標記物包括但不限于，⑶2(E-r0Sette R，T11， LFA-2) ；CD3(T3) ；CD3 α ；CD3 3 ；CD3 ε ；CD4(L3T4, W3/25, T4) ；CD5(T1, Tp67, Leu-1, LY-1) ；CD6(T12) ；CD7(gp40, Leu 9) ；CD8a(Leu2, T8, Lyt2,3) ；CD8b(CD8, Leu2, Lyt3)； CDlla(LFA_l α，α 整合素鏈)；0)1113(0]\1整合素鏈，0 3，]\101，〇311士1 ，]\&1(；-1) ；CDllc(a X 整合素，pl50，95，AXb2) ；CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3 ‘硫代 Lewis X) ；CD15su (6 硫代-唾液酰 Lewis X) ；CD16b (FcgRIIIb) ；CDwl7(乳糖基神經酰胺，LacCer) ；CD 18(整合素 0 2CDlla，b，c β -亞基)；CD26 (DPP IV 外酶，ADA 結合蛋白)；CD27 (T14， S152) ；CD28(Tp44, T44) ；CD29(血小板 GPIIa, β-1 整合素，GP) ；CD31 (PECAM-1， Endocam) ；CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD37 (gP52_40) ；CD38(ADP-核糖基 / 環(huán)化酶， T10) ；CD43(Sialophorin, Leukosialin) ；CD44(ECMRII, H-CAM, Pgp-I) ；CD45(LCA，T200, B220, Ly5) ；CD45RA(p561ck, p59fyn, Src 激酶)；CD45RB(p561ck，p59fyn, Src 激酶)； CD45RC(p561ck, p59fyn, Src 激酶)；CD46(MCP) ；CD47(gp42, IAP, 0A3, Neurophi11 in)； CD47R(MEM-133) ；CD48 (Blast-1，Hulym3, BCM-1, 0Χ-45) ；CD49c (VLA-3 α，α3 整合素)；CD49d(VLA-4a，a 4 整合素)；CD49e (VLA—5 α，a 5 整合素)；CD49f (VLA-6 α， a6 整合素 gplc) ； CD50(ICAM-3) ；CD52 (CAMPATH-1，HES) ；CD53(0X_44) ； CD54 (ICAM-I)； CD55(DAF) ；CD56(Leu-19, NKH-I, NCAM) ；CD57(HNK1, Leu-7) ；CD58 (LFA-3) ；CD59(lF5Ag， H19, Protectin, MACIF, MIRL, P-18) ；CD60a(GD3) ；CD60b (9_0_ 乙?；?GD3) ；CD60c(7_0 乙酰基 GD3) ；CD62L(L-選擇素，LAM-1, LECAM-I, MEL-14，Leu8, TQl) ；CD73(Ecto_5 ‘-核^SISI ) ；CD75( Biy^ ^ffiW Lactosamine) ；CD75S ( α 2,6sialylated Lactosamine)； CD81(TAPA-I) ；CD82(4F9, C33, IA-4， KAI1, R2) ；CD84(P75, GR6) ；CD85a(ILT5, LIR3, HL9) ；CD85j(ILT2, LIRl，MIR7) ；CD87(uPAR) ；CDw92(p70) ；CD94(Kp43) ；CD95(AP0_1， FAS, TNFRSF6) ；CD98(4F2, FRP-I, RL-388) ；CD99(MIC2, E2) ；CD99R(CD99Mab 限制的)； CDlOO (SEMA4D) ；CD 102 (ICAM-2) ;CD108(SEMA7A，JMH 血型組抗原)；CDw119(IFNyR， IFN γ Ra) ；CD120a(TNFRI, p55) ;CD120b(TNFRII，p75, TNFR p80) ；CD121a(l 型 IL-1R)； CD121b(2 型 IL-1R) ； CD122 (IL2R β ) ；CD124 (IL-4R α ) ； CD 126(IL_6Ra) ； CD127(p90, IL-7R, IL-7Ra ) ；CD128a(IL_8Ra，CXCDl，(暫時命名為 CD181)) ;CD128b(IL_8Rb，CXCR2, (暫時命名為 CD182)) ；CD 130 (gp 130) ；CD132(常見的 γ 鏈，IL-2Ry) ；CD 147(Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD 148(HPTP- η, ρ260, DEP-1) ；CD150(SLAM, ΙΡ0-3) ；CD153(CD30L, TNSF8) ；CD156b(TACE, ADAMl7, cSVP) ；CD158a (KIR2DL1，p58. 1) ；CD158bl(KIR2DL2, p58.2) ；CD158b2(KIR2DL3, p58.3) ；CD158c(KIR2DS6, KIRX) ；CD158|el/e2(KIR3DLI/S1， p70) ；CD159F(KIR2DL5) ；CD158g(KIR2DS5) ；CD158h(KIR2DS1，p50.1) ；CD158i(KIR2DS4, p50.3) ；CD158j(KIR2DS2, p50. 2) ；CCD158k(KIR3DL2, pl40) ;CD159a(NKG2A) ；CD160(BY55, NKl, NK28) ；CD161(NKR, NKRPlΑ) ；CD162(PSGL-1) ;CD164(MGC_24，MUC-24) ；CD171(L1CAM, NILE) ； CD172g (SIRPg) ；CD181 (CXCR1,(以前稱作 CDl28a)) ； CD182 (CXCR2,(以前稱作 CD128b)) ；CD183(CXCR3, GPR9) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD185(CXCR5) ；CD186 (CXCR6)； CD191 (CCDl) ；CD192(CCR2) ；CD193(CCR3) ；CD195(CCR5) ；CD196(CCR6) ；CD197(CCR7(以前是 CDwl97)) ；CDwl97(CCR7, EBI1，BLR2) ；CDwl98(CCR8) ；CDwl99(CCR9) ；CD205(DEC-205)； CDw210(CK) ；CDw217(CK) ；CDw218a(IL18Rα ) ；CDw218b(IL18Rβ ) ；CD220(胰島素 R)； CD221(IGFlR) ；CD222 (M6P-R, IGFII-R) ；CD223(LAG-3) ；CD224(GGT) ；CD225 (Leul3)； CD226(DNAM-1，PTA1) ;CD229(Ly9) ;CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ;CD244 (2B4，P38， NAIL) ；CD245(p220/240) ；CD247(CD3Z 鏈)；CD261 (TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成員 IOa) ；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ；CD263 (TRAIL-R3, TNF-R 超家族，成員 IOc) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD268(BAFFR, TNF-R 超家族，成員 13C) ；CD272 (BTLA) ；CD275(B7H2, IC0SL)； CD277 (BT3. 1，B7 家族=Butyrophilin 3) ；CD294 (CRTH2, PGRD2, G 蛋白偶聯(lián)受體 44)； CD295 (LEPR) ；CD296(ART1, ADP-核糖轉移酶 1) ；CD298 (ATP1B3, Na K ATPase β 3 亞基)； CD300a(CMRF-35H) ；CD300c(CMRF-35A) ；CD305 (LAIRl) ；CD314(NKG2D) ；CD316(EW12)； CD317(BST2) ；CD319(CRACC, SLAMF7) ；CD321(JAMl) ；CD322(JAM2) ；CDw328(Siglec7)；禾口 CD68(gp 110，Macrosialin)；其中括號中所列名稱代表別名。在一些具體實施方式
中，可以通過與任何主要在激活后的T細胞上表達和/或存在的物質(即激活的T細胞的靶)(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)結合(例如特異性結合)的任何靶半體實現(xiàn)靶向T細胞。示例性的激活的T細胞的靶半體包括但不限于，CDla (RA，T6, HTA-1) ；CDlb (Rl) ；Cdlc(M241, R7) ；CDld(R3) ；CD9(p24， DRAP-I, MRP-1) ；CD25 (Tac 抗原，IL_2Ra，p55) ；CD30 (Ber-H2, Ki-I) ；CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-1) ；CD45R0 (UCHL-I) ；CD49a(VLA_l α，α 1 整合素)；CD49b (VLA-2 α， gpla, α 2 整合素)；CD69(AIM，EA 1，MLR3, gp34/28, VEA) ；CD70(Ki_24，CD27 配體)； CD74(Ii，不變鏈)；CD80(B7, B7-1，BBl) ；CD86 (B7-2/B70) ；CD96 (TACTILE) ；CD97 (BL-KDD/F12) ；CD101(IGSF2, P126, V7) ；CD103(HML-1,整合素 α E，ITGAE) ；CD107a(LAMP-I)； CD 107b(LAMP-2) ；CD109(8A3, E123 7D1) ；CD134(0X40, TNFRSF4) ；CDwl37 (4-1BB，ILA)； CD146(Muc 18，S—endo，MCAM, Mel-CAM) ；CD152(CTLA—4) ；CD154(CD40L, gp39, TRAP-I, Τ-ΒΑΜ) ；CD166 (ALCAM, KG-CAM，SC-1，BEN，DM-GRASP) ；CD178 (Fas 配體)；CD227 (MUC1，PUM， PEM, EMA) ；CD253(TRAIL, TNF(配體)超家族，成員 10) ；CD254(TRANCE, RANKL, TNF(配體)超家族，成員 11) ；CD258(LIGHT, TMF (配體)超家族，成員 14) ；CD267(TACI, TNF-R 超家族，成員 13B) ；CD273(B7DC, PDL2) ；CD274(B7H1, PDL1) ；CD278 (ICOS) ；CD279(PD1)；禾口 CD312(EMR2)；其中括號中所列名稱代表別名。靶半體的分子特性核酸靶半體。如本文所用“核酸靶半體”是與靶特異性結合的核酸。在一些具體實施方式中，核酸靶半體是核酸適配子。適配子通常是與特定器官、組織、細胞、細胞外基質成分和/或亞細胞位點相關的特異性靶結構結合的多核苷酸。一般地，適配子的靶向功能是基于適配子的三維結構。在一些具體實施方式
中，適配子與靶的結合通常是由適配子和靶的二維和/或三維結構之間的相互作用所介導。在一些具體實施方式
中，適配子與靶的結合不僅僅是基于適配子的初級序列，還基于適配子和/或靶的三維結構。在一些具體實施方式中，適配子通過互補性Watson-Crick堿基配對與它們的靶結合，這種結合被打亂堿基配對的結構(例如發(fā)夾環(huán))所打亂。在一些具體實施方式
中，核酸靶半體是Spiegelmer 。一般地，Spiegelmer 是高親
和性的L-對映體的寡核苷酸配體，與D-寡核苷酸相比，其顯示出對酶降解的高度抗性。在一些具體實施方式
中，Spiegelmer 按照適配子的設計和使用來進行設計和使用。本領域普通技術人員將認識到，本文描述的任何能夠特異性與靶結合的核酸均可用于本發(fā)明。本發(fā)明的核酸(包括核酸靶半體和/或待輸送的功能性RNA，例如RNAi 試劑、核酶、tRNA等，以下更詳細描述)可以通過任何可獲得的技術制備，包括但不限于，化學合成、酶式合成、酶式或化學切割較長的前體，等。合成RNA的方法在本領域是已知的(參見，例如 Gait，Μ. J. (ed.)Oligonucleotide synthesis a practicalapproach, Oxford[Oxfordshire], Washington, DC :IRL Press,1984 ；禾口 Herdewijn,P. (ed. )Oligonucleotide synthesis :methods and applications,Methods in molecularbiology, v. 288 (Clifton, N. J.) Totowa, N. J. Humana Press, 2005 ；兩篇均通過引用并入本文)。形成核酸靶半體的核酸可以包含天然產生的核苷、修飾的核苷、天然產生的在一個或多個核苷之間插入烴連接子(例如亞烴基)或聚醚連接子(例如PEG連接子)的核苷、在一個或多個核苷之間插入烴或PEG連接子的修飾的核苷，或其組合。在一些具體實施方式中，核酸靶半體的核苷酸或修飾的核苷酸可以被烴連接子或聚醚連接子替換，只有核酸靶半體的結合親和性和特異性不被該替換實質性降低(例如，靶的核酸靶半體的解離常數應該不高于約1 X 10_3M)。本領域技術人員將領會到根據本發(fā)明的核酸可以包含完全是在天然產生的核酸中發(fā)現(xiàn)的類型的核苷酸，或者反而可以包括一個或多個核苷酸類似物或具有與天然產生的核酸不同的結構。美國專禾Ij 6, 403, 779 ；6，399，754 ；6，225，460 ；6，127,533 ；6，031，086 ；6，005，087 ；5, 977，089及其中的參考文獻公開了可以使用的眾多的特異性核苷酸類似物禾口修飾0 參見 Crooke，S. (ed. ) Antisense Drug Technology :Principles, Strategies, and Applications (1st ed), Marcel Dekker ；ISBN :0824705661,1st edition (2001)；通過引用并入本文；以及其中的參考文獻。例如，2’ -修飾包括鹵素、烷氧基和烯丙氧基基團。在一些具體實施方式
中，2’ -OH基團被選自H、OR、R、鹵素、SH、SR1, NH2, NHe, NR2或CN的基團取代，其中R是C1-C6烷基、烯基或炔基，鹵素是F、Cl、Br或I。修飾的連接的例子包括硫代磷酸鹽和5’ -N-亞磷酰胺連接。
根據本發(fā)明可以使用包含眾多不同的核苷酸類似物、修飾的骨架或非天然產生的核苷間連接的核酸。本發(fā)明的核酸可以包括天然核苷(即腺苷、胸苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥苷和脫氧胞苷)或修飾的核苷。修飾的核苷的例子包括堿基修飾的核苷(例如阿糖胞苷、肌苷、異鳥苷、水粉傘素(11吐111虹^^)、假尿苷、2，6-二氨基嘌呤、 2_氨基嘌呤、2-硫胸苷、3-脫氮-5-氮胞苷、2’-脫氧尿苷、3-硝基吡咯、4-甲基吲哚、4-硫尿苷、4-硫胸苷、2-氨基腺苷、2-硫胸苷、2-硫尿苷、5-溴胞苷、5-碘尿苷、肌苷、6-氮尿苷、 6-氯嘌呤、7-脫氮腺苷、7-脫氮鳥苷、8-氮腺苷、8-疊氮腺苷、苯并咪唑、Ml-甲基腺苷、批咯并嘧啶、2-氨基-6-氯嘌呤、3-甲基腺苷、5-丙炔基胞苷、5-丙炔基尿苷、5-溴尿苷、5-氟尿苷、5-甲基胞苷、7-脫氮腺苷、7-脫氮鳥苷、8-加氧腺苷、8-加氧鳥苷、0(6)-甲基鳥苷和 2_硫胞苷)，化學或生物修飾的堿基(例如甲基化的堿基)，修飾的糖(例如2’ -氟核糖、 2’ -氨基核糖、2’ -疊氮核糖、2’ -0-甲基核糖、L-對映體核苷阿拉伯糖和己糖)，修飾的磷酸鹽基團(例如硫代磷酸鹽和5’-N-亞磷酰胺連接)及其組合。用于核酸的化學合成的天然和修飾的核苷酸單體可以容易地獲得。在一些情況下，包含這樣的修飾的核酸相對于僅由天然核苷酸組成的核酸表現(xiàn)出改善的特性。在一些具體實施方式
中，本文描述的核酸修飾用于減少和/或防止核酸酶(例如外切核酸酶、內切核酸酶等)的消化。例如，可以通過在一條鏈或兩條鏈的3’末端加入核苷酸類似物以減少消化，從而穩(wěn)定核酸的結構。修飾的核酸不必在分子的全長上統(tǒng)一修飾。不同的核苷酸修飾和/或骨架結構可以存在于核酸的不同位置。本領域普通技術人員將領會到核苷酸類似物或其它修飾可以位于核酸的任何位置，只要核酸的功能實質上不受影響。僅舉一例，修飾可以位于適配子的任何位置，只要適配子與適配子靶特異性結合的能力實質上不受影響。修飾區(qū)域可以位于一條鏈或兩條鏈的5’ -末端和/或3’ -末端。例如，可以這樣的使用修飾的適配子，其中兩條鏈的任一條鏈的5’ -和/或3’ -末端的大約1個至大約5個殘基是核苷酸類似物和 /或具有骨架修飾。修飾可以是5’或3’末端修飾。核酸鏈可以包含至少50%未修飾的核苷酸，至少80%未修飾的核苷酸，至少90%未修飾的核苷酸或100%未修飾的核苷酸。根據本發(fā)明的核酸可以包含例如糖、核苷或核苷間連接的修飾，如在美國專利公開 2003/0175950、2004/0192626、2004/0092470、2005/0020525 和 2005/0032733 中描述的那些。本發(fā)明包括使用具有其中所描述的任意一個或多個修飾的任意核酸。例如，已經報道許多末端偶聯(lián)物，例如脂類例如膽固醇、石膽酸、月桂酸或長烷基支鏈能夠改善細胞攝入。可以使用例如本領域已知的任何合適的檢驗(例如選擇那些產生改善的治療性試劑的輸送，改善的適配子與適配子靶的特異性結合等)測試類似物和修飾。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的核酸可以包含一個或多個非天然核苷連接。在一些具體實施方式
中，適配子的3’ -末端、5’ -末端或3’ -末端和5’ -末端的一個或多個內部核苷酸被倒轉以產生連接，例如3’ -3’連接或5’ -5’連接。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的核酸是非合成的，而是從其天然環(huán)境中分離的天然產生的物質。小分子靶半體。在一㈣具體實施方式
中，根據本發(fā)明的靶半體可以是小分子。在一些具體實施方式
中，小分子為約2000g/mol以下的大小。在一些具體實施方式
中，小分子為約1500g/mol以下或約1000g/mol以下。在一些具體實施方式
中，小分子為約800g/mol 以下或約500g/mol以下。在一些具體實施方式
中，小分子是寡聚體。在一些具體實施方式
中，小分子是非寡聚體。在一些具體實施方式
中，小分子是天然產物或具有基于天然產物的完整結構的部分結構(例如亞結構)的天然產物樣的化合物。在一些具體實施方式
中，小分子是合成產物。在一些具體實施方式
中，小分子可以來自化學庫。在一些具體實施方式
中，小分子可以來自制藥公司的系列庫。在一些具體實施方式
中，小分子是美國食品與藥品管理局批準的藥物，如在美國聯(lián)邦法規(guī)(C.F.R.)中所提供。本領域普通技術人員將領會到根據本發(fā)明可以使用與本文描述的想要的靶特異性結合的任何小分子。蛋白靶半體。在一㈣具體實施方式
中，根據本發(fā)明的靶半體可以是蛋白或肽。在一些具體實施方式
中，肽在大小方面的范圍為約5至約100、約5至約50、約10至約75、約 15至約50或約20至約25個氨基酸。在一些具體實施方式
中，肽序列可以基于蛋白的序列。在一些具體實施方式
中，肽序列可以是氨基酸的隨機排列。術語“多肽”和“肽”在本文中可互換地使用，“肽”通常是指長度為約100個氨基酸以下的多肽。多肽可以含有L-氨基酸、D-氨基酸或二者，并且可以含有任何的多種氨基酸修飾或本領域中已知的類似物。有用的修飾包括例如末端乙?；?、酰胺化、脂化、磷酸化、
糖基化、?；?、法呢基化、硫酸鹽化等?？梢杂米鞲鶕景l(fā)明的靶半體的示例性蛋白包括但不限于抗體、受體、細胞因子、肽激素、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、源自組合庫的蛋白(例如AVimersTM、AffibodieS 等)，及其特征性部分。可以使用合成的結合蛋白例如NanobodiesTM、AdNectinsTM等。在一些具體實施方式中，蛋白靶半體可以是肽。本領域普通技術人員將體會到根據本發(fā)明可以使用與本文描述的想要的靶特異性結合的任何蛋白和/或肽。在一些具體實施方式
中，靶半體可以是抗體和/或其特征性部分。術語“抗體”是指任何免疫球蛋白，不論是天然的或完全或部分合成產生的，還指其衍生物和特征性部分。抗體可以是單克隆或多克隆的?？贵w可以是任何免疫球蛋白類別的成員，包括任何人類的類別IgG、IgM、IgA、IgD 和 IgE。如本文所用的抗體片段(即抗體的特征性部分)是指小于抗體全長的任何衍生物。在一些具體實施方式
中，抗體片段保持全長抗體的特異性結合能力的至少顯著部分。這樣的抗體片段的例子包括但不限于Fab、Fab，、F(ab，)2、scFv.Fv, dsFv 二體和Fd片段。抗體片段還包括但不限于Fc片段。抗體片段可以通過任何方式產生。例如，抗體片段可以通過完整抗體的片段化經酶式作用或化學產生和/或其可以通過從編碼部分抗體序列的基因經重組產生。作為選擇，抑或是另外，抗體片段可以全部或部分合成產生?？贵w片段可選地可以包含單鏈抗體片段。作為選擇，抑或是另外，抗體片段可以包含多條連接在一起(例如通過二硫連接)的鏈。抗體片段可選地可以包含多分子復合體。功能性抗體片段通常包含至少約50個氨基酸，更通常將包含至少約200個氨基酸。在一些具體實施方式
中，抗體可以包括嵌合(例如“人源化”)和單鏈(重組)抗體。在一些具體實施方式
中，抗體可以具有減少的效應功能和/或雙特異性分子。在一些具體實施方式
中，抗體可以包括由Fab表達庫產生的片段。單鏈Fv(SCFV)是僅由可變輕鏈(VL)和可變重鏈(VH)組成(彼此通過多肽連接子共價結合)的重組抗體片段。VL或VH可以包含NH2-末端結構域。多肽連接子的長度和組成可以變化，只要兩個可變結構域能夠無顯著空間位阻地橋連。通常，連接子主要包含一段甘氨酸和絲氨酸殘基，其中散布一些谷氨酸或賴氨酸殘基以增加溶解性。
二體是嵌合的scFv。二體通常具有比多數scFv更短的肽連接子，它們經常顯示出作為二體結合的偏愛。Fv片段是由一個VH和一個VL結構域組成(通過非共價相互作用結合在一起)的抗體片段。如本文所用的術語“dsFv”是指具有工程化的分子間二硫鍵(以穩(wěn)定VH-VL對) 的Fv。F(ab' ) 2片段是實質上等同于通過以胃蛋白酶在pH 4. 0-4. 5消化免疫球蛋白而獲得的抗體片段。片段可以通過重組產生。Fab'片段是實質上等同于將連接F (ab’)2片段中的兩個重鏈片段的二硫橋或橋連接的還原而獲得的抗體片段。Fab’片段可以通過重組產生。Fab片段是實質上等同于通過以酶(例如木瓜蛋白酶)消化免疫球蛋白而獲得的抗體片段。Fab片段可以通過重組產生。Fab片段的重鏈片段是Fd片。碳水化合物靶半體。在一㈣具體實施方式
中,根據本發(fā)明的靶半體可以包含碳水化合物。在一些具體實施方式
中，碳水化合物可以是包含由糖苷鍵連接的單糖(或其衍生物)的多糖，如本領域所知。這樣的糖包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、纖維二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡萄糖胺、半乳糖胺和神經氨酸。在一些具體實施方式
中，碳水化合物可以是一個或多個普魯蘭糖(pullulan)、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥基纖維素、甲基纖維素、右旋糖苷、環(huán)右旋糖苷、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、卡拉膠(carageenan)、糖基、直鏈淀粉、殼聚糖、N, 0-羥甲基殼聚糖、海藻膠和海藻酸、淀粉、幾丁質、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素 (pustulan)、肝素、透明質酸、卡德蘭(curdlan)和黃原膠。在一些具體實施方式
中，碳水化合物可以是酰胺化、羧基化和/或硫化的。在一些具體實施方式
中，親水性多糖可以通過引入大量的側鏈疏水性基團而被修飾以變成疏水性的。在一些具體實施方式
中，疏水性碳水化合物可以包括醋酸纖維素、醋酸普魯蘭糖、醋酸魔芋、醋酸直鏈淀粉和、醋酸右旋糖苷。本領域普通技術人員將領會到根據本發(fā)明可以使用與本文描述的想要的靶特異性結合的任何碳水化合物。脂靶半體。在一㈣具體實施方式
中，根據本發(fā)明的靶半體可以包含一個或多個脂肪酸基團或其鹽。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以包含可消化的長鏈的(例如C8-C50)取代的或非取代的烴。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是Cltl-C2tl脂肪酸或其鹽。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是C15-C2tl脂肪酸或其鹽。在一些具體實施方式中，脂肪酸基團可以是C15-C25脂肪酸或其鹽。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是不飽和的。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是單不飽和的。在一些具體實施方式中，脂肪酸基團可以是多不飽和的。在一些具體實施方式
中，不飽和脂肪酸基團的雙鍵可以是順式構象。在一些具體實施方式
中，不飽和脂肪酸的雙鍵可以是反式構象。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是一個或多個丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸、山崳酸或二十四酸。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是一個或多個棕櫚油酸、油酸、十八碳烯酸、亞油酸、α-亞油酸、Y-亞油酸、花生四烯酸、鱈烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸。本領域普通技術人員將領會到根據本發(fā)明可以使用與本文描述的想要的靶特異性結合的任何脂肪酸基團。新型靶半體任何新型靶半體可以應用于根據本發(fā)明的g納米載體。本領域已知的任何方法可以用于設計、鑒別和/或分離新型靶半體。例如，利用分子庫的標準技術和體外結合檢驗可以用于鑒定新型靶半體。核酸靶半體(例如適配子、Spiegelmer )可以通過使用任何可獲得的方法設計和 /或鑒別。在一些具體實施方式
中，通過鑒別來自核酸候選混合物的核酸靶半體而設計和/ 或鑒別核酸靴半體。Systemic Evolution of Ligands by ExponentialEnrichment (SELEX) 或其變體是普遍使用的從核酸候選混合物中鑒別與靶結合的核酸靶半體的方法(參見例如美國專利 6，482，594 ；6，458，543 ；6，458，539 ；6，376，190 ；6，344，318 ；6，242，246 ； 6，184，364 ；6，001，577 ；5，958，691 ；5，874，218 ；5，853，984 ；5，843，732 ；5，843，653 ； 5，817，785 ；5，789，163 ；5，763，177 ；5，696，249 ；5，660，985 ；5，595，877 ；5，567，588 和 5，270，163 ；每篇均通過引用并入本文)。作為選擇，抑或是另外，Polyplex In Vivo Combinatorial Optimization (PICO)是一種用于在體內和/或體外從核酸候選混合物中鑒別與靶結合的核酸靶半體(例如適配子)的方法，在標題為“System for Screening Particles”，申請日為2006年12月15日的同一申請人的PCT申請US06/47975中有描述，通過引用并入本文。免疫刺激試劑在一些具體實施方式
中，納米載體可以轉運一個或多個幫助刺激免疫應答的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑通過激活APC(以增強他們的免疫刺激試劑能力)而增強免疫應答。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑通過擴大對特異性抗原的淋巴細胞應答而增強免疫應答。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑通過誘導調節(jié)子的局部釋放(例如從多種細胞類型釋放細胞因子)而增強免疫應答。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑抑制或重引導免疫應答。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑誘導調節(jié) 性T細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的所有免疫刺激試劑彼此相同。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體包含許多不同類型的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含多個單獨的免疫刺激試劑，它們彼此都相同。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體精確地包含一種類型免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體精確地包含兩種不同類型的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上的不同類型的免疫刺激試劑。
在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含同時刺激B細胞和T細胞的單一類型的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫刺激試劑，其中第一種類型免疫刺激試劑刺激B細胞，第二種類型免疫刺激試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體包含兩種以上類型的免疫刺激試劑，其中一種或多種類型免疫刺激試劑刺激B細胞，一種或多種類型免疫刺激試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一種類型的與疫苗納米載體的外表面結合的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，結合是共價的。在一些具體實施方式
中，共價結合由一個或多個連接子介導。在一些具體實施方式
中，結合是非共價的。在一些具體實施方式
中，非共價結合由電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵結合相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極_偶極相互作用和/或其組合所介導。免疫刺激試劑與疫苗納米載體的結合在以下標題為“疫苗納米載體的產生”的部分中有更詳細的描述。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包括脂膜(例如脂雙層、脂單層等)，至少一種類型免疫刺激試劑可以與脂膜結合。在一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫刺激試劑嵌入脂膜內。一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫刺激試劑嵌入脂雙層的腔內。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一種類型的與脂膜的內表面結合的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫刺激試劑包埋于疫苗納米載體的脂膜內。在一些具體實施方式
中，至少一種類型免疫刺激試劑可以位于疫苗納米載體的多個位點。例如，第一種類型免疫刺激試劑可以嵌于脂膜內，第二種類型免疫刺激試劑可以包埋于疫苗納米載體的脂膜內。再舉一個例子，第一種類型免疫刺激試劑可以與脂膜的外表面結合，第二種類型免疫刺激試劑可以與疫苗納米載體的脂膜的內表面結合。在一些具體實施方式中，第一種類型免疫刺激試劑可以嵌于疫苗納米載體的脂雙層的腔內，脂雙層中可以包埋聚合物基質，第二種類型免疫刺激試劑可以分布在所述聚合物基質中。在一些具體實施方式中，第一種類型免疫刺激試劑和第二種類型免疫刺激試劑可以位于疫苗納米載體的相同位點(例如它們可都與疫苗納米載體的外表面結合；它們可都包埋于疫苗納米載體內，等)。本領域普通技術人員將認識到前述例子只是多個免疫刺激試劑可以與疫苗納米載體的不同位點結合的很多不同方式的代表。多個免疫刺激試劑可以位于疫苗納米載體的任意位點的組合。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是白細胞介素、干擾素、細胞因子等。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是Toll樣受體(TLR)的天然或合成的激動劑。在特異的具體實施方式
中，疫苗納米載體包括toll樣受體(TLR)-7的配體，例如CpG，其誘導I型干擾素的產生。在特異的具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是DC表面分子CD40的激動劑。在一些具體實施方式
中，為了刺激免疫力而不是耐受性，納米載體包括促進DC成熟(引發(fā)原態(tài)T細胞的需要)和細胞因子(例如I類干擾素，其促進抗體應答和抗病毒免疫力)產生的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以是TLR-4激動劑，例如細菌脂多糖(LPS)、VSV-G和/或HMGB-I。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是細胞因子，其為從細胞釋放的小蛋白或生物因子(5kD-20kD的范圍)且對于細胞-細胞相互作用、交流和其它細胞的行為具有特異性效應。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是從壞死細胞中釋放的促炎性刺激劑(例如尿酸鹽晶體)。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是激活的補體級聯(lián)成分(例如CD21、CD35等)。在一些具體實施方式
中，免疫刺激試劑可以是激活的免疫復合體的成分。免疫刺激試劑包括TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、 TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9和TLR-IO激動劑。免疫刺激試劑還包括補體受體激動齊U，例如與CD21或CD35結合的分子。在一些具體實施方式
中，補體受體激動劑誘導納米載體的內源性補體調理。免疫刺激試劑還包括細胞因子受體激動劑，例如細胞因子。在一些具體實施方式
中，細胞因子受體激動劑是小分子、抗體、融合蛋白或適配子。在一些具體實施方式
中，存在不止一種類型免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，不同的免疫刺激試劑每個作用于不同的途徑。因此，免疫刺激試劑可以是不同的Toll 樣受體、Toll樣受體和CD40、Toll樣受體和炎性體，等等。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明提供了包含與一個或多個佐劑制共同配制成的疫苗納米載體的藥物組合物。如本文所用的術語“佐劑”是指不構成特異性抗原但是增強對所施用的抗原的免疫應答的試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體與一種或多種佐劑配制，例如凝膠類型的佐劑(例如氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣等)；微生物佐劑(例如包括CpG基序的免疫調節(jié)DNA 序列；內毒素例如單磷酸類脂A ；外毒素例如霍亂毒素、大腸桿菌熱不穩(wěn)定毒素和百日咳毒素；胞壁酰二肽等)；油乳劑和基于乳化的佐劑(例如弗氏佐劑，MF59[NoVartis]、SAF等)；顆粒佐劑(例如脂質體、生物可降解微球體、皂角苷等)；合成佐劑(例如非離子阻斷共聚物、胞壁酰肽類似物、聚磷腈、合成多核苷酸等)；和/或其組合。其它的示例性佐劑包括一些聚合物(例如美國專利5，500, 161中描述的聚磷腈，通過引用并入本文)、QS21、鯊烯、四氯十氧化物等。T細胞激活的檢驗在一些具體實施方式
中，可以應用各種檢驗以確定T細胞或T細胞組中的免疫應答是否被激活(即T細胞或T細胞組是否變成“激活的”)。在一些具體實施方式
中，可以通過測定抗原誘導的T細胞產生的細胞因子而確定T細胞中免疫應答的刺激。在一些具體實施方式中，可以通過測定抗原誘導的τ細胞產生的IFN y、IL-4、IL-2、IL-10、IL-17和/ 或TNFa而確定T細胞中免疫應答的刺激。在一些具體實施方式
中，通過細胞內細胞因子染色然后進行流式細胞術而測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。在一些具體實施方式中，通過表面捕獲染色然后進行流式細胞術而測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。在一些具體實施方式
中，通過確定激活的T細胞培養(yǎng)物上清液中細胞因子的濃度而測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。在一些具體實施方式
中，這可以通過ELISA測定。在一些具體實施方式
中，通過ELISP0T檢驗測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。一般地，ELISP0T檢驗應用與三明治酶聯(lián)免疫吸附檢驗(ELISA)技術非常相似的技術。將抗體(例如單克隆抗體，多克隆抗體等)無菌地包被至被覆了 PVDF (聚偏二氟乙烯) 的微型板。根據對待測細胞因子的特異性選擇抗體。通過使用例如不與檢驗中的任何抗體應答的血清蛋白將板封閉。以不同的密度將目標細胞植板(與抗原或有絲分裂原一起)，然后置于潮濕的37°C CO2孵箱內持續(xù)一定的時間。激活的細胞所分泌的細胞因子在局部被高表面區(qū)域的PVDF膜上包被的抗體所捕獲。洗滌孔以除去細胞、碎片和培養(yǎng)液成分之后，向孔中加入對細胞因子特異性的二抗(例如生物素化的多克隆抗體)。該抗體與靶細胞因子的不同表位反應，并因此用于檢測所捕獲的細胞因子。在洗滌以除去任何未結合的生物素化抗體之后，然后使用抗生物素-HRP和沉淀底物(例如AEC、BCIP/NBT)顯示所檢測的細胞因子。著色的終產物(點，通常為黑藍色)通常代表單個的產生細胞因子的細胞?？梢?人工對點進行計數(例如使用解剖顯微鏡)，或使用自動計數器以捕獲微孔圖像并分析點的數目和大小。在一些具體實施方式
中，每個點對應于單一的產生細胞因子的細胞。在一些具體實施方式
中，如果約至約100%的抗原特異性T細胞產生細胞因子，則稱τ細胞中的免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，如果至少約1 %、至少約5%、至少約10%、至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約90%、至少約95%、至少約 99%或約100%的抗原特異性T細胞產生細胞因子，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，如果免疫的個體比原態(tài)對照包含高出至少約10倍、至少約50倍、至少約100倍、至少約500倍、至少約1000倍、至少約5000倍、至少約10，000倍、至少約50，000倍、至少約100，000倍或高出至少約100，000倍以上的產生細胞因子的細胞，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，通過測定抗原誘導的T細胞的增殖而確定T細胞中免疫應答的刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過分裂的T細胞(有時稱為“淋巴細胞轉化測試，或“LTT”)中H3-胸苷的攝入而測定抗原誘導的增殖。在一些具體實施方式
中，如果 H3-胸苷的攝入(以Y計數器的計數讀數給出)比原態(tài)對照高出至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約50倍、至少約100倍、至少約500倍、至少約1000倍、至少約5000倍、至少約10，000倍、或高出至少約10，000倍以上，則稱發(fā)生了抗原誘導的增殖。在一些具體實施方式
中，可以通過流式細胞術測定抗原誘導的增殖。在一些具體實施方式中，可以通過羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(CFSE)稀釋檢驗而測定抗原誘導的增殖。 CFSE是一種無毒的熒光的透膜的染料，其通過琥珀酰反應性基團與細胞質中的蛋白(例如 T細胞蛋白)的氨基基團相結合。當細胞分裂時，CFSE標記的蛋白在子代細胞中均勻分布，因此隨著每次分裂細胞熒光減半。因此，在存在各自的抗原時在培養(yǎng)之后抗原特異性的T 細胞(CFSE1 )的熒光喪失，可以與培養(yǎng)物中的其它細胞(CFSEhigh)分辨開來。在一些具體實施方式中，如果CFSE稀釋(以CFSE1 細胞占所有的CFSE+細胞的百分率表示)是至少約 5 %、至少約10 %、至少約25 %、至少約50 %、至少約75 %、至少約90 %、至少約95 %或至少約100%，則稱發(fā)生了抗原誘導的增殖。在一些具體實施方式
中，如果T細胞激活的細胞標記物相對于未刺激的細胞而言以不同的水平(例如更高或更低的水平)表達，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，⑶Ila⑶27、⑶25、⑶40L、⑶44、⑶45R0和/或⑶69在激活的T細胞中比在未刺激的T細胞中表達更高。在一些具體實施方式
中，L選擇素(⑶62L)、⑶45RA和/或 CCR7在激活的T細胞中比在未刺激的T細胞中表達更低。在一些具體實施方式
中，通過檢驗效應CD8+T細胞抵抗抗原沖擊的靶細胞的細胞毒性而測定T細胞中的免疫應答。例如，可以進行51鉻(51Cr)釋放檢驗。在該檢驗中，效應 CDS+T細胞與感染的細胞(其呈遞病毒肽至I類MHC上)結合并指引感染的細胞進行細胞凋亡。如果加入效應⑶8+T細胞之前以51Cr標記細胞，則釋放到上清液中的51Cr的數量與被殺死的靶的數目成比例。本領域普通技術人員將認識到以上描述的檢驗僅僅是可用于確定是否發(fā)生T細胞激活的示例性方法。本領域技術人員已知的可用于確定是否發(fā)生T細胞激活的任何檢驗均落入本發(fā)明的范圍內。本文描述的檢驗以及其它可用于確定是否發(fā)生T細胞激活的檢驗在 Current Protocols in Immunology (John Wiley & Sons，Hoboken，NY，2007 ；通過弓|用引入本文)中有描述。B 細胞本發(fā)明提供了用于將例如免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞的疫苗納米載體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含可以被呈遞至B細胞的至少一個免疫調節(jié)試劑 (即B細胞抗原)。免疫調節(jié)試劑B細胞和T細胞通過不同的機理識別抗原。如上所述，T細胞識別經處理形式的抗原(例如被APC的MHC分子呈遞至T細胞受體的肽片段)。B細胞識別天然形式的抗原。B 細胞通過B細胞受體(BCR)和/或膜上結合的免疫球蛋白識別血液或淋巴中的游離的(例如可溶的)抗原。免疫調節(jié)試劑可以是B細胞抗原。B細胞抗原包括但不限于蛋白、肽、小分子和碳水化合物。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是非蛋白抗原(即不是蛋白或肽抗原)。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是與傳染性試劑結合的碳水化合物。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是與傳染性試劑結合的糖蛋白或糖肽。傳染性試劑可以是細菌、病毒、真菌、原生動物或寄生蟲。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具體實施方式中，B細胞抗原是被濫用的物質或其部分。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是令人上癮的物質或其部分。令人上癮的物質包括但不限于尼古丁、麻醉藥、咳嗽抑制劑、鎮(zhèn)定劑和止痛藥。令人上癮的物質的例子包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是毒素，例如來自化學武器的毒素。在一些具體實施方式
中，來自化學武器的毒素是肉毒桿菌毒素或磷雜環(huán)戊二烯(phosphene)。來自化學武器的毒素還包括但不限于0-烷基(<C10，包括環(huán)烷基)烷基(Me、Et、n-Pr或
1-Pr)-磷酸氟化物(例如，沙林甲基氟膦酸0-異丙酯，梭曼甲基氟磷酸0-叔己酯)， 0-烷基(< C10，包括環(huán)烷基)N，N-二烷基(Me、Et、n_Pr或i_Pr)-磷胺氰化物(例如，塔崩N，N- 二甲氨基氰基磷酸0-乙酯)，0-烷基(H或< C10，包括環(huán)烷基)S-2- 二烷基 (Me、Et、n-Pr或i_Pr)-氨基乙基烷基(Me、Et、n-Pr或i_Pr)硫代磷酸鹽和相應的烷基化或質子化鹽(例如，VX:0-乙基S-2-二異丙基氨基乙基甲基硫代磷酸鹽)，硫芥子氣2_氯乙基氯甲基硫醚，芥子氣雙(2-氯乙基)硫醚、雙(2-氯乙基硫)甲烷，倍半芥子氣1，
2-雙(2-氯乙基硫)乙烷、1，3-雙(2-氯乙基硫)-η-丙烷、1，4-雙(2-氯乙基硫)_η_丁烷、1，5-雙(2-氯乙基硫)-η-戊烷、雙(2-氯乙基硫甲基)乙醚，0-芥子氣雙(2-氯乙基硫乙基)乙醚，路易斯毒氣(Lewisite)路易斯毒氣1 :2_氯乙烯二氯胂，路易斯毒氣2 雙(2-氯乙烯)氯胂，路易斯毒氣3 三(2-氯乙烯)胂，氮芥HNl 雙(2-氯乙基)乙胺， HN2 雙(2-氯乙基)甲胺，HN3 三(2-氯乙基)胺，蛤蛘毒素，蓖麻毒素，阿米噸(Amiton) 0，0-二乙基S-(2-( 二乙基氨基)乙基)硫代磷酸酯及相應的烷基化或質子化的鹽，PFIB 1，1，3，3，3-五氟-2-(三氟甲基)-1-丙烯，二苯羥乙酸-3-喹嚀環(huán)酯(BZ)，光氣碳酰氯，氯化氰，氰化氫和三氯硝基甲三氯硝基甲烷。B細胞抗原還可以是有害的環(huán)境中的試劑。在有害的環(huán)境中的試劑包括但不限于砷、鉛、汞、氯乙烯、多氯聯(lián)苯、苯、多環(huán)芳香烴、鎘、苯并(a)芘、苯并(b)熒蒽、氯仿、DDT、P， P，_，阿羅克洛 1254(aroclor 1254)、阿羅克洛 1260 (aroclorl260)、二苯并(a，h)蒽、三氯乙烯、狄氏劑(dieldrin)、六價鉻和DDE，P，P’。這樣的試劑的例子包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，B細胞抗原是自身抗原。在其它具體實施方式
中，B細胞抗原是同種抗原、變應原、接觸致敏劑、退行性疾病抗原、半抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、令人上癮的物質、異種抗原或代謝性疾病酶或酶產物。這樣的抗原的例子包括本文其它地方提供的那些。如上所述，本發(fā)明提供了包含例如一個或多個免疫調節(jié)試劑的疫苗納米載體。在一些具體實施方式
中，包含一個或多個免疫調節(jié)試劑的本發(fā)明的納米載體用作疫苗。在一些具體實施方式
中，向B細胞抗原呈遞可以通過呈遞納米載體的表面上的結構上完整的免疫調節(jié)試劑而最優(yōu)化。在一些具體實施方式
中，結構上完整的免疫調節(jié)試劑以高拷貝數目和/或密度被呈遞在疫苗納米載體的表面。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以包含分離的和/或重組蛋白或肽、滅活的生物和病毒、死的生物和病毒、遺傳改變的生物或病毒，和細胞提取物。在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑可以包含核酸、碳水化合物、脂和/或小分子。在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑是激發(fā)免疫應答的試劑。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑是抗原。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑用于疫苗。可以在以上標題為“B細胞”的部分找到對于免疫調節(jié)試劑的進一步描述。如上所述，疫苗納米載體可以包含僅一種類型免疫調節(jié)試劑，其同時刺激B細胞和T細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫調節(jié)試劑，其中第一種類型免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，第二種類型免疫調節(jié)試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體包含兩種以上類型免疫調節(jié)試劑，其中一種或多種類型免疫調節(jié)試劑刺激B細胞，一種或多種類型免疫調節(jié)試劑刺激T細胞。靶半體如上所述，本發(fā)明的納米載體包含一個或多個靶半體。關于本發(fā)明的靶半體的一般性和特異性特征的討論，參見以上標題為“T細胞”的部分中小標題為“靶半體”的內容。在一些具體實施方式
中，靶半體靶向特定的細胞類型。在一些具體實施方式
中，靶是B細胞標記物。在一些具體實施方式
中，B細胞靶是在B細胞上表達而不在非B細胞上表達的抗原。在一些具體實施方式
中，B細胞靶是在B細胞上比在非B細胞上更普遍存在的抗原。在一些具體實施方式
中，靶是SCS-Mph標記物。在一些具體實施方式
中，SCS-Mph 靶是在SCS-Mph上表達但不在非SCS-Mph上表達的抗原。在一些具體實施方式
中，SCS-Mph 靶是在SCS-Mph上比在非SCS-Mph上更普遍存在的抗原。示例性SCS-Mph標記物在下面標題為“被膜下竇巨噬細胞”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，靶是FDC標記物。在一些具體實施方式
中，F(xiàn)DC靶是在FDC 上表達但不在非FDC上表達的抗原。在一些具體實施方式
中，F(xiàn)DC靶是在FDC上比在非FDC 上更普遍存在的抗原。示例性FDC標記物在下面標題為“濾泡樹突狀細胞”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，靶優(yōu)先在特定細胞類型中表達。例如，SCS-Mph, FDC和/ 或B細胞上的SCS-Mph、FDC和/或B細胞靶的表達相對于參考群體來說在SCS_Mph、FDC和 /或B細胞中為至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50 倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍過表達。在一些具體實施方式
中，參考群體可以包含非SCS-Mph、FDC和/或B細胞。在一些具體實施方式
中，激活的SCS_Mph、FDC和/或B細胞上的SCS-Mph、FDC和 /或B細胞靶的表達相對于參考群體來說在激活的SCS-Mph、FDC和/或B細胞中為至少2 倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500 倍或至少1000倍過表達。在一些具體實施方式
中，參考群體可以包含非激活的SCS-Mph、 FDC和/或B細胞。
被膜下竇巨噬細胞本發(fā)明包含以下認識抗原靶向被膜下竇巨噬細胞(SCS-Mph)參與淋巴攜帶的病原體(例如病毒)向濾泡B細胞的有效的早期呈遞(圖2)。如實施例1所描述，向小鼠足底皮下注射泡性口炎病毒(VSV)或腺病毒(AdV)之后，病毒顆粒被引流膝后彎淋巴結中的 ⑶169+ SCS-Mph有效地且選擇性地保留。這些淋巴結中的VSV特異性B細胞受體(BCR)轉基因B細胞被迅速激活并在該病毒攻擊后產生特別高的抗體效價。SCS-Mph的清除(通過注射負載了氯曲膦酸鹽(clodronate)(其對Mph是毒性的)的脂質體)消除了早期的B細胞激活，這表明SCS-Mph對于淋巴攜帶顆?？乖駼細胞呈遞來說是必需的。以固定在表面上(而不是處于溶液中)呈遞至B細胞的多價抗原對B細胞的激活更加有力。不想被任何一個理論所束縛，本發(fā)明提出了為何很多包被的病毒(例如VSV) 引發(fā)針對其包被糖蛋白的有力的中和抗體應答的一種原因抗原性蛋白以非常高的密度被呈遞至病毒顆粒的表面，和病毒顆粒被以相對不可移動的方式被呈遞至B細胞，即結合至 SCS-Mph的質膜。本發(fā)明包括以下認識疫苗載體(其通過在皮下注射后靶向SCS-Mph并在其表面呈遞多價的構象完整的抗原而模擬病毒顆粒)能夠刺激有力的B細胞應答。在一些具體實施方式
中，SCS-Mph的靶向通過與⑶169 (即唾液酸粘附素)、 CDllb (即CDllb/CD18、Mac-l、CR3或α Μβ 2整合素)、和/或甘露糖受體(即多價血凝素) (這些蛋白皆為主要在SCS-Mph上表達)結合的半體實現(xiàn)。這樣的半體的例子包括在本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，可以通過與主要在巨噬細胞上表達和/或存在的任意物質(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即SCS-Mph標記物)特異性結合的任意靶半體實現(xiàn)靶向SCS-Mph。示例性的SCS-Mph標記物包括但不限于，⑶4(L3T4，W3/25，T4)； CD9(p24，DRAP-I，MRP_1) ；CDlla(LFA-l α , α L 整合素鏈)；CDllb ( α M 整合素鏈，CR3，Mol， C3niR, Mac-1) ；CDllc ( α X 整合素，pl50，95，AXb2) ；CDwl2 (p90_120) ；CD13(APN, gpl50, EC 3.4. 11.2) ；CD 14 (LPS-R) ；CD15(X_ 半抗原，Lewis, X，SSEA-1, 3-FAL) ；CD15s(唾液酰 LewisX) ；CD15u(3'硫代 Lewis X) ；CD15su (6 硫代-唾液酰 Lewis X) ；CD16a(FCRIIIA)； CD16b (FcgRIIIb) ；CDwl7(乳糖基神經酰胺，LacCer) ；CD18(整合素 β 2，CDlla，b， c β-亞基)；CD26(DPP IV外酶，ADA結合蛋白)；CD29(血小板GPIIa，整合素， GP) ；CD3KPECAM-1, Endocam) ；CD32(FCyRII) ；CD33(gp67) ；CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD36(GpIIIb, GPIV, PASIV) ；CD37 (gp52_40) ；CD38 (ADP-核糖基環(huán)化酶，TlO) ；CD39 (ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-1) ； CD40 (Bp50) ； CD43 (Sialophorin, Leukosialin) ；CD44(ECMRII， Η-CAM, Pgp-1) ；CD45(LCA, T200, B220, Ly5) ；CD45RA ；CD45RB ；CD45RC ；CD45R0(UCHL-1)； CD46 (MCP) ；CD47(gp42, IAP, 0A3, Neurophi11 in) ；CD47R(MEM-133) ；CD48(Blast-1, Hulym3，BCM-I，0Χ-45) ；CD49a(VLA_l α，α 1 整合素)；CD49b (VLA-2 α ,gpla, α 2 整合素)； CD49c (VLA-3 α，α 3 整合素)；CD49e (VLA-5 α，α 5 整合素)；CD49f (VLA-6 α，α 6 整合素，gplc) ；CD50(ICAM-3) ；CD51 (整合素 α，VNR-α，Vitronectin-R α ) ；CD52 (CAMPATH-1， ΗΕ5) ；CD53(0Χ-44) ；CD54 (ICAM-I) ；CD55 (DAF) ；CD58 (LFA-3) ；CD59 (lF5Ag, H19, Protectin, MACIF, MIRL, P-18) ；CD60a(GD3) ；CD60b(9_0-乙?；?GD3) ；CD61(GP Ilia, β 3 整合素)；CD62L(L-選擇素，LAM-1, LECAM-I, MEL-14，Leu8, TQl) ；CD63(LIMP, MLA1, gp55, NGA, LAMP-3, ME491) ；CD64(Fc y RI) ；CD65(神經酰胺，VIM-2) ；CD65s(唾液酰化-CD65，VIM2) ；CD72(Ly-19. 2，Ly-32. 2，Lyb-2) ；CD74 (Ii，不變鏈)；CD75 (sialo-masked 乳酸胺)；CD75S(a 2，6 唾液?；樗岚?；CD80(B7, B7-1，BBl) ；CD81 (TAPA-I)； CD82(4F9, C33, IA-4，KAI1, R2) ；CD84(p75, GR6) ；CD85a(ILT5, LIR2, HL9) ；CD85d(ILT4, LIR2, MIR10) ；CD85j(ILT2, LIRl，MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HM18) ；CD86(B7-2/B70)； CD87 (uPAR) ；CD88(C5aR) ；CD89(IgA Fc 受體，F(xiàn)caR) ；CD91(a 2M-R, LRP) ；CDw92 (p70)； CDw93(GRll) ；CD95(APO-1，F(xiàn)AS，TNFRSF6) ；CD97 (BL-KDD/F12) ；CD98(4F2，F(xiàn)RP-1，RL-388)； CD99(MIC2, E2) ；CD99R(CD99Mab restricted) ；CDlOO (SEMA4D) ；CDlOl (IGSF2, P126, V7) ；CD102(ICAM-2) ；CDl11(PVRL1, HveC, PRRl，Nectin 1，HIgR) ；CD112(HveB, PRR2, PVRL2, Nectin2) ；CDl14 (CSF3R, G-CSRF, HG-CSFR) ；CDl15(c-fms, CSF-1R，M-CSFR)； CD116(GM-CSFRa) ；CDwl19(IFNyR, IFN y RA) ；CD120a(yNFRI, ρ55) ；CD120b(TNFRII, ρ75, TNFR ρ80) ；CD121b(2 型 IL-1R) ；CD122(IL2Rβ ) ；CD123(IL-3Rα ) ；CD124(IL-4Rα )； CD127(p90, IL-7R, IL_7Ra) ；CD128a(IL_8Ra，CXCRl，(暫時命名為 CD181))； CD128b(IL-8Rb, CSCR2,(暫時命名為 CD182)) ；CD130 (gpl30) ；CD131(常見的 β 亞基)；CD132(常見的 Y 鏈，IL-2RY ) ；CDwl36 (MSP-R，RON, pl58-ron) ；CDwl37 (4-1BB， ILA) ；CD139 ；CD141 (Thrombomodulin, Fetomodulin) ；CD147(Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD148(HPTP- η， ρ260, DEP-1) ；CD155(PVR) ；CD156a(CD156, ADAM8, MS2)； CD156b(TACE, ADAMl7, cSVP) ；CDwl56C(ADAMlO) ；CD157(Mo5, BST-1) ；CD162(PSGL-1)； CD164(MGC-24, MUC-24) ；CD 165(AD2, gp37) ；CD168(RHAMM, IHABP, HMMR) ；CD169(唾液酸粘合素，Siglec-1) ；CD170(Siglec 5) ；CD171(L1CAM，NILE) ；CD172(SIRP-1α， MyD-1) ;CD172b(SIRP3 ) ;CD180(RP105，Bgp95，Ly64) ;CD181 (CXCR1，(以前稱作 CD128a)) ；CD182(CXCR2,(以前稱作 CD128b)) ；CD184(CXCR4，NPY3R) ；CD191(CCRl)； CD192 (CCR2) ；CD195 (CCR5) ；CDwl97(CCR7(以前是 CDwl97)) ；CDwl98(CCR8)； CD204(MSR) ；CD205(DEC-205) ；CD206(MMR) ；CD207(Langerin) ；CDw210(CK) ；CD213a(CK)； CDw217(CK) ；CD220(胰島素 R) ；CD221(IGF1 R) ；CD222 (M6P-R, IGFII-R) ；CD224(GGT)； CD226(DNAM-1, PTA1) ；CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ；CD232(VESP-R) ；CD244(2B4, P38, NAIL) ；CD245(p220/240) ；CD256 (APRIL，TALL2，TNF (配體)超家族，成員 13) ；CD257(BLYS, TALLl，TNF (配體)超家族，成員 13b) ；CD261 (TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成員 IOa)； CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ；CD263 (TRAIL-R3, TNBF-R 超家族，成員 IOc)；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila)； CD277 (BT3. 1，B7 家族Butyrophi Iin 3) ；CD280 (TEM22, ENDO 180) ；CD281(TLR1, TOLL 樣受體 1) ；CD282(TLR2, TOLL 樣受體 2) ；CD284(TLR4, TOLL 樣受體 4) ；CD295 (LEPR)； CD298(ATP1B3, Na K ATPase, β3 亞基)；CD300a (CMRF-35H) ；CD300c (CMRF-35A)； CD300e (CMRF-35L1) ；CD302 (DCLl) ；CD305 (LAIRl) ；CD312(EMR2) ；CD315(CD9P1)； CD317(BST2) ；CD321(JAMl) ；CD322(JAM2) ；CDw328(Siglec7) ；CDw329(Siglec9) ；CD68(gp 110, Macrosialin)；和/或甘露糖受體；其中括號中所列名稱代表別名。這樣的標記物的例子包括本文其它地方提供的那些。
在一些具體實施方式
中，可以通過與主要在激活后的巨噬細胞上表達和/或存在的任意物質(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即激活的SCS-Mph標記物)特異性結合的任意靶半體實現(xiàn)靶向SCS-Mph。示例性的激活的SCS-Mph標記物包括但不限于， CDla (R4, T6, HTA-I) ；CDlb (Rl) ；CDlc(M241, R7) ；CD44R(CD44v, CD44v9) ；CD49d (VLA-4 α， α 4 整合素)；CD69 (AIM, EA 1, MLR3, gp34/28, VEA) ； CD105 (Endoglin) ；CD142(組織因子，促凝血酶原激酶，F(xiàn)3) ；CD143(ACE，肽基二肽酶 A，Kininase II) ；CD153 (CD30L, TNSF8)； CD163(M130, GHI/61, RM3/1) ；CD166(ALCAM, KG-CAM，SC-I, BEN, DM-GRASP) ；CD227(MUC1, PUM, PEM, EMA) ；CD253 (TRAIL, TNF (配體)超家族，成員 10) ；CD273(B7DC, PDL2)； CD274(B7H1, PDL1) ；CD275(B7H2, IC0SL) ；CD276 (B7H3) ；CD297(ART4, ADP-核糖轉移酶 4 ; 和Dombrock血型糖蛋白；其中括號中所列名稱代表別名。這樣的標記物的例子包括本文其它地方提供的那些。B細胞靶半體在一些具體實施方式
中，可以通過與補體受體，CRl (即⑶35)或CR2 (即⑶21) (B 細胞以及FDC上表達的蛋白)結合的半體實現(xiàn)靶向B細胞。在一些具體實施方式
中，可以通過B細胞標記物例如⑶19、⑶20和/或⑶22實現(xiàn)靶向B細胞。在一些具體實施方式
中，可以通過B細胞標記物例如⑶40、⑶52、⑶80、CXCR5、VLA-4、II類MHC、表面IgM或IgD、 APRL和/或BAFF-R實現(xiàn)靶向B細胞。本發(fā)明包括以下認識對補體受體或其它APC相關性分子特異性的半體對B細胞的同時靶向會增強體液應答。在一些具體實施方式
中，可以通過與主要在B細胞上表達和/或存在的任意物質(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即B細胞標記物)特異性結合的任意靶半體實現(xiàn)靶向B細胞。示例性的B細胞標記物包括但不限于，⑶lc(M241，R7)； CDld(R3) ；CD2(E-rosette R, Til, LFA-2) ；CD5(T1, Tp67, Leu-1, Ly-I) ；CD6(T12)； CD9 (p24, DRAP-I, MRP-1) ；CDlla(LFA_l α，aL 整合素鏈)；CDllb(aM 整合素鏈， CR3, Mol，C3niR, Mac-1) ；CDllc(a X 整合素，P150，95，AXb2) ；CDwl7(乳酸神經酰胺，LacCer) ；CD18 (Integrin β 2，CDl la，b，亞基)；CD19(B4) ； CD20(B1, Bp35)； CD21(CR2, EBV-R, C3dR) ；CD22(BL-CAM，Lyb8, Siglec-2) ；CD23(FceRII, B6, BLAST-2， Leu-20) ；CD24(BBA-1, HSA) ；CD25(Tac 抗原，IL_2Ra，p55) ；CD26(DPPIV 內酶，ADA 結合蛋白)；CD27(T14，S152) ；CD29(血小板 GPIIa，β-1 整合素，GP) ；CD31 (PECAM-1， Endocam) ；CD32(FCyRII) ；CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD37(gp52_40) ；CD38(ADP-核糖基環(huán)化酶，T10) ；CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶 _1) ；CD40(Bp50) ；CD44(ECMRII， Η-CAM, Pgp-1) ；CD45(LCA, T200, B220, Ly5) ；CD45RA ；CD45RB ；CD45RC ；CD45R0(UCHL-I)；CD46 (MCP) ；CD47(gp42, IAP, 0Α3, Neurophilin) ；CD47R(ΜΕΜ-133) ；CD48(Blast-1,Hulym3, BCM-I, OX-45) ；CD49b (VLA-2 α，gpla, α 2 整合素)；CD49c (VLA-3 α，α 3 整合素)；CD49d(VLA-4a，a 4 整合素)；CD50 (ICAM-3) ；CD52 (CAMPATH-1，HES) ；CD53(0X_44)； CD54 (ICAM-I) ；CD55(DAF) ；CD58(LFA_3) ；CD60a(GD3) ；CD62L (L-選擇素，LAM-1, LECAM-I, MEL-14, Leu8, TQ 1) ；CD72(Ly-19. 2，Ly-32. 2，Lyb-2) ；CD73(Ecto_5 ‘-核苷酸酶)； CD74(Ii，不變鏈)；CD75(sialo-masked Lactosamine) ；CD75S ( α 2，6 唾液?；樗岚?； CD77(Pk 抗原，BLA，CTH/Gb3) ；CD79a (Ig α，MBl) ；CD79b (Ig β，Β29) ；CD80 ；CD81 (TAPA-I)； CD82(4F9, C33, IA4, KAI1，R2) ；CD83(HB15) ；CD84(P75, GR6) ；CD85j(ILT2, LIRl，MIR7)； CDw92(p70) ；CD95(AP0-1, FAS, TNFRSF6) ；CD98(4F2, FRP-I, RL-388) ；CD99(MIC2, E2)； CDlOO(SEMA4D) ；CD102(ICAM-2) ;CD108(SEMA7A, JMH 血型組抗原)；CDwl19(IFN γR， IFN y Ra) ；CD120a(TNFRI, p55) ；CD 120b (TNFRII, p75, TNFR p80) ；CD121b(2 型 IL-1R)； CD122(IL2R3) ;CD124(IL-4Ra) ;CD130(gpl30) ;CD132(常見的 Y 鏈，IL_2Ry); CDw137(4-1BB, I LA) ；CD139 ； CD147 (Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD150(SLAM，IP0-3)； CD162(PSGL-I) ;CD164(MGC_24，MUC-24) ；CD166(ALCAM, KG-CAM，SC-I, BEN, DM-GRASP)； CD167a(DDRl, trkE, cak) ；CD171(L1CMA, NILE) ；CD175s (Sialyl-Tn(S-Tn)) ；CD180(RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD185(CXCR5) ；CD192(CCR2) ；CD196(CCR6)； CD197(CCR7(以前是 CDwl97)) ；CDwl97 (CCR7, EBI1, BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205 (DEC-205)； CDw210 (CK) ；CD213a(CK) ；CDw217(CK) ；CDw218a(IL18Rα ) ；CDw218b(IL18Rβ )； CD220(胰島素 R) ； CD221(IGF1 R) ； CD222 (M6P-R, IGFII-R) ； CD224(GGT) ； CD225 (Leul3)； CD226(DNAM-1, PTA1) ；CD227(MUC1, PUM, PEM, EMA) ；CD229 (Ly9) ；CD230(朊病毒蛋白 (Prp)) ；CD232(VESP-R) ；CD245(p220/240) ；CD247(CD3Z 鏈)；CD261(TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成員 IOa) ；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ；CD263 (TRAIL-R3, TNF-R 超家族，成員 IOc) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD267(TACI, TNF-R 超家族，成員 13B) ；CD268 (BAFFR，TNF-R 超家族，成員 13C) ；CD269(BCMA, TNF-R 超家族，成員 16) ；CD275(B7H2, IC0SL) ；CD277(BT3. 1. B7 家族Butyrophilin 3) ； CD295 (LEPR) ； CD298 (ATP1B3 Na K ATPase β3 亞基)； CD300a(CMRF-35H) ；CD300c (CMRF-35A) ；CD305(LAIRl) ；CD307(IRTA2) ；CD315(CD9P1)； CD316 (EW12) ；CD317(BST2) ；CD319(CRACC, SLAMF7) ；CD321(JAMl) ；CD322 (JAM2)； CDw327(Siglec6,CD33L) ；CD68(gp 100,Macrosialin) ；CXCR5 ;VLA_4 ;II 類MHC ；表面 IgM ；表面IgD ；APRL ；和/或BAFF-R ；其中括號中所列名稱代表別名。這樣的標記物的例子包括本文其它地方提供的那些。在一些具體實施方式
中，可以通過與主要在激活后的B細胞上表達和/或存在的任意物質(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即激活的B細胞的標記物)特異性結合的任意靶半體實現(xiàn)靶向B細胞。示例性的激活的B細胞標記物包括但不限于，CDla(R4，T6， HTA-1) ；CDlb (Rl) ；CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3'硫代 Lewis X) ；CD15su (6 硫代-唾液酰 Lewis X) ；CD30(Ber-H2, Ki-I) ；CD69(AIM, EA 1，MLR3, gp34/28, VEA) ；CD70(Ki_24， CD27 配體)；CD80(B7，B7-1，BBl) ；CD86 (B7-2/B70) ；CD97 (BL-KDD/F12) ；CD125 (IL-5R α )； CD126(IL-6Ra) ；CD138 (Syndecan-1，類肝素硫酸鹽蛋白聚糖);CD152(CTLA_4)； CD252(0X40L，TNF (配體)超家族，成員 4) ；CD253 (TRAIL，TNF (配體)超家族，成員 10)；CD279 (PDl) ；CD289(TLR9, TOLL樣受體9)；和CD312 (EMR2)；其中括號中所列名稱代表別名。這樣的標記物的例子包括本文其它地方提供的那些。濾泡樹突狀細胞最初探測到以前未知的抗原的B細胞通常表達對該抗原具有亞最適結合親和性的B細胞受體(BCR，即具有跨膜結構域的抗體)。但是，當B細胞進入生發(fā)中心(GC)反應時，B細胞能夠將其產生的抗體的親和性增加幾個數量級。這個通常持續(xù)幾周的事件依賴于累積、保留抗原性材料并將抗原性材料呈遞至激活的B細胞的FDC。B細胞(雖然有力地增殖)反復地使編碼抗體的抗原結合位點的遺傳序列發(fā)生變異并進行類別轉換重組以形成分泌的高親和性抗體(多數為IgG同種型)。GC反應還刺激長命的記憶B細胞和保持高保護性抗體效價(通常為很多年)的胞質細胞的產生。預料在皮下注射后靶向FDC并被長期保留在FDC表面的疫苗納米載體增強針對疫苗接種有反應的GC反應并改善想要的體液免疫應答的親和性和長期性。在一些具體實施方式
中，可以通過與補體受體，CRl (即⑶35)或CR2 (即⑶21) (FDC以及B細胞上表達的蛋白)結合的半體實現(xiàn)靶向FDC。半體的例子包括在本文其它地方提供的那些。包含多個靶半體的疫苗納米載體GC反應和B細胞存活不僅需要FDC，還依賴于激活的⑶4T細胞提供的幫助。當 ⑶4T細胞首先被DC (DC將II類MHC中的同源肽(pMHC)呈遞以達到濾泡幫助(Tfh)表型) 刺激時，提供的幫助是最有效的。然后新生成的Tfh細胞朝著B濾泡遷移并向那些呈遞相同的PMHC復合體的B細胞提供幫助。為此，B細胞首先獲得抗原性材料(例如，病毒或病毒樣疫苗)，將其內在化并處理(即提取裝載至II類MHC的肽)，然后將pMHC呈遞至Tfh細胞。因此，本發(fā)明包括以下認識刺激最適體液免疫力的疫苗能夠結合幾個特征和成分(圖1) (a)靶向DC并被DC呈遞的針對CD4T細胞的抗原性材料；(b)能夠以原態(tài)形式被SCS-Mph呈遞至抗原特異性濾泡B細胞的高密度表面抗原；(c)為了呈遞至Tfh細胞，被濾泡B細胞獲得并被濾泡B細胞處理的能力(本發(fā)明包括以下認識B細胞容易地獲得來自SCS-Mph的顆粒物質并將其內在化)；(d)到達FDC并以完整形式被長期保留在FDC上的能力；和(e)賦予APC完全免疫原性并避免或克服耐受的輔助性活性。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一個靶半體。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體的所有靶半體是彼此相同的。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體許多不同類型的靶半體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含多個單獨的靶半體，其每個彼此相同。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體精確包含一種類型靶半體。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體精確包含兩種不同類型的靶半體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上不同類型的靶半體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含單一類型的靶半體，其引導疫苗納米載體輸送至單一的細胞類型(例如僅輸送至SCS-Mph)。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含單一類型的靶半體，其引導疫苗納米載體輸送至多種細胞類型(例如既輸送至 SCS-Mph又輸送至FDC)。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型靶半體，其中第一種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至一種細胞類型，第二種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至第二種細胞類型。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型的靶半體，其中一種或多種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至一種細胞類型，一種或多種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至第二種細胞類型。僅舉一例，疫苗納米載體可以包含兩種類型靶半體，其中第一種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至DC，第二種類型靶半體引導疫苗納米載體輸送至SCS-Mph。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含至少一個靶半體，其與疫苗納米載體的外表面結合。在一些具體實施方式
中，結合是共價的。在一些具體實施方式
中，共價結合由一個或多個連接子介導。在一些具體實施方式
中，結合是非共價的。在一些具體實施方式中，非共價結合由電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極_偶極相互作用和/或其組合所介導。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包括脂膜(例如脂雙層、脂單層等)，其中至少一個靶半體與脂膜結合。在一些具體實施方式
中，至少一個靶半體嵌入脂膜內。一些具體實施方式
中，至少一個靶半體嵌入脂雙層的腔內。在一些具體實施方式
中，至少一個靶半體可以位于疫苗納米載體的多個位點。例如，第一個靶半體可以嵌于脂膜內，第二個免疫刺激試劑可以與疫苗納米載體的外表面結合。再舉一例，第一個靶半體和第二個靶半體可以均與疫苗納米載體的外表面結合。免疫刺激試劑如上所述，在一些具體實施方式
中，納米載體可以轉運一個或多個幫助刺激免疫應答的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含同時刺激B細胞和T細胞的單一類型的免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種類型免疫刺激試劑，其中第一種類型免疫刺激試劑刺激B細胞，第二種類型免疫刺激試劑刺激T細胞。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含兩種以上類型的免疫刺激試劑，其中一種或多種類型免疫刺激試劑刺激B細胞，一種或多種類型免疫刺激試劑刺激T細胞。對于可用于本發(fā)明的免疫刺激試劑的更詳細的描述，參見以上部分。B細胞激活的檢驗在一些具體實施方式
中，可以應用各種檢驗以確定B細胞或B細胞組中的免疫應答是否被刺激(即B細胞或B細胞組是否變成“激活的”)。在一些具體實施方式
中，可以通過測定抗體效價確定B細胞中免疫應答的刺激。一般地，“抗體效價”是指在特定的稀釋度時抗體與抗原結合并中和抗原的能力。例如，高抗體效價是指在甚至是高稀釋度時抗體與抗原結合并中和抗原的能力。在一些具體實施方式
中，如果在比未免疫個體或預免疫血清高至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約50倍、至少約100倍、至少約500倍、至少約1000倍或多于約1000倍的稀釋度時抗體效價測定為陽性，則稱B細胞中免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過測定抗體親和性確定B細胞中免疫應答的刺激。特別地，如果抗體具有IO-7M以下、ICT8M以下、ICT9M以下、ΙΟ,Μ以下、IiT11M以下、ICT12M 以下或更低的平衡解離常數(Kd)，則稱B細胞中免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，如果發(fā)生類別轉換重組，則稱B細胞中T細胞依賴性免疫應答被刺激。特別地，從IgM轉換至IgG同種型或轉換至IgA或轉換至IgG與IgA同種型的混合物是B細胞中T細胞依賴性免疫應答的指征。
在一些具體實施方式
中，通過測定抗原特異性抗體的親和成熟來確定B細胞中的免疫應答。親和成熟發(fā)生于生發(fā)中心反應中，其中激活的B細胞反復地使編碼抗原結合區(qū) 域的免疫球蛋白基因發(fā)生變異。產生變體抗體(其具有針對抗原的更高的親和性)的B細胞優(yōu)選地被允許存活并增殖。因此，隨著時間的進行，GC中的B細胞產生的抗體獲得漸增的親和性。在一些具體實施方式
中，該過程的結果是出現(xiàn)高抗體效價(例如，甚至在高稀釋度時與抗原結合并中和抗原的高親和性IgG抗體)。在一些具體實施方式
中，如果形成了記憶B細胞和/或能夠長時間地產生大量的高親和性抗體的長生血漿細胞，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，在為了測試記憶B細胞和/或能夠長時間地產生大量的高親和性抗體的長生血漿細胞的存在而進行疫苗接種后的不同的時間間隔(例如，2周、1個月、2個月、6個月、1年、2年、5 年、10年、15年、20年、25年或更長)測定抗體效價。在一些具體實施方式
中，通過測定體液應答而稱存在記憶B細胞和/或能夠長時間地產生大量的高親和性抗體的長生血漿細胞 (例如，如果相對于最初致敏，在后來的加強性疫苗接種后體液免疫應答顯著性更迅速且產生更高的效價)。在一些具體實施方式
中，如果發(fā)生有力的生發(fā)中心反應，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，可以通過進行組織學實驗目視檢測有力的生發(fā)中心反應。在一些具體實施方式
中，可以通過進行含有抗原的淋巴組織(例如疫苗引流淋巴結、脾等)的免疫組化而檢驗有力的生發(fā)中心反應。在一些具體實施方式
中，免疫組合之后進行流式細胞術。可以通過鑒定抗體同種型(例如，IgG、IgA、IgE、IgM)而確定B細胞中免疫應答的刺激。在一些具體實施方式
中，B細胞產生IgG同種型的抗體是想要的B細胞中的免疫應答。在一些具體實施方式
中，通過在中和檢驗中分析抗體功能而確定B細胞中的免疫應答。特別地，將不存在血清時微生物(例如，病毒、細菌、真菌、原生動物、寄生蟲等)在體外感染易感細胞系的能力與向細胞生長的培養(yǎng)基中加入了不同稀釋度的免疫和非免疫血清的狀態(tài)相比較。在一些具體實施方式
中，如果微生物的感染在約1 5、約1 10、約 1 50、約 1 100、約 1 500、約 1 1000、約 1 5000、約 1 10，000 或更低的稀釋度被中和，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。在一些具體實施方式
中，通過以對微生物通常為致死的劑量感染經免疫的和未免疫的小鼠組(例如，疫苗接種后3周或更久)來確定動物模型中疫苗的功效。監(jiān)視兩個組的存活程度和存活持續(xù)時間，通常描繪于Kaplan-Meier曲線中。為了確定延長的存活是否是由B細胞應答造成，可以將來自免疫小鼠的血清轉移為“被動疫苗)以確定對非免疫小鼠對抗致死性感染的保護。本領域普通技術人員就認識到以上描述的檢驗僅僅是可用于確定是否發(fā)生B細胞激活的示例性方法?？捎糜诖_定是否發(fā)生B細胞激活的任何本領域技術人員已知的方法皆落入本發(fā)明的范圍內。此處描述的檢驗以及其它的可用于確定是否發(fā)生B細胞激活的檢驗在 Current Protocols in Immunology (John Wiley & Sons, Hoboken, NY, 2007 ；通過弓| 用并入本文)中有描述。疫苗納米載體
一般地，疫苗納米載體是包含例如能夠同時刺激B細胞和T細胞中免疫應答的至少一個免疫調節(jié)試劑的物質。任何疫苗納米載體均可用于本發(fā)明。在一些具體實施方式
中，納米載體是生物可降解的且生物可兼容的。一般地，生物可兼容物質對細胞是非毒性的。在一些具體實施方式
中，如果向細胞中加入一種物質后的結果為一定闕值(例如，50% 以下、20%以下、10%以下、5%以下或更少的細胞死亡)以下的細胞死亡，則該物質被認為是生物可兼容的。在一些具體實施方式
中，如果向細胞中加入一種物質后不引起不利作用，則該物質被認為是生物可兼容的。一般地，生物可降解物質是在治療相關時間段(例如、幾周、幾個月或幾年)之內在生理條件下進行分解的物質。在一些具體實施方式
中，生物可降解的物質是由細胞機制分解的物質。在一些具體實施方式
中，生物可降解的物質是由化學過程分解的物質。在一些具體實施方式
中，納米載體既是生物可兼容物質又是生物可降解物質。在一些具體實施方式
中，納米載體是生物可兼容物質但不是生物可降解物質。在一些具體實施方式
中，納米載體是生物可降解物質但不是生物可兼容物質。一般地，根據本發(fā)明的納米載體是最大尺寸(例如直徑)在100微米(μπι)以下的任何物質。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有IOym以下的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有1000納米(nm)以下的最大尺寸。在一些具體實施方式中，本發(fā)明的納米載體具有 900nm、800nm、700nm、600nm、500nm、400nm、300nm、200nm 或IOOnm以下的最大尺寸。通常，本發(fā)明的納米載體具有300nm或以下的最大尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有250nm或以下的最大尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為200nm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為150nm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有最大為IOOnm或以下的尺寸(例如直徑)。在本發(fā)明的一些具體實施方式
中使用更小的納米載體，例如具有50nm或以下的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有25nm至200nm范圍的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的納米載體具有20nm至IOOnm范圍的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，納米載體具有IOOOnm以下的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約750nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約500nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約450nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約400nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約350nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約300nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約275nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約250nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約225nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約200nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約175nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約150nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約125nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約IOOnm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約75nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約50nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大約25nm的直徑。在一些具體實施方式
中，納米載體具有大于腎臟排泄物限制的尺寸(例如納米載體具有6nm以上的直徑)。在一些具體實施方式
中，納米載體足夠小以避免肝臟將納米載體從血流中清除(例如納米載體具有IOOOnm以下的直徑)。一般地，納米載體的生理化學特征應該允許納米載體通過減少腎臟排泄和肝臟清除而在血漿中循環(huán)更長時間。通常想要使用大小、形狀和/或組成相對一致的納米載體群，從而每個納米載體具有相似的特征。例如，至少80%、至少90%或至少95%的納米載體可以具有落在平均直徑或平均最大尺寸5 %、10 %或20 %以內的直徑或最大尺寸。在一些具體實施方式
中，納米載體群的大小、性質和/或組成可以是非均勻的。根據本發(fā)明可以使用多種不同的納米載體。在一些具體實施方式
中，納米載體為球或橢圓球。在一些具體實施方式
中，納米載體為球或橢圓球。在一些具體實施方式
中，納米載體為平的或板狀的。在一些具體實施方式
中，納米載體為立方體或立方形。在一些具體實施方式中，納米載體為橢圓或橢圓形。在一些具體實施方式
中，納米載體為圓柱體、圓錐體或棱錐。納米載體可以是實心的或凹的且可以包含一個或多個層。在一些具體實施方式
中，每個層相對于其它層具有獨特的成分和獨特的特性。僅舉一例，納米載體可以具有核心 /殼結構，其中核心是一個層(例如聚合物核心)而殼是第二個層(例如脂雙層或單層)。納米載體可以包含多個不同的層。在一些具體實施方式
中，一個層可以是實質上交聯(lián)的，第二個層不是實質上交聯(lián)的，等等。在一些具體實施方式
中，一個層、一些層或所有不同的層可以包含一個或多個免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或其組合。在一些具體實施方式中，一個層包含免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑，第二個層不包含免疫調節(jié) 試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑，等等。在一些具體實施方式
中，每一個單獨的層包含不同的免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或其組合。脂疫苗納米載體在一些具體實施方式
中，納米載體可以可選地包含一個或多個脂。在一些具體實施方式中，納米載體可以包含脂質體。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含脂雙層。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含脂單層。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含膠團。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含核心，核心包含由脂層(例如脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的聚合物基質。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含由脂層(例如脂雙層、脂單層等)環(huán)繞的非聚合物核心(例如金屬顆粒、量子點、陶顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等)。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含脂雙層，所述脂雙層的方向使得納米載體的內表面和外表面是親水性的，脂雙層的腔是疏水性的。包含脂雙層的疫苗納米載體的例子在實施例2中描述并在圖3-8中顯示。在一些具體實施方式
中，疏水性免疫調節(jié)試齊U、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與脂雙層的腔結合(例如嵌于其內)。在一些具體實施方式中，親水性免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與納米載體內部和/或外部結合(例如共價或非共價結合、包埋于其內等)。在一些具體實施方式
中，親水性免疫調節(jié) 試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與脂雙層的內表面和/或外表面結合(例如共價或非共價結合、包埋于其內等)。在一些具體實施方式
中，脂雙層的內親水性表面與兩性物質結合。在一些具體實施方式
中，兩性物質的方向使得兩性物質的親水端與脂雙層的內表面結合，并且兩性物質的疏水端朝向納米載體的內部，從而在納米載體內部產生疏水性的環(huán)
^Mi ο在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含脂單層，所述脂單層的方向使得納米載體的內部是疏水性的，納米載體的外部是親水性的。包含脂單層的疫苗納米載體的例子在實施例2中描述并在圖9和10中顯示。在一些具體實施方式
中，疏水性免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與納米載體的內部和/或脂單層的內表面結合(例如共價或非共價結合、包埋于其內等)。在一些具體實施方式
中，親水性免疫調節(jié)試劑、靶半體和/ 或免疫刺激試劑可以納米載體的外部和/或脂單層的外表面(例如共價或非共價結合、包埋于其內等)。在一些具體實施方式
中，脂雙層的內疏水性表面與兩性物質結合。在一些具體實施方式中，兩性物質的方向使得兩性物質的疏水端與脂雙層的內表面結合，并且兩性物質的親水端朝向納米載體的內部，從而在納米載體內部產生親水性的環(huán)境。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含一個或多個與納米載體的外表面結合的納米顆粒。包含與納米載體的外表面結合的納米顆粒的疫苗納米載體的例子在實施例2 中描述并在圖4、6和8中顯示。納米載體中脂的百分率范圍可以為0%至99%重量、10%至99%重量、25%至 99%重量、50%至99%重量或75%至99%重量。在一些具體實施方式
中，納米載體中脂的百分率范圍可以為0%至75%重量、0%至50%重量、0%至25%重量或0%至10%重量。在一些具體實施方式
中，納米載體中脂的百分率可以為大約重量、大約2%重量、大約 3%重量、大約4%重量、大約5%重量、大約10%重量、大約15%重量、大約20%重量、大約 25%重量或大約30%重量。在一些具體實施方式
中，脂是油。一般地，納米載體中可包括任何本領域已知的油。在一些具體實施方式
中，油可以包含一個或多個脂肪酸基團或其鹽。在一些具體實施方式中，脂肪酸基團包含可消化的長鏈(例如C8-C5tl)取代的或非取代的烴。在一些具體實施方式中，脂肪酸基團可以是Cltl-C2tl脂肪酸或其鹽。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是C15-C2tl脂肪酸或其鹽。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是C15-C25脂肪酸或其鹽。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是不飽和的。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是單不飽和的。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是多不飽和的。在一些具體實施方式
中，不飽和脂肪酸基團的雙鍵可以是順式構象。在一些具體實施方式
中，不飽和脂肪酸的雙鍵可以是反式構象。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是一個或多個丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸，棕櫚酸，硬脂酸，正二十酸、二十二酸或二十四酸。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是一個或多個棕櫚油酸、油酸、十八碳烯酸、亞油酸、α-亞麻酸、Y-亞油酸、花生四烯酸、廿碳烯-9-酸、花生四烯酸、十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸。在一些具體實施方式
中，油是液態(tài)甘油三酸酯。適合用于本發(fā)明的油包括但不限于，杏仁(almond)、杏仁(apricot kernel)、鱷梨、巴西棕櫚(babassu)、香檸檬、黑加侖種子、琉璃苣、刺檜、甘菊、油菜、香菜、巴西棕櫚 (carnauba)、蓖麻、肉桂、可可脂、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉花種子、鴯鹋、桉樹、夜來香、魚類、亞麻籽、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子堅果、牛膝草、荷荷巴油(jojoba)、夏威夷胡桃、雜薰衣草油(Iavandin)、薰衣草、檸檬、山蒼子(litsea cubeba)、澳洲堅果(macademia nut)、錦葵、芒果種子、繡線菊種子(meadowfoam seed)、水貂、肉豆蔻、橄欖、橙、深海鱸魚(orange roughy)、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟種子、南瓜種子、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、 sasquana、香薄荷(savoury)、沙棘(seabuckthorn)、芝麻、牛油樹脂、硅樹脂、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿(tsubaki)、香根草、胡桃和小麥胚芽油，及其組合。適合用于本發(fā)明的油包括但不限于硬脂酸丁酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯、環(huán)甲硅油、癸二酸二乙酯、二甲硅油 360、豆蔻酸異丙酯、礦物油、辛基十二醇、油醇、硅樹脂油，及其組合。在一些具體實施方式
中，脂是激素(例如雌激素、睪丸激素)、類固醇(例如膽固醇、葉酸)、維生素(例如維生素 E)、磷脂(例如縮醛磷脂酰膽堿)、鞘脂類(例如神經酰胺)或脂蛋白(例如阿樸脂蛋白)。包含聚合物基質的納米載體在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含一個或多個聚合物。在一些具體實施方式中，聚合物基質可由包被層(例如脂質體、脂單層、膠團等)環(huán)繞。在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與聚合物基質結合。在這樣的具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑有效包埋于納米載體內。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與聚合物基質共價結合。在一些具體實施方式
中，共價結合由連接子介導。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑與聚合物基質非共價結合。例如，在一些具體實施方式中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以包埋于聚合物基質內、或由聚合物基質環(huán)繞，和/或分布在聚合物基質中。作為選擇，抑或是另外，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以通過疏水相互作用、電荷作用、范德華力等與聚合物基質結合。眾多的聚合物和從其中形成聚合物基質的方法在藥物輸送領域是已知的。一般地，聚合物基質包含一個或多個聚合物。根據本發(fā)明可以使用任何聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包含兩個或多個單體的共聚物。在序列方面，共聚物可以是無規(guī)，嵌段或包含無規(guī)和嵌段序列的組合。通常，根據本發(fā) 明的聚合物是有機聚合物。聚合物的例子包括聚乙烯，聚碳酸酯(如聚(1，3_二惡烷-2酮))、聚酐(如聚(癸二酸酐))、聚羥基酸(如聚(β-羥基烷酸酯))、聚丙基丁烯二酸酯、聚己內酯、聚酰胺(如聚己內酰胺)、聚縮醛、聚醚、聚酯(如聚乳酸、聚甘醇酸)、聚(原酸酯)、聚腈基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯和聚胺。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的聚合物包括是根據21C.F.R§ 177.2600由美國食品與藥品管理局(FDA)批準用于人類的聚合物，包括但不限于聚酯(例如，聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚己內酯、聚戊內酯、聚(1，3_ 二惡烷-2酮))；聚酐(如聚(癸二酸酐))；聚醚(如聚乙二醇)；聚脲；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；和聚腈基丙烯酸酯。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是親水性的。例如，聚合物可以包含陰離子基團(例如，磷酸鹽基團、硫酸鹽基團、羧酸鹽基團)；陽離子基團(例如，季胺基團)；或極性基團(例如羥基基團、巰基基團、胺基團)。在一些具體實施方式
中，包含親水性聚合物基質的納米載體在納米載體內產生親水性環(huán)境。在一些具體實施方式
中，親水性免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與親水性聚合物基質結合。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是疏水性的。在一些具體實施方式
中，包含疏水性聚合物基質的納米載體在納米載體內產生疏水性環(huán)境。在一些具體實施方式
中，疏水性免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與疏水性聚合物基質結合。在一些具體實施方式
中，聚合物可以被一個或多個半體和/或官能團修飾。根據本發(fā)明可以使用任何半體或官能團。在一些具體實施方式
中，聚合物可以被聚乙二醇(PEG)、碳水化合物和/或源自多糖的聚縮醛修飾(Papisov，2001，ACSSymposium Series, 786 301 ；通過引用并入本文)。在一些具體實施方式
中，聚合物可以被脂或脂肪酸基團修飾，其性質在下文中更詳細描述。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是一個或多個丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸，棕櫚酸，硬脂酸，正二十酸、二十二酸或二十四酸。在一些具體實施方式
中，脂肪酸基團可以是一個或多個棕櫚油酸、油酸、十八碳烯酸、亞油酸、α-亞油酸、Y-亞油酸、花生四烯酸、廿碳烯-9-酸、花生四烯酸、十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸。
在一些具體實施方式
中，聚合物可以是聚酯，包括包含乳酸和羥基乙酸單元的共聚物，例如聚乳酸-羥基乙酸共聚物和聚(丙交酯-乙交酯)共聚物，在本文中一起被稱為 “PLGA”;以及包含羥基乙酸單元的均聚物(本文稱為“PGA”)和包含乳酸單元的均聚物(例如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D，L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯和聚-D，L-丙交酯，在本文中一起被稱為“PLA”)。在一些具體實施方式
中，示例性的聚酯包括例如聚羥基酸； PEG共聚物和丙交酯和乙交酯的共聚物(例如，PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG 共聚物，及其衍生物。在一些具體實施方式
中，聚酯包括例如聚酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-PEG共聚物、聚(己內酯)、聚(己內酯)-PEG共聚物、聚賴氨酸、聚賴氨酸-PEG共聚物、聚(乙烯亞胺)、聚(乙烯亞胺)-PEG的共聚物、聚(L-丙交酯-L-賴氨酸)共聚物、聚 (絲氨酸酯)、聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-羥基乙酸]，及其衍生物。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是PLGA。PLGA是乳酸和羥基乙酸的生物可兼容和生物可降解共聚物，各種形式的PLGA的特征根據乳酸羥基乙酸的比率。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸或D，L-乳酸。可以通過改變乳酸羥基乙酸的比率調整PLGA的降解速率。在一些具體實施方式
中，用于本發(fā)明的PLGA的特征在于乳酸羥基乙酸的比率是大約85 15、大約75 25、大約60 40、大約50 50、大約40 60、大約25 75或大約 15 85。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是一個或多個丙烯酸聚合物。在一些具體實施方式中，丙烯酸聚合物包括例如丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯，和包含一個或多個前述聚合物的組合。丙烯酸聚合物可以包含丙烯酸和甲基丙烯酸酯完全聚合化的共聚物(具有少量的季銨基團)。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是陽離子聚合物。一般地，陽離子聚合物能夠縮合和/或保護帶負電的核酸鏈(例如DNA、RNA或其衍生物)。含有胺的聚合物例如聚(賴氨酸)(Zauner 等人，1998，Adv. Drug Del. Rev. ,30 97 ；禾口 Kabanov 等人，1995， Bioconjugate Chem.，6 :7 ；二者皆通過引用并入本文)、聚(乙烯亞胺)(PEI ;Boussif 等人，1995，Proc. Natl. Acad. Sci. ,USA, 1995,92 7297 ；通過引用并入本文)和聚(酰胺-胺) 樹枝狀高分子(Kukowska-Latallo 等人，1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93 4897 ；Tang 等人’ 1996, Bioconjugate Chem. ,7 703 ；禾口 Haensler 等人，1993, Bioconjugate Chem. ,4 372;所有文獻通過引用并入本文)是在生理pH帶正電的，與核酸形成離子對，在多種細胞系中調節(jié)轉染。
在一些具體實施方式
中，聚合物可以是攜帶陽離子側鏈的可降解的聚酯(Putnam 等人，1999，Macromolecules, 32 3658 ；Barrera 等人，1993，J.Am. Chem. Soc.，115 11010 ； Kwon 等人，1989，Macromolecules, 22 3250 ；Lim 等人，1999，J. Am. Chem. Soc.，121 5633 ；和Zhou等人，1990，Macromolecules，23 3399 ；所有文獻通過引用并入本文)。這樣的聚酯的例子包括聚(L-丙交酯-L賴氨酸)共聚物(Barrera等人，1993，J. Am. Chem. Soc. ,115 11010 ；通過引用并入本文)，聚(絲氨酸酯)(Zhou等人，1990，Macromolecules, 23 3399 ；通過引用并入本文)，聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)(Putnam等人，1999，Macromolecules, 32 3658 ；和Lim等人，1999，J.Am. Chem. Soc.，121 5633 ；二者皆通過引用并入本文)，和聚 (4-輕基-L-脯氨酸酯)(Putnam 等人，1999，Macromolecules，32 3658 ；和 Lim 等人，1999， J. Am. Chem. Soc.，121 5633 ；二者皆通過引用并入本文)。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的聚合物可以是碳水化合物，其性質在下文中更詳細描述。在一些具體實施方式
中，碳水化合物可以是包含由糖苷鍵連接的單糖(或其衍生物)的多糖，如本領域所知。在一些具體實施方式
中，碳水化合物可以是一個或多個普魯蘭糖(pullulan)、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥基纖維素、甲基纖維素、右旋糖苷、環(huán)右旋糖苷、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、卡拉膠(carageenan)、glycon、直鏈淀粉、殼聚糖、N, O-羥甲基殼聚糖、海藻膠和海藻酸、淀粉、幾丁質、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素 (pustulan)、肝素、透明質酸、卡德蘭(curdlan)和黃原膠。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的聚合物可以是蛋白或肽，其性質在下文中更詳細描述?？捎糜诒景l(fā)明的示例性的蛋白包括但不限于白蛋白、膠原、聚(氨基酸)(例如聚賴氨酸)、抗體等。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的聚合物可以是核酸(即多核苷酸)，其性質在下文中更詳細描述。可用于本發(fā)明的示例性的多核苷酸包括但不限于DNA、RNA等。這些和其它聚合物的性質以及制備方法在本領域是已知的(參見，例如，美國專利號 6，123，727,5, 804，178,5, 770，417,5, 736，372,5, 716，404,6, 095，148,5, 837，752、 5，902，599,5，696，175,5，514，378,5，512，600,5，399，665,5，019，379,5，010，167, 4，806，621、4，638，045 和 4，946，929 ；Wang 等人，2001，J. Am. Chem. Soc.，123 9480 ；Lim 等人，2001，J. Am. Chem. Soc.，123 2460 ；Langer，2000，Acc. Chem. Res. ,33 94 ；Langer， 1999，J. Control. Release, 62 7 ；禾口 Uhrich 等人，1999，Chem. Rev. ,99 3181 ；所有文獻通過引用并入本文)。更一般地，多種合成合適的聚合物的方法在以下文獻中描述Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Aminesand Ammonium Salts, Ed. by Goethals, Pergamon Press, 1980 ；Principles ofPolymerization by Odian, John Wiley & Sons, Fourth Edition, 2004 ；ContemporaryPolymer Chemistry by Allcock 等人’ Prentice-Hall, 1981 ；Deming 等人，1997，Nature, 390 386 ；和美國專利號 6，506，577、 6，632，922,6, 686，446和6，818，732 ；所有文獻通過引用并入本文。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是直鏈或支鏈聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是樹突狀聚合物。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是彼此實質上交聯(lián) 的。在一些具體實施方式
中，聚合物可以是無實質交聯(lián)的。在一些具體實施方式
中，聚合物可以不進行交聯(lián)步驟而用于本發(fā)明。還應該理解，本發(fā)明的納米載體可以包含嵌段共聚物、接枝共聚物、共混、混合物和/或任何前述和其它聚合物的加合物。本領域技術人員將認識到本文所列舉的聚合物代表可用于本發(fā)明的聚合物的示例性而非窮舉性的列舉。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含嵌入反膠團的免疫調節(jié)試劑。僅舉一例，脂質體納米載體可以包含嵌入脂質體膜的疏水性免疫調節(jié)試劑，和嵌入脂質體納米載體的內部中的反膠團的親水性免疫調節(jié)試劑。非聚合物納米載體在一些具體實施方式
中，納米載體不包含聚合物成分。在一些具體實施方式
中，納米載體可以包含金屬顆粒、量子點、陶顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑可以與這樣的非聚合物納米載體的表面結合。在一些具體實施方式
中，非聚合物納米載體是非聚合物成分的聚集體，例如金屬原子(例如金原子)的聚集體。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑與非聚合物成分的聚集體的表面結合，包埋于非聚合物成分的聚集體內，或由非聚合物成分的聚集體環(huán)繞，和/或分布在非聚合物成分的聚集體中。在本發(fā)明的一些具體實施方式
中，非聚合物納米載體包含梯度或均勻的合金。在本發(fā)明的一些具體實施方式
中，納米載體包含具有光學上可測和/或磁性可測性質的顆粒。包含兩性物質的納米載體在一些具體實施方式
中，納米載體可以可選地包含一個或多個兩性物質。在一些具體實施方式
中，兩性物質能夠促進具有增加的穩(wěn)定性、改善的一致性或增加的粘性的納米載體的產生。在一些具體實施方式
中，兩性物質可以與脂膜(例如脂雙層、脂單層等)的內表面結合。例如，如果脂膜的內表面是親水性的，則包埋于脂納米載體內的空間是親水性的。但是，如果兩性物質與親水性脂膜的內表面結合以致于兩性物質的親水端與親水性脂膜的內表面結合并且兩性物質的疏水段與納米載體的內部結合，則包埋于納米載體內的空間是疏水性的。納米載體中的兩性物質的百分率范圍可以為0%至99%重量、10%至99%重量、 25%至99%重量、50%至99%重量或75%至99%重量。在一些具體實施方式
中，納米載體中兩性物質的百分率范圍可以為0%至75%重量、0%至50%重量、0%至25%重量或0%至 10%重量。在一些具體實施方式
中，納米載體中兩性物質的百分率可以為大約重量、大約2%重量、大約3%重量、大約4%重量、大約5%重量、大約10%重量、大約15%重量、大約20%重量、大約25%重量或大約30%重量。任何本領域已知的兩性物質均適合用于制造根據本發(fā)明的納米載體。這樣的兩性物質包括但不限于磷酸甘油酯；磷脂酰膽堿；二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC) ；二油?；?脂酰乙醇胺(DOPE) ；二油?；趸一@(DOTMA) ；二油?；字Ｄ憠A；膽固醇；膽固醇酯；二?；视?；二?；视顽晁狨?；二磷脂酰甘油(DPPG)；十六烷醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，例如棕櫚酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸單甘油酯；脂肪酸二甘油酯；脂肪酸酰胺；三油酸山梨酯(Span 85 )甘膽酸鹽；單月桂酸山梨酯(Span 20);聚山梨酸酯20 (Tween 20);聚山梨酸酯60 (Tween 60)^山梨酸酯65 (Tween 65);聚山梨酸酯80 (Tween 80);聚山梨酸酯85 (Tween 85);聚氧乙烯單硬
脂酸酯；表面活性肽(Surfactin) ；poloxomer ；脂肪酸山梨酯，例如三油酸山梨酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂；聯(lián)十六烷醇磷酸酯；二棕櫚酰磷脂酰甘油；硬脂酸胺；十二烷基胺；十六烷基胺；棕櫚酸乙酯；蓖麻醇酸甘油酯；硬脂酸十六烷酯；肉豆蔻酸異丙酯；四丁酚醛；聚(乙二醇)5000磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面積性質的合成和 /或天然去污劑；脫氧膽酯；環(huán)化糊精；離液序列高的鹽；離子配對試劑；及其組合。兩性物質成分可以是不同兩性物質的混合物。這些兩性物質可以從天然來源提取和純化，或者從實驗室中合成制備。在一些特異性具體實施方式
中，兩性物質可從商業(yè)渠道獲得。本領域技術人員將認識到，這僅僅是具有表面活性的物質的示例性而非窮舉性列舉。任何兩性物質可用于生產用于本發(fā)明的納米載體。包含碳水化合物的疫苗納米載體在一些具體實施方式
中，納米載體可選地包含一個或多個碳水化合物。納米載體中的碳水化合物的百分率范圍可以為0%至99%重量、10%至99%重量、25%至99%重量、 50%至99%重量或75%至99%重量。在一些具體實施方式
中，納米載體中碳水化合物的百分率范圍可以為0%至75%重量、0%至50%重量、0%至25%重量或0%至10%重量。在一些具體實施方式
中，納米載體中碳水化合物的百分率可以為大約重量、大約2%重量、大約3%重量、大約4%重量、大約5%重量、大約10%重量、大約15%重量、大約20%重量、大約25%重量或大約30%重量。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以源自天然的碳水化合物。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是單糖，包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、纖維二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡萄糖胺、半乳糖胺和神經氨酸。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是二糖，包括但不限于乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖和纖維二糖。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是多糖，包括但不限于，普魯蘭糖(pullulan)、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥基纖維素(HC)、甲基纖維素(MC)、右旋糖苷、環(huán)右旋糖苷、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、卡拉膠(carageenan)、glycon、直鏈淀粉、殼聚糖、N, 0_羥甲基殼聚糖、海藻膠和海藻酸、淀粉、幾丁質、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素(pustulan)、肝素、透明質酸、卡德蘭(curdlan)和黃原膠。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是糖醇，包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇和乳糖醇。與疫苗納米載體結合的顆粒在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的疫苗納米載體可以包含一個或多個顆粒。在一些具體實施方式
中，一個或多個顆粒與疫苗納米載體結合。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含一個或多個與納米載體的外表面結合的顆粒。在一些具體實施方式
中，顆粒可以與疫苗納米載體通過共價鍵結合。在一些具體實施方式
中，顆粒可以與疫苗納米載體通過非共價相互作用結合(例如，電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用和/或其組合)。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含一個或多個包埋于納米載體中的顆粒。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體包含一個或多個嵌于納米載體表面中的顆粒(例如嵌于脂雙層中)。在一些具體實施方式中，與納米載體結合的顆粒允許可調的膜堅固性和可控的脂質體穩(wěn)定性。在一些具體實施方式
中，與疫苗納米載體結合的顆?？梢园酆衔锘|，如上所述。在一些具體實施方式
中，與疫苗納米載體結合的顆?？梢园蔷酆衔锍煞?例如金屬顆粒、量子點、陶顆粒、骨顆粒、病毒顆粒等)，如上所述。在一些具體實施方式
中，與疫苗納米載體結合的顆?？梢詭в胸撾姾?。在一些具體實施方式中，與疫苗納米載體結合的顆?？梢詭в姓姾伞Ｔ谝恍?b>具體實施方式
中，與疫苗納米載體結合的顆?？梢允请娭行缘?。在一些具體實施方式
中，顆粒在其表面具有一個或多個胺半體。胺半體可以是例如脂肪族胺半體。在一些具體實施方式
中，胺是伯、仲、叔或季胺。在一些具體實施方式
中，顆粒包含含有胺的聚合物。在一些具體實施方式
中，顆粒包含含有胺的脂。在一些具體實施方式中，顆粒包含在中性PH帶有正電荷的蛋白或肽。在一些具體實施方式
中，在其表面具有一個或多個胺半體的顆粒在中性PH帶有凈正電荷。在本發(fā)明的顆粒中還可以使用其它在中性PH提供正電荷的其它化學半體。ζ電位是顆粒的表面電位的度量。在一些具體實施方式
中，顆粒具有正的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有_50mV至+50mV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式中，顆粒具有_25mV至+25mV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有-IOmV至 +IOmV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有_5mV至+5mV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有OmV至+50mV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有OmV至+25mV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有OmV至+IOmV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有OmV至+5mV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式中，顆粒具有_50mV至OmV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有_25mV 至OmV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有-IOmV至OmV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有_5mV至OmV范圍的ζ電位。在一些具體實施方式
中，顆粒具有基本上中性的ζ電位(即大約OmV)。一般地，與疫苗納米載體結合的顆粒具有10微米(μπι)以下的最大尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，顆粒具有1000納米(nm)以下的最大尺寸。在一些具體實施方式中，顆粒具有 900nm、800nm、700nm、600nm、500nm、400nm、300nm、200nm 或 IOOnm 以下的最大尺寸。通常，顆粒具有300nm或以下的最大尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式中，顆粒具有最大為200nm或以下的尺寸(例如直徑)。在一些具體實施方式
中，顆粒具有最大為IOOnm或以下的尺寸(例如直徑)。在本發(fā)明的一些具體實施方式
中使用更小的納米載體，例如具有50nm或以下的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，顆粒具有25nm至 200nm范圍的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，顆粒具有Inm至IOOnm范圍的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，顆粒具有Inm至30nm范圍的最大尺寸。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約IOOOnm以下的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約750nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約500nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約400nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約 300nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約200nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約lOOnm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約75nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約50nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約 30nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約25nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約20nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約15nm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約lOnm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約5nm 的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒具有大約lnm的直徑。在一些具體實施方式
中，顆粒是微米顆粒(例如微球體)。一般地，“微米顆?！笔?指任何具有1000 ym以下直徑的顆粒。在一些具體實施方式
中，顆粒是納米顆粒(例如納米球體)。一般地，“納米顆?！笔侵溉魏尉哂衛(wèi)OOOnm以下直徑的顆粒。在一些具體實施方式中，顆粒是皮可米顆粒(例如皮可米球體)。一般地，“皮可米顆?！笔侵溉魏尉哂衛(wèi)nm以下直徑的顆粒。在一些具體實施方式
中，顆粒是脂質體。在一些具體實施方式
中，顆粒是膠團。根據本發(fā)明可以使用多種不同的顆粒。在一些具體實施方式
中，顆粒為球或橢圓球。在一些具體實施方式
中，顆粒為球或橢圓球。在一些具體實施方式
中，顆粒為平的或板狀的。在一些具體實施方式
中，顆粒為立方體或立方形。在一些具體實施方式
中，顆粒為橢圓或橢圓形。在一些具體實施方式
中，顆粒為圓柱體、圓錐體或棱錐?？梢允褂帽绢I域任何已知的方法制備顆粒(例如納米顆粒、微米顆粒)。例如，顆粒制劑可以通過以下方法制成例如納米沉淀、使用液體通道的流動聚焦、噴霧干燥、單一和雙乳劑溶劑揮發(fā)、溶劑提取、相分離、碾磨、微乳程序、微細加工、納米級加工、犧牲層、單一和復合凝聚，以及其它本領域普通技術人員熟知的方法。作為選擇，抑或是另外，用于單分散半導體、導電性的、磁性的、有機的和其它納米顆粒的水性和有機溶劑綜合體已經描述 (Pellegrino 等人，2005，Small, 1 48 ；Murray 等人，2000，Ann. Rev. Mat. Sci. ,30 545 ；和 Trindade等人，2001，Chem. Mat. ,13 3843 ；所有文獻通過引用并入本文)。在一些具體實施方式
中，可以通過納米沉淀方法或噴霧干燥制備顆粒?？梢愿淖?用于制備顆粒的條件以產生想要的尺寸或性質(例如疏水性、親水性、外部形狀、“粘度”、形狀等)的顆粒。所用的制備顆粒的方法和條件(例如，溶劑、溫度、濃度、空氣流速等)可以取決于要輸送的治療性試劑和/或聚合物基質的成分。制備用于輸送膠囊化試劑的微米顆粒的方法在文獻中有描述(參見，例如，Doubrow, Ed. , “ Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy, " CRCPress, Boca Raton, 1992 ；Mathiowitz 等人，1987, J. Control. Release, 5 13 ；Mathiowitz 等人，1987，Reactive Polymers, 6 275 ；和Mathiowitz 等人，1988，J. Appl. Polymer Sci. ,35 755 ；所有文獻通過引用并入本文)。如果根據以上任何方法制備的顆粒具有想要的范圍以外的尺寸范圍，則可使用例如篩子對顆粒進行區(qū)分。疫苗納米載體的生產可以使用本領域任何已知的方法制備納米載體。例如，顆粒納米載體制劑可以通過以下方法制成例如納米沉淀，使用液體通道的流動聚焦，噴霧干燥，單一和雙乳劑溶劑揮發(fā)，溶劑提取，相分離，碾磨，微乳程序，微細加工，納米級加工，犧牲層，單一和復合凝聚，以及其它本領域普通技術人員熟知的方法。作為選擇，抑或是另外，用于單分散半導體、導電性的、磁性的、有機的和其它納米顆粒的水性和有機溶劑綜合體已經描述(Pellegrino 等人，2005，Small, 1 48 ；Murray 等人，2000，Ann. Rev. Mat. Sci. ,30 545 ；禾口 Trindade 等 A, 2001, Chem. Mat. ,13 3843 ；所有文獻通過引用并入本文)。在一些具體實施方式
中，可以通過納米沉淀方法或噴霧干燥制備疫苗納米載體。可以改變用于制備納米載體的條件以產生想要的尺寸或性質(例如疏水性、親水性、外部形狀、“粘度”、形狀等)的顆粒。所用的制備納米載體的方法和條件(例如，溶劑、溫度、濃度、空氣流速等)可以取決于疫苗納米載體的成分和/或產生的疫苗納米載體的結構。制備用于輸送膠囊化試劑的微米顆粒的方法在文獻中有描述(參見，例如，Doubrow, Ed. , “ Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy, " CRCPress, Boca Raton, 1992 ；Mathiowitz 等人，1987, J. Control. Release, 5 13 ；Mathiowitz 等人，1987，Reactive Polymers, 6 275 ；和Mathiowitz 等人，1988，J. Appl. Polymer Sci. ,35 755 ；所有文獻通過引用并入本文)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一個免疫調節(jié)試劑，和可選地包含，脂膜、聚合物基質和/或非聚合物顆粒。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一個免疫調節(jié)試劑；脂膜、聚合物基質和/或非聚合物顆粒；和至少一個靶半體。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一個免疫調節(jié)試劑；脂膜、聚合物基質和/或非聚合物顆粒；至少一個靶半體；和至少一個免疫刺激試劑。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體包含至少一個免疫調節(jié)試劑；脂膜、聚合物基質和 /或非聚合物顆粒；至少一個靶半體；至少一個免疫刺激試劑；和至少一個納米顆粒。本發(fā)明的疫苗納米載體可以通過任何可獲得的方法制備。希望不對免疫調節(jié)試劑、靶半體和/或免疫刺激試劑的三維特性和構象有負影響地將免疫調節(jié)試劑、靶半體和/ 或免疫刺激試劑結合至疫苗納米載體。希望疫苗納米載體應該能夠在全身施用之后避免被單核吞噬細胞系統(tǒng)攝入從而其能夠到達身體的特異性細胞。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒不與疫苗納米載體共價結合。例如，疫苗納米載體可以包含聚合物基質，和免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒與本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物基質的表面結合，包埋于本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物基質內，和/或分布在本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物基質中。免疫調節(jié)試劑可以通過擴散、疫苗納米載體的降解和/或其組合而被釋放。在一些具體實施方式
中，聚合物通過骨架侵蝕而降解。在一些具體實施方式
中，聚合物通過表面侵蝕而降解。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒與疫苗納米載體共價結合。對于這樣的疫苗納米載體，通過破壞結合而實現(xiàn)免疫調節(jié)試劑釋放并輸送至靶位點。例如，如果免疫調節(jié)試劑與納米載體通過可切割連接子結合，則在切割該連接子之后免疫調節(jié)試劑被釋放并輸送至靶位點。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒不與納米載體共價結合。例如，疫苗納米載體可以包含聚合物，和免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒與本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物的表面結合，包埋于本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物內，由本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物環(huán)繞，和/或分布在本發(fā)明的疫苗納米載體的聚合物中。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒與疫苗納米載體物理結合。物理結合可以通過多種不同方式實現(xiàn)。物理結合可以是共價的或非共價的。疫苗納米載體、免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆?？梢员舜酥苯咏Y合，例如通過一個或多個共價鍵，或通過一個或多個連接子結合。在一個具體實施方式
中，連接子與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒形成一個或多個共價或非共價鍵，且與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒形成一個或多個共價或非共價鍵，從而將它們彼此連接起來。在一些具體實施方式
中，第一個連接子與疫苗納米載體形成共價或非共價鍵且第二個連接子與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒形成共價或非共價鍵。這兩個連接子彼此之間形成一個或多個共價或非共價鍵。根據本發(fā)明可使用任何合適的連接子。連接子可用于形成酰胺鍵、酯鍵、二硫鍵等。連接子可包含碳原子或雜原子(例如氮、氧、硫等)。通常，連接子為1至50個原子長、 1至40個原子長、1至25個原子長、1至20個原子長、1至15個原子長、1至10個原子長或1至10個原子長。連接子可以被各種取代基取代，包括但不限于氫原子、烷基、烯基、炔基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羥基、烷氧基、商素、芳基、雜環(huán)、芳香族雜環(huán)、氰基、酰胺、氨基甲酰、羧酸、酯、硫醚、烷基硫醚、硫醇和脲基基團。如本領域技術人員所認識到的，這些基團可以依次被取代。在一些具體實施方式
中，連接子是脂肪族或雜脂肪族連接子。在一些具體實施方式中，連接子是聚烷基連接子。在一些具體實施方式
中，連接子是聚醚連接子。在一些具體實施方式中，連接子是聚乙烯連接子。在一些特異性具體實施方式
中，連接子是聚乙二醇 (PEG)連接子。在一些具體實施方式
中，連接子是可切割的連接子。僅舉一些例子，可切割的連接子包括蛋白酶可切割的肽連接子、核酶敏感性核酸連接子、脂酶敏感性脂連接子、糖苷酶敏感性碳水化合物連接子、PH敏感性連接子、缺氧敏感性連接子、光切割連接子、熱不穩(wěn)定連接子、酶切割連接子(例如酯酶切割連接子)、超聲敏感連接子、x-射線切割連接子等。在一些具體實施方式
中，連接子不是可切割的連接子。多種方法中的任何方法可用于將連接子與疫苗納米載體結合。一般的策略包括被動吸附(例如通過靜電相互作用)、多價鰲合、特異性結合對成員之間的高親和性非共價結合、共價鍵形成等(Gao等人，2005，Curr. Op. Biotechnol.，16 :63 ；通過引用并入本文)。在一些具體實施方式
中，可以使用點擊化學(click chemistry)將連接子與顆粒結合(例如 Diels-Alder反應、Huigsen 1，3-雙極環(huán)加成、親核取代、羰基化學、環(huán)氧化作用、雙羥化作用等)。可以使用雙功能交聯(lián)試劑。這樣的試劑含有兩個反應基團，從而提供共價連接兩個靶基團的方式?；瘜W偶聯(lián)試劑中的反應基團通常屬于不同類的官能團，例如琥珀酰亞胺酯、馬來酰亞胺和吡啶二硫。示例性交聯(lián)試劑包括例如碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺-4-疊氮水楊酸(NHS-ASA)、二甲基庚二亞胺二鹽酸鹽(DMP)、二甲基辛二亞胺(DMS)、3，3，- 二硫雙丙亞胺(DTBP)、N-琥珀酰亞胺3-[2_吡啶二硫]-丙氨(SPDP)、琥珀酰亞胺a -甲基丁酸酯、生物素氨基己酰-6-氨基-己酸N-羥基-琥珀酰亞胺酯(SMCC)、琥珀酰亞胺_[ (N-馬來酰亞胺丙氨)_十二乙二醇]酯(NHS-PE012)等。例如，碳二亞胺介導的酰胺的形成和活性馬來酰亞胺酯介導的胺和巰基偶聯(lián)是廣泛使用的方法。
92
在一些具體實施方式
中，可以通過將一個分子上的胺基團偶聯(lián)至第二個分子上的硫醇基團(有時通過兩步或三步反應序列)而形成疫苗納米載體。含有硫醇的分子可以通過使用雜雙功能交聯(lián)試劑(例如同時含有琥珀酰亞胺酯和馬來酰亞胺、吡啶二硫或碘乙酰胺的試劑)與含有胺的分子反應?？梢允褂冒?羧酸和硫醇-羧酸交聯(lián)、巰基馬來酰亞胺偶聯(lián)化學(例如，馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基馬來酰亞胺酯(MBS)方法)等。多肽可以分別通過賴氨酸或半胱氨酸側鏈中的胺或硫醇基團，或通過N-末端氨基基團方便地偶聯(lián) 至顆粒。核酸例如RNA可以通過末端氨基基團合成。可以使用多種偶聯(lián)試劑(例如，琥珀酰亞胺3_(2_吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)和硫代琥珀酰亞胺-4_(N-馬來酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸鹽(硫-SMCC))結合疫苗納米載體的各種成分。疫苗納米載體可以使用表面具有的官能團(例如氨基或羧基基團)制備以促進與生物分子的結合?？梢允褂梅枪矁r特異性結合相互作用。例如，顆粒或生物分子可以進行生物素官能團化，而另一個則進行鏈霉菌抗生物素官能團化。這兩個半體彼此非共價地特異性結合且具有高度親和性，從而將顆粒和生物分子結合起來?？梢灶愃频厥褂闷渌禺愋越Y合對。或者，組氨酸標記的生物分子可以與偶聯(lián)至鎳-氮川三乙酸(Ni-NTA)的顆粒結合。任何生物分子與顆粒、靶半體和/或治療性試劑結合。間隔區(qū)(spacer)可以是例如短肽鏈(例如長度為1至10個氨基酸，例如長度為1、2、3、4或5個氨基酸)核酸、烷基鏈等。對于其它的關于結合和/或偶聯(lián)方法和交聯(lián)劑的一般性信息，可參見雜志 Bioconjugate Chemistry, American Chemical Society, Columbus OH, P0 Box 3337， Columbus，0H，43210 出片反；〃 Cross-Linking, “ Pierce Chemical Technical Library, pJ 在Pierce網站獲得，最初在1994-95 Pierce Catalog中出版，及其中的參考文獻；WongSS， Chemistry of Protein Conjugation and Cross—linking， CRC Press Publishers， BocaRaton，1991 ；禾口 Hermanson，G. T.，Bioconjugate Techniques，Academic Press，Inc.， SanDiego，1996。作為選擇，抑或是另外，疫苗納米載體可以通過非共價相互作用直接或間接與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。非共價相互作用的例子包括但不限于電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、偶極_偶極相互作用和/或其組合。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體可以通過電荷相互作用與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。例如，疫苗納米載體可以具有陽離子表面或與陽離子聚合物(例如聚(賴氨酸)或聚(乙烯亞胺))反應以提供陽離子表面。然后疫苗納米載體表面可以通過電荷相互作用與帶負電的免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/ 或納米顆粒結合。通常免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒的一端與帶負電的聚合物(例如聚(羧酸))或另外的寡核苷酸序列(其可以與陽離子聚合物表面相互作用而不破壞免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒的功能)結合。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體可以通過親和相互作用與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。例如，生物素可以與疫苗納米載體的表面結合而鏈霉菌抗生物素可以與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合；或者相反，生物素可以與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合而鏈霉菌抗生物素可以與疫苗納米載體的表面結合。生物素基團和鏈霉菌抗生物素可以通過連接子 (例如亞烴基連接子或聚醚連接子)與疫苗納米載體結合或與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。生物素基團和鏈霉菌抗生物素通過親和相互作用結合，從而將疫苗納米載體與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體可以通過金屬配合與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。例如，聚組氨酸可以與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒的一端結合，和氮川三乙酸可以與疫苗納米載體的表面結合。金屬例如附2+將鰲合聚組氨酸和氮川三乙酸，從而將免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和 /或納米顆粒與疫苗納米載體結合。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體可以通過物理吸附與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。例如，疏水性尾巴(例如聚甲基丙烯酸酯或具有至少約10個碳的烷基基團)可以與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒的一端結合。疏水性尾巴將吸附至疏水性疫苗納米載體的表面，從而將免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒與疫苗納米載體結合。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體可以通過主客體相互作用與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。例如，大環(huán)主體(例如瓜環(huán)或環(huán)狀糊精)可以與疫苗納米載體的表面結合，和客體基團(例如烷基基團、聚乙二醇或二氨基烷基基團) 可以與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合；或者相反，主體基團可以與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合，和客體基團可以與疫苗納米載體的表面結合。在一些具體實施方式
中，主體和/或客體分子可以通過連接子(例如亞烴基連接子或聚醚連接子)與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆?；蛞?苗納米載體結合。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體可以通過氫鍵相互作用與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒結合。例如，具有特定序列的寡核苷酸可以與疫苗納米載體的表面結合，和基本上互補的序列可以與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/ 或納米顆粒的一端或兩端結合(不破壞免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒的功能)。然后免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒通過與疫苗納米載體結合的寡核苷酸的互補性堿基配對而與疫苗納米載體結合。如果一個寡核苷酸上約80% 的核酸堿基通過寡核苷酸堿基配對系統(tǒng)(例如Watson-Crick堿基配對、反向Watson-Crick 堿基配對、Hoogsten堿基配對等)與第二個寡核苷酸上的堿基形成氫鍵，則兩個寡核苷酸是基本上互補的。通常，希望與疫苗納米載體結合的寡核苷酸序列和與免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒通過與疫苗納米載體結合的互補性寡核苷酸之間形成至少約6個互補性堿基對。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體通過自組裝形成。對于疫苗納米載體的自組裝的詳細的例子，參見實施例1和2。在一些具體實施方式
中，制備小脂質體 (10nm-1000nm)并應用小脂質體將一個或多個免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞(圖 3)。一般地，脂質體是人工構建的圓球體脂泡，其數十至數千納米的可控的直徑意味著單獨的脂質體包含體積為仄升(10_21L)至飛升(10_15L)的生物可兼容腔室，這些腔室可用于包埋并儲存各種貨物，例如蛋白、酶、DNA和藥物分子。脂質體可以包含具有兩性性質的脂雙層雙層的內表面和外表面均為親水性的，雙層的腔是疏水性的。親脂性分子可以自發(fā)嵌入脂質體膜并將其親水性結構域保留在外面，由于膜的雙功能性的優(yōu)勢，親水性分子可以與脂質體的外表面化學地偶聯(lián)。在一些具體實施方式
中，脂與親脂性免疫調節(jié)試劑混合，然后形成固體表面上的細膜。親水性免疫調節(jié)試劑溶解于水性溶液中，然后將此水性溶液加入到脂膜中，在振蕩下將脂水解。具有整合到雙層壁中的親脂性免疫調節(jié)試劑和位于脂質體腔內的親水性免疫調節(jié)試劑的脂質體自發(fā)組裝。在一些具體實施方式
中，用于脂質體的脂可以是下列物質的一個或多個，但不限于此磷脂酰膽堿、脂A、膽固醇、長醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經酰胺、糖基神經酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑可以與脂質體的表面偶聯(lián)。在一些具體實施方式中，脂質體內攜帶相同或不同的免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，脂質體表面膜可以被能夠選擇性地將免疫調節(jié)試劑輸送至特異性抗原表達細胞的靶半體修飾。在一些具體實施方式
中，納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體用于將一個或多個免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞(圖4)。通過允許小的帶電的納米顆粒(lnm-30nm)吸附至脂質體表面，脂質體_納米顆粒復合體不但具有上述僅僅脂質體的性質(圖3)，還具有可調的膜堅固性和可控的脂質體穩(wěn)定性。當小的帶電的納米顆粒到達帶有相反電荷或無凈電荷的脂質體表面時，納米顆粒與膜之間的靜電或電荷-偶極相互作用吸引納米顆粒停留在膜表面，被脂膜部分包裹住。這誘導脂質體的局部的膜的彎曲和小球表面的收縮，二者均調節(jié)膜的堅固性。這個方面對于使用脂質體進行疫苗輸送(以模擬病毒，病毒的堅固性取決于病毒膜內其它生物成分的組成)是至關重要的。此外，被吸附的納米顆粒形成帶電的殼，其保護脂質體抵抗融合，從而增強脂質體穩(wěn)定性。在一些具體實施方式
中，小的納米顆粒與脂質體在輕微振蕩下混合，和納米顆粒自發(fā)地粘附至脂質體表面。在特異的具體實施方式
中，小的納米顆?？梢允?，但不限于，聚合物納米顆粒、金屬納米顆粒、無機或有機納米顆粒、其雜合物，和/或其組合。在一些具體實施方式
中，脂質體_聚合物納米載體用于將一個或多個免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞(圖5)。親水性免疫調節(jié)試劑不是保持脂質體內凹，相反，免疫調節(jié)試劑可被包埋。圖3顯示了裝載了雙嵌段共聚物納米顆粒的脂質體，以形成脂質體包被的聚合物納米載體，其同時具有脂質體和聚合物納米顆粒的性質，而排除了一些它們的局限性。在一些具體實施方式
中，脂質體殼可用于攜帶親脂性免疫調節(jié)試劑或偶聯(lián)親水性免疫調節(jié)試劑，和聚合物核心可用于輸送疏水性免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，預制的聚合物納米顆粒(40nm-1000am)與小的脂質體 (20nm-100nm)在輕微振蕩下混合，以誘導脂質體融合至聚合物納米顆粒表面。在特異性具體實施方式
中，雙嵌段共聚物納米顆粒可以是，但不限于，一個或多個以下物質聚(D， L-乳酸)_嵌段-聚(乙二醇)(PLA-b-PEG)、聚(D，L-羥基乙酸)-嵌段-聚(乙二醇) (PLG-b-PEG)、聚(D，L乳酸羥基乙酸)共聚物-嵌段-聚(乙二醇)(PLGA-b-PEG)和聚 (￡ -己內酯)-嵌段-聚(乙二醇)(PCL-b-PEG)。在一些具體實施方式
中，納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體-聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖6)。通過小的納米顆粒(InnHBOnm)吸附至脂質體-聚合物納米載體表面，納米載體不但具有上述納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體(圖4)和上述脂質體-聚合物納米顆粒的性質(圖5)，還具有可調的膜堅固性和可控的脂質體穩(wěn)定性。在一些具體實施方式
中，含有反膠團的脂質體_聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖7)。由于上述脂質體_聚合物納米載體(圖5和6)限制于在聚合物納米顆粒內攜帶疏水性免疫調節(jié)試劑，所以在這里將小的反膠團(lnm-20nm)制成包埋親水性免疫調節(jié)試劑，然后與雙嵌段共聚物混合以制成脂質體的聚合物核心。
在一些具體實施方式
中，首先將待包埋的親水性免疫調節(jié)試劑通過在揮發(fā)性的可與水混溶的有機溶劑中與天然來源的且非毒性的兩性物質混合而整合入反膠團。在一些具體實施方式中，兩性物質可以是，但不限于，一個或多個以下物質磷脂酰膽堿、脂A、膽固醇、長醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經酰胺、糖基神經酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具體實施方式中，揮發(fā)性的可與水混溶的有機溶劑可以是，但不限于四氫呋喃、丙酮、乙腈或二甲基甲酰胺。在一些具體實施方式
中，在形成反膠團之后向該混合物中加入生物可降解聚合物。將得到的生物可降解聚合物_反膠團混合物與不可溶于聚合物的親水性非溶劑混合，通過溶劑快速擴散至非溶劑中以及有機溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。在一些具體實施方式
中，不可溶于聚合物的親水性非溶劑可以是，但不限于，一個或多個以下物質水、乙醇、甲醇及其混合物。含有反膠團的聚合物納米顆粒與脂分子混合以形成上述脂質體_聚合物復合體結構(圖5)。在一些具體實施方式
中，含有反膠團的納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體_聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖8)。通過將小的納米顆粒(InnHBOnm)吸附至脂質體-聚合物納米載體表面，納米載體不但具有上述納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體(圖4)和上述含有反膠團的脂質體_聚合物納米顆粒的性質(圖7)，還具有可調的膜堅固性和可控的脂質體穩(wěn)定性。在一些具體實施方式
中，脂單層穩(wěn)定化的聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖9)。與上述脂質體聚合物納米載體(圖5-8)相比較，這個系統(tǒng)具有試劑和制備意義上的簡單性的性質。在一些具體實施方式
中，疏水性均聚物可以形成聚合物核心，而不是圖5-8中所用的雙嵌段共聚物(其同時具有疏水性和親水性片段)。脂穩(wěn)定化的聚合物納米載體可以在一個單一步驟中制成，而不是先分別制備聚合物納米顆粒和脂質體然后再將其混合在一起。在一些具體實施方式
中，親水性免疫調節(jié)分子首先與脂的頭部基團化學偶聯(lián)。偶聯(lián)物在含有一種或多種與水混溶的溶劑的水性溶液中以一定比例與未偶聯(lián)的脂分子混合。在一些具體實施方式
中，兩性物質可以是，但不限于，一個或多個以下物質磷脂酰膽堿、月旨 A、膽固醇、長醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、糖基神經酰胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具體實施方式中，與水混溶的溶劑可以是但不限于丙酮、乙醇、甲醇和異丙醇。生物可降解聚合物材料與疏水性免疫調節(jié)試劑混合以包埋于與水混溶或部分與水混溶的有機溶劑中。在特異性具體實施方式
中，生物可降解聚合物可以是，但不限于，一個或多個以下物質聚 (D，L_乳酸)、聚(D，L_羥基乙酸)、聚(ε-己內酯)，或其以各種摩爾比例的共聚物。在一些具體實施方式
中，與水混溶的有機溶劑可以是但不限于丙酮、乙醇、甲醇或異丙醇。在一些具體實施方式
中，部分與水混溶的有機溶劑可以是但不限于乙腈、四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、乙酸異丙酯或二甲基甲酰胺。將得到的聚合物溶液加入到偶聯(lián)的脂和未偶聯(lián)的脂的水性溶液中，通過有機溶劑快速擴散至水中以及有機溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。在一些具體實施方式
中，包含反膠團的脂單層穩(wěn)定化的聚合物納米顆粒用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖10)。由于上述脂質體穩(wěn)定化的聚合物納米載體(圖9)限制于攜帶疏水性免疫調節(jié)試劑，所以在這里將小的反膠團(lnm-20nm)制成包埋親水性免疫調節(jié)試劑，然后與生物可降解聚合物混合以制成聚合物納米載體核心。應該理解，可以以任何合適的方式制備本發(fā)明的組合物，和本發(fā)明不以任何方式限制于使用本文上述方法產生的組合物。合適方法的選擇可能需要注意到所結合的特定半體的性質。如果需要，可以使用各種方法將結合了免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/ 或納米顆粒的疫苗納米載體與未結合免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒的疫苗納米載體分離開來，或與結合了不同數目的免疫調節(jié)試劑、靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒的疫苗納米載體分離開來。例如，可以使用尺寸排除色譜、瓊脂糖凝膠色譜或過濾以分離結合了不同數目物質的疫苗納米載體群體和/或將疫苗納米載體與其它物質分離開來。一些方法包括尺寸排除或陰離子交換色譜。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體在無菌條件下制備。這可以保證產生的疫苗是無菌的和無傳染性的，從而與活體疫苗相比改善了安全性。這提供了有價值的安全度量，特別是當接受疫苗的個體具有免疫缺陷、患有感染和/或易于患上感染的時候。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體可以是凍干的并儲存在懸浮液中或作為凍干粉末，這取決于為了延長時間而不損失活性的制備策略。應用本文描述的組合物和方法可用于誘導、增強、抑制、引導或重引導免疫應答。本文描述的組合物和方法可用于預防和/或治療任何癌癥、傳染性疾病、代謝性疾病、退行性疾病、自身免疫疾病、過敏性疾病、炎性疾病、免疫性疾病或其它失調和/或病癥。本文描述的組合物和方法還可用于治療上癮癥，例如對任意本文描述的令人上癮的物質上癮。本文描述的組合物和方法還可用于預防和/或治療由暴露于毒素、有害物質、環(huán)境毒素或其它有害試劑而引起的病癥。個體包括但不限于人和/或其它靈長類；哺乳動物(包括商業(yè)有關的哺乳動物，例如牛、豬、馬、綿羊、貓和/或狗)；和/或鳥(包括商業(yè)有關的鳥，例如雞、鴨、鵝和/或火雞)。在一些具體實施方式
中，根據本發(fā)明的疫苗納米載體可用于疾病、失調和/或病癥的一個或多個征狀或特征的治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體可用于微生物感染(例如細菌感染、真菌感染、病毒感染、寄生蟲感染等)的一個或多個征狀或特征的治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率。在本發(fā)明的一個方面，提供了預防和/或治療疾病、失調或病癥(例如微生物感染)的方法。在一些具體實施方式
中，疾病、失調或病癥的預防和/或治療包括向有需要的個體施用治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體，以足夠達到所需要效果的量和時間。在本發(fā)明的一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體的“治療上有效量”是指對微生物感染的一個或多個征狀或特征能有效地治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率的量。在一些具體實施方式
中，“治療上有效量”是有效調節(jié)免疫系統(tǒng)的量。這樣的量可以是有免疫原性的量，即足夠在個體中引發(fā)可檢測的免疫應答(例如可檢測的抗體應答和/或可檢測的T細胞應答)的量。本發(fā)明的預防和/或治療方案包括向健康個體(例如，未表現(xiàn)出任何微生物感染征狀和/或未被診斷具有微生物感染的個體；未暴露于毒素的個體，未攝取被濫用物質或令人上癮物質的個體，等等)施用治療上有效量的一個或多個本發(fā)明的疫苗納米載體。例如，可以在發(fā)生微生物感染之前，暴露于毒素、被濫用物質或令人上癮物質等之前，和/或發(fā)生其相關征狀之前，使用本發(fā)明的疫苗納米載體接種健康個體；可以在征狀和/或暴露/ 攝取發(fā)生的實質上同時(例如，48小時內、24小時內或12小時內)處理風險個體(例如，暴露于遭受微生物感染個體的病人，到微生物/毒素流行的地方旅行的人；等等)。當然已知患有微生物感染、已經暴露于毒素或攝入被濫用物質或令人上癮物質的個體可以在任何時間接受治療。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的預防和/或治療方法包括向個體施用治療上有效量的一個或多個本發(fā)明的疫苗納米載體，使得T細胞和B細胞中的免疫應答都被刺激。在一些具體實施方式
中，通過將所選的免疫調節(jié)試劑與針對不同APC的靶半體和免疫刺激試劑組合，可以使免疫應答(例如效應物應答)偏向優(yōu)先引發(fā)針對給定跡象的最想要的類型的免疫應答，例如體液免疫、1型T細胞應答、2型T細胞應答、細胞毒T細胞，反應和/或這些應答的組合。因此，相同的平臺可以用于大范圍的不同的臨床應用，包括針對病原體主體的預防性疫苗以及對已經存在的疾病(例如感染、過敏癥、自身免疫疾病和/或癌癥)的免疫治療。癌癥包括但不限于膽管癌、腦癌、乳腺癌、宮頸癌、絨毛膜癌、結腸癌、子宮內膜癌、食管癌、胃癌、上皮腫瘤、淋巴瘤、肝癌、肺癌(例如，小細胞和非小細胞型)、黑素瘤、神經母細胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直腸癌、肉瘤、皮膚癌、睪丸癌、甲狀腺癌和腎癌，以及其他癌與肉瘤。自身免疫疾病包括但不限于，類風濕性關節(jié)炎、風濕熱、潰瘍性結腸炎、腹腔疾病、Crohn病、炎癥性腸病、胰島素依賴型糖尿病、糖尿病、少年糖尿病、自發(fā)免疫性糖尿病、胃炎、自身免疫性萎縮性胃炎、自身免疫性肝炎、甲狀腺炎、橋本(Hashimoto)甲狀腺炎、自身免疫性甲狀腺炎、胰島炎、卵巢炎、睪丸炎、葡萄膜炎、晶狀體源性葡萄膜炎、多發(fā) 性硬化、重癥肌無力、原生粘液水腫、甲狀腺毒癥、惡性貧血、自身免疫性溶血性毒液貧血、 Addison病、硬皮病、Goodpasture綜合征、Guillain-Barre綜合征、Graves病、血管球性腎炎、牛皮癬、尋常性天皰瘡、類天皰瘡、交感性眼炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、idiopathic feucopenia、Siogren綜合征、Wegener肉芽腫病、多/皮肌炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。過敏性疾病包括但不限于，濕疹、過敏性鼻炎(rhinitis)或鼻炎(coryza)、干草發(fā)燒、結膜炎、哮喘、蕁麻疹(麻疹)、局部過敏反應、食物過敏、過敏反應、特應性皮炎、超敏反應和與其它過敏癥狀。過敏反應可能是對任何變應原(包括但不限于，常見的塵土、花粉、植物、動物皮屑、藥品、食物過敏原、昆蟲毒液，病毒或細菌)的免疫反應的結果。
炎性疾病和/或失調包括，例如，心血管疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管擴張、慢性膽囊炎、肺結核、橋本(Hashimoto)甲狀腺炎、膿毒癥、結節(jié)病、硅肺和其它肺塵癥，以及傷口中移植的外源體，但不限于此。如本文所用的術語“膿毒癥”是指公認的與主體對微生物侵入的全身性炎性反應相關的臨床綜合征。本文所用的術語“膿毒癥”是指通常表現(xiàn)為發(fā)燒或體溫過低、心動過速和呼吸急促的病癥，并且在幾種情況下可發(fā)展為低血壓、器官功能障礙，甚至死亡。藥物組合物本發(fā)明提供了新型組合物，其包含治療上有效量的一個或多個疫苗納米載體和一個或多個藥學上可接受的賦形劑。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含本發(fā)明的疫苗納米載體和/或其中的如本文描述的任何組合物。這樣的藥物組合物可選地可以包含一個或多個另外的治療活性物質。根據一些具體實施方式
，提供了向有需要的個體施用包含本發(fā)明的組合物的藥物組合物的方法。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的組合物施用于人。為了本發(fā)明的目的，詞語“活性成分”一般是指本發(fā)明的疫苗納米載體，其包含至少一個免疫調節(jié)試劑和可選地包含一個或多個靶半體、免疫刺激試劑和/或納米顆粒。雖然本文提供的藥物組合物的描述主要是針對適合施用于人的藥物組合物，但是技術人員應該理解這樣的組合物一般適合施用于任何種類的動物。對適合施用于人的藥物組合物的改變(以使其適合施用于各種動物)是熟知的，和普通技術獸醫(yī)藥理人員能夠僅僅通過常規(guī)的實驗(如果有的話)來設計和/或進行這樣的改變?？紤]到本發(fā)明的藥物組合物所施用的個體包括但不限于人和/或其它靈長類；動物，包括商業(yè)相關的動物例如牛、豬、馬、綿羊、貓和/或狗；和/或鳥，包括商業(yè)相關的鳥例如雞、鴨、鵝和/或火雞。本文描述的藥物組合物制劑可以通過藥學領域已知的或從今以后發(fā)展的任何方法制備。一般地，這樣的制備方法包括將活性成分與一個或多個賦形劑和/或一個或多個其它輔佐性成分結合的步驟，然后，如果必要和/或需要，將產物塑形和/或包裝成想要的單劑或多劑單位。本發(fā)明的藥物組合物可以以單一單位劑量和/或多個單一單位劑量來制備、包裝和/或散裝銷售。如本文所用的“單位劑量”是包含預先確定數量的活性成分的藥物組合物的不連續(xù)數量?；钚猿煞值牧恳话愕扔谙騻€體施用的活性成分的劑量和/或這樣的劑量的方便的份數，例如，如，這樣的劑量的一半或三分之一。本發(fā)明的藥物組合物中的活性成分的相對量、藥學上可接受的賦形劑和/或任何其它成分的相對數量將根據治療個體的身份、大小和/或條件進行改變，進一步根據組合物的施用途徑進行改變。舉例來說，組合物可以包含0. 至100% (w/w)的活性成分。本發(fā)明的藥物制劑可以包含另外的藥學上可接受的賦形劑，本文所用的賦形劑包括任何和所有的溶劑、分散介質、稀釋劑或其它液體載體、分散或懸浮輔助、表面活性劑、等張試劑、增厚或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤滑劑等，按照特定劑型需要。Remington’ s The Science and Practice of Pharmacy,21st Edition, A. R. Gennaro, (Lippincott, Williams & Wilkins，Baltimore，MD，2006 ；通過引用并入本文)公開了各種用于配制藥物組合物的賦形劑和已知的用于制備藥物組合物的技術。任何常規(guī)的賦形劑，除非其與物質或其衍生物不兼容(例如產生任何不想要的生物效應或者以有害的方式與藥物組合物中的其它任何成分相互作用)，否則其使用被考慮在本發(fā)明的范圍內。在一些具體實施方式
中，藥學上可接受的賦形劑是至少95 %、96 %、97 %、98 %、 99%或100%純的。在一些具體實施方式
中，賦形劑被批準用于人類和獸醫(yī)用途。在一些具體實施方式中，賦形劑被美國食品與藥品管理局批準。在一些具體實施方式
中，賦形劑是藥物級的。在一些具體實施方式
中，賦形劑符合美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國藥典和 /或國際藥典的標準。用于制備藥物組合物的藥學上可接受的賦形劑包括但不限于，惰性稀釋劑、分散和/或?；瘎?、表面活性劑和/或乳化劑、崩解劑、粘合劑、防腐劑、緩沖劑、潤滑劑和/或油。這樣的賦形劑可以可選地包括在本發(fā)明的制劑中。根據配制者的判斷，組合物中可以存在賦形劑例如可可油和栓劑蠟、著色劑、包被劑、甜味劑、香料和香味劑。示例性的稀釋劑包括但不限于碳酸鈣、碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸二鈣、硫酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈉乳糖、蔗糖、纖維素、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、山梨醇、肌醇、氯化鈉、干淀粉、玉米淀粉、粉狀糖等，及其組合。示例性的?；?或分散劑包括但不限于馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、羥基乙酸淀粉鈉、粘土、褐藻酸、瓜爾膠、柑橘果肉、瓊脂、膨潤土、纖維素和木制品、天然海綿、陽離子交換樹脂、碳酸鈣、硅酸鹽、碳酸鈉、交聯(lián)聚(乙烯吡咯烷酮)(crospovidone)、羧甲基淀粉鈉(羥基乙酸淀粉鈉)、羧甲基纖維素、交羧甲基纖維素鈉(croscarmellose)、甲基纖維素、預制成膠的淀粉(淀粉1500)、微晶淀粉、不溶于水的淀粉、羧甲基纖維素鈣、鎂鋁硅酸鹽(Veegum)、十二烷基硫酸鈉、季銨鹽類化合物等，及其組合。示例性表面活性劑和/或乳化劑包括但不限于，天然乳化劑(例如阿拉伯樹膠、瓊脂、褐藻酸、褐藻酸鈉、黃芪膠、chondrux、膽固醇、黃原膠、果膠、明膠、蛋黃、酪蛋白、羊毛脂、膽固醇、蠟和卵磷脂)，膠粘土(例如斑脫土 [鋁硅酸鹽]和Veegum[鎂鋁硅酸鹽])，長鏈氨基酸衍生物，高分子量的醇(例如硬脂醇、十六醇、油醇、單硬脂酸三醋精、乙二醇雙硬脂酸酯、單硬脂酸甘油酯、和丙二醇單硬脂酸酯、聚乙烯醇)，卡波姆(carbomer)(例如羧基聚亞甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧基乙烯聚合物)，角叉菜，纖維素衍生物(例如羧甲基纖維素鈉、粉狀纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素)，山梨脂肪酸酯(例如，聚氧乙烯單月桂酸山梨酯[TWeen 20]、聚氧乙烯山梨聚糖 [Tween 60]、聚氧乙烯單油酸山梨酯[TWeen 80]、單棕櫚酸山梨酯[Span 40]、單硬脂酸山梨酯[Span 60]、三硬脂酸山梨酯[Sjaii 65]、單油酸甘油酯、單油酸山梨酯[Span 80]),聚氧乙烯酯(例如，聚氧乙烯單硬脂酸酯[Myrj 45、聚氧乙烯氫化調味油、聚乙氧基化調味油、聚甲醛硬脂酸酯和Solutol)，蔗糖脂肪酸酯，聚乙二醇脂肪酸酯(例如Cremophor )，聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯月桂酸酯[Brij 30])，聚(乙烯-吡咯烷酮)，二乙二醇單月桂酸酯，三乙醇胺油酸酯，油酸鈉，油酸鉀，油酸乙酯，油酸，月桂酸乙酯，硫酸月桂酸鈉，Pluronic F 68， Poloxamer 188，西曲溴銨，氯化十六烷基吡啶，芐烷氯銨，多庫酯鈉等，和/或其組合。示例性的粘合劑包括但不限于，淀粉(例如玉米淀粉和淀粉糊)；明膠；糖(如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖漿、乳糖、乳糖醇、甘露醇)；天然的和合成的樹膠(例如阿拉伯樹膠、褐藻酸鈉、愛爾蘭苔蘚提取物、panwar樹膠、ghatti樹膠、isapol殼的粘液、羧甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、微晶纖
100維素、醋酸纖維素、聚(乙烯吡咯烷酮)、鎂鋁硅酸鹽(Veegum)和落葉松阿拉伯半乳聚糖)；褐藻酸鹽；聚乙烯氧化物；聚乙二醇；無機鈣鹽；硅酸；聚甲基丙烯酸酯；蠟；水；醇；等；及其組合。示例性的防腐劑包括但不限于抗氧化劑、螯合劑、抗微生物防腐劑、抗真菌防腐劑、醇防腐劑、酸性防腐劑，以及其它防腐劑。示例性的抗氧化劑包括但不限于，α生育酚、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯、單硫甘油、偏亞硫酸氫鉀、丙酸、五倍子酸丙酯、抗壞血酸鈉、重亞硫酸鈉、偏亞硫酸氫鈉和硫酸鈉。示例性的螯合劑包括乙二胺四乙酸(EDTA)、單水合檸檬酸、乙二胺四乙基二鈉、乙二胺四乙基二鉀、乙二胺四乙酸、富馬酸、蘋果酸、磷酸、乙二胺四乙基鈉、酒石酸和乙二胺四乙基三鈉。示例性的抗微生物防腐劑包括但不限于，芐烷氯銨、芐索氯銨、苯甲醇、溴硝醇、溴化十六烷基三甲銨、氯化十六烷基吡啶、雙氯苯雙胍己烷、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲苯酚、甲酚、乙基醇、甘油、 ?？颂驵ぁ⑦溥蜻?、苯酚、苯氧基乙醇、苯乙基醇、苯汞基硝酸鹽、丙烯乙二醇和硫柳汞 (thimerosal)。示例性的抗真菌防腐劑包括但不限于，尼泊金丁酯、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、安息香酸、羥基安息香酸、安息香鉀、山梨酸鉀、安息香酸鈉、丙酸鈉和山梨酸。示例性的醇防腐劑包括但不限于，乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚化合物、雙酚、氯丁醇、羥基安息香酸鹽和苯基乙基醇。示例性的酸性防腐劑包括但不限于，維生素A、維生素C、維生素 Ε、β-胡蘿卜素、檸檬酸、乙酸、脫氫乙酸、抗壞血酸、山梨酸和植酸。其它的防腐劑包括但不限于，生育酚、生育酚乙酸酯、deteroxime mesylate、溴化十六烷基三甲銨、丁基羥基茴香醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)、乙二胺、硫酸月桂酸鈉(SLS)、十二烷基醚硫酸鈉(SLES)、重亞硫酸鈉、偏亞硫酸氫鈉、硫酸鉀、偏亞硫酸氫鉀、Glydant Plus 、Phenonip 、尼泊金甲酯、 Germall 115、Germaben II、Neolone 、Kathon 和Euxyl 。在一些具體實施方式
中，防腐劑是抗氧化劑。在其它具體實施方式
中，防腐劑是螯合劑。示例性緩沖劑包括但不限于，檸檬酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、氯化銨、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣、葡庚糖酸鈣、葡萄糖酸鈣、D-葡萄糖酸、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、丙酮酸、乙酰丙酸鈣、戊酸、磷酸氫鈣、磷酸、磷酸鈣、磷酸氫氧化鈣、乙酸鉀、氯化鉀、葡萄糖酸鉀、鉀混合物、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鉀混合物、醋酸鈉、重碳酸鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉混合物、氨基丁三醇、氫氧化鎂、氫氧化鋁、褐藻酸、無熱原的水、等滲鹽、Ringer溶液、乙基醇等，及其組合。示例性的潤滑劑包括但不限于，硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、硅石、云母、麥芽、甘油山崳酸酯、氫化植物油、聚乙二醇、安息香酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉、亮氨酸、硫酸月桂酸鎂、硫酸月桂酸鈉等，及其組合。示例性油包括但不限于，杏仁(almond)、杏仁(apricot kernel)、鱷梨、巴西棕櫚(babassu)、香檸檬、黑加侖種子、琉璃苣、刺檜、甘菊、油菜、香菜、巴西棕櫚(carnauba)、蓖麻、肉桂、可可脂、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉花種子、鴯鹋、桉樹、夜來香、魚類、亞麻籽、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子堅果、牛膝草、肉豆蔻酸異丙酯、荷荷巴油(jojoba)、夏威夷胡桃、雜薰衣草油(Iavandin)、薰衣草、檸檬、山蒼子(litsea cubeba)、澳洲堅果(macademia nut)、錦葵、芒果種子、繡線菊種子(meadowfoam seed)、水貂、肉豆蔻、橄欖、橙、深海鱸魚 (orangeroughy)、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟種子、南瓜種子、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、sasquana、香薄荷(savoury)、沙棘(sea buckthorn)、芝麻、牛油樹脂、硅樹脂、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿(tsubaki)、香根草、胡桃和小麥胚芽油。示例性的油包括但不限于，硬脂酸丁酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯、環(huán)甲硅油、癸二酸二乙酯、二甲硅油360、豆蔻酸異丙酯、礦物油、辛基十二醇、油醇、硅樹脂油，及其組合。用于口服和非腸道施用的液體劑型包括但不限于，藥學上可接受的乳劑、微乳劑、溶液、懸浮液、糖漿和西也劑。除了活性成分之外，液體劑型可以包含本領域常用的惰性稀釋劑，例如，水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，例如乙基醇、異丙基醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲基醇、安息香酸苯甲酯、丙烯甘油、1，3_ 丁烯甘油、二甲基甲酰胺、油(特別是，棉花籽、落花生、玉米、胚芽、橄欖、調味油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃基醇、聚乙二醇和山梨醇的脂肪酸酯，及其混合物。除了惰性稀釋劑外，口服組合物可以包括佐劑，例如加濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、香料和香味劑。在用于非腸道的一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體與增溶劑(例如，Cremophor 、醇、油、修飾的油、乙二醇、聚山梨酸鹽、環(huán)化糊精、聚合物，及其組合)混合?？勺⑸渲苿?例如無菌可注射水性懸浮液或油質懸浮液)可以使用合適的分散劑或加濕劑和懸浮劑根據本領域已知的方法制備。無菌可注射制備物可以是非毒性非腸道可接受的稀釋劑或溶劑(例如，如，在1，3_ 丁二醇中的溶液)中的無菌可注射溶液、懸浮液或乳液?？墒褂玫目山邮艿妮d體和溶劑有水、Ringer溶液、U.S. P和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌的固定的油可方便地用作溶劑或懸浮介質。為此目的，可以應用任何溫和的固定的油，包括合成的單甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸例如油酸用于注射物的制備?？勺⑸渲苿┛赏ㄟ^例如以阻擋細菌的過濾膜過濾或通過以無菌固體組合物(在使用前可溶于或懸浮于無菌水或其它無菌可注射介質中)的形式整合滅菌試劑而滅菌。為了延長藥物的功效，經常需要減慢皮下或肌肉內注射的藥物的吸收。這可以通過使用晶體的液體懸浮液或水溶性差的無定形材料而實現(xiàn)。然后藥物的吸收速率取決于溶解速率，而溶解速率又取決于晶體尺寸和晶型?；蛘?，可以通過將藥物溶解或懸浮于油性介質而實現(xiàn)非腸道施藥的延遲吸收。用于直腸或陰道施用的組合物通常是栓劑，其可通過將本發(fā)明的疫苗納米載體與合適的非刺激性賦形劑(例如可可油、聚乙二醇或栓劑蠟，其在室溫為固體而在體溫時為液體，因此在直腸或陰道腔內熔化并釋放活性成分)混合來制備。用于口服施用的固體劑型包括膠囊、藥片、藥丸、粉末和顆粒。在這樣的固體劑型中，活性成分與至少一個惰性的藥學上可接受的賦形劑(例如檸檬酸鈉或磷酸氫鈣)和/ 或a)填充劑或延伸劑(例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸)，b)粘合劑(如，例如，羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯酮、蔗糖和阿拉伯樹膠)，c)濕潤劑(例如甘油)，d)崩解劑(例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、一些硅酸鹽和碳酸鈉)，e) 溶液保留劑(例如石蠟)，f)吸收加速劑(季胺化合物)，g)加濕劑(例如，如十六烷醇和單硬脂酸甘油酯)，h)吸附劑(例如高嶺土和斑脫土)和i)潤滑劑(例如云母、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體乙二醇、硫酸月桂酸鈉及其混合物)混合。在膠囊、藥片和藥丸的情況下，劑型可以包含緩沖劑。相似類型的固體組合物可以用作軟的或硬的填充的明膠膠囊中的填充劑(使用賦形劑例如乳糖或牛奶糖，以及高分子量的聚乙二醇等)。藥片、糖衣丸、膠囊、藥丸和顆粒的固體劑型可以通過包衣和殼(例如腸溶衣和制藥領域熟知的其它包衣)來制備。它們可
102以可選地包含濁化劑并可以是僅僅或優(yōu)先在腸道的某一部分釋放(可選地，以緩釋的方式釋放)活性成分的組合物?？捎玫陌窠M合物的例子包括聚合物物質和蠟。相似類型的固體組合物可以用作軟的或硬的填充的明膠膠囊中的填充劑(使用賦形劑例如乳糖或牛奶糖，以及高分子量的聚乙二醇等)?；钚猿煞挚梢耘c一個或多個上述賦形劑形成微膠囊形式。藥片、糖衣丸、膠囊、藥丸和顆粒的固體劑型可以通過包衣和殼(例如腸溶衣、控釋包衣和制藥領域熟知的其它包衣)來制備。在這樣的固體劑型中，活性成分可以與至少一個惰性稀釋劑(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如通常的實踐，除了惰性稀釋劑之外，這樣的劑型可以包括另外的物質，例如成片潤滑劑和其它的成片輔助劑，例如硬脂酸鎂和微晶纖維素。在膠囊、藥片和藥丸的情況下，劑型可以包含緩沖劑。它們可以可選地包含濁化劑并可以是僅僅或優(yōu)先在腸道的某一部分釋放(可選地，以緩釋的方式釋放)活性成分的組合物?？捎玫陌窠M合物的例子包括聚合物物質和蠟。根據本發(fā)明的疫苗納米載體的局部和/或經皮膚施用的劑型包括軟膏、漿糊、乳霜、洗液、凝膠、粉末、溶液、噴霧劑、吸入劑和/或貼劑。一般地，在無菌條件下將活性成分與藥學上可接受的賦形劑和/或任何需要的防腐劑和/或可能需要的緩沖劑混合。另外，本發(fā)明考慮到使用經皮膚的貼劑，其通常提供控制活性物質輸送至身體的額外優(yōu)點?？梢?通過例如將活性成分溶解和/或分散在合適的介質中來制備這樣的劑型。作為選擇，抑或是另外，可以通過提供速率控制膜和/或通過將活性成分分散于聚合物基質和/或凝膠中來控制速率。適合用于真皮內輸送本文描述的藥物組合物的裝置包括短的針裝置，如在美國專利 4，886，499,5, 190，521,5, 328，483,5, 527，288,4, 270，537,5, 015，235,5, 141，496 和 5，417，662中所描述?？梢酝ㄟ^限制針刺入皮膚的有效穿透長度的裝置(例如在PCT國際公開WO 99/34850及其功能等價物中描述的那些)施用皮內組合物。噴射注射裝置(其通過液體噴射注射器和/或針(刺破角質層并在到達真皮時產生噴射)將液體疫苗輸送至真皮)是適合的。噴射注射裝置在例如美國專利5，480，381、5，599，302、5，334，144、 5，993，412,5，649，912,5，569，189,5，704，911,5，383，851,5，893，397,5，466，220, 5，339，163,5，312，335,5，503，627,5，064，413,5，520，639,4，596，556,4，790，824, 4，941，880,4, 940，460 和 PCT 公開 WO 97/37705 和 W097/13537 中描述。彈道粉末 / 顆粒輸送裝置(其使用壓縮氣體以加速粉末形式的疫苗穿過皮膚外層到達真皮)是適合的。作為選擇，抑或是另外，常規(guī)的注射器可用于真皮內施用的經典曼托(mantoux)方法。適合于局部施用的制劑包括但不限于液體和/或半液態(tài)制劑，例如擦劑、洗劑、水包油和/或油包水乳劑，例如乳霜、軟膏和/或漿糊，和/或溶液和/或懸浮液。可局部施用的制劑可以包含例如約至約10% (w/w)的活性成分，雖然活性成分的濃度可以高達溶劑中活性成分的溶解性限度。局部施用的制劑還可以包含一個或多個本文描述的其它成分。本發(fā)明的藥物組合物可以以適合于通過口腔的肺施用的制劑進行制備、包裝和/ 或出售。這樣的制劑可以包括干燥顆粒，干燥顆粒包含活性成分且直徑范圍為約0.5 μ m至約7 μ m或約1 μ m至約6 μ m。這樣的組合物為干粉的形式，使用包含干粉儲存室的裝置(可以向該儲存室引入推進劑流以使粉末分散)和/或使用自推進溶劑/粉末分散容器(例如在密封容器內包含溶解于和/或分散于低沸推進劑的活性成分的裝置)方便地施用。這樣的粉末包含顆粒，其中至少98%重量的顆粒具有0. 5μπι以上的直徑且至少95%數目的顆粒具有7 μ m以下的直徑。或者，至少95%重量的顆粒具有1 μ m以上的直徑且至少90%數目的顆粒具有6 μ m以下的直徑。干粉組合物可以包括固體精細粉末稀釋劑例如糖，并方便地以單元劑型提供。低沸推進劑一般包括在大氣壓下具有65° F以下沸點的液體推進劑。一般地，推進劑構成組合物的50%至99. 9% (w/w)，和活性成分構成組合物的0. 1 %至20% (w/w)。推進劑還可以包含另外的成分例如液態(tài)非例子和/或固體陰離子表面活性劑和/或固體稀釋劑(其可以具有與包含活性成分的顆粒相同數量級的顆粒尺寸)。制成肺部輸送的本發(fā)明的藥物組合物可提供溶液和/或懸浮液的滴液形式的活性成分。這樣的制劑可作為水性和/或稀釋醇溶液和/或懸浮液來制備、包裝和/或出售，可選地為無菌的，其包含活性成分，和可以通過任何噴霧和/或霧化裝置方便地施用。這樣的制劑還可以包含一個或多個另外的成分，包括但不限于，香料劑(例如糖精鈉)、揮發(fā)油、緩沖劑、表面活性劑和/或防腐劑(例如甲基羥基安息香酸鹽)。通過此施用途徑提供的液滴具有約0. 1 μ m至約200 μ m的范圍的平均直徑。本文描述的可用于肺部輸送的制劑可用于鼻內輸送本發(fā)明的藥物組合物。另一種適合鼻內施用的制劑是包含活性成分的粗糙粉末，其具有約0. 2 μ m至約500 μ m的平均顆粒。這樣的制劑以吸取鼻氣息的方式施用，即從靠近鼻孔的粉末容器迅速吸入鼻通道。適合用于鼻部施用的制劑可以包含例如少至約0. 1% (w/w)到多達100% (w/w) 的活性物質，且可以包含本文描述的一種或多種其它成分。本發(fā)明的藥物組合物可以以適合于口腔施用的制劑來制備、包裝和/或出售。這樣的制劑可以是例如使用常規(guī)方法制成的藥片和/或錠劑，和可以包含例如0.1%至20% (w/w)的活性成分，平衡包含口服可溶解和/或可降解的組合物和可選地包含一種或多種本文描述的其它成分。作為選擇，適合于口腔施用的制劑可以包含粉末和/或氣霧化和/或離子化的溶液和/或懸浮液(其中包含活性成分)。這樣的粉末和/或氣霧化和/或離子化的制劑當分散時具有約0. 1 μ m至約 200 μ m的范圍的平均顆粒和/或滴液尺寸，還可以包含一種或多種本文描述的其它成分。本發(fā)明的藥物組合物可以以適合于口腔施用的制劑來制備、包裝和/或出售。這樣的制劑可以是例如眼滴液的形式，其包括例如水性或油脂賦形劑中的0. 1%/1.0% (w/ w)的活性成分的溶液和/或懸浮液。這樣的滴液還可以包含緩沖劑、鹽和/或一種或多種本文描述的其它成分?？捎玫钠渌慕浹凼┯玫闹苿┌切┰诎⒕问胶?或脂質體制備物中的活性成分的制劑。耳滴液和/或眼滴液被考慮在本發(fā)明的范圍內。在例如 Remington :The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincottffilliams & Wilkins，2005中有關于制備和/或生產藥物制劑的一般性考慮。MM在一些具體實施方式
中，在診斷出疾病、失調和/或病癥之前、與之同時和/或之后將治療上有效量的本發(fā)明的疫苗納米載體組合物輸送至病人和/或動物。在一些具體實施方式中，在疾病、失調和/或病癥的征狀出現(xiàn)之前、與之同時和/或之后將治療上有效量的本發(fā)明的組合物輸送至病人和/或動物。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的量對于疾病、失調和/或病癥的一個或多個征狀或特征足以治療、減輕、改善、緩解、延遲其發(fā)作、抑制其進展，減輕其嚴重程度和/或降低其發(fā)生率。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的量足以在個體中引發(fā)可檢測的免疫應答。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的量足以在個體中引發(fā)可檢測的抗體應答。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的量足以在個體中引發(fā)可檢測的T細胞應答。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的量足以在個體中引發(fā)可檢測的抗體和T細胞應答。在一些具體實施方式
中，納米載體提供的優(yōu)點是納米載體能夠以遠低于常規(guī)疫苗所需的抗原濃度引發(fā)有力的應答?？梢允┯脤χ委熡行У娜魏螖盗亢褪┯猛緩绞┯酶鶕景l(fā)明的方法的組合物。所需的精確數量根據在個體之間變化，這取決于物種、年齡和個體的一般條件、感染的嚴重性、特別的組合物、其施用途徑、其活性模式等。本發(fā)明的組合物通常制成容易施用且劑量一致的劑量單元形式。但是，應該理解，將由主治醫(yī)生在合理的醫(yī)學判斷的范圍內決定本發(fā) 明的組合物每日的總的用量。任何特定個體或生物的特異性治療上有效的劑量水平將取決于多種因素，包括所治療的病癥和該病癥的嚴重程度；所用的特異性活性成分的活性；所用的特異性組合物；個體的年齡、體重、一般健康狀況、性別和食譜；所用的特異性活性成分的施用時間、施用途徑和排泄速率；治療持續(xù)的時間；與所用的特異性活性成分聯(lián)用的或同時使用的藥物；以及醫(yī)學領域熟知的類似因素。本發(fā)明的藥物組合物可以通過任何途徑施用。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的藥物組合物通過多種途徑施用，包括，口服、靜脈內、肌肉內、動脈內、骨髓內、鞘內、皮下、心室內、經皮、真皮內、直腸、陰道內、腹膜內、表面(如通過粉末、軟膏、乳霜和/或滴液)、經皮、粘膜、鼻、口腔、腸道、舌下；通過氣管灌輸、支氣管灌輸和/或吸入；和/或作為口噴霧齊U、鼻噴霧劑和/或氣霧劑。特異性考慮的途徑為口服施用、靜脈內注射、肌肉內注射和/ 或皮下注射。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體為非腸道施用。在一些具體實施方式中，本發(fā)明的疫苗納米載體為靜脈內施用。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體為口服施用。一般地，最合適的施用途徑將取決于多種因素，包括疫苗納米載體的性質(例如，其在胃腸道環(huán)境中的穩(wěn)定性)、個體的狀況(例如，個體是否能夠耐受口服施用)等。本發(fā) 明包括通過任何合適的途徑(考慮到藥物輸送領域可能的進展)輸送本發(fā)明的藥物組合物。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明疫苗納米載體可以以每天范圍為約0.001mg/kg 至約 100mg/kg、約 0. 01mg/kg 至約 50mg/kg、約 0. lmg/kg 至約 40mg/kg、約 0. 5mg/kg 至約 30mg/kg、約 0. 0 lmg/kg 至約 10mg/kg、約 0. lmg/kg 至約 10mg/kg 或約 lmg/kg 至約 25mg/kg 個體體重的量施用(一天一次或多次)，以獲得想要的治療功效。需要的劑量的輸送可以一天三次、一天兩次、一天一次、兩天一次、隔一天一次、每周一次、每兩周一次、每三周一次或每四周一次。在一些具體實施方式
中，需要的劑量可以施用多次來進行輸送(例如，2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14 或更多次施用)。
在一些具體實施方式
中，本發(fā)明包括“治療雞尾酒”，其包含本發(fā)明的疫苗納米載體的群體。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體的群體內的所有疫苗納米載體包含單一種類的靶半體，其能夠與多個靶結合(例如能夠同時與SCS-Mph和FDC結合)。在一些具體實施方式中，疫苗納米載體的群體內的不同疫苗納米載體包含不同的靶半體，所有的不同的靶半體均與相同的靶結合。在一些具體實施方式
中，不同的疫苗納米載體包含不同的靶半體，所有的不同的靶半體能夠與不同的靶結合。在一些具體實施方式
中，這樣的不同的靶可以與相同的細胞類型結合。在一些具體實施方式
中，這樣的不同的靶可以與不同的細胞類型結合。

將認識到，本發(fā)明的疫苗和藥物組合物可以以組合治療應用。用于組合方案中的治療(治療劑或程序)的特定組合將考慮到需要的治療劑和/或程序的兼容性以及要達到的需要的治療效果。將認識到，應用的治療可以達到相同目的需要的效果(例如，用于抵抗特定類型的微生物感染的疫苗接種的本發(fā)明的疫苗納米載體可以與另一種用于治療相同的微生物感染的試劑同時施用)，或者它們可以達到不同的效果(例如控制疫苗納米載體的任何副作用)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的藥物組合物可以單獨施用或與一種或多種其它治療試劑聯(lián)合施用?！奥?lián)合”不是暗示試劑必須同時施用和/或配制成同時輸送，雖然這些輸送方法落入本發(fā)明的范圍內?？梢栽谝环N或多種其它的需要的治療劑或醫(yī)療程序的同時，之前或之后施用組合物。一般地，每種試劑按照對該試劑確定的劑量和/或時間表施用。另夕卜，本發(fā)明包括與可以改善本發(fā)明藥物組合物的生物可利用性、減少和/或改變其代謝、抑制其排泄和/或改變其在體內分布的試.劑聯(lián)合輸送本發(fā)明的藥物組合物。用于組合方案中的治療(治療劑或程序)的特定組合將考慮到需要的治療劑和 /或程序和/或要達到的需要的治療效果。將認識到，應用的治療可以達到針對同一種病癥的需要的效果(例如，本發(fā)明的疫苗納米載體可以與另一種用于治療相同的病癥的治療性試劑同時施用)，和/或它們可以達到不同的效果(例如控制疫苗納米載體的任何副作用)。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體與美國食品與藥片管理局批準的第二種治療性試劑一起施用。還將認識到聯(lián)合使用的治療性活性試劑可以一起以單一組合物施用或在不同的組合物中分別施用。一般地，預期聯(lián)合使用的試劑以不超過其單獨使用時的水平使用。在一些具體實施方式中，聯(lián)合使用時的水平低于單獨使用時的水平。在一些具體實施方式
中，本發(fā)明的疫苗納米載體可以與試劑，包括，例如治療性、診斷性和/或預防性試劑聯(lián)合使用。根據本發(fā)明輸送的示例性的試劑包括但不限于，小分子、有機金屬化合物、核酸、蛋白(包括多聚體蛋白、蛋白復合體等)、肽、脂、碳水化合物、激素、金屬、放射活性元素和化合物、藥物、疫苗、免疫試劑等，和/或其組合。在一些具體實施方式
中，延遲特定的微生物感染的發(fā)作和/或發(fā)展的疫苗納米載體可以與一種或多種治療微生物感染征狀的其它治療性試劑聯(lián)合施用。僅舉一例，在暴露于狂犬病病毒之后，包含用于接種抵抗狂犬病病毒的免疫調節(jié)試劑的納米載體可以與一種或多種用于治療狂犬病病毒征狀的治療性試劑(例如，用于治療偏執(zhí)狂(其為狂犬病病毒感染的征狀)的安定藥劑)聯(lián)合施用。在一些具體實施方式
中，包含本發(fā)明的疫苗納米載體的藥物組合物包含50%重量以下的、40%重量以下的、30%重量以下的、20%重量以下的、15%重量以下的、10%重量以下的、5%重量以下的、重量以下的或0.5%重量以下的待輸送的試劑。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體與一種或多種具有藥學活性的小分子和/或有機化合物聯(lián)合施用。在一些具體實施方式
中，試劑是臨床上使用的藥物。在一些具體實施方式中，藥物是抗癌劑，抗生素，抗病毒劑，抗HIV劑，抗寄生蟲劑，抗原生動物劑，麻醉齊U，抗凝血劑，酶的抑制劑，留體類試劑，留體類或非留體類抗炎劑，抗組胺劑，免疫抑制劑，抗瘤劑，抗原，疫苗，抗體，解充血藥，鎮(zhèn)靜劑，鴉片，止痛劑，退燒藥，避孕藥，激素，前列腺素，妊娠前試劑，抗青光眼試劑，眼藥，抗類膽堿，止痛劑，抗抑郁劑，安定藥劑，神經毒素，催眠藥，鎮(zhèn)定劑，抗驚厥劑，肌肉放松劑，抗Parkinsion藥劑，抗痙攣劑，肌肉收縮劑，通道阻滯劑，縮瞳劑，抗分泌劑，抗血栓藥劑，抗凝血劑，抗類膽堿，β _腎上腺素阻滯劑，利尿劑，心血管活性劑，血管活性劑，血管舒張劑，抗高血壓劑，血管生成劑，細胞_細胞外基質相互作用調節(jié)劑(例如，細胞生長抑制劑和抗粘附分子)，DNA、RNA或蛋白合成抑制劑等。在一些具體實施方式
中，小分子試劑可以是任何藥物。在一些具體實施方式
中，藥物是已經被合適的政府機構或監(jiān)察機構認為是可以安全并有效用于人類或動物的藥物。例如，由FDA根據21C. F. R. §§ 330. 5，331-361和440-460 (通過引用并入本文)所列的批準用于人類的藥物；由FDA根據21C. F. R. § § 500-589 (通過引用并入本文)所列的用于獸醫(yī) 用途的藥物。所有列出的藥物認為可以被接受而用于本發(fā)明?？梢栽?Pharmaceutical Drugs :Syntheses， Patents， Applications by AxelKleemann and Jurgen Enge1,Thieme Medical Publishing，1999禾口the Merck Index AnEncyclopedia of Chemicals， Drugs and Biologicals， Ed.By Budavari 等人，CRC Press, 1996 ( 二者通過引用并入本文)中找到關于適合用于本發(fā)明的類別和特異性藥物的更加完整的列表。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體與一種或多種核酸(例如功能性RNA、功能性DNA等)聯(lián)合用于特異性位點，例如組織、細胞或亞細胞位點。例如，用于延遲特定的微生物感染發(fā)作和/或發(fā)展的本發(fā)明的疫苗納米載體可以與減少微生物蛋白表達的RNAi試劑聯(lián)合施用。核酸的分子特性在上文中標題為“核酸靶半體”的部分有描沭。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體與一種或多種蛋白或肽聯(lián)合施用。在一些具體實施方式
中，待輸送的試劑可以是肽、激素、紅細胞生成素、胰島素、細胞因子、疫苗接種用的抗原等。在一些具體實施方式
中，待輸送的試劑可以是抗體和/或其特征性部分。它們的分子特性在上文中標題為“蛋白靶半體”的部分有描沭。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體與一種或多種碳水化合物聯(lián)合施用，例如與蛋白結合的碳水化合物，如糖蛋白、蛋白聚糖等。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物還可以是天然碳水化合物的衍生物。在一些具體實施方式
中，碳水化合物可以是簡單糖或復合糖。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是單糖，包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖和核糖。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是二糖，包括但不限于乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖和纖維二糖。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是多糖，包括但不限于纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、甲基纖維素(MC)、右旋糖苷、葡萄聚糖、糖原、黃原膠、結冷膠、淀粉和普魯蘭糖(pullulan)。在一些具體實施方式
中，碳水化合物是糖醇，包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇和乳糖醇。碳水化合物的分子特性在上文中標題為“包含碳水化合物的疫苗納米載體”的部分有描沭。在一些具體實施方式
中，疫苗納米載體與一種或多種脂聯(lián)合施用，例如與蛋白結合的脂，如脂蛋白?？梢杂糜诒景l(fā)明的示例性的脂包括但不限于，油、脂肪酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、必需脂肪酸、順式脂肪酸、反式脂肪酸、甘油酯、甘油單酯、甘油二脂、甘油三酸酯、激素、類固醇(例如膽固醇、葉酸)、維生素(例如維生素E)、磷脂、鞘脂和脂蛋白。月旨的分子特性在上文中標題為“脂瘡苗納米載體”的部分有描沭。本領域技術人員將認識到這是可以與本發(fā)明的疫苗納米載體聯(lián)合輸送的治療性、診斷性和/或預防性試劑的示例性而非完整的列舉。根據本發(fā)明可以與疫苗納米載體一起施用任何治療性、診斷性和/或預防性試劑。
試劑盒本發(fā)明提供了多種包含一個或多個本發(fā)明的納米載體的試劑盒。例如，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的疫苗納米載體和使用說明書的試劑盒。試劑盒可以包含多個不同的疫苗納米載體。試劑盒可以包含任意組合的任意數目的其它成分或反應劑。在此不一一列舉所有可能的組合，但是每個組合均包括在本發(fā)明的范圍內。根據本發(fā)明的一些具體實施方式
，試劑盒可以包括，例如(1)包含至少一個免疫調節(jié)試劑的疫苗納米載體，其中至少一個免疫調節(jié)試劑能夠刺激T細胞和B細胞應答；(ii) 向有需要的個體施用疫苗納米載體的說明書。在一些具體實施方式
中，試劑盒可以包括，例如(1)包含至少一個免疫調節(jié)試劑的疫苗納米載體，其中至少一個免疫調節(jié)試劑能夠刺激T細胞和B細胞應答，至少一個靶半體和/或至少一個免疫調節(jié)試劑；(ii)向有需要的個體施用疫苗納米載體的說明書。在一些具體實施方式
中，試劑盒可以包括，例如(1)至少一個免疫調節(jié)試劑，其中至少一個免疫調節(jié)試劑能夠刺激T細胞和B細胞應答；(ii)至少一個靶半體；(iii)至少一個免疫刺激試劑；(iv)聚合物基質前體；(ν)脂和兩性物質；(vi)從單獨成份(i)-(v) 組裝本發(fā)明的疫苗納米載體的說明書。在一些具體實施方式
中，試劑盒包含本發(fā)明的納米載體和如何進行混合的說明書。在一些具體實施方式
中，這樣的試劑盒還包含免疫刺激試劑和/或免疫調節(jié)試劑(例如B細胞或T細胞抗原)。這樣的試劑盒的納米載體可以包含免疫調節(jié)試劑(例如T細胞抗原，如普遍T細胞抗原)和/或靶半體。T細胞抗原和/或靶半體可以在納米載體的表面。在一些具體實施方式
中，免疫調節(jié)試劑和抗原是相同的。在一些具體實施方式
中，它們是不同的。試劑盒通常包括本發(fā)明的疫苗納米載體的使用說明書。例如，說明書可以包含產生疫苗納米載體、向有需要的個體施用疫苗納米載體等的方案和/或描述產生疫苗納米載體、向有需要的個體施用疫苗納米載體等的條件。試劑盒一般包括一個或多個器皿或容器，從而一些或所有的單個成分和反應劑可以分開存儲。試劑盒還可以包括將單個的容器以相對封閉的方式封裝以用于商業(yè)銷售的裝置，例如塑料盒子，其中可以裝入說明書、包裝材料例如泡沫塑料等。試劑盒或試劑盒中包括的一個或多個器皿或容器上面可以有標識符，例如條形碼或射頻識別(ID)標簽等。標識符可用于例如用于唯一確定用于質量控制、存貨控制、追蹤、工作站之間的移動等目的試劑盒。
實施例實施例1 淋巴結中的被膜下竇巨噬細胞清除淋巴攜帶的病毒并將其呈遞至抗病毒B細胞
材料和方法方法概述
從感染的BSRT7細胞的培養(yǎng)上清液純化VSV-IND和VSV-NJ病毒體，以未修飾形式或者AleXa-568(紅色)或AleXa-488(綠色)熒光標記使用。將用于組織顯示的熒光病毒進行UV照射以防止產生非熒光的子代。對VSV-IND顆粒進行熒光標記或UV照射不影響其抗原性或者在VI10YEN細胞中引發(fā)鈣流動的能力(未顯示)。將熒光病毒注射入足底之后，收獲引流的胭淋巴結以進行電子顯微鏡分析或產生用于免疫染色和共焦顯微鏡的冷凍切片。為了顯示淋巴結中過繼性轉移的B細胞，將VI10YEN和野生型B細胞進行熒光標記并通過靜脈內注射共轉染至野生型或突變的受體小鼠。18小時后，當B細胞回歸到B細胞濾泡時，以標記或未標記的VSV注射小鼠的右足底。之后在不同的時間間隔，通過MP-IVM觀察引流的胭淋巴結或者將其收獲以用于共焦顯微鏡觀察或進行流式細胞術以分析病毒特異性和對照B細胞的激活狀態(tài)。在一些實驗中，通過皮下注射CLL而消除胭淋巴結中的巨噬細胞，動物用于此后7-10天的實驗。在預先進行CLL處理或不預先進行CLL處理的淋巴結上進行各種標記物的MP-IVM、電子顯微鏡、免疫組化和流式細胞術分析。通過向足底注射確定數量的活體VSV然后在VSV注射2小時或6小時之后收獲組織而檢測VSV從足底注射位點向血液和其它器官的繁殖。為了測定病毒效價，將組織勻漿并用于空斑實驗。一些病毒繁殖實驗在胸管插管之后進行。小鼠和抗體C57BL/6 禾口 BALB/c 小鼠購買自 Taconic Farm(Germantown，NY)。 VIIOYEN (Hangartner 等人，2003，Proc. Natl. Acad. Sci，USA, 100 12883 ；通過引用并入本文)，C3+(Wessels 等人，1995，Proc. Natl. Acad. Sci，USA，92 11490 ；通過引用并入本文)， MHCII-EGFP (Boes 等人，2002，Nature, 418 983 ；引用并入本文)，Act-EGFP (Wright 等人， 2001，Blood, 97 :2278)，和 DH-LMP2A 小鼠(Casola 等人，2004，Nat. Immunol.，5 317 ；通過弓I用并入本文)在 Harvard Medical School 禾口 the ImmuneDisease Institute(IDI)的棚欄動物場飼養(yǎng)。通過以兩劑650rad照射Act (EGFP)小鼠并以C57BL/6骨髓還原而產生輻射嵌合體，在使用之前允許還原8周。在一些實驗中，在實驗之前7-10天通過足底注射30 μ 1 的膦酸鹽脂質體(CLL)而除去SCS巨噬細胞。膦酸鹽是Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany 的惠贈。其它用于制備脂質體的試劑為磷脂酰膽堿(LIPOID E PC, Lipoid GmbH, Ludwigshafen, Germany)和膽固酉享(Sigma-Aldrich)。根據National Institutes of Health的指南，將小鼠養(yǎng)在無特異性病原體和無抗病毒抗體的條件下。所有的動物程序都經過Institutional Animal Committees of HarvardMedical School 禾Π IDI 批準。除了抗-B220-Alexa647 (Invitrogen-Caltag)、抗-LYVE-1 (Millipore-Upstate)、山羊抗-兔子-APC(Invitrogen)、山羊抗-GFP-FITC(Rockland)、抗 _FITC_Alexa488 (Invitrogen)禾口 Fab 抗-IgM-FITC (Jackson Immunoresearch)之夕卜，抗體購自 BDBiosciences (San Jose, CA)。以下抗體購自 AbD-Serotec 抗-CD68_Alexa647、抗-CDllb-Alexa647、F4/80_Alexa647、抗-CD169-FITC(3D6)。用于檢測 VIIOYEN 小鼠中的 VIIOBCR 的抗-個體基因型抗體 35. 61 (Hangartner 等人，2003，Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 100 12883 ；通過引用并入本文)根據標準方法從雜交瘤上清液中產生。流式細胞術在對小鼠進行后眼窩放血并以ACK緩沖劑(0. 15M NH4Cl、ImM KHC03、0. ImM EDTA( 二鈉鹽)，pH7.2)裂解紅細胞之后將血液樣品進行流式細胞分析。通過小心地切碎組織然后于 37°C在 DMEM(Invitrogen-Gibco)(其中存在 250 μ g/ml liberase CI (Roche) 加SOyg/ml DNase-I(Roche))中消化40分鐘而產生用于流式細胞術的淋巴結和脾的單細胞懸浮液。消化20分鐘后，將樣品劇烈地通過18G針頭以確保器官完全分離。所有的流式細胞分析在FACS緩沖液(含有PBS和2mM EDTA和2% FBS(Invitrogen-GIBCO))中在 FACScalibur (BD Pharmingen)上進行，并通過 FlowJo 軟件(Treestar Inc. , Ashland, OR) 進行分析。為了測定鈣流，以4μ M Fluo-LOJO(Teflabs)(處于含有10% FCS的DMEM中) 于37°C標記細胞90分鐘。細胞穿過FCS旋落并立即使用。病毒和VSV空斑檢驗在BSRT7細胞上以0. 01的MOI繁殖VSV血清型Indiana (VSV-IND，源自 Mudd-Summers 的克隆，體外拯救的(Whelan 等人，1995，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92 8388;通過引用并入本文)和空斑純化的)或New Jersey (VSV-NJ，Pringle Isolate，空斑純化的)。通過在2000x g離心，通過0.45 μ m無菌過濾膜過濾感染細胞的上清液并在 40, OOOx g進行超離心90分鐘，從而將感染細胞的上清液從細胞碎片中除去。將沉淀重懸于 PBS 并通過透過 NTE(0. 5mM NaClUOmM Tris-HCl, pH 7. 5,5mM EDTA, ρΗ 8)中的 10% 蔗糖墊的超離心(157，OOOx g，60分鐘)進行純化。重懸于PBS中過夜后，通過BCA檢驗 (Pierce)定量測定病毒蛋白，通過空斑檢驗定量測定感染力。一些斑以AlexaFluor-488 或 AlexaFluor-568(Invitrogen-Molecular Probes)的羧酸馬來酰亞胺酯(Alexa 染料摩爾數比病毒顆粒高104-105倍)進行標記。通過穿過NTE中的10%蔗糖的超離心除去未偶聯(lián)的染料，將沉淀重懸于PBS并冷凍儲存。通過在綠色猴腎細胞(Vero)上進行空斑檢驗而定量測定VSV制備物的感染力。以Potter-Elvejhem勻漿器將器官勻漿后，類似地測定來自感染小鼠器官的VSV效價。如果需要，在病毒制備過程中，從157，OOOx g的超離心中收集大約4ml的上清液并以10，000MWC0 Amicon Ultra(Millipore)進行濃縮。為了對濃縮的上清液中剩余感染力作出解釋，將VSV貯液稀釋至等于濃縮上清液中的感染力的水平，將VI10YEN B細胞中的鈣流與進一步稀釋100倍的VSV和上清液進行比較。根據標準程序(Leopold等人，1998，HumanGene Therapy, 9 367 ；通過引用并入本文)產生UV滅活的、AlexaFluor-568標記的腺病毒5 (AdV5)。所有的傳染性工作均在指定的BL2+工作站上根據制度指南進行，并經過Harvard Committee on Microbiological Safety的批準。VSV中和檢驗在含有2% FCS的MEM中將經過免疫的小鼠的血清預稀釋40倍。將系列2倍稀釋物與等體積的VSV(500pfu/ml)混合并于37°C在5% CO2中孵育90分鐘。將100 μ 1的血清_病毒混合物轉移至96孔板中的Vero細胞單層并于37°C孵育1小時。以含有甲基纖維素的100 μ 1的DMEM將單層覆蓋并于37°C孵育24小時。然后，除去覆蓋，將單層固定并以0.5%的結晶紫染色。將空斑數減少50%的最高血清稀釋作為效價。為了測定IgG效價，與等體積的0. ImM的β巰基乙醇(在鹽水中)預處理未稀釋的血清。粘附檢驗
以重組小鼠VCAM-I-Fc或ICAM_l_Fc (R&D systems)的稀釋物或PBS中的純化的 VSV-IND包被96孔板(Corning)過夜，重復三次。陰性對照孔以4% BSA包被，陽性對照孔以 lmg/ml 的多聚 L 賴氨酸包被。于 4°C 以 Hanks Balanced SaltSolution (HBSS)/1% BSA將板子封閉1-2小時，并洗滌。使用CD43磁性珠子(Miltenyi, Bergisch Gladbach, Germany)通過磁性細胞分離法負選擇來自VIIOYEN或C57BL/6小鼠的原態(tài)B細胞，并以 3 X IO5/孔加入到板中的HBSS (含有1 % BSA、ImMCa2+和ImM Mg2+,存在或不存在UV滅活的 VSV-IND (Μ0Ι為1000))中，37°C持續(xù)30分鐘。輕輕洗滌(在含有1 %的BSA的HBSS中洗滌3次)之后，以PBS/10%戊二醛將板子固定10分鐘，以0. 5%結晶紫/20%甲醇染色45 分鐘并在水中洗滌。通過加入的SDS洗脫染料，30分鐘后通過分光光度法確定570nm 處的吸收(SpectraMax340PC 微量板閱讀器和 SoftmaxPro 3. 1. 2 軟件，Molecular Devices Corporation)。共焦顯微鏡方法對于一些分析，以20 μ g AlexaFluor-568 或 AlexaFluor-488 標記的 VSV-IND 或 VSV-NJ注射C57BL/6小鼠的兩只后足，持續(xù)30分鐘。對于其它實驗，將IX IO7在實驗前一天負選擇的來自VIIOYENx MHCII-EGFP小鼠的原態(tài)B細胞注入小鼠。在預先確定的時間點，通過足底注射磷酸鹽緩沖的L-賴氨酸和多聚甲醛/高碘酸鹽(PLP)而將胭淋巴結原位固定。除去胭淋巴結并在PLP中于4°C孵育3-5小時之后，在0. IM PBS (pH 7.2)中洗滌胭淋巴結，并在PBS中漸增系列的10%、20%和30%蔗糖中冷凍保存。在TBS組織冷凍液(Triangle Biomedical Sciences, Durham NC)中將樣品突然冷凍并儲存在 _80°C。將 40 μ m 厚的切片裝配在 SuperfrostPlus 玻片(Fisherbrand)上，以 1 μ g/ml 抗體 2. 4G2 (BD Pharmingen)封閉Fc受體之后，在濕室中以熒光抗體進行染色。樣品在FluorSave反應劑溶液(EMD-Calbiochem)中裝配并儲存于4°C直至進行分析。使用Olympus BX50WI顯微鏡和 10x/0. 4或60x/l. 2W的物鏡通過BioRad共焦顯微鏡系統(tǒng)收集圖像。使用LaserSharp2000 軟件(BioRad Cell Science,Hemel Hempstead,Great Britain)禾口 Photoshop CS(Adobe) 分析圖像。通過對位于T/B邊界50 μ m內的細胞進行計數而定量計算定位于T/B邊界的B 細胞，由Β220復染顯示，任何位于更中心區(qū)域的細胞被認為是濾泡。電子顯微鏡方法通過足底注射2%甲醛和2. 5%戊二醛(處于0. IM甲次砷酸鹽緩沖液中，ρΗ7. 4) 而在原位固定胭淋巴結。切除淋巴結并浸沒在相同的緩沖液中于4°C過夜，在甲次砷酸鹽緩沖液中洗滌，并以四氧化鋨/1.5%氰亞鐵酸鉀(在水中)于室溫黑暗中進行鋨染色，持續(xù)1小時。在水中洗滌之后，在0. 05M馬來酸鹽緩沖液(pH5. 15)中洗滌3_4次。在馬來酸鹽緩沖液中的的乙酸鈾酰中將樣品復染2個小時并在水中洗滌3次。通過在水中的乙醇(70% -90% -100% )的稀釋物中孵育15分鐘而將樣品脫水，在氧化丙烯中孵育1小時，然后轉移至1 1混合的Epon和氧化丙烯中，于室溫過夜。將樣品轉移至包埋模具(其中填充新鮮混合的Epon)并于60°C加熱24-48小時以進行聚合。在Harvard Medical School EM facility 以 TecnaiG2 Spirit BioTffIN 電子顯微鏡分析樣品。多光子活體內顯微鏡(MP-IVM)法分析胭淋巴結使用⑶43珠(Milenyi)通過磁性分離負選擇原態(tài)B細胞。使用10 μ M的5_(和 6_) (((4-氯甲基)苯甲酰)氨基)四甲基若丹明(CMTMR5Invitrogen)于37°C標記VIIOYENB細胞，持續(xù)20分鐘，使用10μ M的7-氨基-4氯甲基香豆素(CMAC ；Invitrogen)于37°C標記C57BL/6B細胞，持續(xù)25分鐘。在一些實驗中，在野生型和VI10YEN B細胞之間交換標記以排除非特異性染料效應。將每個群體的5-6xl06個B細胞混合并在分析前一天通過尾部靜脈注射過繼性轉移進入C57BL/6受體小鼠。在一些實驗中，受體C57BL/6小鼠已經在實驗前7-10天接受了后足底注射30 μ 1的CLL以除去SCS巨噬細胞(Delemarre等人， 1990，J. Leukoc. Biol. ,47 251 ；通過引用并入本文)。過繼性轉移B細胞之后18小時，通過靜脈內注射克他命(50mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)而將受體小鼠麻醉。通過微手術方法制備右側胭淋巴結以用于MP-IVM，將其放置于客戶自制的顯微鏡平臺上，如Mempel等人 2004，Nature, 427 154 (通過引用并入本文)所描述。小心地省下血管和傳入淋巴管。將暴露的淋巴結浸沒于正常鹽水中并以玻璃蓋玻片覆蓋。將熱電偶置于淋巴結旁邊以監(jiān)控局部溫度，將其保持在36-38°C。在800nm的激發(fā)波長(來自可調的MaiTai Ti sapphire laser (Spectra-Physics))在 BioRad 2100MP 系統(tǒng)上進行 MP-IVM。通過 31G 針頭將熒光標記的VSV(20 μ 1中含有20 μ g)注射到同時觀察的受體小鼠的后足底。為了進行細胞遷移的四維離線分析，通過20x/0. 95水浸目鏡(Olympus)以電子放大1. 8χ-3χ每15秒獲取11個光學x-y部分(具有4μπι ζ間距)的堆積。以非去掃描檢測器通過400/40nm、450/80nm、 525/50nm和630/120nm通帶過濾膜檢測發(fā)射的熒光信號和第二諧波信號以產生三色圖像。使用Volocity軟件(Improvision)將圖像堆積的序列轉化為賦予體積的四維的時延影像。使用Volocity通過半自動化細胞追蹤和通過Matlab (Mathworks)進行的計算機化分析確定3D即時速率。通過不知情記錄者進行的人工影像分析確定SCS上的細胞積聚。每2分鐘，在SCS、表面濾泡(距離SCS < 50 μ m的距離)和深層濾泡(距離SCS > 50 μ m的距離) 上數出VI10YEN B細胞和多克隆B細胞，記錄整個30分鐘的影像中每個室中的VI10YEN/ 多克隆B細胞的比例。胸管插管為了進行胸管插管，在插管之前30分鐘，小鼠口服接受200ul橄欖油以促進淋巴管的可視化。然后以甲苯噻嗪(10mg/kg)和鹽酸克他命(50mg/kg)將動物麻醉。將聚乙烯導管(PE-IO)插入右側頸靜脈以持續(xù)灌輸(2ml/小時)含有l(wèi)U/ml肝素(American Pharmaceutical partners, Los Angeles, CA)的 Ringer 乳酸鹽(AbbottLaboratories, North Chicago, IL)。使用解剖顯微鏡，通過左肋下切口將TD暴露出來。以肝素化(50U/ ml)的磷酸鹽緩沖鹽水(DPBS，Mediatech，Herndon，VA)沖洗Silastic 硅管(0. 012”I.D.，Dow Corning, Midland, USA)，并通過大約0. 3mm的切口將其插入到乳糜池中，并以異丁基氰基丙烯酸鹽單體(Nexabande5AbbottLaboratories)固定。將管的剩余部分通過后腹壁取出來。然后，使用6-0不能被吸收的連續(xù)縫合線(Sofsilk，Tyco Healthcare Group,Norwalk, CO)將腹部切口封閉。淋巴流平衡30分鐘后，以108pfu的VSV-IND在足底注射動物，在冰上收集淋巴樣品，持續(xù)收集6小時。胸管淋巴收集6小時之后取出淋巴和器官并按照上文所述斑化。按照上文所述將淋巴和器官斑化。在一些實驗中，通過外科手術將引流的胭部和主動脈淋巴結切除，將周圍的淋巴管燒灼以防止淋巴攜帶的病毒進入血液。結果和討論淋巴結(LN)阻止病原體(例如進入機體表面的病毒)從感染的外周位點散布到全身。它們也是針對源自病原體的抗原的獲得性免疫應答的分期依據(vonAndrian和Mempel，2003，Nat. Rev. Immunol.，3 867 ；禾口 Karrer 等人，1997，J. Exp. Med.，185 2157 ；二者通過引用并入本文)。尚不清楚病毒顆粒如何從輸入性淋巴被清除并呈遞至同源的 B細胞以誘導抗體應答。這里，我們在被膜下竇(SCS)的基底和淋巴結的髓質中鑒別出 ⑶llb+CD169+MHCn+的巨噬細胞，其在皮下注射(s. c.)幾分鐘之內捕獲病毒顆粒。SCS巨噬細胞跨過SCS基底將表面結合的病毒顆粒轉運并將其呈遞至下面的濾泡中的遷移性B細胞。選擇性除去這些巨噬細胞破壞了局部病毒保留，惡化了宿主的病毒血癥，并破壞了局部 B細胞激活。這些發(fā)現(xiàn)表明⑶169+巨噬細胞具有雙重生理學功能。它們作為先天“捕蠅紙” 而阻止淋巴結攜帶的病原體的全身性擴散，并且在淋巴組織處作為重要的門戶以促進B細胞識別特定的抗原并啟動體液免疫應答。我們研究了進入外周組織的病毒顆粒在引流的淋巴結中如何被處理。以熒光標記的UV滅活的泡性口炎病毒(VSV)(—種由昆蟲叮咬傳播的引起細胞病變的棒狀病毒)(Mead 等人，2000，Arm. N. Y. Acad. Sci. 916 437 ；通過引用并入本文)注射小鼠后足底并引發(fā)T非依賴性的中和性B細胞應答(Bachmann等人，1995,Eur. J. Immunol. ,25 3445 ；通過引用并入本文)。使用多光子活體內顯微鏡(MP-IVM)，在注射的足底引流的胭淋巴結(Mempel等人，2004，Nature，427:154;通過引用并入本文)中，我們觀察到皮下注射后幾分鐘之內 VSV以離散的碎片在SCS基底上聚積，而SCS的軟組織和頂部仍然沒有病毒(圖11A)。病毒沉積變得越來越深，形成顯著的不規(guī)則網狀式樣，其在數小時內保持固定在位置中。為了描繪淋巴結中VSV結合位點的偏好性，我們以野生型骨髓恢復了幾個照射的 Act (EGFP)小鼠。所產生的B6 — Act (EGFP)嵌合體在非造血細胞中表達EGFP，推測為SCS 基底和頂部的淋巴內皮細胞。將熒光VSV注射進入C57BL/6 —Act(EGFP)嵌合體的足底后，病毒顆粒淹沒了 SCS。3小時后，未結合的腔內VSV已經消失，但是SCS基底顯示出強烈的VSV碎片，其不與EGFP+細胞共存，這暗示VSV被造血細胞捕獲(圖11B)。為了描繪推測的捕獲VSV的白細胞，我們在VSV注射5分鐘之后收獲的胭淋巴結上進行了電子顯微鏡實驗(圖11C)。子彈狀的電子密集的VSV顆粒選擇性地與分散的大細胞(其位于SCS內或在 SCS基底正下)表面的離散區(qū)域結合。位于SCS基底下面的VSV結合細胞通常通過延伸進入SCS腔的突出與淋巴腔室接觸。淋巴結的超結構研究已經表明SCS含有很多巨噬細胞(Clark，1962,Am. J. Anat.， 110 217 ；和Farr等人，1980，Am. J. Anat.，157 265 ；二者通過引用并入本文)，所以我們假設保留VSV的細胞屬于這一群體。確實，足底注射30分鐘之后獲得的冷凍淋巴結切片的共焦顯微鏡觀察顯示VSV與一個巨噬細胞標記物(⑶169/唾液酸粘附素)共同定位于 SCS(圖11D)。使用流式細胞術，我們在淋巴結中的大約-2%的單核細胞(MNC)中檢測到了⑶169，其統(tǒng)一地共表達⑶lib和MHC-II，這表明結合VSV的細胞確實是巨噬細胞(圖 12)。多數⑶169+細胞也表達其它的巨噬細胞標記物，包括⑶68和F4/80，而極少表達粒細胞/單核細胞標記物Gr-Ι。⑶169+細胞也表達⑶11c，但是比⑶Ilchigh常規(guī)性樹突狀細胞 (DC)水平要低。我們得出結論在經皮沉積數分鐘后完整病毒進入淋巴并且迅速且選擇性地在髓質和引流淋巴結的SCS中的巨噬細胞上積聚。為了研究病毒固定的機理，將活體VSV (20 μ g含有2 X IO8Pfu)注射進入后足底，2 小時后測定引流淋巴結中的病毒效價。在補體C3缺失的小鼠的引流淋巴結中VSV的保留沒有缺陷(圖11E)。DH-LMP2a小鼠(其缺少分泌的免疫球蛋白)在脾中病毒效價降低，但是胭淋巴結中不降低(圖11F)。因此，淋巴結中VSV的固定是通過與脾邊緣區(qū)域巨噬細胞不同的機理發(fā)生，脾邊緣區(qū)域巨噬細胞中VSV的固定需要C3和天然抗體以捕獲血液攜帶的 VSV(Ochsenbein 等人，1999，J. Exp. Med.，190 1165 ；禾口 Ochsenbein 等人，1999，Science, 286 2156 ；二者通過引用并入本文)?？梢韵胂?，在淋巴結中VSV表面糖蛋白(VSV-G)可能被表達巨噬細胞的與碳水化合物結合的清道夫受體所識別(Taylor等人，2005，Ann. Rev. Immunol. ,23 901 ；通過引用并入本文)，但是精確的機理需要進一步的研究。巨噬細胞捕獲病毒對于病毒傳播和抗病毒免疫力的意義是什么呢？為了解釋這個問題，我們通過足底注射膦酸鹽脂質體(CLL ；DeIemarre等人，1990，J. Leukoc. Biol.， 47:251 ；通過引用并入本文)除去位于淋巴結中的巨噬細胞。在所用的劑量下，皮下注射CLL選擇性消除了注射點引流的淋巴結中的巨噬細胞，包括胭部、腹股溝和主動脈旁 LN(Delemarre等人，1990，J. Leukoc. Bio l. ,47 251 ；通過引用并入本文)，而剩下了末梢淋巴結和脾中的巨噬細胞(圖13A、B)。在不同的處于淋巴結中的⑶llb+MHC II+的吞噬細胞中，CLL優(yōu)選除去⑶169+亞群，而LYVE-Γ細胞和常規(guī)的DC保持不變。在處理之后7天，CLL 處理的胭淋巴結的B細胞數目增加且濾泡增大，但是其它的形態(tài)學參數(例如，T/B邊界的劃分和SCS超結構)保持不變(圖13C-E)。與未處理的淋巴結相比，我們從CLL處理的小鼠的引流淋巴結中恢復的病毒效價約低10倍(圖11G)，這表明巨噬細胞的消除引起淋巴過濾的無效率。確實，在CLL處理的小鼠的血液、脾和非引流淋巴結中VSV的效價顯著性升高。病毒從注射位點向血液的傳播嚴格取決于淋巴引流，這是因為，當病毒被注射到在胸導管(TD)中攜帶阻塞管的小鼠的足底時(甚至是在CLL處理的小鼠中)檢測不到循環(huán)的VSV。在未處理小鼠的TD淋巴液中病毒效價低，但是可以檢測到，但是在CLL處理的動物中顯著性升高(圖11H)。這表明病毒從外周組織早期傳播的主要途徑是淋巴，其由處于淋巴結中的CLL敏感性巨噬細胞(阻止淋巴攜帶的VSV的全省性擴散)監(jiān)視。這個捕獲機理并非對VSV特異的；⑶169+SCS巨噬細胞也保留腺病毒(AdV ；圖 11A-C)和牛痘病毒(VV，圖14D)，這表明巨噬細胞作為抵抗很多結構不同的病原體的屏障。相反，在足底注射之后，病毒尺寸的橡膠珠(200nm)在SCS中的保留性較差(圖14E)。因此，SCS巨噬細胞區(qū)別淋巴攜帶的病毒和其它相似尺寸的顆粒。熒光VSV、AdV和VV也在引流淋巴結的髓質聚集，在那里它們不僅被⑶1691 細胞結合(圖11D)，還被⑶169-LYVE-1+ 淋巴內皮細胞結合(圖14C、D)。這在CLL處理的淋巴結中得到確證，在CLL處理的淋巴結中VSV專有性地在髓質的LYVE-Γ細胞上聚集(圖15)。接下來，我們研究了 B細胞如何識別捕獲的VSV。在SCS腔內，胭淋巴結幾乎不含 B細胞(圖16A)，但是我們發(fā)現(xiàn)在電子顯微圖中沒有發(fā)現(xiàn)SCS內結合病毒的淋巴細胞的跡象。確實，延伸跨過SCS基底的巨噬細胞將病毒顆粒呈遞至表面濾泡內的B細胞。在注射 VSV(圖17A)或AdV(圖16B-E)之后，在B細胞-巨噬細胞界面處可以容易地檢測到病毒體，這至少持續(xù)4個小時。這暗示為了將病毒顆粒呈遞至B細胞，SCS巨噬細胞將病毒顆粒穿梭跨過SCS基底。轉胞吞作用(transcytosis)似乎是不可能的，因為極少在SCS巨噬細胞中含有VSV的泡顯示出病毒降解的跡象。此外，我們通過MP-IVM沒有檢測到結合病毒的巨噬細胞的實質性運動性，至少在刺激后首6個小時內沒有檢測到。因此，病毒顆粒最可能通過沿著巨噬細胞表面移動而到達淋巴結軟組織。值得注意的是從外周位點遷移的DC也將VSV和其他抗原呈遞至B細胞(Ludewig等人，2000，Eur. J. Immunol. ,30 185 ；和Qi等 A, 2006, Science, 312 1672 ；二者通過引用并入本文)，但是源自足底的DC不可能在非常早的事件中發(fā)揮作用，因為它們需要更長的時間遷移至胭淋巴結。我們得出結論scs基底對于淋巴攜帶的病毒來說不是不可逾越的；⑶169+巨噬細胞似乎作為病毒轉運并呈遞至B 細胞的守衛(wèi)和促進者。接下來，我們使用兩種血清型的VSV，(Indiana (VSV-IND)和New Jersey (VSV-NJ))(圖 18 ；Roost 等人，1996，J. Immunol. Methods, 189 233 ；通過引用并入本文)研究了原態(tài)B細胞對病毒遭遇如何反應。我們將野生型B細胞與來自VI10YEN小鼠的B細胞(其表達不與VSV-NJ結合的VSV-IND特異性B細胞受體)(Hangartner等人， 2003，Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 100 12883 ；通過引用并入本文)進行了比較。相反，一小部分(2%-5%)的野生型B細胞同時結合兩種血清型而不被激活。這可能反映出與 VSV-G的低親和性反應或間接的相互作用，例如通過補體(Rossbacher和Shlomchik，2003， J. Exp. Med. , 198 591 ；通過引用并入本文)。為了檢測體內應答，將經不同標記的野生型和VI10YEN B細胞進行過繼性轉移并允許回歸至淋巴結濾泡。然后將熒光的UV滅活的病毒注射入足底并在約5-35分鐘后通過MP-IVM記錄胭淋巴結。在不含病毒的淋巴結或注射 VSV-NJ之后，VI10YEN和對照B細胞顯示出相同的分布(圖17B-C)。相反，在注射VSV-IND 之后，VI10YEN細胞迅速在SCS基底以下和在SCS基底上聚集。在CLL處理的和未處理的淋巴結中，基礎B細胞活動性和分布沒有差異，這暗示了在兩種條件下，VSV特異性B細胞以相等的可能性探測SCS。但是，在CLL處理的淋巴結中，熒光病毒沒有被保留在SCS上并且 VI10YEN B細胞不能在該區(qū)域聚集，這表明SCS巨噬細胞對兩個事件均是必需的(圖17B)。為了嚴格定量VI10YEN B細胞的分布，在VSV刺激30分鐘之后收獲淋巴結并通過共焦顯微鏡進行分析。整個的濾泡VI10YEN群體保留其總體分布(圖17D)，但是在含有 VSV-IND的淋巴結中(而不是在VSV-NJ的淋巴結中)位于SCS以下彡50iim的細胞亞群向 SCS偏移(圖17E)。因為化學趨向性信號，所以VI10YENB細胞似乎不可能重新分布于SCS，因為無反應性多克隆B細胞表達相同的化學趨向因子受體。更可能的是，運動性的VI10YEN 細胞與結合巨噬細胞的VSV-IND的隨機接觸引發(fā)依賴于BCR的“終止信號”(Okada等人， 2005，PloS Biol. 3 :el50 ；通過引用并入本文)短時間暴露于VSV-IND激活VI10YEN B細胞上的 LFA-1 和 / 或 a 4 整合素(Dang 和 Rock, 1991，J. Immunol.，146 3273 ；通過引用并入本文)，這導致粘附至各自的配體ICAM-1和VCAM-1，二者均在SCS上表達(圖19)。另外，VSV-IND與SCS巨噬細胞的結合可能為VI10YEN B細胞通過BCR的直接粘附提供底物。為了研究B細胞檢測到捕獲的病毒體之后如何處理，我們測試了來自VI10YEN x MHCII-EGFP小鼠的B細胞，這允許我們顯示與內涵體MHC-II共定位的內吞的VSV以作為 B細胞引發(fā)的指示(Vascotto等人，2007，Curr.，Op in, Immunol. ,19 93 ；通過引用并入本文)。在注射后30分鐘內，表面濾泡中的VIlOYENx MHCII-EGFP B細胞具有嚴重內在化的 VSV-IND,但沒有VSV-NJ顆粒(圖20A、B)。在深層濾泡中很少有攜帶病毒的VSV特異性B 細胞，但仍可以檢測到。這些細胞可能具有從鮮有的在表面攜帶VSV的多克隆B細胞獲得的病毒體，或者可能對應于VI10YEN細胞，VI10YEN細胞在獲得VSV-IND之后不能停留在SCS。我們的組織學發(fā)現(xiàn)證明完整的病毒體優(yōu)先被SCS和表面濾泡中的B細胞檢測到并獲得，而對B細胞活動性的MP-IVM測定顯示出更廣的抗原傳播。在VSV-IND注射后，VI10YEN細胞在整個B濾泡中表現(xiàn)出迅速的速率下降(圖21)。在CLL處理和對照淋巴結中同樣有此發(fā)現(xiàn)，這表明病毒抗原不依賴于巨噬細胞到達B細胞。這種抗原性材料最可能由游離的病毒蛋白(自然感染的不可逆的副產物)組成。確實，我們的VSV貯液的純化上清液在VI10YEN B細胞中誘導強烈的鈣流動(圖18E)。已知小的淋巴攜帶的蛋白迅速擴散至濾泡和激活同源的B細胞(Pape等人，2007，Immunity, 26 491 ；通過引用并入本文)。因此，注射病毒上清液抑制濾泡VI10YEN B細胞的移動而不誘導其在SCS的聚集，這表明游離的VSV-G包含在病毒接種體內并且是活性的。這可以解釋VSV-IND注射的巨噬細胞非依賴性的廣泛的濾泡效應。為了確定遭遇病毒之后的VI10YEN B細胞激活的動力學，我們測定了常見的激活標記物(圖22)。在VSV-IND刺激之后6小時，共刺激分子⑶86首先被上調。⑶69被迅速地誘導，但是在多克隆B細胞上同樣被誘導，推測是被多向性IFN-a信號所誘導(Barchet 等人，2002，J. Exp. Med.，195 507 ；禾口 Shiow 等人，2006，Nature, 440 540 ；二者通過引用并入本文)。早在刺激之后30分鐘表面IgM(圖20C、D)即被下調，在2小時內達到最大值，當> 70%的VI10YEN細胞是BCRlWneg的時候。因此，BCR的內在化為病毒特異性B細胞的激活提供了最早的特異性讀出。引人注目的是，在皮下注射20 yg的VSV-IND之后的頭兩個小時內，CLL處理的淋巴結中的VI10YEN B細胞不能下調其BCR(圖20E)，這表明SCS巨噬細胞對于將捕獲的病毒體有效的早期呈遞至B細胞是必需的。引發(fā)的B細胞最終懇求來自CD4+T細胞的幫助(Vascotto等人，2007，Curr.，Opin， Immunol.，19:93;通過引用并入本文)以進行類別轉換重組和生發(fā)中心的形成。為了接觸 T細胞，新激活的B細胞朝著T/B邊界遷移(Okada等人，2005，PLoS Biol.，3 :el50 ；和Reif 等人，Nature,416 94 ；二者通過引用并入本文)。這個機理在富含巨噬細胞的小鼠中有效進行；多數VI10YEN B細胞在足底注射VSV-IND(少至40ng)后的6小時之內重新分布于 T/B邊界(圖20F、H和23)。相反，在CLL處理的小鼠中需要高100倍的病毒劑量以引發(fā) VI10YEN B細胞的完全的重新分布(圖20G、H)。到注射后12個小時的時候，多數VSV特異性細胞到達T-B邊界，不論注射劑量為多少。因此，即使沒有SCS巨噬細胞，濾泡B細胞最終也會被源自VSV的抗原激活，雖然效率較低。綜上，我們證明淋巴結中的⑶169+巨噬細胞具有雙重作用它們捕獲淋巴攜帶的病毒，阻止其全身性傳播；并且它們指引捕獲的病毒體跨越SCS基底以有效地呈遞并激活濾泡B細胞。實施例2 示例性的基于脂的疫苗納米技術構建脂質體納米載體在一些具體實施方式
中，生產小的脂質體(lOnm-lOOOnm)并在一些具體實施方式
中用于將一個或多個免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞(圖3)。一般地，脂質體是人工構建的圓球體脂泡，其數十至數千納米的可控直徑意味著單獨的脂質體包含體積為仄升 (10_21L)至飛升(10_15L)的生物可兼容腔室，這些腔室可用于包埋并儲存各種貨物，例如蛋白、酶、DNA和藥物分子。脂質體可以包含具有兩性性質的脂雙層雙層的內表面和外表面均為親水性的，雙層的腔是疏水性的。親脂性分子可以自發(fā)嵌入脂質體膜并將其親水性結構域保留在外面，由于膜的雙功能性的優(yōu)勢，親水性分子可以與脂質體的外表面化學地偶聯(lián)。
在一些具體實施方式
中，脂與親脂性免疫調節(jié)試劑混合，然后形成固體表面上的細膜。親水性免疫調節(jié)試劑溶解于水性溶液中，然后將此水性溶液加入到脂膜中，在振蕩下將脂水解。具有整合到雙層壁中的親脂性免疫調節(jié)試劑和位于脂質體腔內的親水性免疫調節(jié)試劑的脂質體自發(fā)組裝。納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體納米載體在一些具體實施方式
中，納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體用于將一個或多個免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞(圖4)。當小的帶電的納米顆粒到達帶有相反電荷或無凈電荷的脂質體表面時，納米顆粒與膜之間的靜電或電荷-偶極相互作用吸引納米顆粒停留在膜表面，被脂膜部分包裹住。這誘導脂質體的局部的膜的彎曲和整體表面的收縮，二者均調節(jié)膜的堅固性。這個方面對于使用脂質體進行疫苗輸送(以模擬病毒，病毒的堅固性取決于病毒膜內其它生物成分的組成)是至關重要的。此外，被吸附的納米顆粒形成帶電的殼，其保護脂質體抵抗融合，從而增強脂質體穩(wěn)定性。在一些具體實施方式
中，小的納米顆粒與脂質體在輕微振蕩下混合，納米顆粒自發(fā)地粘附至脂質體表面。脂質體_聚合物納米載體在一些具體實施方式
中，脂質體_聚合物納米載體用于將一個或多個免疫調節(jié)試劑輸送至免疫系統(tǒng)的細胞(圖5)。親水性免疫調節(jié)試劑不是保持脂質體內凹，相反，親水性免疫調節(jié)試劑可被包埋。圖3顯示了裝載了雙嵌段共聚物納米顆粒的脂質體，以形成脂質體包被的聚合物納米載體，其同時具有脂質體和聚合物納米顆粒的性質，而排除了一些它們的局限性。在一些具體實施方式
中，脂質體殼可用于攜帶親脂性免疫調節(jié)試劑或偶聯(lián)親水性免疫調節(jié)試劑，聚合物核心可用于輸送疏水性免疫調節(jié)試劑。在一些具體實施方式
中，預制的聚合物納米顆粒(40nm-1000nm)與小的脂質體(20nm-100nm)在輕微振蕩下混合，以誘導脂質體融合至聚合物納米顆粒表面。m^mMm^mmm^ - m^mmm^在一些具體實施方式
中，納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體-聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖6)。通過小的納米顆粒(lnm-30nm)吸附至脂質體-聚合物納米載體表面，納米載體不但具有上述納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體(圖4)和上述脂質體-聚合物納米顆粒的性質(圖5)，還具有可調的膜堅固性和可控的脂質體穩(wěn)定性。在一些具體實施方式
中，含有反膠團的脂質體_聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖7)。由于上述脂質體_聚合物納米載體(圖5和6)限制于在聚合物納米顆粒內攜帶疏水性免疫調節(jié)試劑，所以在這里將小的反膠團(lnm-20nm)制成包埋親水性免疫調節(jié)試劑，然后與雙嵌段共聚物混合以制成脂質體的聚合物核心。在一些具體實施方式
中，首先將待包埋的親水性免疫調節(jié)試劑通過在揮發(fā)性的可與水混溶的有機溶劑中與天然來源的且非毒性的兩性物質混合而整合入反膠團。將得到的生物可降解聚合物_反膠團混合物與不可溶于聚合物的親水性非溶劑聯(lián)合，通過溶劑快速擴散至非溶劑中以及有機溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。含有反膠團的聚合物納米顆粒與脂分子混合以形成上述脂質體_聚合物復合體結構(圖5)。^mmmm^mMm^mmm^ -m^mmm^在一些具體實施方式
中，含有反膠團的納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體-聚合物納米載
117體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖8)。通過將小的納米顆粒(InnHBOnm)吸附至脂質體-聚合物納米載體表面，納米載體不但具有上述納米顆粒穩(wěn)定化的脂質體(圖4)和上述含有反膠團的脂質體_聚合物納米顆粒的性質(圖7)，還具有可調的膜堅固性和可控的脂質體穩(wěn)定性。脂單層穩(wěn)定化的聚合物納米載體在一些具體實施方式
中，脂單層穩(wěn)定化的聚合物納米載體用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖9)。與上述脂質體聚合物納米載體(圖5-8)相比較，這個系統(tǒng)具有試劑和制備意義上的簡單性。在一些具體實施方式
中，疏水性均聚物可以形成聚合物核心，而不是圖5-8中所用的雙嵌段共聚物(其同時具有疏水性和親水性片段)。脂穩(wěn)定化的聚合物納米載體可以在一個單一步驟中制成，而不是先分別制備聚合物納米顆粒和脂質體然后再將其混合在一起。在一些具體實施方式
中，親水性免疫調節(jié)分子首先與脂的頭部基團化學偶聯(lián)。偶聯(lián)物在含有一種或多種與水混溶的溶劑的水性溶液中以一定比例與未偶聯(lián)的脂分子混合。生物可降解聚合物材料與疏水性免疫調節(jié)試劑混合以包埋于與水混溶或部分與水混溶的有機溶劑。將得到的聚合物溶液加入到偶聯(lián)的脂和未偶聯(lián)的脂的水性溶液中，通過有機溶劑快速擴散至水中以及有機溶劑的揮發(fā)而形成納米顆粒。伺加__旨·穩(wěn)觀·內細本在一些具體實施方式
中，包含反膠團的脂單層穩(wěn)定化的聚合物納米顆粒用于輸送一個或多個免疫調節(jié)試劑(圖10)。由于上述脂質體穩(wěn)定化的聚合物納米載體(圖9)限制于攜帶疏水性免疫調節(jié)試劑，所以在這里將小的反膠團(lnm-20nm)制成包埋親水性免疫調節(jié)試劑，并與生物可降解聚合物混合以制成聚合物納米載體核心。實施例3 使用來自人IgG的Fc片段在體內靶向SCS-Mph將未進行熒光修飾的對照納米顆粒(上端圖板，圖24A)或Fc表面偶聯(lián)的靶向納米載體(中間和下端圖板，圖24A)注射到麻醉小鼠的足底，1小時后切除引流的胭淋巴結并制備用于流式細胞術的單細胞懸浮液。通過注射裝載膦酸鹽的脂質體消除淋巴結巨噬細胞后一個星期，同樣以靶向納米載體注射小鼠(下端圖板，圖24A)?；冖莑ib的高表達，門 (gate)內的細胞群體被鑒定為與納米顆粒結合的巨噬細胞。這些結果表明(i)納米顆粒的結合取決于膦酸鹽敏感性巨噬細胞的存在；和(ii)相對于對照納米顆粒，靶向納米顆粒結合約兩倍的巨噬細胞。圖24的右側圖板顯示了注射藍色熒光對照納米顆粒(上端圖板，圖24A)或靶向納米顆粒(中間和底端圖板，圖24A)之后冷凍的淋巴結切片的熒光顯微圖。以抗-CD169和鑒別髓質(上端和下端圖板，圖24A)或B細胞(中間圖板，圖24A)的標記物將切片進行復染(counter-stained)。注射納米顆粒1小時之后，在髓質中發(fā)現(xiàn)多數對照顆粒(上端，圖 24A)，而靶向納米顆粒與⑶169+SCS-Mph共定位于B細胞濾泡附近(中間，圖24A)。注射之后24小時，在SCS和髓質之間的皮層區(qū)域中看到靶納米顆粒的離散的細胞尺寸的累積，這暗示了遷移性樹突狀細胞的攝取和轉移。以紅色熒光B細胞和1 1的對照和Fc靶向納米顆?；旌衔镬o脈注射小鼠足底。 24小時后，當一些轉化的B細胞遷移進入B細胞濾泡時，切除引流的胭淋巴結并切片以進行共焦顯微鏡觀察和藍色綠色熒光比例的定量圖像分析。被膜下竇(SCS)區(qū)域含有相似水平的藍色和綠色納米顆粒(右側圈起來的細胞，圖24B)，而與Fc靶向納米顆粒結合的綠色熒光在SCS中大約高兩倍。在B濾泡內也有顯著的綠色納米顆粒累積，如分散的紅色B細胞所顯示。這些區(qū)域具有特征性的尺寸、形狀和濾泡樹突狀細胞(FDC)的分布，像巨噬細胞和樹突狀細胞一樣已知為表達豐富的Fc受體。實施例4 攜帶抗原的靶向納米顆粒為高度免疫原性的且誘導高抗體效價以UV滅活的水皰性口炎病毒(VSV，Indiana血清型)或以VSV的經純化的免疫原性被膜糖蛋白(VSV-G)免疫小鼠組(每組5只)。VSV-G以可溶形式與明礬混合供給，或者 VSV-G與非靶向或靶向(具有表面固定的人類Fe)PLGA納米顆粒(含有或不含明礬佐劑) 偶聯(lián)供給。估計游離VSV-G的劑量比以納米顆粒輸送的VSV-G的劑量約高10倍。小鼠在初次免疫之后55天接受增強性注射，10周后獲取血清并測定Vero細胞上VSV-介導的空斑形成的中和情況。結果顯示為阻斷至少50%空斑形成的最高血清稀釋時的效價。每個符號表示一只小鼠中中和抗-VSV的效價。接受含有VSV-G的Fc靶向納米顆粒免疫的小鼠組 (該組中的具有最高抗體效價的兩只動物在所測的最高稀釋度時完全中和了空斑的形成，所以實際的效價甚至可能更高)產生比其它任何組都顯著性高的中和抗-VSV效價。納米顆粒(NP)疫苗引發(fā)的誘導的免疫應答賦予對致死劑量的VSV的有力的保護。雖然所有接受疫苗的組均顯示出一些保護，但是只有一組(其接受VSV-G偶聯(lián)至Fc靶向NP 外加明礬)顯示出對致死性感染的100%保護。接受游離VSV-G(VSV-G+明礬)的受體接受的抗原比供給VSV-G偶聯(lián)至納米顆粒的動物約高10倍。作為陰性對照，一個小組的小鼠接受不含VSV-G的Fc靶向納米顆粒(NP-Fc)，其沒有產生保護。實施例5 通過免疫調節(jié)納米顆粒體內激活T細胞以CFSE標記的⑶4T細胞(來自OT-II供體小鼠，該小鼠表達對II類MHC中呈遞的雞白蛋白(OVA)特異性的轉基因的TCR)通過靜脈注射C57BL6J小鼠。然后，通過使用游離的OVA或納米顆粒(其由PLA或PLGA組成，其中包埋等量的OVA作為模型抗原)注射一只足底而進行免疫接種實驗。所有的抗原性混合物還包含作為佐劑的CpG (—種TLR9激動劑)。注射動物，免疫3天后殺死動物，在來自不同組織的單細胞懸浮液中通過流式細胞術測定OT-II T細胞激活。未刺激的5，6_羧基-馬來酰亞胺-熒光素-酯(CFSE)標記的T細胞不分裂，所以統(tǒng)一攜帶高濃度的CFSE，這導致明亮地熒光細胞的單一的窄峰。相反，激活的T細胞發(fā) 生分裂并且在此過程中在兩個子代細胞之間平均分配熒光素染料，這導致每次連續(xù)分裂之后熒光的強度逐漸減弱。因此，CFSE熒光左偏移得越多，T細胞被激活得越厲害。結果表明(i)在引流的胭淋巴結中(popLN，上面一行)，納米顆粒包埋的抗原比游離的抗原產生更強烈的CD4T細胞應答；(ii)在末梢淋巴組織中，包括臂淋巴結(中間一行)和脾(下面一行)只有納米顆粒誘導局部T細胞增殖，游離OVA不誘導局部T細胞增殖。在接受游離 OVA的受體中，臂淋巴結和脾僅含有未分裂的細胞或含有非常少量的CFSE的細胞。后者的群體不指示局部T細胞激活，而是指示其它地方激活的T細胞的遷移。以CFSE標記的⑶8T細胞(來自OT-I供體小鼠，該小鼠表達對I類MHC中呈遞的雞白蛋白(OVA)特異性的轉基因的T細胞受體(TCR))通過靜脈注射C57BL6J小鼠。其它實驗程序與上面一段所述的相同。如上所述以以CFSE標記的⑶8T細胞(來自OT-I供體小鼠)通過靜脈注射C57BL6J小鼠。但是，在該實驗中，使用CL097( —種激活TLR-7和TLR-8的咪唑喹啉化合物)作為佐劑并測試了不同的佐劑輸送方法。在足底注射與游離佐劑(160ng)混合的游離的0VA(li!g或lOOng)之后3天，計算引流的胭淋巴結中OT-I T細胞的總數目，從而測定該情況下T細胞的激活。所有接受納米顆粒的動物均接受含有或不含有160ng CL097的 lOOng的OVA。那些包埋于納米顆粒中而不是與PLA聚合物共價結合的材料以[]表示。以連字符標示CL097與PLA的共價鍵。以游離形式混合于相同腔室內的材料以“ + ”分開。這些結果顯示在接受包埋于納米顆粒中的OVA (其中佐劑與賦形劑共價連接)的動物中，⑶8T 細胞的增殖顯著性增加。等同物和范圍本領域技術人員將認識到或僅通過常規(guī)實驗可以確定本文描述的本發(fā)明的特異性具體實施方式
的很多等同物。本發(fā)明的范圍不限于以上的說明書，而是由隨附的權利要求書所限定。本領域技術人員將認識到或僅通過常規(guī)實驗可以確定本文描述的本發(fā)明的特異性具體實施方式
的很多等同物。本發(fā)明的范圍不限于以上的說明書，而是由隨附的權利要求書所限定。除非另有指明或從上下文中可以斷定，否則權利要求書中的冠詞例如“a”、“an”和 “the”除了指一個以外可以指一個或多個。因此，例如，當提及“納米顆?！睍r包括多個這樣的納米顆粒，提及“細胞”時包括本領域技術人員已知的一個或多個細胞，等等。除非另有指明或從上下文中可以斷定，否則權利要求書或說明書中所包括的“或者”(在一組的一個或多個成員之間)被認為是滿足一個、多個或所有的組成員存在于、應用于給定的產品或方法或與給定的產品或方法相關。本發(fā)明包括這樣的具體實施方式
，其中恰有一個組成員存在于、應用于給定的產品或方法或與給定的產品或方法相關。本發(fā)明包括這樣的具體實施方式，其中多個組成員或所有組成員存在于、應用于給定的產品或方法或與給定的產品或方法相關。此外應該理解，本發(fā)明包括所有這樣的變體、組合或排列，其中來自一個或多個所列的權利要求的一個或多個限定、元素、從句、描述性術語等被引入另一個權利要求。例如，任何從屬于另一個權利要求的權利要求可以被修改為包括任何其它的從屬于同一個基礎權利要求的權利要求中的一個或多個限定。此外，除非另有指明或者本領域普通技術人員可以斷定會產生矛盾或不一致性，否則，當權利要求提及組合物時，應該理解為包括為了本文描述的任何目的使用該組合物的方法，并且包括根據本文描述的任何制備方法或其它本領域已知的方法制備該組合物的方法。當元素以Markush組的形式列舉表示時，應該理解為同樣公開的元素的亞組，并可以從組中除去任何元素。一般地應該理解為，當本發(fā)明或本發(fā)明的方面被稱作包含特定的元素、特征等的時候，本發(fā)明的某些具體實施方式
或本發(fā)明的方面由這樣的元素、特征等組成或實質上由這樣的元素、特征等組成。為了簡單起見，在本文中沒有以那樣的語言具體列出那樣的具體實施方式
。應該注意的是，術語“包含”是開放式的并允許包括另外的元素或步驟。當給出范圍時，包括端點值。此外，應該理解的是，除非另有指明或者由上下文和本領域普通技術人員的理解可以斷定，否則在本發(fā)明的不同具體實施方式
中，作為范圍表述的數值可以是本發(fā)明的不同具體實施方式
中的任何具體數值或亞范圍，直至范圍下限的單位的十分之一，除非上下文另有指明。另外，應該理解，任何落入現(xiàn)有技術范圍內的本發(fā)明的任何特定具體實施方式
可以明確地從一個或多個權利要求中排除。因為這樣的具體實施方式
被認為是本領域普通技術人員已知的，所以即使在本文沒有明確指出排除，也可以將其排除。不論任何原因，可以從一個或多個權利要求中排除本發(fā)明的組合物的任何特定具體實施方式
(例如，任何免疫調節(jié)試劑、任何靶半體、任何免疫刺激試劑、任何抗原呈遞細胞、任何疫苗納米載體架構、任何微生物、任何施用方法、任何預防性和/或治療性應用等)，不管是否與現(xiàn)有技術相關。
以上和全文中所討論的出版物僅僅是因為它們早于本申請的申請日的公開內容而提供。這方面的任何內容不應被理解為承認本發(fā)明人沒有權利通過更早的公開而使本發(fā) 明早于這樣的公開物。
權利要求
一種組合物，其包含靶向特異性細胞、組織或器官并調節(jié)免疫應答的納米載體，所述納米載體包含B細胞抗原、T細胞抗原和免疫刺激試劑中的至少一個。
2.根據權利要求1所述的組合物，其中納米載體包含B細胞抗原。
3.根據權利要求2所述的組合物，其中B細胞抗原位于納米載體的表面。
4.根據權利要求3所述的組合物，其中B細胞抗原以激活B細胞受體的密度位于納米載體的表面。
5.根據權利要求2所述的組合物，其中B細胞抗原包埋于納米載體內部。
6.根據權利要求3或4所述的組合物，其中B細胞抗原位于納米載體的表面并且也包埋于納米載體內部。
7.根據權利要求2-5任一項所述的組合物，其中B細胞抗原與納米載體結合。
8.根據權利要求7所述的組合物，其中B細胞抗原與納米載體共價結合。
9.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是弱免疫原性的抗原。
10.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是蛋白或肽。
11.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是小分子。
12.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是被濫用的物質。
13.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是令人上癮的物質。
14.根據權利要求13所述的組合物，其中令人上癮的物質是尼古丁、麻醉藥、迷幻劑、刺激物、咳嗽抑制劑、鎮(zhèn)定劑或止痛藥。
15.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是毒素。
16.根據權利要求15所述的組合物，其中毒素來自化學武器或生物戰(zhàn)的試劑。
17.根據權利要求16所述的組合物，其中化學武器或生物戰(zhàn)的試劑是芥子氣、蓖麻毒素、肉毒桿菌毒素、蛤蛘毒素、沙林、磷雜環(huán)戊二烯、三氯硝基甲或路易斯毒氣。
18.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是有害的環(huán)境中的試劑。
19.根據權利要求18所述的組合物，其中有害的環(huán)境中的試劑是砷、鉛、汞、氯乙烯、多氯聯(lián)苯、苯、多環(huán)芳香烴、鎘、苯并(a)芘、苯并(b)熒蒽、氯仿、DDT，P，P’ _、阿羅克洛1254、阿羅克洛1260、二苯并(a,h)蒽、三氯乙烯、狄氏劑、六價鉻或DDE，P，P’。
20.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是蛋白或肽。
21.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是碳水化合物。
22.根據權利要求20或21所述的組合物，其中碳水化合物來自傳染性試劑。
23.根據權利要求22所述的組合物，其中傳染性試劑是細菌、真菌、病毒、原生動物或寄生蟲。
24.根據權利要求23所述的組合物，其中細菌是假單胞菌屬、肺炎球菌屬、大腸桿菌、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、密螺旋體、包柔氏螺旋體、衣原體、嗜血桿菌屬、梭菌屬、沙門氏菌屬、軍團桿菌屬、弧菌或腸球菌或分支桿菌屬。
25.根據權利要求23所述的組合物，其中病毒是痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒、人類乳頭瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、委內端拉馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒。
26.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是自身抗原。
27.根據權利要求26所述的組合物，其中自身抗原是蛋白或肽、脂蛋白、脂、碳水化合物或核酸。
28.根據權利要求26所述的組合物，其中自身抗原是酶、結構蛋白、分泌的蛋白、細胞表面受體或細胞因子。
29.根據權利要求28所述的組合物，其中細胞因子是TNF、IL-1或IL-6。
30.根據權利要求26所述的組合物，其中自身抗原是膽固醇酯轉移蛋白(CETP)、與 Alzheimer病相關的A0蛋白、處理A0蛋白的病理形式的蛋白水解酶、與動脈硬化癥相關的LDL或HIV-1的共受體。
31.根據權利要求30所述的組合物，其中處理A0蛋白的病理形式的蛋白水解酶是分泌酶。
32.根據權利要求30所述的組合物，其中與動脈硬化癥相關的LDL是氧化的或最小化修飾的。
33.根據權利要求30所述的組合物，其中HIV-1的共受體是CCR5。
34.根據權利要求2-8任一項所述的組合物，其中B細胞抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原或代謝性疾病酶。
35.根據權利要求34所述的組合物，其中傳染性疾病抗原是病毒抗原。
36.根據權利要求35所述的組合物，其中病毒抗原是來自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒、人類乳頭瘤病毒、水痘_帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細胞巨化病毒、EB病毒、 JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、委內端拉馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。
37.根據權利要求36所述的組合物，其中納米載體包含T細胞抗原。
38.根據權利要求37所述的組合物，其中當納米載體同時包含B細胞和T細胞抗原時，其中B細胞抗原是蛋白、肽或非蛋白抗原。
39.根據權利要求37所述的組合物，其中T細胞抗原是普遍T細胞抗原。
40.根據權利要求39所述的組合物，其中普遍T細胞抗原是源自破傷風類毒素、EB病毒或流感病毒的一個或多個肽。
41.根據權利要求37所述的組合物，其中T細胞抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、接觸致敏劑、半抗原或代謝性疾病酶或酶產物。
42.根據權利要求41所述的組合物，其中傳染性疾病抗原是病毒抗原。
43.根據權利要求42所述的組合物，其中病毒抗原是來自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒、人類乳頭瘤病毒、水痘_帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒、細胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰質炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道腸道病毒、風疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆轉錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、委內端拉馬腦脊髓炎病毒、日本腦炎病毒、黃熱病毒、裂谷熱病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。
44.根據權利要求37-43任一項所述的組合物，其中當納米載體包含B細胞和T細胞抗原時，B細胞抗原和T細胞抗原是不同的抗原。
45.根據權利要求37所述的組合物，其中當納米載體包含B細胞和T細胞抗原時，B細胞抗原和T細胞抗原是相同的。
46.根據權利要求37-45任一項所述的組合物，其中T細胞抗原包埋于納米載體內部。
47.根據權利要求37-45任一項所述的組合物，其中T細胞抗原與納米載體結合。
48.根據權利要求47所述的組合物，其中T細胞抗原與納米載體共價結合。
49.根據權利要求1-48任一項所述的組合物，其中納米載體包含免疫刺激試劑。
50.根據權利要求49所述的組合物，其中免疫刺激試劑位于納米載體表面。
51.根據權利要求49所述的組合物，其中免疫刺激試劑包埋于納米載體內部。
52.根據權利要求49所述的組合物，其中免疫刺激試劑同時位于納米載體表面和包埋于納米載體內部。
53.根據權利要求52所述的組合物，其中位于納米載體表面的免疫刺激試劑和包埋于納米載體內部的免疫刺激試劑是不同的。
54.根據權利要求49所述的組合物，其中納米載體包含一個以上的免疫刺激試劑。
55.根據權利要求54所述的組合物，其中一個以上的免疫刺激試劑是不同的。
56.根據權利要求49-51任一項所述的組合物，其中免疫刺激試劑與納米載體結合。
57.根據權利要求56所述的組合物，其中免疫刺激試劑與納米載體共價結合。
58.根據權利要求49-57任一項所述的組合物，其中免疫刺激試劑選自toll樣受體 (TLR)激動劑、細胞因子激動劑、CD40激動劑、Fc受體激動劑、含有CpG的核酸、補體受體激動劑或佐劑。
59.根據權利要求58所述的組合物，其中TLR激動劑是TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、 TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9 或 TLR-10 激動劑。
60.根據權利要求58所述的組合物，其中Fc受體激動劑是Fc-Y受體激動劑。
61.根據權利要求58所述的組合物，其中補體受體激動劑與CD21或CD35結合。
62.根據權利要求61所述的組合物，其中補體受體激動劑誘導納米載體的內源性補體調理。
63.根據權利要求58所述的組合物，其中細胞因子受體激動劑是細胞因子。
64.根據權利要求58所述的組合物，其中細胞因子受體激動劑是小分子、抗體、融合蛋白或適配子。
65.根據權利要求58所述的組合物，其中佐劑誘導細胞因子的生物合成。
66.根據權利要求58或65所述的組合物，其中佐劑是明礬、MF59、QS21、霍亂毒素、弗氏佐劑、鯊烯、磷酸鹽佐劑或四氯十氧化物。
67.根據權利要求1-66任一項所述的組合物，其中納米載體還包含靶半體。
68.根據權利要求67所述的組合物，其中靶半體位于納米載體表面。
69.根據權利要求68所述的組合物，其中靶半體與納米載體結合。
70.根據權利要求69所述的組合物，其中靶半體與納米載體共價結合。
71.根據權利要求67-70任一項所述的組合物，其中靶半體與細胞表面表達的受體結合。
72.根據權利要求67-70任一項所述的組合物，其中靶半體與可溶性受體結合。
73.根據權利要求72所述的組合物，其中可溶性受體是補體蛋白或預先存在的抗體。
74.根據權利要求67-71任一項所述的組合物，其中靶半體用于將納米載體輸送至抗原呈遞細胞、T細胞或B細胞。
75.根據權利要求74所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是巨噬細胞。
76.根據權利要求75所述的組合物，其中巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞。
77.根據權利要求74所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是樹突狀細胞。
78.根據權利要求74所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是濾泡樹突狀細胞。
79.根據權利要求67-78任一項所述的組合物，其中靶半體是與⑶lib、⑶169、甘露糖受體、DEC-205、CDllc、CD21/CD35、CX3CRl 或 Fc 受體結合的分子。
80.根據權利要求79所述的組合物，其中靶半體是與⑶169、CX3CR1或Fc受體結合的分子。
81.根據權利要求79或80所述的組合物，其中靶半體包含免疫球蛋白的Fc部分。
82.根據權利要求81所述的組合物，其中靶半體包含IgG的Fc部分。
83.根據權利要求1-66任一項所述的組合物，其中納米載體具有正(電位。
84.根據權利要求1-66任一項所述的組合物，其中納米載體在其表面包含一個或多個胺半體。
85.根據權利要求84所述的組合物，其中一個或多個胺半體是一個或多個脂肪族胺。
86.根據權利要求83-85任一項所述的組合物，其中納米載體是乳膠顆粒。
87.根據權利要求83-85任一項所述的組合物，其中納米載體在中性pH具有凈正電荷。
88.根據權利要求1-87任一項所述的組合物，其中納米載體由一個或多個聚合物組成。
89.根據權利要求88所述的組合物，其中一個或多個聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物。
90.根據權利要求89所述的組合物，其中可溶于水的非吸附性聚合物是PEG、PE0、聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。
91.根據權利要求88所述的組合物，其中一個或多個聚合物是生物可降解聚合物。
92.根據權利要求88所述的組合物，其中一個或多個聚合物是生物可兼容聚合物，所述生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。
93.根據權利要求91或92所述的組合物，其中生物可降解聚合物是PLA、PGA或PLGA。
94.根據權利要求1-93任一項所述的組合物，其中納米載體通過自組裝形成。
95.根據權利要求1-94任一項所述的組合物，其中免疫應答被誘導、增強、抑制、引導或重引導。
96.根據權利要求1-95任一項所述的組合物，其中納米載體靶向一個或多個次級淋巴組織或器官。
97.根據權利要求96所述的組合物，其中次級淋巴組織或器官是淋巴結、脾、派亞氏淋巴叢、闌尾或扁桃體。
98.根據權利要求1-97任一項所述的組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆?；?皮可米顆粒。
99.根據權利要求98所述的組合物，其中顆粒通過自組裝形成。
100.一種包含納米載體的組合物，所述納米載體包含(a)聚合物與抗原的偶聯(lián)體， (b)聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體，和/或(c)聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。
101.根據權利要求100所述的組合物，其中納米載體包含(a)聚合物與抗原的偶聯(lián)體和(b)聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體。
102.根據權利要求100所述的組合物，其中納米載體包含(a)聚合物與抗原的偶聯(lián)體和(c)聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。
103.根據權利要求100所述的組合物，其中納米載體包含(b)聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體和(c)聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。
104.根據權利要求100所述的組合物，其中納米載體包含(a)聚合物與抗原的偶聯(lián)體， (b)聚合物與免疫刺激試劑的偶聯(lián)體和(c)聚合物與靶半體的偶聯(lián)體。
105.根據權利要求100-104任一項所述的組合物，其中偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。
106.根據權利要求100-105任一項所述的組合物，其中納米載體通過自組裝形成微米顆粒、納米顆?；蚱た擅最w粒。
107.根據權利要求101-102和104-106任一項所述的組合物，其中抗原是B細胞抗原。
108.根據權利要求107所述的組合物，其中納米載體還包含聚合物和T細胞抗原的偶聯(lián)體。
109.根據權利要求108所述的組合物，其中偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。
110.根據權利要求101-102和104-106任一項所述的組合物，其中抗原是T細胞抗原。
111.根據權利要求110所述的組合物，其中納米載體還包含聚合物和B細胞抗原的偶聯(lián)體。
112.根據權利要求111所述的組合物，其中偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。
113.—種包含納米載體的組合物，所述納米載體包含具有以下通式X-L1-Y-L2-Z的分子，其中X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半體、免疫刺激試劑、免疫調節(jié)試劑或藥學試劑，L1和L2是鍵或連接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和 Z不能同時不存在。
114.根據權利要求113所述的組合物，其中納米載體載體包埋抗原、免疫刺激試劑或
115.根據權利要求113或114所述的組合物，其中Z是抗原。
116.根據權利要求113-115任一項所述的組合物，其中Z是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。
117.根據權利要求114所述的組合物，其中抗原是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。
118.根據權利要求113、114或117任一項所述的組合物，其中Z是與細胞表面表達的受體結合的靶半體。
119.根據權利要求113、114或117任一項所述的組合物，其中Z是與可溶性受體結合的靶半體。
120.根據權利要求119所述的組合物，其中可溶性受體是補體蛋白或預先存在的抗體。
121.根據權利要求113-118任一項所述的組合物，其中靶半體用于將納米載體輸送至抗原呈遞細胞、T細胞或B細胞。
122.根據權利要求121所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是巨噬細胞。
123.根據權利要求122所述的組合物，其中巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞。
124.根據權利要求121所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是樹突狀細胞。
125.根據權利要求121所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是濾泡樹突狀細胞。
126.根據權利要求113-118任一項所述的組合物，其中靶半體是與⑶lib、⑶169、甘露糖受體、DEC-205、CDllc、CD21/CD35、CX3CRl 或 Fc 受體結合的分子。
127.根據權利要求126所述的組合物，其中靶半體是與⑶169、CX3CR1或Fc受體結合的分子。
128.根據權利要求113-127任一項所述的組合物，其中Y是PEG、PE0、聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。
129.根據權利要求113-128任一項所述的組合物，其中X是PLGA、PLA或PGA。
130.根據權利要求113和121-126任一項所述的組合物，其中Z不存在。
131.根據權利要求113-130任一項所述的組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆 ?；蚱た擅最w粒。
132.根據權利要求131所述的組合物，其中顆粒通過自組裝形成。
133.—種包含納米載體的組合物，所述納米載體包含免疫刺激試劑。
134.根據權利要求133所述的組合物，還包含抗原和/或靶半體。
135.根據權利要求134所述的組合物，其中抗原、靶半體和免疫刺激試劑中的至少一個偶聯(lián)至可溶于水的非吸附性聚合物。
136.根據權利要求134所述的組合物，其中抗原、靶半體和免疫刺激試劑中的至少一個偶聯(lián)至生物可降解聚合物。
137.根據權利要求134所述的組合物，其中抗原、靶半體和免疫刺激試劑中的至少一個偶聯(lián)至生物可兼容聚合物，所述生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。
138.根據權利要求134-137任一項所述的組合物，其中抗原是B細胞抗原。
139.根據權利要求138所述的組合物，其中B細胞抗原是T細胞非依賴性抗原。
140.根據權利要求138或139所述的組合物，其中納米載體還包含T細胞抗原。
141.根據權利要求134-137任一項所述的組合物，其中抗原是T細胞抗原。
142.根據權利要求134-141任一項所述的組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆粒或皮可米顆粒。
143.根據權利要求142所述的組合物，其中顆粒通過自組裝形成。
144.一種包含微米顆粒、納米顆?；蚱た擅最w粒的組合物，所述微米顆粒、納米顆?；?皮可米顆粒包含小分子、靶半體、免疫刺激試劑和T細胞抗原。
145.根據權利要求144所述的組合物，其中小分子偶聯(lián)至聚合物。
146.根據權利要求145所述的組合物，其中聚合物是生物可兼容聚合物，其為可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。
147.根據權利要求144-146任一項所述的組合物，其中靶半體偶聯(lián)至聚合物。
148.根據權利要求147所述的組合物，其中聚合物是生物可兼容聚合物，其為可溶于水的非吸附性聚合物與生物可降解聚合物的偶聯(lián)體。
149.根據權利要求144-148任一項所述的組合物，其中免疫刺激試劑偶聯(lián)至生物可降解聚合物。
150.根據權利要求146、148或149任一項所述的組合物，其中生物可降解聚合物是 PLGA, PLA 或 PGA。
151.根據權利要求146或148所述的組合物，其中可溶于水的非吸附性聚合物是PEG、 PE0、聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。
152.根據權利要求144-150任一項所述的組合物，其中顆粒通過自組裝形成。
153.根據權利要求144-150任一項所述的組合物，其中小分子是令人上癮的物質、來自化學武器的小分子或有害的環(huán)境中的物質。
154.一種包含靶向特異性細胞或組織并且調節(jié)免疫應答的納米載體的組合物，所述納米載體在其表面包含能激活B細胞受體的密度的B細胞抗原，以及免疫刺激試劑。
155.根據權利要求154所述的組合物，其中納米載體還包含靶半體。
156.根據權利要求155或155所述的組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆?；蚱?可米顆粒。
157.根據權利要求156所述的組合物，其中顆粒通過自組裝形成。
158.根據權利要求1-157任一項所述的組合物，其中組合物是藥物組合物并進一步包含藥學上可接受的載體。
159.根據權利要求158所述的組合物，其中藥物組合物是疫苗組合物。
160.—種藥物組合物，其包含靶向抗原呈遞細胞的半體和納米載體的偶聯(lián)體。
161.根據權利要求160所述的藥物組合物，其中偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。
162.根據權利要求160或161所述的藥物組合物，其中靶向抗原呈遞細胞的半體靶向巨噬細胞。
163.根據權利要求162所述的藥物組合物，其中巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞。
164.根據權利要求160或161所述的藥物組合物，其中靶向抗原呈遞細胞的半體靶向樹突狀細胞。
165.根據權利要求160或161所述的藥物組合物，其中靶向抗原呈遞細胞的半體靶向濾泡樹突狀細胞。
166.根據權利要求160-165任一項所述的藥物組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆?；蚱た擅最w粒。
167.根據權利要求166所述的藥物組合物，其中顆粒通過自組裝形成。
168.—種藥物組合物，其包含免疫刺激試劑和納米載體的偶聯(lián)體。
169.根據權利要求168所述的藥物組合物，其中偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。
170.根據權利要求168或169所述的藥物組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆粒或皮可米顆粒。
171.根據權利要求170所述的藥物組合物，其中顆粒通過自組裝形成。
172.—種組合物，其包含具有通式X-L1-Y-L2-Z的分子，其中X是生物可降解聚合物， Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半體、免疫刺激試劑、免疫調節(jié)試劑或藥學試劑，L1 和L2是鍵或連接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同時不存在。
173.一種組合物，其包含具有通式T-L1-X-L2-Y-L3-Z的分子，其中T是T細胞抗原，X 是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是B細胞抗原，其中LI、L2和L3 是鍵或連接分子，其中T、Y和Z中任意一個或任意兩個可以不存在，但T、Y和Z不能三者同時不存在。
174.根據權利要求172所述的組合物，其中Z是抗原。
175.根據權利要求172-174任一項所述的組合物，其中Z是退行性疾病抗原、傳染性疾病抗原、癌癥抗原、變態(tài)反應性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同種抗原、異種抗原、變應原、半抗原、令人上癮的物質或代謝性疾病酶或酶產物。
176.根據權利要求175所述的組合物，其中Z是與細胞表面表達的受體結合的靶半體。
177.根據權利要求175所述的組合物，其中Z是與可溶性受體結合的靶半體。
178.根據權利要求177所述的組合物，其中可溶性受體是補體或預先存在的抗體。
179.根據權利要求175-176任一項所述的組合物，其中靶半體用于靶向抗原呈遞細胞、T細胞或B細胞。
180.根據權利要求179所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是巨噬細胞。
181.根據權利要求180所述的組合物，其中巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞。
182.根據權利要求179所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是樹突狀細胞。
183.根據權利要求179所述的組合物，其中抗原呈遞細胞是濾泡樹突狀細胞。
184.根據權利要求175-176任一項所述的組合物，其中靶半體是與⑶lib、⑶169、甘露糖受體、DEC-205、CDllc、CD21/CD35、CX3CRl或Fc受體特異性結合的分子。
185.根據權利要求184所述的組合物，其中靶半體⑶169、CX3CR1或Fc受體。
186.根據權利要求175-188任一項所述的組合物，其中Y是PEG、PE0、聚烷撐二醇或聚亞烷基氧化物。
187.根據權利要求175-186任一項所述的組合物，其中X是PLGA、PGA或PLA。
188.根據權利要求175和186-188任一項所述的組合物，其中Z不存在。
189.根據權利要求175和186-187任一項所述的組合物，其中Y不存在。
190.一種藥物組合物，其包含免疫刺激試劑和聚合物的偶聯(lián)體。
191.根據權利要求190所述的組合物，其中偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。
192.根據權利要求190或191所述的藥物組合物，其中聚合物是生物可兼容聚合物。
193.根據權利要求192所述的藥物組合物，其中生物可兼容聚合物是生物可降解聚合物或可溶于水的非吸附性聚合物。
194.根據權利要求193所述的藥物組合物，其中生物可降解聚合物是合成的。
195.根據權利要求190-194任一項所述的藥物組合物，其中藥物組合物包含納米載體，其中偶聯(lián)體是納米載體的成分。
196.根據權利要求195所述的藥物組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆?；蚱?可米顆粒。
197.根據權利要求190-196任一項所述的藥物組合物，還包含抗原。
198.根據權利要求190-196任一項所述的藥物組合物，其中藥物組合物不包含抗原。
199.根據權利要求190-198任一項所述的藥物組合物，還包含靶半體。
200.一種疫苗組合物，其包含免疫刺激試劑和聚合物的偶聯(lián)體。
201.根據權利要求200所述的疫苗組合物，其中偶聯(lián)體是共價偶聯(lián)體。
202.根據權利要求200或201所述的疫苗組合物，其中聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物。
203.根據權利要求202所述的疫苗組合物，其中聚合物是合成的。
204.根據權利要求202或203所述的疫苗組合物，其中可溶于水的非吸附性聚合物是聚乙二醇。
205.根據權利要求200-204任一項所述的疫苗組合物，其中疫苗組合物包含納米載體，其中偶聯(lián)體是納米載體的成分。
206.根據權利要求205所述的疫苗組合物，其中納米載體是微米顆粒、納米顆粒或皮可米顆粒。
207.根據權利要求200-206任一項所述的疫苗組合物，還包含抗原。
208.根據權利要求200-206任一項所述的疫苗組合物，其中疫苗組合物不包含抗原。
209.根據權利要求200-208任一項所述的疫苗組合物，還包含靶試劑。
210.一種方法，包括向個體施用有效量的根據權利要求1-209任一項所述的組合物以調節(jié)免疫應答。
211.根據權利要求210所述的方法，其中組合物為有效誘導或增強免疫應答的量。
212.根據權利要求211所述的方法，其中個體患有或者易于患上癌癥、傳染性疾病、非自身免疫代謝或退行性疾病或上癮癥。
213.根據權利要求212所述的方法，其中傳染性疾病是慢性病毒感染。
214.根據權利要求213所述的方法，其中慢性病毒感染是HIV、HPV、HBV或HCV感染。
215.根據權利要求212所述的方法，其中傳染性疾病是細菌感染或由細菌感染引起。
216.根據權利要求212所述的方法，其中個體患有或易于患上假單胞菌感染、肺炎球菌感染、肺結核、瘧疾、利什曼病、幽門螺旋桿菌、葡萄狀球菌感染或沙門氏菌感染。
217.根據權利要求212所述的方法，其中傳染性疾病是真菌感染或由真菌感染引起。
218.根據權利要求212所述的方法，其中傳染性疾病是寄生蟲感染或由寄生蟲感染引起。
219.根據權利要求212所述的方法，其中傳染性疾病是原生動物感染或由原生動物感染引起。
220.根據權利要求212所述的方法，其中個體患有或易于患上流感。
221.根據權利要求210所述的方法，其中組合物以有效抑制免疫應答的量施用。
222.根據權利要求210所述的方法，其中組合物以有效調節(jié)免疫應答的量施用。
223.根據權利要求221或222所述的方法，其中個體患有自身免疫疾病、過敏癥或哮喘。
224.根據權利要求223所述的方法，其中自身免疫疾病是狼瘡、多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、I型糖尿病、炎癥性腸病、甲狀腺炎或腹腔疾病。
225.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；用于將納米載體輸送至抗原呈遞細胞、T細胞或B細胞的靶半體；和賦形劑。
226.根據權利要求225所述的納米載體，其中巨噬細胞是被膜下竇巨噬細胞。
227.根據權利要求225所述的納米載體，其中抗原呈遞細胞是樹突狀細胞。
228.根據權利要求225所述的納米載體，其中抗原呈遞細胞是濾泡樹突狀細胞。
229.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；用于將納米載體輸送至被膜下竇巨噬細胞的靶半體；和賦形劑。
230.一種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；用于將納米載體輸送至樹突狀細胞的靶半體；和賦形劑。
231.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；用于將納米載體輸送至濾泡樹突狀細胞的靶半體；和賦形劑。231.一種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；用于將納米載體輸送至濾泡樹突狀細胞的靶半體；和賦形劑。
232.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；靶半體，其中靶半體特異性結合至⑶lib ；和賦形劑。
233.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；靶半體，其中靶半體特異性結合至⑶169 ；和賦形劑。
234.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；靶半體，其中靶半體特異性結合至甘露糖受體；和賦形劑。
235.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；靶半體，其中靶半體特異性結合至DEC-205 ；和賦形劑。
236.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；靶半體，其中靶半體特異性結合至⑶11c ；和賦形劑。
237.—種納米載體，其包含能夠刺激T細胞和B細胞中免疫應答的免疫調節(jié)試劑；靶半體，其中靶半體特異性結合至⑶21/⑶35 ；和賦形劑。
238.—種納米載體，其包含能夠刺激區(qū)域淋巴結中的T細胞和B細胞中的免疫應答的免疫調節(jié)試劑；用于將納米載體輸送至抗原呈遞細胞、T細胞或B細胞的靶半體；和賦形劑。
239.—種納米載體，其包含第一免疫調節(jié)試劑，其中第一免疫調節(jié)試劑位于納米載體表面并能夠刺激B細胞或抗原呈遞細胞；第二免疫調節(jié)試劑，其中第二免疫調節(jié)試劑位于納米載體表面或者包埋于納米載體內部并且能夠被抗原呈遞細胞處理并呈遞給T細胞；和賦形劑。
240.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過將接受免疫的個體的抗體效價與未接受免疫的個體的抗體效價進行比較而確定B細胞中免疫應答的刺激。
241.根據權利要求240所述的納米載體，其中如果接受免疫的個體的抗體效價經測定比未接受免疫的個體高約10倍，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
242.根據權利要求240所述的納米載體，其中如果接受免疫的個體的抗體效價經測定比未接受免疫的個體高約100倍，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
243.根據權利要求240所述的納米載體，其中如果接受免疫的個體的抗體效價經測定比未接受免疫的個體高約1000倍，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
244.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過測定抗體親和性確定B細胞中免疫應答的刺激。
245.根據權利要求244所述的納米載體，其中通過測定抗體的平衡解離常數確定抗體親和性。
246.根據權利要求245所述的納米載體，其中如果抗體具有10_7M以下的平衡解離常數，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
247.根據權利要求245所述的納米載體，其中如果抗體具有10_8M以下的平衡解離常數，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
248.根據權利要求245所述的納米載體，其中如果抗體具有10_9M以下的平衡解離常數，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
249.根據權利要求245所述的納米載體，其中如果抗體具有l(wèi)O^M以下的平衡解離常數，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
250.根據權利要求245所述的納米載體，其中如果抗體具有10-"M以下的平衡解離常數，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
251.根據權利要求245所述的納米載體，其中如果抗體具有10_12M以下的平衡解離常數，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
252.根據權利要求239所述的納米載體，其中如果B細胞中發(fā)生類別轉換重組，則稱B 細胞中的免疫應答被刺激。
253.根據權利要求252所述的納米載體，其中B細胞中的類別轉換重組引起B(yǎng)細胞產生的抗體同種型由IgM轉換為IgG。
254.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過測定抗原特異性抗體的親和成熟確定B細胞中免疫應答的刺激。
255.根據權利要求239所述的納米載體，其中如果形成了記憶B細胞或能夠長時間地產生大量的高親和性抗體的長生血漿細胞，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
256.根據權利要求239所述的納米載體，其中如果發(fā)生有力的生發(fā)中心反應，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
257.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過進行組織學分析確定已經發(fā)生了有力的生發(fā)中心反應。
258.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過進行淋巴組織的免疫熒光確定已經發(fā)生了有力的生發(fā)中心反應。
259.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過鑒定抗體的同種型確定B細胞中免疫應答的刺激。
260.根據權利要求259所述的納米載體，其中如果B細胞被鑒定為產生IgG同種型抗體，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
261.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過分析中和檢驗中抗體的功能確定B 細胞中免疫應答的刺激。
262.根據權利要求261所述的納米載體，其中如果微生物感染被約1 10的稀釋度中和，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
263.根據權利要求261所述的納米載體，其中如果微生物感染被約1 100的稀釋度中和，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
264.根據權利要求261所述的納米載體，其中如果微生物感染被約1 1000的稀釋度中和，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
265.根據權利要求261所述的納米載體，其中如果微生物感染被約1 5000的稀釋度中和，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
266.根據權利要求261所述的納米載體，其中如果微生物感染被約1 10，000的稀釋度中和，則稱B細胞中的免疫應答被刺激。
267.根據權利要求239所述的納米載體，其中通過測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子確定T細胞中免疫應答的刺激。
268.根據權利要求267所述的納米載體，其中細胞因子是IFNY、IL-4、IL-2或TNFa。
269.根據權利要求267所述的納米載體，其中通過細胞內細胞因子染色然后進行流式細胞術而測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。
270.根據權利要求267所述的納米載體，其中通過表面捕獲細胞因子染色然后進行流式細胞術而測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。
271.根據權利要求267所述的納米載體，其中通過ELISA確定培養(yǎng)物上清液中細胞因子的濃度而測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。
272.根據權利要求269所述的納米載體，其中如果至少的抗原特異性T細胞產生細胞因子，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
273.根據權利要求269所述的納米載體，其中如果至少25%的抗原特異性T細胞產生細胞因子，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
274.根據權利要求269所述的納米載體，其中如果至少50%的抗原特異性T細胞產生細胞因子，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
275.根據權利要求269所述的納米載體，其中如果至少90%的抗原特異性T細胞產生細胞因子，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
276.根據權利要求269所述的納米載體，其中如果基本上100%的抗原特異性T細胞產生細胞因子，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
277.根據權利要求267所述的納米載體，其中通過ELISP0T檢驗測定抗原誘導的由T 細胞產生的細胞因子。
278.根據權利要求277所述的納米載體，其中如果經免疫的個體包含比原態(tài)對照多約 10倍的產生細胞因子的細胞，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
279.根據權利要求277所述的納米載體，其中如果經免疫的個體包含比原態(tài)對照多約 100倍的產生細胞因子的細胞，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
280.根據權利要求277所述的納米載體，其中如果經免疫的個體包含比原態(tài)對照多約 1000倍的產生細胞因子的細胞，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
281.根據權利要求277所述的納米載體，其中如果經免疫的個體包含比原態(tài)對照多約 10，000倍的產生細胞因子的細胞，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
282.根據權利要求277所述的納米載體，其中如果經免疫的個體包含比原態(tài)對照多約 100, 000倍的產生細胞因子的細胞，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
283.根據權利要求267所述的納米載體，其中通過確定抗原誘導的T細胞增殖而測定抗原誘導的由T細胞產生的細胞因子。
284.根據權利要求283所述的納米載體，其中通過將測試樣品中H3-胸苷的攝入與原態(tài)對照中H3-胸苷的攝入進行比較而測定抗原誘導的T細胞增殖。
285.根據權利要求284所述的納米載體，其中如果測試樣品中H3-胸苷的攝入比原態(tài) 對照中高約10倍，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
286.根據權利要求284所述的納米載體，其中如果測試樣品中H3-胸苷的攝入比原態(tài) 對照中高約50倍，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
287.根據權利要求284所述的納米載體，其中如果測試樣品中H3-胸苷的攝入比原態(tài) 對照中高約100倍，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
288.根據權利要求284所述的納米載體，其中如果測試樣品中H3-胸苷的攝入比原態(tài)對照中高約1000倍，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
289.根據權利要求284所述的納米載體，其中如果測試樣品中H3-胸苷的攝入比原態(tài) 對照中高約10倍，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
290.根據權利要求283所述的納米載體，其中通過進行羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 (CFSE)稀釋檢驗而測定抗原誘導的T細胞增殖。
291.根據權利要求290所述的納米載體，其中如果CFSE稀釋為約10%，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
292.根據權利要求290所述的納米載體，其中如果CFSE稀釋為約25%，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
293.根據權利要求290所述的納米載體，其中如果CFSE稀釋為約50%，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
294.根據權利要求290所述的納米載體，其中如果CFSE稀釋為約75%，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
295.根據權利要求291所述的納米載體，其中如果CFSE稀釋為約100%，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
296.根據權利要求267所述的納米載體，其中通過測定T細胞激活的細胞標記物而確定T細胞中的免疫應答的刺激。
297.根據權利要求296所述的納米載體，其中如果相對于原態(tài)對照細胞而言T細胞表達升高水平的⑶11a⑶27、⑶25、⑶40L、⑶44、⑶45R0或⑶69，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
298.根據權利要求296所述的納米載體，其中如果相對于原態(tài)對照細胞而言T細胞表達更低水平的L-選擇素(⑶62L)、⑶45RA或CCR7，則稱T細胞中的免疫應答被刺激。
299.根據權利要求267所述的納米載體，其中通過檢驗效應CD8+T細胞抵抗抗原沖擊的靶細胞的細胞毒性而確定T細胞中的免疫應答的刺激。
300.根據權利要求299所述的納米載體，其中通過使用51鉻(51Cr)釋放檢驗而進行效應CD8+T細胞抵抗抗原沖擊的靶細胞的細胞毒性檢驗。
301.根據權利要求225所述的納米載體，其中免疫調節(jié)試劑與納米載體共價結合。
302.根據權利要求225所述的納米載體，其中免疫調節(jié)試劑與納米載體非共價結合。
303.根據權利要求302所述的納米載體，其中非共價結合由電荷相互作用、親和相互作用、金屬配合、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華力相互作用、磁性相互作用、靜電相互作用、或偶極_偶極相互作用所介導。
304.根據權利要求225所述的納米載體，還包含第二個免疫調節(jié)試劑。
305.根據權利要求225所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑能夠刺激T細胞中的免疫應答。
306.根據權利要求225所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑能夠刺激B細胞中的免疫應答。
307.根據權利要求225所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑能夠刺激抗原呈遞細胞中的免疫應答。
308.根據權利要求225所述的納米載體，還包含靶半體。
309.根據權利要求225所述的納米載體，還包含多個靶半體。
310.根據權利要求309所述的納米載體，其中多個靶半體中所有的單獨的靶半體彼此相同。
311.根據權利要求309所述的納米載體，其中多個靶半體中所有的單獨的靶半體彼此不相同。
312.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體選自抗體、抗體片段、蛋白、肽、糖蛋白、適配子、寡核苷酸、碳水化合物、脂、葡胺聚糖、affibody、adnectin, spiegelmer, avimer> nanobody 禾口小分子。
313.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向抗原呈遞細胞。
314.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向選自的樹突狀細胞(DC)、被膜下竇巨噬細胞(SCS-Mph)、B細胞或濾泡樹突狀細胞(FDC)的抗原呈遞細胞。
315.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向樹突狀細胞。
316.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向DEC-205(CD205)。
317.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向CD169。
318.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向CDllb。
319.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向甘露糖受體。
320.根據權利要求308所述的納米載體，其中靶半體靶向CD21/CD35(CR2/CR1)。
321.根據權利要求225所述的納米載體，還包含免疫刺激試劑。
322.根據權利要求321所述的納米載體，其中免疫刺激試劑選自toll樣受體(TLR)激動劑、細胞因子受體激動劑、CD40激動劑、Fc受體激動劑或補體受體激動劑。
323.根據權利要求225所述的納米載體，還包含TLR-7激動劑。
324.根據權利要求225所述的納米載體，還包含CpG。
325.根據權利要求225所述的納米載體，還包含TLR-4激動劑。
326.根據權利要求225所述的納米載體，還包含細菌脂多糖(LPS)。
327.根據權利要求225所述的納米載體，還包含⑶40激動劑。
328.根據權利要求225所述的納米載體，還包含TLR-2激動劑。
329.根據權利要求225所述的納米載體，還包含F(xiàn)c-Y受體激動劑。
330.根據權利要求225所述的納米載體，還包含補體受體激動劑。
331.根據權利要求324所述的納米載體，其中補體受體激動劑與CD21或CD35結合。
332.根據權利要求225所述的納米載體，還包含細胞因子。
333.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體包含脂膜。
334.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體包含聚合物基質。
335.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體包含金屬顆粒。
336.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體是包含兩性物質的脂質體。
337.根據權利要求336所述的納米載體，其中兩性物質位于脂質體的內表面內。
338.根據權利要求336所述的納米載體，其中兩性物質選自磷脂酰膽堿、脂A、膽固醇、長醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、糖基神經酰胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸或溶血磷脂。
339.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體是基于脂質體_聚合物的納米載體。
340.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體是基于脂單層的納米載體。
341.根據權利要求225所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑位于反膠團內。
342.根據權利要求225所述的納米載體，其中賦形劑是選自聚乙烯，聚碳酸酯、聚酐、多羥基酸、聚丙基丁烯二酸酯、聚己內酯、聚酰胺、聚縮醛，聚醚，聚酯、聚(原酸酯)，聚腈基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯、聚胺、其衍生物、其組合物、或其共聚物的聚合物。
343.根據權利要求225所述的納米載體，其中賦形劑是選自下列的聚合物聚乙二醇 (PEG)；聚(乳酸-羥基乙酸)；聚(乳酸-羥基乙酸)和聚乙二醇的共聚物；聚(丙交酯-乙交酯) ’聚(丙交酯_乙交酯)和PEG的共聚物；聚羥基乙酸；聚羥基乙酸和PEG的共聚物；聚-L-乳酸 ’聚-L-乳酸和PEG的共聚物；聚-D-乳酸；聚-D-乳酸與PEG的共聚物；聚-D， L-乳酸；聚-D，L-乳酸與PEG的共聚物；聚-L-丙交酯；聚-L-丙交酯與PEG的共聚物；聚-D-丙交酯 ’聚-D-丙交酯與PEG的共聚物；聚-D，L-丙交酯 ’聚-D，L-丙交酯與PEG的共聚物 ’聚(原酸酯) ’聚(原酸酯)與PEG的共聚物 ’聚(己內酯)；聚(己內酯)與PEG 的共聚物；聚賴氨酸；聚賴氨酸與PEG的共聚物；聚(乙烯亞胺)；聚(乙烯亞胺)與PEG的共聚物；聚羥基酸；聚酐 ’聚(L-丙交酯-L-賴氨酸)；聚(絲氨酸酯)；聚(4-羥基-L-脯氨酸酯) ’聚[a-(4-氨基丁基)-L-羥基乙酸]；其衍生物；其組合；或其共聚物。
344.根據權利要求225所述的納米載體，其中賦形劑是聚乙二醇和聚(丙交酯-乙交酯)共聚物的共聚物。
345.根據權利要求225所述的納米載體，其中賦形劑是聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物 (PLGA)。
346.根據權利要求225所述的納米載體，其中賦形劑包含聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物(PLGA)、脂和聚乙二醇。
347.根據權利要求225所述的納米載體，其中賦形劑包含脂。
348.根據權利要求225所述的納米載體，其中脂選自磷脂酰膽堿、脂A、膽固醇、長醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神經酰胺、糖基神經酰胺、腦苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、心磷脂、磷脂酸或溶血磷脂。
349.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體具有大約lOnm至大約200nm范圍的直徑。
350.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體具有大約50nm至大約200nm范圍的直徑。
351.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體具有大約lOnm至大約150nm范圍的直徑。
352.根據權利要求225所述的納米載體，其中納米載體具有大約50nm至大約150nm范圍的直徑。
353.根據權利要求225所述的納米載體，其中第一個免疫調節(jié)試劑是B細胞抗原。
354.根據權利要求225所述的納米載體，其中第一個免疫調節(jié)試劑是源自病原體的蛋白。
355.根據權利要求225所述的納米載體，其中第一個免疫調節(jié)試劑是肽的集合。
356.根據權利要求225所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑是T細胞抗原。
357.根據權利要求225所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑是源自病原體的蛋白。
358.根據權利要求225所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑是肽的集合。
359.根據權利要求225所述的納米載體，其中第一個免疫調節(jié)試劑和第二個免疫調節(jié) 試劑彼此相同。
360.根據權利要求225所述的納米載體，其中第一個免疫調節(jié)試劑和第二個免疫調節(jié) 試劑彼此不相同。
361.—種藥物組合物，其包含治療上有效量的根據權利要求225所述的納米載體和藥學上可接受的賦形劑。
362.一種藥物組合物，其包含治療上有效量的根據權利要求225所述的納米載體和藥學上可接受的佐劑。
363.根據權利要求362所述的藥物組合物，其中佐劑是明礬、MF59(Novartis)、QS21、霍亂毒素、弗氏佐劑、鯊烯、磷酸鹽佐劑或四氯十氧化物。
364.—種制備根據權利要求225所述的納米載體的方法，該方法包括以下步驟提供免疫調節(jié)試劑；聚合物；脂；和將免疫調節(jié)試劑、靶半體、聚合物和脂混合；和允許納米載體發(fā)生自組裝。
365.一種制備根據權利要求225所述的納米載體的方法，該方法包括以下步驟提供免疫調節(jié)試劑；顆粒；脂；和將免疫調節(jié)試劑、靶半體、顆粒和脂混合；和允許納米載體發(fā)生自組裝。
366.根據權利要求364或365所述的方法，還包括提供靶半體的步驟。
367.一種制備根據權利要求225所述的納米載體的方法，該方法包括以下步驟提供第一混合物，其包含疏水性免疫調節(jié)試劑；和脂；和提供第二混合物，其包含親水性免疫調節(jié)試劑；和水溶液；和將第一混合物和第二混合物組合，其中第一混合物和第二混合物的組合產生通過自組裝形成的納米載體。
368.一種免疫接種個體的方法，該方法包括以下步驟向個體施用治療上有效量的根據權利要求225所述的納米載體。
369.一種納米載體，其包含包含免疫調節(jié)試劑的外部部分，其中免疫調節(jié)試劑能夠刺激B細胞和T細胞；內部部分；和賦形劑。
370.根據權利要求369所述的納米載體，其中內部部分包含免疫調節(jié)試劑，其中內部部分的免疫調節(jié)試劑能夠被抗原呈遞細胞處理并呈遞至T細胞。
371.一種納米載體，其包含包含免疫調節(jié)試劑的外部部分，其中免疫調節(jié)試劑能夠刺激B細胞和抗原呈遞細胞；內部部分；和賦形劑。
372.根據權利要求371所述的納米載體，其中免疫調節(jié)試劑能夠被抗原呈遞細胞處理并呈遞至T細胞。
373.根據權利要求371所述的納米載體，其中外部部分包含第二個免疫調節(jié)試劑，其中外部部分的第二個免疫調節(jié)試劑能夠被抗原呈遞細胞處理并呈遞至T細胞。
374.根據權利要求371所述的納米載體，其中內部部分包含免疫調節(jié)試劑，其中內部部分的免疫調節(jié)試劑能夠被抗原呈遞細胞處理并呈遞至T細胞。
375.根據權利要求369所述的納米載體，其中外部部分是脂。
376.根據權利要求375所述的納米載體，其中外部脂部分包含脂雙層。
377.根據權利要求375所述的納米載體，其中外部脂部分包含脂單層。
378.根據權利要求375所述的納米載體，其中免疫調節(jié)試劑與脂外部分的外表面結合
379.根據權利要求375所述的納米載體，其中免疫調節(jié)試劑與脂外部分的內表面結合.
380.根據權利要求375所述的納米載體，其中免疫調節(jié)試劑嵌于脂外部分內部。
381.根據權利要求376所述的納米載體，其中免疫調節(jié)試劑嵌于脂雙層的腔內。
382.根據權利要求375所述的納米載體，其中脂外部分的內表面與兩性物質結合。
383.根據權利要求369所述的納米載體，其中內部分包含聚合物基質。
384.根據權利要求383所述的納米載體，其中聚合物基質包含交聯(lián)的聚合物網。
385.根據權利要求383所述的納米載體，其中第二個免疫調節(jié)試劑分布于聚合物基質中。
386.根據權利要求383所述的納米載體，其中至少一個免疫調節(jié)試劑包埋于反膠團內，并且其中反膠團包含在內聚合物部分內。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于將納米載體輸送至免疫系統(tǒng)的細胞的組合物和系統(tǒng)。本發(fā)明提供了能夠刺激T細胞和/或B細胞中免疫應答的疫苗納米載體，在一些具體實施方式
中，所述疫苗納米載體包含至少一個免疫調節(jié)試劑，可選地包含至少一個靶半體和可選的至少一個免疫刺激試劑。本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的疫苗納米載體的藥物組合物。本發(fā)明提供了設計、制備和使用本發(fā)明的疫苗納米載體及其藥物組合物的方法。本發(fā)明提供了預防和/或治療疾病、失調和病癥的方法，所述方法包括向有需要的個體施用至少一個本發(fā)明的疫苗納米載體。
文檔編號A61K39/00GK101861165SQ200880116677
公開日2010年10月13日申請日期2008年10月12日優(yōu)先權日2007年10月12日
發(fā)明者A·莫斯曼, F·亞歷克西, M·揚納科內, O·C·法羅科澤德, P·巴斯托, R·S·蘭格, T·容特, U·H·馮安德里安, 張良方申請人:麻省理工學院

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