專(zhuān)利名稱(chēng)：用于預(yù)防白發(fā)和治療白斑的含有竹芋淀粉的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預(yù)防白發(fā)(gray hair)和治療白斑的組合物，其含有竹芋淀粉 (arrowroot)作為活性成分，更具體地，涉及用于預(yù)防白發(fā)和治療白斑的組合物，其旨在提 高黑素細(xì)胞中小眼相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(MITF)的表達(dá)，進(jìn)而活化黑素細(xì)胞并提高黑色素合成。
背景技術(shù)：
隨著年齡的增加，人們的頭發(fā)一般會(huì)變白。由于白發(fā)會(huì)使人看上去顯老，染發(fā)劑被開(kāi)發(fā)并用于遮掩白發(fā)并使其恢復(fù)成黑色或其它顏色。但是，染發(fā)僅能暫時(shí)地持續(xù)。隨著白 發(fā)的生長(zhǎng)，還需要再進(jìn)行染發(fā)。此外，現(xiàn)在使用的氧化性染發(fā)劑由于其含有的氧化劑等可能 會(huì)導(dǎo)致皮膚損傷。已經(jīng)公開(kāi)以下所述作為白發(fā)抑制劑黑芝麻、核桃、墨旱蓮(Eclipta prostrate) 和蜂蜜，它們與配料熟地黃、天冬(asparagus)和麥冬(Liriope platyphylla)混合；火炭 母、側(cè)柏葉、女貞子、墨旱蓮、礦塊鹽(rock salt)、熟地黃、天冬蘆筍、闊葉山麥冬和黑豆，在 50°C煎煮；黑芝麻、紅松葉(Korean black pine leaf)和昆布；刺五加(Eleutherococcus senticosus)提取物；垂體激素；c_AMP(3’，5’ -環(huán)磷酸腺苷)；以及維生素D3等。但是，它 們提供的效果均不明顯。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明人注意到，在眾多的草藥中，竹芋淀粉具有提高黑素細(xì)胞中小眼相關(guān)性轉(zhuǎn) 錄因子(MITF)的表達(dá)的效力，進(jìn)而提高黑色素的生成。當(dāng)施用于白斑模型小鼠時(shí)，發(fā)現(xiàn)竹 芋淀粉具有抑制毛發(fā)變白的進(jìn)展的效力。因此，本發(fā)明的目的是提供用于預(yù)防白發(fā)和治療 白斑的組合物，其含有竹芋淀粉作為活性成分。技術(shù)方案一方面，本發(fā)明提供用于預(yù)防白發(fā)和治療白斑的組合物，其含有竹芋淀粉作為活 性成分。所述組合物提高黑素細(xì)胞中小眼相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(MITF)的表達(dá)，進(jìn)而提高黑色素 的生成。有益效果本發(fā)明公開(kāi)的含有竹芋淀粉作為活性成分的用于預(yù)防白發(fā)和治療白斑的組合物， 提高黑素細(xì)胞中MITF的表達(dá)，進(jìn)而活化黑素細(xì)胞并提高黑色素的合成。當(dāng)施用于白斑模型 小鼠時(shí)，它具有抑制毛發(fā)變白的進(jìn)展的效力。


通過(guò)以下的詳細(xì)說(shuō)明，結(jié)合附圖，所公開(kāi)的示例性實(shí)施方案的以上及其他的方面、 特征和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)更加清楚，附圖中圖1顯示竹芋淀粉提高黑色素生成的效力；
圖2顯示蛋白質(zhì)印跡帶(圖2a)和蛋白測(cè)定結(jié)果(圖2b)，表明竹芋淀粉提高小眼 相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(MITF)和酪氨酸酶的表達(dá)的效力；和圖3顯示照片(圖3a)和毛發(fā)中黑色素含量的圖表(圖3b)，表明竹芋淀粉預(yù)防白 斑模型小鼠的白毛的效力。最佳實(shí)施方式下文中，結(jié)合其中顯示示例性實(shí)施方案的附圖，更充分地說(shuō)明示例性的實(shí)施方案。 但是，本發(fā)明還可以體現(xiàn)為許多不同的形式，而且不應(yīng)解釋為本發(fā)明僅限于以下所述的示 例性實(shí)施方案。相反，提供這些示例性的實(shí)施方案是為了使本發(fā)明詳盡和完整，并向本領(lǐng)域 的技術(shù)人員充分傳達(dá)本發(fā)明的范圍。本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)只是出于描述特定實(shí)施方案的目的，并不是為了限制本發(fā)明。如本文中使用的，英文單數(shù)形式“a”、“an”和“the”也意在包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文 中有其他明確的指示。此外，英文用語(yǔ)a、an等并不表示對(duì)量的限定，而表示存在所述項(xiàng)目 中的至少一個(gè)(種)。另外應(yīng)該理解，當(dāng)在該說(shuō)明書(shū)中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“包含(comprises)”和 /或“包含(comprising)”、或者“包括(includes) ”和/或“包括(including) ”詳細(xì)列出 存在所述的特征、區(qū)域、整數(shù)、步驟、操作、元素和/或組分，但不排除存在或加入一種或多 種其他特征、區(qū)域、整數(shù)、步驟、操作、元素、組分和/或它們的組。除非另外有定義，本文使用的所有術(shù)語(yǔ)(包括技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ))的意義與本領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員通常理解的意義相同。另外應(yīng)該理解，術(shù)語(yǔ)如那些在常用詞典中定義的術(shù) 語(yǔ)，應(yīng)解釋為其意義與它們?cè)谙嚓P(guān)技術(shù)領(lǐng)域和本發(fā)明中的意義一致，并且不應(yīng)以理想化的 或過(guò)于形式上的方式加以解釋?zhuān)潜疚拿鞔_地這樣定義。毛發(fā)變白被認(rèn)為是由于黑素干細(xì)胞的減少和黑素細(xì)胞活性的降低引起的。特別 地，已知與年齡相關(guān)的毛發(fā)變白主要有黑素干細(xì)胞的減少引起，而過(guò)早的白發(fā)則是由現(xiàn)代 社會(huì)的環(huán)境或精神壓力引起的黑素細(xì)胞活性降低造成的。黑素細(xì)胞的黑色素合成活性主要受小眼相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(MITF)活性的影響。本 文公開(kāi)的含有竹芋淀粉的組合物可以顯著的提高黑素細(xì)胞中MITF的表達(dá)，進(jìn)而預(yù)防白發(fā)。當(dāng)本文公開(kāi)的組合物用于化妝品時(shí)，它可以包含化妝品可接受的介質(zhì)或載體 (support)。所述組合物可以任意的可局部施用的制劑形式提供，如溶液劑、凝膠劑、無(wú)水固 體或糊劑、水包油型乳劑、混懸劑、微乳、微囊、微粒、離子型(脂質(zhì)體的)和/或非離子型囊 泡分散液、乳膏、化妝水(toner)、洗劑、散劑、軟膏劑、噴霧劑或遮瑕棒。這些制劑可以通過(guò) 本領(lǐng)域常用的方法制備。特別地，所述組合物可以方便的制成施用于頭皮或毛發(fā)的制劑，如 香波、潤(rùn)發(fā)露(rinse)、護(hù)發(fā)素(conditioner)、生發(fā)油或頭皮精華。本文公開(kāi)的組合物可以 包含美容領(lǐng)域常用的輔劑，如脂肪、有機(jī)溶劑、增溶劑、濃縮劑、膠凝劑、柔軟劑、抗氧化劑、 助懸劑、穩(wěn)定劑、發(fā)泡劑、芳香劑、表面活性劑、水、離子型或非離子型乳化劑、填充劑、多價(jià) 螯合劑、螯合劑、防腐劑、維生素、阻滯劑(blocker)、潤(rùn)濕劑、精油、染料、色素、親水性或親 脂性活化劑、脂質(zhì)囊泡等。所包含的這些輔劑的量可以是化妝品領(lǐng)域常用的量。當(dāng)本文公開(kāi)的組合物用于藥物時(shí)，通過(guò)向所述活性成分竹芋淀粉添加常用的無(wú)機(jī) 或有機(jī)載體，可以將所述組合物制成固體、半固體或液體的腸胃外給藥形式(用于透皮給 藥或外用)。用于腸胃外給藥的制劑的實(shí)例可以包括軟膏劑、洗劑、噴霧劑、混懸劑等。本文 公開(kāi)的活性成分可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法方便地制成這樣的制劑?？梢赃m當(dāng)?shù)厥褂帽砻婊钚詣?、賦形劑、著色劑、香料、防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、混懸劑或其他常用的輔劑。本文公開(kāi)的含有竹芋淀粉的組合物的給藥劑量可以根據(jù)需要治療的個(gè)體的年齡、 性別和體重、待治療的具體疾病或病癥、疾病或病癥的嚴(yán)重性、給藥途徑或醫(yī)囑而變化。本 領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解考慮這些因素來(lái)決定給藥劑量。所述組合物可外用于出現(xiàn)白發(fā)或白 斑的區(qū)域。通常的給藥劑量可以為約0.001-約2，000mg/kg/天。更具體地，所述給藥劑量 可以為約0. 2-5mg/kg/天。
實(shí)施例下面將描述實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)。下述實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)僅是為了說(shuō)明而不是為了限制本發(fā)明的范圍。試驗(yàn)例1 竹芋淀粉提高黑餼素牛成的效力將培養(yǎng)于含有5%胎牛血清(FBS) UOOIU的青霉素G和0.2μ M TPA的羅Roswell Park Memorial Institute (RPMI)培養(yǎng)基中的 Melan-a 細(xì)胞以 50，000 個(gè)細(xì)胞 / 孔置于 24 孔微量滴定板中。第二天，用終濃度為IOppm和50ppm的供試物竹芋淀粉(1，OOOx母液)、 作為陰性對(duì)照物的0. 1% DMS0、或作為陽(yáng)性對(duì)照物的100 μ MIBMX對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，然后在 37°C下培養(yǎng)3天。隨后，在用PBS清洗各孔后，通過(guò)向各孔中加入IOOyL IN NaOH，溶解細(xì) 胞中的黑色素。使用酶標(biāo)儀在405nm下測(cè)量溶解的黑色素的吸光度。圖1比較了竹芋淀粉 和對(duì)照物提高黑色素生成的效力，如圖1所示，竹芋淀粉提高了黑素細(xì)胞中黑色素的合成， 進(jìn)而提高黑色素的生成。特別的，在50ppm時(shí)，其提高黑色素生成的效力高于陽(yáng)性對(duì)照物。i式驗(yàn)例2 竹芋淀卞対是高H素細(xì)朐,中MITF禾的表達(dá)伯效力將501mel細(xì)胞以500，000個(gè)細(xì)胞/孔置于6孔微量滴定板中。用作為陰性對(duì)照物 的0. DMS0、作為陽(yáng)性對(duì)照物的100 μ M IBMX或作為供試物的IOppm竹芋淀粉處理各孔。 在37°C下培養(yǎng)細(xì)胞24、48和72小時(shí)后，獲取蛋白質(zhì)。使用小眼相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(MITF)和 酪氨酸酶抗體對(duì)如此得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)。通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的標(biāo)準(zhǔn) 方法進(jìn)行蛋白質(zhì)提取和蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)。圖2a(蛋白質(zhì)印跡帶圖像)和圖2b (蛋白質(zhì)測(cè)定 結(jié)果)顯示了結(jié)果。如圖2a和圖2b所示，竹芋淀粉提高了黑素細(xì)胞中MITF和酪氨酸酶蛋 白質(zhì)的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)例3竹芋淀粉制本抑制毛爐變白導(dǎo)至她勺白斑小薩調(diào)白發(fā)階效力白斑小鼠(C57bl/6-MITFmi_vit)得自The Jackson Lab (USA)。實(shí)驗(yàn)方法如下。通 過(guò)脫毛除去12周齡小鼠的背部毛發(fā)。所有個(gè)體小鼠的脫毛面積是恒定的。從第二天起，在 脫毛區(qū)域上施用抑制毛發(fā)變白的物質(zhì)，每天兩次。使用Et0H、l，3-BG和DW(3 2 5 ν/ ν/ν)的混合物作為所述抑制毛發(fā)變白物質(zhì)的媒介物(vehicle)。該媒介物本身用作陰性對(duì) 照物，加入到該媒介物中的50mM IBMX用作陽(yáng)性對(duì)照物。加入到該媒介物中的2. 5%竹芋 淀粉用作供試物。大約3周后，當(dāng)這些物質(zhì)抑制白發(fā)的效力用肉眼看見(jiàn)時(shí)，收集新長(zhǎng)出來(lái)的 毛發(fā)并測(cè)定這些毛發(fā)中黑色素的含量。使用蛋白酶EsperasdNovozymes)來(lái)測(cè)定這些毛發(fā) 中黑色素的含量。通過(guò)將Esperase溶于緩沖液(50mM Tris_HCl，5mM DTT, ρΗ 9. 3)，將反 應(yīng)緩沖液制成INPU/mL的濃度。將5mg的小鼠毛發(fā)加入到ImL的反應(yīng)緩沖液中，在37°C在 1，OOOrpm振搖下，反應(yīng)13小時(shí)。然后，通過(guò)離心立即將毛發(fā)與反應(yīng)溶液分離。將如此獲得 的反應(yīng)溶液置于96孔板中，并在405nm下測(cè)量吸光度，以測(cè)定反應(yīng)溶液中黑色素的含量。
圖3顯示了用陰性對(duì)照物、陽(yáng)性對(duì)照物和供試物治療毛發(fā)變白導(dǎo)致的白斑小鼠后 的肉眼觀察和毛發(fā)中黑色素測(cè)定的結(jié)果。圖3a顯示施用3周后小鼠后背上生長(zhǎng)的毛發(fā)的 照片。圖3b的圖表顯示生長(zhǎng)的毛發(fā)中黑色素的含量。如圖3所示，竹芋淀粉在毛發(fā)變白導(dǎo) 致的小鼠中在體預(yù)防白發(fā)并提高毛發(fā)中黑色素的含量。本文公開(kāi)的組合物可以如下制備。但是，下述制備例并不是為了限制本發(fā)明。制備例1 洗發(fā)香波 制備例2 護(hù)發(fā)素 制備例3 頭皮牛發(fā)油 制備例4 頭皮精華 制備例5 軟膏劑 制備例6 洗劑 雖然已經(jīng)展示和描述了示例性的實(shí)施方案，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)理解，在不背 離所附權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以對(duì)本發(fā)明作出各種形式和細(xì) 節(jié)方面的變化。此外，在不背離本發(fā)明的基本范圍的情況下，在本發(fā)明的教導(dǎo)下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn) 行許多修改，以適應(yīng)特定的情況或材料。因此，本發(fā)明不限于所公開(kāi)的作為用于實(shí)施本發(fā)明 的最佳方式的示例性實(shí)施方案，而是包括所有落入所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)的實(shí)施方案。
權(quán)利要求
用于預(yù)防白發(fā)的組合物，其含有竹芋淀粉作為活性成分。
2.如權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防白發(fā)的組合物，其通過(guò)提高黑素細(xì)胞中小眼相關(guān)性轉(zhuǎn) 錄因子(MITF)的表達(dá)來(lái)提高毛發(fā)中黑色素的生成。
3.如權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防白發(fā)的組合物，其通過(guò)提高黑素細(xì)胞中酪氨酸酶的表 達(dá)來(lái)提高毛發(fā)中黑色素的生成。
4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的用于預(yù)防白發(fā)的組合物，其施用于頭皮或毛發(fā)。
5.如權(quán)利要求4所述的用于預(yù)防白發(fā)的組合物，其被制備成香波、潤(rùn)發(fā)露、護(hù)發(fā)素、生 發(fā)油或頭皮精華的形式。
6.用于治療白斑的組合物，其含有竹芋淀粉作為活性成分。
7.如權(quán)利要求6所述的用于治療白斑的組合物，其通過(guò)提高黑素細(xì)胞中MITF的表達(dá)來(lái) 提高毛發(fā)中黑色素的生成。
8.如權(quán)利要求6所述的用于治療白斑的組合物，其通過(guò)增強(qiáng)黑素細(xì)胞中酪氨酸酶的表 達(dá)來(lái)提高毛發(fā)中黑色素的生成。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了用于預(yù)防白發(fā)和治療白斑的組合物，其含有竹芋淀粉作為活性成分。所述用于預(yù)防白發(fā)和治療白斑的組合物提高黑素細(xì)胞中小眼相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(MITF)的表達(dá)，進(jìn)而活化黑素細(xì)胞并提高黑色素的合成。
文檔編號(hào)A61K36/488GK101868244SQ200880117377
公開(kāi)日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2008年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月21日
發(fā)明者D-j·閔, I-S·張, J-S·黃, N-H·樸, W-S·樸 申請(qǐng)人:株式會(huì)社太平洋