專利名稱：用于治療癌癥的免疫脂質(zhì)體的制作方法
用于治療癌癥的免疫脂質(zhì)體本發(fā)明屬于癌癥治療領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及用于一線和更高線治療罹患癌癥、 特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表的癌癥的人患者并涉及在所述方法中使用的組 合物。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)是ErbB家族的酪氨酸激酶受體，所述酪氨酸激酶受體 在許多上皮腫瘤中被異常激活。受體激活導(dǎo)致幾種下游胞內(nèi)底物的召集和磷酸化，這導(dǎo)致 促有絲分裂信號(hào)傳導(dǎo)和其他促進(jìn)腫瘤的細(xì)胞活性。在人腫瘤中，受體過(guò)量表達(dá)與更侵入性 的臨床過(guò)程相關(guān)(1，2)。針對(duì)結(jié)合配體的胞外結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體和受體酪氨酸激酶的低 分子量抑制劑目前處于臨床開(kāi)發(fā)的高級(jí)階段。在可獲得的抗EGFR單抗當(dāng)中，最充分表征的一種單抗是嵌合的人小鼠MAb西妥 昔單抗。西妥昔單抗是具有活躍的自分泌EGFR回路的培養(yǎng)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的強(qiáng)力抑制劑。 現(xiàn)在已經(jīng)完成單獨(dú)或者與化學(xué)療法或放射療法聯(lián)合給予的一系列西妥昔單抗I期、II期和 III期研究。發(fā)現(xiàn)西妥昔單抗是安全的，但是它顯示一些副作用，包括在多達(dá)40-70%全部 治療患者中的痤瘡樣皮膚疹和2%患者中發(fā)生的過(guò)敏樣或過(guò)敏反應(yīng)。在4%患者中檢測(cè)到 針對(duì)嵌合抗體的非中和性人抗體。發(fā)現(xiàn)如通過(guò)抗體清除率的飽和作用所確定的最佳生物學(xué) 劑量是在每周200至400mg/m2的范圍內(nèi)(3)。西妥昔單抗目前在許多國(guó)家被視為患有結(jié)腸 直腸癌的患者和頭頸腫瘤中的標(biāo)準(zhǔn)療法的部分。多柔比星是最廣泛使用的用于治療實(shí)體瘤和血液惡性病的抗癌藥之一。它有效 對(duì)抗多種癌癥類型，并廣泛用作單一藥物或用于聯(lián)合化療方案中。除在治療乳腺癌中的重 要地位之外，多柔比星還在卵巢癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、膀胱癌和小細(xì)胞肺癌、子 宮肉瘤、急性成淋巴細(xì)胞白血病、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和軟組織及骨肉 瘤中顯示抗腫瘤活性。盡管多柔比星展示了優(yōu)異的抗腫瘤活性譜，然而它在臨床實(shí)踐中 的使用受到藥物相關(guān)毒性、特別地骨髓抑制和心臟毒性限制(援引“Principals and Practice of Oncology，DeVita，第 6 片反〃)。利用多柔比星的脂質(zhì)體封裝來(lái)改變?cè)撍幬锏慕M織分布和藥物代謝動(dòng)力學(xué)并提 高其治療指數(shù)。聚乙二醇化的脂質(zhì)體多柔比星(DOXYL，OrthoBiotech Products LP, Bridgewater, NJ ；CAELYX, Schering Plough, Kenilworth, NJ)是多柔比星的一種新制劑。 聚乙二醇化保護(hù)脂質(zhì)體免遭單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)探測(cè)并增加循環(huán)時(shí)間，從而允許更多地定向 遞送多柔比星至腫瘤細(xì)胞。聚乙二醇化的脂質(zhì)體多柔比星已經(jīng)作為單一藥物在患有轉(zhuǎn)移性或復(fù)發(fā)性乳腺癌 的患者中顯示效力，客觀應(yīng)答率范圍是9%至33% (4，5)。與常規(guī)多柔比星相比，聚乙二醇 化的脂質(zhì)體多柔比星具有相似的效力譜和改善的安全性譜，伴以明顯降低的心臟毒性發(fā)生 率和明顯更少的心臟事件，以及降低的骨髓抑制、粘膜炎、惡心、嘔吐和脫發(fā)的發(fā)生率。另一方面，聚乙二醇化的脂質(zhì)體多柔比星與掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)相關(guān)， 其中所述掌跖紅斑是用游離多柔比星時(shí)很少或從未見(jiàn)到的一種毒性。除在乳腺癌中使用外，脂質(zhì)體多柔比星在治療卡波奇氏肉瘤(6，7)和復(fù)發(fā)性卵巢 癌(8)中發(fā)揮充分確立的作用，并且還成功地用于患有不同類型的淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、
6軟組織肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑素瘤、間皮瘤、泌尿道移行細(xì)胞癌和用在子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、 胃癌、小細(xì)胞及非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、腎細(xì)胞癌、頭頸癌和膽管癌的患者中 (在(9)中綜述)。對(duì)于臨床前研究，通過(guò)使用與脂質(zhì)體膜共價(jià)綴合的嵌合MAb西妥昔單抗(C225， 西妥昔單抗，愛(ài)必妥，ImClone Systems公司，紐約，美國(guó)；Merck KGaA，達(dá)姆施塔特，德國(guó)) Fab’片段構(gòu)建了抗EGFR免疫脂質(zhì)體。設(shè)計(jì)該方法旨在通過(guò)導(dǎo)向受體和內(nèi)化性藥物載體提 供最大藥物遞送至癌細(xì)胞，其中所述的導(dǎo)向受體和內(nèi)化性藥物載體穩(wěn)定、無(wú)免疫原性、長(zhǎng)壽 命、具有延長(zhǎng)的血液及組織駐留時(shí)間并且能夠遞送大的有效荷載的多樣類型藥物。在優(yōu)化 MAb片段的同時(shí)，也優(yōu)化了綴合方法學(xué)。開(kāi)發(fā)了一種新的膠束摻入方法，包括2步驟綴合MAb 片段至預(yù)制的載藥脂質(zhì)體(10)。首先，將MAb片段(Fab’ )共價(jià)地綴合至溶液中的衍生化 PEG-磷脂酰乙醇胺(MAL-PEG-DSPE)接頭，產(chǎn)生易于自發(fā)形成膠束的免疫綴合物。接下來(lái)， 所述綴合物通過(guò)受控加熱法摻入預(yù)載藥物的脂質(zhì)體，從而產(chǎn)生與PEG鏈的末端共價(jià)綴合并 與脂質(zhì)體錨接的MAb片段。當(dāng)C225的Fab，僅以中等密度(每個(gè)脂質(zhì)體30個(gè)Fab，)在免疫脂質(zhì)體上存在時(shí)， 這些免疫脂質(zhì)體在一系列過(guò)量表達(dá)EGFR或EGFRvIII的癌細(xì)胞系中顯示極有效的結(jié)合和內(nèi) 化，如熒光顯微鏡法和FACS所示(11)。這些癌細(xì)胞系包括表皮樣癌細(xì)胞(A431)、乳腺癌細(xì) 胞(MDA-MB-468)、惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U87)和EGFRvIII穩(wěn)定轉(zhuǎn)化體NR6-M細(xì)胞。相反， 無(wú)關(guān)的免疫脂質(zhì)體(抗-HER2)和對(duì)照脂質(zhì)體(無(wú)MAb)不結(jié)合或聚積于A431、MDA-MB468、 U87或NR6-M細(xì)胞中。另外，抗EGFR免疫脂質(zhì)體不可檢測(cè)地結(jié)合至非過(guò)量表達(dá)EGFR的細(xì)胞 (乳腺癌細(xì)胞系SKBR-3或MCF-7)或聚積于其中。在體外條件下，使用載有pH敏感探針(HPTS)的抗EGFR免疫脂質(zhì)體進(jìn)行免疫脂質(zhì) 體攝取、內(nèi)化和胞內(nèi)藥物遞送的定量研究。這種方法允許定量分析在中性PH(表面結(jié)合)與 酸性pH(內(nèi)吞相關(guān))下的免疫脂質(zhì)體攝取的動(dòng)力學(xué)(12)。在MDA-MB-468細(xì)胞中，抗EGFR 免疫脂質(zhì)體在5分鐘內(nèi)結(jié)合，隨后在15分鐘處開(kāi)始胞內(nèi)聚積并升高直至240分鐘。以飽和 濃度存在時(shí)，靶向EGFR的免疫脂質(zhì)體在MDA-MB-468細(xì)胞中的總攝取量是1. 70fmol磷脂/ 細(xì)胞，這對(duì)應(yīng)于13，000個(gè)脂質(zhì)體/細(xì)胞的攝取量。非靶向的脂質(zhì)體在MDA-MB-468細(xì)胞中 的攝取量是小于300個(gè)脂質(zhì)體/細(xì)胞，顯示因定向遞迭所致的大于43倍增加?？笶GFR免 疫脂質(zhì)體在非過(guò)量表達(dá)EGFR的MCF-7細(xì)胞中的攝取量是450個(gè)ILs/細(xì)胞，顯示過(guò)量表達(dá) EGFR的MDA-MB468細(xì)胞中28倍更多的積累。在體內(nèi)，抗EGFR免疫脂質(zhì)體(ILs)在單次靜脈內(nèi)給藥后顯示作為穩(wěn)定構(gòu)建體在 正常成年大鼠中的極長(zhǎng)循環(huán)，同時(shí)具有與那些立體穩(wěn)定的(“隱形(stealth)”)的脂質(zhì) 體不可區(qū)分的藥物代謝動(dòng)力學(xué)(13)。另外，重復(fù)施用顯示清除率不升高，這進(jìn)一步證實(shí)免 疫脂質(zhì)體保留作為隱形脂質(zhì)體特征的長(zhǎng)循環(huán)作用和非免疫原性。在一系列腫瘤異種移植 物模型(MDA-MB-468、U-87和U-87vIII)中評(píng)價(jià)了載有多種抗癌藥的抗EGFR免疫脂質(zhì)體 (C225-ILs-dox)的潛在治療效力(13)。仍未顯示抗EGFR免疫脂質(zhì)體系統(tǒng)(ILs)用于臨床環(huán)境中治療人的可行性。在這 方面的一個(gè)主要顧慮涉及抗EGFR免疫脂質(zhì)體(例如以脂質(zhì)體方式封裝的多柔比星(Doxil， Caelyx))的已知毒性。這里，最明顯的毒性副作用是掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)，其中 可以在作為例行腫瘤學(xué)實(shí)踐中標(biāo)準(zhǔn)的每隔4周短時(shí)輸注形式的40-50mg/m2劑量觀察到所述的掌跖紅斑。類似地，抗EGFR抗體如西妥昔單抗的重大副作用是皮膚毒性，通常表現(xiàn)為 面部和軀干的痤瘡樣疹。此種副作用可能是表皮以相對(duì)高的水平表達(dá)EGFR這一事實(shí)的后 果。因而，臨床環(huán)境中使用抗EGFR免疫脂質(zhì)體的一個(gè)主要安全顧慮是借助抗EGFR抗體例 如西妥昔單抗引導(dǎo)所述脂質(zhì)體至過(guò)量表達(dá)EGFR的細(xì)胞也可能增加該藥物的皮膚毒性。另外，仍然未顯示并且極其不可預(yù)測(cè)的是封裝化療藥物例如多柔比星、長(zhǎng)春瑞濱 (vinorelbine)或氨甲蝶呤(methotrexate)的抗EGFR免疫脂質(zhì)體(ILS)是否可以治療性 地用于已經(jīng)接受、但不應(yīng)答一種或多種標(biāo)準(zhǔn)療法(一線、二線、三線等)患者群體即非應(yīng)答 者群體中。多線治療中所觀察到應(yīng)答缺乏的可能原因之一是癌細(xì)胞多藥抗性的發(fā)展。抗藥性仍然是癌癥治療中的主要挑戰(zhàn)。內(nèi)因性或獲得性抗藥性在大部分癌癥中頻 繁出現(xiàn)并且經(jīng)常同時(shí)涉及對(duì)多種藥物抵抗(多藥抗性，MDR)。已經(jīng)對(duì)抗藥性描述了許多機(jī) 制。這些機(jī)制包括藥物輸出泵(如P-糖蛋白(PGP)和多藥抗性蛋白(MRP))過(guò)量表達(dá); 藥物攝取減少，如葉酸載體改變；藥物失活，如借助谷胱甘肽介導(dǎo)的還原作用；靶酶過(guò)量表 達(dá)，如胸苷酸合酶上調(diào)；藥物靶(如拓?fù)洚悩?gòu)酶II)的改變；DNA修復(fù)能力提高；發(fā)生凋亡的 能力降低和其他機(jī)制(在(30)和(31)中綜述)。在這些機(jī)制當(dāng)中，PGP在多藥抗性中的作 用已經(jīng)成為最深入研究的對(duì)象之一。由MDR1基因編碼的PGP是ABC(ATP結(jié)合盒)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋 白家族的成員并且頻繁地在MDR表型中過(guò)量表達(dá)。能夠介導(dǎo)藥物排出的其他膜結(jié)合型轉(zhuǎn)運(yùn) 蛋白包括多藥抗性蛋白MRP和其他相關(guān)蛋白((32)、(33)和(34))。這些蛋白質(zhì)主動(dòng)地轉(zhuǎn)運(yùn) 多種雜環(huán)底物(包括細(xì)胞毒藥物如蒽環(huán)類藥、長(zhǎng)春堿類、米托蒽醌、紫杉醇和其他藥物)離 開(kāi)細(xì)胞或進(jìn)入其他細(xì)胞區(qū)室((32)、(33)和(34))。這些抗藥性機(jī)制的特異性抑制劑已經(jīng)廣泛地用作恢復(fù)藥物敏感性的手段(綜述， 見(jiàn)(35))。盡管仍在積極研究中，但抗藥性特異抑制劑仍沒(méi)有獲得臨床用途的注冊(cè)。治療成 功的進(jìn)展受阻于此類事項(xiàng)，如特異性不充分、可預(yù)測(cè)的和不可預(yù)見(jiàn)的毒性、不確定已知抗藥 性機(jī)制的真實(shí)普遍性和貢獻(xiàn)、缺乏鑒定依賴特定機(jī)制的腫瘤的預(yù)測(cè)性測(cè)定法和抗藥性機(jī)制 的多樣性和冗余性((35))。因而需要提供備選策略以安全地治療性治療已經(jīng)顯現(xiàn)癌癥的患者、特別地屬于非 應(yīng)答者群體的患者，即不應(yīng)答或不再應(yīng)答常規(guī)癌癥化學(xué)療法的患者。特別地，需要提供備選 策略以克服癌療法中的內(nèi)在性或獲得性抗藥性。能夠在本發(fā)明的范圍內(nèi)通過(guò)提供基于藥物遞送系統(tǒng)的治療方法滿足這種提供備 選策略的需要，其中所述的藥物遞送系統(tǒng)包含靶向EGFR的免疫脂質(zhì)體，所述免疫脂質(zhì)體在 過(guò)量表達(dá)EGFR的細(xì)胞的細(xì)胞漿中顯示廣泛內(nèi)化(多達(dá)30，000個(gè)ILs/細(xì)胞)，但在非過(guò)量 表達(dá)的細(xì)胞中不顯示內(nèi)化，并且當(dāng)封裝幾種化療藥物(多柔比星、長(zhǎng)春瑞濱和氨甲蝶呤)之 任一種藥物時(shí)還顯示突出的細(xì)胞毒性?，F(xiàn)在已經(jīng)在本發(fā)明的范圍內(nèi)驚訝地發(fā)現(xiàn)在臨床設(shè)立的施用抗EGFR免疫脂質(zhì)體、 特別地包含幾種化療藥物例如多柔比星、長(zhǎng)春瑞濱或氨甲蝶呤之任一種藥物的免疫脂質(zhì)體 至罹患癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥并且 未經(jīng)歷過(guò)化學(xué)療法的人患者，并且特別地施用至已經(jīng)接受過(guò)，但不應(yīng)答或停止應(yīng)答至少一 種標(biāo)準(zhǔn)療法(一線)、特別地至少二種標(biāo)準(zhǔn)療法(二線)、特別地至少三種標(biāo)準(zhǔn)療法(三線)， 不過(guò)尤其地不應(yīng)答或停止應(yīng)答全部可用的標(biāo)準(zhǔn)療法(多線)的患者，不僅引起該疾病穩(wěn)定化、特別地引起部分應(yīng)答、但是尤其地引起完全應(yīng)答，而且顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有副作用、 特別地顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)和/或皮膚毒性。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與實(shí)體 瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，用于一線至多線治療臨床 設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表 的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與 實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，其用于二線治療臨床 設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表
的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與 實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，其用于三線治療臨床 設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表
的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與 實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，其用于四線治療臨床 設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表
的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與 實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，其用于五線治療臨床 設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表
的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與 實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，其用于六線治療臨床 設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表
的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與 實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，其用于七線和更高線 治療臨床設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫 瘤所代表的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的包含識(shí)別并與 實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段的免疫脂質(zhì)體，其用于治療、特別地 用于多線治療罹患癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表 的癌癥并且未經(jīng)歷過(guò)化學(xué)療法的人患者、特別地是已經(jīng)接受過(guò)、但不應(yīng)答至少一種標(biāo)準(zhǔn)療 法、特別地至少二種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少三種標(biāo)準(zhǔn)療法，但是尤其地不應(yīng)答所有可使用的 標(biāo)準(zhǔn)療法的患者。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體， 其用于治療、特別地用于多線治療具有如本文中先前所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤的人 患者，其中所述的腫瘤仍然正在進(jìn)展。
在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體用于治 療、特別地用于多線治療患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫 瘤所代表癌癥的人患者，其中脂質(zhì)體封裝了抗癌化合物，特別地抑制細(xì)胞性化合物，特別地 封裝選自以下的化合物道諾霉素、伊達(dá)比星、米托蒽醌、絲裂霉素、順鉬和其他鉬類似物、 長(zhǎng)春新堿、表柔比星、阿克拉霉素、氨甲蝶呤、依托泊苷、多柔比星、表柔比星、長(zhǎng)春瑞濱、阿 糖胞苷、氟尿嘧啶和其他氟化嘧啶、嘌呤或核苷、尤其地吉西他濱、博來(lái)霉素、絲裂霉素、普 卡霉素、放線菌素D、環(huán)磷酰胺和其衍生物、噻替派、卡芥氮、紫杉醇、多西他賽和其他紫杉烷 衍生物和分離物、喜樹(shù)堿、多肽、核酸、具有硫代磷酸酯核苷酸間鍵的核酸和具有聚酰胺核 苷酸間鍵的核酸，但是尤其地封裝選自多柔比星、表柔比星和長(zhǎng)春瑞濱的化合物，特別地封 裝多柔比星。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體， 其用于治療、特別地用于多線治療患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進(jìn)的或 轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表癌癥的人患者，其中該患者的非應(yīng)答性由多藥抗性機(jī)制引起。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體， 其用于治療、特別地用于多線治療人患者，所述的人患者患有癌癥、特別地由如本文中先前 所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表的癌癥并且已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的用于治療、特別地 用于多線治療人患者的免疫脂質(zhì)體，所述人患者屬于患有癌癥、特別地由如本文中先前所 述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表癌癥的非應(yīng)答者群體，特別地屬于已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性 的患者，其中所述免疫脂質(zhì)體具有標(biāo)準(zhǔn)MTT測(cè)定法中所確定的在1. Oy g/ml與5. Oy g/ml 之間、特別地0. 8u g/ml與3. 5 ii g/ml之間、特別地0. 7 u g/ml與2. 5 y g/ml之間、特別地
0.6u g/ml 與 2. 0 ii g/ml 之間、特別地 0. 5 u g/ml 與 1. 5 y g/ml 之間、特別地 0. 4 u g/ml 與
1.Ou g/ml 之間、特別地 0. 3 ii g/ml 與 0. 5 y g/ml 之間、特別地 0. 2 y g/ml 與 0. 4 y g/ml 之 間的IC5(I。該免疫脂質(zhì)體特別地是包含多柔比星的免疫脂質(zhì)體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的用于治 療、特別地用于多線治療人患者的免疫脂質(zhì)體，所述人患者屬于患有癌癥、特別地由如本文 中先前所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表癌癥的非應(yīng)答者群體，特別地屬于已經(jīng)顯現(xiàn) 多藥抗性的患者，其中所述免疫脂質(zhì)體具有比游離抗癌藥的細(xì)胞毒性在3倍至5倍之間、在 5倍至20倍之間、在10倍至30倍之間、在15倍至40倍之間、在20倍至50倍之間、在25 倍至60倍之間、在30倍至70倍之間、在35倍至80倍之間、在40倍至90倍之間、在50倍 至100倍之間更高、在80倍至150倍之間、在120倍至250倍之間更高的細(xì)胞毒性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于治療、特別地用于多線治療人患者的免 疫脂質(zhì)體，所述人患者患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、 特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥，其中所述的治療引起疾病穩(wěn)定化，特別地引起部分應(yīng) 答，但是尤其地特別引起完全應(yīng)答。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗EGFR免疫脂質(zhì)體以10mg/m2和40mg/m2身體表面、 特別地30mg/m2與50mg/m2之間、特別地40mg/m2與60mg/m2之間、特別地50mg/m2與70mg/ m2之間、特別地60mg/m2與80mg/m2之間、特別地70mg/m2與90mg/m2之間、特別地75mg/m2 與100mg/m2的劑量水平給予，作為短時(shí)輸注每隔2至6周，特別地每隔3至5周，但是特別
10地每隔4周給予。短時(shí)輸注意為至少10分鐘、特別地至少20分鐘、特別地至少30分鐘、特 別地至少40分鐘、特別地至少60分鐘、特別地至少90分鐘、特別地至少120分鐘、特別地 至少240分鐘的輸注時(shí)間。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如本文中先前所述的用于治療、特別地用于多線 治療人患者的免疫脂質(zhì)體，所述人患者罹患癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別 地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥，其中所述的治療顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有毒性副作用，特別 地顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)和/或皮膚毒性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如本文中先前所述的用于治療、特別地用于多線 治療人患者的免疫脂質(zhì)體，特別地包含多柔比星化合物的免疫脂質(zhì)體，所述人患者罹患癌 癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥，其中所述的 治療在5mg/m2與20mg/m2身體表面之間、特別地10mg/m2與40mg/m2之間、特別地30mg/m2 與50mg/m2之間、特別地40mg/m2與60mg/m2之間、特別地50mg/m2與70mg/m2之間、特別地 60mg/m2與80mg/m2之間、特別地70mg/m2與90mg/m2之間、特別地75mg/m2與100mg/m2之間 的免疫脂質(zhì)體濃度上顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有毒性副作用，特別地顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有掌 跖紅斑(PPE =手足綜合征)和/或皮膚毒性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于治療、特別地用于多線治療人患者的免 疫脂質(zhì)體，所述人患者患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤 所代表的癌癥，其中抗體或抗體片段共價(jià)地結(jié)合至脂質(zhì)體膜，特別地共價(jià)地綴合至與脂質(zhì) 體錨接的接頭分子的末端。接頭分子特別地是親水聚合物，但尤其地是聚乙二醇。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明和如本文中所述的免疫脂質(zhì)體包含針對(duì) EGF受體的結(jié)合配體的胞外結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體、特別地嵌合抗體例如嵌合Mb C225或人 源化抗體例如人源化MAb EMD72000，其中提供所述的免疫脂質(zhì)體用于治療、特別地用于多 線治療患有癌癥、特別地由如本文中先前所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表癌癥的人隱患o(jì)在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物，其中待治療的癌癥是乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、 胃癌、膀胱癌、子宮肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤和軟組織及骨肉瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的用于治療，特別地 用于多線治療臨床設(shè)立的人患者的免疫脂質(zhì)體，其中所述患者罹患選自卡波奇氏肉瘤、復(fù) 發(fā)性卵巢癌、軟組織肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑素瘤、間皮瘤、泌尿道移行細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、胰 腺癌、小細(xì)胞及非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌、食管癌、結(jié)腸直腸癌、肛門癌、陰道癌、 外陰癌、前列腺癌、皮膚的基底細(xì)胞癌、頭頸癌和膽管癌的癌癥，所述癌癥特別地由局部推 進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤代表。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于治療，特別地用于多線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中 所述的患者罹患選自前列腺癌、胰腺癌、腎癌、食管癌、結(jié)腸癌和直腸癌的癌癥，所述癌癥特 別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤代表。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合用于多線治療、特別地二線、特別地三線、特別地四線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患前列腺癌，具有在激素和/或多西他賽和/或米托蒽 醌治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線治 療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患胰腺癌或膽囊癌，具有在吉西他濱和/或卡 培他濱和/或奧沙利鉬治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患腎癌，具有在干擾素和/或卡 培他濱和/或舒尼替尼和/或索拉菲尼治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患膀胱上皮癌，具有在順鉬或卡 鉬和/或吉西他濱和/或多柔比星和/或氨甲蝶呤和/或長(zhǎng)春新堿治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患非小細(xì)胞肺癌，具有在順鉬或 卡鉬和/或吉西他濱和/或長(zhǎng)春瑞濱和/或培美曲塞和/或多西他賽和/或吉非替尼治療 下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患小細(xì)胞肺癌，具有在順鉬或卡 鉬和/或依托泊苷和/或伊立替康和/或多柔比星和/或長(zhǎng)春新堿和/或環(huán)磷酰胺和/或 托泊替康治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患間皮瘤，具有在順鉬或卡鉬和/ 或吉西他濱和/或培美曲塞治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患乳腺癌，具有在順鉬或卡鉬和/ 或多柔比星和/或長(zhǎng)春新堿和/或環(huán)磷酰胺和/或紫杉醇和/或多西他賽和/或吉西他濱 和/或長(zhǎng)春瑞濱和/或卡培他濱和/或絲裂霉素和/或氨甲蝶呤和/或米托蒽醌和/或貝 伐單抗和/或曲妥珠單抗下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線治 療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患食管癌，具有在順鉬和/或5-FU和/或多西 他賽和/或西妥昔單抗治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患在替莫唑銨和/或貝伐單抗和 /或伊立替康和/或長(zhǎng)春新堿和/或丙卡巴胼和/或CCNU和/或BCNU治療下已經(jīng)進(jìn)展的 腦腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線治療臨床設(shè)立 的的人患者，其中所述的患者罹患肝細(xì)胞癌，具有在舒尼替尼和/或索拉非尼治療下已經(jīng) 進(jìn)展的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前所述的免疫脂質(zhì)體或包含 所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物用于多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、 特別地五線、特別地六線、特別地七線治療臨床設(shè)立的的人患者，其中所述的患者罹患結(jié)腸 癌和/或直腸癌，具有在西妥昔單抗和/或貝伐單抗和/或奧沙利鉬和/或伊立替康和/ 或卡培他濱和/或5-FU治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于治療、特別地用于多線治療患有癌癥、特 別地由如本文中先前所述的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表癌癥的人患者的免疫脂質(zhì)體， 其中實(shí)現(xiàn)在5%與10%之間、特別地7%與15%之間、特別地9%與20%之間、特別地12% 與25%之間、特別地18%與30%之間、特別地22%與35%之間、特別地28%與40%之間、 特別地32 %與45 %之間、特別地38 %與50 %之間、特別地42 %與55%之間、特別地48 % 與60%之間、特別地52%與60%之間、特別地52%與70%之間、特別地52%與75%之間、 特別地58 %與80 %之間、特別地62 %與85 %之間、特別地68 %與90 %之間、特別地72 %與 95%之間并且直至100%的應(yīng)答率。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前公開(kāi)的免疫脂質(zhì) 體和可藥用載體或賦形劑或稀釋劑的藥物組合物，其用于一線至多線治療、特別地用于二 線、特別地三線、特別地四線、特別地五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設(shè)立 的人患者、特別地屬于非應(yīng)答者群體的人患者、特別地屬于非應(yīng)答者群體的已經(jīng)顯現(xiàn)多藥 抗性的人患者中癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的 癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一線至多線治療、特別地二線、特別地三線、特別 地四線、特別地五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設(shè)立的人患者、特別地屬 于非應(yīng)答者群體的人患者、特別地屬于非應(yīng)答者群體的已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性的人患者中癌 癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表癌癥的方法，所述方 法為通過(guò)施用根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前公開(kāi)的免疫脂質(zhì)體或藥物組合物至所述的人患 者o在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前公開(kāi)的免疫脂質(zhì)體 或藥物組合物治療患有癌癥、特別地患有由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫 瘤所代表的癌癥并且未經(jīng)歷過(guò)化學(xué)療法的人患者、特別地治療已經(jīng)接受過(guò)、但不應(yīng)答至少 一種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少二種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少三種標(biāo)準(zhǔn)療法，但是尤其地不應(yīng)答所 有可使用的標(biāo)準(zhǔn)療法的患者的方法。特別地，本發(fā)明涉及治療已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性人患者的方法。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前公開(kāi)的免疫脂質(zhì) 體或藥物組合物以制備藥物的方法，所述的藥物用于一線至多線治療、特別地二線、特別地 三線、特別地四線、特別地五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設(shè)立的人患者 中、特別地屬于非應(yīng)答者群體的人患者中、特別地屬于非應(yīng)答者群體的已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性 的人患者中癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌 癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前公開(kāi)的免疫脂質(zhì) 體或藥物組合物以制備藥物的方法，其中所述藥物用以治療患有癌癥、特別地由局部推進(jìn) 的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥并且未經(jīng)歷過(guò)化學(xué)療法的人患者、特 別地治療已經(jīng)接受過(guò)、但不應(yīng)答至少一種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少二種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少 三種標(biāo)準(zhǔn)療法，但是特別地不應(yīng)答所有可使用的標(biāo)準(zhǔn)療法的患者。特別地，本發(fā)明涉及使用根據(jù)本發(fā)明和如本文中先前公開(kāi)的免疫脂質(zhì)體或藥物組 合物以制備藥物的方法，其中所述藥物用以治療已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性的人患者。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明和如本文中所述的包含識(shí)別并與實(shí)體瘤表 面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段并且還在脂質(zhì)體中封裝抗腫瘤化合物的免疫 脂質(zhì)體或包含這種免疫脂質(zhì)體的藥物組合物，用于治療已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性的患者或患者群 體中的這種多藥抗性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明和如本文中所述的免疫脂質(zhì)體和 可藥用載體或賦形劑或稀釋劑的用于治療患者或患者群體中癌癥、特別地用于治療乳腺癌 或結(jié)腸直腸癌或這兩種癌癥的藥物組合物，其中所述的患者或患者群體已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗 性、特別地顯現(xiàn)針對(duì)用一種或多種抗癌藥治療的多藥抗性，其中所述抗癌藥選自多西他賽、 米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、干擾素、舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬或卡鉬、多柔 比星、氨甲蝶呤、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、培美曲塞、吉非替尼、依托泊苷、伊立替康、環(huán)磷酰胺、 托泊替康、環(huán)磷酰胺、紫杉醇、絲裂霉素、貝伐單抗、曲妥珠單抗、5-FU、西妥昔單抗、替莫唑 胺、貝伐單抗、丙卡巴胼、CCNU和BCNU。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的多藥抗性包含選自以下藥物中的一種或多種抗癌藥 物多西他賽、米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬、5-FU、 西妥昔單抗、貝伐單抗、奧沙利鉬和伊立替康。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含根據(jù)本發(fā)明和如本文中所述的免疫脂質(zhì)體和可藥 用載體或賦形劑或稀釋劑的藥物組合物用于治療、特別地用于多線治療癌癥、特別地用于 治療乳腺癌或結(jié)腸直腸癌或這兩種癌癥，其中所述的免疫脂質(zhì)體封裝了多柔比星并且還包 含抗體MAb C225或抗體EMD72000或其片段，其仍顯示所述抗體之一者或兩者的特異結(jié)合 特性。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含根據(jù)本發(fā)明和如本文中所述的免疫脂質(zhì)體和可藥 用載體或賦形劑或稀釋劑的藥物組合物用于治療患者或患者群體中癌癥、特別地用于治療 乳腺癌或結(jié)腸直腸癌或這兩種癌癥，其中所述的患者或患者群體已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性、特別 地顯現(xiàn)針對(duì)用一種或多種抗癌藥治療的多藥抗性，其中所述抗癌藥選自多西他賽、米托蒽 醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、干擾素、舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬或卡鉬、多柔比星、氨 甲蝶呤、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、培美曲塞、吉非替尼、依托泊苷、伊立替康、環(huán)磷酰胺、托泊替
14康、環(huán)磷酰胺、紫杉醇、絲裂霉素、貝伐單抗、曲妥珠單抗、5-FU、西妥昔單抗、替莫唑胺、貝伐 單抗、丙卡巴胼、CCNU和BCNU，其中所述的免疫脂質(zhì)體封裝了多柔比星并且還包含抗體MAb C225或抗體EMD72000或其片段，其仍顯示所述抗體之一者或兩者的特異結(jié)合特性。定義術(shù)語(yǔ)“包含”通常以包括的意思使用，也就是說(shuō)允許一種或多種特征或組分存在。如本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中所用，單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“該”包括復(fù)數(shù)稱謂， 除非上下文另外清楚地說(shuō)明。例如，術(shù)語(yǔ)“一位患者”包括多位患者。術(shù)語(yǔ)“一種免疫脂質(zhì) 體”包括多種免疫脂質(zhì)體，包括其混合物。術(shù)語(yǔ)“EGF受體”或“EGFR”、“ErbBl”、“HERl”是本領(lǐng)域認(rèn)可的術(shù)語(yǔ)并且在本文 中同義地使用并理解為指作為受體酪氨酸激酶(RTK) I類家族成員的受體蛋白，其包括 EGFR(ErbBUHERl)、HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)和 HER4(ErbB4)。作為靶抗原，EGFR 是在多 種人實(shí)體瘤中過(guò)量表達(dá)的輕易可及的細(xì)胞表面受體。在這個(gè)定義中也包括EGFR的突變體， 特別地III類突變體，例如EGFRvIII，其在EOT內(nèi)部的第2-7外顯子中含有缺失，導(dǎo)致符合 可讀框地缺失編碼序列的801bp和在融合接頭處生成新的甘氨酸殘基。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“一線治療”或“一線療法”是本領(lǐng)域認(rèn)可的術(shù)語(yǔ)并理解為指 首次化學(xué)療法治療癌癥，它可以與手術(shù)和/或放射療法聯(lián)合，也稱初級(jí)治療或初級(jí)療法。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“二線治療”或“二線療法”是本領(lǐng)域認(rèn)可的術(shù)語(yǔ)并理解為指 當(dāng)初始或初級(jí)治療(一線或初級(jí)療法)不奏效或停止奏效時(shí)給予的化學(xué)療法治療。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“三線、四線、五線等治療”或三線、四線、五線等療法”是本領(lǐng) 域認(rèn)可的術(shù)語(yǔ)并理解為指當(dāng)初始治療和任意的后續(xù)治療(一線、二線、三線等療法)不奏效 或停止奏效時(shí)給予的化學(xué)療法治療。術(shù)語(yǔ)“多線”治療是通用術(shù)語(yǔ)并在本文中理解為指在不奏效或已經(jīng)停止奏效的初 始或初級(jí)治療(一線或初級(jí)療法)之后的任意的更高線治療。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“基本上無(wú)副作用”或“基本上無(wú)不利副作用”是本領(lǐng)域認(rèn)可 的術(shù)語(yǔ)并理解為指的輕微至中等藥物相關(guān)作用或毒性，它不是劑量限制的。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“EGFR陽(yáng)性腫瘤”理解為指含有例如通過(guò)免疫組織化學(xué)試 驗(yàn)(例如 FDA 批準(zhǔn)的 EGFR pharmaDx 試劑盒(“DAK0” 試驗(yàn)；DAKO Notrth America, Inc)、 Zymed EGFR試劑盒或Ventana EGFR 3C6抗體)檢測(cè)到的至少1 %、特別地至少2%、3%、 4%或5%、特別地至少10% EGFR陽(yáng)性細(xì)胞的腫瘤，特別地，所述的EGFR陽(yáng)性細(xì)胞過(guò)量表達(dá) EGFR抗原和/或EGFR的突變體，特別地III類突變體，例如EGFRvIII?！八帉W(xué)有效量”是指施用至人或動(dòng)物生物時(shí)誘導(dǎo)可檢測(cè)的藥理學(xué)和/或生理學(xué)作用 的化學(xué)物質(zhì)或化合物。相應(yīng)的藥學(xué)有效量可以取決于待治療的特定患者、待治療的疾病和施用的方法。 另外，藥學(xué)有效量取決于所用的具體蛋白質(zhì)，特別地該蛋白質(zhì)是否額外地含有或不含有如 所述的藥物。治療通常包括藥物組合物的多次施用，通常間隔幾小時(shí)、幾日或幾周。本發(fā)明 免疫脂質(zhì)體的劑量單位的藥學(xué)有效量通常在5mg/m2與100mg/m2待治療患者的身體表面之 間的范圍內(nèi)?！翱伤幱谩敝干砩峡赡褪懿⑶以谑┯弥寥藭r(shí)一般不產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)或類似異常反 應(yīng)如胃不適、眩暈等的分子實(shí)體和組合物。
如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”或“諸抗體”是本領(lǐng)域認(rèn)可的術(shù)語(yǔ)并且理解為指與已 知抗原結(jié)合的分子或分子活性片段，特別地術(shù)語(yǔ)“抗體”或“諸抗體”指免疫球蛋白分子并 指免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異地結(jié)合抗原的結(jié)合位點(diǎn)的分子。本發(fā) 明的免疫球蛋白可以是任意型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或類(IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgAl和IgA2)或亞類的免疫球蛋白分子。“抗體”在本發(fā)明的范圍內(nèi)意圖包括單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗 體、雙特異性抗體、猿猴源化抗體、人抗體和人源化抗體以及其活性片段。術(shù)語(yǔ)“片段”指抗 體或抗體鏈的一部分或區(qū)段，其比完整或完全抗體或抗體鏈包含更少的氨基酸殘基。與已 知抗原結(jié)合的分子活性片段的例子包括分開(kāi)的輕鏈和重鏈、Fab、Fab/C、FV、Fab，和F(ab，)2 片段，包括Fab免疫球蛋白表達(dá)文庫(kù)的產(chǎn)物和上文所提及任意抗體和片段的表位結(jié)合片 段。片段可以通過(guò)化學(xué)處理或酶處理完整或完全抗體或抗體鏈獲得。片段也可以通過(guò)重組 手段獲得。示例性片段包括？油、？油，、？(油，)2、？油(3和/或？￥片段。術(shù)語(yǔ)“抗原結(jié)合片 段”指免疫球蛋白或抗體的多肽片段，其結(jié)合抗原或與完整抗體競(jìng)爭(zhēng)(即與衍生這些片段的 完整抗體競(jìng)爭(zhēng))抗原結(jié)合(即特異結(jié)合)?？贵w結(jié)合片段通過(guò)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生或通過(guò)酶切割或化學(xué)切割完整免疫球蛋白 產(chǎn)生。結(jié)合片段包括Fab、Fab，、F(ab，)2、Fabc、Fv、單鏈和單鏈抗體。這些活性片段可以借助許多技術(shù)從給定抗體衍生。例如，純化的單克隆抗體可以 用酶如胃蛋白酶切割，并經(jīng)過(guò)HPLC凝膠過(guò)濾處理。隨后可以通過(guò)膜過(guò)濾法和其他方法收集 并濃縮含有Fab片段的適宜級(jí)分。關(guān)于進(jìn)一步描述用于分離抗體活性片段的一般技術(shù)，見(jiàn) 例如(14) ； (15)?！扒逗峡贵w”是這樣的抗體，其中該抗體的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域來(lái)自一個(gè)動(dòng)物物種并 且該抗體的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域來(lái)自一個(gè)不同的動(dòng)物物種。優(yōu)選的嵌合抗體是包括來(lái)自靈長(zhǎng) 動(dòng)物免疫球蛋白的區(qū)域的嵌合抗體。用于人臨床用途的嵌合抗體一般理解為具有來(lái)自非 人動(dòng)物例如嚙齒動(dòng)物的可變區(qū)，同時(shí)恒定區(qū)來(lái)自人，相反，人源化抗體使用來(lái)自非人抗體 的CDR，同時(shí)大部分或全部可變構(gòu)架區(qū)來(lái)自人免疫球蛋白并且全部恒定區(qū)來(lái)自人免疫球蛋 白。人嵌合抗體一般理解為具有來(lái)自嚙齒動(dòng)物的可變區(qū)。常見(jiàn)的人嵌合抗體具有人重鏈 恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)，同時(shí)重鏈和輕鏈的可變區(qū)均來(lái)自嚙齒動(dòng)物抗體。嵌合抗體可以包 括相對(duì)于人恒定區(qū)天然氨基酸序列和天然嚙齒動(dòng)物可變區(qū)序列的一些變化。嵌合和人源化 抗體可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法制備，所述方法包括CDR移植方法(見(jiàn)，例如美國(guó)專利號(hào) 5，843，708 ；6, 180，370 ；5, 693, 762 ；5, 585, 089 ；5, 530，101)、鏈改組策略(見(jiàn)例如美國(guó)專 利號(hào)5，565，332) (16)、分子模建策略(美國(guó)專利號(hào)5，639，641)等。“人源化抗體”指摻入至少一種人源化免疫球蛋白或抗體鏈或其片段、特別地至少 一條人源化輕或重鏈的一類工程化抗體。所述人源化免疫球蛋白或抗體鏈或其片段，但是 特別地至少一條人源化輕或重鏈衍生自非人來(lái)源，特別地衍生自非人抗體，一般是嚙齒動(dòng) 物起源。一般以至少一個(gè)CDR區(qū)的形式提供對(duì)人源化抗體的所述非人貢獻(xiàn)，所述的CDR區(qū) 分散在衍生自一種(或多種)人免疫球蛋白的構(gòu)架區(qū)當(dāng)中。此外，可以改變構(gòu)架支持殘基 以保留結(jié)合親和性。人源化抗體可以進(jìn)一步包含恒定區(qū)(例如在輕鏈的情況下，至少一個(gè)恒定區(qū)或其 部分，并且在重鏈的情況下，優(yōu)選3個(gè)恒定區(qū))。
獲得“人源化抗體”的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的?！叭嗽椿贵w”也可以通過(guò)能夠在大動(dòng)物例如兔中產(chǎn)生親和力成熟的人樣多克隆 抗體的新基因工禾呈方法獲得(http://www. rctech. com/bioventures/-therapeutic. php)。術(shù)語(yǔ)“免疫脂質(zhì)體劑量”或“免疫脂質(zhì)體濃度”通常指截留于脂質(zhì)體中的抗癌藥的 濃度?！爸|(zhì)體”指由脂質(zhì)、特別地形成小泡的脂質(zhì)組成的球狀小泡，其能夠在水中自發(fā) 排列成脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)，其中該脂質(zhì)的疏水部分與雙層膜的內(nèi)部疏水區(qū)接觸并且其首基部分 指向該膜的外部極性表面。形成小泡的脂質(zhì)一般具有兩條烴鏈，特別地?；湥蜆O性或非 極性的首基。形成小泡的脂質(zhì)由天然存在或合成來(lái)源的脂質(zhì)(包括磷脂如磷脂酰膽堿、磷 脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰肌醇和鞘磷脂)組成，其中所述兩條烴鏈一般長(zhǎng)約14-22個(gè)碳 原子并且具有可變的不飽和度。其?；溇哂锌勺冿柡投鹊纳鲜鲋|(zhì)和磷脂可以商業(yè)地獲 得或根據(jù)公開(kāi)的方法制備。用于本發(fā)明組合物中的其它合適脂質(zhì)包括糖脂和固醇，如膽固 醇及其也可以用于脂質(zhì)體中的各種類似物。也可以在脂質(zhì)體中適宜地使用一般具有親脂部分如固醇、酰基或二?；湶⑶移?中脂質(zhì)具有總體凈正電荷的陽(yáng)離子脂質(zhì)。該脂質(zhì)的首基一般攜帶正電荷。示例性陽(yáng)離子 脂質(zhì)包括1，2_ 二油基氧基-3-(三甲基氨基)丙烷(D0TAP) ；N-[l-(2，3-雙十四烷氧基) 丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨(DMRIE) ；N_[l_(2，3-二油基氧基)丙基]_N，N_ 二 甲基-N-羥乙基溴化銨(D0RIE) ；N-[l-(2，3-二油基氧基)丙基]_N，N, N-三甲基氯化 銨(D0TMA) ；3[N-(N，，N，- 二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]膽固醇(DC-Choi)和二甲基雙 十八烷基銨(DDAB)。形成小泡的陽(yáng)離子脂質(zhì)也可以是中性脂質(zhì)如二油酰基磷脂酰乙醇胺 (DOPE)，或兩親性脂質(zhì)如以陽(yáng)離子脂質(zhì)衍生化的磷脂，如聚賴氨酸或其他聚胺脂質(zhì)。脂質(zhì)體可以包括用親水聚合物衍生化的形成小泡的脂質(zhì)以形成脂質(zhì)體表面上的 親水聚合物鏈表面層。形成小泡的脂質(zhì)、特別地磷脂，如二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)可 以共價(jià)地接合至親水聚合物，其在脂質(zhì)體周圍形成親水聚合物鏈表面層。適合與形成小泡 的脂質(zhì)衍生化的親水聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯甲醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑 啉、聚羥丙基噁唑啉、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚羥丙 基甲基丙烯酸酯、聚羥乙基丙烯酸酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚天冬酰胺 (polyaspartamide)和親水肽序列。所述聚合物可以作為均聚物或作為嵌段或隨機(jī)共聚物 使用。優(yōu)選的親水聚合物鏈?zhǔn)蔷垡叶?PEG)，優(yōu)選地作為具有在200-20，000道爾頓之 間、更優(yōu)選地在500-10，000道爾頓之間、仍更優(yōu)選地在750-5000道爾頓之間分子量的PEG 鏈。甲氧基或乙氧基封端的PEG類似物也是以多種聚合物大小例如120-20，000道爾頓商 業(yè)可獲得的優(yōu)選親水聚合物。在脂質(zhì)體形成時(shí)添加至脂質(zhì)混合物并處于脂質(zhì)聚合物綴合物形式的額外聚合物 鏈產(chǎn)生從脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層的內(nèi)表面和外表面均伸出的聚合物鏈。一般通過(guò)包括0. 5-20摩 爾百分?jǐn)?shù)之間的聚合物衍生化脂質(zhì)與剩余的脂質(zhì)體形成組分(例如形成小泡的脂質(zhì))實(shí)現(xiàn) 在脂質(zhì)體形成時(shí)添加脂質(zhì)聚合物綴合物。已經(jīng)在例如美國(guó)專利號(hào)5，395，619、在美國(guó)專利號(hào)5，013，556、在美國(guó)專利號(hào) 5，631，018和在W0 98/07409中描述了制備用親水聚合物衍生化的形成小泡的脂質(zhì)。將理解的是親水聚合物可以穩(wěn)定偶聯(lián)至脂質(zhì)或借助不穩(wěn)定鍵偶聯(lián)，這允許包衣的脂質(zhì)體在血流 中循環(huán)時(shí)或應(yīng)答于刺激物時(shí)脫去聚合物鏈表層?！皟?nèi)化抗體”是與細(xì)胞表面上的受體或其他配體結(jié)合后被轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)例如轉(zhuǎn)運(yùn) 至溶酶體或其他細(xì)胞器或轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞漿內(nèi)的抗體。本發(fā)明涉及用于一線至多線治療、特別地至二線、特別地至三線、特別地至四線、 特別地至五線、特別地至六線、特別地至七線和更高線治療臨床設(shè)立的人患者中癌癥、特別 地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表癌癥的免疫脂質(zhì)體，其中所述 的免疫脂質(zhì)體包含識(shí)別并與實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗體或抗體片段并且包 含至少一種抗腫瘤藥。本發(fā)明的免疫脂質(zhì)體組合物因而也包括特異性識(shí)別并與腫瘤衍生細(xì)胞的表面上 EGF受體結(jié)合的抗體或抗體片段，包括Fab、Fab，、F(ab，)2、Fabc, Fv、單鏈和單鏈抗體。在 另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含與腫瘤衍生細(xì)胞的表面上EGF受體特異性結(jié)合的至少一個(gè) 結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體是包含與腫瘤衍生細(xì)胞的表面上EGF受體特異 性結(jié)合的至少一個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域的單鏈抗體?？贵w可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的共價(jià)方法接合至脂質(zhì)體。為了共價(jià)地接合抗體至脂質(zhì) 體，將含有末端官能化聚乙二醇鏈的衍生化脂質(zhì)摻入脂質(zhì)體。在脂質(zhì)體形成后，末端官能化 基團(tuán)可以與抗體反應(yīng)用于偶聯(lián)抗體至脂質(zhì)體。 存在廣泛類型的用于接合所選親水性聚合物至所選脂質(zhì)并活化聚合物的游離未 接合末端以與所選配體反應(yīng)的技術(shù)，并且特別地已經(jīng)廣泛研究了親水性聚合物聚乙二醇 (PEG) (18 ；19 ；20 ；21 ；22)。通常，將PEG鏈官能化以含有適于例如與多種類型配體中存在的巰基、氨基和醛 或酮(一般衍生自溫和氧化抗體的糖部分)偶聯(lián)的反應(yīng)基。此類PEG末端反應(yīng)基的例子包 括馬來(lái)酰亞胺(用于與巰基反應(yīng))、N-羥琥珀酰亞胺(NHS)或NHS碳酸酯(用于與伯胺反 應(yīng))、酰胼或胼(用于與醛或酮反應(yīng))、碘乙?；?偏好地與巰基反應(yīng))和二硫代吡啶(硫 羥反應(yīng)性)。通過(guò)這些方法中任意方法制備攜帶所截留物并承載表面結(jié)合的靶向性配體的 脂質(zhì)體，即靶向的治療性脂質(zhì)體。優(yōu)選的制備方法是插入法，其中預(yù)制的脂質(zhì)體與靶向性 綴合物孵育以實(shí)現(xiàn)靶向性綴合物插入脂質(zhì)體雙層。在這種方法中，通過(guò)多種技術(shù)(如(23) 中詳述的那些技術(shù))制備脂質(zhì)體，并且下文將描述為支持本發(fā)明所制備的脂質(zhì)體的具體例 子。一般而言，脂質(zhì)體是可以由簡(jiǎn)單的脂質(zhì)膜水化技術(shù)形成的多層小泡(MLV)。在這種方 法中，在容器中蒸發(fā)溶解于適宜有機(jī)溶劑中的上文詳述類型的脂質(zhì)體形成脂質(zhì)的混合物以 形成薄膜，該薄膜隨后被含水介質(zhì)覆蓋。該脂質(zhì)膜水化以形成MLV，通常大小在約0. 1至10 微米之間。脂質(zhì)體可以包括用親水聚合物衍生化的形成小泡的脂質(zhì)以形成脂質(zhì)體表面上的 親水聚合物鏈表面層。脂質(zhì)-聚合物綴合物的添加是任選的，因?yàn)樵诓迦氩襟E后，如下文所 述，脂質(zhì)體將包括脂質(zhì)_聚合物_靶向性配體。在脂質(zhì)體形成時(shí)添加至脂質(zhì)混合物并處于 脂質(zhì)聚合物綴合物形式的額外聚合物鏈產(chǎn)生從脂質(zhì)體脂質(zhì)雙層的內(nèi)表面和外表面均伸出 的聚合物鏈。一般通過(guò)包括0. 5-20摩爾百分?jǐn)?shù)之間的聚合物衍生化脂質(zhì)與剩余的脂質(zhì)體 形成組分(例如形成小泡的脂質(zhì))實(shí)現(xiàn)在脂質(zhì)體形成時(shí)添加脂質(zhì)聚合物綴合物。制備聚合 物衍生化脂質(zhì)的示例性方法和形成聚合物包衣的脂質(zhì)體的示例性方法已經(jīng)在美國(guó)專利號(hào) 5，013，556,5, 631，018和5，395，619中描述，所述專利通過(guò)引用的方式并入本文。將理解的是親水聚合物可以穩(wěn)定偶聯(lián)至脂質(zhì)或借助不穩(wěn)定鍵偶聯(lián)，這允許包衣的脂質(zhì)體在血流中循 環(huán)時(shí)或應(yīng)答于刺激物時(shí)脫去聚合物鏈表層。備選地，抗體-脂質(zhì)衍生物可以首先形成并隨后摻入脂質(zhì)體。作為例子，將抗體偶 聯(lián)至游離DSPE-PEG分子的馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)?？贵w偶聯(lián)的DSPE-PEG分子隨后用來(lái)形成小泡。 在形成脂質(zhì)體后，摻入靶向性配體以獲得靶向細(xì)胞的治療性脂質(zhì)體。通過(guò)孵育預(yù) 制的脂質(zhì)體與如上文所述制備的脂質(zhì)_聚合物_配體綴合物來(lái)?yè)饺氚邢蛐耘潴w。將預(yù)制的 脂質(zhì)體和綴合物在實(shí)現(xiàn)綴合物與脂質(zhì)體締合的條件下孵育，所述的締合可以包括該綴合物 與外部脂質(zhì)體雙層相互作用或綴合物插入脂質(zhì)體雙層。更具體地，將這兩種組分在實(shí)現(xiàn)綴 合物與脂質(zhì)體以如下方式締合的條件下孵育，使得靶向性配體從脂質(zhì)體表面指向外部并因 而可用于與其相關(guān)受體相互作用，將理解的是基于幾種變量確定有效實(shí)現(xiàn)此種締合或插入 的條件，所述變量包括想要的插入速率(其中較高的孵育溫度可以實(shí)現(xiàn)較快的插入速率)、 可以安全加熱配體而不影響其活性的溫度和較小程度地包括脂質(zhì)及脂質(zhì)組合物的相變溫 度。還將理解的是插入過(guò)程可以因存在溶劑如兩親性溶劑(包括聚乙二醇和乙醇)或去污 劑而變化。當(dāng)脂質(zhì)-聚合物-配體綴合物形式的靶向性綴合物與含水溶劑混合時(shí)，該綴合物 一般將形成膠束溶液。綴合物的膠束溶液與預(yù)制脂質(zhì)體的懸液混合以將綴合物與脂質(zhì)體孵 育和締合或?qū)⒕Y合物插入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層。孵育過(guò)程有效實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)_聚合物_抗體綴合 物與脂質(zhì)體的外部雙層小葉締合或插入其中以形成免疫脂質(zhì)體。在制備后，免疫脂質(zhì)體優(yōu)選地具有如通過(guò)例如動(dòng)態(tài)光散射法在30 [度]或90 [度] 所測(cè)量的小于約200nm、優(yōu)選在約85-120nm之間并更優(yōu)選在90-110nm之間的尺寸。脂質(zhì)體組合物一般用以下述摩爾比存在的脂質(zhì)組分制備約30-75百分?jǐn)?shù)形成小 泡的脂質(zhì)、25-40百分?jǐn)?shù)膽固醇、0. 5-20百分?jǐn)?shù)聚合物衍生化脂質(zhì)和0. 0001-10摩爾百分?jǐn)?shù) 用于抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)衍生物。一般而言，如下文所述，通過(guò)在脂質(zhì)體形成之前添加治療藥物至形成小泡的脂質(zhì) 而將該藥物摻入脂質(zhì)體以截留該藥物于形成的脂質(zhì)體中。如果該藥物是疏水的，則直接添 加藥物至疏水混合物。如果該藥物是親水的，則可以添加該藥物至含水介質(zhì)，其中所述含水 介質(zhì)覆蓋蒸發(fā)的脂質(zhì)的薄膜。在本發(fā)明中待使用的脂質(zhì)體包含抗腫瘤藥。構(gòu)思了用于本發(fā)明中的抗腫瘤化合 物，包括但不限于植物生物堿，如長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿和依托泊苷；蒽環(huán)類藥抗生素包括多柔 比星、表柔比星、柔紅霉素；氟尿嘧啶；抗生素，包括博來(lái)霉素、絲裂霉素、光神霉素、放線菌 素D ；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，如喜樹(shù)堿及其類似物；和鉬化合物，包括順鉬及其類似物如卡鉬。 適合使用的其他常規(guī)化療藥是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且包括天冬酰胺酶、白消安、苯丁 酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、達(dá)卡巴嗪、雌莫司汀磷酸鈉、氟尿苷、氟尿嘧啶(5-FU)、羥基 脲(羥脲)、異環(huán)磷酰胺、洛莫司汀(CCNU)、鹽酸氮芥(氮芥)、美法侖、巰基嘌呤、氨甲蝶 呤(MIX)、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、丙卡巴胼、鏈脲佐菌素、硫鳥(niǎo)嘌呤、噻替派、安吖啶 (m-AMSA)、阿扎胞苷、六甲嘧胺(HMM)、米托胍腙(甲基GAG ；甲基乙二醛雙脒基腙；MGBG)、 司莫司汀(甲基CCNU)、替尼泊苷(VM-26)和硫酸長(zhǎng)春地辛。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，脂質(zhì)體具有適于外滲入實(shí)體瘤的尺寸。在脂質(zhì)體也 包含親水聚合物鏈表面層以延長(zhǎng)脂質(zhì)體的血液循環(huán)壽命時(shí)，這是特別有用的。保持循環(huán)持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間段例如大于約2-5小時(shí)的脂質(zhì)體能夠滲入顯示受損泄露性脈管系統(tǒng)或內(nèi)皮屏 障的腫瘤和感染部位。此類脂質(zhì)體一般是在約40-200nm之間，更優(yōu)選是在50-150nm之間， 最優(yōu)選是在70-120nm之間。將所選藥劑通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法摻入脂質(zhì)體，所述標(biāo)準(zhǔn)方法包括(i)通過(guò)用該藥物的水 溶液水化脂質(zhì)薄膜被動(dòng)截留水溶性化合物，(ii)通過(guò)水化含有該藥物的脂質(zhì)薄膜被動(dòng)截留 親脂化合物，和(iii)加載對(duì)抗內(nèi)部/外部脂質(zhì)體PH梯度的可離子化藥物。其他方法如反 向蒸發(fā)法也是合適的。備選地，藥物可以通過(guò)主動(dòng)運(yùn)輸機(jī)制摻入預(yù)制的脂質(zhì)體。一般而言，在這種情況 下，藥物應(yīng)答于差異性鉀離子或氫離子濃度而攝入脂質(zhì)體中(Mayer，1986 ;Mayer 1989)。在脂質(zhì)體形成后，可以篩分脂質(zhì)體以獲得具有基本上均一大小范圍的、一般在約 0. 01至0. 5微米之間、更優(yōu)選在0. 03-0. 40微米之間的脂質(zhì)體群體。用于REV和MLV的一 種有效篩分方法包括經(jīng)過(guò)一系列聚碳酸酯膜擠出脂質(zhì)體的含水懸液，所述的聚碳酸酯膜具 有所選的范圍0. 03至0. 2微米、一般0. 05,0. 08,0. 1或0. 2微米的統(tǒng)一孔徑。膜的孔徑大 體對(duì)應(yīng)于經(jīng)該膜擠出所產(chǎn)生的脂質(zhì)體的最大尺寸，特別地在經(jīng)相同的膜擠出該制備物兩次 或多次的情況下。均化方法也用于減小脂質(zhì)體大小至lOOnm或更小的尺寸(24)?？梢酝ㄟ^(guò)這些方法中的任意方法制備攜帶所截留物并承載表面結(jié)合的靶向性配 體的脂質(zhì)體，即靶向的治療性脂質(zhì)體。優(yōu)選的制備方法是插入法，其中預(yù)制的脂質(zhì)體與靶 向性綴合物孵育以實(shí)現(xiàn)靶向性綴合物插入脂質(zhì)體雙層。在這種方法中，通過(guò)多種技術(shù)(如 (23)中詳述的那些技術(shù))制備脂質(zhì)體，并且下文描述為支持本發(fā)明所制備的脂質(zhì)體的具體 例子。一般而言，脂質(zhì)體是多層小泡(MLV)或單層小泡(ULV)。MLV可以通過(guò)簡(jiǎn)單的脂質(zhì)膜水化技術(shù)形成。在這種方法中，在容器中蒸發(fā)溶解于適 宜有機(jī)溶劑中的上文詳述類型的脂質(zhì)體形成脂質(zhì)的混合物以形成薄膜，該薄膜隨后由含水 介質(zhì)覆蓋。該脂質(zhì)膜水化以形成MLV，通常大小在約0. 1至10微米之間。ULV可以通過(guò)反復(fù)凍融法形成。在這種方法中，1-2-油?；?3-sn-甘油磷酸膽堿 和Choi或者DSPC和Choi (摩爾比3 2)與mPE⑶SPE(0. 5-5mol%磷脂)混合。隨后將脂 質(zhì)體通過(guò)具有0. 1、0. 08和0.05 ym定義孔徑的聚碳酸酯濾器擠出幾次。這產(chǎn)生一般具有 直徑70-120nm大小的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體的尺寸可以由動(dòng)態(tài)光散射法確定。可以使用標(biāo)準(zhǔn)磷 酸鹽測(cè)定法測(cè)量脂質(zhì)體濃度。通過(guò)上述任意方法能夠獲得的抗EGFR免疫脂質(zhì)體具有臨床相關(guān)性并且可以用于 二線和更高線治療罹患癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表癌癥的人患者中。 構(gòu)思的用于本發(fā)明中的免疫脂質(zhì)體包含識(shí)別并與實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原結(jié)合的抗 體或抗體片段。特別地，該免疫脂質(zhì)體包含F(xiàn)ab、Fab，、F(ab，)2、Fabc、Fv片段或者是單鏈 抗體。構(gòu)思的用于本發(fā)明中的免疫脂質(zhì)體還包含抗腫瘤藥，特別地還包含選自多柔比 星、表柔比星和長(zhǎng)春瑞濱中的抗腫瘤藥、特別地還包含多柔比星。本發(fā)明的免疫脂質(zhì)體可以以包含所述免疫脂質(zhì)體和可藥用載體和/或稀釋劑和/ 或賦形劑的藥物組合物的形式施用至人患者。本發(fā)明藥物組合物的配制可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)完成。本發(fā)明的免疫脂質(zhì)體或包含所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物可以在固體劑、液體
20劑、氣霧劑的形式以合適的藥學(xué)有效劑量施用至受試者。固體組合物的例子包括丸劑、膏 劑和可植入的劑量單元。丸劑可以經(jīng)口施用。治療性膏劑可以局部施用?？芍踩氲膭┝繂?元可以局部地施用，例如在腫瘤部位，或可以植入以全身性釋放治療性組合物，例如皮下植 入。液體組合物的例子包括適用于輸注的制劑、適用于肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)注射的制 劑和用于局部和眼內(nèi)施用的制劑。氣霧制劑的例子包括用于施用至肺部的吸入制劑。本發(fā)明的免疫脂質(zhì)體或包含所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)施用途 徑施用。一般而言，所述組合物可以通過(guò)局部、經(jīng)口、直腸、鼻、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或腸胃外(例如 靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi))途徑施用。此外，該組合物可以摻入持續(xù)釋放基質(zhì)如生物降解性聚合 物，所述聚合物植入想要遞送至的位置附近，如在腫瘤部位處。施用方法包括施用單次劑 量、以預(yù)定時(shí)間間隔施用重復(fù)劑量和持續(xù)施用預(yù)定的時(shí)間段。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知藥物組合物的劑量將取決于多種因素，例如待治療的病 癥，所用的具體組合物和其他臨床因素，如患者的重量、尺寸、性別和總體健康狀況、身體表 面積、待施用的化合物或組合物、同時(shí)施用的其他藥物、和施用途徑。本發(fā)明的免疫脂質(zhì)體或包含所述免疫脂質(zhì)體的藥物組合物可以與生物活性物質(zhì) 或化合物或其他組合物組合施用，所述的組合物包含所述生物活性物質(zhì)或化合物，特別地 抗腫瘤化合物，特別地至少一種抑制細(xì)胞性化合物，特別地選自以下的化合物道諾霉素、 伊達(dá)比星、米托蒽醌、絲裂霉素、順鉬和其他鉬類似物、長(zhǎng)春新堿、表柔比星、阿克拉霉素、氨 甲蝶呤、依托泊苷、多柔比星、阿糖胞苷、氟尿嘧啶和其他氟化嘧啶、嘌呤或核苷、特別地吉 西他濱、博來(lái)霉素、絲裂霉素、普卡霉素、放線菌素D、環(huán)磷酰胺和其衍生物、噻替派、BCNU、紫 杉醇、多西他賽和其他紫杉烷衍生物和分離物、喜樹(shù)堿、多肽、核酸、具有硫代磷酸酯核苷酸 間鍵的核酸和具有聚酰胺核苷酸間鍵的核酸，但尤其地多柔比星、表柔比星和長(zhǎng)春瑞濱，以 及本發(fā)明的抗體和任選地可藥用載體和/或稀釋劑和/或賦形劑。藥學(xué)活性物質(zhì)，特別地免疫脂質(zhì)體中截留的抗腫瘤化合物，可以以0. lmg/m2和 2. 5g/m2身體表面和每次給藥之間的量存在。一般而言，施用方案應(yīng)當(dāng)在本發(fā)明抗腫瘤化合 物的0. 5mg/m2與1000mg/m2之間的范圍內(nèi)，特別地在1. Omg/m2至500mg/m2之間的范圍內(nèi)并 且特別地在5. Omg/m2與250mg/m2之間的范圍內(nèi)、特別地在10. Omg/m2與150mg/m2之間的范 圍內(nèi)，同時(shí)處于這些范圍內(nèi)的全部各個(gè)數(shù)字也是本發(fā)明的部分。如果施用通過(guò)連續(xù)輸注進(jìn) 行，更適宜的劑量可以是每小時(shí)在每公斤體重單位0. 01 y g和10mg之間的范圍，同時(shí)處于 這些范圍內(nèi)的全部各個(gè)數(shù)字也是本發(fā)明的部分。免疫脂質(zhì)體的抗體濃度在每微摩爾磷脂1 P g至150 y g抗體或抗體片段之間的范 圍內(nèi)，特別地在每微摩爾磷脂5 i! g至100 i! g抗體或抗體片段之間的范圍內(nèi)，特別地在每微 摩爾磷脂10 i! g至100 i! g抗體或抗體片段之間的范圍內(nèi)，特別地在每微摩爾磷脂20 i! g至 50 i! g抗體或抗體片段之間的范圍內(nèi)，特別地在每微摩爾磷脂30 i! g至40 i! g抗體或抗體片 段之間的范圍內(nèi)。本發(fā)明的免疫脂質(zhì)體制備物可以制備為藥物組合物的形式，用于例如通過(guò)靜脈 內(nèi)、皮下或肌內(nèi)注射或通過(guò)靜脈內(nèi)滴注進(jìn)行腸胃外施用，其中所述的藥物組合物含有溶解 于或分散在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的可藥用載體中的分離和純化的免疫脂質(zhì)體。就腸胃外施用的藥物組合物而言，可以使用任意的常規(guī)添加劑，如賦形劑、佐劑、 黏合劑、崩解劑、分散劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、吸收增強(qiáng)劑、緩沖劑、表面活性劑、增溶劑、防腐劑、乳化劑、等滲劑、穩(wěn)定劑、注射用增溶劑、PH調(diào)節(jié)劑等。促進(jìn)活性化合物加工成可以藥學(xué)方式使用的制備物的可接受載體、稀釋劑和佐 劑在所用的劑量和濃度對(duì)接受者無(wú)毒并且包括緩沖劑如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機(jī)酸； 抗氧化劑(包括抗壞血酸和甲硫氨酸)；防腐劑(如十八烷基二甲基芐基氯化銨；六甲氯 銨；苯扎氯銨、苯扎溴銨；苯酚、丁醇或芐醇；對(duì)羥基苯甲酸烷基酯如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或 丙酯；兒茶酚；雷瑣辛；環(huán)己醇；3-戊醇和間甲酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽； 蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨 酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其他碳水化合物包括葡萄 糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA ；糖如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；形成鹽的反 離子如鈉；金屬?gòu)?fù)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)和/或非離子表面活性劑如TWEEN 、 PLUR0NICS 或聚乙二醇(PEG)。施用藥物組合物的形式可以是全身或局部的。例如，此類組合物的施用可以是各 種腸胃外途徑，如皮下、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、經(jīng)皮、頰途徑或借助植入裝置，并 且也可以通過(guò)蠕動(dòng)手段遞送。施用通常以腸胃外例如靜脈內(nèi)，特別地以輸注形式進(jìn)行。用于腸胃外施用的制品 包括無(wú)菌的水溶液或非水溶液、混懸劑和乳劑。非水溶劑包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、 植物油如橄欖油和可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯。含水溶劑可以選自由水、醇/水溶液、乳濁 液或懸液組成的組，包括鹽水和緩沖的介質(zhì)。腸胃外載體包括氯化鈉溶液、林格右旋糖、右 旋糖和氯化鈉、乳酸化林格液或固定油，靜脈內(nèi)載體包括液體和養(yǎng)分補(bǔ)充物、電解質(zhì)補(bǔ)充物 (如基于林格右旋糖的那些電解質(zhì)補(bǔ)充物)和其他載體。也可以存在防腐劑(例如抗微生 物劑)、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。藥物組合物還可以包含蛋白質(zhì)載體例如血清白蛋白或免疫球蛋白，特別地人來(lái)源 的蛋白質(zhì)載體。根據(jù)藥物組合物的預(yù)期用途，其他生物活性物質(zhì)可以在本發(fā)明的藥物組合 物中存在。在本發(fā)明的一個(gè)方面，產(chǎn)生了如本文中所述的免疫脂質(zhì)體(ILs)，其結(jié)合EGFR以 提供抗體指導(dǎo)的抗癌藥有效胞內(nèi)遞送入靶細(xì)胞，旨在研究通過(guò)這種方法是否可能克服抗藥 性機(jī)制，所述抗藥性機(jī)制仍是癌癥療法中更好結(jié)果的重大障礙。ILs可以按模塊方式用共接連接至含有多種藥物或探針的穩(wěn)定化脂質(zhì)體的多種 MAb或MAb片段構(gòu)建，所述的MAb或MAb片段包括嵌合抗體例如來(lái)自C225(西妥昔單抗、愛(ài) 必妥 )的Fab’或人源化抗體例如EMD72000。隨后可以用如此產(chǎn)生的ILs治療也以mdr介導(dǎo)多藥抗性為特征的過(guò)量表達(dá)EGFR 的細(xì)胞，例如人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231/mdr或結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系HT-29/mdr。在多藥抗 性細(xì)胞系中，載有多柔比星(dox)的ILs能顯示產(chǎn)生比游離多柔比星大15-86倍的細(xì)胞毒 性(例如HT-29/mdr細(xì)胞中ILs-dox的IC50 = 0. 37而游離多柔比星的IC50 = 6. 0 ( u g dox/ ml)。在非耐受性HT-29細(xì)胞中，多柔比星的免疫脂質(zhì)體細(xì)胞毒性是與游離藥物的免疫脂質(zhì) 體細(xì)胞毒性可比較的(IC5Q = 0. 23 ug dox/ml對(duì)0. 36 u g dox/ml)，而比非靶向的脂質(zhì)體多 柔比星具有顯著更多的細(xì)胞毒性(IC5(1 > 27ug dox/ml)。令人感興趣的是，MDA-MB-231/ mdr細(xì)胞中的胞內(nèi)分布研究揭示了游離多柔比星與免疫脂質(zhì)體dox遞送之間的明顯差異。 雖然游離多柔比星被有效泵出這種多藥抗性腫瘤細(xì)胞之外，但在相同濃度上的免疫脂質(zhì)體dox在胞漿中實(shí)現(xiàn)3. 5-8倍更高的dox累積并且在胞核中實(shí)現(xiàn)3. 5-4. 9倍更高的dox累積。最后，在MDA-MB-231/mdr異種移植物模型中的體內(nèi)療法研究證實(shí)抗EGFR ILs-dox有效靶向多藥抗性細(xì)胞的能力。盡管游離多柔比星在這種高度多藥抗性腫瘤模型 中在其MTD上沒(méi)有顯示任何活性，然而抗EGFRILs-dox顯示令人印象深刻的明顯優(yōu)于全部 其他療法的抗腫瘤作用。根據(jù)本發(fā)明和如本文中披露的免疫脂質(zhì)體因而對(duì)過(guò)量表達(dá)EGFR的腫瘤細(xì)胞提供 有效和靶向的藥物遞送并且甚至對(duì)多藥抗性細(xì)胞顯示強(qiáng)烈活性。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解除了具體描述的那些內(nèi)容之外，本文中所述的本發(fā)明易受 變化和改變。將理解的是本發(fā)明包括全部此類變化和改變，而不脫離本發(fā)明的精神和基本 特征。本發(fā)明也分別或總體地包括在本發(fā)明中提及或顯示的全部步驟、特征、組合物和化合 物，以及任意和全部組合或任意兩個(gè)或多個(gè)所述步驟或特征。本公開(kāi)因而以全部所述方面 加以考慮并且不限于此，從而本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求書(shū)指示，并且屬于等同性意思 和范圍內(nèi)的全部變化意圖包含于本發(fā)明范圍內(nèi)。在本說(shuō)明書(shū)通篇范圍內(nèi)援引多篇參考文獻(xiàn)，每份參考文獻(xiàn)通過(guò)全部引用的方式并 入本文。將參考以下實(shí)施例更充分地理解前面的描述。然而，此類實(shí)施例舉例說(shuō)明實(shí)施本 發(fā)明的方法并且不意圖限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例目標(biāo)群體是已經(jīng)接受過(guò)所有可使用的標(biāo)準(zhǔn)療法的具有過(guò)量表達(dá)EGFR的實(shí)體瘤的
^^ o特別地，所述患者罹患以下癌癥并且腫瘤在以下治療下已經(jīng)進(jìn)展前列腺癌，具有在激素、多西他賽、米托蒽醌治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。胰腺癌和膽囊癌，具有在吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。腎癌，具有在干擾素、卡培他濱、舒尼替尼、索拉菲尼治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。膀胱上皮癌，具有在順鉬或卡鉬、吉西他濱、多柔比星、氨甲蝶呤、長(zhǎng)春新堿治療時(shí) 進(jìn)展的腫瘤。非小細(xì)胞肺癌，具有在順鉬或卡鉬、吉西他濱、長(zhǎng)春瑞濱、培美曲塞、多西他賽、吉 非替尼治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。小細(xì)胞肺癌，具有在順鉬或卡鉬、依托泊苷、伊立替康、多柔比星、長(zhǎng)春新堿、環(huán)磷 酰胺、托泊替康治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。間皮瘤，具有在順鉬或卡鉬、吉西他濱、培美曲塞治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。乳腺癌，具有在順鉬或卡鉬、多柔比星、長(zhǎng)春新堿、環(huán)磷酰胺、紫杉醇、多西他賽、吉 西他濱、長(zhǎng)春瑞濱、卡培他濱、絲裂霉素、氨甲蝶呤、米托蒽醌、貝伐單抗、曲妥珠單抗治療時(shí) 進(jìn)展的腫瘤。食管癌，具有在順鉬或卡鉬、5-FU、多西他賽治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。頭頸癌，具有在順鉬或卡鉬、5-FU、多西他賽、西妥昔單抗治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。腦腫瘤，具有在替莫唑胺、貝伐單抗、伊立替康、長(zhǎng)春新堿、丙卡巴胼、CCNU、BCNU治 療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。
肝細(xì)胞癌，具有在舒尼替尼、索拉非尼治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。結(jié)腸和直腸癌，具有在西妥昔單抗、貝伐單抗、奧沙利鉬、伊立替康、卡培他濱、 5-FU治療時(shí)進(jìn)展的腫瘤。在試驗(yàn)中測(cè)試的治療性化合物是C225-ILS-dox，是一種其中EGFR特異性抗體 C225與含有多柔比星的脂質(zhì)體的脂質(zhì)膜共價(jià)結(jié)合的構(gòu)建體。使用這種化合物的基本理由是 這樣的事實(shí)多柔比星是許多種人腫瘤中最有效的藥物之一并且高百分?jǐn)?shù)的這些惡性病確 實(shí)表達(dá)EGFR。A:I期研究CC1的方案1.選擇標(biāo)準(zhǔn)1. 1.患者總數(shù)大約30位患者。1.2.納入標(biāo)準(zhǔn)在登記參與本研究前，候選人必須達(dá)到全部以下標(biāo)準(zhǔn)1.組織學(xué)證明的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤。2.EC0G 表現(xiàn)<2。3.沒(méi)有額外的標(biāo)準(zhǔn)療法可用于該患者。4.在最新近可評(píng)價(jià)的腫瘤組織中確定的EGFR過(guò)量表達(dá)(根據(jù)DAK0EGFR pharmDx-試驗(yàn))。5.無(wú)伴行的抗腫瘤療法(類固醇是允許的-在乳腺癌和前列腺癌中，需要類固醇 劑量在研究期間保持穩(wěn)定)。6.自停止任何先前抗腫瘤治療以來(lái)至少4周(在亞硝基脲或絲裂霉素C的情況下 6周)。7.在具有先前蒽環(huán)類藥暴露史的患者中，要求正常的超聲心動(dòng)圖(LVEF>50%)。8.年齡彡18歲。9.男性或女性。10.育齡女性和男性患者必須使用有效避孕措施。11.在參與本研究前，愿意并且能夠簽署知情同意書(shū)并且在本研究持續(xù)期間服從 本方案。1-3.排除標(biāo)準(zhǔn)如果符合以下任意標(biāo)準(zhǔn)，則必須從本研究排除候選人1.妊娠和/或哺乳。2.具有以下實(shí)驗(yàn)室值的患者嗜中性粒細(xì)胞< 1. 5xl09個(gè)/L血小板<lOOxlO9 個(gè)/L血清肌酸> 3. Ox正常上限ALAT、ASAT > 3. Ox正常上限(在肝臟轉(zhuǎn)移作為酶改變的唯一可能原因的患者中 5. Ox)堿性磷酸酶> 3. Ox正常上限(在肝臟轉(zhuǎn)移或骨轉(zhuǎn)移作為酶改變的唯一可能原因 的患者中5. Ox)
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膽紅素>3. Ox正常上限3.在治療開(kāi)始前4周內(nèi)參與任何調(diào)查性藥物研究。4.具有臨床明顯和失控的腎病或肝病的患者。5.臨床明顯的心臟病充血性心力衰竭(紐約心臟協(xié)會(huì)III或IV類)；有癥狀的 冠狀動(dòng)脈??；用藥物療法沒(méi)有充分控制的心律不齊；在最近12個(gè)月內(nèi)的心肌梗死。6.可能有損患者參與本試驗(yàn)的能力的(由研究人員判定的)任何嚴(yán)重的基礎(chǔ)性醫(yī) 學(xué)病癥(例如活躍的自身免疫病、失控的糖尿病等)。7.根據(jù)瑞士治療產(chǎn)品署批準(zhǔn)的產(chǎn)品信息施用愛(ài)必妥 或Caelyx 時(shí)禁忌的任何 伴行藥物。8.累積的多柔比星劑量> 300mg/m2BSA(或心臟毒性蒽環(huán)類藥等同物)。9.具有由研究人員判定為臨床明顯并妨礙知情同意或干擾順應(yīng)性的失控性發(fā)作、 中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或精神病學(xué)失能的患者。10.腦轉(zhuǎn)移。2.安全性參數(shù)2. 1.不利事件(主要對(duì)象)臨床研究期間遭遇的全部不利事件將記錄于患者的歷史/文件中。臨床不利事件的強(qiáng)度將根據(jù)NCI CTC評(píng)級(jí)系統(tǒng)3. 0版(http //ctep. info. nih. gov/reporting/ctc. html)評(píng)級(jí)。2-2.實(shí)驗(yàn)室參數(shù)在研究啟動(dòng)之前，必須記錄參與實(shí)驗(yàn)室的正常值。本研究期間必須實(shí)施以下實(shí)驗(yàn) 室操作皿(根據(jù)需要在新施用研究藥物之前)血紅蛋白_白細(xì)胞計(jì)數(shù)，包括白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù)每4周(在新施用研究藥物之前):ASAT-ALAT膽紅素堿性磷酸酶血清肌酸LDH 丐尿分析(“U-狀況”檢測(cè)紅細(xì)胞尿、白細(xì)胞尿和蛋白尿)僅在周期1期間的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究在0、24、48、96小時(shí)和在第8日的血樣(2x7. 5ml血清管)2. 3.生命體征和體格檢杳在研究開(kāi)始之前應(yīng)當(dāng)記錄以下生命體征和體格檢查結(jié)果體溫血壓心率
高度(一旦開(kāi)始篩查)重量體力狀況(EC0G)2. 4.專門研究對(duì)于藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，將在0、24、48、96小時(shí)以及在第8日抽取血樣(2x7. 5ml 血清管)。血漿將通過(guò)離心從全血分開(kāi)并冷凍在-80°C以進(jìn)一步分析。多柔比星濃度將由熒 光確定。由于游離多柔比星的快速清除率，這種簡(jiǎn)單分析提供對(duì)循環(huán)性完整C225-ILS-dox 的優(yōu)異測(cè)量。將使用 PK Solution 2. 0 軟件(Summit Research Serviced, Montrose, CO, 美國(guó))，通過(guò)非區(qū)室藥物代謝動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)分析確定藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。2. 5.針對(duì)毒件的劑量調(diào)整這是一個(gè)劑量逐步升高研究(I期)。對(duì)于細(xì)節(jié)，還參見(jiàn)10. 3. 2部分。在感受到毒性(DLT)但受益于療法的個(gè)體患者中，根據(jù)主要研究人員的臨床判斷 所確定，以降低的劑量繼續(xù)治療是可選項(xiàng)(撤出研究)。如果可能，應(yīng)當(dāng)對(duì)癥治療毒性。如果毒性出現(xiàn)，將使用適宜的治療來(lái)改善體征和癥 狀，包括針對(duì)惡心和嘔吐的止吐藥、針對(duì)腹瀉的止瀉藥、針對(duì)藥物發(fā)熱的退熱藥和抗組胺藥 和針對(duì)皮膚毒性的50% DMS0軟膏劑。2.6支持措施2.6.1惡心/嘔吐應(yīng)當(dāng)從第一周期開(kāi)始給予患者預(yù)防性止吐治療。推薦使用5-HT3-受體-拮抗劑。 應(yīng)當(dāng)給予在前面周期中感受等級(jí)> 3惡心/嘔吐的任何患者更有侵入性的止吐預(yù)防措施。盡管給予適宜藥物，如果等級(jí)彡3惡心/嘔吐持續(xù)，則該患者必須從本研究退出。2.6.2 腹瀉對(duì)第一周期不推薦預(yù)防性抗腹瀉療法。然而，在腹瀉首次發(fā)生后，該患者應(yīng)當(dāng)在首 次發(fā)作后接受用洛哌丁胺4mg對(duì)癥治療，隨后在每次新發(fā)作用2mg洛哌丁胺對(duì)癥治療直至 腹瀉康復(fù)(每日不超過(guò)16mg)。盡管給予適宜藥物，如果等級(jí)彡3腹瀉持續(xù)，則該患者必須從本研究退出。2. 6. 3.掌跖紅斑(PPE =手足綜合征)應(yīng)當(dāng)從第一周期開(kāi)始給予患者預(yù)防性治療?；颊邞?yīng)當(dāng)在第-1至4日經(jīng)口接受8mg 地塞米松BID、在第5日接受4mg地塞米松BID并且在第6日接受4mg地塞米松。額外地， 患者應(yīng)當(dāng)在治療時(shí)間期間每日(經(jīng)口)接受150mg吡哆醇(維生素B6) (20)。盡管給予適 宜藥物，如果2或3級(jí)PPE出現(xiàn)，則C225-ILS-dox的施用應(yīng)當(dāng)中斷最長(zhǎng)14日。一旦PPE的 嚴(yán)重性降低至CTC等級(jí)1，則患者可以繼續(xù)治療(如果不因DLT放棄)。盡管給予預(yù)防性或?qū)ΠY治療，如果等級(jí)2或3毒性持續(xù)，則該患者必須從本研究退 出o3.疾病評(píng)價(jià)(功效標(biāo)準(zhǔn))3. 1.總體應(yīng)答率(次要目標(biāo))雖然應(yīng)答率不是本試驗(yàn)的主要目的，但是將通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)評(píng)價(jià)具有可測(cè)量疾病的 患者。腫瘤評(píng)估將在篩查期間和在2、4和6個(gè)治療周期后進(jìn)行。在治療結(jié)束后，第一年每 隔3個(gè)月并隨后根據(jù)臨床需要開(kāi)展評(píng)估。如果記錄到進(jìn)展，則在本研究范圍內(nèi)將不必開(kāi)展
26進(jìn)一步評(píng)估。在應(yīng)答性患者中，應(yīng)答必須在首次記錄該應(yīng)答后最少4周進(jìn)行證實(shí)。主要功效標(biāo)準(zhǔn)是將根據(jù)附錄1中給出的用于報(bào)告癌癥治療結(jié)果的RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng) 估的總體應(yīng)答率。必須在全部評(píng)價(jià)期間對(duì)每位患者確保連續(xù)CT掃描與X射線(例如利用反差等) 的一致性，同時(shí)相同技術(shù)在整個(gè)治療期間自始至終用于評(píng)價(jià)損害。3. 2.講展時(shí)間將從患者開(kāi)始治療的時(shí)間至患者首次記錄為具有疾病進(jìn)展的時(shí)間來(lái)測(cè)量進(jìn)展時(shí) 間。必須充分記錄并根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估疾病進(jìn)展。4.研究流程4. 1.篩杳在進(jìn)行任何研究特定篩查流程前必須提交知情同意書(shū)。篩查流程可以在兩個(gè)階段進(jìn)行。第一組評(píng)估可以在第1日治療開(kāi)始之前4周內(nèi)的 任意時(shí)間進(jìn)行。第二組評(píng)估必須在治療開(kāi)始之前7日內(nèi)進(jìn)行。如果評(píng)估在第1日進(jìn)行，它 們必須在研究藥物施用之前結(jié)束。第-28日至第1日(首日C225-ILS-dox，在藥物施用之前)評(píng)估
27 4. 2.在治療期間腫瘤評(píng)估將在篩查期間和在2、4和6個(gè)治療周期后進(jìn)行。在治療結(jié)束后，第一年 每隔3個(gè)月并此后根據(jù)臨床需要開(kāi)展評(píng)估。如果記錄到進(jìn)展，則在本研究范圍內(nèi)將不必開(kāi) 展進(jìn)一步評(píng)估。在應(yīng)答性患者中，應(yīng)答必須在首次記錄該應(yīng)答后最少4周進(jìn)行證實(shí)。實(shí)驗(yàn)室安全性評(píng)估血紅蛋白、白細(xì)胞和血小板將在第一周期期間每周進(jìn)行分析，并且如果沒(méi)有相反 的臨床指示，在后續(xù)周期期間每隔2周進(jìn)行分析。
轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素、堿性磷酸酶、肌酸酐、鈣、LDH和尿狀況將每隔4周進(jìn)行分析。將在每次訪問(wèn)時(shí)記錄不利事件。將在全部患者中在治療前和治療2和6個(gè)周期后(或在研究結(jié)束時(shí))并且如果臨 床提示時(shí)開(kāi)展超聲波心動(dòng)描記法。5.研究設(shè)計(jì)這是一個(gè)單中心、開(kāi)放研究。將以兩個(gè)階段進(jìn)行患者召募。首先，患者根據(jù)10. 3. 2部分(劑量方案和劑量調(diào) 節(jié))登記。第二階段允許根據(jù)如MTD所確定的劑量水平額外地召募至多6位額外患者。已經(jīng)完成治療期(24周)并顯示完全或部分應(yīng)答以及穩(wěn)定疾病的患者將進(jìn)入本研 究的觀察期。該期將在納入最后患者后12個(gè)月結(jié)束。在治療期或觀察期期間的任何時(shí)間，下述患者將離開(kāi)研究并任由研究人員治療， 所述患者根據(jù)附錄1中給出的用于報(bào)告癌癥治療結(jié)果的RECIST標(biāo)準(zhǔn)具有疾病進(jìn)展的體征 或因不可接受的毒性而中斷治療。6.研究藥物治療6. 1.藥物名稱、制劑、貯存將供應(yīng)C225-IL-dox作為腸胃外施用的每20ml小藥瓶10mg多柔比星溶液劑 (0. 5mg多柔比星/ml)使用。C225-ILs-dox應(yīng)當(dāng)貯存在2-8°C。6. 1. 1.脂質(zhì)體制備通過(guò)使用反復(fù)凍融以水化脂質(zhì)膜的脂質(zhì)膜水化-擠出法(23)制備脂質(zhì)體。脂質(zhì)體 包含1，2_ 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DSPC)和膽固醇(摩爾比3 2)，具有甲氧基 聚乙二醇(mPEG)-l，2- 二硬脂酰-3-sn-甘油磷酸乙醇胺(DSPE ；0. 5-5mol%磷脂；Avanti Polar Lipids ；Alabaster, AL) 0水化后，將脂質(zhì)體通過(guò)聚碳酸酯濾器(0. 1 P m孔徑)擠出 10次。脂質(zhì)體大小由動(dòng)態(tài)光散射法確定(一般80-100nm)。磷脂濃度由磷酸鹽測(cè)定法測(cè)量 (25)。對(duì)于載有ADS645WS (American Dye Source，魁北克，加拿大)的脂質(zhì)體，將熒光染 料(5mmol/L)溶解于緩沖液中以再水化干燥的脂質(zhì)。在被動(dòng)加載后，使用S印hadex G-75 層析法除去未封裝的染料。為封裝化療藥物多柔比星(Bedford實(shí)驗(yàn)室，Bedford，0H)和表柔比星 (Pharmacia, Kalamazoo, Ml)，使用硫酸銨進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遠(yuǎn)程加載方法(26，27)。為封裝長(zhǎng)春 瑞濱，在蔗糖八硫酸酯三乙基銨的溶液(TEA8S0S ；0. 65mol/L TEA，pH 5. 2-5. 5)中水化后如 所述制備脂質(zhì)體。在S印harose CL-4B大小排阻柱上除去未截留的TEA8S0S。以350g藥物 /mol磷脂的藥物對(duì)磷脂比添加長(zhǎng)春瑞濱并且用IN HC1調(diào)節(jié)pH至6. 5，隨后在60°C啟動(dòng)加 載過(guò)程持續(xù)30分鐘。所得脂質(zhì)體長(zhǎng)春瑞濱在S印hadex G_75柱上純化以除去未封裝的藥 物。6. 1. 2單克隆抗體片段和免疫脂質(zhì)體的制備如之前所述切割并還原完整C225mAb (西妥昔單抗，愛(ài)必妥；ImCloneSystems， 在New York，NY) (11)。Fab，片段共價(jià)地綴合至PEG-DSPE鏈末端處的馬來(lái)酰亞胺基團(tuán) (Mal-PEG-DSPE ；Nektar, Huntsville, AL ；參考文獻(xiàn) 8)。對(duì)于 C225_Fab，，綴合效率一般 是30%至50%。為摻入進(jìn)預(yù)制的脂質(zhì)體或商品PLD(Doxil，Alza Pharmaceuticals, PaloAlto, CA)，通過(guò)在55°C以30iig Fab，/ y mol磷脂的蛋白質(zhì)/脂質(zhì)體比共孵育30分鐘，將 mAb綴合物摻入脂質(zhì)體，產(chǎn)生70%至80%的摻入效率(11)。6. 1.3 制劑C225-ILs-dox University Hospital of Basel 白勺胃帛(Prof. C. Surber) M 備。C225-ILs-dox 將貯存在 pH 6-7 的 HEPES 緩沖鹽水(0. 9% NaCI ;HEPES 2mM)，以濃度 0.5mg多柔比星/ml。將C225-ILs-dox添加至250ml 5%葡萄糖中用于注射(500ml，對(duì)劑 量水平50mg/m2和以上)。這種制劑必須在葡萄糖中稀釋后24小時(shí)內(nèi)使用。稀釋的C225-ILS-dox應(yīng)當(dāng)是清 亮和淺紅色的溶液，沒(méi)有任何聚集跡象。6. 1. 4貯存要求小瓶的C225-ILS-dox必須在冰箱內(nèi)在2° _8°C范圍的溫度貯存以確保最佳保留 物理和生物化學(xué)完整性。重要的是不凍結(jié)該研究藥物，因?yàn)橹|(zhì)體將被破壞。C225-ILs-dox 可能對(duì)剪切有誘導(dǎo)的應(yīng)力(例如攪拌或從注射器快速推出)敏感。劇烈操作(如振搖) C225-ILs-dox溶液可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集并可以產(chǎn)生云霧狀溶液。小瓶?jī)H設(shè)計(jì)為單次使用。6. 2包裝和標(biāo)灃本研究藥物C225-ILS-dox的小瓶如下標(biāo)注僅用于臨床試驗(yàn)使用研究CC1C225-ILs-dox總含量:20ml,0. 5mg多柔比星/ml = 10mg/小瓶貯存在2-8°C之間(勿凍結(jié))失效日期批號(hào)研究員姓名患者標(biāo)識(shí)6. 3研究治療6. 3. 1.劑量選擇的原理在眾多II期和III期試驗(yàn)中并還在例行腫瘤學(xué)實(shí)踐中使用的Caelyx標(biāo)準(zhǔn)劑量是 40-50mg/m2，作為短時(shí)輸注每4周給予。以這個(gè)劑量給予的該藥物的主要毒性之一是掌跖紅 斑(PPE =手足綜合征)。類似地，西妥昔單抗的重要可能的副作用是皮膚毒性，通常本身表 現(xiàn)為面部和軀干的痤瘡樣疹。此種副作用可能是表皮以相對(duì)高的水平表達(dá)EGFR這一事實(shí) 的后果。因而，這項(xiàng)研究的主要安全性顧慮是借助抗EGFR抗體西妥昔單抗引導(dǎo)Caelyx至 過(guò)量表達(dá)EGFR的細(xì)胞也可能增加該藥物的皮膚毒性。在這項(xiàng)I期研究范圍內(nèi)的治療以非常低劑量的Caelyx即十分之一標(biāo)準(zhǔn)劑量的藥 物(與建立的臨床方案中250mg/m2 (加載劑量400mg/m2)相比，對(duì)應(yīng)于大約0. 9mg/m2的抗 體(西妥昔單抗)劑量)進(jìn)行并且計(jì)劃以小的增量提高劑量。6. 3. 2劑量方案和劑量調(diào)節(jié)患者將三位患者成組分別以下述劑量水平治療(C225-ILs-doX的定量和劑量水 平以mg多柔比星定義)
水平 1 = 5mg/m2 水平 2 = 10mg/m2水平 3 = 20mg/m2水平 4 = 30mg/m2水平 5 = 40mg/m2水平 6 = 50mg/m2水平 7 = 60mg/m2水平 8 = 70mg/m27jC平 9 = 80mg/m2在每個(gè)劑量水平上，3位患者可以同時(shí)登記參與。在給定劑量水平的3位患者已經(jīng) 接受至少一個(gè)完整治療周期后，如果在給定劑量水平?jīng)]有劑量限制性毒性(DLT)出現(xiàn)，將 允許升高至下一個(gè)較高的劑量。將由團(tuán)隊(duì)在審閱前面組的全部可用毒性數(shù)據(jù)后作出進(jìn)入下 一個(gè)劑量水平的決定。DLT定義為任意的4級(jí)毒性、持續(xù)超過(guò)1周的任意3級(jí)毒性或/和3 級(jí)熱性嗜中性白細(xì)胞減少癥(定義為嗜中性粒細(xì)胞< 1.(^10的/1和發(fā)熱>38.5°0。排 除惡心、嘔吐、厭食和脫發(fā)(2級(jí))是劑量限制性毒性。類似地，與原發(fā)腫瘤顯然相關(guān)的不利 事件如疾病進(jìn)展將不視為DLT。此外，當(dāng)定義并分析DLT時(shí)，必須考慮預(yù)先存在的毒性。視為DLT的3級(jí)毒性的例子 在PPD (手足綜合征)的情況下，3級(jí)毒性定義為潰瘍性皮炎或皮膚改變，伴有干 擾功能的疼痛，并因而視為DLT。 在腹瀉的情況下，3級(jí)毒性定義為超過(guò)基線的每日大于7次排便；失禁；靜脈內(nèi)補(bǔ) 液大于24小時(shí)和/或住院，并因而視為DLT。 在左心室功能的情況下，3級(jí)毒性定義為應(yīng)答于介入治療的有癥狀心機(jī)能障礙和 /或射血分?jǐn)?shù)下降低于40%，并因而視為DLT。如果DLT在任何劑量水平上出現(xiàn)，則以下原則將適用 將允許依次劑量逐步升高直至在相同劑量水平上治療的3-6位患者中對(duì)3位患者 觀察到DLT。在此刻，將不允許進(jìn)一步劑量逐步升高。未來(lái)可能研究的最大耐受劑量(MTD) 隨后將定義為比不得不停止劑量逐步升高的劑量水平低的劑量水平。在經(jīng)歷了毒性的個(gè)體患者中，根據(jù)主要研究人員的臨床判斷所確定并且按照第 6. 5章中詳述的規(guī)則，以降低的劑量繼續(xù)治療是可選項(xiàng)。6.3.3.治療持續(xù)期患者將進(jìn)行治療直至疾病進(jìn)展，但持續(xù)最多6個(gè)周期。6.4.伴行治療必須以病例報(bào)告形式匯報(bào)全部并行藥物。7.過(guò)早退出患者可以在任何時(shí)間并因任何原因退出本研究，而不影響他們的恰當(dāng)治療權(quán)利。 研究人員有權(quán)利因最有利于患者的任何原因請(qǐng)患者退出，所述原因包括間發(fā)疾病、不利事 件、治療失敗或違反方案。在本研究期間懷孕的患者將退出。退出的原因應(yīng)當(dāng)標(biāo)記為違反方案并且應(yīng)當(dāng)將妊 娠報(bào)告為嚴(yán)重不利事件。盡管應(yīng)當(dāng)盡可能避免退出，然而應(yīng)理解退出可以在研究期間出現(xiàn)。無(wú)論何時(shí)患者 出于任何原因退出研究，必須對(duì)該患者完成最終研究評(píng)價(jià)，無(wú)論退出原因是什么。關(guān)于該患 者的全部文件記錄必須盡可能完整。8.警告和注意事項(xiàng)視為嚴(yán)重的任何不利事件必須立即(在一個(gè)工作日內(nèi))報(bào)告給Ghristoph Mamot 博士或Christoph Rochlitz教授(二者均來(lái)自巴塞爾大學(xué)醫(yī)院腫瘤學(xué)系；聯(lián)系方式見(jiàn)本方 案的標(biāo)題頁(yè))。C225-ILS-dox療法僅應(yīng)當(dāng)在治療癌癥患者方面有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師監(jiān)督下啟動(dòng)。由于這 是在瑞士巴塞爾大學(xué)腫瘤學(xué)系實(shí)施的一個(gè)單中心研究，僅該系的醫(yī)師與研究人員密切合作 實(shí)施該治療。關(guān)于皮膚毒性，請(qǐng)參考10. 3. 1 (劑量選擇的原理)
9.統(tǒng)計(jì)方法和考慮事項(xiàng)9. 1總體考虎事項(xiàng)
這是評(píng)價(jià)C225-ILS-dox在患有晚期實(shí)體瘤的患者中安全性的I期研究。功 效是該項(xiàng)研究的次要目的，因而在治療之前、期間和之后的腫瘤量值會(huì)提供關(guān)于針對(duì) C225-ILs-dox的腫瘤應(yīng)答的一些初步數(shù)據(jù)。然而，功效分析將是純粹描述性的并且沒(méi)有開(kāi) 展正式的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。9. 2樣本量本試驗(yàn)的樣本量基于這樣的研究設(shè)計(jì)，其中使用所述研究設(shè)計(jì)來(lái)提供試驗(yàn)期間遭 遇劑量限制性毒性(DLT)時(shí)的安全性終止規(guī)則。研究計(jì)劃是在每個(gè)劑量水平上召募3位患 者，同時(shí)取決于毒性，在這些劑量水平的每一劑量水平上隨后納入最多另外的3位額外患 者。當(dāng)3至6位患者中3位患者在特定劑量水平(DLT劑量)感受到DLT時(shí)，將終止試驗(yàn)。如果在某一劑量水平的真實(shí)毒性率是“P”，則宣布該劑量為毒性(DLT劑量)的概 率如下 9. 3.主要和次要分析9. 3.1.主要變量患者針對(duì)每一劑量水平的不利事件譜將就事件的頻率和數(shù)目進(jìn)行概括。類似地， 也概括了感受到DLT的患者的數(shù)目和比例。將提供全部不利事件和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的清單。9. 3. 2.次要變量將列表說(shuō)明屬于每種應(yīng)答類別(見(jiàn)7. 2. 1.)的患者的比例。10.倫理學(xué)考慮事項(xiàng)本方案已經(jīng)書(shū)寫(xiě)成文，并且試驗(yàn)將根據(jù)赫爾辛基宣言、ICH頒布良好臨床實(shí)踐指南 (Guidelines of Good Clinical Practice)和瑞士管理機(jī)關(guān)要求進(jìn)行。在將任何患者納入本試驗(yàn)之前，研究人員必須確保該試驗(yàn)已經(jīng)由當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會(huì) 批準(zhǔn)并且瑞士治療產(chǎn)品署已經(jīng)開(kāi)放該中心。10. 1知情同意書(shū)和患者信息
知情同意書(shū)應(yīng)當(dāng)以地倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的書(shū)面形式獲得并且由患者簽名。兩份知情 同意書(shū)應(yīng)當(dāng)簽名，其中一份遞交給該患者。在尋求知情同意書(shū)時(shí)，應(yīng)當(dāng)使用附件中提供的患者信息(根據(jù)當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會(huì)的 要求修訂)并且應(yīng)當(dāng)遞交一份副本給該患者。知情同意流程必須遵守ICH和瑞士治療產(chǎn)品署頒布的良好臨床實(shí)踐指南。全部患者將被告知試驗(yàn)?zāi)康?、可能的不利感受、在不利事件出現(xiàn)時(shí)如何反應(yīng)和他/ 她可能遭遇的流程及可能危害。他們將被告知對(duì)患者數(shù)據(jù)嚴(yán)格保密，但是他們需要知道他 們的醫(yī)學(xué)紀(jì)錄可以由除治療醫(yī)師之外的授權(quán)個(gè)人審閱。研究人員必須向患者提供考慮是否參與的足夠機(jī)會(huì)并且使被迫或過(guò)度影響的概 率最小化。提供的信息應(yīng)當(dāng)以患者可理解的語(yǔ)言書(shū)寫(xiě)并且不可以包括可能放棄患者任何合 法權(quán)利或可能豁免研究人員、贊助商或研究機(jī)構(gòu)過(guò)失責(zé)任的任何內(nèi)容。將強(qiáng)調(diào)的是參與是自愿的并且允許患者在他或她愿意的任何時(shí)候拒絕進(jìn)一步參 與該方案。這不損害患者的后續(xù)護(hù)理。在轉(zhuǎn)變損益比的新數(shù)據(jù)可獲得的情況下，患者應(yīng)當(dāng)再次同意。11.附件11. 1. Recist 標(biāo)準(zhǔn)實(shí)體腫瘤應(yīng)答評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST) (29)對(duì)具有可測(cè)量疾病的全部患者評(píng)價(jià)應(yīng)答?？蓽y(cè)量的疾病-存在至少一種可測(cè)量的損害。如果這種可測(cè)量疾病限于孤立損 害，其腫瘤特征應(yīng)當(dāng)由細(xì)胞學(xué)/組織學(xué)證實(shí)。 可測(cè)量的損害可以在至少一個(gè)維度上精確測(cè)量的損害，所述損害具有使用常規(guī) 技術(shù)時(shí)20mm的最長(zhǎng)直徑3或用螺旋CT掃描時(shí)10mm的最長(zhǎng)直徑3。 不可測(cè)量的損害全部其他損害，包括小損害(用常規(guī)技術(shù)時(shí)最長(zhǎng)直徑< 20mm或 用螺旋CT掃描時(shí)最長(zhǎng)直徑< 10mm)，S卩，骨損害、柔腦脊膜疾病、腹水、胸膜/心包膜滲出、炎 性乳腺疾病、皮膚/肺淋巴管炎、囊性損害并且還包括未證實(shí)并隨后由成像技術(shù)證實(shí)的腹 部包塊。損害的評(píng)價(jià)靶損害的評(píng)價(jià)A 完全應(yīng)答(CR)全部靶損害消失 部分應(yīng)答(PR)以基線總和LD為參考，靶損害的最長(zhǎng)直徑(LD)的總和下降至少 30%。 進(jìn)展(PD)參考自開(kāi)始治療或出現(xiàn)一種或多種新?lián)p害以來(lái)所記錄的最小總和 LD，靶損害的LD總和增加至少20%。 穩(wěn)定的疾病(SD)參考自開(kāi)始治療以來(lái)的最小總和LD，既沒(méi)有足夠地縮小至定 性PR，也沒(méi)有足夠地增加至定性PD。非靶損害的評(píng)價(jià)B 完全應(yīng)答(CR)全部非靶損害消失和腫瘤標(biāo)記水平正?；?。 不完全應(yīng)答一種或多種非靶損害持續(xù)(非CR)或/和腫瘤標(biāo)記水平維持高于 正常限。
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·進(jìn)展(PD)—種或多種新?lián)p害出現(xiàn)和/或現(xiàn)有非靶損害毫無(wú)疑義地進(jìn)展。C注 腫瘤標(biāo)記單獨(dú)不能用來(lái)評(píng)估應(yīng)答。如果腫瘤標(biāo)記初始高于正常上限，它們必須對(duì)全部損害已消失時(shí)視為處于完全臨床應(yīng)答的患者歸一化。 細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)如果這種可測(cè)量疾病限于孤立損害，則其腫瘤特征應(yīng)當(dāng)由細(xì)胞 學(xué)/組織學(xué)證實(shí)。這些技術(shù)可以用來(lái)區(qū)分罕有病例(例如，其中已知的殘余良性腫瘤可能仍保留的 腫瘤類型如生殖細(xì)胞腫瘤中的殘余損害)中的I3R和CR。當(dāng)可測(cè)量的腫瘤已經(jīng)符合應(yīng)答或穩(wěn)定性疾病的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，細(xì)胞學(xué)證實(shí)治療期間出現(xiàn) 或惡化的任何滲出物的腫瘤來(lái)源對(duì)于區(qū)分應(yīng)答或穩(wěn)定性疾病與進(jìn)展性疾病是必須遵循的 (滲出可以是該治療的副作用)。最好總體應(yīng)答的評(píng)價(jià)最好總體應(yīng)答是從治療開(kāi)始直至疾病進(jìn)展/復(fù)發(fā)所記錄的最好應(yīng)答(以開(kāi)始治療 以來(lái)所記錄的最小量值作為進(jìn)展性疾病的參考)?；颊叩淖詈脩?yīng)答指定將取決于量值和證 實(shí)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)現(xiàn)。A代表全部所涉及器官的全部可測(cè)量損害直至最多10處損害應(yīng)當(dāng)被鑒定為靶損害 并且在基線處記錄和測(cè)量。應(yīng)當(dāng)基于靶損害的大小(具有最長(zhǎng)直徑的損害)及它們對(duì)精確 反復(fù)測(cè)量(通過(guò)成像技術(shù)或臨床測(cè)量)的適用性選擇靶損害。將計(jì)算全部靶損害的長(zhǎng)直徑 (LD)的總和并且報(bào)道為基線總和LD。該基線總和LD將作為參考用來(lái)進(jìn)一步表征疾病的可 測(cè)量維度的客觀腫瘤應(yīng)答。β全部其他損害(或疾病部位)應(yīng)當(dāng)被鑒定為非靶損害并也應(yīng)當(dāng)在基線處記錄。不 要求量值，不過(guò)在整個(gè)隨訪期間應(yīng)當(dāng)指出這些損害中每一種損害的存在或不存在。e盡管“非靶”損害的清晰進(jìn)展僅是例外，然而在這種環(huán)境下，治療醫(yī)師的選擇應(yīng)當(dāng) 為主導(dǎo)并且進(jìn)展?fàn)顩r應(yīng)當(dāng)在稍后時(shí)間由評(píng)審專家組(或試驗(yàn)主持人)證實(shí)。 注
應(yīng)當(dāng)將健康狀況全面惡化的要求中斷治療而當(dāng)時(shí)沒(méi)有疾病進(jìn)展客觀證據(jù)的患者 報(bào)道為“有癥狀的惡化”。應(yīng)當(dāng)全力記錄客觀進(jìn)展，即便在中斷治療后。 在一些情況下，可能難以區(qū)分殘留疾病與正常組織。當(dāng)完全應(yīng)答的評(píng)價(jià)取決于這 種決定因素時(shí)，推薦應(yīng)當(dāng)在證實(shí)完全應(yīng)答狀況之前研究殘余損害(細(xì)針頭抽吸/活組織檢 查)。評(píng)價(jià)可測(cè)量疾病的指南全部量值應(yīng)當(dāng)使用尺子或卡尺記錄以米制符號(hào)記錄。全部基線評(píng)價(jià)應(yīng)當(dāng)在根據(jù)評(píng) 估計(jì)劃注冊(cè)之前14日內(nèi)進(jìn)行。注在以往輻射過(guò)的區(qū)域內(nèi)的腫瘤損害最佳地不視為可測(cè)量的疾病。應(yīng)當(dāng)在基線處和隨訪期間使用相同的評(píng)估方法和相同技術(shù)來(lái)表征每種所鑒定和 報(bào)告的損害。CT和MRI是測(cè)量為應(yīng)答評(píng)估所選擇的靶損害的目前可用性和重復(fù)性最好的方 法。當(dāng)使用兩種方法來(lái)評(píng)估療法的抗腫瘤作用時(shí)，優(yōu)選基于成像的評(píng)價(jià)法來(lái)通過(guò)臨床檢查 評(píng)價(jià)。 僅當(dāng)臨床損害為淺表時(shí)(例如，皮膚小結(jié)，可觸及性淋巴結(jié))，才會(huì)認(rèn)為它們是可 測(cè)量的。在皮膚損害的情況下，推薦通過(guò)彩色照相記錄，包括尺子以估計(jì)損害的尺寸。 可接受胸部X射線片上的損害為可測(cè)量的損害，當(dāng)這些損傷是清晰限定的并被 充氣肺包圍時(shí)。然而，優(yōu)選CT。 常規(guī)CT和MRI應(yīng)當(dāng)以10mm或更小截距切片厚度連續(xù)地進(jìn)行。螺旋CT應(yīng)當(dāng)使 用5mm連續(xù)的重構(gòu)算法進(jìn)行。這適用于胸部、腹部和骨盆。頭和頸部端部通常需要特殊的 方法。 當(dāng)本試驗(yàn)的主要目的是客觀性應(yīng)答評(píng)價(jià)時(shí)，超聲術(shù)(US)不應(yīng)當(dāng)用來(lái)測(cè)量臨床上 不容易接近的腫瘤損害。它是臨床測(cè)量淺表可觸及性小結(jié)、皮下?lián)p害和胸腺小結(jié)的可能替 代。超聲術(shù)也可能用來(lái)證實(shí)通常由臨床檢查評(píng)估的淺表性損傷的徹底消失。證實(shí)性量值/應(yīng)答持續(xù)期證實(shí)為了向一種狀況指定冊(cè)或CR，必須通過(guò)重復(fù)研究證實(shí)腫瘤量值的改變，其中所述 的重復(fù)研究應(yīng)當(dāng)在首次滿足應(yīng)答標(biāo)準(zhǔn)4周后進(jìn)行。在SD的情況下，隨訪量值必須在試驗(yàn)7 周后符合SD標(biāo)準(zhǔn)至少一次(見(jiàn)評(píng)估安排，附件23. 18)。總體應(yīng)答的持續(xù)期從對(duì)CR/HU無(wú)論先記錄到哪種)符合測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)間直至客觀記錄到復(fù)發(fā)性或 進(jìn)展性疾病的首個(gè)日期，測(cè)量總體應(yīng)答的持續(xù)期(以開(kāi)始治療以來(lái)所記錄的最小量值作為 進(jìn)展性疾病的參考)。從CR首先符合測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)間直至客觀記錄到復(fù)發(fā)性疾病的首個(gè)日期，測(cè)量總 體完全應(yīng)答的持續(xù)期。穩(wěn)定疾病的持續(xù)期以開(kāi)始治療以來(lái)所記錄的最小量值作為參考，從開(kāi)始治療直至符合進(jìn)展標(biāo)準(zhǔn)，測(cè) 量穩(wěn)定性疾病。11.2.合格形式納入標(biāo)準(zhǔn)
在登記參與本研究前，候選人必須達(dá)到全部以下標(biāo)準(zhǔn)(如果是的話，勾選每個(gè)空 格)1.組織學(xué)證明的局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤。2.EC0G 表現(xiàn)<2。3.沒(méi)有額外的標(biāo)準(zhǔn)療法可用于該患者。4.在最新近可評(píng)價(jià)的腫瘤組織中確定的EGFR過(guò)量表達(dá)(根據(jù)DAK0EGFR pharmDx-試驗(yàn))。5.無(wú)伴行的抗腫瘤療法(類固醇是允許的_在乳腺癌和前列腺癌中，需要類固醇 在研究期間保持穩(wěn)定)。6.自停止任何先前抗腫瘤治療以來(lái)至少4周(在亞硝基脲或絲裂霉素C的情況下 6周)。7.在具有先前蒽環(huán)類藥暴露史的患者中，要求正常的超聲心動(dòng)圖(LVEF>50%)。8.年齡彡18歲。9.男性或女性。10.育齡女性和男性患者必須使用有效避孕措施。11.在參與本研究前，愿意并且能夠簽署知情同意書(shū)并且在本研究持續(xù)期間服從 本方案。排除標(biāo)準(zhǔn)如果符合以下任意標(biāo)準(zhǔn)，則必須從本研究排除候選人(如果是的話，勾選每個(gè)空 格)1.妊娠和/或哺乳。2.具有以下實(shí)驗(yàn)室值的患者嗜中性粒細(xì)胞< 1. 5xl09個(gè)/L血小板<lOOxlO9 個(gè)/L血清肌酸> 3. Ox正常上限ALAT、ASAT > 3. Ox正常上限(在肝臟轉(zhuǎn)移作為酶改變的唯一可能原因的患者中 5. Ox)堿性磷酸酶> 3. Ox正常上限(在肝臟轉(zhuǎn)移或骨轉(zhuǎn)移作為酶改變的唯一可能原因 的患者中5. Ox)膽紅素>3. Ox正常上限3.在治療開(kāi)始前4周內(nèi)參與任何調(diào)查性藥物研究。4.具有臨床明顯和失控的腎病或肝病的患者。5.臨床明顯的心臟病充血性心力衰竭(紐約心臟協(xié)會(huì)III或IV類)；有癥狀冠 狀動(dòng)脈??；用藥物療法沒(méi)有充分控制的心律不齊；在最近12個(gè)月內(nèi)的心肌梗死。6.可能有損患者參與本試驗(yàn)的能力的(由研究人員判定的)任何嚴(yán)重的基礎(chǔ)性醫(yī) 學(xué)病癥(例如活躍自身免疫病、失控的糖尿病等)。7.根據(jù)瑞士治療產(chǎn)品署批準(zhǔn)的產(chǎn)品信息施用愛(ài)必妥 或Caelyx 時(shí)禁忌的任何 伴行藥物。8.累積的多柔比星劑量> 300mg/m2BSA(或心臟毒性蒽環(huán)類藥等同物)。
9.具有由研究人員判定為臨床明顯并妨礙知情同意或干擾順應(yīng)性的失控性發(fā)作、 中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或精神病學(xué)失能的患者。10.腦轉(zhuǎn)移。12.結(jié)果在下表中包括I期試驗(yàn)的初步結(jié)果。這些結(jié)果顯示直至50mg/m2濃度不能或很少 能夠觀察到藥物相關(guān)的毒性作用。特別地，在甚至更高的劑量上沒(méi)有發(fā)現(xiàn)皮膚毒性、特別地 沒(méi)有掌跖紅斑，而與此同時(shí)，觀察到清晰的功效信號(hào)，甚至在所用的最低劑量上也是如此。表1 :1期試驗(yàn)的初步結(jié)果
(*2周期后最小腫瘤進(jìn)展?；厮莸兀琍SA下降和肺轉(zhuǎn)移緩和持續(xù)18個(gè)月)。 (在迄今治療的所有16位患者中根本沒(méi)有皮膚毒性) PD進(jìn)展
穩(wěn)定性疾病
穩(wěn)定性疾病(最小應(yīng)答) 部分應(yīng)答 未評(píng)價(jià)
(MR)
SD SD PR n. e
B多藥抗性研究 1.材料 1. 1細(xì)
用于脂質(zhì)體制備的試劑包括:DilC18(3)-DS(Molecular Probes ；Leiden, Netherlands) ；DSPC，膽固醇，和 mPEG-DSPE (Avanfi Polar Lipids ；Alabaster, AL, USA)； Mal-PEG(2000/3400)-DSPE(Nektar ；Huntsville, AL，美國(guó))；有機(jī)溶劑和其他試劑純化學(xué) 品(SIgma-Aldrich AG ；Buchs,瑞士 )。多柔比星(Adriblastin RD ；Pfizer AG，Ziirich，瑞士)和聚乙二醇化的脂質(zhì)體 多柔比星(Caelyx ，Essex Chemie AG，Luzern，瑞士)商業(yè)地從藥房獲得。免疫脂質(zhì)體含有衍生自C225(西妥昔單抗，愛(ài)必妥)或EMD72000(馬妥珠單抗) (均為Merck KGaA，達(dá)姆施塔特，德國(guó))的Fab’。兩種單克隆抗體均是與EGFR胞外結(jié)構(gòu)域 (ECD)結(jié)合并因而阻斷EGFR配體如EGF和TGF-a (36)激活作用的重組IgGlt) MAb C225是 嵌合MAb，而EMD72000是從轉(zhuǎn)基因小鼠衍生的人源化MAb (37)。MAb EMD72000由德國(guó)達(dá)姆施塔特Merck KGaA友好提供。L2.細(xì)胞系MDA-MB-231人乳腺癌和結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系HT-29癌細(xì)胞系從巴塞爾大學(xué) 研究系或美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)獲得。這些細(xì)胞系的抗性形式由Susan Bates (MDA-MB-231 VblOO ；NIH，Bethesda，美國(guó))和由SchSfer博士 (HT-29RDB ；Charite, 柏林，德國(guó))提供。在加濕氣氛95 %空氣和5 % C02在37 °C將MDA-MB-231細(xì)胞維持 于“改良MEM鋅選項(xiàng)”培養(yǎng)基(Invitrogen AG，巴塞爾，瑞士)中和將HT-29維持在 RPMI-1640(Sigma-Aldrich AG，布克斯，瑞士)，所述培養(yǎng)基補(bǔ)充有10%胎牛血清，100IU/ml 青霉素和100iig/ml鏈霉素。2.脂質(zhì)體制備、加載和抗體摻入2. 1脂質(zhì)體制備根據(jù)反復(fù)凍融法(23)，使用DSPC和膽固醇(摩爾比3 2)與mPEG-DSPE (0. 5-5mol %磷脂)制備單層脂質(zhì)體。簡(jiǎn)而言之，隨后將脂質(zhì)體通過(guò)具有0. 1 P m 定義孔徑的聚碳酸酯濾器擠出10次，產(chǎn)生如動(dòng)態(tài)光散射法所確定的90-120nm直徑的脂質(zhì) 體。使用標(biāo)準(zhǔn)磷酸鹽測(cè)定法測(cè)量脂質(zhì)體濃度。對(duì)于攝取和內(nèi)化研究，用0. 1-0. 3mol% DilC18(3)_DS (—種可以穩(wěn)定摻入脂質(zhì)體 膜的熒光脂質(zhì))((38) (39))標(biāo)記脂質(zhì)體。為封裝多柔比星，利用硫酸銨進(jìn)行遠(yuǎn)程加載法(remote-loadingmethod) ((27) (26))。首先，將干燥脂質(zhì)在250mM硫酸銨中于pH 5. 5再水化，隨后如上文所述擠出。使用 Sephadex G_75柱/HEPES緩沖鹽水(pH7. 0)，通過(guò)大小排阻層析法除去游離硫酸銨。脂質(zhì) 體隨后在60°C與多柔比星孵育30分鐘。在這些條件下，當(dāng)使用每微摩爾磷脂150 u g藥物 時(shí)，加載效率一般在95-100%范圍內(nèi)。使用S印hadex G_75柱，通過(guò)大小排阻層析法除去 所有未封裝的多柔比星。此外，商業(yè)地獲得聚乙二醇化的脂質(zhì)體多柔比星(PLD/Caelyx /Doxil :)。2. 2 MAb片段制備、綴合和脂質(zhì)體摻入對(duì)于C225-和EMD72000-Fab，，將完整MAb與0. 1M乙酸鈉(pH 3.7)中的胃蛋白酶 (重量比1 20)在37°C孵育3小時(shí)，隨后對(duì)HEPES緩沖鹽水(pH 6.0)透析。所得F(ab)2 用2-巰基乙胺或2-巰基乙醇在37°C于氬氣下還原15分鐘，然后通過(guò)使用S印hadex G-25 的凝膠過(guò)濾法回收。還原效率一般是70-90%。Fab，如以往所述綴合至Mal_PEG_DSPE((11) (12))。通過(guò)SDS-PAGE評(píng)價(jià)綴合效 率，從而允許比較游離MAb片段與綴合物；綴合效率一般對(duì)于C225是30-50%并且對(duì)于 EMD72000是40-60%。為摻入包含制備的脂質(zhì)體藥物和探針或商品聚乙二醇化的脂質(zhì)體 多柔比星的預(yù)制脂質(zhì)體，通過(guò)在55°C共孵育30分鐘將形成膠束溶液的MAb片段綴合物 (Fab，-Mal-PEG-DSPE)摻入脂質(zhì)體。作為結(jié)果，綴合物通過(guò)疏水DSPE結(jié)構(gòu)域與脂質(zhì)體的 脂質(zhì)外層接合。通過(guò)S印harose CL-4B凝膠過(guò)濾法將未摻入的綴合物和游離藥物與免疫 脂質(zhì)體分開(kāi)。當(dāng)使用DilC18(3)-DS標(biāo)記的脂質(zhì)體時(shí)，小于5%的熒光與膠束級(jí)分共締合， 這顯示該標(biāo)記的最小轉(zhuǎn)移。如所述地使用一系列蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品和凝膠掃描與定量法，通過(guò) SDS-PAGE評(píng)估綴合MAb片段的摻入效率。對(duì)于C225和EMD72000，一般而言，75-85%添加 的MAb綴合物摻入免疫脂質(zhì)體，這對(duì)應(yīng)于每個(gè)脂質(zhì)體30-40個(gè)Fab’片段。3.研究設(shè)計(jì)3. 1結(jié)合和內(nèi)化研究對(duì)于流式細(xì)胞術(shù)研究，將250，000個(gè)細(xì)胞在37°C與12孔板中的鹽水(對(duì)照)、脂 質(zhì)體或以DilC18(3)-DS標(biāo)記的靶向EGFR的免疫脂質(zhì)體共孵育2小時(shí)，用PBS充分洗滌，隨 后分開(kāi)并貯存在冰上直至進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。因而進(jìn)行熒光顯微鏡術(shù)研究，除了從12孔平板 移出細(xì)胞之外。含有C225_Fab，的免疫脂質(zhì)體比對(duì)照脂質(zhì)體在人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231中顯 示高大約2個(gè)數(shù)量級(jí)的累積，所述對(duì)照脂質(zhì)體在這些細(xì)胞中僅產(chǎn)生背景熒光水平。在多藥 抗性次級(jí)細(xì)胞系MDA-MB-231 VblOO中存在相似的模式。也在過(guò)量表達(dá)EGFR的結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞及其多藥抗性次級(jí)細(xì)胞系HT_29 RDB中 評(píng)價(jià)了含有C225-Fab’的免疫脂質(zhì)體的結(jié)合和攝取。這里，免疫脂質(zhì)體在過(guò)量表達(dá)EGFR的 HT-29細(xì)胞中顯示超過(guò)1個(gè)數(shù)量級(jí)的更多攝取并且在mdr細(xì)胞系HT-29 RDB中顯示可比較的研究結(jié)果。在無(wú)EGFR過(guò)量表達(dá)的對(duì)照細(xì)胞系MCF-7中，非靶向的脂質(zhì)體與抗EGFR免疫 脂質(zhì)體之間不存在攝取/結(jié)合的差異(數(shù)據(jù)未顯示)。這些結(jié)果表明兩個(gè)同基因細(xì)胞系中 對(duì)免疫脂質(zhì)體攝取的高度選擇性，與這兩個(gè)細(xì)胞系的mdr特征無(wú)關(guān)。與對(duì)照脂質(zhì)體孵育后靶細(xì)胞中最小熒光攝取的觀察結(jié)果與聚乙二醇化脂質(zhì)體的 非反應(yīng)特性一致((12) (40))，并且還證實(shí)DilC18(3)-DS可以用作基于脂質(zhì)體的穩(wěn)定標(biāo)記， 而沒(méi)有明顯交換至細(xì)胞膜中。細(xì)胞毒性研究在靶細(xì)胞中評(píng)價(jià)含有多柔比星的EGFR-靶向的免疫脂質(zhì)體的特異性細(xì)胞毒性，其 中所述的靶細(xì)胞以密度每孔8，000個(gè)細(xì)胞接種于96孔平板內(nèi)并且使其生長(zhǎng)過(guò)夜。在37°C 應(yīng)用免疫脂質(zhì)體或?qū)φ罩委?小時(shí)，隨后用PBS洗滌并重新添加生長(zhǎng)培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)一步 在37°C孵育3日并使用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑鐺(MTT)染色 法(41)分析細(xì)胞成活力。對(duì)于使用排出泵抑制劑維拉帕米的細(xì)胞毒性研究，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期 間這種化合物以100 u M濃度添加至培養(yǎng)基。在過(guò)量表達(dá)EGFR的HT-29野生型結(jié)腸癌細(xì)胞，處理2小時(shí)后，靶向EGFR的免疫脂 質(zhì)體多柔比星顯示實(shí)質(zhì)的體外細(xì)胞毒性(IC5Q = 0. 25 u g/ml)，這接近于游離多柔比星的體 外細(xì)胞毒性(ICM = 0. 3 y g/ml)(表2)。因而，多柔比星的EGFR靶向免疫脂質(zhì)體遞送如游 離多柔比星(一種在體外輕易橫穿細(xì)胞膜的兩親性小分子)的快速擴(kuò)散一樣有效。另一方 面，通過(guò)將C225-Fab，綴合至PLD所衍生的靶向EGFR的免疫脂質(zhì)體多柔比星在HT-29細(xì)胞 中比非靶向的PLD本身(未達(dá)到IC5(I)顯示大得多的細(xì)胞毒性，表明遞送過(guò)程是抗體依賴的 (表2)。值得注意地，僅用抗體C225持續(xù)2小時(shí)的相似處理在這種測(cè)定法中不顯示細(xì)胞毒 性，這證實(shí)免疫脂質(zhì)體活性歸因于定向藥物遞送并且與C225在這個(gè)短暫孵育時(shí)間期間的 潛在抗增殖作用不相關(guān)。另外，含有C225-Fab’但缺少所封裝藥物的免疫脂質(zhì)體(“空的免 疫脂質(zhì)體”)在這些測(cè)試條件下類似地不顯示細(xì)胞毒性。在缺少EGF受體的MCF-7細(xì)胞中 也未見(jiàn)到C225-免疫脂質(zhì)體-dox的作用(陰性對(duì)照；數(shù)據(jù)未顯示)。在多藥抗性次級(jí)細(xì)胞系HT-29RDB中進(jìn)行相同實(shí)驗(yàn)。值得注意地，在這種細(xì)胞系 中，多柔比星的免疫脂質(zhì)體遞送(ICM = 0.5ug/ml)優(yōu)于游離藥物(ICM = 9. 5 u g/ml ；= 19倍)并且還優(yōu)于脂質(zhì)體藥物(未達(dá)到IC5(I)。匯總我們的這部分研究，盡管游離多柔比星 在HT-29細(xì)胞系的多藥抗性變體中與野生型細(xì)胞系相比具有低得多的細(xì)胞毒性，然而對(duì)于 免疫脂質(zhì)體化合物而言幾乎不存在差異，與這種細(xì)胞系中的不同mdr特征無(wú)關(guān)，這表明免 疫脂質(zhì)體能夠在這種環(huán)境下回避多藥抗性機(jī)制。也在以多藥抗性為特征的過(guò)量表達(dá)EGFR的人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231 VblOO中 評(píng)價(jià)了使用多柔比星的免疫脂質(zhì)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性并且與使用缺少mdr的其親本細(xì)胞系 MDA-MB-231的結(jié)果比較。在親本野生型MDA-MB-231中，含有C225_Fab’的ILs與游離多柔 比星本身一樣有效地遞送多柔比星，其也可以輕易穿透細(xì)胞膜并且比非靶向的脂質(zhì)體多柔 比星/PLD明顯具有更強(qiáng)細(xì)胞毒性(IC50 = 0.31^/1111，相對(duì)于0.61^/1111，相對(duì)于120 ug/ ml) 0令人感興趣地，在高度藥物抗性MDA-MB-231 VblOO細(xì)胞系中，載有多柔比星 (dox)的ILs產(chǎn)生比游離多柔比星高216倍的細(xì)胞毒性，并且也比非靶向的脂質(zhì)體多柔比星 具有明顯更高的細(xì)胞毒性(IC50 = 0. 6ii g/ml，相對(duì)于130 y g/ml，相對(duì)于大于900 u g/m)。
41
在維拉帕米的存在下重復(fù)抗性MDA-MB-231 VblOO細(xì)胞中的相同實(shí)驗(yàn)。維拉帕米 能夠抑制排出泵并因而逆轉(zhuǎn)多藥抗性的特定機(jī)制。實(shí)際上，通過(guò)添加維拉帕米至這個(gè)實(shí)驗(yàn)， 能有效地轉(zhuǎn)變多藥抗性機(jī)制，并且因而游離多柔比星如在野生型MDA-MB-231細(xì)胞系中那 樣有效(IC5(I = 0.9u g/ml)。相反，維拉帕米的添加沒(méi)有進(jìn)一步提高由抗EGFR免疫脂質(zhì)體 遞送的多柔比星的效力(IC5(I = 0.5u g/ml)，因而證實(shí)了我們的研究結(jié)果ILs能夠克服多 藥抗性機(jī)制并且該遞送系統(tǒng)不受排出泵存在的影響。表2 細(xì)胞毒性研究的匯總結(jié)果 PLD非靶向的脂質(zhì)體多柔比星C225-ILs-dox C225抗體靶向的脂質(zhì)體多柔比星3.3 ^bmtF.mmmmM^mmm對(duì)于比較性累積研究，腫瘤細(xì)胞(HT-29、HT-29RDB、MDA-MB-231 或 MDA-MB-231 VblOO)以每孔200，000個(gè)細(xì)胞的密度接種在12孔板中。游離多柔比星、非靶向的脂質(zhì)體多 柔比星(PLD)和免疫脂質(zhì)體多柔比星已經(jīng)以3 ii g/ml多柔比星濃度在37°C應(yīng)用了 2小時(shí)， 隨后用培養(yǎng)基進(jìn)行2輪洗滌。維拉帕米以0、10或100 yM濃度添加至實(shí)驗(yàn)。在無(wú)任何處理 下孵育另外2小時(shí)后，如下分析細(xì)胞在移去培養(yǎng)基后，細(xì)胞用1ml含有FCS的培養(yǎng)基洗滌一次，隨后用1ml含鈣和鎂的 PBS在室溫(RT) 3分鐘。將PBS用400 ill C100T溶液(100ml含有2. lg檸檬酸和0. 5ml Tween 20)替換。以300轉(zhuǎn)/分鐘振搖10-15分鐘引起細(xì)胞膜溶解和釋放細(xì)胞核，如顯微 鏡術(shù)所證實(shí)。將每孔的全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移至0. 5ml透明PCR管并在室溫和1200rcf離心5分 鐘。以這種方式，胞核將沉積在管底尖處，這對(duì)后續(xù)加工是重要的。為確定細(xì)胞漿中的多柔 比星，取出350 ill上清液并與350 ill酸性甲醇(含有1M正磷酸的甲醇)混合。對(duì)于多 柔比星的胞核累積，含有胞核的沉淀物用500 yl含有C100T的PBS洗滌兩次并且利用 如前所述的后續(xù)離心法離心。在仔細(xì)移去最終上清液后，來(lái)自沉淀物的多柔比星由400 yl 50%酸性甲醇過(guò)夜提取。從細(xì)胞漿提取物和胞核提取物轉(zhuǎn)移300iU至96孔平板并通過(guò)“SpertraMax Gemini Fluorimeter，，(Molecular Devices)測(cè)量。3. 4腫瘤異種移棺物樽型在MDA-MB-231野生型和抗性乳腺癌異種移植物腫瘤模型中研究非靶向的脂質(zhì)體 相對(duì)于抗EGFR免疫脂質(zhì)體的效力。Swiss nu/nu小鼠(5-6周；Charles River，法國(guó))以 過(guò)量表達(dá)EGFR的MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞(lxlO7個(gè)細(xì)胞，野生型或抗性)皮下(s. c.)注射至動(dòng)物背部。一旦腫瘤異種移植物已經(jīng)建立并且和腫瘤測(cè)量為150-250mm3，將小鼠隨機(jī)分 配至不同處理組(根據(jù)研究，8-10只動(dòng)物/組)。全部靜脈內(nèi)治療通過(guò)尾靜脈注射，一般以 100-200 μ 1體積進(jìn)行。脂質(zhì)體和抗EGFR免疫脂質(zhì)體(C225-和EMD72000-)以劑量IOmg多 柔比星/kg/劑靜脈內(nèi)施用3周，每周1次，總劑量30mg dox/kg。游離藥物按照與脂質(zhì)體 或免疫脂質(zhì)體相同的時(shí)間進(jìn)度表以30mg dox/kg多柔比星MTD進(jìn)行靜脈內(nèi)注射。在對(duì)照組 中，鹽水以相同注射體積和時(shí)間進(jìn)度表靜脈內(nèi)施與。腫瘤植入后監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)55-100日。小鼠一周三次稱重并就毒性進(jìn)行檢查。使 用卡 尺每周2-3次進(jìn)行腫瘤測(cè)量，并且使用等式(長(zhǎng)度X寬度2) /2計(jì)算腫瘤體積。在缺少mdr特征的野生型MDA-MB-231異種移植物模型中，以分成10mg/kg的周劑 量三次的30mg dox/kg總劑量靜脈內(nèi)施用抗EGFR免疫脂質(zhì)體-dox。從抗EGFR MAb C225 或從EMD 72000制備抗EGFR免疫脂質(zhì)體。對(duì)照治療包括劑量和時(shí)間進(jìn)度表與免疫脂質(zhì)體 相同的鹽水；游離多柔比星和非靶向的脂質(zhì)體多柔比星(商業(yè)聚乙二醇化的脂質(zhì)體多柔比 星；PLD)。與鹽水治療相比時(shí)，游離多柔比星產(chǎn)生一些腫瘤生長(zhǎng)抑制。通過(guò)PLD實(shí)施的多柔 比星非靶向脂質(zhì)體遞送在這個(gè)高劑量上誘導(dǎo)腫瘤消退和勝過(guò)游離藥物的明顯提高的效力。 用抗EGFR免疫脂質(zhì)體-dox的治療，無(wú)論使用C225或EMD72000，引起實(shí)質(zhì)的腫瘤消退并且 總體上是最有效的治療。直到第77日，對(duì)于PLD組、G225-ILs-dox組和EMD72000-ILs_dox 組而言腫瘤消退是相似的。然而，在追蹤期間，用非靶向PLD治療的腫瘤均開(kāi)始重新生長(zhǎng)而 用免疫脂質(zhì)體多柔比星即C225-ILS-dox和EMD72000-ILS-dox治療的腫瘤不顯示生長(zhǎng)活動(dòng) 直至觀察結(jié)束(第100日)，表明了如以往在其他異種移植物腫瘤模型中報(bào)道的抗EGFR免 疫脂質(zhì)體的治愈性潛力。在以非常相似的EGFR過(guò)量表達(dá)(數(shù)據(jù)未顯示)、但額外地以多藥抗性為特征的 MDA-MB-231 VblOO異種移植物模型中重復(fù)相同實(shí)驗(yàn)。再次，以分成10mg/kg三次周劑量的 30mg dox/kg總劑量靜脈內(nèi)施用從C225或EMD72000衍生的抗EGFR免疫脂質(zhì)體-dox。比 較物包括劑量和時(shí)間進(jìn)度表與免疫脂質(zhì)體相同的鹽水；游離多柔比星和非靶向的脂質(zhì)體 多柔比星(商業(yè)聚乙二醇化的脂質(zhì)體多柔比星；PLD)。在這個(gè)高度多藥抗性模型中，與鹽水治療相比，游離多柔比星不顯示任何腫瘤生 長(zhǎng)抑制作用。通過(guò)PLD實(shí)施的多柔比星的非靶向脂質(zhì)體遞送在這個(gè)高劑量上顯示一些腫 瘤生長(zhǎng)抑制作用。有趣并且重要地，用抗EGFR免疫脂質(zhì)體-dox的治療，無(wú)論使用C225或 EMD72000，引起實(shí)質(zhì)的腫瘤消退并且總體上是最有效的治療。與EMD72000-ILS-dox相比， C225-ILs-doX似乎是適度地更有效。然而，這僅是一種趨勢(shì)并且不是統(tǒng)計(jì)顯著的。總之，本 試驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明抗EGFR免疫脂質(zhì)體甚至對(duì)多藥抗性腫瘤是有效的并且可以克服mdr機(jī)制 (見(jiàn)表3)。在兩種模型中，抗EGFR免疫脂質(zhì)體-dox被小鼠充分耐受。用抗EGFR免疫脂質(zhì) 體-dox的治療與沒(méi)有大的體重?fù)p失相關(guān)表3 腫瘤異種移植物研究的結(jié)果 3. 5統(tǒng)計(jì)分析為評(píng)價(jià)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)顯著性，分析了腫瘤體積并對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)使用Student t檢驗(yàn) (2樣本單獨(dú)的t檢驗(yàn))比較不同治療組。此外，基于每只小鼠的秩總數(shù)進(jìn)行多變量(秩) 檢驗(yàn)。在最后的治療后的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的腫瘤尺寸在該日的全部小鼠內(nèi)進(jìn)行秩評(píng)定并將秩 加總。在每種情況下對(duì)兩個(gè)治療組通過(guò)2樣本t檢驗(yàn)比較秩總數(shù)(42)。參考文獻(xiàn)(l)Sridhar SS，Seymour L，Shepherd FA.表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑以非小細(xì) 胞月市癌為焦點(diǎn)的臨床研究綜述(Inhibitors of epidermal-growth-factor receptors :a review of clinical research with afocus on non-small-celi lung cancer). 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權(quán)利要求
免疫脂質(zhì)體，其包含識(shí)別并結(jié)合至實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原的抗體或抗體片段并且還在脂質(zhì)體中封裝了抗腫瘤化合物，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中的癌癥，特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表的癌癥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的免疫脂質(zhì)體，其中所述腫瘤是EGFR陽(yáng)性腫瘤。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的免疫脂質(zhì)體，其中脂質(zhì)體封裝了抑制細(xì)胞性化合物。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中抗腫瘤化合物是選自以下的化合 物道諾霉素、伊達(dá)比星、米托蒽醌、絲裂霉素、順鉬和其他鉬類似物、長(zhǎng)春新堿、表柔比星、 阿克拉霉素、氨甲蝶呤、依托泊苷、多柔比星、阿糖胞苷、氟尿嘧啶和其他氟化嘧啶、嘌呤或 核苷、尤其地吉西他濱、博來(lái)霉素、絲裂霉素、普卡霉素、放線菌素D、環(huán)磷酰胺和其衍生物、 噻替派、BCNU、紫杉醇、多西他賽和其他紫杉烷衍生物和分離物、喜樹(shù)堿、多肽、核酸、具有硫 代磷酸酯核苷酸間鍵的核酸、和具有聚酰胺核苷酸間鍵的核酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的免疫脂質(zhì)體，其中細(xì)胞毒化合物是選自多柔比星、表柔比星和長(zhǎng) 春瑞濱的化合物。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于二線治療人患者。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于三線治療人患者。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于四線治療人患者。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于五線治療人患者。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于六線治療人患者。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于七線治療人患者。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療已經(jīng)接受、但不應(yīng)答所 有可使用的標(biāo)準(zhǔn)療法的患者群體。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中腫瘤仍然正在進(jìn)展。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中患者已經(jīng)發(fā)展了多藥抗性。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療導(dǎo)致疾病的穩(wěn)定化。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療導(dǎo)致部分應(yīng)答。
17.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療導(dǎo)致完全應(yīng)答。
18.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有毒 性副作用。
19.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療不顯示皮膚毒性。
20.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療不顯示掌跖紅斑(PPE=手 足綜合征)。
21.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療在5mg/m2和80mg/m2之間 的濃度顯示沒(méi)有或基本上沒(méi)有毒性副作用。
22.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中治療在直到40mg/m2的濃度顯示 沒(méi)有或基本上沒(méi)有毒性副作用。
23.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中抗體或抗體片段共價(jià)地結(jié)合至 脂質(zhì)體膜。
24.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中抗體共價(jià)地綴合至與脂質(zhì)體錨 接的接頭分子的末端。
25.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中接頭分子是聚乙二醇。
26.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中抗體是針對(duì)EGF受體的結(jié)合配 體的胞外結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體。
27.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于治療臨床設(shè)立的人患者中選自 由卡波奇氏肉瘤、復(fù)發(fā)性卵巢癌、軟組織肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑素瘤、間皮瘤、泌尿道移行細(xì) 胞癌、子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌、食管癌、結(jié)腸直腸 癌、肛門癌、陰道癌、外陰癌、前列腺癌、皮膚的基底細(xì)胞癌、頭頸癌和膽管癌組成的組中的 癌癥，所述癌癥特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤代表。
28.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于治療臨床設(shè)立的人患者中選自 由前列腺癌、胰腺癌、腎癌、膀胱上皮癌、食管癌、頭頸癌、結(jié)腸直腸癌、肝細(xì)胞癌和間皮瘤組 成的組中的癌癥，所述癌癥特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤代 表。
29.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患前列腺癌，具有在激素和/或多西他賽和/或米托蒽醌治療下已 經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。
30.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患胰腺癌，具有在吉西他濱和/或卡培他濱和/或奧沙利鉬治療下 已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。
31.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患腎癌，具有在干擾素和/或卡培他濱和/或舒尼替尼和/或索拉 菲尼治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。
32.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患食管癌，具有在順鉬和/或5-FU和/或多西他賽和/或西妥昔 單抗治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。
33.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患結(jié)腸癌和/或直腸癌，具有在西妥昔單抗和/或貝伐單抗和/或 奧沙利鉬和/或伊立替康和/或卡培他濱和/或5-FU治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。
34.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患膀胱上皮癌，具有在順鉬或卡鉬和/或吉西他濱和/或多柔比星 和/或氨甲蝶呤和/或長(zhǎng)春新堿治療下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。
35.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患間皮瘤，具有在順鉬或卡鉬和/或吉西他濱和/或培美曲塞治療 下已經(jīng)進(jìn)展的腫瘤。
36.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于多線治療臨床設(shè)立的人患者中 的癌癥，其中所述患者罹患肝細(xì)胞癌，具有在舒尼替尼和/或索拉非尼治療下已經(jīng)進(jìn)展的 腫瘤。
37.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，用于治療臨床設(shè)立的患有癌癥、特別 地患有由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表的癌癥的人患者，其中實(shí)現(xiàn)5%和95%之間的應(yīng)答率。
38.藥物組合物，其包含根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體和可藥用載體或 賦形劑或稀釋劑，用于一線至多線治療、特別地用于二線、特別地三線、特別地四線、特別地 五線、特別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推 進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥。
39.一線至多線治療、特別地二線、特別地三線、特別地四線、特別地五線、特別地六線、 特別地七線和更高線治療臨床設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫 瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥的方法，所述方法通過(guò)施用根據(jù)前述權(quán)利要求任一 項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體或藥物組合物至所述人患者而實(shí)施。
40.治療患有癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表 的癌癥并且未經(jīng)歷過(guò)化學(xué)療法的人患者、特別地治療已經(jīng)接受過(guò)、但不應(yīng)答至少一種標(biāo)準(zhǔn) 療法、特別地至少二種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少三種標(biāo)準(zhǔn)療法，但是尤其地不應(yīng)答所有可使用 的標(biāo)準(zhǔn)療法的患者的方法，所述方法通過(guò)施用根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體 或藥物組合物至所述人患者而實(shí)施。
41.使用根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體或藥物組合物用來(lái)制備藥物的方 法，所述藥物用于一線至多線治療，特別地二線、特別地三線、特別地四線、特別地五線、特 別地六線、特別地七線和更高線治療臨床設(shè)立的人患者中的癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或 轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫瘤所代表的癌癥。
42.使用根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體或藥物組合物用來(lái)制備藥物的方 法，所述藥物用于治療患有癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤、特別地EGFR陽(yáng)性腫 瘤所代表的癌癥并且未經(jīng)歷過(guò)化學(xué)療法的人患者、特別地治療已經(jīng)接受過(guò)、但不應(yīng)答至少 一種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少二種標(biāo)準(zhǔn)療法、特別地至少三種標(biāo)準(zhǔn)療法，但是尤其地不應(yīng)答所 有可使用的標(biāo)準(zhǔn)療法的患者。
43.免疫脂質(zhì)體，其包含識(shí)別并結(jié)合至實(shí)體瘤表面上的EGF受體抗原的抗體或抗體片 段并且還在脂質(zhì)體中封裝了抗腫瘤化合物，用于治療已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性的患者或患者群體 中的多藥抗性。
44.藥物組合物，其包含根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體和可藥用載體或 賦形劑或稀釋劑，用于治療已經(jīng)顯現(xiàn)多藥抗性的患者或患者群體中的癌癥。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的藥物組合物，用于治療乳腺癌。
46.根據(jù)權(quán)利要求44的藥物組合物，用于治療結(jié)腸直腸癌。
47.根據(jù)權(quán)利要求44的藥物組合物，其中所述的多藥抗性包含選自由以下藥物組成的 組中的一種或多種抗癌藥物多西他賽、米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、干擾素、 舒尼替尼、索拉菲尼、順鉬或卡鉬、多柔比星、氨甲蝶呤、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、培美曲塞、吉 非替尼、依托泊苷、伊立替康、環(huán)磷酰胺、托泊替康、環(huán)磷酰胺、紫杉醇、絲裂霉素、貝伐單抗、 曲妥珠單抗、5-FU、西妥昔單抗、替莫唑胺、貝伐單抗、丙卡巴胼、CCNU和BCNU。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的藥物組合物，其中所述的多藥抗性包含選自由以下藥物組成的 組中的一種或多種抗癌藥物多西他賽、米托蒽醌、吉西他濱、卡培他濱、奧沙利鉬、舒尼替 尼、索拉菲尼、順鉬、5-FU、西妥昔單抗、貝伐單抗、奧沙利鉬和伊立替康。
49.藥物組合物，其包含根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的免疫脂質(zhì)體，其中所述的免疫 脂質(zhì)體封裝了多柔比星并且還包含抗體MAb C225或抗體EMD72000或其片段，其仍顯示所述抗體之一者或兩者的特異結(jié)合特性。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于多重治療罹患癌癥、特別地由局部推進(jìn)的或轉(zhuǎn)移性腫瘤所代表癌癥的人患者的免疫脂質(zhì)體，并涉及在所述方法中使用的組合物。本發(fā)明還涉及免疫脂質(zhì)體用于在癌癥療法中治療多藥抗性的用途。
文檔編號(hào)A61K39/395GK101878229SQ200880118058
公開(kāi)日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2008年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月28日
發(fā)明者C·羅赫利茨, C·馬莫特 申請(qǐng)人:巴塞爾大學(xué)醫(yī)院