專利名稱：有機化合物的制作方法
有機化合物本發(fā)明提供了新的有效治療受DPP-IV介導(dǎo)的病癥的二肽基肽酶-IV(DPP-IV)抑 制劑。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)DPP-IV負責(zé)使胰高血糖素樣肽-I(GLP-I)失活。由于GLP-I是胰腺胰島 素分泌的主要刺激物并對葡萄糖處置具有直接有益效果，所以DPP-IV抑制顯示出代表了 治療諸如非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)的病癥的有吸引力的手段。本發(fā)明涉及游離形式或可藥用酸加成鹽形式的式(I A)、(I B)、(XA)、(X B)、(Y A)或(Y B)化合物(本發(fā)明的化合物)
(YB)其中R'表示 且R"表示氫、羥基、C1-C7烷氧基、C1-C8-烷?；趸騌5R4N-CO-O-,其中R4和R5 獨立地是C1-C7烷基或苯基，未取代或被選自C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、鹵素和三氟甲基的取代基取代，并且其中R4另外地是氫；或者R4和R5 —起表示C3-C6亞烷基。本發(fā)明還涉及如上所述的式(I A)、(I B)、(Χ A)、(X B)、(Y A)或(Y B)化合物， 其中R"表示氫。在優(yōu)選的實施方案中，如上所述的式(I A)、(I B)、(Χ A)、(X B)、(YA)或(Y B) 化合物是基本上純的形式。本發(fā)明的化合物可以以游離形式或酸加成鹽形式存在。優(yōu)選可藥用鹽(即無毒性 的生理學(xué)可接受的鹽)，雖然其它鹽也是有用的、例如在分離或純化本發(fā)明的化合物中是有 用的。盡管優(yōu)選的酸加成鹽是鹽酸鹽，但是也可以使用甲磺酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽 和乙酸鹽。本發(fā)明的化合物可以以具有旋光活性的異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式存在，并且可 以通過常規(guī)技術(shù)如色譜法來分離和回收。下文列出了用于描述本發(fā)明的各種術(shù)語的定義。這些定義如同它們在本說明書通 篇中使用的那樣單獨地或作為較大基團的一部分應(yīng)用于各術(shù)語，在特定情況中另有限制除 外。術(shù)語“烷基”指具有1-10個碳原子、優(yōu)選1-7個碳原子、最優(yōu)選1-5個碳原子的直
鏈或支鏈烴基。示例性的烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基、
己基等ο術(shù)語“烷酰基”指烷基-C (0) _。術(shù)語“取代的金剛烷基”指被一個或多個、例如兩個取代基取代的金剛烷基、即 1-或2-金剛烷基，所述取代基選自烷基、-OR1或-NR2R3 ；其中RpR2和R3獨立地是氫、烷基、 (C1-C8-烷?；?、氨甲?；?CO-NR4R5 ；其中禮和R5獨立地是烷基、未取代或取代的芳基， 且其中R4和R5之一另外地是氫或者R4和R5 —起表示C2-C7亞烷基；術(shù)語“芳基”優(yōu)選表示苯基。取代的苯基優(yōu)選是被一個或多個、例如兩個選自例如 烷基、烷氧基、鹵素和三氟甲基的取代基取代的苯基。術(shù)語“烷氧基”指烷基-0-。術(shù)語〃鹵素〃或〃鹵代〃指氟、氯、溴和碘。術(shù)語“亞烷基”指2-7個碳原子、優(yōu)選3-6個碳原子、最優(yōu)選5個碳原子的直鏈橋。術(shù)語"基本上純的"在本發(fā)明的上下文中被理解為指基本上不含生物物質(zhì)、例如 在血液中發(fā)現(xiàn)的生物物質(zhì)，尤其是低于10%、優(yōu)選低于1%、最優(yōu)選不含這類生物物質(zhì)。本發(fā)明的化合物可以例如通過包括如下步驟的方法來制備使反應(yīng)活性的(2-氰 基吡咯烷子基)羰基亞甲基化合物與適當(dāng)?shù)娜〈陌放悸?lián)；更具體而言，對于制備式I化合 物，該方法包括使式II化合物 其中Y是反應(yīng)活性基團(優(yōu)選鹵素如溴、氯或碘)，與式III化合物反應(yīng)，
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NH2(CH2)-R III其中R如上述所定義，和以游離形式或酸加成鹽形式回收所得的式(I A)、(I B)、(Χ A)、(X B)、(Y A) 或(Y B)化合物。制備式Y(jié)A或YB化合物的前體的供選方法在專利申請WO 01/068603中有述及， 對于式XA或XB化合物而言在WO 05/095339中有述及。下述方法可用于獲得專利申請WO 01/068603或WO 05/095339中所述的其中R'是-OH的化合物的0-葡糖醛酸苷形式。R'部分可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的任意方法或者通過下文對化學(xué)式IA或 IB的結(jié)構(gòu)描述的方法來與化學(xué)結(jié)構(gòu)連接。經(jīng)由采用大鼠肝勻漿作為催化劑的制備級生物轉(zhuǎn) 化，已經(jīng)如下文所述制備了維格列汀的0-葡糖醛酸苷。 維格列汀(NVP-LAF237-NX或Galvus )是目前正處于U. S. FDA的調(diào)整性回顧 (regulatory review)的二肽基肽酶_4 (DPP-4)抑制劑類別的一類新的口服降血糖藥(抗 糖尿病)。申請人已經(jīng)出人意料地地發(fā)現(xiàn)維格列汀的0-葡糖醛酸苷(圖AA)保持了與維 格列汀相同的活性。申請人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)維格列汀的0-葡糖醛酸苷除了與維格列 汀在抑制DPP-4酶方面等效外，在抑制DPP-8或DPP-9酶方面具有較低的效力。特別出人 意料的是，取代DPP-4抑制劑的金剛烷基將提供改善的藥理學(xué)特性。維格列汀的0-葡糖醛 酸苷可提供進一步的藥物動力學(xué)或藥理學(xué)優(yōu)點，例如副作用較少、生物利用度更好。 在最優(yōu)選的實施方案中，維格列汀的0-葡糖醛酸苷(圖AA)是基本上純的形式。本發(fā)明的方法可以按照常規(guī)方式進行。例如，使式II化合物與1至3當(dāng)量、優(yōu)選 3當(dāng)量的式III伯胺反應(yīng)。該反應(yīng)便利地在惰性有機溶劑如二氯甲烷或環(huán)醚如四氫呋喃的 存在下進行。溫度優(yōu)選為約0°c至約35°C、優(yōu)選約0°C至約25°C之間。
可以從反應(yīng)混合物中分離出本發(fā)明的化合物和以常規(guī)方式、例如通過色譜法進行純化。原料還可以以常規(guī)方式制得。式II化合物可以通過如下的兩步反應(yīng)流程制備 步驟1涉及式IV吡咯烷與略微摩爾過量的鹵代乙酰鹵如溴代乙酰溴或氯代乙酰 氯和堿如碳酸鉀或三乙胺反應(yīng)。該反應(yīng)便利地在惰性有機溶劑如四氫呋喃或氯化脂族烴如 二氯甲烷的存在下、在約0°c至約25°C的溫度下、優(yōu)選在約0°C至約15°c的溫度下進行。步驟2涉及用1至2當(dāng)量的三氟乙酸酐(TFAA)使步驟1中制得的式V化合物脫 水。脫水優(yōu)選在惰性有機溶劑如四氫呋喃或氯化脂族烴如二氯甲烷的存在下、在約0°c至約 25°C的溫度下、優(yōu)選在約0°C至約15°C的溫度下進行。當(dāng)用作原料的化合物的制備沒有在本文中具體描述時，該用作原料的化合物是已 知的或者可以按照已知方式或類似于已知方法或類似于實施例中所述的方法由已知的化 合物制得。例如，式III的伯胺化合物是已知的，可以通過文獻如Khim.-Farm. Zh. (1986)， 20 (7)，810-15中記錄的方法制得。最終，本發(fā)明的化合物以游離形式獲得，或者如果存在成鹽基團的話作為其鹽形 式獲得。具有堿性基團的本發(fā)明化合物可以被轉(zhuǎn)化為酸加成鹽、尤其是可藥用酸加成鹽。 這些鹽例如與無機酸、例如礦物酸如硫酸、磷酸或氫鹵酸或與有機羧酸形成。優(yōu)選的是與鹽 酸形成的鹽。鑒于游離化合物和鹽形式的化合物之間的密切關(guān)系，無論何時在本文中提到化合 物時還涉及相應(yīng)的鹽，條件是這在所述情況中是可能的或適當(dāng)?shù)??；衔铩ㄋ鼈兊柠}還可以以其水合物形式獲得，或者包括其它用于其結(jié)晶的 溶劑。本發(fā)明還包括藥物組合物、例如可用于抑制DPP-IV的藥物組合物，其包含可藥用 載體或稀釋劑以及治療有效量的式I化合物或其可藥用酸加成鹽。在另一項實施方案中，本發(fā)明提供了抑制DPP-IV的方法，該方法包括給需要該治 療的哺乳動物施用治療有效量的本發(fā)明化合物或其可藥用酸加成鹽。在另一項實施方案中，本發(fā)明提供了治療受DPP-IV抑制介導(dǎo)的病癥的方法，該方 法包括給需要該治療的哺乳動物施用治療有效量的上述本發(fā)明化合物或其可藥用酸加成鹽. ο本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽的用途，例如在制備用于預(yù)防或治療與DPP-IV水平升高相關(guān)的疾病或病癥的藥物中的用途。如上所述，所有的式(I A)、(I B)、(Χ A)、(X B)、(Y A)或(Y B)化合物及其相應(yīng) 的可藥用酸加成鹽均可用于抑制DPP-IV。本發(fā)明的化合物及其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽抑 制DPP-IV的能力可以采用Caco-2DPP-IV試驗來證實，該試驗測定了受試化合物抑制來自 人結(jié)腸癌細胞提取物的DPP-IV活性的能力。人結(jié)腸癌細胞系Caco-2獲自美國典型培養(yǎng)物 保藏中心(ATCCHTB 37)。如 Reisher 等人在 Proc. Natl. Acad. Sci.，第 90 卷，第 5757-5761 M (1993) ΦΙΙ^ "Increased expression of intestinal cell line Caco-2" ^ifei^ 所述使細胞分化以誘導(dǎo)DPP-IV表達。由溶解于IOmM Tris HC1、0. 15MNaCl、0. 04t. i. u.抑 肽酶、0. 5% nonidet-P40，pH 8. 0中的細胞將其在4°C于35，OOOg離心30分鐘以除去細胞 碎片制備細胞提取物。試驗通過向微量滴定板的孔中添加20 μ g溶解的Caco-2蛋白來進 行，所述 Caco-2 蛋白在試驗緩沖液(25mM Tris HCl pH 7. 4、140mM NaClUOmM KC1、1%牛 血清清蛋白)中稀釋至125 μ 1的終體積。于室溫孵育60分鐘后，通過添加25 μ IlmM底物 (H-丙氨酸-脯氨酸-ρΝΑ ；ρΝΑ是對硝基苯胺)啟動反應(yīng)。反應(yīng)在室溫下進行10分鐘，然后 加入19 μ 1體積的25%冰醋酸以終止反應(yīng)。受試化合物通常以30 μ 1添加物加入，試驗緩 沖液的體積被減至95 μ 1。采用游離ρΝΑ在試驗緩沖液中的0-500 μ M溶液產(chǎn)生游離對硝基 苯胺的標準曲線。生成的曲線是線性的，用于底物消耗的內(nèi)插(催化活性以所裂解底物的 nmoles/min表示)。通過在Molecular Devices UV Max微量滴定板讀數(shù)器中測定405nm 的吸收度確定終點。采用4-參數(shù)邏輯函數(shù)、由8-點劑量響應(yīng)曲線計算受試化合物作為DPP-IV抑制劑 的效力，以IC5tl表示。本發(fā)明的化合物及其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽抑制DPP-IV的能力還可以通過采用 Kubota 等人在 Clin. Exp. Immunol.，第 89 卷，第 192-197 頁(1992)中題為"Involvement of dipeptidylpeptidase IV in an in vivo immuneresponse，，的論文中所述測定法的變 通方法在人和大鼠血漿中測定受試化合物對DPP-IV活性的影響來證實。簡言之，將5 μ 1血 漿加入到96-孔平底微量滴定板(Falcon)中，然后添加5μ 1在孵育緩沖液(25mM HEPES, 140mMNaCl、l% RIA-級BSA，pH 7.8)中的80mM MgCl20于室溫孵育60分鐘后，通過添加 10 μ 1含有0. ImM底物(H-甘氨酸-脯氨酸-AMC ；AMC是7-氨基-4-甲基香豆素)的孵育 緩沖液啟動反應(yīng)。將板用鋁箔覆蓋(或保持在暗處)，于室溫孵育20分鐘。反應(yīng)20分鐘 后，采用CytoFluor 2350熒光計(激發(fā)380nm，發(fā)射460nm ；靈敏度設(shè)置4)測定熒光。受試 化合物通常以2μ 1添加物加入，試驗緩沖液的體積被減至13μ 1。采用AMC在試驗緩沖液 中的0-50 μ M溶液產(chǎn)生游離AMC的熒光-濃度曲線。生成的曲線是線性的，用于底物消耗 的內(nèi)插(催化活性以所裂解底物的nmoles/min表示)。與前面的試驗一樣，采用4-參數(shù)邏 輯函數(shù)、由8-點劑量響應(yīng)曲線計算受試化合物作為DPP-IV抑制劑的效力，以IC5tl表示。鑒于其抑制DPP-IV的能力，本發(fā)明的化合物及其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽可用于 治療受DPP-IV抑制介導(dǎo)的病癥。根據(jù)上述和文獻中的所見內(nèi)容，可以預(yù)計本文公開的化 合物可用于治療諸如非胰島素依賴型糖尿病、關(guān)節(jié)炎、肥胖、同種異體移植物移植和降鈣 素-骨質(zhì)疏松癥的病癥。此外，基于胰高血糖素樣肽(例如GLP-I和GLP-2)的作用以及它 們與DPP-IV抑制的關(guān)聯(lián)，可以預(yù)計本文公開的化合物可用于例如產(chǎn)生鎮(zhèn)靜或抗焦慮作用 或者減弱術(shù)后的分解代謝改變和對應(yīng)激的激素響應(yīng)或者降低心肌梗塞后的死亡率和發(fā)病率，或者可用于治療與可以受GLP-I和/或GLP-2水平介導(dǎo)的上述作用有關(guān)的病癥。更具體而言，例如，本發(fā)明的化合物及其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽改善了對口服葡 萄糖攻擊的早期胰島素響應(yīng)，因此可用于治療非胰島素依賴型糖尿病。本發(fā)明的化合物及 其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽改善對口服葡萄糖攻擊的早期胰島素響應(yīng)的能力可以按照如下 方法在抗胰島素性大鼠中測定在測試當(dāng)天使已經(jīng)飼喂高脂肪膳食(飽和脂肪=57%卡路里)達2-3周的雄性 Sprague-Dawley大鼠禁食約2小時，分成8-10只一組，口服給予10 μ mol/kg在CMC中的受 試化合物。在受試化合物直接進入受試動物的胃后30分鐘時，施用lg/kg的口服葡萄糖丸。 在各時間點從長期頸靜脈導(dǎo)管獲得血樣，對其分析血糖和免疫反應(yīng)性胰島素(IRI)濃度以 及血漿DPP-IV活性。通過雙抗體放射免疫測定(RIA)方法、采用來自Linco Research (St. Louis, MO)的特異性抗鼠胰島素抗體分析了血漿胰島素水平。RIA的檢測下限為0.5 μ U/ mL，分析內(nèi)和分析間變異為5%以下。數(shù)據(jù)表示為對照動物平均值的增加％。通過口服施用， 受試化合物各自放大了早期胰島素響應(yīng)，這導(dǎo)致了抗胰島素性測試動物中葡萄糖耐量的改 善。獲得了如下結(jié)果本發(fā)明的化合物及其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽將被施用以治療受DPP-IV抑制介導(dǎo) 的病癥的精確劑量依賴于多種因素，包括宿主、所治療病癥的性質(zhì)和嚴重性、施用方式和所 用的具體化合物。但是，通常，當(dāng)本發(fā)明的化合物或其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽以0.002-5、 優(yōu)選0. 02-2. 5mg/kg體重的日劑量或者對于大多數(shù)較大靈長類動物而言以0. 1-250、優(yōu) 選I-IOOmg的日劑量經(jīng)腸施用、例如經(jīng)口服施用或者經(jīng)胃腸道外使用、例如經(jīng)靜脈內(nèi)施用、 優(yōu)選經(jīng)口服施用時，受DPP-IV抑制介導(dǎo)的病癥被有效地治療。典型的口服劑量單位為 0.01-0.75mg/kg，每日1-3次。通常，最初施用小劑量，逐步增加劑量至確定所治療宿主的 最佳劑量。劑量上限由副作用決定，并且可以通過對所治療宿主的試驗得以確定。本發(fā)明的化合物及其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽可以與一種或多種可藥用載體和任 選的一種或多種其它常規(guī)藥物佐劑合并，經(jīng)腸施用、例如以片劑、膠囊劑、膠囊形片劑等經(jīng) 口服施用或者經(jīng)胃腸道外使用、例如以無菌可注射溶液或混懸液經(jīng)靜脈內(nèi)施用。經(jīng)腸和胃 腸道外施用的組合物可以通過常規(guī)方式制備。包含本發(fā)明化合物的適宜制劑的實例在專利 申請 W02005/067976 或 WO 2006/078593 中有述及。因此，本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含游離形式或可藥用酸加成鹽形式的權(quán)利 要求1-4任一項的化合物或本文所述的化合物以及至少一種可藥用載體或稀釋劑。本發(fā)明的藥物組合物是適于經(jīng)腸(例如經(jīng)口服或直腸)、透皮和胃腸道外施用于 哺乳動物、包括人來治療受DPP4活性介導(dǎo)的病癥的藥物組合物。這類病癥包括葡萄糖耐量 降低、2型糖尿病和肥胖。因此，本發(fā)明的藥理活性化合物可用于制備藥物組合物，所述組合物包含有效量 的該化合物與適于經(jīng)腸或胃腸道外應(yīng)用的賦形劑或載體的結(jié)合物或混合物。優(yōu)選的是包含 活性成分和下述成分的片劑和明膠膠囊劑a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；就片劑而 言還包含c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要的話，還包含d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑?？勺⑸浣M合物優(yōu)選是含水等張溶液或混懸液，栓劑有利地由脂肪乳劑或混懸劑制備。所述組合物可以被滅菌和/或含有佐劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化齊U、 溶解促進劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可以含有其它有治療價值的物 質(zhì)。分別按照常規(guī)的混合、制?；虬路椒ㄖ苽渌鼋M合物，其含有約0. 1-75%、優(yōu)選約 1-50%的活性成分。適于透皮應(yīng)用的制劑包括治療有效量的本發(fā)明化合物和載體。有利的載體包括可 吸收的藥理學(xué)可接受的溶劑以幫助穿過宿主的皮膚。特征性地，透皮裝置是繃帶劑的形式， 包含背膜、含有化合物和任選的載體的儲庫、任選的速率控制屏障(歷經(jīng)延長了的時間以 受控和預(yù)定的速率遞送化合物至宿主皮膚)和確保該裝置于皮膚上的手段。因此，本發(fā)明提供了用于治療受二肽基肽酶-IV抑制介導(dǎo)的病癥、優(yōu)選葡萄糖耐 量降低、2型糖尿病和肥胖的如上所述的藥物組合物。本發(fā)明還提供了如上所述的藥物組合物在治療受二肽基肽酶-IV抑制介導(dǎo)的病 癥、優(yōu)選葡萄糖耐量降低、2型糖尿病和肥胖中的用途，其中本發(fā)明的化合物(如權(quán)利要求 1-4任一項所定義)與其它治療劑如一種或兩種另外的活性劑組合施用，所述其它治療劑 如下文所述。藥物組合物可以含有單獨的或與其它治療劑組合的治療有效量的如本文(如權(quán) 利要求1-4)定義的本發(fā)明化合物，例如各自為本領(lǐng)域報道的治療有效劑量。這類治療劑包 括a)抗糖尿病劑，例如胰島素、胰島素衍生物和模擬物；胰島素促分泌劑，例如磺 脲類，例如格列吡嗪、格列本脲和亞莫利阿瑪爾；促胰島素磺酰脲受體配體，例如氯茴苯 酸類，例如那格列奈和瑞格列奈；蛋白酪氨酸磷酸酶-IB(PTP-IB)抑制劑，例如PTP-112 ； GSK3(糖原合酶激酶-3)抑制劑，例如 SB-517955、SB-4195052、SB-216763、NN-57-05441 和NN-57-05445 ；RXR配體，例如GW-0791和AGN-194204 ；鈉依賴性葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白抑 制劑，例如T-1095 ；糖原磷酸化酶A抑制劑，例如BAYR3401 ；雙胍類，例如甲福明；α -糖苷 酶抑制劑，例如阿卡波糖；GLP-I (胰高血糖素樣肽-1)、GLP-1類似物如Exendin-4 (艾塞那 肽-4)和GLP-I模擬物；和DPPIV (二肽基肽酶IV)抑制劑，例如維格列汀；b)降血脂劑，例如3-羥基-3-甲基-戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，例如 洛伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、維洛他汀(velostatin)、 氟伐他汀、達伐他汀、阿托伐他汀、羅蘇伐他汀和rivastatin (雷司他汀)；角鯊烯合酶抑制 劑；FXR(法呢醇X受體(farnesoid X receptor))和LXR(肝X受體)配體；考來烯胺；貝特 類(fibrates)；煙酸膽汁酸結(jié)合樹脂，例如考來烯胺；貝特類；煙酸和其它GPR109激動劑； 膽固醇吸收抑制劑，例如依澤替米貝；CETP抑制劑(膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白抑制劑)，和阿司匹 林；c)抗肥胖劑，例如奧利司他、西布曲明和大麻素受體I(CBl)拮抗劑，例如利莫那 班；和
d)抗高血壓劑，例如髓袢利尿劑，例如依他尼酸、呋塞米和托塞米；血管緊張素轉(zhuǎn) 化酶(ACE)抑制劑，例如貝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、莫昔普利、培 哚普利、喹那普利、雷米普利和群多普利；Na-K-ATP酶膜泵抑制劑，例如地高辛；中性內(nèi)肽 酶(NEP)抑制劑ACE/NEP抑制劑，例如奧馬曲拉、山帕曲拉和法西多曲；血管緊張素II拮 抗劑，例如坎地沙坦、依普羅沙坦、厄貝沙坦、氯沙坦、替米沙坦和纈沙坦，特別是纈沙坦；腎 素抑制劑，例如地替吉侖、占吉侖、特拉吉侖、阿利吉侖、RO 66-1132和R0-66-1168 ； β -腎 上腺素能受體阻滯劑，例如醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、美托洛爾、納多洛爾、 普萘洛爾、索他洛爾和噻嗎洛爾；影響收縮力的物質(zhì)，例如地高辛、多巴酚丁胺和米力農(nóng)； 鈣通道阻滯劑，例如氨氯地平、芐普地爾、地爾硫革、非洛地平、尼卡地平、尼莫地平、硝苯地 平、尼索地平和維拉帕米；醛留酮受體拮抗劑；和醛留酮合酶抑制劑；e)過氧化物酶體增殖物激活受體激動劑，例如非諾貝特、吡格列酮、羅格列酮、替 格他唑(tesaglitazar)、BMS-298585、L-796449、在專利申請 WO 2004/103995 中具體描述 的化合物(即實施例1-35的化合物或在權(quán)利要求21中具體列出的化合物)或在專利申請 WO 03/043985中具體描述的化合物(即實施例1_7的化合物或權(quán)利要求19中具體列出的 化合物)，尤其是(R)-1-{4- [5-甲基-2- (4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-基甲氧基]-苯磺 ?；鶀 _2，3- 二氫-IH-吲哚-2-甲酸或其鹽。在每種情況中，特別是在化合物權(quán)利要求和實施例的終產(chǎn)物中，終產(chǎn)物、藥物制劑 和權(quán)利要求的主題通過引用這些出版物和專利申請在此引入本申請。因此，本發(fā)明涵蓋了包含如下物質(zhì)的藥物組合物i)權(quán)利要求1-4任一項的化合物；和ii)至少一種選自如下的化合物a)抗糖尿病劑，b)降血脂劑，c)抗肥胖劑，d)抗高血壓劑，e)過氧化物酶體增殖物激活受體激動劑，ii) 一種或多種可藥用載體。Patel Mona在Expert Opin Investig Drugs，2003，12 (4)，623-633 的圖 1-7 中描 述了其它具體的抗糖尿病化合物，該文獻引入本文作為參考。本發(fā)明的化合物可以與其它 活性成分同時、在其之前或之后施用，分別通過相同或不同施用途徑或者在同一藥物制劑 中一起施用。通過代碼、通用名或商品名鑒別的治療劑的結(jié)構(gòu)可以獲自標準綱要《默克索引》 (The Merck Index)的現(xiàn)行版本或數(shù)據(jù)庫如 Patents International (例如 IMS World Publications)。其相應(yīng)的內(nèi)容引入本文作為參考。因此，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的本發(fā)明化合物與治療有效 量的其它治療劑的聯(lián)合，所述其它治療劑優(yōu)選選自抗糖尿病劑、降血脂劑、抗肥胖劑或抗高 血壓劑，最優(yōu)選選自如上所述的抗糖尿病劑或降血脂劑。本發(fā)明還涉及用作藥劑的如上所述的藥物組合物。本發(fā)明還涉及如上所述的藥物組合物或組合產(chǎn)品在制備用于治療受二肽基肽酶-IV抑制介導(dǎo)的病癥、優(yōu)選葡萄糖耐量降低、2型糖尿病和肥胖的藥物中的用途。本發(fā)明的化合物及其相應(yīng)的可藥用酸加成鹽可以配制成經(jīng)腸和胃腸道外施用的 藥物組合物，其含有有效治療受DPP-IV抑制介導(dǎo)的病癥的量的活性物質(zhì)，該組合物是單位 劑量形式并且該組合物包含可藥用載體。本發(fā)明的化合物(包括其亞范圍各自的化合物和實施例各自的化合物)可以以對 映異構(gòu)純的形式(例如ee > 98%、優(yōu)選> 99% )或與E對映異構(gòu)體一起、例如以外消旋形 式施用。上述劑量范圍是以本發(fā)明的化合物為基礎(chǔ)的(不包括E對映異構(gòu)體的量)。下述實施例顯示了本發(fā)明所囊括的代表性化合物及其合成。然而，應(yīng)當(dāng)清楚地理 解，它們僅用于解釋說明的目的。I.實施例11-[(3_羥基-1-金剛烷基)氨基]乙酰基-2-氰基-吡咯烷，(S) (INN:維格列 汀)或 NVP-LAF237 Α. 1-氨基金剛烷-3-醇
可以對Khim. -Farm. Zh. (1986)，20 (7)，810-15中找到的合成進行略微改變。
歷經(jīng) 30 分鐘向 96%濃硫酸(2IOmL ；3，943mmol)和 65%硝酸(21. OmL ；217. Ommol) 的快速攪拌的、澄清無色的、冰水冷卻的混合物中分小批加入21. 0g(112. Ommol) 1_金剛烷 基胺HCl (99%)。在添加鹽酸金剛烷基胺時出現(xiàn)略微冒泡，該反應(yīng)是略微放熱的。將該冒 泡的黃色溶液在冰_水溫度下攪拌約2小時，然后于室溫攪拌30小時。然后將該澄清淡黃 色反應(yīng)物傾入約IOOg冰中，所得溶液為澄清的綠-藍色。將溶液置于冰水浴中，攪拌30分鐘。然后歷經(jīng)45分鐘分小批加入約550g 89%純 的K0H(8，74mol)。在此添加過程中，該反應(yīng)放熱，達到80°C并產(chǎn)生大量棕色NO2氣體。在添 加結(jié)束時，反應(yīng)物是濃稠的，含有白色固體(產(chǎn)物和鹽)。然后將所得白色糊狀物傾倒在布 氏漏斗/硅藻土墊上，用1. 2升CH2Cl2洗滌。然后從水層萃取出CH2Cl2層，用Na2SO4干燥。 然后過濾該溶液，濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/泵)，得到1-氨基金剛烷-3-醇，為白色固體。B. 1-氯乙?；?2-氰基吡咯烷歷經(jīng)45分鐘向20. Og (180. Ommol)氯代乙酰氯和97g(0. 70mmol)碳酸鉀在150mL 四氫呋喃中的機械攪拌的溶液中滴加20. Og L-脯氨酰胺(180. Ommol)在500ml四氫呋喃 中的溶液。然后將反應(yīng)物于室溫機械攪拌另外2小時。然后過濾反應(yīng)物以除去鉀鹽，濾液 用Na2SO4干燥。然后通過過濾除去Na2SO4,向無色濾液中一次性加入三氟乙酸酐(25. OmL, 0. ISOmmol)。然后將反應(yīng)物于室溫機械攪拌1小時，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮所得的澄清黃/ 橙色溶液。通過向濃縮的油中添加乙酸乙酯并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀再次濃縮，除去過量的三氟 乙酸酐。該除去操作進行3次。使所得油在乙酸乙酯與水之間分配。然后將產(chǎn)物萃取入乙酸乙酯中，然后用乙酸 乙酯將水層洗滌2次。然后將所合并的有機層依次用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到1-氯乙?；?2-氰基吡咯烷，為黃色固體。C. 1-「(3_羥某-1-金剛烷某)t[某1乙酰某-2-氰某-吡咯烷，(S)向標題A 化合物(1-氨基金剛烷-3-醇(5. 80g, 34. 7mmol)在 CH2Cl2 (68. OmL)中 的非均勻溶液中加入9. 6g(69mmol)K2CO30然后用冰_水浴冷卻該非均勻混合物，歷經(jīng)30 分鐘滴加3. 0g(17mmol)標題B化合物(1-氯乙?；?2-氰基吡咯烷)溶于25. OmL CH2Cl2 中的溶液。將所得混合物于0°C攪拌2小時，于室溫攪拌6天。然后濃縮該反應(yīng)物，得到 黃色糊狀物質(zhì)，將其用SIMS/Biotage快速色譜系統(tǒng)和甲醇在二氯甲烷中的7%溶液作為洗 脫劑在硅膠上純化，得到游離堿形式的標題化合物，為白色結(jié)晶固體(熔點138°C -140 13CNMR(ppm) = 119. 59)。A. P. NVP-BQS867 (維格列汀的O-葡糖酵酸苷)和NVP-BRU563 (標記的維格列汀的 0-葡糖酵酸苷)的牛物催化合成圖4-1顯示了 NVP-LAF237在大鼠肝勻漿催化下的酶促葡糖苷酸化的反應(yīng)流程。
(i)圖I-I NVP-LAF237的生物轉(zhuǎn)化
3. 1.大鼠肝勻漿的制備
將兩份15g和一份Ilg冷凍大鼠肝臟解凍并切成小片。向每份肝臟中添加0. 5體 積當(dāng)量的冰冷0. 9% NaCl溶液并在Dispomix攪拌機中混合后，在“Potter S”組織勻漿器 (Braun Biotech Inc.，Melsungen，德國)中在冰水冷卻下通過以100%攪棒速度將特富 龍杵上下移動3次從而將組織勻漿化。將勻漿填充至最終重量為81g，在裝配有JA-10轉(zhuǎn) 子的 Avanti J-HC 型 Beckmann Coulter 離心機(Fullerton, CA, USA)中以 10，000rpm(= 17, OOOxg)于4-6離心30分鐘。上清液用作酶源。4. 2.制備規(guī)模的生物轉(zhuǎn)化340mg規(guī)模的NVP-LAF237 f維格列汀V的葡糖苷酸化條件是
NVP-LAF2375mM、UDP-葡糖酸酸鹽(Yamasa Co.，日本東京)20mM、MgCl220mM、HEPES, ρΗ 8. 5160mM、大鼠肝勻漿20% ν/ν,總體積224ml，于37°C孵育5小時，再于30°C孵育14小時。 反應(yīng)在50ml Nunc試管中進行，所述試管各自填充有20ml反應(yīng)混合物，在具有5cm振動半 徑的微生物實驗室振蕩器上以170rpm振搖。通過添加224ml乙腈并于20°C混合10分鐘從而終止制備級反應(yīng)。于SOOOrpm(轉(zhuǎn) 子JA-10)離心15分鐘后，將沉淀混懸于乙腈在去離子水中的50ml 50% ν/ν溶液，再次離 心。將所合并的上清液于25°C減壓濃縮至50ml。將渾濁的濃縮物于5000rpm離心，上清液 經(jīng)纖維玻璃過濾后，進行制備型HPLC。對于·丨13Cg isNl標記的NVP-LAF237 (50mg規(guī)模)的葡糖苷酸化，生物轉(zhuǎn)化
條件與340mg規(guī)模的NVP-LAF237相同，不同的是UDP-葡糖醛酸鹽的濃度是80mM、大鼠肝勻漿的濃度是30% v/v、nunc試管的填充體積是16. 5ml、總體積是33ml、反應(yīng)時間是4小時 和振搖速度是200rpm。通過向每支試管中添加16. 5ml乙腈、在冰上孵育15分鐘、然后混合從而終止反 應(yīng)。于17，00011)111(轉(zhuǎn)子從-10)離心15分鐘后，將沉淀重新混懸于乙腈在去離子水中的 20ml 50% ν/ν溶液中，再次離心。對于最終的凈化，將所合并的上清液于30°c減壓濃縮至 10ml、再次稀釋至25ml終體積、離心。將沉淀重新混懸于5ml去離子水，離心后，合并后兩 次的上清液并進行制備型hplc。轉(zhuǎn)化的測定/分析型HPLC-DAD將340mg批量的nvp-laf237的19h樣品 50 μ 1和[13c515n]標記的nvp-laf237批量的4h樣品25 μ 1各自與200 μ 150%乙腈水溶液 混合，在sigma 4k15c冷凍離心機中離心。通過分析型rp18-hplc-dad(來自瑞士巴塞爾安 捷倫技術(shù)公司(agilent technologies)的 hplc-dad 1100 系列；具有 chromolith guard cartridge rp-18e 5x4. 6mm (merck)白勺 chromolith performance rp-18e 100x4. 6mm 型號 的兩個連接的柱；流速2ml/分鐘；流動相a :3mm h3po4水溶液，流動相b 乙腈；梯度為歷經(jīng) 5分鐘由3%至15% b ；在200-400nm的dad檢測)分析上清液。轉(zhuǎn)化基于葡糖醛酸苷和 nvp-laf237的205nm處的uv-吸收峰面積。5.e.代謝物的純化a)a) nvp-bqs867_nx_2將一部分(5ml或約10% )生物轉(zhuǎn)化原料用于制備nvp-bqs867_nx_2批量。向該 體積中加入35ml iomm nh4ac水溶液和8ml甲醇。用稀乙酸調(diào)節(jié)ph至7。然后將該混合物 用作制備型液相色譜法的進樣溶液。制備型液相色譜法-質(zhì)譜法系統(tǒng)由waters autopurification系統(tǒng)(waters corp. milford，ma, usa)和2525泵、2767樣品管理器、2996光電二極管檢測器、515補充泵 (make-up pump)、zq2000 質(zhì)譜儀禾口 masslynx 4. o 禾口 fractionlynx 4. o 軟件組成。使用 atlantis dc18，5 μ m，19mmxl00mm 柱(waters)；流速 20ml/min ；流動相 a : iomm nh4ac水溶液，ph7. o ；流動相b :ch3cn/ch30h 4:1，iomm nh4ac ；梯度程序:0 分鐘，5% b ；2 分鐘，5% b ;7 分鐘，20% b ；7. 1-12 分鐘，95% b ；12. 1-14 分鐘，5% b ；進樣體積 l_5ml。 分離柱洗脫液，取很小一部分與補充液2-丙醇/h20/hc00h400 100 1在線混合，導(dǎo)入 質(zhì)譜儀的離子源中；其余部分進入記錄范圍為200-600nm的dad檢測器，然后進入樣品管理 器用于分級采集。質(zhì)譜儀裝配有在正esi模式中使用的esci接口。施加3kv毛細管電壓和30v錐 孔電壓；質(zhì)量范圍250-550da?；跁r間由5. 3至6. 7分鐘收集目標級分。合并來自12次hplc運行的目標級分， 于30°c減壓除去有機溶劑，剩余溶液于-80°c和0. 2mbar下冷凍干燥，得到15mg，為幾乎無 色的凍干物。通過hplc-dad和hplc-ms測定純度(參見第2. 2. 2部分)除了鹽(乙酸銨)和 水外，nvp-bqs867-nx-2批量的純度> 97%。b)b)nvp-bru563-nx~l (穩(wěn)定的標記的葡糖醛酸苷)將等體積的20mm nh4ac溶液加入到水提取物中以形成iomm的nh4ac濃度。用稀 乙酸將該混合物調(diào)節(jié)至ph7. 0，然后用作制備型液相色譜的進樣溶液。
制備型液相色譜法_質(zhì)譜法系統(tǒng)在2. 1. 3. 1中進行了描述。使用 Atlantis Prep dC18 OBD，5 μ m，30mmxl50mm柱(Waters)；流速40ml/min ；流 動相 A =IOmM NH4Ac 水溶液；流動相 B :CH3CN/CH30H4 1+lOmM NH4Ac, pH 7. 0 ；梯度程序0 分鐘，5% B ；2 分鐘，5% B ；7 分鐘，20% B ；7. 1-12 分鐘，95% B ；12. 1-14 分鐘，5% B ；進樣 體積2-6ml。按照與2. 1. 3. 1中所述相同的方式分離柱洗脫液。質(zhì)譜儀裝配有在正ESI模式中使用的ESCi接口。施加3kV毛細管電壓和30V錐 孔電壓；質(zhì)量范圍100-1000Da。 基于時間由7. 0至9. 0分鐘收集目標級分。合并來自12次HPLC運行的目標級分， 于30°C減壓除去有機溶劑，剩余溶液于-80°C和0. 2mbar下冷凍干燥，得到63mg，為幾乎無 色的凍干物。通過HPLC-DAD和HPLC-MS測定純度(參見第2. 2. 2部分)除了鹽(乙酸銨)和 水外，NVP-BRU563-NX-1批量的純度> 98%。B. F.結(jié)構(gòu)鑒定分析1.NMR 光譜法將化合物溶于5 μ 1 DMS0-d6中，填充入Imm直徑的NMR管中。由NVP-BQS867獲得 ID-1H 光譜和 2D 同-和異核光譜(COSY, HSQC, HMBC, R0ESY)。由 NVP-BRU563 測得 1H 光譜。 所有光譜在Bruker DRX600光譜儀上采用1Hl13C, 15N}Microliterprobe于300° K記錄。由 NVP-BQS867 在 BRUKER DRX600 光譜儀上采用 5mm 13C(1H) Cryoprobe 測得 13C 光譜。2. 2. HPLC-質(zhì)譜法液相色譜儀由裝配有Waters Acquity 2996 PDA檢測器的WatersUPLC Acquity(Waters)組成。柱Acquity UPLC BEH C18 ；1. 7ym ；1. Ox 150mm(Waters)；流速 0. Iml/分鐘；洗脫液A :H20/TFA 100 0. 1 ；洗脫液B 乙腈/TFA 100 0. 1 ；梯度:0分鐘， 5%B ； 1 分鐘，5% B ； 11 分鐘，40% B ； 13-16 分鐘，95% B ；30°C;UV_ 檢測200_350nm，分辨率 2. 4nm ；進樣體積5 μ 1。將物質(zhì)以約0. 3mg/ml的濃度溶于水/乙腈9 1中。通過210nm 處的UV以預(yù)期峰的面積進行純度評價。將柱洗脫液直接導(dǎo)入MS的離子源中。使用裝配有正離子模式的電噴霧接口的TSQ Quantum AM質(zhì)譜儀(Thermo，San Jose, CA, USA)。采用Xcalibur軟件2. 0版進行操作。使用25個單位的鞘氣(sheath gas) 設(shè)置和5個單位的輔助氣(auxiliary gas)，施加3kV的噴射電壓。將加熱的金屬毛細管維 持在 300°C;質(zhì)量范圍 200-800Da。MS/MS 參數(shù)碰撞氣(collision gas) 1. 5mTorr 氬氣；碰 撞能(collision energy) 25V。II. G.結(jié)果Α. 1.生物催化合成對于所述兩種制備級反應(yīng)而言，分析型HPLC-DAD給出以下轉(zhuǎn)化值340mg NVP-LAF237批量的轉(zhuǎn)化值為66 %，[13C515N]標記的NVP-LAF237批量的轉(zhuǎn)化值為94 % (50mg) ο2.葡糖醛酸苷的純化如上述部分中所述，通過制備型HPLC-MS由5ml獲自生物轉(zhuǎn)化的含水培養(yǎng)物提取 物得到15mg 0-葡糖醛酸苷NVP-BQS867-NX-2。由340mgNVP_LAF237的完整制備級反應(yīng)分 離出4批NVP-BQS867-NX(NX-1至NX-4)，總量為295mg 0-葡糖醛酸苷。
3.結(jié)構(gòu)闡明NVP-BOS867-NX-2 ^Ι 、兒元[M+H]+ 是 480. 1，提示分子量為 479。這與 NVP-LAF237的葡糖醛酸苷是一致的。MS/MS產(chǎn)物離子光譜顯示了葡糖醛酸苷(m/z 304)和 葡糖醛酸(m/z 286)的損失。根據(jù)NMR光譜清楚地闡明了 NVP-BQS867-NX-2的結(jié)構(gòu)(圖3_1)。NVP-BQS867的 NMR光譜與NVP-LAF237相比的主要差異主要是獲自葡糖醛酸苷部分的共振。葡糖醛酸的 端基異構(gòu)1’共振的力-(4.42 111)和13C位移(96.4ppm)顯示后者與氧鍵合，不與氮鍵合。 H-I，至C-3的HMBC相關(guān)性和H-I，至H-2和H-4的ROESY相關(guān)性清楚地證實了圖3_1中所 示的結(jié)構(gòu)。所有NMR數(shù)據(jù)和相關(guān)性的解釋均產(chǎn)生了僅僅一種結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)與MS結(jié)果(MW = 479，m/z MH+ = 480. 1)相符。所有1H-和13C位移以及相關(guān)的同_和異核相關(guān)性的概述顯 示在表3-1中。由[U-吡咯烷，氰基-13C5,吡咯烷-15N]標記的NVP-LAF237經(jīng)生物合成獲得的化合 ^NVP-BRU563-NX-3思示T與NVP-BQS867-NX相同的光譜特性，對于穩(wěn)定標記而言 預(yù)期的例外是MH+486. 2比NVP-BQS867-NX的MH+高6Da，在MS/MS產(chǎn)物離子光譜中一些碎 片也發(fā)生了位移。(i)

圖11-1，具有表3-1和1H光譜中所用編號方案的NVP-BQS867的結(jié)構(gòu) (b)表 11-1，NVP-BQS867 結(jié)構(gòu)的 1H-和 13C 歸屬 另一種優(yōu)選的化合物是；
在最優(yōu)選的實施方案中，圖BB的化合物是基本上純的形式。這種0-葡糖醛酸苷化合物(圖BB)可以通過采用本文所述的方法得到。專利申請TO 01/068603或WO 05/095339中描述了由其中R'是-OH獲得原料化合物的方法。鹽可以是HCL鹽。(HCl)=為鹽酸鹽。所有的終產(chǎn)物的HCl鹽通過使HCl穿過游 離堿在四氫呋喃中的0. 1摩爾溶液直至溶液明顯呈酸性、然后除去溶劑(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/泵) 而制得。氨基-金剛烷原料是文獻中已知的，或者可以如下制得3, 5- 二甲基土金剛烷基胺的制備在J. Med. Chem, 25 ；1 ； 1982 ；51-56中有述及。3-乙基-1-金剛烷基胺的制備在T. Med. Chem, 25 ；1 ； 1982 ；51-56中有述及。3-甲氧基-1-金剛烷基胺可以如下制備歷經(jīng)30分鐘向氫化鉀(0. 680gm ;5. 95mmol)在15. Oml四氫呋喃中的攪拌的、 冰-水冷卻的混懸液中滴加1-氨基金剛烷-3-醇(1. OOg ；5. 95mmol)和15. Oml四氫呋喃 的混合物。然后將所得混合物攪拌另外30分鐘，然后歷經(jīng)1分鐘滴加碘甲烷(0. 370ml ； 5.95mmol)。然后將所得不透明白色反應(yīng)物于室溫攪拌18小時。然后將混合物用50ml 二 氯甲烷稀釋，過濾以除去無機雜質(zhì)。然后濃縮濾液，采用SIMS/Biotage裝置和在二氯甲烷 中的19%甲醇和氫氧化銨作為洗脫劑在硅膠上純化，得到3-甲氧基-1-金剛烷基胺， 為不透明油狀物。3-「「(釘腦某)聽1氧某1-1-氡,縣__&成:歷經(jīng)10分鐘內(nèi)向I-氨基金剛烷-3-醇(5. OOg ；30. Ommol)和碳酸鉀(6. 20g ； 45mmol)在150ml四氫呋喃中的混合物中滴加氯甲酸芐基酯(4. 70g，33. Ommol)。然后將混 合物于室溫攪拌2小時，然后在乙酸乙酯與水之間分配。然后將產(chǎn)物萃取入乙酸乙酯中，水 層用乙酸乙酯(IOOml)洗滌兩次。然后將所合并的有機層依次用100ml 2N氫氧化鈉水溶 液、水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/泵)，得到1-芐基氨甲酰基金 剛烷-3-醇，為白色固體，85%收率。向1-芐基氨甲酰基金剛烷-3-醇(1. OOg, 3. 32mmol)和異氰酸叔丁基酯(380 μ 1， 3. 32mmol)在30ml 二氯甲烷中的澄清溶液中通過注射器加入三甲基甲硅烷基氯(20. 0 μ 1， 0. 17mmol)。然后將反應(yīng)物于室溫攪拌18小時，濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，用SIMS/Biotage裝置 和乙酸乙酯在己烷中的20 %溶液作為洗脫液在硅膠上進行純化，得到3-[[(叔丁基氨基) 羰基]氧基]-ι-芐基氨甲?；饎偼?，為白色固體，定量收率。向在1-升Parr氫化燒瓶中的3_ [[(叔丁基氨基)羰基]_氧基]芐基氨甲酰 基金剛烷(1. 50g,3. 75mmol)和10%鈀/碳(400mg)在乙醇(150ml)中的混合物中加入氫 (50psi)。然后將該不透明黑色混合物振搖24小時。然后將反應(yīng)物經(jīng)硅藻土過濾以除去鈀 催化劑，濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/泵)，得到3-[[(叔丁基氨基)羰基]氧基]-1-氨基金剛烷， 為澄清油狀物，99%收率。4_「「「(甲氧基苯基)氨基1羰基1氧基1-1-氨基金剛烷的合成方法基本上是 3_ [[(叔丁基氨基)羰基]氧基]-1-氨基金剛烷的方法，不同的是在第二步中，等量的異 氰酸4-甲氧基苯基酯代替異氰酸叔丁基酯，1,2- 二氯乙烷代替二氯甲烷用作溶劑，以及反 應(yīng)物于50°C攪拌18小時。得到最終的胺中間體，為油狀物。3_「「(苯基氨基)羰基1氧基1-1-氨基金剛烷的合成方法基本上是3_[[(叔丁 基氨基)羰基]氧基]-ι-氨基金剛烷的方法，不同的是在第二步中，等量的異氰酸苯基酯 代替異氰酸叔丁基酯，1，2_二氯乙烷代替二氯甲烷用作溶劑，以及反應(yīng)物于50°C攪拌18小時。得到最終的胺中間體，為澄清油狀物。2-氨基金剛烷-5-醇的制備方法與實施例1相同，不同的是原料是2-氨基金剛 烷而不是ι-氨基金剛烷。親核體3-乙酰氧基-1-氨基金剛烷的合成方法基本上是3-[[(叔丁基氨基)羰 基]氧基]-1-氨基金剛烷的方法，不同的是采用1.2eq乙酰氯、3. Oeq.吡啶、0. Ieq 4_ 二 甲氨基吡啶和1，2 二氯乙燒，將它們均于室溫攪拌24小時，從而進行1-芐基氨甲?；饎?烷-3-醇的標準酰化。得到最終的胺，為粘稠油狀物。3-「「「( 二異丙某)Ii某1氧,某1-1-M某金_1烷的合成方法某本卜.是 3-[[(叔丁基氨基)羰基]氧基]-1-氨基金剛烷的方法，不同的是在第二步中，等量的二 異丙基氨甲酰氯代替異氰酸叔丁基酯，1，2_ 二氯乙烷代替二氯甲烷用作溶劑，以及反應(yīng)物 于85°C攪拌18小時。得到最終的胺中間體，為灰色固體。3-「「「(環(huán)P1某)氨某1羰某1氧某1 -1-氨某金剛烷的合成方法某本卜.是3-[[(叔 丁基氨基)羰基]氧基]-ι-氨基金剛烷的方法，不同的是在第二步中，等量的異氰酸環(huán)己 基酯代替異氰酸叔丁基酯，1，2-二氯乙烷代替二氯甲烷用作溶劑，反應(yīng)物于50°C攪拌18小 時。得到最終的胺中間體，為粘稠澄清油狀物。3-乙氧基-1-金剛烷基胺(澄清油狀物)的制備方法與3-甲氧基-1-金剛烷基 胺相同，不同的是使用碘乙烷(1.3當(dāng)量)代替碘甲烷。制劑實施例可以如下制得各自含有50mg活性成分NVP-BQS867的片劑組成(對10,000片片劑而言)活性成分500. Og乳糖500. Og馬鈴薯淀粉352. Og明膠8. Og滑石粉60. Og硬脂酸鎂10. Og二氧化硅(高分散性)20. Og乙醇適量將活性成分與乳糖和292g馬鈴薯淀粉混合，將混合物用明膠的醇溶液潤濕，過篩 制粒。干燥后，混入其余的馬鈴薯淀粉、滑石粉、硬脂酸鎂和高分散性二氧化硅，將混合物壓 制成各自重145. Omg、活性成分含量為50. Omg的片劑，如果需要的話，可以提供斷裂口以更 細微地調(diào)節(jié)劑量。III.實施例2 生物學(xué)實驗縮略語列表 IV.材料和方法A.A.儀器在硅化處理的管(Life Systems Design，Merenschwand，瑞士)中對所有含有 蛋白質(zhì)和肽的溶液進行操作。采用CyBi-Well 96-通道吸液管管理器(CyBio AG, Jena,德國)將化合物溶液以及酶和底物溶液轉(zhuǎn)入384-孔培養(yǎng)板(黑色Cliniplate;目錄號 95040020Labsystems 0y, Finland)中。1. 1.FI測定儀器對于采用AMC為染料進行的熒光強度(FI)測定，使用了 UltraEvolution讀 數(shù)器(TECAN，Maermedorf，瑞士)。該儀器轉(zhuǎn)配有分別對于熒光繼發(fā)和發(fā)射采集而言的 350nm(20nm帶寬)和500nm(25nm帶寬)帶通過濾器(bandpath filter)的組合。為了增 加信躁比，使用適宜的分色鏡。所有過濾器和分色鏡均購自TECAN。采用Safire2讀數(shù)器(TECAN，Maermedorf，瑞士)和使用RhllO染料進行FI測定。 Safire2是基于單色儀的儀器，485nm和535nm波長分別用于熒光激發(fā)和發(fā)射采集。在激發(fā) 和發(fā)射通路中帶寬均設(shè)置為20nm。通過每次測定三次快閃激發(fā)了各孔中的熒光團。2.由平均數(shù)據(jù)計算IC=倌將來自單獨實驗運行的數(shù)據(jù)求平均值，采用Origin 7. 5SR6 (OriginLabCorporation,Northampton,MA,USA)程序繪圖。使用 Origin，內(nèi)置非線 性回歸程序?qū)⑵骄鶖?shù)據(jù)擬合為如下‘邏輯’方程y = A2+(Al-A2)/(l+(x/IC50)"p)(等式 1)其中y是抑制劑濃度χ下的抑制，Al是最低抑制值，即0%，A2是最大抑制值， 即100%。指數(shù)P是Hill系數(shù)。B. IC=倌的測定對于測定IC5tl值，于室溫在384-孔培養(yǎng)板中進行實驗。所有的最終實驗體積均為 30μ1。將受試化合物溶于90% (v/v)DMSO/水中，在水(含有0.05% (w/v)CHAPS)中稀釋 至預(yù)期實驗濃度的三倍。對每次測定，每孔加入10 μ 1水/CHAPS (士受試化合物)，然后加 入10 μ 1蛋白酶溶液(用實驗緩沖液稀釋；最終實驗濃度參見§實驗條件)。于室溫孵育 1小時后，通過添加10 μ 1底物溶液(最終濃度參見§實驗條件)啟動反應(yīng)。11個最終化 合物濃度是 0. 9ηΜ、3ηΜ、9ηΜ、30ηΜ、90ηΜ、300ηΜ、900ηΜ、3 μ Μ、9 μ Μ、30 μ M 禾Π 90 μ M 或 3ηΜ、 10ηΜ、30ηΜ、100ηΜ、300ηΜ、1 μ Μ、3 μ Μ、10 μ Μ、30 μ Μ、100 μ M 和 300 μ Μ。從線性發(fā)展曲線獲 得化合物對酶活性的作用，由兩個讀數(shù)測定，第一個讀數(shù)在加入底物(t = 0分鐘)后立即 讀取，第二個讀數(shù)在1小時(t = 60分鐘)后讀取。采用非線性回歸分析軟件(XLfit，4. 0 版；IDBusiness Solution Ltd.，Guildford，Surrey，UK)、由抑制百分數(shù)對比于抑制劑濃度 的圖計算得IC50值。C.實驗條件下文針對各實驗列出了有關(guān)酶、底物和緩沖液的所有條件。1. -DPP-2 ( 二肽基肽酶 2)酶覆蓋氨基酸30-492的人DPP-2 ；在昆蟲細胞中表達并從中純化(桿狀病毒表 達系統(tǒng))底物Nle-Pro_AMC，購自 Biosyntan(www. biosyntan. de)，產(chǎn)品號 4572酶濃度0. 03nM底物濃度2 μ M實驗緩沖液IOOmM檸檬酸鈉，ρΗ 5. 5,0. 05% (w/v) CHAPS
2. -DPP-IV ( 二肽基肽酶 IV)酶覆蓋氨基酸39-766的人DPP-IV ；在昆蟲細胞中表達并從中純化(桿狀病毒表 達系統(tǒng))底物Gly-Pro_AMC，購自 Bachem (www. bachem. com)，目錄號 1-1225酶濃度0.0InM底物濃度10 μ M實驗緩沖液25mMTris, pH 7. 4，140mM NaCl，IOmM KCl,0. 05% (w/v)CHAPS3.-人血漿DPP-IV (人血漿中的內(nèi)源性二肽基肽酶IV)酶來自男性供體血漿樣品的內(nèi)源性人DPP-IV底物(H-Ala-Pro)2-RhllO,室內(nèi)合成酶濃度約5nM底物濃度10 μ M實驗緩沖液人血漿，用緩沖液(25mMTris, pH 7.4、140mM NaClUOmM KC1、 0. 05%(w/v)CHAPS)稀釋至50%血漿含量4. -DPP-8 ( 二肽基肽酶 8)酶覆蓋氨基酸1-882的人DPP-8 ；在昆蟲細胞中表達并從中純化(桿狀病毒表達 系統(tǒng))底物Gly-Pro_AMC，購自 Bachem (www. bachem. com)，目錄號 1-1225酶濃度0. 05nM底物濃度10 μ M實驗緩沖液25mMTris, pH 7. 4，140mM NaCl，IOmM KCl,0. 05% (w/v)CHAPS5. -DPP-9 ( 二肽基肽酶 9)酶覆蓋氨基酸1-863的人DPP-9 ；在巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)中表達 并從中純化底物Gly-Pro_AMC，購自 Bachem (www. bachem. com)，目錄號 1-1225酶濃度InM底物濃度10 μ M實驗緩沖液25mMTris, pH 7. 4，140mM NaCl，IOmM KCl,0. 05% (w/v)CHAPS6. -FAP (成纖維細胞活化蛋白，α )酶覆蓋氨基酸27-760的人FAP α，不包括胞漿結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域；在昆蟲細胞 中表達并從中純化(桿狀病毒表達系統(tǒng))底物Z-Gly-Pro-AMC，購自 Bachem (www. bachem. com)，目錄號 1-1145酶濃度0.InM底物濃度8 μ M實驗緩沖液IOOmMTris, pH 7. 4，IOOmM NaCl，ImM EDTA，0. 05% (w/v)CHAPS7.-PEP (脯氨酰內(nèi)肽酶)酶覆蓋氨基酸1-710的人PEP ；在巴斯德畢赤酵母中表達并從中純化底物Z-Gly-Pro-AMC，購自 Bachem (www. bachem. com)，目錄號 1-1145酶濃度0. 03nM
底物濃度10 μ M實驗緩沖液100mMTris, pH 7. 4, IOOmM NaCl, ImM EDTA,0. 05% (w/v)CHAPS, 0. 1% (w/v) BSA。V. P.結(jié)果下表3-1至3-7概括了化合物NVP-BQS867的所有IC5tl測定結(jié)果，對于hDPP_IV、 人血漿中的內(nèi)源性 DPP-IV、hDPP-8、hDPP-9、hFAP 和 hPEP。(a)表 V-1NVP-BQS867-NX_2 對人 DPP-2 的效力 (d)表 V-4NVP-BQS867-NX_2 對人 DPP-8 的效力
(e)表 V-5NVP-BQS867-NX-2 對人 DPP-9 的效力
(f)表 V-6NVP-BQS867-NX-2 對人 FAP 的效力
(g)表 V-7NVP-BQS867-NX_2 對人 PEP 的效力
權(quán)利要求
游離形式或可藥用酸加成鹽形式的式(I A)、(I B)、(X A)、(X B)、(Y A)或(Y B)化合物其中R′表示且R″表示氫、羥基、C1 C7烷氧基、C1 C8 烷?；趸騌5R4N CO O ，其中R4和R5獨立地是C1 C7烷基或苯基，未取代或被選自C1 C7烷基、C1 C7烷氧基、鹵素和三氟甲基的取代基取代，并且其中R4另外地是氫；或者R4和R5一起表示C3 C6亞烷基。FPA00001142720600011.tif,FPA00001142720600012.tif
2.權(quán)利要求1的式(IΑ)、(I B)、(Χ A)、(X B)、(Y Α)或(Y B)化合物，其中R"表示氫。
3.權(quán)利要求1的化合物，選自 和或在每種情況下其可藥用酸加成鹽。
4.權(quán)利要求1的化合物，其為 或其可藥用酸加成鹽。
5.藥物組合物，包含權(quán)利要求1-4任一項的游離形式或可藥用酸加成鹽形式的化合物 以及至少一種可藥用載體或稀釋劑。
6.權(quán)利要求1-4任一項的化合物或其可藥用酸加成鹽在制備用于抑制二肽基肽酶-IV 的藥物中的用途；或者抑制二肽基肽酶-IV的方法，該方法包括對需要該治療的哺乳動物施用治療有效量的 權(quán)利要求1-4任一項的化合物或其可藥用酸加成鹽。
7.權(quán)利要求5的藥物組合物在制備用于抑制二肽基肽酶-IV的藥物中的用途；或者 抑制二肽基肽酶-IV的方法，該方法包括給需要該治療的哺乳動物施用治療有效量的權(quán)利要求5的藥物組合物。
8.權(quán)利要求6或權(quán)利要求7的用途或者權(quán)利要求6或權(quán)利要求7的方法，其中所述藥 物用于治療受二肽基肽酶-IV抑制介導(dǎo)的病癥。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述藥物用于治療非胰島素依賴型糖尿病；或者 權(quán)利要求8的方法，其中所治療的病癥是非胰島素依賴型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明涉及游離形式或可藥用酸加成鹽形式的式(I A)、(I B)、(XA)、(X B)、(Y A)或(Y B)化合物，其中R′表示(結(jié)構(gòu)式)，且R″表示氫、羥基、C1-C7烷氧基、C1-C8-烷?；趸騌5R4N-CO-O-，其中R4和R5獨立地是C1-C7烷基或苯基，未取代或被選自C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、鹵素和三氟甲基的取代基取代，并且其中R4另外地是氫；或者R4和R5一起表示C3-C6亞烷基。式(I A)、(I B)、(X A)、(X B)、(Y A)或(Y B)化合物抑制DPP-IV(二肽基肽酶-IV)活性。因此，它們被指示在抑制DPP-IV和治療受DPP-IV介導(dǎo)的病癥如非胰島素依賴型糖尿病、關(guān)節(jié)炎、肥胖、骨質(zhì)疏松癥和葡萄糖耐量降低的其它疾病中用作藥物。
文檔編號A61P3/10GK101918423SQ200880118155
公開日2010年12月15日 申請日期2008年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月30日
發(fā)明者M·基特爾曼, U·哈西佩 申請人:諾瓦提斯公司