專利名稱：：用于治療cmt和相關疾病的新治療方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及用于治療沙-馬-圖病(Charcot-Marie-Toothdisease)和相關疾病的組合物和方法。
背景技術：
：沙-馬-圖病(“CMT”)是一種遺傳性外周多發(fā)性孤兒神經(jīng)病。大約在2500人中有1人患病，這種疾病是外周神經(jīng)系統(tǒng)最常見的遺傳性疾病。它的發(fā)作典型情況下在生命的第一個或第二個十年中出現(xiàn)，盡管在嬰兒期也可以檢測到它。疾病過程是慢性的，具有逐漸的神經(jīng)肌肉變性。在伴隨有神經(jīng)痛和極度肌無力的病例中，疾病可造成殘廢。CMT是研究得最深入的遺傳病之一，在法國使用了大約30，000個病例。盡管大多數(shù)CMT患者帶有含有髓磷脂基因PMP22的17號染色體片段的重復(CMT1A形式)，但有兩打以上的基因與不同形式的CMT相關。因此，盡管起源是單基因的，但由于可能的調(diào)節(jié)基因，該疾病表現(xiàn)出臨床異質(zhì)性。CMT患者中突變的基因，簇集在緊密關聯(lián)的影響施旺細胞(Schwanncells)或神經(jīng)元的分化、或在外周神經(jīng)中改變這些細胞的相互作用的分子途徑周圍。PMP22是表達在外周神經(jīng)系統(tǒng)中基本上所有有髓纖維的致密部分中的髓磷脂的主要成分，主要由施旺細胞產(chǎn)生。在CMT患者中，在對于重復片段來說雜合的施旺細胞中也觀察到正常PMP22蛋白的中毒1.5倍的過表達(在某些罕見病例中，CMTlA樣表型也可能與PMP22蛋白中的結構突變相關)(Lupski等，1992；Suter等，1992；Roa等，1993；Thomas等，1997;Suter&Scherer，2003;Nave&Sereda，2007)。異常的PMP22基因劑量引起CMTlA樣表型的直接證據(jù)，由在具有PMP22蛋白過表達的嚙齒動物模型中進行的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒炋峁?Niemann等，1999；Perea等，2001；Robaglia-Schlupp等，2002；Meyer等，2006；Sereda&Nave，2006)。此外，使用孕酮受體特異性抑制劑奧那司酮(onapristone)(Sereda等，2003;MeyerzuHorste等，2007)和抗壞血酸(Passage等，2004)進行的治療性干預，在轉(zhuǎn)基因動物中降低了這種表達，緩解或減慢了疾病表型的發(fā)展?，F(xiàn)有的實驗數(shù)據(jù)表明，PMP22蛋白不僅是髓鞘的結構成分，而且作為重要的調(diào)控蛋白，影響了施旺細胞中的多種表型性狀。將蛋白的異常水平與它在突變的CMTlA神經(jīng)膠質(zhì)細胞中功能的改變相關聯(lián)的準確機制還未完全了解，但某些可能解釋它對施旺細胞生物學的有害效應的細胞機制正開始浮現(xiàn)。挖掘公用數(shù)據(jù)，描述CMTlA疾病的分子機制和病理表現(xiàn)，允許我們對幾個功能性細胞模塊——PMP22基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，PMP22蛋白的折疊/降解，施旺細胞的增殖和凋亡，細胞外基質(zhì)的沉積和重塑，免疫應答——作為CMT相關治療性干預的潛在合理的靶，按優(yōu)先順序進行排列。這些失調(diào)控的功能性模塊對沙-馬-圖病的病理表現(xiàn)的發(fā)生和發(fā)展的組合影響，為組合CMT療法的潛在效能提供了證明。在最初建立了CMT病理的動態(tài)模型后，對以功能性調(diào)控CMTlA疾病相關細胞途徑為目標的市銷一般藥物進行了篩選。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供用于治療CMT和相關疾病的新的治療方法。本發(fā)明還涉及用于調(diào)節(jié)PMP22在對象中的表達的組合物和方法。本發(fā)明人在對象中鑒定了各種不同的可以被調(diào)控以緩解CMT和相關疾病的途徑。本發(fā)明人還鑒定到幾種藥物，當組合或單獨使用時，可以有效地影響這些引起CMT和相關疾病的途徑，它們代表了治療這些疾病的新療法。因此，本發(fā)明提供了用于治療CMT疾病和相關疾病的新的組合物和方法。更具體來說，本發(fā)明的目標涉及化合物的組合在治療CMT或相關疾病(的藥物制造)中的應用，其中所述化合物選自GABA-B受體激動劑，毒蕈堿受體激動劑，留體激素受體拮抗劑，影響D-山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑或部分激動劑，甲狀腺激素信號傳導抑制劑，ERK(細胞外信號調(diào)控的激酶)激活劑和pAkt激酶抑制劑，COX抑制劑，及其任何組合?；衔锟梢允撬幬锘蚩贵w(或其片段或衍生物)，蛋白或肽。本發(fā)明的另一個目標涉及選自下列化合物的組合或其單個化合物在治療CMT或相關疾病(的藥物制造)中的應用化合物A:D-山梨糖醇(CAS50-70-4)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；化合物B:巴氯芬(CAS1134-47-0，和巴氯芬鹽酸鹽為CAS63701-56-4)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；化合物C毛果蕓香堿(CAS92_13_7，和毛果蕓香堿鹽酸鹽為CAS54-71-7)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；化合物D納曲酮(CAS16590-41-3，納曲酮鹽酸鹽為CAS16676-29-2)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；化合物E甲巰咪唑(CAS60-56-0)及其可能的鹽前體藥物和衍生物；化合物F米非司酮(CAS84371-65-3)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；孟魯司特(CAS158966-92-8)及其可能的鹽前體藥物和衍生物；酮洛芬(CAS22071-15-4，和酮洛芬鈉CAS57495-14-4)及其可能的鹽前體藥物和衍生物；化合物G。本發(fā)明的另一個目標涉及選自下列的化合物或其組合在治療CMT或相關疾病(的藥物制造)中的應用乙酰唑胺(CAS59-66-5，鈉鹽形式為CAS1424-27-7)及其可能的鹽和衍生物；氨魯米特(CAS125-84-8)及其可能的鹽和衍生物；氨曲南(CAS78110-38-0,氨曲南二鈉鹽為CAS80581-86-8)及其可能的鹽和衍生物；巴氯芬(CAS1134-47-0，巴氯芬鹽酸鹽為CAS63701-56-4)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；巴柳氮(CAS80573-04-2，150399-21-6(二鈉鹽形式)，213594-60-6(二鈉鹽形式)，和82101-18-6)及其可能的鹽和衍生物；比卡魯胺(CAS90357-06-5)及其可能的鹽和衍生物；溴隱亭(CAS25614-03-3，甲磺酸鹽形式為CAS22260-51-1)及其可能的鹽和衍生物；布美他尼(CAS28395-03-1)及其可能的鹽和衍生物；丁螺環(huán)酮(CAS36505-84-7，鹽酸鹽形式為CAS33386-08-2)及其可能的鹽和衍生物；環(huán)丙沙星(CAS85721-33-1，鹽酸鹽形式為CAS86393-32-0)及其可能的鹽和衍生物；可樂定(CAS4205-90-7，鹽酸鹽形式為CAS4205-91-8)及其可能的鹽和衍生物；環(huán)孢菌素A(CAS59865-13-3)及其可能的鹽和衍生物；雙硫侖(CAS97-77-8)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；依西美坦(CAS107868-30-4)及其可能的鹽和衍生物；非氨酯(CAS25451-15-4)及其可能的鹽和衍生物；非諾貝特(CAS49562-28-9)及其可能的鹽和衍生物；非那利得(CAS98319-26-7)及其可能的鹽和衍生物；氟嗎西尼(CAS78755-81-4)及其可能的鹽和衍生物；氟硝西泮(CAS1622-62-4)及其可能的鹽和衍生物；呋塞米(CAS54-31-9)及其可能的鹽和衍生物；加巴噴丁(CAS60142-96-3)及其可能的鹽和衍生物；加蘭他敏(CAS357-70-0，氫溴酸鹽形式為CAS1953-04-4)及其可能的鹽和衍生物；氟哌啶醇(CAS52-86-8)及其可能的鹽和衍生物；布洛芬(CAS15687_27_1，鈉鹽為CAS31121-93-4)及其可能的鹽和衍生物；異丙腎上腺素(CAS7683_59_2，鹽酸鹽形式為CAS51-30-9，CAS5984_95_2(異丙腎上腺素(_)_鹽酸鹽))及其可能的鹽和衍生物；L-肉毒堿(CAS541-15-1，鹽酸鹽形式為CAS6645-46-1)及其可能的鹽和衍生物；三碘甲狀腺素(T3)(CAS6893-02-3，鈉鹽形式為CAS55-06-1)及其可能的鹽和衍生物；氯沙坦(CAS114798-26-4，鉀鹽形式為CAS124750-99-8)及其可能的鹽和衍生物；洛沙平(CAS1977-10-2，琥珀酸鹽和鹽酸鹽形式分別為CAS27833-64-3和CAS54810-23-0)及其可能的鹽和衍生物；奧西那林(CAS586-06-1，硫酸鹽形式為CAS5874-97-5)及其可能的鹽和衍生物；間羥胺(CAS54-49-9，酒石酸氫鹽形式為CAS33402-03-8)及其可能的鹽和衍生物；甲福明(CAS657-24-9，鹽酸鹽形式為CAS1115-70-4)及其可能的鹽和衍生物；甲巰咪唑(CAS60-56-0)及其可能的鹽和衍生物；甲基麥角新堿(CAS113_42_8，對應的馬來酸鹽為CAS57432-61-8)及其可能的鹽和衍生物；美替拉酮(CAS54-36-4)及其可能的鹽和衍生物；美托洛爾(CAS37350-58-6,CAS51384-51-1和CAS56392-17-7(酒石酸鹽形式))及其可能的鹽和衍生物；米非司酮(CAS84371-65-3)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；納多洛爾(CAS42200-33-9)及其可能的鹽和衍生物；納洛酮(CAS465_65_6，二水鹽酸鹽形式為CAS51481-60-8)及其可能的鹽和衍生物；納曲酮(CAS16590-41-3，納曲酮鹽酸鹽為CAS16676-29-2)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；氟諾沙星(CAS70458-96-7)及其可能的鹽和衍生物；戊唑星(CAS359-83-1，戊唑星(+)形式為CAS7361-76-4，乳酸鹽形式為CAS17146-95-1，鹽酸鹽形式為CAS64024-15-3)及其可能的鹽和衍生物；酚芐明(CAS59-96-1，鹽酸鹽形式為CAS63-92-3)及其可能的鹽和衍生物；苯丁酸酯(CAS1716-12-7，對應于鈉鹽形式；CAS1821-12-1，對應于4-苯基丁酸)及其可能的鹽和衍生物；毛果蕓香堿(CAS92-13-7，毛果蕓香堿鹽酸鹽為CAS54-71-7)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；吡格列酮(CAS111025-46-8，鹽酸鹽形式為CAS112529-15-4)及其可能的鹽和衍生物；哌唑嗪(CAS19216-56-9，鹽酸鹽形式為CAS19237-84-4)及其可能的鹽和衍生物；雷洛昔芬(CAS84449-90-1，鹽酸鹽形式為CAS82640-04-8)及其可能的鹽和衍生物；利福平(CAS13292-46-1)及其可能的鹽和衍生物；辛伐他汀(CAS79902-63-9)及其可能的鹽和衍生物；D-山梨糖醇(CAS50-70-4)及其可能的鹽、前體藥物和衍生物；化合物螺內(nèi)酯(CAS52-01-7)及其可能的鹽和衍生物；他莫昔芬(CAS10540_29_1，檸檬酸鹽形式為CAS54965-24-1)及其可能的鹽和衍生物；曲洛司坦(CAS13647-35-3)及其可能的鹽和衍生物；丙戊酸(CAS99-66-1，鈉鹽和雙丙戊酸鈉形式分別為CAS1069-66-5和CAS76584-70-8)及其可能的鹽和衍生物；卡馬西平(CAS298_46_4，二水形式為CAS85756-57-6)及其可能的鹽和衍生物；酮洛芬(CAS22071_15_4，酮洛芬鈉為CAS57495-14-4)及其可能的鹽和衍生物；氟比洛芬(CAS5104-49-4,S和R對映異構體對應于CAS51543-39-6和CAS51543-40-9；鈉鹽形式對應于CAS56767-76-1)及其可能的鹽和衍生物；雙氯芬酸(CAS15307-86-5，鈉鹽形式為CAS15307-79-6；鉀鹽形式為CAS15307-81-0)及其可能的鹽和衍生物；美洛昔康(CAS71125-38-7)及其可能的鹽和衍生物；他克莫司(CAS104987-11-3，單水固體形式為CAS109581-93-3)及其可能的鹽和衍生物；地西泮(CAS439-14-5)及其可能的鹽和衍生物；度他雄胺(CAS164656-23-9)及其可能的鹽和衍生物；吲哚美辛(CAS53-86-1，兩種鈉鹽形式為CAS74252-25-8和7681-54-1)及其可能的鹽和衍生物；地諾前列酮(CAS363-24-6)及其可能的鹽和衍生物；卡巴可(CAS51-83-2，對應的膽堿碳酸酯為CAS462_58_8)及其可能的鹽和衍生物；雌二醇(β和α形式分別為CAS50-28-2和57-91-0)及其可能的鹽和衍生物；姜黃素(CAS458-37-7)及其可能的鹽和衍生物；鋰(CAS7439_93_2，無水碳酸鹽和檸檬酸鹽形式為CAS554-13-2和919-16-4；氯化物形式為CAS7447-41-8)及其可能的鹽和衍生物；雷帕霉素(CAS53123-88-9)及其可能的鹽和衍生物；甜菜堿(氯醛甜菜堿為CAS2218-68-0；CAS107-43-7,17146-86-0,590-46-5，590-47-6對應于甜菜堿，單水甜菜堿，鹽酸甜菜堿和單水甜菜堿形式)及其可能的鹽和衍生物；海藻糖(CAS4484-88-2)及其可能的鹽和衍生物；阿米洛利(CAS2016-88-8對應于無水鹽酸鹽；CAS2609-46-3對應于阿米洛利(在IPA中鑒定))及其可能的鹽和衍生物；沙丁胺醇(CAS18559-94-9，硫酸鹽形式為CAS51022-70-9)及其可能的鹽和衍生物。本發(fā)明的另一個目標涉及選自下列的至少兩種化合物或其鹽或前體藥物的組合在治療CMT或相關疾病(的藥物制造)中的應用D-山梨糖醇(化合物A)；巴氯芬(化合物B)；毛果蕓香堿(化合物C)；納曲酮(化合物D)；甲巰咪唑(化合物E)；米非司酮(化合物F)和酮洛芬(化合物G)。本發(fā)明的另一個目標涉及選自下列的化合物或其鹽、前體藥物或激動劑在治療CMT或相關疾病(的藥物制造)中的應用D-山梨糖醇(化合物A)，巴氯芬(化合物B)，毛果蕓香堿(化合物C)，納曲酮(化合物D)，甲巰咪唑(化合物E)，米非司酮(化合物F)和酮洛芬(化合物G)。本發(fā)明的另一個目標涉及選自下列至少兩種化合物或其鹽、前體藥物或激動劑的組合在治療CMT或相關疾病(的藥物制造)中的應用乙酰唑胺，氨魯米特，氨曲南，巴氯芬，巴柳氮，比卡魯胺，溴隱亭，布美他尼，丁螺環(huán)酮，環(huán)丙沙星，可樂定，環(huán)孢菌素A，雙硫倉，依西美坦，非氨酯，非諾貝特，非那利得，氟嗎西尼，氟硝西泮，呋塞米，加巴噴丁，加蘭他敏，氟哌啶醇，布洛芬，異丙腎上腺素，L-肉毒堿，三碘甲狀腺素(T3)，氯沙坦，洛沙平，奧西那林，間羥胺，甲福明，甲巰咪唑，甲基麥角新堿，美替拉酮，美托洛爾，米非司酮，孟魯司特，納多洛爾，納曲酮，納洛酮，氟諾沙星，戊唑星，酚芐明，苯丁酸酯，毛果蕓香堿，吡格列酮，哌唑嗪，雷洛昔芬，利福平，辛伐他汀，螺內(nèi)酯，他莫昔芬，曲洛司坦，丙戊酸，卡馬西平，酮洛芬，氟比洛芬，雙氯芬酸，美洛昔康，D-山梨糖醇，他克莫司，地西泮，度他雄胺，吲哚美辛，地諾前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黃素，鋰，雷帕霉素，甜菜堿，海藻糖，阿米洛利，沙丁胺醇。本發(fā)明的另一個目標涉及選自下列至少兩種化合物或其鹽、前體藥物或激動劑的組合在患有CMT或相關疾病的對象中降低PMP22表達(的藥物制造)中的應用D-山梨糖醇(化合物A)，巴氯芬(化合物B)，毛果蕓香堿(化合物C)，納曲酮(化合物D)，甲巰咪唑(化合物E)，米非司酮(化合物F)，酮洛芬(化合物G)。本發(fā)明的另一個目標涉及選自下列至少兩種化合物或其鹽、前體藥物或激動劑的組合在患有CMT或相關疾病的對象中降低PMP22表達(的藥物制造)中的應用乙酰唑胺，氨魯米特，氨曲南，巴氯芬巴柳氮，比卡魯胺，溴隱亭，布美他尼，丁螺環(huán)酮，環(huán)丙沙星，可樂定，環(huán)孢菌素A，雙硫侖，依西美坦，非氨酯，非諾貝特，非那利得，氟嗎西尼，氟硝西泮，呋塞米，加巴噴丁，加蘭他敏，氟哌啶醇，布洛芬，異丙腎上腺素，L-肉毒堿，三碘甲狀腺素(T3)，氯沙坦，洛沙平，奧西那林，間羥胺，甲福明，甲巰咪唑，甲基麥角新堿，美替拉酮，美托洛爾，米非司酮，孟魯司特，納多洛爾，納曲酮，納洛酮，氟諾沙星，戊唑星，酚芐明，苯丁酸酯，毛果蕓香堿，吡格列酮，哌唑嗪，雷洛昔芬，利福平，辛伐他汀，螺內(nèi)酯，他莫昔芬，曲洛司坦，丙戊酸，卡馬西平，酮洛芬，氟比洛芬，雙氯芬酸，美洛昔康，D-山梨糖醇，他克莫司，地西泮，度他雄胺，吲哚美辛，地諾前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黃素，鋰，雷帕霉素，甜菜堿，海藻糖，阿米洛利，沙丁胺醇。本發(fā)明的另一個目標是藥物組合物，含有選自D-山梨糖醇，巴氯芬，毛果蕓香堿，納曲酮，甲巰咪唑，米非司酮和酮洛芬的至少兩種化合物或其鹽或前體藥物的組合，以及藥學上適當?shù)馁x形劑。在優(yōu)選實施方案中，上述藥物組合使用以提供最有效的效果。就此而言，本發(fā)明的另一個目標在于藥物組合在治療CMT或相關疾病中的應用，其中所述組合選自-留體激素受體拮抗劑和選自下列的化合物毒蕈堿受體激動劑，GABA-B受體激動劑，ERK激活劑，pAkt激酶抑制劑，影響甲狀腺激素信號傳導的藥物；影響D-山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑，COX抑制劑；-毒蕈堿受體激動劑和選自下列的化合物=GABA-B受體激動劑，ERK激活劑，pAkt激酶抑制劑，影響甲狀腺激素信號傳導的藥物；影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑，Cox抑制劑；-GABA-B受體激動劑和選自下列的化合物ERK激活劑，pAkt激酶抑制劑，影響甲狀腺激素信號傳導的藥物；影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑，Cox抑制劑；-ERK激活劑和選自下列的化合物pAkt激酶抑制劑，影響甲狀腺激素信號傳導的藥物；影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑，Cox抑制劑；-pAkt激酶抑制劑和影響甲狀腺激素信號傳導的藥物；選自下列的化合物影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑，Cox抑制劑；-影響甲狀腺激素信號傳導的藥物；和影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物和阿片樣受體拮抗劑或Cox抑制劑；-影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物和阿片樣受體拮抗劑或Cox抑制劑；-阿片樣受體拮抗劑和Cox抑制劑。在具體情況下，本發(fā)明涉及在上述化合物或組合物或組合在治療CMT中的應用。本發(fā)明還提供了用于治療CMT或相關疾病、特別是CMT的方法，包括向需要的對象施用有效量的上面公開的任何化合物或化合物組合或組合物。優(yōu)選的方法包括施用選自化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F和化合物G的至少兩種化合物或其鹽或前體藥物的組合。就此而言，本發(fā)明的具體目標是在對象中治療CMTla的方法，包括向?qū)ο笫┯糜行Я康娜缟纤_的化合物或化合物組合。任何本文公開的各種治療應用或方法，還可以包含診斷患者為患有CMT或相關疾病、特別是CMT1A，或鑒定個體為處于發(fā)生CMT或相關疾病、特別是CMTlA的風險的任選步馬聚ο就此而言，本發(fā)明的另一個目標是治療CMT、特別是CMTla的方法，方法包括(1)評估對象是否患有CMT、特別是CMTla，以及(2)使用有效量的上述化合物的組合治療患有CMT、特別是CMTla的對象。確定對象是否患有CMT、特別是CMTla，可以通過本
技術領域：
中本身已知的各種測試，例如DNA分析測定來進行。這樣的診斷可以通過，例如，評價在治療之前和期間患者(樣品)中的PMP22表達或功能來作出。本發(fā)明的另一個目標是包含PMP22或PMP22片段作為患者接種的免疫原的組合物。本發(fā)明的另一個目標是包含抗PMP22抗體或該抗體的片段或衍生物的疫苗。本發(fā)明可用于在任何哺乳動物對象、特別是人類對象中治療CMT或相關疾病，更優(yōu)選治療CMTla。圖1、選擇的藥物對PMP22mRNA表達水平的影響。圖2、選擇的藥物對PMP22mRNA表達水平的影響。圖3、選擇的藥物在不同劑量下對PMP22mRNA表達水平的影響。圖4、選擇的藥物對PMP22蛋白表達水平的影響。圖5、毛果蕓香堿和納曲酮的組合對PMP22蛋白表達水平的影響。圖6、以趨勢形式表現(xiàn)的在整個桿試驗(Bar-test)治療研究過程中雌性大鼠的運動評估結果。A甲巰咪唑；B:毛果蕓香堿。圖7、治療16周后在該試驗中記錄的平均桿試驗表現(xiàn)。A甲巰咪唑；B毛果蕓香堿。圖8、在20周期間，用藥物治療的CMT大鼠中靈敏性神經(jīng)電位幅度的電生理評估。A甲巰咪唑；B毛果蕓香堿。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了用于治療CMT或相關疾病的新的治療方法。本發(fā)明公開了允許對這些疾病進行有效糾正的藥物或藥物組合的新應用，并可用于任何哺乳動物對象。在本發(fā)明的背景內(nèi)，術語“CMT相關疾病”是指其他與髓磷脂蛋白、包括PMP22的異常表達相關的疾病。這些疾病的多樣性是由于PMP22功能的多樣性所致。首先，PMP22是在外周神經(jīng)系統(tǒng)中基本上所有有髓纖維的致密部分中表達的髓磷脂的主要成分。PMP22蛋白與另一種結構髓磷脂蛋白PO相互作用，因此，PMP22/P0蛋白比例的變化可能影響髓鞘的緊密(Vallat等，1996；D，Urso等，1999)。正如通過體外研究所證實的，PMP22蛋白也以P因子依賴性方式參與細胞伸展的調(diào)控，因此可以影響軸突入鞘(Brancolini等，1999)。此外，PMP22與α6β4整合蛋白形成復合物，可以介導施旺細胞與細胞外基質(zhì)的相互作用(Amici等，2006；Amici等，2007)。此外，ΡΜΡ22蛋白水平增加可以改變Arf6調(diào)控的質(zhì)膜內(nèi)體再循環(huán)途徑，導致PMP22在晚期內(nèi)體中的積累(Chies等，2003)。也已證明，過表達的PMP22蛋白擾亂了細胞內(nèi)蛋白分選，導致施旺細胞中蛋白降解機制的過載(Notterpek等，1997；Tobler等，2002；Fortun等，2003；Fortun等，2006；Fortun等，2007；Khajavi等，2007)。最后，PMP22直接參與細胞增殖和程序化細胞死亡的控制(Sancho等，2001；Atanasoski等，2002)，突變的PMP22蛋白顯示出引起軸突離子通道的深度重新組織和異常表達(Ulzheimer等，2004；Devaux&Scherer，2005)。PMP22也在人類腦的某些部分中表達(OhsawaY等，2006)。有證據(jù)顯示它牽涉情緒障礙(Le-NiculescuH等，2008)和精神分裂癥(DrachevaS等，2006)。PMP22在建立腦/血液屏障中發(fā)揮作用(RouxKJ等，2004)，腦/血液屏障在多發(fā)性硬化癥和神經(jīng)變性疾病中通常是有缺陷的。因此，術語“CMT相關疾病”是指阿茨海默氏(Alzheimer’s)病(AD)，AD型老年癡呆癥(SDAT)，帕金森氏(Parkinson's)癥，路易體(Lewisbody)癡呆，血管性癡呆，孤獨癥，輕度認知障礙(MCI)，增齡性記憶障礙(AAMI)以及與衰老相關的問題，腦炎后帕金森氏癥，精神分裂癥，抑郁癥，雙相障礙和其他情緒障礙，亨廷頓氏(Huntington’s)病，運動神經(jīng)元疾病包括肌萎縮側索硬化(ALS)，多發(fā)性硬化癥，特發(fā)性神經(jīng)病，糖尿病性神經(jīng)病，中毒性神經(jīng)病包括由藥物治療誘導的神經(jīng)病，由HIV、輻射、重金屬和維生素缺乏狀態(tài)引起的神經(jīng)病，基于朊病毒的神經(jīng)變性，包括克-雅(Creutzfeld-Jakob)病(CJD)，牛海綿狀腦病(BSE)，GSS，F(xiàn)FI，庫魯(Kuru)病和Alper，s綜合征。在優(yōu)選實施方案中，CMT相關疾病是指神經(jīng)病，例如脫髓鞘性神經(jīng)病，包括HNPP(遺傳性壓力易感性神經(jīng)病)，CMT1B，CMT1C,CMTID,CMT1X,CMT2A,CMT2B,CMT2D,CMT2E，CMT2-P0，嚴重脫髓鞘神經(jīng)病DSS(德熱里納-索塔斯(Dejerine-Sottas)綜合征)，CHN(先天性髓鞘發(fā)育不良神經(jīng)病)，CMT4A,CMT4B1，CMT4B2，CMT4D,CMT4F,CMT4,AR-CMT2A,HSNl。在本文中使用時，疾病的“治療”包括治療、防止、預防、阻滯或減輕由疾病引起的疼痛。術語治療特別包括控制疾病的發(fā)展和相關癥狀。此外，術語化合物是指在本申請中具體命名的化學化合物，以及任何帶有其可接受的鹽、水合物、酯、醚、異構體、消旋體、結合物和前體藥物的藥物組合物。術語抗體是指單克隆或多克隆抗體。術語片段非限制性地指示免疫球蛋白鏈，F(xiàn)ab或Fab’片段，或CDR區(qū)域?？贵w的衍生物包括單鏈抗體，人源化抗體，嵌合抗體等?？贵w片段或衍生物應保持抗體的表位特異性。此外，術語“組合”是指將至少兩種藥物共同施用于對象以引起生物學效應的處理方法。在組合療法中，所述至少兩種藥物可以一起或分開、同時或相繼給藥。此外，所述至少兩種藥物也可以通過不同的途徑或方案給藥。本發(fā)明顯示，外周髓磷脂蛋白的功能性可以受到影響毒蕈堿受體、GABA-B受體、甾體激素受體、阿片樣受體、山梨糖醇信號傳導途徑，或激活ERK(細胞外信號調(diào)控的激酶)、COX抑制劑、甲狀腺激素信號傳導抑制劑，和/或抑制pAkt激酶的藥物的調(diào)節(jié)，從而允許設計CMT及相關疾病的新的治療方法。此外，本發(fā)明公開了以組合或獨自調(diào)節(jié)上述途徑、并可用于治療所述疾病的具體藥物的鑒定和活性。更具體來說，本發(fā)明顯示，化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F和化合物G，或以組合或獨自、優(yōu)選組合，可用于治療CMT或相關疾病。D-山梨糖醇(化合物A)該藥物，C6H14O6，是膀胱沖洗、輕瀉和高滲類別的成員。它已被批準用于治療i)膀胱(成人)的沖洗，用于在前列腺外科手術或其他尿道外科手術過程中防止感染，)中毒(成人)，當與活性炭混合時，以及iii)便秘(成人)，用作高滲輕瀉劑它通過將流體保留在結腸中起作用，幫助增加腸內(nèi)的肌肉運動在CMTIA疾病中的目標代謝途徑細胞外信號調(diào)控的激酶(ERK)和Akt途徑以相反的方式控制PMP22基因的表達PMP22基因的轉(zhuǎn)錄通過活化的PI3K/pAkt/GSK-3β信號傳導途徑而增加，并受到Ras/MEK/ERK激酶級聯(lián)的抑制?；衔顰能夠活化ERK/JNK/p38激酶，并可能通過調(diào)節(jié)ERK激酶活性降低PMP22基因的表達(Bogoyevitch等，1995；Galvez等，2003)。由PMP22基因過表達引起的錯誤折疊的PMP22蛋白聚集物，是CMTlA施旺細胞的整體表型特征，并可能影響細胞內(nèi)膜的動力學、蛋白分類和降解。因此，D-山梨糖醇作為具有分子伴侶活性的細胞滲壓劑，可以通過增加細胞內(nèi)參與蛋白折疊和清除的機制的能力，更加抑制過表達的PMP22基因的有害效應(Fortun等，2005；Fortun等，2006；Welch&Brown,1996)?；衔顰還可以通過刺激與化合物A特異性結合的2型毒蕈堿受體來執(zhí)行增強的效應。這導致PMP22表達的降低。最后，化合物A通過反饋抑制醛糖還原酶代謝途徑來抑制凋亡和氧化應激。在醛糖還原酶代謝途徑中產(chǎn)生D-山梨糖醇。弱化醛糖還原酶基因在大鼠細胞中抑制了凋亡和氧化應激(NambuH等，2008)。巴氯芬(化合物B)該藥物，C10H12ClNO2,已被批準用于緩解由多發(fā)性硬化癥引起的可逆性痙攣狀態(tài)的體癥和癥狀，特別是用于減輕屈肌痙攣和伴隨的疼痛，陣攣和肌肉強直，以及用于在對口服療法無響應或不能耐受的患者中，鞘內(nèi)治療脊髓源性的嚴重痙攣狀態(tài)?；衔顱是GABA-B受體的直接激活劑。其作用的準確機制還未完全了解。它能夠在脊椎水平上抑制單突觸和多突觸反射，這可能是通過傳入末端的超極化，盡管在脊椎上位點處也可能發(fā)生作用并有助于其臨床效應。在CMTIA疾病中的目標代謝途徑已顯示，GABA(B)受體通過GPCR相互作用支架蛋白(GISP)活化ERKV2激酶，因此能夠?qū)I3K-Akt-GSK-3β信號傳導途徑和參與施旺細胞中ΡΜΡ22基因的正轉(zhuǎn)錄調(diào)控的甾體激素受體的活性進行負調(diào)控(Kantamneni等，2007；Lange等，2007；Miller等，2007；Tu等，2007)。此外，GABAB受體能夠以發(fā)育背景依賴性的方式，降低GABAA受體的活性，后者也被識別為PMP22表達的正調(diào)控劑(Obrietan&vandenPol，1998)。毛果蕓香堿(化合物C)該藥物，C11H16N2O2，已被批準用于治療i)由頭頸部癌癥的放射療法引起的唾液腺機能減退導致的口干的癥狀；以及ii)在患有舍格倫氏(Sjogren's)綜合征的患者中治療口干的癥狀。作為毒蕈堿受體激動劑，它引起平滑肌纖維收縮(消化道，眼，支氣管)，刺激汗液、唾液、支氣管和胃分泌。此外，它表現(xiàn)出復雜的心血管作用，刺激擬副交感神經(jīng)(血管舒張)神經(jīng)節(jié)興奮(excitoganglionary)途徑。在CMTIA疾病中的目標代謝途徑我們證明了毛果蕓香堿，一種毒蕈堿受體激動劑，在體外降低了施旺細胞中PMP22蛋白的表達。毒蕈堿受體能夠在不同的細胞背景中調(diào)節(jié)Akt和Erk途徑二者，因此能夠參與這兩種信號傳導途徑的精細開關控制，分別參與PMP22蛋白的正和負轉(zhuǎn)錄調(diào)控。我們提出，通過毛果蕓香堿刺激毒蕈堿受體——可能是通過分子機制的復雜設置——導致細胞內(nèi)Erk/Akt活性的平衡移向更顯著的Erk信號傳導，抑制了PMP22基因的表達。例如，毒蕈堿受體能夠通過促進IRS-I酪氨酸去磷酸化作用，選擇性阻斷由pAkt/GSK-3i3功能性模塊介導的IGF-I引起的信號傳導，其中去磷酸化作用將IRS-I與被刺激的IGF-I受體解偶聯(lián)(Batty等，2004；Stirnweiss等，2006)。納曲酮(化合物D)該藥物，C20H23NO4,已被批準用于治療乙醇依賴性和用于阻斷外源給藥的阿片樣物質(zhì)的效應。該藥物與阿片樣μ受體拮抗性結合，從而阻止了常規(guī)的含鴉片藥物(海洛因，嗎啡)結合和誘導阿片樣神經(jīng)反應。它可逆地顯著弱化或完全阻斷了靜脈內(nèi)給藥的阿片類物質(zhì)的主體性效應。當在長期基礎上與嗎啡共同給藥時，它阻斷了對嗎啡、海洛因和其他阿片樣物質(zhì)放入生理依賴性。在對阿片樣物質(zhì)生理依賴的對象中，它將使戒斷癥狀加速下降。在酗酒中的作用機制還未被了解；但是，臨床前數(shù)據(jù)表明內(nèi)源阿片樣系統(tǒng)參與其中。它與這樣的受體競爭性結合，可以阻斷內(nèi)源性阿片樣物質(zhì)的效應。在CMTIA疾病中的目標代謝途徑細胞外信號調(diào)控的激酶(ERK)和Akt途徑以相反的方式控制ΡΜΡ22基因的表達ΡΜΡ22基因的轉(zhuǎn)錄通過活化PI3K/pAkt/GSK-3β信號傳導途徑而升高，并受到Ras/MEK/ERK激酶級聯(lián)的抑制?；衔顲通過負調(diào)控σ阿片樣受體，可以阻斷pAkt激酶的活性，因此降低了PMP22基因的轉(zhuǎn)錄。盡管表達水平低，但施旺細胞表達所有類型的阿片樣物質(zhì)和ο受體以及它們的天然配體強啡肽原和腦啡肽原，該觀察結果表明自分泌阿片樣物質(zhì)信號傳導可能在這些神經(jīng)膠質(zhì)細胞的生物學中發(fā)揮重要作用。通過阿片樣受體的信號傳導是極其復雜的，并且在急性和慢性激動劑應用模式之間變化。我們建議，納曲酮可能弱化PAkt激酶的活化并下調(diào)Erk激酶介導的信號傳導，正如對某些神經(jīng)元細胞所證明的，是由急性嗎啡使用所引起的(Muller&Unterwald，2004)。細胞外信號調(diào)控的激酶(ERK)和Akt途徑以相反的方式控制PMP22基因的表達PMP22基因的轉(zhuǎn)錄通過活化的PI3K/pAkt/GSK-3β信號傳導途徑而升高，并受到Ras/MEK/ERK激酶級聯(lián)的抑制?；衔顲通過負調(diào)控σ阿片樣受體，可以阻斷pAkt激酶的活性并增加通過Erk激酶的信號傳導，因此降低了PMP22基因的轉(zhuǎn)錄。甲巰咪嗶(化合物E)該藥物已被批準用于治療甲狀腺機能亢進、甲狀腺腫、格雷夫斯(Graves)病和牛皮癬。甲巰咪唑結合并阻斷甲狀腺過氧化物酶的活性，該酶是甲狀腺激素合成中的限速酶，將碘化物轉(zhuǎn)變成碘。因此，甲巰咪唑有效抑制新的甲狀腺激素的產(chǎn)生。在CMTIA疾病中的目標代謝途徑盡管施旺細胞在完整的成年坐骨神經(jīng)中不表達甲狀腺激素受體，但在受損的外周神經(jīng)中破壞正常的軸突-神經(jīng)膠質(zhì)相互作用，這快速誘導了這些受體在施旺細胞中的表達，表明甲狀腺激素信號傳導對于PNS損傷的可誘導修復的重要性(Walter，1993)。該意見得到了下述觀察的進一步支持，即受傷的坐骨神經(jīng)不僅表達甲狀腺受體，而且表達參與甲狀腺激素代謝的酶——將甲狀腺素(T4)轉(zhuǎn)化成三碘甲狀腺氨酸(T3)的2型脫碘酶，以及負責甲狀腺激素降解的3型脫碘酶(Walter等，1995;Li等，2001)。因為PMP22基因在施旺細胞中的過表達，在CMT患者的損傷的外周神經(jīng)中破壞了正常的軸突-神經(jīng)膠質(zhì)相互作用，因此甲狀腺受體信號傳導在沙-馬-圖病的發(fā)展中也發(fā)揮重要作用。在施旺細胞中，三碘甲狀腺氨酸T3是EGR2表達的強激活劑；因為EGR2轉(zhuǎn)錄因子被識別為施旺細胞中成髓鞘(promyelinating)轉(zhuǎn)錄程序的主要正調(diào)控劑，通過甲狀腺激素受體進行的信號傳導可能影響PMP22基因的轉(zhuǎn)錄(Mercier等，2001)。我們推測，甲巰咪唑在受損的施旺細胞中可能通過弱化甲狀腺激素信號傳導而降低PMP22基因的轉(zhuǎn)錄。米非司酮(化合物F)該藥物C29H35NO2,已被批準用于藥物終止49天內(nèi)的宮內(nèi)妊娠?；衔颋的抗促孕活性源自于在孕酮受體位點上與孕酮的競爭性相互作用?；谠趲追N動物種類(小鼠，大鼠，兔和猴)中使用不同的口服劑量的研究，該化合物抑制內(nèi)源或外源孕酮的活性。在CMTIA疾病中的目標代謝途徑化合物F是孕酮和糖皮質(zhì)激素受體的拮抗劑，是PMP22轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控因子。盡管化合物F被開發(fā)用作孕酮受體拮抗劑，但它也被識別為糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑；此外，它也顯示了弱的抗雄激素活性，并且不與雌激素受體或鹽皮質(zhì)激素受體結合。PMP22蛋白的轉(zhuǎn)錄受到施旺細胞中表達的幾種核受體、包括留體激素受體的正調(diào)控(Robert等，2001；Schumacher等，2001)。我們建議，米非司酮這種同時降低孕酮和糖皮質(zhì)激素受體二者的活性的非特異性拮抗劑，可能是PMP22轉(zhuǎn)錄的更有力的負調(diào)節(jié)劑，因此是比以前試驗的孕酮受體特異性拮抗劑更有前途的用于開發(fā)CMTlA相關藥物的候選物，而孕酮受體特異性拮抗劑已被證明具有相當邊緣性的治療效果，特別是在長期治療模式中(Sereda等，2003;MeyerzuHorste等，2007)；該結論也得到了最近公布的數(shù)據(jù)的支持，這些數(shù)據(jù)表明，在施旺細胞中，糖皮質(zhì)激素受體的表達比孕酮受體的表達強至少50倍(Groyer等，2006)。酮洛芬(化合物G)酮洛芬已被批準用于治療類風濕性關節(jié)炎和骨關節(jié)炎?；衔颎是非甾類抗炎性藥物，阻斷環(huán)加氧酶-I(COX-I)和環(huán)加氧酶-2(C0X-2)二者的活性，并且由于這種效應，抑制了前列腺素和白三烯的合成。在CMTIA疾病中的目標代謝途徑以前已經(jīng)證明，施旺細胞表達幾種類型的功能性前列腺素EP，前列環(huán)素IP，血栓烷，半胱氨酰白三烯和白三烯B4受體，具有可誘導的C0X-2活性，能夠產(chǎn)生前列腺素E2，血栓烷A2和白三烯LTC4(Constable等，1999；Muja等，2001；Woodhams等，2007)。前列腺素通過它們同族的GPCR受體，能夠增加Akt信號傳導途徑的活性，這促進了髓磷脂相關蛋白、包括PMP22的表達。例如，最近的發(fā)現(xiàn)表明，PGE2前列腺素密切參與了聯(lián)蛋白的代謝，這種蛋白在施旺細胞中是PAkt信號傳導的下游效應子和成髓鞘轉(zhuǎn)錄程序的激活劑(Ogata等，2004)。已經(jīng)證實，在EP受體被PGE2活化后，Gαs亞基與Axin/GSK-3β復合物結合，降低了GSK-3i3介導的磷酸化并降解β-聯(lián)蛋白。同時，PGE2與EP受體的結合引起了Gi3γ亞基的釋放，這通過磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)直接刺激了Akt蛋白(Castellone等，2006)。因此，cox抑制劑酮洛芬(化合物G)能夠通過施旺細胞中的前列腺素受體抑制自分泌信號傳導，增強了聯(lián)蛋白活性，從而降低了ΡΜΡ22基因的轉(zhuǎn)錄。此外，本發(fā)明涉及組合地或單獨地使用下列化合物來治療CMT或相關疾病乙酰唑胺，氨魯米特，氨曲南，巴氯芬巴柳氮，比卡魯胺，溴隱亭，布美他尼，丁螺環(huán)酮，環(huán)丙沙星，可樂定，環(huán)孢菌素Α，雙硫侖，依西美坦，非氨酯，非諾貝特，非那利得，氟嗎西尼，氟硝西泮，呋塞米，加巴噴丁，加蘭他敏，氟哌啶醇，布洛芬，異丙腎上腺素，L-肉毒堿，三碘甲狀腺素(Τ3)，氯沙坦，洛沙平，奧西那林，間羥胺，甲福明，甲巰咪唑，甲基麥角新堿，美替拉酮，美托洛爾，米非司酮，孟魯司特，納多洛爾，納曲酮，納洛酮，氟諾沙星，戊唑星，酚芐明，苯丁酸酯，毛果蕓香堿，吡格列酮，哌唑嗪，雷洛昔芬，利福平，辛伐他汀，螺內(nèi)酯，他莫昔芬，曲洛司坦，丙戊酸，卡馬西平，酮洛芬，氟比洛芬，雙氯芬酸，美洛昔康，D-山梨糖醇，他克莫司，地西泮，度他雄胺，吲哚美辛，地諾前列酮，卡巴可，雌二醇，姜黃素，鋰，雷帕霉素，甜菜堿，海藻糖，阿米洛利，沙丁胺醇。正如上面討論的，本發(fā)明還顯示了特定細胞途徑可以被調(diào)節(jié)，以有效地治療CMT或相關疾病。更具體來說，本發(fā)明顯示，ΡΜΡ22包括其表達、折疊或運輸?shù)墓δ苄裕蛲庵芩枇字鞍椎墓δ苄?，可以受到影響毒蕈堿受體、GABA-B受體、甾體激素受體、阿片樣受體、山梨糖醇信號傳導途徑、甲狀腺激素信號傳導途徑，或激活ERK(細胞外信號調(diào)控的激酶)或抑制pAkt激酶的藥物，和/或COX抑制劑的調(diào)節(jié)，從而允許設計CMT及相關疾病的新的治療途徑。這些途徑可以被獨立地或組合地調(diào)節(jié)，以提供最好的可能治療效果?？偟膩碚f，提出了使PMP22基因表達正常的藥物組合類型來治療性治療CMT或相關疾病的(I)-影響牽涉PMP22基因及其蛋白功能的相同細胞途徑的藥物組合，(II)-調(diào)節(jié)不同信號傳導途徑的藥物組合，這些途徑匯集到PMP22基因及其蛋白的功能上(III)-調(diào)節(jié)不同信號傳導途徑的藥物組合，這些途徑控制了PMP22基因及其蛋白產(chǎn)物的功能。這些組合對PMP22基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生了附加或協(xié)同效應，因此將允許顯著降低所選藥物的有效治療劑量，并最小化它們不想要的副作用。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的藥物組合選自-留體激素受體拮抗劑和選自下述的化合物毒蕈堿受體激動劑，GABA-B受體激動劑，ERK激活劑，pAkt激酶抑制劑，抑制甲狀腺激素信號傳導的藥物，影響D-山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑，COX抑制劑；-毒蕈堿受體激動劑和選自下述的化合物=GABA-B受體激動劑，ERK激活劑，pAkt激酶抑制劑，抑制甲狀腺激素信號傳導的藥物，影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑，COX抑制劑；-GABA-B受體激動劑和選自下述的化合物ERK激活劑，pAkt激酶抑制劑，抑制甲狀腺激素信號傳導的藥物，影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑和COX抑制劑；-ERK激活劑和選自下述的化合物pAkt激酶抑制劑，抑制甲狀腺激素信號傳導的藥物，影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑和COX；-pAkt激酶抑制劑和選自下述的化合物抑制甲狀腺激素信號傳導的藥物，影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物，阿片樣受體拮抗劑和COX抑制劑；-抑制甲狀腺激素信號傳導的藥物和選自下述的化合物影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物和阿片樣受體拮抗劑或COX抑制劑；_影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物和選自阿片樣受體拮抗劑或COX抑制劑的化合物；-阿片樣受體拮抗劑和COX抑制劑。藥物組合的優(yōu)選例子選自-留體激素受體拮抗劑和毒蕈堿受體激動劑；-留體激素受體拮抗劑和GABA-B受體激動劑；-留體激素受體拮抗劑和ERK激活劑；-留體激素受體拮抗劑和pAkt激酶抑制劑；-留體激素受體拮抗劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑；-留體激素受體拮抗劑和COX抑制劑；-毒蕈堿受體激動劑和GABA-B受體激動劑；-毒蕈堿受體激動劑和ERK激活劑；-毒蕈堿受體激動劑和pAkt激酶抑制劑；_毒蕈堿受體激動劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑；-毒蕈堿受體激動劑和COX抑制劑；-GABA-B受體激動劑和ERK激活劑；-GABA-B受體激動劑和pAkt激酶抑制劑；-GABA-B受體激動劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑；-GABA-B受體激動劑和COX抑制劑；或-ERK激活劑和pAkt激酶抑制劑；-ERK激活劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑；-ERK激活劑和COX抑制劑；-或甲狀腺激素信號傳導抑制劑和COX抑制劑。在具體實施方案中，留體激素受體拮抗劑是化合物F，毒蕈堿受體激動劑是化合物A或化合物C，GABA-B受體激動劑是化合物B或化合物E，pAkt激酶抑制劑是化合物D，ERK激活劑是化合物A。本發(fā)明的具體實施方案在于治療CMT或相關疾病的組合療法，其中所述組合療法包含化合物A和至少第二種選自下列的化合物留體激素受體拮抗劑、毒蕈堿受體激動劑、GABA-B受體激動劑、ERK激活劑、pAkt激酶抑制劑、阿片樣受體拮抗劑、COX抑制劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑。本發(fā)明的具體實施方案在于治療CMT或相關疾病的組合療法，其中所述組合療法包含化合物B和至少第二種選自下列的化合物留體激素受體拮抗劑、毒蕈堿受體激動劑、ERK激活劑、pAkt激酶抑制劑、影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物、阿片樣受體拮抗劑、COX抑制劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑。本發(fā)明的具體實施方案在于治療CMT或相關疾病的組合療法，其中所述組合療法包含化合物C和至少第二種選自下列的化合物留體激素受體拮抗劑、GABA-B受體激動劑、ERK激活劑、pAkt激酶抑制劑、影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物、阿片樣受體拮抗劑、COX抑制劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑。本發(fā)明的具體實施方案在于治療CMT或相關疾病的組合療法，其中所述組合療法包含化合物D和至少第二種選自下列的化合物留體激素受體拮抗劑、毒蕈堿受體激動劑、GABA-B受體激動劑、影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物、ERK激活劑、COX抑制劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑。本發(fā)明的具體實施方案在于治療CMT或相關疾病的組合療法，其中所述組合療法包含化合物E和至少第二種選自下列的化合物留體激素受體拮抗劑、毒蕈堿受體激動劑、影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物、ERK激活劑、pAkt激酶抑制劑、阿片樣受體拮抗劑、COX抑制劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑。本發(fā)明的具體實施方案在于治療CMT或相關疾病的組合療法，其中所述組合療法包含化合物F和至少第二種選自下列的化合物毒蕈堿受體激動劑、GABA-B受體激動劑、ERK激活劑、pAkt激酶抑制劑、影響山梨糖醇信號傳導途徑的藥物、阿片樣受體拮抗劑、COX抑制劑和甲狀腺激素信號傳導抑制劑。藥物組合的具體和優(yōu)選的例子，作為活性物質(zhì)至少包括(I)化合物F和化合物E(II)化合物C和化合物B(III)化合物F和化合物C化合物F和化合物B化合物F和化合物A化合物F和化合物D化合物C和化合物A化合物C和化合物D化合物B和化合物A化合物B和化合物D化合物A和化合物D化合物G和化合物D本發(fā)明的療法可以作為藥物組合或單獨地和/或與任何其他療法結合而進行。它可以在家、醫(yī)生辦公室、診所、醫(yī)院門診部或醫(yī)院提供，以便醫(yī)生可以密切觀察療法的效果，并作出任何需要的調(diào)整。療法的持續(xù)時間依賴于所治療疾病的階段，患者的年齡和狀況，以及患者對治療的響應如何。此外，發(fā)生其它神經(jīng)病性疾病的風險較大的人(例如對例如糖尿病具有遺傳易感性或患有糖尿病的人，或正在進行腫瘤病癥治療的人等)，可以接受預防性治療，以緩解或延遲最終的神經(jīng)病性響應。組合中每種成分的給藥劑量、頻率和方式可以獨立地進行控制。例如，一種藥物可以口服給藥，而第二種藥物可以肌肉內(nèi)給藥。組合療法可以包括休息期的斷續(xù)周期進行，以便患者的身體有機會從任何尚未預見到的副作用中恢復。藥物也可以配制到一起，以便一次給藥投送這兩種藥物。藥物組合物的制劑組合中每種藥物的給藥，可以通過任何適合的方式進行，使得與其他成分組合的藥物的濃度，在到達外周神經(jīng)后，能夠校正PMP22表達升高產(chǎn)生的效應。盡管對于組合中的活性成分來說作為純的化學物質(zhì)給藥是可能的，但優(yōu)選將它們作為藥物組合物提供，在本文中也稱為藥物制劑?？赡艿慕M合物包括適合于口服、直腸、表面(包括透皮、頰和舌下)或腸胃外(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)和真皮內(nèi))給藥的組合物。更通常情況下，這些藥物制劑以含有多個劑量單位的“患者包”的形式，或其他用于將不同治療時期內(nèi)使用的計量單位劑量放置在單個包裝、通常為泡殼包裝中給藥的方式，開給患者?；颊甙c藥劑師從大包裝藥物供應品中分出患者的藥物供應品的傳統(tǒng)處方藥相比，其優(yōu)點在于患者總是能夠得到患者包中包含的包裝說明書(packageinsert)，它在傳統(tǒng)處方藥中一般是沒有的。包含包裝說明書已被顯示出能夠提高患者對醫(yī)生指令的順從性。進而，本發(fā)明還包括本文前述的藥物制劑與適合用于所述制劑的包裝材料的組合。在這樣的患者包中，用于組合治療的制劑的預期用法，可以從說明書、設備(facilities)、供應品(provisions)、適應癥(adaptations)和/或其他幫助使用制劑最適合地用于治療的手段，推斷出來。這樣的措施使得患者包特別適合并可改造以適用于以本發(fā)明的組合進行治療。藥物可以以任何適合的量包含在任何適合的載體物質(zhì)中，可以以組合物總重量的1-99重量％的量存在。組合物可以提供在適合于口服、腸胃外(例如靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi))、直腸、皮膚、鼻、陰道、吸入、表皮(貼片)或眼給藥途徑的劑型中。因此，組合物可以采取例如片劑、膠囊、丸劑、粉末、顆粒、懸液、乳液、溶液、凝膠包括水凝膠、糊劑、軟膏、油膏、膏藥、浸液(drenches)、滲透性投送裝置、栓劑、灌腸劑、注射劑、植入物、噴劑或氣溶膠的形式。藥物組合物可以按照常規(guī)的藥物實踐進行配制(參見例如《Remington藥物禾斗學與實踐〉〉(第20版)(Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(20thed.))，A.R.Gennaro主編，Lippincottffilliams&Wilkins，2000，以及《制藥技術百科》(EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology),J.Swarbrick禾口J·C·Boylan3Ξ編，1988-1999，MarcelDekker,NewYork)。本發(fā)明的藥物組合物可以配制成在給藥后基本上立刻、或在給藥后任何預定的時間或時期釋放出活性藥物。受控釋放制劑包括(i)在體內(nèi)產(chǎn)生較長時間段基本上恒定的藥物濃度的制劑；(ii)在預定的時滯后，在體內(nèi)產(chǎn)生較長時間段基本上恒定的藥物濃度的制劑；(iii)通過維持體內(nèi)相對恒定有效的藥物水平并在同時最小化與活性藥物物質(zhì)的血漿水平波動有關的不想要的副作用，在預定時間段期間維持藥物作用的制劑；(iv)通過例如將受控釋放組合物空間放置在患病組織或器官附近或其中，使藥物作用局部化的制劑；以及(ν)通過使用載體或化學衍生物將藥物投送到特定靶細胞類型而將藥物作用定向的制劑。藥物以受控釋放制劑的形式給藥，在下列情況下是特別優(yōu)選的，在這些情況中，藥物單獨或組合地具有(i)狹窄的治療指數(shù)(即產(chǎn)生有害副作用或毒性反應的血漿濃度與產(chǎn)生治療效果的血漿濃度之間的差異?。灰话銇碚f，治療指數(shù)TI被定義為中值致死劑量(LD50)與中值有效劑量(ED50)的比率)；(ii)在胃腸道中狹窄的吸收窗；或(iii)非常短的生物學半衰期，使得在一天之內(nèi)必需頻繁用藥才能將血漿水平維持在治療水平?？梢园凑斩喾N策略中的任何一種來獲得其中釋放速度超過所論述藥物的代謝速度的受控釋放。受控釋放可以通過適當選擇各種不同的制劑參數(shù)和成分，包括例如各種不同類型的受控釋放組合物和包衣，來獲得。因此，將藥物用適合的賦形劑配制成給藥后以受控方式釋放出藥物的藥物組合物(單個或多個單位片劑或膠囊組合物，油溶液，懸液，乳液，微膠囊，微球，納粒，貼片和脂質(zhì)體)。口服使用的固體劑型口服使用的制劑包括含有活性成分與無毒性可藥用賦形劑的混合物的片劑。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑或填充劑(例如蔗糖，微晶體纖維素，淀粉包括土豆淀粉，碳酸鈣，氯化鈉，磷酸鈣，硫酸鈣或磷酸鈉)；成粒或崩解劑(例如纖維素衍生物包括微晶體纖維素，淀粉包括土豆淀粉，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，藻酸鹽或藻酸)；黏合劑(例如阿拉伯樹膠，藻酸，藻酸鈉，明膠，淀粉，預明膠化淀粉，微晶體纖維素，羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，乙基纖維素，聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及潤滑劑，助流劑和抗粘附劑(例如硬脂酸，二氧化硅或滑石粉)。其他的可藥用賦形劑可以是著色劑，調(diào)味劑，增塑劑，保濕劑，緩沖劑等。片劑可以是無包衣的，或者它們可以通過已知技術任選地包衣，以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，由此在較長時間內(nèi)提供持續(xù)的作用。包衣可以適合于以預定樣式釋放活性藥物物質(zhì)(例如以便獲得受控釋放制劑)，或者它可以適合于在通過胃之前不釋放活性藥物物質(zhì)(腸溶包衣)。包衣可以是糖包衣，薄膜包衣(例如基于羥丙基甲基纖維素，甲基纖維素，甲基羥乙基纖維素，羥丙基纖維素，羧甲基纖維素，丙烯酸共聚物，聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)，或腸溶包衣(例如基于甲基丙烯酸共聚物，乙酸鄰苯二甲酸纖維素，鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素，乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素，聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯，蟲膠和/或乙基纖維素)。可以使用時間延遲材料例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。固體片劑組合物可以包含適合于保護組合物免于不想要的化學變化(例如活性藥物物質(zhì)釋放前的化學降解)的包衣。包衣可以按照與《制藥技術百科》(EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology)中描述的相似的方式施加到固體劑型上。兩種藥物可以在片劑中混合在一起，或可以分隔開。例如，第一種藥物包含在片劑內(nèi)部，第二種藥物在外部，使得相當部分的第二種藥物在第一種藥物釋放之前釋放?？诜褂玫闹苿┮部梢员憩F(xiàn)為咀嚼片或作為硬質(zhì)明膠膠囊，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如土豆淀粉，微晶體纖維素，碳酸鈣，磷酸鈣或高嶺土)混合，或作為軟質(zhì)明膠膠囊，其中活性成分與水或油介質(zhì)例如液體石蠟或橄欖油混合。粉末和顆?？梢允褂蒙厦嬖谄瑒┖湍z囊下提到的成分，以常規(guī)的方式制備。口服使用的受控釋放組合物，可以構建成例如通過控制活性藥物物質(zhì)的溶解和/或擴散來釋放活性藥物。溶解或擴散受控釋放，可以通過藥物的片劑、膠囊、球粒或顆粒制劑的適當包衣，或通過將藥物摻入適合的基質(zhì)來實現(xiàn)。受控釋放包衣可以包含一種或多種上面提到的包衣物質(zhì)，和/或例如蟲膠，蜂蠟，glycowax,蓖麻蠟，巴西棕櫚蠟，硬脂醇，單硬脂酸甘油酯，二硬脂酸甘油酯，棕櫚酰硬脂酸甘油酯，乙基纖維素，丙烯酸樹脂，dl-聚乳酸，乙酸丁酸纖維素，聚氯乙烯，聚乙酸乙烯酯，乙烯吡咯烷酮，聚乙烯，聚甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸甲酯，2-羥基甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸酯水凝膠，1,3-丁二醇，甲基丙烯酸乙二醇酯，和/或聚乙二醇。在受控釋放基質(zhì)劑型中，基質(zhì)材料也可以包含例如水合甲基纖維素，巴西棕櫚蠟和硬脂醇，卡波姆934，有機硅，三硬脂酸甘油酯，丙烯酸甲酯_甲基丙烯酸甲酯，聚氯乙烯，聚乙烯，和/或鹵代氟烴。含有要求權利的組合的一種或多種藥物的受控釋放組合物，也可以采取漂浮片劑或膠囊的形式(即片劑或膠囊在口服后，在胃內(nèi)容物的頂部漂浮一定的時間段)。藥物的漂浮片劑制劑，可以通過將藥物與賦形劑和20-75%w/w的水膠體、例如羥乙基纖維素、羥丙基纖維素或羥丙基甲基纖維素的混合物成粒來制備。然后可以將獲得的顆粒壓縮成片劑。當與胃液接觸時，片劑在其表面周圍形成了基本上不透水的凝膠屏障。這種凝膠屏障參與了將密度維持在1以下，從而使片劑保持漂浮在胃液中?？诜o藥的液體適合于通過添加水來制備水性懸液的粉末、可分散粉末或顆粒，是用于口服給藥的方便的劑型。作為懸液的制劑提供了活性成分與分散或潤濕劑、懸浮劑以及一種或多種防腐劑的混合物。適合的懸浮劑是例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，藻酸鈉等。腸胃外組合物藥物組合物也可以通過以劑型、制劑的注射、輸注或植入(靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，皮下等)，或通過適合的投送裝置或含有常規(guī)的無毒性可藥用載體和佐劑的植入物，進行腸胃外給藥。這些組合物的制劑和制備對于藥物制劑領域的專業(yè)人員來說是公知的。用于腸胃外使用的組合物可以以單位劑型提供(例如在單劑安瓿中)，或以含有幾個劑量的小瓶提供，其中可以添加適合的防腐劑(參見下文)。組合物可以采取溶液、懸液、乳液、輸注裝置、或用于植入的投送裝置的形式，或者它可以表現(xiàn)為干粉，在使用前用水或另一種適合的介質(zhì)復溶。除了活性藥物之外，組合物可以包含適合的腸胃外可接受的載體和/或賦形劑?；钚运幬锟梢該饺氲轿⑶?、微膠囊、納粒、脂質(zhì)體等中用于受控釋放。組合物可以包含懸浮劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑和/或分散劑。本發(fā)明的藥物組合物可以采用適合于無菌注射的形式。為了制備這樣的組合物，將適合的活性藥物溶解或懸浮在腸胃外可接受的液體介質(zhì)中。可以使用的可接受介質(zhì)和溶劑包括水，通過加入適量的鹽酸、氫氧化鈉或適合的緩沖液調(diào)整到適合的PH的水，1，3_丁二醇，林格氏(Ringer's)溶液和等滲氯化鈉溶液。水性制劑也可以包含一種或多種防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯、乙酯或正丙酯)。在其中一種藥物只能略微或少量溶解在水中的情況下，可以添加溶解增強劑或增溶劑，或溶劑可以包含10-60%w/w的丙二醇等。受控釋放的腸胃外組合物可以采取水性懸液、微球、微膠囊、磁性微球、油溶液、油懸液或乳液的形式?？蛇x地，活性藥物可以摻入到可生物相容的載體、脂質(zhì)體、納粒、植入物或輸注裝置中。用于制備微球和/或微膠囊的材料是例如可生物降解/可生物侵蝕的聚合物，例如丙交酯乙交酯共聚物(polygalactin)，聚(氰基丙烯酸異丁基酯)，聚(2-羥基乙基-L-谷氨酰胺)。在配制受控釋放腸胃外制劑時可以使用的可生物相容載體是糖類(例如葡聚糖)，蛋白(例如白蛋白)，脂蛋白或抗體。在植入物中使用的材料可以是不可生物降解的(例如聚二甲基硅氧烷)或可生物降解的(例如聚(己內(nèi)酯)，聚(羥基乙酸)或聚(原酸酯))。直腸組合物對于直腸使用來說，適合的用于組合物的劑型包括栓劑(乳劑或懸液劑類型)，以及直腸明膠膠囊(溶液或懸液)。在典型的栓劑制劑中，活性藥物與適合的可藥用栓劑基質(zhì)例如可可脂、酯化脂肪酸、甘油膠，以及各種不同的水溶性或可分散的基質(zhì)例如聚乙二醇混合?？梢該饺敫鞣N不同的添加劑、增強劑或表面活性劑。經(jīng)皮和表面組合物藥物組合物也可以皮膚上表面給藥，用于在含有常規(guī)的無毒性可藥用載體和賦形劑的劑型或制劑、包括微球和脂質(zhì)體中經(jīng)皮吸收。制劑包括霜劑、軟膏、洗劑、搽劑、凝膠、水凝膠、溶液、懸液、粘貼劑、噴霧劑、糊劑、膏藥，以及其他種類的透皮藥物投送系統(tǒng)?？伤幱幂d體或賦形劑可以包含乳化劑、抗氧化劑、緩沖劑、防腐劑、保濕劑、穿透增強劑、螯合劑、成膠劑、軟膏基質(zhì)、香料和皮膚保護劑。乳化劑可以是天然存在的樹膠(例如阿拉伯樹膠或黃耆樹膠)。防腐劑、保濕劑、穿透增強劑可以是對羥苯甲酸酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯，以及苯扎氯銨，甘油，丙二醇，尿素等。上面描述的用于皮膚上表面給藥的藥物組合物也可用于在待治療身體部分上或附近表面給藥。組合物可以適用于直接施加，或通過特殊的藥物投送裝置例如敷料或可選的膏藥、墊片、海綿、條帶，或其他形式的適合的柔性材料施加。緩釋制劑化合物可以在緩釋制劑中使用，和/或與改變組織分布或生物利用度的藥劑配制在一起。更具體來說，在優(yōu)選實施方案中，至少兩種化合物的組合，與藥物洗脫聚合物或生物分子或形成膠束或脂質(zhì)體的脂類或水包油乳液，或聚乙二醇化的或固體的納粒或微粒配制在一起，用于口服或腸胃外或氣管內(nèi)給藥，以改變組織分布或生物利用度。這種配制劑的具體例子包括PGA、PLGA、環(huán)糊精、白蛋白或蛋白載體、納粒和微粒、脂質(zhì)體、乳液和PEG。結合物在本發(fā)明的組合療法中，化合物可以以不同方式與藥物組合物聯(lián)合。它們可以作為分開的實體混合在一起。它們可以分開配制。它們也可使用連接基或不使用連接基進行共價或非共價連接。在具體實施方案中，至少兩種化合物優(yōu)選通過可切開或不可切開的連接基連接。治療劑量和持續(xù)時間應該認識到，組合中的藥物可以在相同或不同藥物制劑中同時或相繼給藥。如果相繼給藥，在第二種(或附加的)活性成分給藥時的延遲不應該使得活性成分組合的有效效應的益處喪失。對于本說明書的組合來說，最低要求是組合應該預期將活性成分組合的有效效應的益處進行組合運用。組合所預期的應用可以由設備、供應品、適應癥和/或有助于使用本發(fā)明的組合的其他手段推斷出來。治療有效量的作為本發(fā)明主體的兩種或多種藥物可以一起使用來制備藥劑，所述藥劑可用于降低PMP22基因表達增加的效應，阻止或降低發(fā)生CMTlA疾病的風險，一旦CMTlA疾病變得臨床明顯后阻止或減緩其發(fā)展，以及阻止或降低神經(jīng)病性事件的初次或后續(xù)發(fā)生的風險。盡管本發(fā)明的活性藥物可以分次劑量給藥，例如每天2或3次，但組合中的每種藥物每天單次給藥是優(yōu)選的，其中所有藥物在單一藥物組合物中(單位劑型)每天單次給藥是最優(yōu)選的。給藥可以每天一次到幾次，持續(xù)幾天到幾年，甚至可以持續(xù)患者終生。在大多數(shù)情況下，將要求長期或至少周期性重復地長期給藥。術語“單位劑型”是指適合作為單一劑量用于人類對象的物理上分離的單位(例如膠囊、片劑或裝好的注射器針筒)，每個單位含有經(jīng)計算可以產(chǎn)生所需治療效果的預定量的活性材料，以及所需的藥物載體。優(yōu)選用于單位劑量的組合中的每種藥物的量，將依賴于幾種因素，包括給藥方法，患者的體重和年齡，由CMTlA疾病引起的神經(jīng)病性損傷的嚴重性，或考慮到待治療的人的總體健康狀況的潛在副作用風險。此外，關于具體患者的藥物基因組學(基因型對藥物動力學、藥效學的影響或治療藥物的功效情況)信息，可以影響使用的劑量。除了在應對特別傷害性CMT疾病的情況下可能需要較高劑量，或在治療兒童時應該選擇較低劑量之外，組合中的每種藥物的優(yōu)選劑量，一般將在不超出通常為長期維持性治療所處方的劑量范圍或在大型3期臨床研究中被證明是安全的劑量范圍之內(nèi)。例如·對于化合物F來說，如果口服，每天大約2到大約lOOmg。如果表面給藥應該選擇特定的劑量?！τ诨衔顳來說，如果每天口服，每天大約1到大約20mg。對于化合物B來說，如果口服，每天大約2到大約20mg。如果以納粒或類似制劑形式給藥，不同的劑量可能是適合的?！τ诨衔顴來說，如果口服，每天大約125到大約500mg?！τ诨衔顲來說，如果口服，每天大約1到大約20mg。對于化合物A來說，如果口服，每天大約1到大約50g。如果注射，應該選擇特定的劑量。最優(yōu)選的劑量應該相當于通常為長期維持性治療所處方的量的到最多10%。應該理解，實際給藥的藥物的量將由醫(yī)生根據(jù)相關的情況來確定，所述情況包括待治療的病癥，待給藥的具體組合物，個體患者的年齡、體重和響應，患者癥狀的嚴重性，以及所選的給藥途徑。因此，上述的劑量范圍旨在為本文的講述提供一般性的指導和支持，而不打算限制本發(fā)明的范圍。給出了下面的實施例，其目的在于說明而不是限制。實施例1.細胞培養(yǎng)1.1可商購的大鼠原代施旺細胞將大鼠施旺細胞(SC)原代培養(yǎng)物(Sciencell#R1700)的小瓶解凍，以10,000個細胞/cm2的密度接種在聚L-賴氨酸預先包被的75cm2培養(yǎng)瓶中的“Sciencell施旺細胞培養(yǎng)基”中(來自Sciencell的基本培養(yǎng)基#R1701)。培養(yǎng)基由基本培養(yǎng)基，5%胎牛血清(3H-BiomedicalAB#1701_0025)，1%施旺細胞生長增補劑(3HBiomedicalAB#1701-1752)，慶大霉素(Sigma#G1397)和10μM毛喉素(Sigma#F6886)構成，以促進它們的增殖。在達到合生后(4到10天，依賴于細胞批次)，通過輕柔攪拌或通過thyl.1免疫淘洗，使SC與黏附性成纖維細胞分離來純化施旺細胞，以產(chǎn)生至少95%純的培養(yǎng)物。然后對SC進行計數(shù)(錐蟲藍方法)，接種到聚L-賴氨酸預先包被的75cm2培養(yǎng)瓶中的同樣的SC培養(yǎng)基中。在合生時，將細胞洗滌，用胰蛋白酶處理(從InvitrOgen#1540054稀釋Ix的胰蛋白酶-EDTA，在不含鈣和鎂的PBS中稀釋)，計數(shù)，鋪板于12孔板(140000個細胞/孔)中的Sciencell施旺細胞培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基還含有5%FBS，1%細胞生長增補劑(CGS)，40μg/ml慶大霉素和4μM毛喉素。1.2專門制備的原代施旺細胞從Sprague-Dawley新生大鼠(P0到P2之間)坐骨神經(jīng)建立原代施旺細胞培養(yǎng)物(SC)。所有新生大鼠在皮氏培養(yǎng)血中處死和分離。解剖在無菌條件下進行。從后爪和下部軀干除去背部皮膚。分離出坐骨神經(jīng)并轉(zhuǎn)移到含有冰冷的Leibovitz(L15，Invitogen#11415)的培養(yǎng)皿中，Leibovitz中添力卩有1%青霉素/鏈霉素溶液(分別為50UI/ml和50μg/ml；Invitrogen#15070)和1%牛血清白蛋白(BSA，SigmaA6003)。將每只大鼠的兩根神經(jīng)都轉(zhuǎn)移到含有冰冷的L15的15ml試管中。然后除去L15培養(yǎng)基，用含有10mg/ml膠原酶(Sigma#A6003)的2.4mlDMEM(Invitrogen#21969035)代替。將神經(jīng)在該培養(yǎng)基中在37°C下溫育30分鐘。然后除去培養(yǎng)基，通過用不含鈣和鎂的PBS(Invitrogen#2007-03)稀釋的胰蛋白酶(10%胰蛋白酶-EDTA10x,Invitrogen#15400054)在37°C處理20分鐘，將兩根神經(jīng)松解。反應通過加入含有II級DNase1(0.lmg/ml,Rochediagnostic#104159)和胎牛血清(FCS10%,Invitrogen#10270)的DMEM終止。將細胞懸液用IOml移液管研散，通過過濾器收集在50ml管中(Swinnex13mm過濾裝置，Millipore，帶有20μm尼龍篩網(wǎng)濾膜，F(xiàn)isher)。將細胞懸液在室溫(RT)以350g離心10分鐘，將沉淀懸浮在含有10%FCS和1%青霉素/鏈霉素的DMEM中。對細胞進行計數(shù)(錐蟲藍方法)，以5.105到106個細胞/板的密度接種到Falcon100mmPrimaria組織培養(yǎng)板中。在培養(yǎng)1天后，將培養(yǎng)基用DMEM，10%FCS，1%青霉素/鏈霉素和10μM胞嘧啶b-D-呋喃阿拉伯糖苷(Sigma#C1768)更換。48小時后，除去培養(yǎng)基，將細胞用DMEM洗滌3次。然后加入SC生長培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由DMEM，10%FCS,1%青霉素/鏈霉素，2μM毛喉素(Sigma#F6886)，10μg/ml牛垂體提取物(PEX,Invitrogen#13028)構成。每2-3天更換培養(yǎng)基。在培養(yǎng)8天后(4到10天，依賴于細胞批次)，施旺細胞達到合生，將含有大量成纖維細胞污染的培養(yǎng)物，通過thyl.1免疫淘洗方法進行純化。純化后，將細胞以10000個細胞/cm2懸浮在聚L-賴氨酸預先包被的75cm2培養(yǎng)瓶中的生長培養(yǎng)基中。一旦它們達到合生，將細胞清洗，用胰蛋白酶處理(胰蛋白酶-EDTA)，計數(shù)，并鋪板于12孔板中(100000個細胞/孔)。1.3藥物溫育在將細胞鋪板于12孔板后，將培養(yǎng)基更換為確定成分培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有DMEM-F12混合物(Invitrogenii2I33IO2O)，并補充有N2補充劑(Invitrogeniil75O2)，L-谷氨酰胺(Invitrogen#25030024)，2·5%FBS(Sciencell#0025),0.02μg/ml皮質(zhì)甾酮6丨8111￡1憂2505)，411|1毛喉素和5(^8/1111慶大霉素。沒有向該培養(yǎng)基中添加生長因子，以促進SC分化。24小時后，將該培養(yǎng)基替換為確定成分培養(yǎng)基(DMEM-F12)，補充有1%胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒-X(ITS，Invitrogen#51300),16μg/ml腐胺(Sigma#P5780)，0·02μg/ml皮質(zhì)酮和50μg/ml慶大霉素。在該步驟中，培養(yǎng)基中既不存在孕酮也不存在毛喉素。1天后，將施旺細胞用藥物組合或單獨的藥物刺激24小時(3個孔/條件)。每種化合物在將其添加到細胞培養(yǎng)基中之前新鮮制備。將藥物添力Π到由DMEM-F12與胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒_X(ITS，Invitrogen#51300)，16μg/ml腐胺，0.02μg/ml皮質(zhì)酮，IOnM孕酮和50μg/ml慶大霉素構成的確定成分培養(yǎng)基中。在藥物刺激過程中不存在毛喉素，避免了腺甘酸環(huán)化酶飽和。2.通過Thyl.1免疫淘洗純化施旺細胞為了防止成纖維細胞培養(yǎng)物的污染，使用克隆Thyl.1(ATCCTIB_103)免疫淘洗方案對施旺細胞進行了純化。抗體預包被的IOOmm細菌皮氏培養(yǎng)皿如下進行制備將這些平皿用PBS洗3次，用含有10μg/ml山羊抗小鼠IgMMU抗體(JacksonlmmunoResearchiill5-OO5-O2O)的2OmlpH9.5的50mMTrisHCl溶液，在4°C處理過夜；然后用PBS洗3次，用含有0.02%BSA和從TllD7e2雜交瘤培養(yǎng)物(ATCC#TIB_103)獲得的含有Thyl.1IgM抗體的上清液的PBS溶液，在室溫處理2小時。最后，將板用PBS洗3次，然后加入細胞懸液。SC用胰蛋白酶EDTA松開。一旦大部分細胞進入懸液，立即用DMEM-10%FBS中和胰蛋白酶，并將細胞離心。將松解的細胞的沉淀以每ml0.66xl06個細胞(最大值)的密度，重新懸浮在15ml含有0.02%BSA的培養(yǎng)基中，并轉(zhuǎn)移到皮氏培養(yǎng)皿中(大約660萬個細胞/lOml/lOOmm培養(yǎng)皿)。將細胞懸液在Thy1.1包被的皮氏培養(yǎng)皿中在37°C下溫育45分鐘，每15分鐘輕輕攪拌，以防止非特異性結合。大部分表達Thyl.1的成纖維細胞黏附于培養(yǎng)皿上。在溫育結束時，回收細胞懸液并離心。該細胞懸液理論上只含有施旺細胞。將細胞離心，將細胞沉淀以16000個細胞/cm2懸浮在聚L-賴氨酸處理過的T75cm2培養(yǎng)瓶中帶有10μM毛喉素的生長培養(yǎng)基中。3-定量反轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(Q-RT-PCR)定量RT-PCR被用于比較藥物刺激后PMP22mRNA相對于大鼠施旺細胞原代培養(yǎng)物中的看家核糖體L13AmRNA的水平。在用冷的無菌PBS清洗后，從SC中使用QiagenRneasy微量試劑盒(Qiagen#74004)提取和純化每個細胞樣品的總RNAs。使用1μ1RNA樣品，通過Nanodrop分光光度計對核酸進行了定量。RNA完整性通過BioAnalyzer(Agilent))裝置確定。按照標準方案將RNAs反轉(zhuǎn)錄成cDNA。用于PCR擴增的cDNA模板使用SuperScriptII反轉(zhuǎn)錄酶(Invitrogen#18064-014)，在存在寡聚(dT)的情況下在42°C經(jīng)60分鐘從200ng總RNA合成，終體積為20μ1。使用《LightCycler480》系統(tǒng)(RocheMolecularSystemsInc.)對cDNAs進行PCR擴增。在用于PCR擴增之前，將每個cDNA稀釋5倍。將2.5μ1該cDNAs加入到PCR反應溶液中(終體積10μ1)。進行了初步實驗以確保在兩種序列的擴增過程的指數(shù)期中進行定量，并且參比基因的表達在不同培養(yǎng)條件下是一致的。PCR反應通過擴增大鼠ΡΜΡ22(ΝΜ_017037)的500ηΜ正向弓丨物，5-GGAAACGCGAATGAGGC-3,禾Π500ηΜ反向引物5-GTTCTGTTTGGTTTGGCTT-3來進行(擴增了148-bp)。通過使用500nM正向引物5-CTGCCCTCAAGGTTGTG-3和500nM反向引物5-CTTCTTCTTCCGGTAATGGAT-3，在分開的反應中平行地擴增了RPL13A核糖體(NM_173340)RNA的152-bp的片段，用于對結果進行歸一化。我們使用了FRET化學來進行RT-Q-PCR分析。FRET探針由0.3μMPmp22-FL-5_GCTCTGAGCGTGCATAGGGTAC或Rpll3A_FL-5_TCGGGTGGAAGTACCAGCC構成，在它們的3，末端用供體熒光團染料(熒光素)標記。0.15μMRed640探針定義如下Pmp22-red_5‘-AGGGAGGGAGGAAGGAAACCAGAAA-或Rpl13A-red_5‘-TGACAGCTACTCTGGAGGAGAAACGGAA,在它們的5，末端用受體熒光團染料(羅丹明Red640)標記。每個PCR反應在總體積為10μ1的主混合物試劑盒(mastermixkit,Roche#04-887301001)中包含2·5μ1cDNA模板。使用了下述PCR條件95V10秒，63V10秒，72V12秒，和40V30秒(40個擴增循環(huán))。PMP22基因表達的相對水平通過測定從靶基因PMP22與內(nèi)源內(nèi)部標準品RPL13A產(chǎn)生的產(chǎn)物之間的比率來計算。4-通過流式細胞術(FACS)進行PMP22蛋白表達分析在與藥物溫育8小時、24小時和48小時后，回收上清液，離心并冷凍。使用胰蛋白酶-EDTA分拆SC。一旦大部分細胞進入懸液，立即用含有10%FCS的DMEM中和胰蛋白酶?；厥蘸屑毎纳锨逡翰㈦x心。將細胞沉淀轉(zhuǎn)移到微量管中，在PBS中清洗一次，使用特定溶液(AbCysftReagentABUF09B)固定。10分鐘后，將細胞用PBS洗滌一次，保持在4°C。細胞固定后5天，使用下面的方案，對所有溫育時間不同的細胞制備物進行標記。將細胞以7000rpm離心5分鐘，將沉淀懸浮在通透化溶液(AbCys#ReagentBBUF09B)中，用第一PMP22抗體(Abcam#ab61220，1/50)在室溫標記1小時。然后將細胞以7000rpm離心5分鐘，將細胞沉淀在PBS中洗滌一次。加入在室溫與AlexaFluor488偶聯(lián)的第二抗體(山羊抗兔IgG,MolecularProbes#A11008,1/100)1小時。然后將細胞以7000rpm離心5分鐘，將細胞沉淀在PBS中洗滌一次。加入與AlexaFluor488偶聯(lián)的第三抗體(雞抗山羊IgG,MolecularProbes#A21467,1/100)，在室溫溫育1小時，以增加標記。然后將細胞在PBS中洗滌一次。執(zhí)行了不含任何抗體的對照(未標記細胞)，以確定自身熒光的水平并調(diào)整光倍增器的靈敏度。執(zhí)行了使用第二和第三抗體但是不使用第一抗體的對照，以評估抗體的非特異性結合。數(shù)據(jù)獲取和分析使用FACS陣列細胞計數(shù)器和FACS陣列軟件(BectonDickinson)在5000個細胞上進行。分析了與細胞體積(尺寸)相關的正向散射(FSC)和依賴于細胞的內(nèi)部復雜性(顆粒度)的側向散射。對于PMP22的表達來說，在總細胞中進行分析，并計算陽性細胞的百分數(shù)。陽性細胞是熒光強度高于使用第二抗體的對照的細胞。為了對SC數(shù)量進行定量，使用抗SlOO蛋白抗體分析了對照培養(yǎng)基中的細胞。細胞按照下列方案制備將施旺細胞用抗SlOO蛋白抗體(Dako#S0311，1/100)在室溫染色1小時。該抗體按照上面描述的用于PMP22免疫染色的方案進行標記，但是不與第三抗體溫育。5.藥物溫育和活件將藥物在與上面描述的相同的確定成分培養(yǎng)基中溫育24小時或48小時(3個孔/條件)，其中不存在毛喉素以避免腺苷酸環(huán)化酶刺激的飽和，但是存在IOnM孕酮。在與藥物溫育后，回收上清液，將施旺細胞冷凍用于RT-Q-PCR分析。當藥物與對照相比明顯降低PMP22水平時，我們確定了這些藥物對PMP22表達的活性。下面的表1歸納了20種引起PMP22表達降低的活性藥物的結果。表118種在溫育24小時后導致PMP22mRNA表達顯著降低的藥物的數(shù)據(jù)顯示在圖1_3中。這些數(shù)據(jù)顯示出PMP22mRNA水平的顯著降低，即使在非常低的劑量下。6.溫育24小時后的PMP22蛋白水平我們測試了一些藥物抑制PMP22蛋白表達的能力(FACS分析)。圖4描述了6種藥物的結果，顯示出它們在添加到培養(yǎng)基中24小時之后，能夠顯著降低PMP22蛋白表達。某些個體藥物對PMP22蛋白水平的作用結果，也顯示在上面的表1中。在圖5中，顯示了毛果蕓香堿和納曲酮的組合在溫育24小時后對PMP22蛋白表達的影響。將蛋白表達水平與未處理的對照進行了比較。這些差異顯示出是統(tǒng)計學顯著的。下面的表2歸納了使用不同濃度的不同藥物組合獲得的對PMP22蛋白表達的結果。這些結果是統(tǒng)計學顯著的，證明了提出的藥物組合的優(yōu)點和有益效應。表27.在CMT動物樽型中的體內(nèi)實驗我們測試了化合物在CMT轉(zhuǎn)基因大鼠模型——帶有三個附加拷貝的小鼠PMP22基因的半合子PMP22轉(zhuǎn)基因大鼠(Sereda等，1996;Grandis等，2004)中的治療效果。該CMT大鼠模型從臨床的觀點來說，很接近人類CMTlA疾病。成年CMT大鼠顯示出減慢的運動神經(jīng)傳導速度，其值與CMTlA患者相似，即低于50%。在坐骨神經(jīng)刺激后，化合物的肌肉動作電位顯示出降低的幅度和去同步化作用。組織學和電生理改變出現(xiàn)在運動受損的明顯臨床體征之前(Sereda等，1996，2003)。由組織學顯著的肌肉萎縮所證實的軸突喪失，與人類CMTlA的癥狀相符。在整個研究中使用了四周齡大鼠轉(zhuǎn)基因PMP22大鼠。研究設計方面(隨機化，多重比較的統(tǒng)計學，樣本量等)已被檢查，與ILARJournal(2002)第43卷第4期中提供的推薦相符合，該文獻提供了生物醫(yī)學研究中實驗設計和統(tǒng)計學領域的綜述。使用兩種性別的幼齡大鼠分別形成實驗組。大鼠根據(jù)體重按照隨機方案分派到組中。在某些實驗中，根據(jù)大鼠在桿試驗中的表現(xiàn)進行隨機化。兩種性別由獨立的對照組表示，它們在數(shù)量上與處理組相同或更大。大鼠用藥物長期處理，在10-20周的時間內(nèi)，根據(jù)每種藥物的生物利用度，通過強制喂食或使用Alzet滲透皮下泵(DURECTCorporationCupertino,CA)注射。動物每周稱重兩次，以便根據(jù)體重的增長調(diào)節(jié)劑量。如果選擇了滲透泵進行處理給藥，則根據(jù)動物在泵送期間(6周)的年齡所預計的估計平均體重來計算藥物的劑量。如果需要，可以使用適合的麻醉方案重新植入泵。行為測試每3或4周，對動物進行行為測試。每次測試由相同的研究人員在相同的房間中，在一天的同樣時間進行；在整個實驗過程中維持這種一致性。所有的處理對于研究人員來說都是盲法的。在整個研究中主要使用“桿試驗(BarTest)”和“抓握力量(Gripstrength)”來評估行為。隨著動物的生長，桿試驗的方案可以改變(以避免由于例如學習而引起的偏差)。抓握力量的測定允許檢測抓握行為中的細微差異，抓握行為看來由肌肉力量、敏感性狀態(tài)(例如疼痛的觸覺感可能改變測量到的力量值)、行為成分(“動機”)構成。前后肢之間的值是不同的，并極大地依賴于動物的年齡。抓握力量測試測量了動物分別用其前爪或后爪握在握桿上的力量。與握桿放置在一起的測力計測量力量(ForceGaUgere-5000A)。大鼠由實驗人員抓住，使它用其前爪或用其后爪握住握桿，并將大鼠輕輕向后拉，直到它放開握桿。記錄當動物釋放握桿時測量到的力。對于每只動物，進行兩次連續(xù)的測量前爪力量的試驗和兩次連續(xù)的測量后爪力量的試驗；只記錄最大的分值(前爪一個，后爪一個)(單位為N)。桿試驗評估大鼠握住固定桿的能力。顯示出肌肉虛弱的Pmp22大鼠在該試驗中表現(xiàn)出成績不佳(Sereda等，1996)。將大鼠放置，使其四爪在桿的中間(桿直徑2.5cm;長度50cm；高于桌面30cm)。試驗連續(xù)進行；在我們的實驗中，試驗的數(shù)量和持續(xù)時間取決于動物的批次。這種測試中的變異性已被引入，以確定在實驗過程中適合于最好地檢測CMT大鼠中運動缺陷的方案。記錄每一期的表現(xiàn)指數(shù)-在桿上保持60秒(或?qū)τ诘谝慌?，第一期和第二期來說30秒)所需的試驗數(shù)。-每次試驗中在桿上度過的時間(即跌落等待時間)以及每一期的平均值。在大鼠在桿上停留了截止時間、即30或60秒后該期結束的實驗程序中，將還未完成的試驗設定為以截止時間(30秒或60秒)進行(例如，對于第8批來說，對于在試驗1、2和3中在桿上停留了不到10秒，然后在試驗4和5中停留了60秒的動物來說，將試驗6到10設定為60秒)。_跌落的次數(shù)?？傮w健康評估在整個實驗過程中監(jiān)測動物的體重，外顯體征(毛皮外觀，身體姿勢，步態(tài)，震顫等)。使用等級評定量表進行記錄0=正常，1=異常。其他測試當適合時，對大鼠進行電生理評估和組織學測量。MM在整個處理過程中，甲巰咪唑改善桿試驗表現(xiàn)(圖6)，而在這里僅僅為了比較而出現(xiàn)的化合物PXT25，幾乎不顯示任何改善。同樣地，毛果蕓香堿在整個處理過程中改善桿試驗表現(xiàn)(圖6)。在用安慰劑處理的不同CMT大鼠中，與野生型(WT)組相比，運動表現(xiàn)的成功率平均低3倍。使用甲巰咪唑或毛果蕓香堿處理，使得動物在此方面得到改進，當早在強迫喂飼8周后時，就變得統(tǒng)計學顯著。在處理16周時這種效應相當具有論證性(圖7)。與安慰劑組相比，動物變得明顯更具執(zhí)行性，并恢復到與WT安慰劑組相比沒有明顯差異的表現(xiàn)水平。在TG安慰劑組中，發(fā)現(xiàn)在尾部遠端部分測量到的電位幅度明顯減小，可能反映出轉(zhuǎn)而由于脫髓鞘作用引起的重要的軸突喪失。在用甲巰咪唑處理后，該電生理參數(shù)轉(zhuǎn)為明顯改善(圖8)，而神經(jīng)傳導速度(NCV)不受顯著影響。該觀察使我們推測，甲巰咪唑的作用可能阻止了軸突喪失，盡管外周神經(jīng)的髓鞘化狀態(tài)沒有可測量到的改善。毛果蕓香堿的效應似乎基本上是相同的，即使因為組內(nèi)變異性，與安慰劑組參數(shù)的差異未能達到統(tǒng)計學顯著。在CMTlA中，與CMT2中相比，感覺神經(jīng)行動電位(SNAP)幅度更低，SNAP持續(xù)時間更長。在CMTlA中，合并肌肉行動電位(composedmuscleactionpotential,CMAP)與SNAP幅度的降低可能是脫髓鞘作用和軸突機能障礙的組合效應。在研究的最后，進行了形態(tài)測量分析。后肢組織的測量顯示出在用安慰劑處理的CMT雌性大鼠中，與對照的WT大鼠相比，坐骨神經(jīng)和比目魚肌顯著減小。這些缺陷看來通過甲巰咪唑處理得到了完全校正肌肉和神經(jīng)的絕對質(zhì)量甚至高于對照WT大鼠的，而在甲巰咪唑組中，與安慰劑組相比，總體重反而減少(數(shù)據(jù)未顯示)。這些數(shù)據(jù)顯示，在體內(nèi)，本發(fā)明的化合物允許有效地治療CMT。此外，應該指出，對于每種藥物來說，顯示出活性的第一劑量是相當于在人類中用于典型適應癥的劑量的四分之一(甲巰咪唑)和二分之一(毛果蕓香堿)的劑量。8.^^^mimmm^.下面，描述了在人類中兩種組合(給藥途徑不同)的劑量。(1)化合物F和化合物D1作為單一藥物組合物口服給藥化合物D從大約0.1到大約20mg，化合物F從大約0.2到大約50mg，每天口服，為期數(shù)月，組合物中兩種藥物的最優(yōu)選劑量在每單位(每天)0.1到5mg的范圍內(nèi)。2同時口服給藥幾個月化合物F從大約5到大約200mg，每周一次(最優(yōu)選劑量高達每周50mg)，化合物D從大約0.1到大約20mg每日(該藥物的最優(yōu)選劑量是每日0.1至丨J5mg)ο3同時給藥數(shù)月化合物D從大約0.1到大約20mg，每日口服(該藥物的最優(yōu)選劑量是每日0.1到5mg)，化合物F作為皮膚貼片，優(yōu)選以每日大約0.2到大約2mg的速度釋放藥物。(2)化合物A和化合物F1長期口服給藥，每天兩次或三次，作為單一藥物組合物，采用必須溶解在飲料中(優(yōu)選牛奶中)的膠囊或滴劑的形式優(yōu)選的每日總劑量，化合物F為大約0.1到大約5mg，化合物A為大約1到大約50g。2同時給藥數(shù)月化合物F每周一次，每周一次大約5到大約200mg(最優(yōu)選劑量高達每周50mg)，化合物A在飲料中每日兩次，化合物A的每日總劑量為大約1到大約50g。3相繼和同時給藥用于長期治療首先口服作為單一大丸劑的化合物F(大約200到600mg)，然后同時間歇性組合作為釋放藥物的皮膚貼片的化合物嚴(最優(yōu)選情況下，以每日大約0.2到大約2mg的速度)，以及在飲用水中的化合物A，在7天期間每日兩次，然后在14天期間不給藥化合物A，然后在7天期間每日兩次在飲用水中的化合物A(化合物A的每日優(yōu)選總劑量是大約1到大約50g)等。*該藥物在本發(fā)明中公開的任何組合中的劑量，在打算用于治療男性或女性的制劑中可以顯著不同。**與化合物F和化合物A(3)的治療計劃相同，但是可以使用低劑量化合物F的直腸/陰道給藥來代替皮膚貼片。參考文獻AmiciSA,DunnWAJr,MurphyAJ,AdamsNC,GaleNff,ValenzuelaDM,YancopoulosGD,NotterpekL.Peripheralmyelinprotein22isincomplexwithalpha6beta4integrin,anditsabsencealterstheSchwanncellbasallamina.(夕卜周髓磷脂蛋白22與α6β4整合蛋白形成復合物，并且其的缺乏改變施旺細胞的基膜)JNeurosci.2006；26(4):1179_1189·AmiciSA,DunnWAJr,NotterpekL.Developmentalabnormalitiesinthenervesofperipheralmyelinprotein22-deficientmice.(外周髓磷月旨蛋白22缺陷型小鼠神經(jīng)中的發(fā)育異常)JNeurosciRes.2007；85(2)=238-249.AtanasoskiS,SchererSS,NaveK~A,SuterU.ProliferationofSchwannCellsandRegulationofCyclinDlExpressioninanAnimalModelofCharcot-Marie-ToothDiseaseTypeΙΑ.(1A型沙-馬-圖病動物模型中施旺細胞的增殖和周期蛋白Dl表達的調(diào)控)JNeurosciRes.2002；67(4)443-449.Basta-KaimA,BudziszewskaB,Jaworska-FeilL,TetichM,LeskiewiczΜ,KuberaΜ,LasofiW.Chlorpromazineinhibitstheglucocorticoidreceptor-mediatedgenetranscriptioninacalcium-dependentmanner.(氯丙嗪以丐依賴性方式抑制糖皮質(zhì)激素受體介導的基因轉(zhuǎn)錄Neuropharmacology.2002；43(6)1035-1043BattyIH,FlemingIN,DownesCP.Muscarinic-receptor-mediatedinhibitionofinsulin-likegrowthfactor-1receptor-stimulatedphosphoinositide3-kinasesignallingin1321N1astrocytomacells.(1321N1星形細胞瘤細胞中毒蕈堿受體介導的抑制胰島素樣生長因子-1受體刺激的磷酸肌醇3-激酶信號傳導)BioChemJ.2004；379(Pt3):641-651.BogoyevitchMA,KettermanAJ,SugdenPH.Cellularstressesdifferentiallyactivatec-JunN-terminalproteinkinasesandextrace1lularsignal-regulatedproteinkinasesinculturedventricularmyocytes.(細胞應激在培養(yǎng)的^已、室肌細胞中差異活化c-JimN-末端蛋白激酶和細胞外信號調(diào)控的蛋白激酶)JBiolChem.1995；270(50)29710-29717.BrancoliniC,MarzinottoS,EdomiP,AgostoniE,FiorentiniC,MiillerHW,SchneiderC.Rho-dependentregulationofcellspreadingbythetetraspanmembraneproteinGas3/PMP22.(四次跨膜的蛋白Gas3/PMP22對細胞伸展的ρ依賴性調(diào)控)Mol.Biol.Cell1999;10:2441-2459.CastelloneMD,TeramotoH,GutkindJS.Cyclooxygenase-2andColorectalCancerChemoprevention:Theβ-CateninConnection.(環(huán)力口氧醇_2禾口結腸直腸癌化學預防β-聯(lián)蛋白的牽連)CancerRes.2006；66(23)11085-11088.ChenXR,BessonVC,PalmierB,GarciaY,PlotkineΜ,Marchand-LerouxC.Neurologicalrecovery-promoting,anti-inflammatory,andanti-oxidativeeffectsaffordedbyfenofibrate,aPPARalphaagonist,intraumaticbraininjury.(非諾貝特——一種PPARex激動劑，在外傷性腦損傷中提供的神經(jīng)恢復促進、抗炎和抗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