專利名稱：抑制瘢痕形成的方法
抑制瘢痕形成的方法本發(fā)明涉及提供用于抑制形成于人傷口愈合中瘢痕形成的新方法。本發(fā)明也提供 了 TGF-β 3的新用途、選擇合適的抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的治療方案的新方法和 用于抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的試劑盒。轉(zhuǎn)化生長因子β (TGF-β s)為具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子家族。TGF-β家族 包括 TGF- β 1、TGF- β 2、TGF- β 3、TGF- β 4 和 TGF- β 5 共 5 種亞型。TGF- β 家族成員以包 含雙肽鏈的二聚體形式天然存在?；钚訲GF-β 二聚體的分子量大約為25. 4KDa。已表明，TGF-β 3在預(yù)防、減少或抑制全身各部位的瘢痕形成中是有用的。這一效 應(yīng)在TGF-β 3抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成能力方面特別有利。人TGF-β 3的氨基酸序 列顯示于序列ID No. 1中，且編碼TGF-β 3的核酸序列顯示于序列ID No. 2中。傷口愈合的瘢痕形成反應(yīng)在所有的成年哺乳動物中是常見的。瘢痕形成反應(yīng)在 大多數(shù)的組織類型間是保守性的，而且在所有情況下都導(dǎo)致同樣的結(jié)果，即稱為瘢痕”的纖 維化組織的形成。瘢痕可被定義為“在體內(nèi)任何組織的損傷或病患部位形成的纖維結(jié)締組
幺口，，就傷口愈合產(chǎn)生的瘢痕而言，瘢痕構(gòu)成了作為修復(fù)反應(yīng)結(jié)果所產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)。這一 修復(fù)過程已經(jīng)作為預(yù)防受傷動物死亡的生物學(xué)需要的進(jìn)化性解決方案出現(xiàn)。為降低由于感 染或出血引起的死亡風(fēng)險，機(jī)體快速反應(yīng)以修復(fù)受損區(qū)域，而不是試圖使受損組織再生。既 然受損組織沒有再生以獲得與受傷前存在的結(jié)構(gòu)相同的組織結(jié)構(gòu)，從而可借助瘢痕與未受 傷組織相比的異常形態(tài)學(xué)來鑒定瘢痕。在宏觀上觀察時，瘢痕可以是凹陷的、低于周圍組織表面，或者是隆起的、高于它 們未受損周圍表面。瘢痕著色可比正常組織相對更深(色素沉著過度)或具有與它們周圍 組織相比更蒼白的顏色(色素沉著不足)。就皮膚瘢痕而言，任一色素沉著過度的或色素沉 著不足的瘢痕都構(gòu)成了顯而易見的外觀缺陷。還已知皮膚瘢痕可比未受傷的皮膚更紅，這 使得它們顯而易見和在外觀上無法接受。已經(jīng)證明瘢痕的外觀表現(xiàn)是促成瘢痕對患者心理 影響的主要因素之一，而且這些效應(yīng)能夠在導(dǎo)致瘢痕的傷口已愈合后長期存在。除了它們的心理學(xué)影響外，瘢痕還對患者產(chǎn)生有害的身體影響。這些影響通常是 由于瘢痕與正常組織間機(jī)械差異導(dǎo)致的。瘢痕的異常結(jié)構(gòu)和組成意味著它們通常比其正常 的組織對應(yīng)物的柔韌性更差。因此，瘢痕可能是造成正常功能削弱的原因(諸如就覆蓋關(guān) 節(jié)的瘢痕而言，其可限制可能的運動范圍)而且如果自幼年時出現(xiàn)可能延緩正常生長。根據(jù)上文，可以認(rèn)識到TGF-β 3在傷口愈合時出現(xiàn)的瘢痕形成的臨床治療方面具 有很大的效用，但是仍需要新的和改進(jìn)的用于抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的治療方 法。本發(fā)明一些方面的目的是提供抑制形成于傷口愈合的瘢痕形成的改進(jìn)的方法。本 發(fā)明其他方面的目的是提供TGF- β 3的新用途。這些TGF- β 3的新用途可構(gòu)成對現(xiàn)有技術(shù) 中所熟知的用途的替代用途，但是優(yōu)選地它們可能構(gòu)成與那些目前已知的用途相比的改進(jìn) 的用途。本發(fā)明某些方面的目的是提供選擇合適的用于抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的 治療方案的新方法。本發(fā)明其它方面的目的是提供用于抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的試劑盒。這些試劑盒可用于治療方法中，其提供了與現(xiàn)有技術(shù)中所熟知的那些相比增強(qiáng)的 瘢痕形成的抑制作用。在本發(fā)明的第一方面提供了抑制形成于人傷口愈合的瘢痕形成的方法，這一方法 包括治療瘢痕形成待被抑制的身體部位在第一次治療中提供給傷口邊緣的每一厘米或?qū)⒁纬蓚诓课惶幍拿恳焕迕?量大約為350-1000ng的TGF-β 3 ；以及在傷口形成后發(fā)生且第一次治療后8-48小時發(fā)生的第二次治療中，向所述傷口 提供量為每厘米瘢痕形成待被抑制的傷口邊緣大約為350-1000ng的TGF-β 3。在第二方面，本發(fā)明提供了抑制形成于人傷口愈合的瘢痕形成的方法，這一方法 包括治療瘢痕形成待被抑制的身體部位在第一次治療中，向?qū)⒁纬蓚诘牟课坏拿恳焕迕滋峁┝繛榇蠹s350-1000ng 的TGF-i3 3 ；以及在發(fā)生在第一次治療后8-48小時的第二次治療中，向所述傷口提供量為每厘米 瘢痕形成待被抑制的傷口邊緣大約350-1000ng的TGF-β 3。在第三方面，本發(fā)明提供了抑制形成于人傷口愈合的瘢痕形成的方法，這一方法 包括治療瘢痕形成待被抑制的身體部位在第一次治療中，向傷口邊緣的每一厘米或未來傷口邊緣的每一厘米提供量為大 約 350-1000ng 的 TGF- β 3 ；以及在發(fā)生在第一次治療后8-48小時的第二次治療中，向所述傷口提供量為每厘米 傷口邊緣約350-1000ng的TGF-β 3，在所述傷口邊緣瘢痕形成待被抑制。在本發(fā)明的各個方面和實施方案中，根據(jù)提供到所述部位每一厘米(例如，被創(chuàng) 傷部位的每一厘米或傷口邊緣或未來傷口邊緣的每一厘米)的量，本發(fā)明公開內(nèi)容確定了 提供給身體部位的TGF-β 3的量。應(yīng)了解，雖然這些段落確定了待提供給這些部位TGF-β 3 的量，它們并沒有限制這一量的提供方式。尤其不應(yīng)該認(rèn)為這些段落要求TGF- β 3給藥到 待治療部位的每一厘米(盡管這可以是優(yōu)選的實施方案)。必需的TGF-i3 3可以通過存在 的多種給藥方式提供給任一部位，從而允許特定量的TGF-β 3被提供到瘢痕形成待被抑制 的部位。本發(fā)明基于發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)能夠通過利用兩部分治療方案而出乎意料地有效抑 制瘢痕形成(其否則會在人類患者傷口愈合時出現(xiàn))，其中對將減少瘢痕形成的部位在傷 口或傷口閉合周圍一次用350-1000ng TGF-β 3治療，然后8_48小時后再次使用同樣量的 TGF-β 3治療。這些在本發(fā)明公開中首次描述的治療方案使瘢痕與那些利用已知的治療方 法獲得的那些瘢痕相比大大地減小。不希望受任何假說約束，發(fā)明人相信傷口或?qū)⒁纬蓚诓课惶幍募?xì)胞暴露于在 第一次治療中所提供的TGF-β 3能夠降低瘢痕形成反應(yīng)(盡管，如下文所述，如果在單個 的發(fā)生治療中提供的話，本發(fā)明中所考慮的劑量并不具有最強(qiáng)的抗瘢痕形成效應(yīng))而且在 第二次治療中提供的TGF-β 3可用來對抗否則其會在傷口部位出現(xiàn)的促瘢痕形成“級聯(lián)反 應(yīng)”的生物學(xué)活性。這在抑制瘢痕形成方面具有令人驚訝的有益效果，其顯著強(qiáng)于利用目前 所考慮的其它TGF-β 3治療方案可能實現(xiàn)的效果。應(yīng)了解盡管本發(fā)明公開內(nèi)容中提到的每一次治療中所提供的量是基于每一厘米所提供的量，但本發(fā)明公開內(nèi)容并不限制于此，而且可用來確定合適的劑量，其可應(yīng)用于以 任一合適的單位所衡量的傷口?；诒景l(fā)明的發(fā)現(xiàn)非常令人驚訝，因為不但所獲得的抗瘢痕形成結(jié)果特別有效， 而且現(xiàn)有技術(shù)使得本領(lǐng)域技術(shù)人員相信利用兩個相對高劑量的TGF-β 3的這一治療方案 將不會像利用已知的更小劑量的方案一樣有益。本領(lǐng)域技術(shù)人員先前已了解TGF-β 3抗瘢痕形成反應(yīng)表現(xiàn)為“鐘形”劑量反應(yīng)曲 線，如

圖1和2中所示的類型。這一曲線的頂端或底端劑量不像位于劑量反應(yīng)中間的那些 劑量一樣有效，衍生于傷口愈合動物模型的數(shù)據(jù)表明高劑量的TGF-β 3甚至可能增加膠原 蛋白的產(chǎn)生，其在某種程度上被預(yù)期為會加重瘢痕形成。基于這些發(fā)現(xiàn)，優(yōu)選的給藥于患者 瘢痕形成待被抑制部位每一厘米的TGF-β 3的治療有效量已鑒定為大約200ng。更低劑量 (IOOng左右)或更高劑量(諸如500ng)不會產(chǎn)生如200ng所產(chǎn)生的有效減少瘢痕形成。 本發(fā)明人的研究以及本領(lǐng)域中其他人的工作已經(jīng)確定，當(dāng)受傷之前或傷口形成后對傷口邊 緣給藥時，200ng劑量的TGF-β 3會有效抑制人患者的瘢痕形成。一旦TGF-β 3的抗瘢痕形成有效性研究已經(jīng)鑒定出最佳使用劑量為200ng，進(jìn)一 步的研究考慮能否通過重復(fù)將這一劑量給予到疤痕形成待被減少的部位帶來任何優(yōu)勢。這 些結(jié)果顯示重復(fù)給予傷口 200ngTGF-i3 3在觀察到的抗瘢痕形成效應(yīng)方面沒有提供任何益 處。鑒于已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，單次更大劑量的TGF-β 3，諸如500ng，在實現(xiàn)減少瘢痕方面不如 更小劑量有效，以及包含這些優(yōu)選低劑量多次給藥的治療方案已經(jīng)顯示，不會提供任何優(yōu) 于單一治療的治療優(yōu)勢，，已引導(dǎo)本領(lǐng)域技術(shù)人員相信本發(fā)明第一、第二和第三方面所描述 的方案類型沒有任何顯著的抑制瘢痕形成的效用。這些發(fā)現(xiàn)意味著本領(lǐng)域技術(shù)人員沒有動 機(jī)去考慮本文所描述的治療類型，其中在重復(fù)的治療中對同一部位提供相對高的劑量，實 際上技術(shù)人員會考慮到這種治療很可能比在現(xiàn)有技術(shù)中已知的那些治療更加昂貴和復(fù)雜， 并且有效性低。因此可以看出本文所提供的發(fā)現(xiàn)對可以用于臨床上抑制傷口疤痕形成的治 療范圍提供了 一種出人意料但有價值的補充。以前人類研究或非人類動物中進(jìn)行的實驗性研究都沒有提示通過本發(fā)明的藥物 或方法、利用重復(fù)的高劑量TGF-β 3提供令人驚訝的優(yōu)勢。實際上以前的人類或動物研究 的報告中沒有甚至暗示本發(fā)明所提供的有益效果的內(nèi)容?？梢岳帽景l(fā)明的方法和藥物而實現(xiàn)的有益效果的認(rèn)識也引起了本發(fā)明的許多 其它方面，這也在本文中進(jìn)行了闡述。因為本文所公開的治療方法需要至少兩次治療，其發(fā)生彼此間隔至少8-48小時， 從而它們不適用于那些不能夠完成第二次或更進(jìn)一步的治療的患者。這一觀察結(jié)果產(chǎn)生了 本發(fā)明的其它方面，其中提供了一種選擇合適的治療方案以抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形 成的方法，這一方法包括確定需要這種瘢痕形成抑制的個體是否能夠完成發(fā)生在第一次治療后8-48小時 的第二次治療；以及如果個體能夠完成發(fā)生在第一次治療后8-48小時的第二次治療，選擇一種治療 方案，其包含與任一本發(fā)明的前三方面一致的一種治療方法，或者如果個體不能夠完成發(fā)生在第一次治療后8-48小時的第二次治療，選擇一種治療方案，其包含在單次治療中向待抑制瘢痕形成的傷口邊緣每一厘米或?qū)⒁纬蓚诓课坏拿?一厘米提供量大約為150-349ng TGF-β 3 在該單次治療中每一厘米所提供的TGF-β 3的 量優(yōu)選為大約200ng。在本發(fā)明的其它方面，提供了 TGF-β 3用作治療傷口或?qū)⒁纬蓚诘牟课坏?藥物以抑制疤痕形成的用途，其中在第一次治療中所提供的藥物使得大約350-1000ng的 TGF-β 3被提供給傷口邊緣的每一厘米或?qū)⒁纬蓚诘牟课坏拿恳焕迕?，以及其中在隨 后的治療中所提供的藥物使得在前一次治療后8-48小時大約350-1000ng的TGF-β 3被提 供給傷口邊緣的每一厘米。本發(fā)明的這一方面的藥物可以為可復(fù)水的藥物，諸如凍干的可注射的組合物。此外，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了用于實現(xiàn)本發(fā)明方法的手段，包括按照本發(fā)明生產(chǎn)的 藥物，可以試劑盒的形式被有效提供用于抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成，這一試劑盒包 含至少第一和第二小瓶，其包含用于在彼此間隔8-48小時的時間對傷口或要形成傷口的 部位給藥的TGF-β 3。本發(fā)明的另一方面提供了用于抑制與傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的試劑盒，這一試 劑盒包含第一量的含有TGF-β 3的組合物，該第一量在第一次治療中對傷口或?qū)⒁纬蓚?口的部位給藥；第二量的含有TGF-β 3的組合物，該第二量在第二次治療中對傷口給藥；關(guān)于第一量和第二量的組合物在彼此間隔8-48小時的時間給藥的說明書；其中配制的組合物提供給其給藥組織或器官的每厘米大約350-1000ng的 TGF- β 3 的量?？蓛?yōu)選組合物包含濃度大約為500ng/100 μ 1的TGF- β 3。用于這一試劑盒中其他 濃度包括約350ng/100y 1至約lOOOng/lOOy 1范圍內(nèi)任一濃度。這一試劑盒中所提供的組合物可以以適合于使用前復(fù)水的形式(諸如凍干的可 注射組合物)來提供。在本發(fā)明的另一實施方案中，通過用于脈沖式遞送TGF-β 3到傷口或?qū)⒁纬?傷口部位的皮下植入或儲存藥物系統(tǒng)提供TGF-β 3以抑制瘢痕形成，其中在第一次治療 中所提供的藥物使得提供給傷口邊緣的每一厘米或?qū)⒁纬蓚诓课坏拿恳焕迕状蠹s 350-1000ng的TGF-β 3，并且其中在隨后的治療中所提供的藥物使得在前一次治療后8_48 小時提供給傷口邊緣的每一厘米大約350-1000ng的TGF-β 3。按照本發(fā)明的這一方面，藥物可以配制在例如整體侵蝕系統(tǒng)(bulk-eroding system)中，諸如包含TGF-β 3的基于聚乳酸和乙醇酸共聚物(PLGA)的微球或微囊劑系統(tǒng)， 或者PLGA 乙基纖維素混合物系統(tǒng)也可以使用。按照本發(fā)明的這一方面，其它藥物可以配 制在表面侵蝕系統(tǒng)中，其中TGF-β 3包埋在易蝕基質(zhì)中，諸如其中聚合物的水解是快速的 聚(鄰)酯的和聚酐基質(zhì)。按照本發(fā)明的這一方面，藥物也可以通過如上文所述的脈沖傳 遞系統(tǒng)與諸如如上文所述的凍干的可注射組合物的即刻釋放系統(tǒng)的組合來配制。應(yīng)了解雖 然在每一次治療中TGF-β 3可通過同一途徑和同一形式給藥，但是不同次的治療可通過不 同的藥物和/或不同的給藥途徑來提供TGF- β 3。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，初次治療可借助諸如皮內(nèi)注射的注射方式來提供TGF-β 3，而第二次(和任何隨后的)治療可通過諸如 局部制劑的替代途徑來提供TGF-β 3。通常本發(fā)明的藥物和方法中使用的TGF-β 3優(yōu)選的是野生型同型二聚體 TGF-β 3，其包含兩個二聚體，而每一個又包含序列ID No. 1中所示的氨基酸殘基序列。利 用這種形式的TGF-β 3產(chǎn)生了本說明書別處報道的實驗性研究結(jié)果。本發(fā)明人相信本發(fā)明衍生出的優(yōu)勢可以適用于全身各部位的傷口。然而，優(yōu)選的 是，將要抑制與其有關(guān)的瘢痕形成的傷口為皮膚傷口。出于示例性目的，本發(fā)明的實施方案 一般結(jié)合皮膚傷口進(jìn)行描述，盡管它們還適用于其它的組織和器官。僅為舉例，另一個優(yōu)選 的實施方案中傷口可能為循環(huán)系統(tǒng)的傷口，特別是血管的傷口(在這種情況下治療可以抑 制再狹窄)。根據(jù)本發(fā)明，其它其中可以抑制瘢痕形成的傷口在說明書別處中被考慮到。傷 口可以為外科手術(shù)(諸如選擇性外科手術(shù))的結(jié)果，而且這構(gòu)成了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。本發(fā)明的方法可以任選地包含第三次或更進(jìn)一步的治療。如有必要，這樣更進(jìn)一 步的治療可以繼續(xù)直到負(fù)責(zé)照管患者的臨床醫(yī)師確定已實現(xiàn)期望的抑制瘢痕形成為止。每 一次治療都應(yīng)該在前一次的治療后8-48小時發(fā)生。更多的關(guān)于第三次或更進(jìn)一步治療的 時機(jī)的指導(dǎo)可自本文所公開的有關(guān)第一和第二次治療的相對時機(jī)中獲取。第一次治療優(yōu)選的是發(fā)生在創(chuàng)傷之前，在這種情況下可將TGF-β 3提供到將要形 成傷口的部位，如果TGF-β 3是通過局部注射到皮膚的方式提供的(諸如皮內(nèi)注射)，這可 能會產(chǎn)生水泡，其是由于包含TGF-β 3的溶液注射到皮膚所致。在一優(yōu)選實施方案中，這一 水泡可能發(fā)生在將要形成傷口的部位，而且實際上傷口可能通過切割水泡而形成。在這種 情況下，根據(jù)待形成傷口的部位的長度來確定第一次治療中所提供的TGF-β 3的量。可選擇地，兩個水泡可以出現(xiàn)在將要形成傷口的部位的每側(cè)。這些水泡優(yōu)選地定 位于將要形成傷口邊緣0.5厘米以內(nèi)。在這種情況下，根據(jù)以未來傷口邊緣的厘米數(shù)測量 的要形成的傷口長度(在下文中定義)來確定第一次治療中所提供的TGF-β 3的量。優(yōu)選地，用于將TGF-β 3提供到創(chuàng)傷前的部位的水泡可以基本上覆蓋了將要形成 傷口的部位的全長。更優(yōu)選地，水泡可以延伸超過了將要形成傷口部位的長度。適宜地，這 樣的水泡可以延伸超過將要形成的傷口的末端約0. 5厘米(或更多)。按照本發(fā)明的這些實施方案，皮內(nèi)注射可借助于基本上與將要形成的傷口中線 平行或與將要形成的傷口邊緣平行的插入的皮下注射針進(jìn)行給藥。注射部位可以沿著 TGF-β 3將被提供給的區(qū)域的長度，彼此間隔大約1厘米?；蛘撸瑑?yōu)選地第一次治療涉及將TGF-β 3提供到現(xiàn)有傷口。本發(fā)明人認(rèn)為無論細(xì) 胞在創(chuàng)傷之前還是傷傷之后暴露于TGF-β 3，抗瘢痕形成活性相關(guān)的生物學(xué)機(jī)制是一樣的。 在任一情況下，只要在受傷之前或受傷之后使待被抑制瘢痕形成部位的細(xì)胞暴露于大約 350-1000ng治療有效量的TGF-β 3都可以達(dá)到所必需的生物學(xué)活性。在本發(fā)明將TGF-β 3提供到現(xiàn)有傷口的實施方案中，根據(jù)以傷口邊緣的厘米數(shù)測 量(如下文所討論的)的傷口的長度來確定需要的量。TGF-β 3應(yīng)該優(yōu)選沿著每一傷口邊 緣的全長來提供，甚至超過受創(chuàng)傷的區(qū)域來提供。在一優(yōu)選的實施方案中，可以沿著超過傷 口邊緣末端延伸大約0. 5厘米(或更多)的長度提供TGF-β 3。皮內(nèi)注射也代表了可以將TGF-β 3提供到現(xiàn)有傷口的優(yōu)選途徑。根據(jù)這一實施方 案，提供的皮內(nèi)注射應(yīng)給藥于每一傷口邊緣。注射部位可以優(yōu)選在傷口邊緣的半厘米內(nèi)。注射可借助于插入的基本上平行于傷口邊緣的皮下注射針來給藥。注射部位可沿著治療區(qū)域 的長度，彼此間隔大約1厘米。在上述段落中所闡明的與在第一次治療中將TGF-β 3提供到傷口有關(guān)的注意事 項也適用于其在第二次(或更進(jìn)一步的)治療中的提供。因為第二次治療發(fā)生在創(chuàng)傷已經(jīng) 發(fā)生后，因此其總是涉及將TGF-β 3提供到現(xiàn)有傷口。傷口可以是開放的或閉合的，這取決 于將要應(yīng)用的傷口處理策略。當(dāng)?shù)谝淮沃委熒婕疤峁㏕GF-β 3到將要形成傷口部位時，優(yōu)選這一提供發(fā)生在創(chuàng) 傷開始前1小時或更短的時間，優(yōu)選創(chuàng)傷開始前半小時或更短的時間，還更優(yōu)選地創(chuàng)傷開 始前15分鐘或更短的時間，而且最優(yōu)選地創(chuàng)傷開始前10分鐘或更短的時間。如果第一次治療涉及將TGF-β 3提供到現(xiàn)有傷口，提供這一治療的時間可以根據(jù) 傷口已經(jīng)形成后經(jīng)過的時間進(jìn)行選擇。在這種情況下，優(yōu)選按照本發(fā)明的第一次治療在創(chuàng) 傷2小時之內(nèi)開始，優(yōu)選創(chuàng)傷1. 5小時之內(nèi)、更優(yōu)選創(chuàng)傷1小時之內(nèi)、還更優(yōu)選創(chuàng)傷半小時 之內(nèi)、而且最優(yōu)選創(chuàng)傷15分鐘之內(nèi)開始?？蛇x擇地或另外地，第一次治療的時機(jī)可根據(jù)待治療的傷口閉合后所經(jīng)過的時間 來進(jìn)行選擇。在這種情況下，優(yōu)選按照本發(fā)明的第一次治療在傷口閉合完成的2小時之內(nèi) 開始，優(yōu)選傷口閉合完成的1. 5小時之內(nèi)、更優(yōu)選傷口閉合完成的1小時之內(nèi)、還更優(yōu)選傷 口閉合完成的半小時之內(nèi)、而且最優(yōu)選傷口閉合完成的15分鐘之內(nèi)開始。在由于臨床原因 (例如如果有必要維持傷口內(nèi)部位的通路)傷口沒有完全閉合的情況下，一旦傷口閉合到 會作為所采取的過程的部分而閉合的最大程度，仍然可以認(rèn)為傷口閉合是完全的。應(yīng)了解，根據(jù)傷口閉合后所經(jīng)過的時間進(jìn)行第一次治療時機(jī)的選擇與長時間外科 操作的情況尤其相關(guān)，在這種情況下，傷口必須保持長時間地開放以允許接近外科手術(shù)的 操作部位。治療之間所經(jīng)過的時間為8-48小時。更優(yōu)選所經(jīng)過的時間應(yīng)該為至少、更優(yōu)選至 少10小時、甚至更優(yōu)選至少12小時、仍更優(yōu)選至少14小時、還更優(yōu)選至少16小時、仍更優(yōu) 選仍為至少18小時、更優(yōu)選仍為至少20小時、甚至更優(yōu)選至少22小時、以及最優(yōu)選大約為 24小時。治療之間所經(jīng)過的時間可長達(dá)48小時，但是優(yōu)選長達(dá)約44小時，更優(yōu)選長達(dá)約40 小時，甚至更優(yōu)選長達(dá)約36小時，仍更優(yōu)選長達(dá)約32小時，還更優(yōu)選長達(dá)約28小時，以及 最優(yōu)選為約24小時。提供給待治療區(qū)域(即將要形成傷口的部位，未來的傷口邊緣或現(xiàn)有傷口的周 邊)每一厘米的TGF- β 3的量為約350至約lOOOng。提供的量可以優(yōu)選為大約350ng、400ng 或450ng。提供的量可以優(yōu)選為多于350ng、更優(yōu)選多于400ng、甚至更優(yōu)選可以多于450ng。 提供的量可以優(yōu)選為大約1000ng、900ng、800ng、700ng或600ng。提供的量可以優(yōu)選為少于 IOOOng,更優(yōu)選少于900ng，還更優(yōu)選少于800ng，甚至更優(yōu)選少于700ng而且還更優(yōu)選少于 600ng。提供的量的上限和下限可自上述句子中所列舉的那些中獨立地進(jìn)行選擇。最優(yōu)選 地提供的TGF-β 3量為大約500ng。無論提供的TGF-β 3量是多少，優(yōu)選在每一次治療中對待被抑制瘢痕形成的機(jī)體 部位的每一厘米所提供的量基本上是相同的。特別是，優(yōu)選在每一次治療中對待被抑制瘢 痕形成的機(jī)體部位的每一厘米提供量為大約500ng的TGF-β 3。
在本發(fā)明方法的實踐中，待被抑制瘢痕形成的區(qū)域的細(xì)胞應(yīng)該“沐浴”在包含大約 350-1000ng TGF-β 3的藥學(xué)上可接受的溶液中。這可以創(chuàng)造一個局部環(huán)境，其中細(xì)胞暴露 于充足的TGF-β 3以預(yù)防瘢痕形成?？捎糜趯崿F(xiàn)這一目的的治療有效量的TGF-β 3的詳細(xì) 內(nèi)容已在本發(fā)明的第一、第二和第三方面中被確定。那些否則會參與瘢痕形成的細(xì)胞接受治療有效量的TGF-β 3，無論TGF-β 3是通 過注射到傷口邊緣(或沿著未來傷口的周邊-圖11的圖面B中所顯示的技術(shù))還是通過 直接注射到將要形成傷口的部位(例如，通過形成覆蓋受創(chuàng)傷部位的水泡-圖11的圖面A 中所顯示的技術(shù))來給藥。這些給藥途徑的任一種都能夠確立TGF-β 3在細(xì)胞周圍區(qū)域中 的抗瘢痕形成濃度。然而，應(yīng)了解，必須提供給機(jī)體部位以實現(xiàn)細(xì)胞所必需的局部環(huán)境的 TGF-β 3的總量根據(jù)使用的給藥途徑而不同。當(dāng)?shù)谝淮沃委熓褂弥苯拥竭_(dá)受創(chuàng)傷部位的注射時，通過沿著未來傷口的線路并覆 蓋受創(chuàng)傷區(qū)域給予的單次注射(或連續(xù)“單次”注射)的給藥(圖11的圖面A中所示的技 術(shù))來確立細(xì)胞周圍TGF-i3 3的必需量。當(dāng)?shù)谝淮沃委熇眠_(dá)傷口每一邊緣的“成對的”注 射(或沿著每一未來傷口邊緣注射-圖11的圖面B中所示的技術(shù))時，應(yīng)了解所要提供的 TGF-β 3總量要比經(jīng)由單次注射途徑所提供的(上文所述的)TGF-β 3量大，因為需要對每 一邊緣進(jìn)行注射以治療同一區(qū)域。然而，盡管提供的TGF-β 3總量有差別，但對靶細(xì)胞生物 學(xué)效應(yīng)，以及由此的治療效應(yīng)在這兩種給藥途徑間沒有差別。優(yōu)選的是，在本發(fā)明方法中TGF-β 3借助于合適的藥物組合物給藥被提供給必需 的身體部位。通常，可以使用任一藥學(xué)上可接受的溶液，但是本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)用于本發(fā)明的組 合物可以有利地包含諸如麥芽糖或海藻糖的糖類。這些糖類可用于穩(wěn)定組合物，也可以增 加如此組成的TGF-β 3的生物學(xué)活性。優(yōu)選的組合物可以是適用于注射尤其適用于皮內(nèi)注 射的那些。許多可以用于TGF-β 3通過皮內(nèi)注射給藥的組合物的制劑為本領(lǐng)域中技術(shù)人員 熟知。發(fā)明人共同待決的公布號為WO 2007/007095的專利申請中描述了合適制劑的實例， 并在這一申請中描述的這類制劑被用于本說明書的實驗研究結(jié)果部分中所報道的研究中。為避免疑義，現(xiàn)將對本發(fā)明公開內(nèi)容中所使用的各種術(shù)語進(jìn)行進(jìn)一步的描述。應(yīng) 了解，為了簡便起見，對這些術(shù)語中的一些可能只根據(jù)本發(fā)明某些方面進(jìn)行描述。然而，除 了上下文另有要求，這些術(shù)語的下列描述都適用于本發(fā)明的所有方面。TGF- β 3含量、效價和給藥量的計算包含TGF-β 3(特別是重組的人TGF-β 3，其為用于本發(fā)明的TGF-β 3的優(yōu)選 形式)溶液的蛋白含量可以優(yōu)選通過定量酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)來確定，所述測定 利用英國國立生物標(biāo)準(zhǔn)與控制研究所(the United Kingdom National Institute for Biological Standards andControl, NIBSC)轉(zhuǎn)化生長因子 β3(人 rDNA 衍生的)參考試 劑代碼98/608進(jìn)行校準(zhǔn)。通過這種方式進(jìn)行的蛋白含量的確定允許技術(shù)人員計算出溶液 濃度并因此計算出通過特定體積溶液向身體部位的每一厘米提供的TGF-β 3的量。這一實 驗設(shè)計已被用于確定實驗結(jié)果部分使用的溶液的蛋白含量。如果技術(shù)人員不能獲取NIBSC參考試劑代碼98/608的參考樣品，發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)利 用他們自己擁有的 TGF-β 3 產(chǎn)物(Lonza Bulk DrugSubstance Lot 205-0505-005)作為標(biāo) 準(zhǔn)品的ELISA產(chǎn)生的值大約為利用NIBSC參考試劑代碼98/608所獲得的值的52%。如果 希望使用這一替代標(biāo)準(zhǔn)品代替NIBSC參考試劑代碼98/608，應(yīng)該由此確定TGF-β 3的必需
11量。按照本發(fā)明，使用的TGF-β 3的生物學(xué)活性(例如效價)可以通過抑制貂肺上皮 細(xì)胞系(MLEC)(美國典型微生物菌種保藏中心(ATCC)目錄號為CCL-64)來確定。在一優(yōu) 選實施方案中，生物學(xué)活性可通過利用上文提及的英國國立生物標(biāo)準(zhǔn)與控制研究所參考試 劑代碼98/608進(jìn)行校準(zhǔn)的測定進(jìn)行定量。參考試劑代碼98/608被認(rèn)為每微克TGF- β 3蛋 白具有10000任意單位(AU)的特異生物學(xué)活性，而且通過比較感興趣樣品和參考試劑代碼 98/608的MLEC抑制活性，以AU表示的感興趣樣品的生物學(xué)活性能夠容易地確定。因此500ng劑量的TGF-β 3提供5000AU的TGF-β 3活性。發(fā)明人相信量為大約 3500-6500AU的TGF-β 3活性可以實現(xiàn)類似的治療效應(yīng)?？梢杂纱朔治龀霰景l(fā)明公開中所 使用的500ng TGF-β 3的參照。要形成傷口的部位的厘米數(shù)為便于參照，要形成傷口部位的長度可以以厘米數(shù)來測量以便確定為減少本發(fā)明 所述的瘢痕形成而需要提供的TGF-β 3的量。優(yōu)選的是，計算的待治療的長度超出欲形成 傷口的預(yù)期長度，以確保治療有效量的TGF-β 3被提供到傷口末端。因此優(yōu)選計算出的將 要形成傷口的部位的長度(從而即待治療部位的長度)延伸超過預(yù)期傷口每一末端大約 0.5厘米的距離。未來傷口邊緣的厘米數(shù)出于本發(fā)明公開的目的，如以未來傷口邊緣的厘米數(shù)測量的將要形成傷口部位的 長度應(yīng)該計算為將要形成的傷口的每一邊緣的長度總和(以厘米為單位)。優(yōu)選計算出待 治療的長度延伸超過要形成傷口的邊緣的末端，這可以幫助確保治療有效量的TGF-β 3被 提供到傷口末端。因此優(yōu)選計算出的未來傷口邊緣的長度(以及由此待治療部位的長度) 在要形成的傷口的每一末端延伸大約0.5厘米(或更多)的距離。傷口邊緣的厘米數(shù)出于本發(fā)明公開的目的，如以傷口邊緣的厘米數(shù)測量的傷口長度應(yīng)該計算為傷口 每一邊緣長度的總和(以厘米為單位)。優(yōu)選計算出的待治療部位的長度延伸超過傷口邊 緣的末端。這可以有助于確保治療有效量的TGF-β 3被提供到傷口末端。因此優(yōu)選本發(fā)明 中計算出的待治療傷口邊緣長度延伸超過傷口每一末端大約0. 5厘米(或更多)的距離。TGF-β 3出于本發(fā)明公開的目的，TGF-β 3可被視為包含含有如序列ID No. 1所示的氨基 酸序列的肽。TGF-β 3可以優(yōu)選為二聚體的TGF-β 3，但是發(fā)明人相信也可以利用單體形式 的TGF-β 3來實現(xiàn)本文所描述的瘢痕形成的抑制作用。發(fā)明人相信也可以利用TGF-β 3的治療有效片段或衍生物來實現(xiàn)本發(fā)明公開內(nèi) 容所描述的瘢痕形成抑制作用?？筛鶕?jù)序列ID No. 1中所提供的序列信息容易地確定 TGF-β 3片段，而且可利用本領(lǐng)域中技術(shù)人員所熟知的方法制備基于這一序列信息的衍生 物。發(fā)明人共同待決的公布號為WO 2007/104845的申請中公開了合適的衍生物的例子?？山Y(jié)合大量合適的實驗?zāi)Ｐ偷娜我粋€容易地評估所述TGF-β 3片段或衍生物的 治療有效性。這樣的模型可包括指示生物學(xué)有效性(期望其與治療有效性相關(guān))的體外模 型或利用人類或非人類個體的體內(nèi)研究。僅為了舉例，為研究TGF-β 3片段或衍生物的治 療有效性，可以使用或應(yīng)用在說明書中別處所闡明的實驗結(jié)果部分所描述的技術(shù)。
如果期望使用除了野生型二聚活性片段(其包含兩個與序列IDNo. 1對應(yīng)的肽鏈) 以外的TGF-β 3形式，應(yīng)了解這類因子的分子量可能與天然存在形式的那些不同。因此，用 于本發(fā)明的藥物或方法的這類因子的治療有效量可能不同，以反映出分子量的差異。從而， 如果使用分子量為野生型二聚活性片段分子量一半的TGF-β 3形式，那么合適的治療有效 量將為說明書在別處所闡明的那些的一半。預(yù)防/抑制/減少/最小化瘢痕形成應(yīng)該理解，本發(fā)明上下文中瘢痕形成的抑制作用包括與對照治療或未治療傷口愈 合時發(fā)生的瘢痕形成水平比較，根據(jù)本發(fā)明方法(或本發(fā)明的試劑盒或藥物)治療的傷口 愈合時所實現(xiàn)的瘢痕形成的任何程度的預(yù)防、減少、最小化或抑制。為了簡便起見，本說明 書主要涉及利用TGF-β 3 “抑制”瘢痕形成，然而，除了上下文另有要求外，應(yīng)該認(rèn)為這些涉 及處也包括利用TGF-β 3預(yù)防、減少、最小化瘢痕形成。藥學(xué)上可接受的如本文所使用的，短語“藥學(xué)上可接受的”指的是“通常認(rèn)為是安全的”分子實體 和組合物，例如，其為生理學(xué)上耐受的、而且當(dāng)給藥于人體時，通常不會產(chǎn)生過敏性或諸如 胃部不適、眩暈等類似的不利反應(yīng)。優(yōu)選地，如本文所使用的，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”表示 美國聯(lián)邦或國會的監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或美國藥典或其它公認(rèn)的用于動物和更特別用于人的 藥典中所列舉的。藥物組合物和給藥方法當(dāng)可能使用本發(fā)明所提供的組合物用于現(xiàn)狀治療時，優(yōu)選以藥物制劑的形式將其 進(jìn)行給藥，例如以與結(jié)合預(yù)期給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實踐而選擇的合適的藥物賦形劑、稀釋 劑或載體的混合物的形式。因此，在一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物或制劑，其包含至少 一種活性組分或其藥學(xué)可接受的衍生物與藥學(xué)可接受的賦形劑、稀釋劑和/或載體結(jié)合。 賦形劑、稀釋劑和/或載體必須在如下意義上是“可接受的”與其它制劑成分相兼容并且對 其受者無害。本發(fā)明的組合物能夠配制成以任一便利方式給藥以用于人類或獸醫(yī)醫(yī)學(xué)。因此本 發(fā)明在其范圍內(nèi)包括包含適合用于人類或獸醫(yī)醫(yī)學(xué)的本發(fā)明產(chǎn)物的藥物組合物?？山邮艿挠糜谥委熡猛镜馁x形劑、稀釋劑和載體在藥學(xué)領(lǐng)域中是被熟知的，而 且在例如 Remington :The Science and Practice of Pharmacy (雷明頓藥學(xué)禾斗學(xué)與實 踐)· Lippincott Williams & Wilkins (A. R. Gennaro edit. 2005)中被描述。能夠結(jié)合預(yù) 期給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實踐來進(jìn)行藥物賦形劑、稀釋劑和載體的選擇。傷 口發(fā)明人相信利用本發(fā)明的TGF-β 3的治療的方法可以用于有益地抑制各種類型 傷口的瘢痕形成。其中利用本發(fā)明的藥物和方法可以抑制瘢痕形成的具體傷口的例子包括，但不局 限于，獨立選自下述的那些皮膚傷口，眼部傷口(包括抑制諸如LASIK外科手術(shù)、LASEK外 科手術(shù)、PRK外科手術(shù)、青光眼濾過外科手術(shù)、白內(nèi)障外科手術(shù)或容易造成晶狀體囊瘢痕形 成的外科手術(shù)的眼部外科手術(shù)導(dǎo)致的瘢痕形成)諸如產(chǎn)生角膜瘢痕化的那些，容易造成囊 性收縮的傷口(其常見于乳房植入物周圍)，血管傷口，中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)傷口(預(yù)防、減 少或抑制這一部位的瘢痕形成可增強(qiáng)神經(jīng)元重接和/或神經(jīng)元功能)，肌腱、韌帶或肌肉傷口，包括嘴唇和上顎的口腔傷口(例如抑制唇裂或腭裂治療導(dǎo)致的瘢痕形成)，諸如肝臟、 心臟、腦、消化組織和生殖組織的內(nèi)臟器官傷口，諸如腹腔、骨盆腔和胸腔的體腔傷口(抑 制這一部位的瘢痕形成可以減少粘連形成發(fā)生的數(shù)目和/或形成粘連的大小)和外科手術(shù) 傷口(尤其是與諸如瘢痕修復(fù)的美容操作有關(guān)的傷口)。特別優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物和傷口 用于預(yù)防、減少或抑制與皮膚傷口有關(guān)的瘢痕形成。瘢痕形成的評估瘢痕形成的程度和所實現(xiàn)的瘢痕形成的任何抑制可以通過對瘢痕的臨床宏觀性 評估進(jìn)行評估。這可以通過對個體瘢痕的直接評估、或者通過瘢痕的攝影圖像、或取自瘢痕 的硅模具或由這些模具制成的全壓式石膏模型的評估來實現(xiàn)。出于本發(fā)明公開的目的，應(yīng) 該認(rèn)為“被治療的瘢痕”包含本發(fā)明治療的傷口愈合時所產(chǎn)生的瘢痕。當(dāng)評估瘢痕形成時可以考慮的瘢痕的宏觀特征包括i)瘢痕的顏色。與周圍皮膚相比，瘢痕通常是低色素或色素沉著過度的。當(dāng)被治 療的瘢痕的色素沉著比未治療的瘢痕的色素沉著更近似接近無瘢痕皮膚的色素沉著時，可 以證明抑制了瘢痕形成。瘢痕經(jīng)?？杀戎車つw更紅。在這種情況下，當(dāng)被治療的瘢痕的 紅色與未治療的瘢痕相比消退地更早或更完全或更近似周圍皮膚的外觀時，可以證明抑制 了瘢痕形成。ii)瘢痕的高度。與周圍皮膚相比，瘢痕通常是隆起的或凹陷的。當(dāng)被治療的瘢痕 的高度比未治療瘢痕的高度更接近無瘢痕皮膚的高度(例如，既沒有隆起又沒有凹陷)時， 可以證明抑制了瘢痕形成。能夠直接在患者身上(例如借助于輪廓測定法)或間接地(例 如通過對取自瘢痕的模具的輪廓測定法)測量瘢痕高度。iii)瘢痕的表面質(zhì)地。瘢痕表面比周圍皮膚相對更光滑(產(chǎn)生有“光澤”外觀的 瘢痕)或比周圍皮膚更粗糙。當(dāng)被治療的瘢痕的表面質(zhì)地比未治療的瘢痕的表面質(zhì)地更接 近無瘢痕皮膚的表面質(zhì)地時，可以證明抑制了瘢痕形成。也可以直接在患者身上(例如借 助于輪廓測定法)或間接地(例如通過對取自瘢痕的模具的輪廓測定法)測量表面質(zhì)地。iv)瘢痕的硬度。瘢痕的異常組成和結(jié)構(gòu)意味著它們通常比瘢痕周圍未受損的皮 膚更硬。在這種情況下，當(dāng)被治療的瘢痕的硬度比未治療的瘢痕的硬度更近似接近無瘢痕 皮膚的硬度時，可以證明抑制了瘢痕形成。優(yōu)選地，被治療的瘢痕顯示了瘢痕形成的抑制，如根據(jù)本說明書中所闡述的用于 宏觀評估的至少一個參數(shù)所評估的。更優(yōu)選地，被治療的瘢痕根據(jù)這些參數(shù)的至少兩個、更 優(yōu)選地這些參數(shù)的至少三個、最優(yōu)選地這些參數(shù)的至少四個(例如，上文列出的所有四個 參數(shù))可以顯示抑制的瘢痕形成。瘢痕的高度、長度、寬度、表面積、凹陷和隆起體積、粗糙/光滑度能夠直接在個體 身上測量，例如通過利用光學(xué)3D測量裝置。瘢痕測量能夠直接在個體身上或在代表瘢痕的 模具或模型上(這可以通過制造瘢痕壓跡的硅模具復(fù)制品及隨后從硅模具產(chǎn)生石膏模型 來形成)進(jìn)行。所有這些方法都能夠通過利用光學(xué)3D測量裝置或通過瘢痕照片的圖像分 析進(jìn)行分析。3D光學(xué)測量沿所有軸的分辨率都在微米范圍內(nèi)，這保證了所有皮膚和瘢痕參 數(shù)的精確測定。技術(shù)人員也注意到另外的能夠用于研究合適參數(shù)的非侵入性辦法和裝置， 其包括用于手動測量的卡尺、超聲波、3D攝影(例如利用自Canfield Scientific, Lie得 到的硬件和/或軟件)和高分辨率磁共振成像。
通過與未治療的瘢痕相比，被治療的瘢痕在其高度、長度、寬度、表面積、凹陷或隆 起體積、粗糙和光滑度的減少或其任意組合，可以證明抑制了瘢痕形成。用于宏觀評估瘢痕的一個優(yōu)選的方法是整體評估。這可以通過由專家組或非專業(yè) 小組(lay panel)對宏觀照片進(jìn)行評估或者臨床上通過臨床醫(yī)師或患者自己的宏觀評估來 實現(xiàn)。借助于VAS (視覺模擬評分)或分類量表的方式來記錄評估。下文描述了合適的評估 瘢痕形成(和從而所獲得的任何瘢痕形成的減少)的參數(shù)的例子。Duncan et al. (2006)， Beausang et al. (1998)和van Zuijlen et al. (2002)描述了其它合適的參數(shù)的實例和記 錄這些參數(shù)評估的方式。利用視覺模擬評分(VAS)瘢痕得分的評估利用基于瘢痕形成的VAS可以記錄瘢痕評估。合適的用于瘢痕評估中的VAS可基 于Duncan et al. (2006)或Beausang et al. (1998)所描述的方法。它通常是IOcm的線， 其中Ocm被認(rèn)為是難以覺察的瘢痕而IOcm為非常不良的肥大性瘢痕。VAS以這種方式使用 使得瘢痕形成評估的記錄和量化變得容易。VAS評分可用于瘢痕形成的宏觀和/或微觀評 估。僅為了舉例，合適的瘢痕形成的宏觀評估可利用由自左到右表示0(對應(yīng)正常皮 膚)到10(預(yù)示為不良瘢痕)等級的O-IOcm線組成的VAS進(jìn)行?；隈：劭傮w評估，評估 者可在IOcm線上做標(biāo)記。這可以將諸如瘢痕的高度、寬度、輪廓和顏色的參數(shù)考慮在內(nèi)。 最好的瘢痕(通常寬度小，其顏色、高度和輪廓如同正常皮膚)可在朝著比例尺“正常皮膚” 端處記下(VAS線的左側(cè))，而不良瘢痕(通常寬度大，隆起的側(cè)面和不規(guī)則輪廓及蒼白的顏 色)可以在朝著比例尺的“不良瘢痕”端處記下(VAS線的右側(cè))。然后這些標(biāo)記可自左側(cè) 測量以為瘢痕評估提供以厘米為單位的最終值(到一位小數(shù))。瘢痕形成的替代評估(無論是宏觀評估還是微觀評估)包括比較兩個瘢痕或兩個 瘢痕片段(諸如一個治療的片段和另一個未治療的或?qū)φ罩委煹钠?以確定哪一個具有 更優(yōu)選的外觀，這種替代評估可以利用包含被垂直線分割的兩個IOOmmVAS線的VAS進(jìn)行。 在這種類型的VAS中，這兩個VAS線對應(yīng)于比較的兩個瘢痕，而垂直線表示0(提示比較的 瘢痕間沒有可察覺的差異)。100%極端值(在每一 VAS線末端的100mm)提示一個瘢痕已 變得與周圍皮膚相比是不可察覺的。以這種方式評估瘢痕宏觀外觀的特別優(yōu)選方法稱為全球瘢痕比較量表(The Global Scar Comparison Scale (GSCS))。這一量表已被歐洲藥品管理局(EMEA)積極采納， 并且被公認(rèn)為是可以評估疤痕并確定與疤痕形成抑制有關(guān)的臨床相關(guān)指標(biāo)的優(yōu)選量表。特 別是，可以優(yōu)選使用基于臨床專家組評估的GSCS版本，這被EMEA視為是特別相關(guān)的。當(dāng)利用諸如GSCS這一類型的VAS比較成對瘢痕時，評估者首先要確定哪個瘢痕具 有優(yōu)選的外觀或是否這兩者間沒有可察覺到的差異。如果沒有可察覺到的差異，通過在0 垂直線處做一標(biāo)記來記錄。如果存在可察覺的差異，評估者利用這兩個瘢痕中更差的一個 作為錨定來確定在優(yōu)選瘢痕中發(fā)現(xiàn)的改善水平，然后在量表的相關(guān)部分記上分?jǐn)?shù)(即根據(jù) 瘢痕外觀的比較設(shè)定一個等級)。標(biāo)記的點表示相比錨定瘢痕改善的百分比。發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在評估瘢痕宏觀或微觀外觀中使用的這一類型的VAS測量提供 了很多優(yōu)勢。因為這些VAS實質(zhì)上是直覺的，它們1)利用不同皮膚類型中嚴(yán)重程度不同 的瘢痕參照圖像降低了大規(guī)模培訓(xùn)的需求，這使得這一工具在大的3期試驗中使用相對簡
15便；2)減少了數(shù)據(jù)的差異性與藥物和安慰劑疤痕兩次獨立的評估不同，對每一瘢痕對進(jìn) 行一次評估；3)并入了 VAS已確立的原則(即數(shù)據(jù)的連續(xù)性分布)與在同一量表分級的優(yōu) 勢；和4)使臨床醫(yī)師和患者就藥物效應(yīng)(改善百分比)的交流更加簡單。現(xiàn)將根據(jù)所附的實驗結(jié)果部分和附圖對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，其中圖1比較在單次治療中提供到人傷口的不同劑量的TGF_i33的抗瘢痕形成的活 性。圖2比較在彼此相隔大約1小時內(nèi)給藥的兩次治療中，提供到人傷口的不同劑量 TGF-β 3的抗瘢痕形成的活性。圖3比較在彼此相隔大約24小時給藥的兩次治療中，提供到人傷口的不同劑量 TGF-β 3的抗瘢痕形成的活性。兩次500ng劑量的TGF-β 3治療與本發(fā)明一致而且能夠看 到其減少瘢痕形成顯著強(qiáng)于其它研究的治療方案。圖4比較TGF-β 3治療的瘢痕或安慰劑治療對照瘢痕的宏觀圖像。在相隔大約24 小時的治療中不同量的TGF-β 3被提供到這三個TGF-β 3治療的瘢痕。圖5示例TGF-β 3或安慰劑治療的傷口愈合時所形成的瘢痕的三維模擬或瘢痕測量。圖6示例TGF-β 3或安慰劑治療的傷口愈合時所形成的瘢痕的三維模擬或瘢痕測量。圖7示例用TGF-β 3(與本發(fā)明一致)或安慰劑治療的傷口愈合時所形成的瘢痕 的三維模擬或瘢痕測量。圖8比較用TGF-β 3的四種實驗性方案(在相隔大約1小時的兩次治療中的每次 給藥每厘米5ng、50ng、200ng或500ng的量)的一種治療的傷口愈合時所形成的瘢痕隨時 間變化所實現(xiàn)的抑制瘢痕形成的量值。圖9比較使用TGF-β 3的四種實驗性方案(在相隔大約24小時的兩次治療中的 每次給藥每厘米5ng、50ng、200ng或500ng的量)的一種治療的傷口愈合時所形成的瘢痕 隨時間變化所實現(xiàn)的抑制瘢痕形成的量值。用500ng治療的傷口已進(jìn)行與本發(fā)明一致的治療。圖10示例使用全球瘢痕比較量表(The Global Scar ComparisonScale)比較發(fā)生 在使用TGF-β 3的四種實驗性方案(在相隔大約24小時的兩次治療中的每次給藥每厘米 5ng、50ng、200ng或500ng)的一種治療的傷口愈合時所形成的瘢痕的抑制瘢痕形成的量值 所獲得的結(jié)果。用500ng治療的傷口已按照本發(fā)明進(jìn)行治療。使用GSCS的瘢痕形成評估 在創(chuàng)傷后進(jìn)行12個月。標(biāo)記為A的結(jié)果是由調(diào)查研究的外科醫(yī)師在患者身上進(jìn)行GSCS評 估所獲得的那些，而標(biāo)記為B的結(jié)果是由獨立的臨床專家組進(jìn)行GSCS評估所獲得的那些。圖11顯示示例了用于將TGF-β 3按照本發(fā)明提供到希望抑制疤痕形成的身體部 位的優(yōu)選給藥途徑的照片。圖面A顯示包含TGF- β 3的組合物在待被創(chuàng)傷的部位的單次注 射給藥。這一注射形成了覆蓋傷口將要形成部位(兩個內(nèi)部圓點間)和覆蓋延伸超過預(yù)期 傷口部位區(qū)域(外部圓點所界定的區(qū)域)的水泡。圖面B顯示包含TGF-β 3的組合物沿 未來傷口邊緣的給藥。實線示例了傷口將要形成的部位，而且圍繞未來傷口的圓點顯示了 TGF- β 3的可能給藥部位。圖面C和D示例了包含TGF- β 3的組合物給藥于現(xiàn)有傷口(其 已經(jīng)用縫線封閉)邊緣。
圖12示例了皮內(nèi)注射可用于按照本發(fā)明的TGF-β 3給藥的優(yōu)選方法。將TGF-β 3 經(jīng)其進(jìn)行給藥的皮下針經(jīng)皮內(nèi)插入到部位B并行進(jìn)到部位Α(與部位B相隔距離1cm)。然 后隨著針回撤，將100 μ 1組合物均勻地注射到部位A和B間。然后針經(jīng)皮內(nèi)插入到部位C， 并向部位B的方向行進(jìn)，并且重復(fù)這一給藥過程。當(dāng)完成傷口一個邊緣的給藥時，然后可以 在另一邊緣重復(fù)給藥。實驗結(jié)果圖 1圖1顯示了來自發(fā)明人所進(jìn)行的臨床實驗的數(shù)據(jù)，其產(chǎn)生了表示利用在單次治療 中給予各種不同劑量的TGF-β 3所實現(xiàn)的抗瘢痕形成效應(yīng)的劑量反應(yīng)曲線。將作為單一皮 內(nèi)注射的TGF-β 3或安慰劑給藥于1厘米實驗性傷口。該圖將TGF-β 3治療效應(yīng)顯示為來 自以部位作為因子的方差分析(ANOVA)的最小二乘均數(shù)和95%置信區(qū)間。為檢測治療效 應(yīng)，從每一個體另一只胳膊上的解剖學(xué)上匹配的安慰劑ToScar中減去給予TGF-β 3的瘢痕 的ToScar。ToScar計算為自第6周和第3、4、5、6和7月VAS分?jǐn)?shù)(mm)的總和。在給藥后 的6個時間點(第6周、第3-7月)，由獨立的非專業(yè)小組利用IOOmmVAS線對瘢痕進(jìn)行評 分。圖1示例了傷口邊緣的每一厘米單次應(yīng)用50ng、200ng和500ng/100y 1 TGF-β 3 可有效抑制瘢痕形成。改善水平顯示為典型的鐘型劑量反應(yīng)曲線，在200ng/y 1劑量處觀 察到最大改善(TGF-i3 3治療的傷口中瘢痕改善平均> 50mm)，并且藥物功效在接近劑量范 圍頂端即每厘米傷口邊緣為500ng/100l·! 1時下降。圖 2圖2顯示了來自發(fā)明人進(jìn)行的臨床實驗的數(shù)據(jù)。在這一研究中，在兩次單獨的治 療中分別給予TGF_i3 3和安慰劑(借助于兩次皮內(nèi)注射)。然而，不同于本發(fā)明的方法， 第一治療就發(fā)生在創(chuàng)傷之前，而第二次治療發(fā)生在傷口剛剛閉合后，即兩次劑量的給藥彼 此相隔大約1小時內(nèi)(第一次劑量在創(chuàng)傷之前的10-30分鐘，且第二次在創(chuàng)傷后10-30分 鐘)。該圖將TGF-β 3治療效應(yīng)顯示為來自以部位作為因子的方差分析(ANOVA)的最小二 乘均數(shù)和95%置信區(qū)間。為檢測治療效應(yīng)，從每一個體另一只胳膊上在解剖學(xué)上匹配的安 慰劑ToScar中減去給予TGF-β 3的瘢痕的ToScar。ToScar計算為自第6周和第3、4、5、 6和7月VAS分?jǐn)?shù)(mm)的總和。由獨立的非專業(yè)小組在給藥后的6個時間點(第6周、第 3-7月)利用IOOmmVAS線對瘢痕進(jìn)行評分。圖2示例了傷口閉合前和剛剛閉合后(即兩次劑量在在大約1小時內(nèi)給藥)，傷 口邊緣的每一厘米應(yīng)用兩次5ng、50ng、200ng和500ng/100y 1 TGF-β 3可有效抑制瘢痕 形成。改善水平顯示為典型的鐘型劑量反應(yīng)曲線，在200ng/y 1劑量處觀察到最大改善 (TGF- β 3治療的傷口中瘢痕改善平均> 40mm)，并且藥物功效接近劑量范圍頂端，即傷口 邊緣每一厘米500ng/100 μ 1時下降。給予兩次TGF-β 3治療(大約1小時內(nèi))的改善程 度和劑量反應(yīng)曲線與給予一次TGF-β 3治療的改善程度和劑量反應(yīng)曲線(見圖1)是可比 較的，盡管總的抑制瘢痕形成程度略微低于單一給藥方案。這顯示了 TGF-β 3的重復(fù)給藥 (不是以本發(fā)明所描述的方法)不會導(dǎo)致更強(qiáng)的瘢痕形成抑制而且若有區(qū)別的話其稍微減 弱了這一化合物的抗瘢痕形成功效。圖 3
圖3顯示使用本發(fā)明方法所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)，在兩次治療中給予TGF-β 3和安慰 劑(每一次通過皮內(nèi)注射)，第一次在創(chuàng)傷之前而第二次在創(chuàng)傷后大約24小時。該圖將 TGF-β 3治療效應(yīng)顯示為來自以部位作為因子的方差分析(ANOVA)的最小二乘均值和95% 置信區(qū)間。為檢測治療效應(yīng)，從每一個體另一只胳膊上在解剖學(xué)上匹配的安慰劑ToScar中 減去給予TGF-β 3的瘢痕的ToScar。ToScar計算為自第6周和第3、4、5、6和7月VAS分 數(shù)(mm)的總和。由非專業(yè)小組在給藥后的6個時間點(第6周、第3-7月)利用IOOmmVAS 線對瘢痕進(jìn)行評分。圖3示例了創(chuàng)傷之前和創(chuàng)傷后大約24小時，傷口邊緣的每一厘米應(yīng)用兩次5ng、 50ng、200ng和500ng/100l·! 1 TGF-β 3有效抑制了瘢痕形成。在這些實驗性治療方法中，按 照本發(fā)明的這種方法(即在相隔24小時的治療中給予500ng TGF-i3 3的方法)明顯比其 它方法更有效。根據(jù)圖1和2中給出的上述數(shù)據(jù)，令人驚訝地，改善水平并沒有顯示出典型的鐘 形劑量反應(yīng)曲線。而且，最大程度的改善是兩次(創(chuàng)傷前和創(chuàng)傷后大約24小時)給予 500ng/100y 1劑量的TGF-i3 3治療所實現(xiàn)的這一發(fā)現(xiàn)是令人驚訝地(在以這種方式用 TGF-β 3治療的傷口中產(chǎn)生了平均> 60mm的瘢痕改善)。圖 4圖4顯示來自三個體的代表性宏觀圖像，示例了利用不同TGF-β 3治療方案抑 制瘢痕形成所達(dá)到的不同程度。這些宏觀圖像來源于發(fā)明人所進(jìn)行的臨床實驗中安慰劑 治療和TGF-β 3治療(相隔大約24小時對傷口邊緣的每一厘米給予兩次50ng、200ng和 500ng/100y 1 TGF-β 3)傷口愈合時所產(chǎn)生的個體內(nèi)瘢痕。每一次治療中給予同樣量的 TGF- β 3，而且所使用的量顯示在題注中(頂部左側(cè)顯示傷口邊緣每一厘米50ng/100 μ 1 TGF-β 3，頂部右側(cè)是同一個體使用安慰劑沖間左側(cè)顯示傷口邊緣每一厘米200ng/100y 1 TGF-β 3，中間右側(cè)是同一個體使用安慰劑；底部左側(cè)顯示傷口邊緣每一厘米500ng/100y 1 TGF-β 3，底部右側(cè)是同一個體使用安慰劑)。能夠看到本發(fā)明方法治療的傷口(底部左側(cè))受益于所實現(xiàn)的最強(qiáng)的瘢痕形成抑 制作用。圖 5圖5顯示對來自疤痕的硅模具進(jìn)行輪廓測定法分析所獲得的3維模擬和瘢痕測 量，所述疤痕為在發(fā)明人所進(jìn)行的臨床實驗中用安慰劑治療和TGF-β 3治療(相隔大約24 小時對傷口邊緣的每一厘米給予兩次100μ 1的50ng/100y 1的TGF-0 3或100μ 1安慰劑) 的傷口愈合時產(chǎn)生。注意這不是按照本發(fā)明的治療方法，但是(連同圖6)可用來提供可比 較的數(shù)據(jù)，其說明了按照本發(fā)明的治療方法的令人驚訝的功效(其結(jié)果在圖7中闡明)。頂部圖面顯示了初始的3維模擬，而為了清楚起見，底部圖面示例了用白色箭頭 劃分的瘢痕界限，而圖像剩余區(qū)域為瘢痕周圍的正常皮膚。通過輪廓測定法對每一個瘢痕 的一系列量化參數(shù)進(jìn)行分析，并證明與安慰劑相比TGF-β 3治療的瘢痕表面積有30. 21% 的減少(TGF-β 3治療的傷口瘢痕表面積=12. 823mm2 ；安慰劑治療的傷口瘢痕表面積= 18. 375mm2)。圖 6圖6顯示對來自疤痕的硅模具進(jìn)行輪廓測定法分析所獲得的3維模擬和瘢痕測
18量，所述疤痕為發(fā)明人所進(jìn)行的臨床實驗中安慰劑治療和TGF-β 3治療(相隔大約24小時 對傷口邊緣的每一厘米給予兩次100 μ 1的200ng/100 μ 1 TGF-β 3或100 μ 1安慰劑)的 傷口愈合時所產(chǎn)生的瘢痕。正如圖6中所顯示的結(jié)果，這并不構(gòu)成按照本發(fā)明的治療方法， 但是可用來提供可比較的數(shù)據(jù)，其顯示了按照本發(fā)明的治療方法的令人驚訝的功效(其結(jié) 果在圖7中闡明)。頂部圖面顯示了初始的3維模擬，而為了清楚起見，底部圖面示例了用白色箭 頭劃分的瘢痕界限，而圖像剩余區(qū)域為瘢痕周圍的正常皮膚。通過輪廓測定法對每一個 瘢痕的一系列量化參數(shù)進(jìn)行分析，并證明了與安慰劑相比，TGF-β 3治療的瘢痕表面積有 75. 19%的減少(TGF-β 3治療的傷口瘢痕表面積=3. 532mm2 ；安慰劑治療的傷口瘢痕表面 積=14.239mm2)。輪廓測定法分析也證明，與安慰劑治療相比，TGF-β 3治療的瘢痕隆起體 積有73. 33%的減少(TGF-β 3治療的傷口瘢痕隆起體積=0. 0008mm3 ；安慰劑治療的傷口 瘢痕隆起體積=0. 003mm3)。圖 7圖7顯示對來自疤痕的硅模具進(jìn)行輪廓測定法分析所獲得的3維模擬和瘢痕測量 以示例本發(fā)明的方法的令人驚訝的功效，所述疤痕為在采取的臨床實驗中用安慰劑治療和 TGF- β 3治療(相隔大約24小時對傷口邊緣的每一厘米給予兩次100 μ 1的500ng/100 μ 1 的TGF-β 3或100 μ 1安慰劑)的傷口愈合時所產(chǎn)生的瘢痕。頂部圖面顯示了初始的3維模擬，而為了清楚起見，底部圖面示例了用白色箭頭 劃分的瘢痕界限，而圖像剩余區(qū)域為瘢痕周圍的正常皮膚。如所能見到的，TGF-β 3治療后 沒有可察覺到的瘢痕，即輪廓測定法技術(shù)不能將用本發(fā)明的治療方法治療的傷口愈合時產(chǎn) 生的傷口與周圍未受傷的正常皮膚中區(qū)分。因此，通過輪廓測定法分析的量化參數(shù)證明與 安慰劑相比按照本發(fā)明的TGF-β 3治療的瘢痕表面積和瘢痕隆起體積有100%的減少，因 為TGF-β 3治療后沒有可察覺到的瘢痕(安慰劑治療的傷口瘢痕表面積=12. 71mm2)。圖7中所闡明的結(jié)果清楚地顯示了與使用TGF-β 3的其它(治療有效的)治療相 比，本發(fā)明方法的令人驚訝的抑制傷口愈合所形成的瘢痕形成功效。圖 8圖8示例了來自發(fā)明人所進(jìn)行的臨床實驗的數(shù)據(jù)，其中在兩次治療中(每次包含 檢測物質(zhì)的皮內(nèi)注射給藥)給予TGF-β 3或安慰劑，第一次治療發(fā)生在創(chuàng)傷前而第二次治 療在傷口剛剛閉合后，即兩次劑量大約在1小時內(nèi)(創(chuàng)傷前10-30分鐘和創(chuàng)傷后10-30分 鐘)給藥。應(yīng)認(rèn)識到這一實驗性治療方法以及圖8中顯示的其結(jié)果并不代表按照本發(fā)明的 治療方法，而是一種替代的(治療有效的)治療方法，其說明了本發(fā)明方法的令人驚訝的功 效。圖8將TGF_i3 3(此處標(biāo)記為〃 Juvista")和安慰劑的治療效應(yīng)顯示為視覺模擬 評分(VAS)的平均分?jǐn)?shù)(mm)。由一個獨立的非專業(yè)小組在給藥后的6個時間點(第6周和 第3-7月)利用IOOmmVAS線對瘢痕進(jìn)行評分。圖8示例了通過在傷口閉合前和傷口剛剛閉合后(即兩次劑量在大約1小時內(nèi)) 傷口邊緣每一厘米兩次應(yīng)用100 μ 1的5ng、50ng、200ng和500ng/ μ 1 TGF- β 3抑制瘢痕形 成。改善水平是劑量反應(yīng)性的而且通常在早期的時間點(第6周往前)首先明顯起來并且 維持在整個評估期(即在這一研究中直到第7個月)。
*顯示TGF-β 3與安慰劑治療間的顯著性差異(ρ < 0. 05)。圖 9圖9示例了來自發(fā)明人所進(jìn)行的臨床實驗的數(shù)據(jù)，其比較了按照本發(fā)明的治療方 法和其它使用TGF-β 3的治療有效的抗瘢痕形成治療。這一結(jié)果示例了本發(fā)明的方法與其 它治療相比的令人驚訝的功效。在兩次治療中借助皮內(nèi)注射方式給予TGF-β 3和安慰劑，第一次在創(chuàng)傷前而第二 次大約在24小時后。該圖將TGF_i3 3(再次標(biāo)記為"Juvista")和安慰劑的治療效應(yīng)顯 示為視覺模擬評分(VAS)的平均分?jǐn)?shù)(mm)。通過一個獨立的非專業(yè)小組在給藥后的6個時 間點(第6周和第3-7月)利用IOOmmVAS線對瘢痕進(jìn)行評分。圖9示例了通過在創(chuàng)傷前和創(chuàng)傷后大約24小時傷口邊緣每一厘米兩次應(yīng)用 100 μ 1的5ng、50ng、200ng和500ng/ μ 1 TGF- β 3抑制瘢痕形成。改善水平是劑量反應(yīng)性 的，而且通常在早期的時間點(第6周往前)首先明顯起來并且維持在整個評估期(例如 在這一研究中直到第7個月)。令人驚訝的是，效應(yīng)強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于以前數(shù)據(jù)所預(yù)期的。能夠 看到本發(fā)明方法(其中在每一次治療中機(jī)體治療部位的每一厘米提供500ng TGF-β 3)比 其它治療方法(其自身仍然是治療有效的)更為令人驚訝地有效。*表示TGF-33與安慰劑治療間的顯著性差異(ρ < 0. 05)。圖 10當(dāng)利用歐洲藥品管理局優(yōu)選的瘢痕形成評估工具_(dá)全球瘢痕比較量表(GSCS)，將 本發(fā)明的方法所提供的抗瘢痕形成效應(yīng)與實驗性治療方案所實現(xiàn)的抗瘢痕形成效應(yīng)相比 較時，本發(fā)明方法和藥物的令人驚訝的有益效應(yīng)會更加明顯。在說明書中別處描述了 GSCS，而且其包含“雙重VAS”這使得它在抗瘢痕形成效應(yīng) 評估中能夠產(chǎn)生比傳統(tǒng)的“單個的VAS”方法更高的靈敏度。圖10顯示了用按照本發(fā)明的治療方法或三個實驗性對照治療之一治療的傷口愈 合后發(fā)生的瘢痕形成的比較結(jié)果。利用彼此相隔大約24小時給藥的兩次治療對患者外科 手術(shù)切口進(jìn)行治療。在每一次治療中，通過皮內(nèi)注射給予TGF-β 3的量為治療處每一厘米 5ng、50ng和200ng(在實驗性治療中)或在按照本發(fā)明的治療中給予每一厘米500ng。使 用GSCS，在外科手術(shù)后12個月評估瘢痕形成。Y軸上所達(dá)到的值越高，這一特定治療抑制 瘢痕形成的能力越強(qiáng)。A中所顯示的結(jié)果是調(diào)查研究的外科醫(yī)師在比較患者身上治療的和對照治療的瘢 痕時所產(chǎn)生的那些。這些示例了用本發(fā)明方法治療的傷口愈合所觀察到的瘢痕形成的抑制 遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于使用替代治療方案對照治療傷口愈合時所觀察到的瘢痕形成的抑制。當(dāng)獨立的臨床評估組使用GSCS (評估者和EMEA所批準(zhǔn)的評估工具組合以進(jìn)行瘢 痕抑制指標(biāo)的臨床評估)比較各種治療的抑制瘢痕能力時所獲得的結(jié)果更加令人印象深 刻。這些顯示于B中，而且清楚地表明了本發(fā)明方法治療所實現(xiàn)的瘢痕抑制效應(yīng)幾乎是使 用每一厘米200ng的TGF- β 3 (在現(xiàn)有技術(shù)中所建議的最為有效的劑量)實驗性治療傷口 時所實現(xiàn)的瘢痕抑制效應(yīng)的2倍。這些結(jié)果清楚地表明了當(dāng)使用經(jīng)管理機(jī)構(gòu)驗證的臨床評估工具進(jìn)行評估時，本發(fā) 明的藥物或方法對人傷口的治療能夠?qū)е?5%或更多的瘢痕形成的抑制。序列信息
TGF- β 3 (序列 ID No. 1) ALDTNYCFRNLEENCCVRPLYIDFRQDLGWKWVHEPKGYYANFCSGPCPYLRSADTTHSTVLGLYNTLNPEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPKVEQLSNMVVKSCKCS序列ID No. 2-編碼野生型人TGF- β 3的DNAGCTTTGGACACCAATTACTGCTTCCGCAACTTGGAGGAGAACTGC
TGTGTGCGCCCCCTCTACATTGACTTCCGACAGGATCTGGGCTGG
AAGTGGGTCCATGAACCTAAGGGCTACTATGCCAACTTCTGCTCA
GGCCCTTGCCCATACCTCCGCAGTGCAGACACAACCCACAGCACG
GTGCTGGGACTGTACAACACTCTGAACCCTGAAGCATCTGCCTCG
CCTTGCTGCGTGCCCCAGGACCTGGAGCCCCTGACCATCCTGTAC
TATGTTGGGAGGACCCCCAAAGTGGAGCAGCTCTCCAACATGGTG
GTGAAGTCTTGTAAATGTAGC
權(quán)利要求
抑制人傷口愈合時所形成的瘢痕形成的方法，所述方法包含治療瘢痕形成待被抑制的身體部位在第一次治療中向傷口邊緣的每一厘米或?qū)⒁纬蓚诘牟课坏拿恳焕迕滋峁┝繛榇蠹s350 1000ng的TGF β3；以及在傷口形成后并在第一次治療后8 48小時發(fā)生的第二次治療中，向所述傷口提供量為每厘米疤痕形成待被抑制的傷口邊緣大約350 1000ng的TGF β3。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中借助于局部注射提供所述TGF-β3。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中在將要形成傷口的部位提供所述第一次治療，而且 將基本上沿著將要形成的傷口的中線給予所述局部注射。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中在將要形成傷口的部位提供所述第一次治療，而且 其中將局部注射給予將要形成的傷口的每一邊緣。
5.如權(quán)利要求2所述的方法，其中將所述第一和/或第二次治療提供到傷口邊緣，而且 在所述傷口邊緣0. 5厘米內(nèi)的位置給予所述局部注射。
6.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述第一和/或第二次治療包含將 TGF-β 3提供到延伸超過所述傷口每一末端至少0. 5厘米的區(qū)域。
7.抑制人傷口愈合時所形成的瘢痕形成的方法，所述方法包含治療瘢痕形成待被抑制 的身體部位在第一次治療中，向?qū)⒁纬蓚诘牟课坏拿恳焕迕滋峁┝繛榇蠹s350-1000ng的 TGF-3 3 ；以及在第一次治療后8-48小時發(fā)生的第二次治療中，向所述傷口提供量為每厘米瘢痕形 成待被抑制的傷口邊緣大約350-1000ng的TGF-β 3。
8.抑制人傷口愈合時所形成的瘢痕形成的方法，所述方法包含治療瘢痕形成待被抑制 的身體部位在第一次治療中，向傷口邊緣的每一厘米或未來傷口邊緣的每一厘米提供量為大約 350-1000ng 的 TGF-β 3 ；在第一次治療后8-48小時發(fā)生的第二次治療中，向所述傷口提供量為每厘米瘢痕形 成待被抑制的傷口邊緣大約350-1000ng的TGF-β 3。
9.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中提供的TGF-β3的量在每一次治療中基 本上相同。
10.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在每一次治療中，提供的每厘米傷口邊 緣或潛在傷口邊緣的TGF-β 3的量為大約500ng。
11.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，還包含第三次或更進(jìn)一步的治療。
12.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中治療間隔大約24小時。
13.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述傷口為皮膚傷口。
14.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述傷口為循環(huán)系統(tǒng)的傷口。
15.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述傷口為外科手術(shù)的結(jié)果。
16.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述TGF-β3通過給予身體部位的局 部注射來提供。
17.如上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述TGF-β 3在藥學(xué)上可接受的溶液中給藥，給予每厘米被治療的身體部位大約100 μ 1所述藥學(xué)上可接受的溶液。
18.如權(quán)利要求7至17中任一項所述的方法，其中所述第一次治療發(fā)生在創(chuàng)傷前。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述第一次治療發(fā)生在創(chuàng)傷前長達(dá)1小時。
20.如權(quán)利要求7至17中任一項所述的方法，其中所述第一次治療發(fā)生在創(chuàng)傷后。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述第一次治療發(fā)生在創(chuàng)傷后長達(dá)2小時。
22.如權(quán)利要求7至17中任一項所述的方法，其中所述第一次治療發(fā)生在傷口閉合后。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述第一次治療發(fā)生在傷口閉合后長達(dá)2小時。
24.選擇合適的治療方案以抑制與人傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的方法，所述方法包含確定需要這種瘢痕形成抑制的個體能否完成發(fā)生在第一次治療后8-48小時的第二次 治療；如果所述個體能夠完成發(fā)生在第一次治療后8-48小時的第二次治療，選擇包含治療 瘢痕形成待被抑制的身體部位的治療方案以使在第一次治療中，向瘢痕形成待被抑制的傷口邊緣的每厘米或?qū)⒁纬蓚诘牟课坏?每厘米提供量為大約350-1000ng的TGF-β 3 ；以及在第一次治療后8-48小時發(fā)生的第二次治療中，向所述傷口提供量為每厘米瘢痕形 成待被抑制的傷口邊緣大約350-1000ng的TGF-β 3 ；或者如果個體不能完成發(fā)生在第一次治療后8-48小時的第二次治療，選擇包含如下的治 療方案在單次治療中，向瘢痕形成待被抑制的傷口邊緣的每厘米或?qū)⒁纬蓚诘牟课坏拿?厘米提供量為大約150-349ng的TGF-β 3。
25.用作治療人傷口或?qū)⒁纬扇藗诘牟课灰砸种岂：坌纬傻乃幬锏腡GF-β3，其 中在第一次治療中，提供所述藥物以使大約350-1000ng的TGF- β 3提供到傷口邊緣的每一 厘米或?qū)⒁纬蓚诘牟课坏拿恳焕迕?，而且其中在隨后的治療中，提供所述藥物以使在 前一次治療后8-48小時將大約350-1000ng的TGF-β 3提供到傷口邊緣的每一厘米。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所使用的TGF-β3，其中所述藥物為可注射的藥物。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所使用的TGF-β3，其中所述藥物用于皮內(nèi)注射。
28.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任一項所使用的TGF-β3，其中配制所述藥物以使在 100 μ 1體積的所述藥物中提供必需量的TGF-β 3。
29.用于抑制與人傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的試劑盒，所述試劑盒包含至少第一和第 二小瓶，所述小瓶包含用于在彼此間隔8-48小時的時間對傷口或?qū)⒁纬蓚诘牟课唤o 藥的 TGF-β 3。
30.用于抑制與人傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的試劑盒，所述試劑盒包含第一量的含有TGF-β 3的組合物，該第一量用于在第一次治療中對傷口或?qū)⒁纬蓚?口的部位給藥；第二量的含有TGF-β 3的組合物，該第二量用于在第二次治療中對傷口給藥；關(guān)于在彼此間隔8-48小時的時間給予所述第一量和第二量的組合物的說明書；其中所述組合物被配制為向每厘米它給藥的組織或器官提供量為大約350-1000ng的 TGF-D0
31.如權(quán)利要求30所述的試劑盒，其中所述組合物包含濃度約為500ng/100y 1的 TGF-D0
全文摘要
本發(fā)明提供了利用轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)抑制人瘢痕形成的新的治療方法和用于抑制人瘢痕形成的新用途的TGF-β3。在第一次治療中向傷口邊緣的每一厘米或要形成傷口的部位的每一厘米提供大約350-1000ng的TGF-β3；在發(fā)生在傷口形成后且在第一次治療后8-48小時的第二次治療中，向傷口提供量為每厘米瘢痕形成待被抑制的傷口邊緣大約350-1000ng的TGF-β3。在每一次治療中提供的TGF-β3的量可以是相同的。優(yōu)選地在每一次治療中每厘米提供的TGF-β3的量可為大約500ng。TGF-β3可經(jīng)皮內(nèi)注射途徑提供。本發(fā)明也提供了選擇合適的治療方案用于抑制與人傷口愈合有關(guān)的瘢痕形成的試劑盒和方法。
文檔編號A61P17/02GK101918023SQ200880121276
公開日2010年12月15日 申請日期2008年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月12日
發(fā)明者大衛(wèi)·費爾蘭, 尼克·奧克萊斯頓, 沙倫·奧凱恩, 特蕾西·梅森, 詹姆士·布什, 馬克·威廉·詹姆斯·弗格森, 馬克·庫珀 申請人:瑞諾弗有限責(zé)任公司