專利名稱：減少牙侵蝕癥的組合物的制作方法
減少牙侵蝕癥的組合物本發(fā)明涉及選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質 在減少由暴露于PH范圍2. 0至5. 0的酸性組合物而引起的牙侵蝕癥中的應用。牙侵蝕癥描述為“由酸和/或螯合作用而不涉及細菌的從牙表面經(jīng)化學侵蝕掉 的牙硬組織的病理性、慢性、局部的、無疼痛損失”(Imfeld，1996，Eur J. Oral Sci. 104, 151-155.)。引起侵蝕的酸源于飲食、職業(yè)或內在來源(intrinsic sources)，并且不是口腔 內菌群的產(chǎn)物。因此，牙侵蝕癥是與具有疾病類似的病原學(dis-similar etiology)的齲 齒明顯區(qū)別和不同的病癥。據(jù)認為，牙齒的侵蝕是尤其由酸性食物引起，所述酸性食物比正 常再礦化(remineralisation)過程可置換的鈣能更快地浸出鈣。當依據(jù)本發(fā)明制備并導 入口腔用于消費或保健目的的酸性產(chǎn)物，諸如飲料時，顯著減少通過化學過程從牙齒溶出 或去除鈣和磷。Lussi等(1995，Caries Res 29，349-354)已經(jīng)將飲料的pH和可滴定的酸度與其 侵蝕潛力相關聯(lián)；飲料中的酸的濃度越大，其對牙齒的損傷變得越大。在兒童中的類似研究 (Millward等，(1994) Int. J Paed. Dent. 4，151-157.)將牙侵蝕癥的存在與消耗酸性飲料和 果汁相關聯(lián)。當依據(jù)本發(fā)明制備諸如飲料的產(chǎn)品，并導入口腔用于消費或保健目的時，顯著減 少通過化學過程從牙齒溶出或去除鈣和磷。已經(jīng)要求增加膳食酸的攝入，并且偏離(move away from)正式的就餐時間，已經(jīng) 伴隨有牙侵蝕癥發(fā)病率的升高?？紤]到這一點，幫助預防牙侵蝕癥和牙齒磨損的方法應該 具有優(yōu)勢。EP 1625877A, (Friesland Brands BV)，描述了 無蛋白質的乳清部分(milk whey)，其可被用于減少與口服攝入酸性食物和飲料相關的負效應。本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即某些蛋白質具有減少或減輕由攝入膳食酸所引起的牙 侵蝕癥的能力。在第一個方面，本發(fā)明提供選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種 或多種蛋白質在制備用于減少由暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥的、包含酸化劑且PH范 圍為2. 0至5. 0的、可口服給藥的組合物中的應用。在另一個方面，提供了包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白 中的一種或多種蛋白質且PH范圍為2. 0至5. 0的、可口服給藥的組合物，其用于減少由暴 露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥。用于依據(jù)本發(fā)明的酸性組合物的蛋白質所存在的量從0. 01% w/v至50. 0% w/v, 適宜地從 0. 01% w/v 至 1. Ow/ν,從 0. 05% w/v 至 0. 5% w/v，從 0. w/v 至 25. 0% w/v 和 從 2. 0% w/v M 10.0% w/v ο典型地，在用于本發(fā)明的組合物中，存在的蛋白質的量的變化將從0. 10g/L至 500g/L，適宜地從 0. lg/L 至 10g/L,從 0. 5g/L 至 5g/L，從 1. 0g/L 至 250g/L 和從 20g/L 至 100g/L。適宜地，用于本發(fā)明的蛋白質源于天然資源。
典型地，酪蛋白和乳清蛋白從全脂奶中提取。乳清蛋白是干酪制備的副產(chǎn)物。典 型地，卵白蛋白從鳥類的蛋，例如雞蛋中提取。典型地，大豆蛋白從大豆中提取。通過使用依據(jù)本發(fā)明的含蛋白質的酸性組合物而呈現(xiàn)的優(yōu)點在于，組合物由于其 酸性內容物產(chǎn)生牙侵蝕癥的可能性減少。適宜地，依據(jù)本發(fā)明使用的酸性組合物的pH范圍為從2. 0至4. 5，更適宜地從2. 8 至4. 0。最適宜地，依據(jù)本發(fā)明使用的酸性組合物的pH范圍為從3. 0至4. 0。依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質的酸性組合物還可包含從0. Olmmol/L至50mmol/ L，適宜地從2. Ommol/L至20mmol/L的量的鈣。通過使用依據(jù)本發(fā)明的含蛋白質和鈣的酸性組合物而呈現(xiàn)的優(yōu)點在于，使酸性組 合物的侵蝕癥的可能性更加減少。鈣可呈現(xiàn)為鹽的形式，諸如碳酸鈣、氫氧化鈣、檸檬酸鈣、蘋果酸鈣、馬來酸檸檬酸 鈣、乳酸鈣、氯化鈣、甘油磷酸鈣或甲酸鈣或任何其它的鹽。典型地，依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質的酸性組合物含有為膳食酸的酸化劑，所 述膳食酸可為有機酸和/或無機酸。典型的膳食酸包括，例如果酸如檸檬酸和蘋果酸；可飲 用的酸如乳酸、磷酸、乙酸和酒石酸及其一種或多種的混合物。典型地，在依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質的組合物中的酸化劑的濃度，例如基于 水果的產(chǎn)品中的檸檬酸或蘋果酸濃度，范圍將從0. 01% w/v至4. 0% w/v，適宜地范圍為 0. w/v 至 1. 0% w/vO依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質的酸性組合物可為打算以液體、固體或半固體形式 經(jīng)口服消費的組合物，所述形式有例如酸性飲料、果汁、蘋果酒、葡萄酒、醋和腌漬品高溫熬 制的甜品(sweets)、糖果、片劑、止咳糖、棒棒糖、咀嚼劑(chews)、凝膠劑、口香糖、滴劑、干 粉混合物，如打算溶解于例如水中的粉末飲品等。半固體產(chǎn)物包括乳制品，諸如酸乳酪和發(fā) 酵(set)或冰凍飲品。當依據(jù)本發(fā)明的包含蛋白質的酸性組合物是固體時，術語pH意為固化前組合物 (其時組合物經(jīng)由液相中間體制備)的PH，或當再生或溶解于液體如水中時的組合物的pH。 術語固化包括處理或補充液相中間體以形成固體或半固體。依據(jù)本發(fā)明用于口服消費的包含蛋白質的酸性液體組合物，可呈現(xiàn)易于飲用的飲 料或用液體，例如用于制備易于飲用的飲料的液體稀釋的濃縮液體的形式。依據(jù)本發(fā)明的包含蛋白質的酸性組合物也可呈現(xiàn)固體濃縮物的形式，例如用制備 易于飲用的飲料的液體再配制的干粉劑。依據(jù)本發(fā)明的包含蛋白質的酸性組合物也可呈現(xiàn)口腔護理組合物，例如嗽口水、 凝膠或噴霧劑的形式。依據(jù)本發(fā)明使用的包含蛋白質的酸性口腔護理組合物，將含有適宜的配制劑 (formulating agents)，例如表面活性劑、增稠劑、濕潤劑、調味劑、甜味劑、遮光劑或著色 劑、防腐劑和水，選自那些常規(guī)用于口腔護理組合物領域的用于該目的的試劑。這樣的試劑 的實例如在EP929287中描述。口腔護理活性劑也可包括在本發(fā)明組合物中。在本發(fā)明的另一個方面，提供減少pH范圍在2. 0至5. 0的酸性口服組合物的牙侵 蝕特性的方法，所述方法包括添加選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質至酸性口服組合物中?？赏ㄟ^將選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質與 酸化劑和其它成分混合，并調節(jié)pH在2. 0至5. 0范圍內，制備依據(jù)本發(fā)明使用的酸性口服 組合物。在本發(fā)明的另一個方面，提供減少由暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥的方法，所述 方法包括口服給予有需要的患者包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋 白中的一種或多種蛋白質且PH范圍為2. 0至5. 0的組合物。通過以下非限制性實施例闡述本發(fā)明。實施例1.修飾酸性組合物以減少組合物的侵蝕可能性。材料和方法烴基磷灰石溶出檢測設置配備50ml水套反應容器的自動滴定系統(tǒng)(Metrohm，Buckingham, UK)，通過 加入50mmol/L HCl以維持恒定pH。反應溫度為36°C。烴基磷灰石被用作牙釉質的類似 物(Barbour 和 Rees (2004) J. Dentistry 32 591-602)。使用粘賭將直徑 12. 05mm χ 厚度 1.25mm 的烴基磷灰石(HA)圓片(Hitemco Medical Applications,Old Bethpage,USA)固 定至玻璃棒上，且圓片的下面用指甲油涂覆，以使每一片圓片得到155. 5mm2的恒定暴露面 積。將帶有圓片的玻璃棒固定至試管，試管與反應容器蓋入口相配并以與攪拌器相應的可 重復的位置保持樣品。對于每一次溶解檢測，將15mL的試驗溶液置于反應容器中并用磁力 攪拌器攪拌。當溫度和PH達到平衡時，通過將HA圓片浸入溶液啟動反應。隨著時間變化 酸值呈線形增加，并且酸增加的速率用作HA溶出的量度。通過將它們暴露于攪拌的對照檸檬酸溶液30min，以移除任何松散的附著物或更 多溶解物，調整新的圓片。對于每一次檢測，實施對照試驗(control run)和測試試驗(test run)。首先檢測對照檸檬酸溶液中的HA圓片的溶出率，然后測定試驗溶液中的相同HA圓 片的溶出率。因此每一次檢測均有其自身的對照。各試驗溶液測試三次。棄去已經(jīng)暴露于 蛋白質試驗溶液后的圓片。檸檬酸溶液所有用于烴基磷灰石溶出檢測的溶液基于0. 3% w/v的檸檬酸一水合物溶液，并 用KOH或HCl將pH調節(jié)至適宜的值。通過用KOH提高pH，將酪蛋白酸鈉(BDH，Poole, UK) 溶解于蒸餾水中，直至酪蛋白溶解。然后加入儲備液30%檸檬酸一水合物溶液，調節(jié)體積和 pH，得到0. 3% w/v檸檬酸一水合物和適宜的pH和酪蛋白濃度的溶液。通過采用于室溫下 溫和攪拌至少60min，將需要量的卵白蛋白(MPBiochemicals，Ohio，USA)溶解于蒸餾水中， 制備卵白蛋白溶液。然后，將濃的檸檬酸溶液加至該蛋白質溶液中，得到最終濃度為0. 3% w/v的檸檬酸一水合物，并用KOH將pH調節(jié)至需要的值。通過緩慢加入稱量的量至約SOmL 體積的攪拌的去離子水中，制備大豆蛋白溶液。攪拌該混懸液直至看來已經(jīng)達到溶解度平 衡(約30min)。然后加入ImL的30%檸檬酸一水合物并再攪拌該混懸液另外20min。將該 混懸液離心(4000rpm，15min)，輕輕倒出上清液并用蒸餾水制成100mL。pH的作用在pH 2. 80、3. 00、3. 20、3. 40、3. 60 和 4. 00，與無蛋白質，和或者 0. 2 % w/v 或
0. 02% w/v的蛋白質一起，制備如上描述的檸檬酸溶液。蛋白質濃度的作用
于pH 3. 20以及以0.02% w/v和0.2% w/v蛋白質濃度，制備如上描述的檸檬酸溶液。鈣的作用pH 3. 20，和或者無蛋白質或以0.2% w/v或0.02% w/v蛋白質濃度，制備如上描 述的檸檬酸溶液。加入氯化鈣二水合物以達到鈣濃度為5mmol. L^UOmmol. r\20mmol. Γ1 和 50mmol. Γ1。蛋白質作用的持續(xù)時間為了評估蛋白質對抗酸侵蝕的作用的持續(xù)時間，實施序貫檢測。在調整圓片后，實 施在對照檸檬酸溶液中的三次對照試驗30分鐘，以獲得平均基線檢測。此后，在具有蛋白 質的酸性溶液中實施單次30分鐘試驗。此后，在對照酸性溶液中實施序貫的30分鐘試驗， 直至溶解率達到基線水平。每個作用實驗的持續(xù)時間，用0. 2% w/v或0. 02% w/v蛋白質 實施至少三次，在分開的HA圓片上進行每個序貫試驗。數(shù)據(jù)/統(tǒng)計學分析從將H+離子加至溶液中的速率，計算烴基磷灰石的溶出率。平均率表示為每min、 每mm2暴露的表面溶出的nmol烴基磷灰石。用誤差條(error bars)表示標準差。結果1.烴基磷灰石溶出

圖1顯示在0.02% w/v酪蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。0.3% w/v檸檬酸， 于 pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 40,3. 60 時。表1.在0.02% w/v酪蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。0.3% w/v檸檬酸，于 pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 40,3. 60 時。(標準差在括號中) 圖2顯示在0. 02 % w/v和0. 2% w/v卵白蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。 0. 3% w/v 檸檬酸，于 pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 60,4. 0 時。表2.在0.02% w/v和0.2% w/v卵白蛋白的存在下的烴基磷灰石溶出率。0.3% w/v檸檬酸，于pH 2. 8,3. 0,3. 2,3. 60,4. 0時。(標準差在括號中) 2.鈣濃度的作用圖3顯示在0.02% w/v酪蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0.3% w/v檸檬酸一水合物，于pH 3. 20時。表3.在0. 02% w/v酪蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0. 3% w/ ν檸檬酸一水合物，于pH 3. 20時。(標準差在括號中)。 圖4顯示在0. 2 % w/v卵白蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0. 3 % w/v檸檬酸一水合物，于pH 3. 2時。
表4.在0.2% w/v卵白蛋白的存在下，鈣濃度對烴基磷灰石溶出的作用。0.3% w/v檸檬酸一水合物，于pH 3. 2時。(標準差在括號中)。
3.作用的持續(xù)時間圖5顯示0.02% w/v卵白蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0. 3% w/v檸檬酸，經(jīng) 150mins)。圖6顯示0.2% w/v卵白蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0.3% w/v檸檬酸，經(jīng) 240mins)。表5. 0. 02%和0. 2% w/v卵白蛋白(OA)對烴基磷灰石溶出的作用(0. 3% w/v檸 檬酸、pH 3. 2，經(jīng)150mins和240mins)。(標準差在括號中)。 圖7顯示0.2% w/v大豆蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0.3% w/v檸檬酸，pH 3. 2，經(jīng) 90min)。表6. 0.2% w/v大豆蛋白對烴基磷灰石溶出的作用(0. 3% 八檸檬酸，？!1 3. 2，經(jīng)90min)。(標準差在括號中)。
概要實施例1明確地證明，受添加蛋白質調節(jié)的酸性溶液具有減少侵蝕的潛力，并且 因此使牙齒侵蝕減少。實施例2a.典型的飲料配方-0.02% w/v蛋白質 pH 3. 2，酸度 0. 3% w/v CAMH實施例2b.典型的飲料配方-0.02% w/v蛋白質 實施例3a.典型的飲料配方-2.0% w/v蛋白質 pH 3. 2，酸度 0. 3% w/v CAMH實施例3b.典型的飲料配方-2.0% w/v蛋白質
權利要求
選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種的蛋白質在制備可口服給藥的組合物中的應用，所述組合物包含酸化劑且具有在范圍為2.0至5.0中的pH，所述組合物用于減少因暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥。
2.依據(jù)權利要求1的應用，其中的pH在2.0至4.5范圍內。
3.依據(jù)權利要求1或2的應用，其中的蛋白質存在的量從0.01%w/v至50% w/Vo
4.依據(jù)權利要求1至3中任一項的應用，其中的蛋白質存在的量從0.10g/L至500g/L0
5.依據(jù)權利要求1至4中任一項的應用，其中的組合物還包含從O.Olmmol/L至 50mmol/L的量的鈣。
6.一種包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種的 蛋白質且PH范圍為2. 0至5. 0的可口服給藥的組合物，其用于減少由暴露于酸化劑所引起 的牙侵蝕癥。
7.一種如在權利要求6中要求的可口服給藥的組合物，其中的pH范圍為2. 0至4. 5。
8.一種依據(jù)權利要求6或7的可口服給藥的組合物，其中蛋白質存在的量為0.01% w/ ν M 50% w/vo
9.一種依據(jù)權利要求6至8中任一項的可口服給藥的組合物，其中蛋白質存在的量為 0.10g/L 至 500g/L。
10.一種依據(jù)權利要求6至9中任一項的可口服給藥的組合物，其還含有從0. Olmmol/ L至50mmol/L的量的鈣。
11.一種減少具有PH范圍為2. 0至5. 0的酸性口服組合物的牙侵蝕特性的方法，所述 方法包括將選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質添加至酸 性口服組合物中。
12.—種減少由暴露于酸化劑所引起的牙侵蝕癥的方法，所述方法包括口服給予有需 要的個體包含酸化劑和選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白 質、且PH范圍為2. 0至5. 0的組合物。全文摘要
本發(fā)明涉及選自酪蛋白、卵白蛋白、乳清蛋白和大豆蛋白中的一種或多種蛋白質在減少由暴露于pH范圍2.0至5.0的酸性組合物而引起的牙侵蝕癥的應用。
文檔編號A61P1/02GK101932334SQ200880126297
公開日2010年12月29日 申請日期2008年11月27日 優(yōu)先權日2007年11月30日
發(fā)明者M·E·巴鮑爾, R·P·舍里斯 申請人:葛蘭素集團有限公司