專利名稱：腦缺血障礙治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腦缺血障礙治療劑，具體地，涉及含有溶劑溶解性高的L-組氨酸衍生 物作為有效成分的腦缺血障礙治療劑。
背景技術(shù)：
已知由于高熱量食品的攝取或飲酒、吸煙、運(yùn)動不足、壓力等不良生活習(xí)慣而發(fā)病 的肥胖或高血壓、高血糖、高脂血病等生活習(xí)慣病。生活習(xí)慣病被認(rèn)為是腦梗塞或心肌梗塞 等成人病的原因?，F(xiàn)實(shí)情況是，在成人病中腦梗塞多在病后殘留身體障礙或語言障礙、癡呆 癥狀這樣的后遺癥。腦梗塞是指這樣的疾病例如，由于腦動脈被血栓堵塞或硬化而變窄，故產(chǎn)生腦 缺血，對腦組織的氧和營養(yǎng)的供給不足，結(jié)果腦組織陷入壞死(necrosis)或與其接近的狀 態(tài)。已知在腦梗塞中，在由腦缺血狀態(tài)脫離時會產(chǎn)生自由基，其引起周邊的腦組織的進(jìn)一步 壞死，由此腦缺血障礙進(jìn)一步發(fā)展。腦缺血障礙的治療大體分為2種。一種為，例如通過血栓的溶解和血管的擴(kuò)張而 使血流恢復(fù)，另一種為，阻止自由基或腫脹導(dǎo)致的腦組織的壞死的發(fā)展。均是以藥物療法為 主流，但在前者中，例如使用血栓溶解劑或血小板凝集抑制劑，在后者中，例如使用自由基 清除劑或抗浮腫劑。為了使腦梗塞的預(yù)后良好，必須將血流的恢復(fù)和阻止壞死的發(fā)展這兩 種的治療組合進(jìn)行，尤其重要的是阻止壞死的發(fā)展。但是，阻止壞死的發(fā)展來抑制腦障礙的藥劑有限，且還存在副作用的問題。作為 腦保護(hù)劑，已知作為自由基清除劑的依達(dá)拉奉(Edaravone) (3_甲基-1-苯基_2_吡唑 啉-5-酮)，但依達(dá)拉奉具有以高幾率引發(fā)肝功能障礙或腎功能障礙這樣的副作用的問題。 因此，副作用少的腦缺血障礙治療劑受到廣泛探索。例如，在專利文獻(xiàn)1中記載了，作為氨基酸之一的L-組氨酸表現(xiàn)出腦缺血障礙的 抑制效果。但是，在L-組氨酸中，存在游離的L-組氨酸在水(25°C )中的溶解度低，為4. 3g/ dL(0. 28mol/L)的問題。為了使血中的L-組氨酸濃度迅速地上升，理想的是經(jīng)靜脈給藥，但 由于L-組氨酸在水中的溶解度低，因此配制以有效濃度含有L-組氨酸的注射劑伴有困難。 為了提高L-組氨酸的溶解度，考慮以鹽酸鹽等鹽的形態(tài)使用L-組氨酸，或者在注射劑中加 入酸而使其為酸性，但此時卻存在招致酸中毒等的副作用危險。專利文獻(xiàn)1 國際公開第2006/025598號

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的在于，提供腦缺血障礙治療劑，其對于副作用危險少地使血中 的L-組氨酸濃度迅速上升是有用的。本發(fā)明人著眼于L-組氨酸，摸索出了副作用危險少 地使血中的L-組氨酸濃度迅速上升的方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，作為L-組氨酸衍生物的特定的組 氨酸二肽在水中的溶解度高，具有良好的穩(wěn)定性，且無副作用，從而完成本發(fā)明。即，為達(dá)成 上述目的，在本發(fā)明的一個方式中，提供腦缺血障礙治療劑，其含有選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種作為有效成分。


圖1是表示給藥了不同的L-組氨酸衍生物的3個給藥組中的血中L-組氨酸濃度 的時間變化的圖。圖2是表示給藥甘氨酰-L-組氨酸對于腦缺血再灌流時的腦缺血障礙的影響的 圖。
具體實(shí)施例方式以下，說明本發(fā)明的一個實(shí)施方式。本實(shí)施方式的腦缺血障礙治療劑含有選自作為組氨酸衍生物的L-丙氨酰-L-組 氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種作為有效成分。L-丙氨酰-L-組氨酸是L-丙氨酸 和L-組氨酸肽鍵結(jié)合的二肽(H-Ala-His-OH,分子量226. 24，CAS No. 3253-17-6)。甘 氨酰-L-組氨酸是甘氨酸和L-組氨酸肽鍵結(jié)合的二肽(H-Gly-His-OH，分子量212. 21， CASNo. 2489-13-6)。L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸兩者對水的溶解度都比L-組 氨酸的要高，為3. 5mol/L以上。L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸可以通過公知的方法得到，例如，可以通 過化學(xué)或生物學(xué)方法合成，或者還可以使用市售品。利用生物學(xué)方法的合成使用例如公知 的酶或微生物來進(jìn)行。更具體地，這些二肽可以利用二肽酶通過水解已知序列的多肽而制造。腦缺血障礙治療劑優(yōu)選具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型。在經(jīng)靜脈給藥具有注 射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑時，腦缺血障礙治療劑中的有效成分的血中濃度迅速地上 升，結(jié)果迅速且充分地發(fā)揮腦缺血障礙治療劑的效能。具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的 腦缺血障礙治療劑含有溶劑、溶解于溶劑的選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸 的至少一種。溶劑優(yōu)選為水或者含有水的溶劑。即，具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺 血障礙治療劑優(yōu)選為水性的。溶劑的水優(yōu)選為滅菌水，更優(yōu)選不含有熱源的注射用水。作 為含有水的溶劑，例如，可以使用生理鹽水或葡萄糖溶液、乳酸配合林格液等在醫(yī)藥制劑中 可以使用的公知的溶劑。具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑通過例如將 選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種溶解于溶劑，并根據(jù)需要進(jìn)行過 濾、容器填充和滅菌處理而制造。通過將具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑用例如凍干和減壓 干燥等公知的方法進(jìn)行干燥，可以制為粉末狀或顆粒狀的劑型。得到的具有粉末狀或顆粒 狀的劑型的腦缺血障礙治療劑可以溶解于溶劑制為注射劑的劑型后使用。即，腦缺血障礙 治療劑可以以在使用時溶解于溶劑的粉末狀或顆粒狀的劑型提供。具有粉末狀或顆粒狀的 劑型的腦缺血障礙治療劑還可以與例如注射用水、生理鹽水、葡萄糖溶液等溶劑組合，作為 試劑盒制品而提供。具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑優(yōu)選pH5 8. 5，更優(yōu)選 pH6 8. 0。具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑收容于例如輸液容器或載藥注射器(prefilled syringe)中。作為輸液容器的例子，例如可以列舉合成樹脂制的柔 軟的輸液袋或玻璃瓶。具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑，雖根據(jù)使用目的而異，但 優(yōu)選以0. 3 3. 5mol/L，更優(yōu)選以0. 6 2. lmol/L，進(jìn)一步優(yōu)選以1 1. 7mol/L，特別優(yōu)選 以1 1. 5mol/L的濃度含有選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種。腦缺血障礙治療劑除了選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一 種以外，還可以進(jìn)一步含有緩沖劑或抗氧化劑、去痛劑(soothing agent)、pH調(diào)節(jié)劑等公知 的添加劑。作為緩沖劑的例子，例如可以列舉磷酸緩沖劑或檸檬酸緩沖劑、酒石酸緩沖劑、 醋酸緩沖劑。作為抗氧化劑的例子，例如可以列舉亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉、抗壞血酸鈉、硫 代硫酸鈉。作為去痛劑的例子，例如除了甘油和丙二醇等多元醇以外，還可以列舉利多卡因 鹽酸鹽或芐醇。用作PH調(diào)節(jié)劑的酸可以是有機(jī)酸或無機(jī)酸的任一種，例如可以是抗壞血 酸、鹽酸、葡萄糖酸、醋酸、乳酸、硼酸、磷酸、硫酸、酒石酸或檸檬酸。用作PH調(diào)節(jié)劑的堿例 如可以是氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鈉或氫氧化鎂。在制造具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑時，首先，將選自 L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種與根據(jù)需要的添加劑一起溶解于溶 劑。選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種可以與添加劑同時在溶劑中 混合，或者也可以在將添加劑混合于溶劑之前或混合之后混合于溶劑中。接著，將這樣得到 的溶劑供于例如利用膜過濾器的過濾滅菌、或利用高壓釜的加壓熱滅菌、利用間歇滅菌法 的熱滅菌等的滅菌處理。由于不存在熱變性的危險，因此優(yōu)選的滅菌處理為過濾滅菌。優(yōu) 選滅菌處理后的溶液的pH為5 8. 5的范圍。腦缺血障礙治療劑的給藥方法沒有特別限定，但根據(jù)例如劑型、患者的年齡、性別 和疾病的程度而進(jìn)行適當(dāng)?shù)剡x擇。腦缺血障礙治療劑可以是在輸液中混合選自L-丙氨 酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種而制為靜脈給藥用。所使用的輸液沒有特別 限定，可以使用例如葡萄糖注射液或者木糖醇注射液、D-甘露醇注射液、果糖注射液、生理 鹽水、葡聚糖40注射液(血流改善劑)、葡聚糖70注射液(血漿增量劑)、氨基酸注射液、 林格液、乳酸林格液。腦缺血障礙治療劑的給藥量根據(jù)例如給藥方法、劑型、患者的年齡、性別和疾病的 程度而進(jìn)行適當(dāng)?shù)剡x擇，但優(yōu)選以L-組氨酸換算計(jì)為0. 1 3g/kg/日左右。具有經(jīng)靜脈 給藥用的注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑可以以單次或1日數(shù)次的經(jīng)靜脈給藥、以及持 續(xù)點(diǎn)滴靜注的任一種的方法給藥。腦缺血障礙治療劑優(yōu)選用于腦缺血障礙的治療。更具體地，優(yōu)選腦缺血障礙治療 劑在伴隨腦缺血的腦組織損傷時，即在腦細(xì)胞不斷陷入壞死(necrosis)或與其接近的狀 態(tài)時給藥?；蛘邇?yōu)選腦缺血障礙治療劑在由腦缺血狀態(tài)脫離時給藥，以防止脫離腦缺血狀 態(tài)所引起的再灌流時產(chǎn)生的自由基或炎癥性反應(yīng)破壞周邊的腦組織?；蛘?，也可以在腦缺 血障礙的回復(fù)期給藥腦缺血障礙治療劑，以防止腦細(xì)胞壞死的進(jìn)一步發(fā)展。根據(jù)本實(shí)施方式，可以得到以下的效果。(1)本實(shí)施方式的腦缺血障礙治療劑含有選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨 酰-L-組氨酸的至少一種的L-組氨酸衍生物作為有效成分。這些L-組氨酸衍生物與L-組 氨酸相比，對于水等的溶劑的溶解度高，因此容易以高濃度給藥至生物體內(nèi)。
(2)腦缺血障礙治療劑具有副作用危險少地有效改善腦缺血障礙的作用。(3)具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑對于通過經(jīng)靜脈給藥來 迅速提高血中的L-組氨酸濃度有效。另外，具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙 治療劑對于持續(xù)地給藥L-組氨酸也有效。(4)在具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑以0. 3 3. 5mol/L, 進(jìn)而以0. 6 2. lmol/L，更進(jìn)而以1 1. 5mol/L的濃度含有選自L-丙氨酰-L-組氨酸和 甘氨酰-L-組氨酸的至少一種時，除了可以進(jìn)一步減少副作用危險，還可以通過較少量的 腦缺血障礙治療劑的給藥即使血中的L-組氨酸濃度迅速上升到有效水平。(5)由于L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的溶解度比較高，因此可以減 少在具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑中使用的溶劑的量。這對于防止 因腦缺血障礙治療劑的給藥，由腦缺血障礙治療劑中的溶劑引起生物體內(nèi)的水電解質(zhì)平衡 崩潰或血壓一過性上升是有利的。應(yīng)予說明，上述實(shí)施方式還可以進(jìn)行如下變化?！ご婢哂薪?jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型，腦缺血障礙治療劑例如可以具有動脈內(nèi) 注射劑、皮下注射劑、皮內(nèi)注射劑、肌肉內(nèi)注射劑、脊髓腔內(nèi)注射劑、腹腔內(nèi)注射劑或口服給 藥劑的劑型。此時，也期待腦缺血障礙治療劑對于提高血中的L-組氨酸濃度是有用的?！つX缺血障礙治療劑不限于對人給藥，對于家畜(例如馬或牛、豬)或家禽(例如 雞)等飼養(yǎng)動物也可以給藥，對于狗、貓、大鼠、小鼠等寵物也可以給藥。其次，列舉本發(fā)明的腦缺血障礙治療劑的制造例、以及使用在該制造例得到的腦 缺血障礙治療劑的試驗(yàn)例，更具體地說明本發(fā)明。制造例1將L-丙氨酰-L-組氨酸(Bachem公司制)29. 2g溶解于注射用水，配制總量IOOmL 的溶液，將其無菌過濾后，分別填充于IOmL玻璃小瓶并密封，而制造具有注射液的劑型的 腦缺血障礙治療劑。該腦缺血障礙治療劑中的L-丙氨酰-L-組氨酸的濃度為1. 29mol/ L (以L-組氨酸濃度計(jì)為20% (W/V))。制造例2除了代替L-丙氨酰-L-組氨酸29. 2g，使用甘氨酰-L-組氨酸(Bachem公司 制)27. 4g以外，與制造例1相同地制造具有注射液的劑型的腦缺血障礙治療劑。該腦缺血 障礙治療劑中的甘氨酰-L-組氨酸濃度為1. 29mol/L(以L-組氨酸濃度計(jì)為20% (W/V))。制造例3除了代替L-丙氨酰-L-組氨酸29. 2g，使用L-丙氨酰-L-組氨酸(Bachem公司 制)14. 6g和甘氨酰-L-組氨酸(Bachem公司制)13. 7g以外，與制造例1相同地制造具有 注射液的劑型的腦缺血障礙治療劑。該腦缺血障礙治療劑中的L-丙氨酰-L-組氨酸和甘 氨酰-L-組氨酸的合計(jì)濃度為1. 29mol/L(以L-組氨酸濃度計(jì)為20% (W/V))。制造例4將甘氨酰-L-組氨酸(Bachem公司制)16. 41g溶解于注射用水，配制總量120mL的 溶液，將其無菌過濾后，分別填充于IOmL玻璃小瓶并密封，而制造具有注射液的劑型的腦 缺血障礙治療劑。該腦缺血障礙治療劑中的甘氨酰-L-組氨酸濃度為0. 64mol/L(以L-組 氨酸濃度計(jì)為10% (W/V))。
制造例5將L-丙氨酰-L-組氨酸(Bachem公司制)3. 39g溶解于注射用水，配制總量IOmL 的溶液，將其無菌過濾后，分別填充于ImL玻璃制注射筒并密封，制造具有注射液的劑型的 腦缺血障礙治療劑。該腦缺血障礙治療劑中的L-丙氨酰-L-組氨酸濃度為1. 5mol/L(以 L-組氨酸濃度計(jì)為23. 3% (W/V))。制造例6將甘氨酰-L-組氨酸(Bachem公司制)3. 61g溶解于注射用水，配制總量IOmL的溶 液，將其無菌過濾后，分別填充于ImL玻璃制注射筒并密封，而制造具有注射液的劑型的腦 缺血障礙治療劑。該腦缺血障礙治療劑中的甘氨酰-L-組氨酸濃度為1. 7mol/L(以L-組 氨酸濃度計(jì)為26.4% (W/V))。制造例7將L-丙氨酰-L-組氨酸(Bachem公司制)4. 75g溶解于注射用水，配制總量IOmL 的溶液，將其無菌過濾后，分別填充于ImL玻璃制注射筒并密封，而制造具有注射液的劑型 的腦缺血障礙治療劑。該腦缺血障礙治療劑中的L-丙氨酰-L-組氨酸濃度為2. lmol/L(以 L-組氨酸濃度計(jì)為32. 6% (W/V))。制造例8在塑料制的2室袋的一個室中封入甘氨酰-L-組氨酸(Bachem公司制)3. 18g，在 另外一室中封入注射用蒸餾水50mL，制造具有用時溶解型的注射劑的劑型的腦缺血障礙 治療劑。通過使兩室連通、混合兩室的內(nèi)容物而得到的溶液中的甘氨酰-L-組氨酸濃度為 0. 3mol/L(以L-組氨酸濃度計(jì)為4. 7% (W/V))。試驗(yàn)例1 腦缺血再灌流時的腦缺血障礙的抑制效果的確認(rèn)<中腦動脈閉塞再通模型的制作>使用約9周齡的Wistar系雄性大鼠，在氟烷麻醉下，依據(jù)小泉等的方法(脳卒中， 第8卷，第1-8頁，1986年)，制作中腦動脈閉塞再通模型。即，在氣體麻醉下(初期麻醉: 在含有3%氟烷的室內(nèi)空氣下實(shí)施，持續(xù)麻醉在含有氟烷的室內(nèi)空氣下實(shí)施)固定自 然呼吸狀的大鼠，將頸部正中切開。接著，將左總頸和外頸動脈從周圍結(jié)締組織剝離，系上 線進(jìn)行結(jié)扎。接著，將內(nèi)頸動脈從周圍結(jié)締組織剝離，系上線進(jìn)行結(jié)扎。進(jìn)一步地，用剪刀 在左外頸動脈和內(nèi)頸動脈的分岔點(diǎn)附近開孔，將尼龍塞子的硅涂布部插入內(nèi)頸動脈15 16mm。由此，插入的尼龍塞子的前端越過中腦動脈部分到達(dá)前腦動脈內(nèi)，中腦動脈的入口被 塞子的硅涂布部閉塞。之后，在血管外少量殘留尼龍線端并結(jié)扎，縫合頸部。在術(shù)后約15分鐘和中腦動脈再通前進(jìn)行神經(jīng)癥狀的確認(rèn)，選出發(fā)現(xiàn)神經(jīng)癥狀的 動物，進(jìn)一步選擇術(shù)后90分鐘后的直腸溫度顯示為高值的動物，作為試驗(yàn)動物。<藥劑的給藥>閉塞中腦動脈90分鐘后進(jìn)行中腦動脈的再通，在剛再通后和再通6小時后，對試 驗(yàn)動物給藥上述實(shí)施例1中得到的具有注射液的劑型的腦缺血障礙治療劑(實(shí)驗(yàn)組)。再 通通過拔掉閉塞中腦動脈的尼龍塞子來進(jìn)行。腦缺血障礙治療劑的給藥通過使用在靜注留 置針安裝了 50mL容量的聚丙烯制一次性注射筒的注射泵，以60mL/kg/hr的速度尾靜脈內(nèi) 給藥10分鐘來進(jìn)行。使試驗(yàn)動物自由攝食(個體數(shù)η = 10)。另外，代替制造例1的腦缺 血障礙治療劑，以3mg/kg的用量在剛再通后和再通30分鐘后推注給藥依達(dá)拉奉(商品名，夕力^卜，田邊三菱制藥公司制)而準(zhǔn)備比較組。<腦梗塞巢的體積測定>在給藥的第二天，用乙醚麻醉試驗(yàn)動物，摘出腦，將左腦分割為約2mm厚度的6片 的切片。將氯化2，3，5_三苯基四氮唑(TTC)溶解于磷酸緩沖生理鹽水而配制2% TTC溶液， 在用該溶液裝滿的12孔板的各孔中，將測定面朝下分別放入一片腦切片，于暗處在室溫下 進(jìn)行染色。用數(shù)碼相機(jī)拍攝染色后的各腦切片的測定面，將拍攝的圖像載入圖像解析軟件， 測定各腦切片的測定面中的梗塞巢(腦組織壞死被確認(rèn)的部位)的面積，將其乘以腦切片 的厚度，由此求出各腦切片中梗塞巢的體積。作為梗塞率，計(jì)算梗塞巢的合計(jì)體積相對于左 腦總體積的比例(百分比)，求出各組的平均的結(jié)果如表1所示。[表 1]
權(quán)利要求
腦缺血障礙治療劑，其特征在于，含有選自L 丙氨酰 L 組氨酸和甘氨酰 L 組氨酸的至少一種作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦缺血障礙治療劑，其具有經(jīng)靜脈給藥用注射劑的劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的腦缺血障礙治療劑，其是水性的，且以0.3 3. 5mol/L的濃 度含有選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腦缺血障礙治療劑，其以0.6 2. lmol/L的濃度含有選自 L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種。
全文摘要
腦缺血障礙治療劑，其含有選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種作為有效成分。優(yōu)選該腦缺血障礙治療劑具有經(jīng)靜脈給藥用的注射劑的劑型。具有水性注射劑的劑型的腦缺血障礙治療劑優(yōu)選以0.3～3.5mol/L，更優(yōu)選以0.6～2.1mol/L的濃度含有選自L-丙氨酰-L-組氨酸和甘氨酰-L-組氨酸的至少一種。
文檔編號A61K47/48GK101951935SQ20088012743
公開日2011年1月19日 申請日期2008年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月26日
發(fā)明者二井卓哉, 土居和久, 河野裕一 申請人:株式會社大塚制藥工場