專利名稱：呈現(xiàn)血管發(fā)生抑制作用的抗腫瘤類萜烯藥物組合物abisilin的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)、化學(xué)和制藥工業(yè)，尤其涉及通過誘發(fā)一連串抗腫瘤過程來(lái)治療 各種起因的腫瘤疾病的抗腫瘤藥物的開發(fā)，包括通過使用誘發(fā)這些過程的無(wú)毒多重活性的 藥劑，即基于來(lái)自針葉樹的萜烯(類異戊二烯)的用于口服給藥的藥物組合物Abisilinji 制血管發(fā)生、誘導(dǎo)內(nèi)源性程序性細(xì)胞死亡、減緩腫瘤細(xì)胞增殖以及激活抗復(fù)發(fā)和抗轉(zhuǎn)移作 用，所述組合物包含以下成分類單萜、類倍半萜烯、中性雙萜類、雙萜酸、三萜酸、酚類化合 物以及不飽和的和飽和的脂肪酸。
此外，本發(fā)明可用于治療多種與血管發(fā)生障礙有關(guān)的疾病，主要是由眼新血管形 成引起的疾病(視網(wǎng)膜病變或年齡依賴性黃斑變性)以及用于治療慢性和急性腎病(腎小 球腎炎)情況中的腎小球系膜細(xì)胞增生性障礙、銀屑病、漸進(jìn)性粉瘤、動(dòng)脈再狹窄、糖尿病、 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性哮喘、子宮內(nèi)膜異位、自身免疫疾病、動(dòng)脈粥樣硬化或移植后動(dòng)脈粥 樣硬化和許多其它疾病。
背景技術(shù)：
大多數(shù)被分類為化療藥物、激素類藥物或生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑的抗腫瘤藥物的使用分 析表明，它們中的大多數(shù)增強(qiáng)了腫瘤結(jié)節(jié)消退，而不影響轉(zhuǎn)移，但在腫瘤患者中這是最常見 的死亡原因。
在一種新型的抗腫瘤藥物(即抗血管發(fā)生的藥物)中發(fā)現(xiàn)了不僅抑制原發(fā)性腫瘤 生長(zhǎng)而且抑制其轉(zhuǎn)移的可能性，其由Judas Folkman博士于1971年首次提出(Folkman，J.， Tumor Angiogenesis TherapeuticImplication,N. Engl. J. Med. 1971 ；285 :1182-6)?？寡?管發(fā)生的藥物具有許多優(yōu)于傳統(tǒng)抗腫瘤的化療藥物的優(yōu)點(diǎn)，即選擇性作用、抗藥性、副作 用的風(fēng)險(xiǎn)減少和毒性降低。
通過阻斷腫瘤血管形成，抗血管發(fā)生藥物減緩或者中止腫瘤生長(zhǎng)，并且抑制了轉(zhuǎn) 移。
存在多種用于實(shí)施這個(gè)過程的方法，因?yàn)楫?dāng)前所述的情況并不是具有特定調(diào)節(jié)機(jī) 制的細(xì)胞直接損傷；相反，這是具有非常許多細(xì)胞靶的普通內(nèi)皮細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)增殖和/ 或遷移的抑制、細(xì)胞分化的阻斷、血管發(fā)生生長(zhǎng)因子(酪氨酸激酶受體CHER-1)的中和、對(duì) 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和血管生成素/TIF受體系統(tǒng)的作用、VEGFR-2和VEGFR-3血管 發(fā)生生長(zhǎng)因子及其特異性受體的抑制以及基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制。
內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能反應(yīng)性還使得自身容易受損，這是因?yàn)槠涔δ芡瑯邮艿綑C(jī)體 的其它細(xì)胞系統(tǒng)決定。
這種靶標(biāo)的多重性使得能推出許多潛在的抗血管發(fā)生的抑制劑。然而，對(duì)于現(xiàn)有 技術(shù)的抗血管發(fā)生的藥物，只注意到了一些必要的優(yōu)點(diǎn)。
例如，已知阿瓦斯丁(Avastin)是最有前景的抗腫瘤藥物；這是一種具有抗血管 發(fā)生作用、能夠通過選擇性結(jié)合血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)而減輕血管形成和抑制腫瘤生長(zhǎng)的單克隆抗體藥理學(xué)類型中的藥物(美國(guó)專利no. 60542297 ；美國(guó)專利no. 6639055)。
然而，阿瓦斯丁的臨床功效(其將患有轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌患者的總存活期從15. 6 個(gè)月增加到20. 3個(gè)月，而只用化療治療的患者只能從13. 6個(gè)月增加到17. 7個(gè)月)刺激了 更有效藥物的研究。而且，對(duì)于貝伐單抗(bevacizumab)，具有很多的禁忌癥和副作用，貝伐 單抗是阿瓦斯丁的活性物質(zhì)，其用于胃腸穿孔、出血、動(dòng)脈血栓栓塞和其它疾病的綜合療法 中。
從邏輯上講，預(yù)期阻礙新血管形成-增強(qiáng)化學(xué)信號(hào)的血管發(fā)生抑制劑有效對(duì)抗任 何類型的腫瘤，因?yàn)檫@些是共同的過程。
阿瓦斯丁的臨床試驗(yàn)結(jié)果證明這些理論預(yù)期是不成立的。
還有影響VEGP/VEGF受體和血管生成素/TIE受體系統(tǒng)功能的已知組合和組合物， 它們能夠增強(qiáng)血管形成的抑制作用，并且可用于治療癌癥(RU 2^2221，C2，2001年6月20 日)。這些多種化合物只對(duì)抗血管發(fā)生作用的多步機(jī)制的單獨(dú)方面有作用，因此只是無(wú)意義 地影響抗腫瘤藥劑功效的增強(qiáng)。研究對(duì)血管生成素/Tie2受體系統(tǒng)的作用，顯示僅減緩了 所誘發(fā)的腫瘤的生長(zhǎng)(Siemeister 等，Cancer Res. 59，3185-3191，1999)。
已知鄰氨基苯甲酸和硫代鄰氨基苯甲酸N-芳基酰胺類抑制與腫瘤疾病和血管發(fā) 生相關(guān)的VEGF酪氨酸激酶受體Fit-I的活性。它們的使用具有無(wú)意義的治療功效。
關(guān)于生物活性譜和來(lái)源，本發(fā)明最相關(guān)的技術(shù)在于紫杉醇(Taxol)，它是一種有效 抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抗腫瘤藥物，即，表示血管發(fā)生抑制劑(Klauber，N等，Cancer Res.， 57，81-86，1997)。
紫杉醇首先是基于復(fù)雜結(jié)構(gòu)的雙萜類而被開發(fā)的，該復(fù)雜結(jié)構(gòu)的雙萜類即紫杉烷 類，其于1971年從太平洋紅豆杉(Taxus brevifolia Nutl)的樹皮材料中分離?，F(xiàn)在，存 在幾種已知的紫杉醇及其類似物的全合成的方法(USA Al，No. 5488116，2006年1月；RU No. 2196581,2000年5月4日)。多西他賽(Taxotere)是紫杉醇的一種半合成類似物，從 歐紫杉(Taxus baccata)材料中分離，并且使用來(lái)自物種西伯利亞紅松(Pinus sibirica)， 和/或物種瑞士石松(Pinus cembra)，和/或冷杉屬(Abies)，和/或落葉松屬(Larix)的 針葉樹的海松松脂的天然類萜烯復(fù)合物(RU 2051900C1,1996年1月10日)，通過從天然產(chǎn) 物分離活性成分或通過半合成途徑(RU 2196581C2,2000年5月4日)，形成R-四醇，所述 半合成途徑使用與樟腦混合的Iabdanoid雙萜酸級(jí)分，并且將所得混合物暴露于、輻射以 產(chǎn)生R-四醇結(jié)構(gòu)。
通過以上說(shuō)明的方法制備的上述化合物具有以下缺點(diǎn)一定程度的毒性，這是所 有藥物固有的(引起中性白細(xì)胞減少癥、纖維狀中性白細(xì)胞減少癥、感染、嘔吐、腹瀉、口 炎、虛弱、神經(jīng)(運(yùn)動(dòng))和血液并發(fā)癥，等等)以及低功效，這些缺點(diǎn)迫使腫瘤學(xué)家尋找這些 血管發(fā)生抑制劑與其它活性藥劑的組合方案，用于提供更有效的治療。
現(xiàn)有技術(shù)抗血管發(fā)生類萜烯藥物的這些缺點(diǎn)可能源自對(duì)于其制備而提出的多步 驟方案，這些方案目標(biāo)在于基于部分或完全合成分離純形式的單獨(dú)活性物質(zhì)，其有利于各 種類型毒性顯露，并且使藥物喪失必需的多重活性。
因而，雖然存在用于抑制血管發(fā)生的多個(gè)靶標(biāo)和許多現(xiàn)有技術(shù)技術(shù)藥物固有的全 部?jī)?yōu)點(diǎn)但沒有其本質(zhì)缺點(diǎn)，預(yù)期這些組合物
-沒有毒性；
-沒有禁忌癥；
-當(dāng)與抗腫瘤細(xì)胞毒劑聯(lián)合使用時(shí)(需要時(shí))，減少其毒性并增強(qiáng)其功效；
-具有直接的抗腫瘤作用；
-引起抗復(fù)發(fā)和抗轉(zhuǎn)移作用；
-不引起抗藥性，尤其是對(duì)程序性細(xì)胞死亡的抗藥性；
-表達(dá)新血管形成抑制選擇性，并且中止腫瘤中的新血管形成；以及
-任選地，包括免疫調(diào)節(jié)、疼痛釋放、抗細(xì)菌、抗炎和抗血管發(fā)生劑的多重活性譜中 的其它類型活性；
-能夠誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。
鑒于現(xiàn)有技術(shù)方法和藥物中存在的許多缺點(diǎn)，上述清單遠(yuǎn)非窮舉達(dá)到所需結(jié)果需 要的條件。
能夠?qū)δ[瘤生長(zhǎng)過程同時(shí)引起所述多重活性效果的抗血管發(fā)生劑在現(xiàn)有技術(shù)中 是未知的，從中也不是顯而易見的。
發(fā)明概述
本發(fā)明的目的在于尋找并且開發(fā)使用抗血管發(fā)生抗腫瘤劑選擇性抑制或完全中 止新血管發(fā)生的藥物，所述抗血管發(fā)生抗腫瘤劑沒有現(xiàn)有技術(shù)藥物存在的缺點(diǎn)，即，它在長(zhǎng) 期使用中不引起任何毒副作用、沒有禁忌癥和不引起抗藥性(尤其是對(duì)程序性細(xì)胞死亡的 抗藥性)，并且當(dāng)與細(xì)胞抑制性藥物結(jié)合使用時(shí)，其不僅增強(qiáng)其功效，而且有利于減少其毒 性。此外，所要求保護(hù)的方法具有許多優(yōu)于所有現(xiàn)有技術(shù)血管發(fā)生阻斷劑的優(yōu)點(diǎn)，即，其具 有直接的抗腫瘤作用、能夠誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡并且具有抗復(fù)發(fā)和抗轉(zhuǎn)移活性，同時(shí)具有 免疫調(diào)節(jié)、抗菌、傷口愈合、抗炎、疼痛釋放和其它活性。
在理論上，可預(yù)期多組分和多重活性的天然類萜烯的復(fù)合物沒有現(xiàn)有技術(shù)血管發(fā) 生抑制方法內(nèi)在的缺點(diǎn)，并且具有一些前述的必然優(yōu)點(diǎn)。
使本發(fā)明的發(fā)明人感到意外的是，在他們的科學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，類萜烯物質(zhì) Abisil (描述于專利 RU No. 2054945 中，1995 年 6 月沘日；RU No. 2198653，2002 年 3 月 29日)，其具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、傷口愈合、疼痛釋放和抗細(xì)菌活性，并且還能夠激活具有 神經(jīng)介質(zhì)合成障礙的病理狀態(tài)(特別是癌癥)中大腦皮層中神經(jīng)末梢的特定體液介質(zhì) (RUNo. 2244928，2003年2月19日)，其是一種有效的血管發(fā)生抑制劑，表現(xiàn)出細(xì)胞毒活性， 以及誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡、抗復(fù)發(fā)、抗轉(zhuǎn)移和抗腫瘤的活性。
Abisil類萜烯物質(zhì)用作新藥物(即多重活性的類萜烯藥物組合物Abisilin)的基 礎(chǔ)，其表示一種口服劑型，即，20%的油溶液，具有新的藥物活性譜，以及中止與血管發(fā)生障 礙(特別是惡性腫瘤生長(zhǎng)中的血管發(fā)生障礙)相關(guān)的病理過程的新可能性。
類萜烯藥物組合物Abisilin的多重活性是由于使用天然化學(xué)萜烯復(fù)合物來(lái)實(shí)現(xiàn) 的，該復(fù)合物含有刺激產(chǎn)生和刺激合成、提供松科代表性植物對(duì)抗環(huán)境影響的生物保護(hù)的 物質(zhì)，該物質(zhì)富含相同的單萜烯化合物。發(fā)現(xiàn)了天然萜烯復(fù)合物與單獨(dú)在最終產(chǎn)物的使用 中不會(huì)引起前述現(xiàn)有技術(shù)抗血管發(fā)生藥物固有的毒性作用。高治療效果不僅歸因于藥物組 合物Abisilin所有活性物質(zhì)的某些最佳作用，而且歸因于它們的協(xié)同作用，所述活性物質(zhì) 為來(lái)自松科針葉樹的萜烯(類異戊二烯)，包含
-類倍半萜烯(3 6%)；
-中性類萜烯(11 15%)；
-雙萜酸(23 28% )；
-三萜酸(8 16%);
-不飽和的和飽和的脂肪酸(0.1 0. 3% )；
-酚類化合物(0.1 0. 2% )；
-其余的為類單萜，其中相對(duì)于總萜烯組合物，乙酸冰片酯含量至少為10.0%，其 溶解于葵花子油中。
此外，具有血管發(fā)生抑制作用的抗腫瘤類萜烯藥物組合物Abisilin的開發(fā)是基 于基本上新提出的策略，該策略是通過使用來(lái)自針葉植物中的內(nèi)源性萜類化合物(該化合 物在該植物中合成以保護(hù)它們自身對(duì)抗環(huán)境的影響)，在人或動(dòng)物體內(nèi)由大腦結(jié)構(gòu)開始產(chǎn) 生能夠阻斷正常生理過程調(diào)節(jié)失衡的它們自身的內(nèi)源性物質(zhì)。
研究了具有血管發(fā)生抑制作用的多重活性的抗腫瘤口服藥物Abisilin的一般毒 性。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選變化方案中，基于一般毒性研究，將Abisilin以80至IOOmg/ kg體重的劑量口服給藥(參見實(shí)施例1)。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選變化方案是使用1000 μ g/mL劑量的Abisilin誘導(dǎo)對(duì)腫瘤細(xì) 胞的選擇性細(xì)胞毒作用的方法和通過類似于程序性細(xì)胞死亡的機(jī)制處死腫瘤細(xì)胞的方法， 至于該劑量，對(duì)于Jurkat細(xì)胞系而言，發(fā)現(xiàn)總計(jì)最大比例的對(duì)Αην+ΡΓ、Αην+ΡΓ和AnV—PI+陽(yáng) 性的細(xì)胞，其占86. 6% (參見實(shí)施例2)。
本發(fā)明再-個(gè)更優(yōu)選的變化方案是以10至100毫克/千克體重劑量口服給藥2至 11天的期間，如所闡述的，使用必要的可移植實(shí)體腫瘤黑色素瘤B-16、Ca-755、LLC、CC_5、 CAC和肉瘤M-I的試劑盒，誘導(dǎo)Abisilin抗腫瘤活性的方法(參見實(shí)施例3)。
本發(fā)明代表各種起因的腫瘤疾病治療的優(yōu)選變化方案在于使用藥物組合物 Abisilin，其可以呈溶液、片劑、明膠膠囊、丸劑、糖漿、混懸劑、散劑、乳劑、顆粒劑、微球體 或納米球體的形式，或可用于實(shí)現(xiàn)藥物活性成分受控釋放的其它劑型。
在可移植腫瘤CAC、Ca-755和黑色素瘤B-16上研究了 Abisilin與現(xiàn)有技術(shù)藥物 順鉬的聯(lián)合給藥，不僅證明了使用Abisilin可獲得協(xié)同作用，而且證明了兩種藥物的治療 意義的增強(qiáng)。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是通過使用Abisilin體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，將促血管發(fā)生性 介質(zhì)和抗血管發(fā)生性介質(zhì)之間的自然平衡向后者占主導(dǎo)地位的方向移動(dòng)的方法(參見實(shí) 施例4)。
此外，本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選實(shí)施方案是通過口服給予80至100毫克/千克體重劑 量的藥物Abisilin，該藥物用于誘導(dǎo)抗復(fù)發(fā)和抗轉(zhuǎn)移作用的用途(參見實(shí)施例5)。
以下給出實(shí)施例1至5，以說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但它們不限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
在測(cè)定急性毒性中，在10000mg/kg的最大可能劑量下，沒有觀測(cè)到動(dòng)物的死亡， 這使得根據(jù)俄羅斯國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GOST) 12. 1.007-76，可以將所述藥物歸類為物質(zhì)危害分類 IV。
在各自具有165 士 3克和163 士 3克平均體重的非純種系譜雄性和雌性大鼠上進(jìn)行 了亞慢性實(shí)驗(yàn)。將研究的藥物胃內(nèi)給藥，每天給藥一次，進(jìn)行14天，其中對(duì)雄性大鼠的劑量 為100、500或1000mg/kg，對(duì)雌性大鼠的劑量為100和1000mg/kg。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所研究劑量的Abisilin在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的整體指標(biāo)(體重增加、行為 反應(yīng)、食物和水的攝入)；外周血的細(xì)胞組成；肝臟的排泄、吸收、蛋白質(zhì)合成和碳水化合物 功能；血清膽固醇水平；以及心血管、排泄和神經(jīng)系統(tǒng)的功能狀況方面沒有引起可靠的變 化。
以1000mg/kg的劑量，S卩，超過推薦治療劑量十倍的劑量，使用Abisilin只在某些 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中引起微弱的胃腸粘膜的局部刺激。
因此，以所研究的劑量給藥的Abisilin的一般毒性研究顯示，該使用不會(huì)引起機(jī) 體器官或組織的結(jié)構(gòu)障礙。
實(shí)施例2
Abisilin對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒和程序性細(xì)胞死亡誘導(dǎo)活性
在以下腫瘤細(xì)胞系上進(jìn)行了體外研究Jurkat (T-細(xì)胞淋巴細(xì)胞白血病)、 Raji (B-細(xì)胞白血病)、K562 (慢性髓細(xì)胞白血病)、U937 (髓細(xì)胞白血病)、Mel P(黑色素 瘤)、T 47 D (乳腺癌)、SK0V-3 (卵巢癌)和PC-3 (前列腺癌)。
使上述細(xì)胞系于37°C下和(X)2氣氛中，在完全RPMI-1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，該培養(yǎng)基 含有10%胎牛血清、2mM/mL谷氨酰胺、0. lmg/mL慶大霉素、維生素、丙酮酸鈉和氨基酸。
在研究中，用以下濃度使用Abisilin :300 μ g/mL、500 μ g/mL、800 μ g/mL 和 ΙΟΟΟμ g/mLo DMSO(二甲基亞砜)用作稀釋劑。
通過比色法，使用MTT測(cè)定法，測(cè)定Abisilin的細(xì)胞毒活性。將5X IO4個(gè)細(xì)胞/ 毫升濃度的腫瘤細(xì)胞接種到^arsted平底96-孔平板上，向每個(gè)孔中加入20 μ L測(cè)試濃度 的Abisilin，然后將平板在標(biāo)準(zhǔn)溫度和壓力下溫育72小時(shí)(一式3份研究各Abisilin濃 度)。所用的對(duì)照為不含Abisilin的三個(gè)孔，向該三個(gè)孔中加入20 μ L 1%DMS0。在溫育 結(jié)束前5小時(shí)，向各孔中加入20 μ L MTT溶液(來(lái)自Sigma Chemical Co. ,U.S.A.)。在溫 育結(jié)束之后，通過將平板在IOOOrpm下離心2-3分鐘，使細(xì)胞沉淀。小心地收集上清液，并 向各孔中加入200 μ L DMSO (ICNBiomedicals，he.)，其是用于甲臜晶體的溶劑。將細(xì)胞重 懸浮，并且在37°C下溫育10分鐘，之后在Uniplan AIFR-01免疫酶反應(yīng)讀數(shù)器(俄羅斯) 中，在MOnm波長(zhǎng)下，測(cè)定溶液的光密度(OD)。MTT通過活細(xì)胞代謝為水不溶性的甲臜，從 而改變與存活細(xì)胞量成比例的溶液的光密度。如果池中死亡細(xì)胞的數(shù)量為至少50%時(shí)，認(rèn) 為腫瘤細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)的藥物是敏感的。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行三次。以(實(shí)驗(yàn)中的平均OD/對(duì)照 中的平均0D) X 100%確定存活率。
通過使用FITC綴合的膜聯(lián)蛋白V，結(jié)合碘化丙錠(PI)活體染料的雙重活體染色， 測(cè)定凋亡細(xì)胞。
按照以下的標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)膜聯(lián)蛋白V-FITC和PI染色的細(xì)胞
膜聯(lián)蛋白V陰性/PI陰性(Αην—ΡΓ)活細(xì)胞、膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性/PI陰性(AnV+ΡΓ) 早期凋亡細(xì)胞和膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性/PI陽(yáng)性(AnV+PI+)晚期凋亡或壞死的細(xì)胞。對(duì)照由在相 同條件但不含Abisilin的情況下溫育的腫瘤細(xì)胞和在相同條件但加入DMSO溶液代替 Abisilin的情況下培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞組成。
使用Matistika 6. 0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。使用學(xué)生(Mudent)檢 驗(yàn)，比較平均值(ρ < 0. 05時(shí)，認(rèn)為差異是顯著的)。
該研究顯示，與Abisilin —起溫育腫瘤細(xì)胞顯示，Abisilin對(duì)Jurkat、Raji和 PC-3細(xì)胞系的細(xì)胞毒活性。Abisilin下腫瘤細(xì)胞存活率曲線顯示于

圖1中。
Abisilin對(duì)Jurkat細(xì)胞系具有最明顯的細(xì)胞毒性，并且當(dāng)Abisilin濃度為 1000 μ g/mL時(shí)，該細(xì)胞毒性總計(jì)為41.8%。隨著Abisilin的濃度增加，活腫瘤細(xì)胞懂得百 分比含量降低，反之亦然。
在研究Abisilin對(duì)U937、K562、T 47D、SK0V-3和Mel P腫瘤細(xì)胞的活性中，沒有檢測(cè)到細(xì)胞毒性。
對(duì)300 μ g 和 1000 μ g Abisilin 濃度，對(duì) Jurkat、Raji、PC_3 和 U937 系細(xì)胞，使用 膜聯(lián)蛋白V/PI雙重活體染色，測(cè)定了 Abisilin誘導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡。
發(fā)現(xiàn)Abisilin通過類似于程序性細(xì)胞死亡的機(jī)制，誘導(dǎo)所測(cè)定的細(xì)胞系的腫瘤 細(xì)胞死亡(表1)。
表 1
Abisilin誘導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡研究的結(jié)果
權(quán)利要求
1.用于治療和預(yù)防腫瘤和其它疾病的藥物，其中血管發(fā)生抑制是通過使用多重活性藥 物組合物AbiSilin的治療有效作用，其中活性成分為來(lái)自松科針葉樹的萜烯(類異戊二 烯)，這些萜烯包含以下成分，以相對(duì)于總重量的百分比基礎(chǔ)計(jì)，即-類倍半萜烯(3 6%)；-中性雙萜類(11 15% )；-雙萜酸(23 28%)；-三萜酸(8 16% )；-不飽和的和飽和的脂肪酸(0. 1 0. 3% )；-酚類化合物(0. 1 0.2% )；-其余的為類單萜，其中以特定比例計(jì)相對(duì)于總萜烯，乙酸冰片酯的含量至少為 10.0%,以及藥學(xué)上可接受的載體和/賦形劑，其特征在于該組合物以有效量口服給予哺 乳動(dòng)物，包括人。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用于治療各種起因的腫瘤疾病的藥物，該藥物由藥物組合物 Abisilin表示，其可以是溶液、片劑、明膠膠囊、丸劑、糖漿、混懸劑、散劑、乳劑、顆粒劑、微 球體或納米球體的形式，或用于藥物活性成分受控釋放的其它劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其用于誘導(dǎo)血管發(fā)生系統(tǒng)抑制和引起直接的抗腫瘤、 抗復(fù)發(fā)和抗轉(zhuǎn)移作用和內(nèi)源性程序性細(xì)胞死亡系統(tǒng)的聯(lián)合激活，所述藥物組合物每天以80 至100毫克/千克體重的劑量口服給予患有腫瘤疾病的哺乳動(dòng)物，包括人。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的藥物，其中所述藥物組合物Abisilin與其它藥物活性物質(zhì) (抗生素、細(xì)胞抑制劑等)聯(lián)合使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)、化學(xué)和制藥工業(yè)，并且涉及用于治療由血管發(fā)生調(diào)節(jié)障礙引起的疾病的藥劑，尤其涉及通過誘導(dǎo)血管發(fā)生抑制以及通過聯(lián)合活化程序性細(xì)胞死亡內(nèi)源性系統(tǒng)，治療不同起因的腫瘤疾病的方法，所述誘導(dǎo)血管發(fā)生抑制繼發(fā)于直接的抗腫瘤、抗復(fù)發(fā)和抗轉(zhuǎn)移作用。本發(fā)明使用新的口服藥物形式‘Abisilin’，其含有涉及天然萜烯類化合物(類異戊二烯)的來(lái)源于松科針葉樹的成分，該藥物形式包含類倍半萜烯(3-6％)；中性雙萜類(11-15％)；雙萜酸(22-28％)；三萜酸(8-16％)；不飽和的和飽和的脂肪酸(0.1-0.3％)；酚類化合物(0.1-0.2％)；其余為類單萜，其中乙酸冰片酯的含量為總萜烯組合物的至少10.0％。預(yù)期該新的口服藥物形式‘Abisilin’(表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗炎、麻醉、傷口愈合和其它藥理學(xué)上有意義的作用的物質(zhì))的使用無(wú)禁忌癥和毒性作用；并且可與不同藥劑共同使用，提供一種新的治療方法，并且增強(qiáng)腫瘤疾病和許多其它由血管發(fā)生過程障礙引起的疾病的治療功效。
文檔編號(hào)A61K36/15GK102036672SQ200880128861
公開日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2008年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月14日
發(fā)明者A·M·科茲洛夫, A·U·巴利辛尼科夫, F·I·馬加諾娃, L·A·萊特瑟魯斯, N·M·皮尼吉娜, Z·S·斯米爾諾夫娜 申請(qǐng)人:伊尼蒂雅姆-醫(yī)藥有限責(zé)任公司