專利名稱：一種裸花紫珠提取物及其制備方法、制劑和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種裸花紫珠提取物及其制備方法、制劑和用途。

背景技術(shù)：
裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.exArn.)為馬鞭草科(Verbenaceae)紫珠屬植物，主產(chǎn)于我國海南，是一種海南地道藥材，我國廣東、廣西也有分布。國外主要分布于印度、越南和馬來西亞。其根、葉可入藥，有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消腫，驅(qū)風(fēng)祛濕之功效，主治化膿性炎癥、急性傳染性肝炎、呼吸道及消化道出血、創(chuàng)傷出血等癥，外用治燒、燙傷及外傷出血等。
目前已有裸花紫珠片、裸花紫珠栓、裸花紫珠合劑等，現(xiàn)行工藝為水煎煮兩次，再濃縮、過濾、干燥成干浸膏，工藝簡(jiǎn)單粗糙，卻沿用了近30年，對(duì)中藥提取、濃縮、干燥等工藝的方法和參數(shù)的合理性未作研究，而且，現(xiàn)行產(chǎn)品均以單一的總黃酮類成分作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步提高。
因此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于對(duì)裸花紫珠葉進(jìn)行進(jìn)一步的深入研究，從而提供一種活性成分含量更高，更為合理、有效的裸花紫珠提取物。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種裸花紫珠提取物，該提取物包含裸花紫珠總黃酮類化合物和鞣質(zhì)類化合物。
所述提取物中黃酮類化合物的含量為50％～90％，鞣質(zhì)的含量為5％～20％。其中，總黃酮類化合物包括木犀草素、芹菜素和木犀草苷的至少一種。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種上述裸花紫珠提取物的制備方法。該制備方法包括下列步驟 1).在裸花紫珠藥材中加入水、稀醇或稀酮溶劑，加熱煎煮，倒出煎液，過濾得濾液； 2).將所得濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； 3).將乙醇洗脫液濃縮，得裸花紫珠提取物。
其中，步驟2)中的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯類大孔吸附樹脂，所述聚苯乙烯類大孔吸附樹脂優(yōu)選JD-1、D101、AB-8、X-5或D402，樹脂柱的徑高比為1∶5～1∶10。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是公開了將上述裸花紫珠提取物與藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑，該制劑優(yōu)選噴霧劑、片劑、膠囊、口服液或顆粒劑。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是公開了上述裸花紫珠提取物在制備用于抑菌、止血、鎮(zhèn)痛或收斂的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的裸花紫珠提取物不僅含有總黃酮類成分，而且含有鞣質(zhì)類成分，總有效成分的含量相對(duì)提高；提取物的制備工藝也相對(duì)簡(jiǎn)單，收率較高；所得裸花紫珠提取物還具有顯著的抑菌、止血、鎮(zhèn)痛、收斂的作用。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例一 取100kg裸花紫珠藥材，加水1500kg，浸泡30分鐘，加熱煮沸120分鐘，倒出煎液，藥渣再煎2次，每次加水1500kg，煮沸60分鐘，合并三次煎液，過濾，濾液通過比表面積為350～450m2/g、骨架密度為1～1.2g/ml，平均孔徑為35～65nm，空隙率為60～68％的JD-1(WLD)型聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱，樹脂柱的徑高比為1∶5，棄去流出液，用5倍柱體積的水洗滌柱體，棄去洗滌液，用10％的乙醇洗脫至洗脫液中無黃酮檢出。收集洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2，冷凍干燥，檢驗(yàn)分裝即得裸花紫珠提取物。聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱用5％的鹽酸乙醇進(jìn)行再生。
提取物的收率為2.53％，其中，經(jīng)UV定量分析(分析方法按照公知方法進(jìn)行操作)，總黃酮含量為50％，總鞣質(zhì)含量20％。
實(shí)施例二 取100kg裸花紫珠藥材，加稀醇1000kg，浸泡50分鐘，加熱煮沸90分鐘，倒出煎液，藥渣再煎2次，每次加水1500kg，煮沸90分鐘，合并三次煎液，過濾，濾液通過比表面積為350～450m2/g、骨架密度為1～1.2g/ml，平均孔徑為35～65nm，空隙率為60～68％的D101型聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱，樹脂柱的徑高比為1∶7，棄去流出液，用4倍柱體積的水洗滌柱體，棄去洗滌液，用50％乙醇洗脫至洗脫液中無黃酮檢出。收集洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對(duì)密度為1.1，冷凍干燥，檢驗(yàn)分裝即得裸花紫珠提取物。聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱用10％氫氧化鈉堿液洗滌后再用5％鹽酸乙醇進(jìn)行再生。
裸花紫珠提取物的收率為3.23％，其中，經(jīng)UV定量分析，總黃酮含量為81.17％，總鞣質(zhì)含量12.23％。
實(shí)施例三 取100kg裸花紫珠藥材，加稀酮2000kg，浸泡40分鐘，加熱煮沸60分鐘，取出煎液，藥渣再煎2次，每次加水1000kg，煮沸60分鐘，合并三次煎液，過濾，濾液通過比表面積為350～450m2/g、骨架密度為1～1.2g/ml，平均孔徑為35～65nm，空隙率為60～68％的AB-8型聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱，樹脂柱的徑高比為1∶10，棄去流出液，用6倍柱體積的水洗滌柱體，棄去洗滌液，用90％乙醇洗脫至洗脫液中無黃酮檢出。收集洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對(duì)密度為1.08，冷凍干燥，檢驗(yàn)分裝即得裸花紫珠提取物。聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱用10％氫氧化鈉堿液洗滌后再用5％鹽酸乙醇進(jìn)行再生。
裸花紫珠提取物的收率為3.03％，其中，經(jīng)UV定量分析，總黃酮含量為90％，總鞣質(zhì)含量5％。
實(shí)施例四 片劑制備 將本發(fā)明裸花紫珠提取物100g(實(shí)施例一方法制得)，淀粉80g，糊精5g混合均勻，加入10％淀粉漿制軟材，用14目尼龍篩網(wǎng)制粒，60～70℃通風(fēng)干燥，16目篩整粒，加硬脂酸鎂1.5g，羧甲基淀粉鈉5g混勻，壓制成1000片，包衣即得。成人口服每日2～5次，每次1～10片。
實(shí)施例五 膠囊制備 將本發(fā)明裸花紫珠提取物100g(實(shí)施例二方法制得)，淀粉78g，硬脂酸鎂2g混勻，直接用全自動(dòng)膠囊填充機(jī)填充成1000粒，拋光即得。成人口服每日2～5次，每次1～10粒。
實(shí)施例六 口服液制備 將本發(fā)明裸花紫珠提取物20g(實(shí)施例一方法制得)，與蜂蜜300g、蔗糖50g、苯甲酸鈉2g及蒸餾水300ml混合，加熱至85～90℃，攪拌使溶解，保溫30分鐘，濾過，濾液加水稀釋至1000ml，攪勻，灌封(每支10毫升)，滅菌即得。成人口服每日2～5次，每次1～5支。
實(shí)施例七 顆粒劑制備 取本發(fā)明裸花紫珠提取物10g(實(shí)施例二方法制得)、糊精20g、蔗糖100g及乙醇適量，混勻，過十目篩制成顆粒，于60～70℃干燥，整粒，分裝即得，每包重5g，成人口服每日2～5次，每次1～5包。
實(shí)施例八 噴霧劑制備 取本發(fā)明裸花紫珠提取物2g(實(shí)施例三方法制得)，黃原膠10mg，糜蛋白酶100IU，生理鹽水稀釋到1000ml，在無菌條件下，根據(jù)上述組方量的要求，將裸花紫珠有效部位與生理鹽水、黃原膠、糜蛋白酶混合，攪拌均勻，制成混懸液；經(jīng)含量分析合格后，在避菌條件下，將上述溶液用定量加液裝置分裝，即得。
實(shí)施例九 本發(fā)明裸花紫珠提取物的有關(guān)藥效試驗(yàn)如下 1、抑菌作用 通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)，以最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)指標(biāo)評(píng)價(jià)本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物對(duì)常見菌株的抗菌作用。
菌液制備挑取斜面菌種接種于20％牛浸汁培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)過夜，再用20％牛浸汁培養(yǎng)基將菌液稀釋至10cfu/ml，立即接種。
MIC測(cè)定采用液體試管連續(xù)稀釋法，用20％牛浸汁培養(yǎng)基將樣品作連續(xù)對(duì)倍稀釋。將1.0ml加入滅菌試管中，每管加入0.05ml標(biāo)準(zhǔn)新鮮菌液，并設(shè)菌株對(duì)照及溶媒對(duì)照組，37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察細(xì)菌生長情況，以無菌生長的最高稀釋度為MIC。
MBC測(cè)定采用平板劃線接種法，從被判為MIC及MIC相鄰兩管的培養(yǎng)基中挑取培養(yǎng)液接種至10％血清MH肉湯瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，以生長菌落數(shù)≤5個(gè)的最高稀釋度為MBC。
上述試驗(yàn)結(jié)果見表一。
表一裸花紫珠提取物體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果
本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、肺炎球菌、乙型鏈球菌和幽門螺旋桿菌均有不同程度的抑制和殺滅作用。
2、止血作用 用本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三個(gè)劑量組，生理鹽水組，藥物溶媒組和原裸花紫珠水提液。將180只健康昆明小白鼠隨機(jī)分6組(每組30只，雌雄各半)，每日灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)7天。末次給藥1小時(shí)后按如下步驟開始實(shí)驗(yàn)。
(1)對(duì)小鼠出血時(shí)間(BT)的影響 采用一次尾靜脈注射給藥方式，給藥后30分鐘用非常鋒利的剪刀在小鼠尾尖部向上約1cm處快速剪斷尾部，并立即用秒表記時(shí)，同時(shí)不斷用濾紙吸流出的血液。從剪尾開始至出血停止這段時(shí)間即為小鼠剪尾出血時(shí)間。
(2)對(duì)小鼠凝血時(shí)間(CT)的影響 用毛細(xì)玻管插人小鼠內(nèi)毗球后靜脈叢，深約4～5mm，自血液流進(jìn)管內(nèi)計(jì)時(shí)，注滿毛細(xì)管后平放于桌上，每隔30秒折斷兩端約0.5cm，并緩慢向左右拉開，仔細(xì)觀察折斷處有無血凝絲出現(xiàn)，出現(xiàn)血絲時(shí)停表即為血液凝固時(shí)間。
(3)對(duì)小鼠血液凝固系統(tǒng)PT、APTT和FIB的影響 摘小鼠眼球取血，采2ml血置于含有3.8％枸櫞酸鈉抗凝劑的負(fù)壓試管中，用ACT-200型凝血功能檢測(cè)儀檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血酶時(shí)間(APTT)及纖維蛋白原定量(FIB)。
(4)對(duì)小鼠血小板計(jì)數(shù)的影響 摘小鼠眼球取血，采0.5ml血置于含有EDTA抗凝劑的負(fù)壓試管中，用血球記數(shù)儀檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)。
(5)試驗(yàn)結(jié)果 通過上述實(shí)驗(yàn)，測(cè)得小鼠出血時(shí)間(BT)、凝血時(shí)間(CT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血酶時(shí)間(APTT)和纖維蛋白原定量(FIB)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見下表二。
表二本發(fā)明裸花紫珠提取物對(duì)小鼠止血作用的試驗(yàn)結(jié)果 (均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，N＝10)
*P＜0.05，**P＜0.01與正常對(duì)照組比較。
以上結(jié)果證明，本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物均能縮短BT、CT和APTT及降低FIB含量，具有明顯的止血作用。
3、鎮(zhèn)痛作用 (1)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)(扭體實(shí)驗(yàn)) 將健康昆明小鼠隨機(jī)分成6組(每組10只)，即用本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三個(gè)劑量組，生理鹽水組，藥物溶媒組(2％乙醇)和原裸花紫珠水提液組。每日灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)7天。末次給藥后1小時(shí)，各組分別腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，觀察并記錄注射醋酸后15分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)(腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行)的時(shí)間及次數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表三。
表三裸花紫珠提取物對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 (均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，N＝10)
*P＜0.05，**P＜0.01與溶媒組比較。
(2)熱板實(shí)驗(yàn) 將健康昆明小鼠稱重標(biāo)記6組(每組10只)，即用本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三個(gè)劑量組，生理鹽水組，藥物溶媒組(2％乙醇)和原裸花紫珠水提液。采用熱板法，熱板溫度為(55±0.5)℃，給藥前先測(cè)定各鼠的正常痛反應(yīng)(放入熱板至小鼠舔后足時(shí)間，若在5～30秒內(nèi)不舔后爪者棄置不用)。然后，每日按0.42g/kg劑量灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)7天。末次給藥1小時(shí)后再測(cè)定各鼠的正常痛反應(yīng)，并計(jì)算小鼠給藥前后痛閾提高百分率，結(jié)果見表四。

表四裸花紫珠提取物對(duì)小鼠熱板痛閾的影響 (均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，N＝10)

注每日灌胃給予小鼠藥物，連續(xù)7天。*P＜0.05，**P＜0.01與溶媒組比較。
上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物在小鼠扭體試驗(yàn)中均能延長扭體反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間及減少扭體次數(shù)，在熱板試驗(yàn)，本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物均能增加痛閾提高百分率。
4、收斂作用 選健康家兔60只，隨機(jī)分為6組(每組10只，雌雄各半)，即用本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物250、500、750mg/kg三個(gè)劑量組，生理鹽水組，藥物溶媒組(2％乙醇)和原裸花紫珠水提液。實(shí)驗(yàn)前將所選家兔均在背部擦傷，形狀呈圓形，面積直徑約3cm，致局部出現(xiàn)顯著的糜爛滲液表現(xiàn)。每天觀察一次局部的反應(yīng)情況，并測(cè)量傷口面積、記錄滲出量的多少及消失時(shí)間，最后計(jì)算愈合率，即愈合面積/第2天創(chuàng)面愈合面積，結(jié)果見表五和表六。
表五裸花紫珠提取物對(duì)家兔傷口愈合面積的影響 (均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，N＝10)
*P＜0.05，**P＜0.01與正常對(duì)照組比較。
表六裸花紫珠提取物對(duì)家兔傷口愈合率的影響 (均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，N＝10)
*P＜0.05，**P＜0.01與正常對(duì)照組比較。
本發(fā)明制備的裸花紫珠提取物中、高劑量組均能顯著增加傷口愈合面積，提高傷口愈合率。
權(quán)利要求
1.一種裸花紫珠提取物，其特征在于該提取物包含裸花紫珠總黃酮類化合物和鞣質(zhì)類化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的裸花紫珠提取物，其特征在于所述提取物中總黃酮類化合物的含量為50％～90％，鞣質(zhì)的含量為5％～20％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的裸花紫珠提取物，其特征在于所述的總黃酮類化合物包括木犀草素、芹菜素和木犀草苷中的至少一種。
4.一種權(quán)利要求1或2所述的裸花紫珠提取物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟
1).在裸花紫珠藥材中加入水、稀醇或稀酮溶劑，加熱煎煮，倒出煎液，過濾得濾液；
2).將所得濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10％～90％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；
3).將乙醇洗脫液濃縮，得裸花紫珠提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的裸花紫珠提取物的制備方法，其特征在于步驟2)中所述的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯類大孔吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的裸花紫珠提取物的制備方法，其特征在于所述的聚苯乙烯類大孔吸附樹脂為JD-1、D101、AB-8、X-5或D402。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的裸花紫珠提取物的制備方法，其特征在于步驟2)中所述的大孔吸附樹脂柱的徑高比為1∶5～1∶10。
8.一種由權(quán)利要求1或2所述的裸花紫珠提取物與藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制劑，其特征在于所述制劑為噴霧劑、片劑、膠囊、口服液或顆粒劑。
10.權(quán)利要求1或2所述的裸花紫珠提取物在制備用于抑菌、止血、鎮(zhèn)痛或收斂的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種裸花紫珠提取物及其制備方法、制劑和用途。本發(fā)明的裸花紫珠提取物是從裸花紫珠葉中提取的含有裸花紫珠總黃酮類化合物和鞣質(zhì)類化合物的提取物。所述的提取物是將裸花紫珠葉用水、稀醇或稀酮提取，提取液濃縮后，經(jīng)大孔吸附樹脂柱層析純化所得。本發(fā)明裸花紫珠提取物的純度高，具有抑菌、止血、鎮(zhèn)痛、收斂的作用。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101623394SQ200910006088
公開日2010年1月13日 申請(qǐng)日期2009年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月22日
發(fā)明者寧云山, 關(guān)繼峰, 嚴(yán)冬蘭 申請(qǐng)人:九芝堂股份有限公司